AISLAMIENTO Y EVALUACIN DE HONGOS

SOLUBILIZADORES DE FOSFATOS ASOCIADOS AL

SISTEMA PRODUCTIVO DE BANANO (Musa
paradisiaca) EN LOS DEPARTAMENTOS DE
MAGDALENA, ANTIOQUIA Y CUNDINAMARCA,
COLOMBIA
Nio Moreno Johann Sebastian (1), Pulido Agudelo Diana Paola (2).
Corporacin Universitaria Minuto de Dios, Cenired, Ministerio de Agricultura
Resumen
El estudio a continuacin abrevia el trabajo, de la evaluacin de actividad y presencia de
hongos fosfatosolubilizadores de fosfatos de calcio, aluminio y hierro, presentes en suelos
rizosfericos del cultivo de banano (Musa paradisiaca L.), en 3 departamentos de Colombia,
con el fin de identificar potenciales inoculos que permitan el desarrollo futuro de un insumo
biolgico a base de los mismos; se asilaron un total de XXX de hongos por medio de los
mtodos de siembra de grnulos y diluciones seriadas, dando como resultado positivo de
solubilizacin de fosfato de calcio un numero de XXX ,de los cuales se destacaron XXX.
Palabras clave:
Banano, Hongos Fosfatosolubilizadores, Fosfato Tricalcalcio, Homogeneidad
Abstract
The study then abbreviated work, evaluation of activity and presence of fungi phosphate
solubilizing calcium phosphates, aluminum and iron present in rhizosphere soils from
banana (Musa paradisiaca L.), in 3 departments of Colombia, with the inocula identify
potential enabling future development of a biological-based input thereof; XXX total fungal
sought asylum by seeding methods and serial dilutions of granules, giving a positive result
phosphate solubilization XXX a number of calcium, which is highlighted XXX.
Keywords:
Bananas, phosphate solubilizing fungi, Tri Calcium Phosphate, Homogeneity
Introduccin
El banano ocupa el tercer lugar de los
principales cultivos de exportacin en
Colombia, (Arias, Dankers, Liu, &
Pilkauskas, 2004), consecuentemente el
rubro en fertilizantes qumicos constituye
entre el 10 al 11 % de los costos totales
de la produccin de banano por hectrea

lo cual econmicamente hablando no es

favorable como lo menciona el
Departamento de Estudios Econmicos
SAC (2006), adems la volatilidad de los
precios del petrleo y el consecuente
encarecimiento
de
los
productos
derivados de ste han sembrado mucha

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incertidumbre en
(Dibut, 2009).

el

sector

agrcola

Asimismo como bien es sabido la

agricultura es una de las principales
causas de la prdida de biodiversidad
(Von Meyer, 1996), uno de estos motivos
es la aplicacin de dosis de fertilizantes
por encima de la capacidad de extraccin
del cultivo y otras prcticas agrcolas
contaminantes, esta situacin constituye
un elemento de manejo crtico que ha
deteriorado los suelos y aguas donde
actualmente se desarrolla la industria
bananera (Rosales, Pocasangre, Trejos,
Serrano, & Pea, 2008), al mismo tiempo
se ha demostrado que la produccin
industrial de fertilizantes no puede
satisfacer las necesidades de una
poblacin mundial en creciente aumento,
cuyo consumo per-cpita demanda
alimentos, fibras y energa; lo cual a
obligando a expandir e intensificar las
reas destinadas a la agricultura y por lo
tanto al uso de fertilizantes inorgnicos
(Tilman, et al., 2001), si se tiene en
cuenta que muchos de los fertilizantes
fosfatados solubles en agua se precipitan
alrededor del 75 al 90% (Khan, Zaidi,
Ahemad, Oves, & Wani, 2010), y que
segn Castillo, et al. (2011) el P es uno de
Por lo anterior, por definicin los
microorganismos
solubilizadores
de
fosforo (MSP) son organismos que tiene
la capacidad de solubilizar formas no
disponibles de fsforo inorgnico,
(Walpola & Yoon, 2012; Sharma, Kumar,
& Tripathi, 2011), son omnipresentes en
el suelo (Gyaneshwar, Neresh, Parekh, &
Poole, 2002; Khan, Zaidi, Ahemad, Oves,
& Wani, 2010), incluso encontrados en
los suelos libres de raz, por lo que estos
podran desempear un papel importante
en el suministro de P para las plantas,
inclusive en situaciones de estrs (Santos,
et al., 2013). Adems de constituir una
importante reserva de P en el suelo a

los elementos ms limitantes en la

produccin de banano debido a que este
elemento afecta significativamente el
crecimiento y el metabolismo de la
planta, se hace necesario abarcar otras
salidas que resuelvan gran parte del
problema.
Aproximadamente el 95-99% del fosforo
presente en el suelo esta de forma
insoluble insoluble (Pradhan & Sukla,
2005). Los suelos caractersticos de las
zonas de explotacin bananera son suelos
altamente meteorizados de trpicos y
subtrpicos hmedos (Vazquez, Morales,
& Dalurzo, 2004; Pradhan & Sukla,
2005), por lo tanto concentracin de P
soluble en suelos tropicales, suele ser
muy baja, disponible slo en cantidades
micromolar o menor (Khan, Zaidi,
Ahemad, Oves, & Wani, 2010). Estos
suelos agrcolas, a menudo presentan
bajos contenidos de P disponible luego
este elemento, a menudo se encuentra
fuertemente fijado a formas de fosfato de
Ca2+, Fe2+, Mg2+ y Al3, arcillas del grupo
de las caolinitas y ocluido en los xidos
de hierro y aluminio, (Cern &
Aristizbal, 2012).
travs de su biomasa (Cern &
Aristizbal, 2012), estos microorganismos
tienen la capacidad de contribuir al
suministro
de
fsforo,
por
la
solubilizacin de distintas fuentes de
fosforo tales como roca fosforica, fosfato
de aluminio y fosfato triclcico
(Nopparat, Jatupornpipat, & Rittiboon,
2009),
bacterias
como
Bacillus, Pseudomonas,
Rhizobium y Enterobacter
son
abundantemente
conocidas
como
fosfatosolubilizadores en la literatura; por
su parte dentro de los hongos se
encuentran principalmente los gneros
Aspergillus y Penicillium, pero se

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reportan muchos ms (Pradhan & Sukla,

2005; Khan, Zaidi, Ahemad, Oves, &
Wani, 2010; Yadav & Verma, 2012;
Walpola & Yoon, 2012;).
Los hongos P-solubilizantes constituyen
aproximadamente el 0,1-0,5% de las
poblaciones de hongos totales, algunos de
estos
microorganismos
poseen
caractersticas de control biolgico y
promotores de crecimiento de las races
(Aguado, Moreno, Jmenez, Garca, &
Preciado, 2012), en general estos
producen ms cidos y son capaces de
atravesar largas distancias, a diferencia de
las bacterias, por lo tanto consiguen ser
ms importantes en la solubilizacin del
fosforo en el suelo (Khan, Zaidi, Ahemad,
Oves, & Wani, 2010; Yadav & Verma,
2012), la solubilizacin de fosforo en los
microorganismos est dada por un grupo
de genes que codifican y
tienen
influencia en la expresin, actividad y
tiempo de produccin de enzimas y otros
mecanismos (Mikanova & Novakova,
2002; Khan, Zaidi, Ahemad, Oves, &
Wani, 2010; Patio, 2010).
La xido-reduccin, la inmovilizacin
(Otero, 2011), la produccion de enzimas
(Narvez, Snchez, & Menjvar, 2010)
hacen parte de los mecanismos estudiados
para la solubilizacin del P, pese a esto la
actividad de estos microorganismos se
especializa en la produccin y liberacin
de metabolitos (enzimas y cidos
Materiales y mtodos
Los 3 lugares en el que se desarrollaron
los muestreos, corresponden a zonas
bananeras
de los departamentos de
Antioquia, Magdalena y Cundinamarca,
las dos primeras reconocidas por la mayor
produccin a nivel nacional y la tercera
como contraste y complemento. en cada
una de las zonas seleccionaron 4 fincas

orgnicos) (Nautiyal, 1999; Khan, Zaidi,

Ahemad, Oves, & Wani, 2010), pero la
teora la produccin de cidos orgnicos
es la ms aceptada y estudiada en el
mundo. Este mecanismo consiste en la
reduccin en el pH del medio y liberacin
de cidos orgnicos por parte de
diferentes microorganismos. Tambin
puede relacionarse con la quelacin de
los cationes unidos al P en la que se
pueden disolver el P minerales como
resultado de intercambio de aniones del
PO42 -por el anin de cido o pueden
quelar los iones Fe y Al asociados con el
P (Khan, Zaidi, Ahemad, Oves, & Wani,
2010; Sharma, Kumar, & Tripathi, 2011).
La construccin de nuevas alternativas de
desarrollo, ms igualitarias y sostenibles a
largo plazo, fundadas en la bsqueda de
nuevas formas de produccin vinculadas
ms directamente con la dinmica de los
procesos naturales, toman en cuenta la
incidencia de las prcticas productivas
sobre la dotacin y las condiciones de
regeneracin de los recursos, as como la
contribucin
de
la
productividad
ecolgica y cultural en el desarrollo de las
fuerzas sociales de produccin (Montes
& Leff, 2000), por lo tanto, el uso y
aplicacin de inoculantes biolgicos o
biofertilizantes
en
los
sistemas
productivos, permite una produccin a
bajo costo, y conserva el suelo desde el
punto de vista de fertilidad y
biodiversidad (Otero, 2011).
de produccin bananera, separadas
mnimo por 20 km, se tomatn 6 plantas
de banano por finca seleccionadas al azar,
utilizando como principal criterio de
seleccin, el que las plantas se encuentran
en etapa de llenado de frutos, y que las
plantas se encuentren por lo menos 100
metros una de la otra, con la misma
distancia de siembra respecto a las plantas
prximas, con similar: i) desarrollo

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fenolgico,
ii)
manejo
previo
(fertilizacin, fumigacin, preparacin del
suelo, presencia de rocas, irrigacin), iii)
factores edafoclimticos, (IGAC, 2013).
Se extraern 4 cantidades de suelo (submuestras) en cruz, de la zona radicular de
la planta, equidistantes alrededor de cada
planta de banano, a una profundidad de
20 cm, se buscaran raicillas terciarias del
rea de la raz del banano; mezclando las
4 sub-muestras, se obtendrn una 1
muestra compuesta por planta de 1 Kg
aprox.; para un total de 24 muestras por
departamento.
A cada muestras compuesta, se le realizo
un anlisis fsico-qumico, incluyendo
capacidad de intercambio catinico,
calcio, magnesio, potasio, sodio, fosforo,
aluminio de cambio, saturacin de bases,
carbono orgnico, textura y pH, fsforo
total, inmovilizado y disponible, se
evalu el contenido de humedad del
suelo. Adems se realizo un anlisis de
fsforo foliar seleccionando una hoja
fotosintticamente activa del sector medio
de la planta; Todas las valoraciones de
suelo y foliares sern realizadas por parte
del Instituto Geogrfico Agustn Codazzi
(IGAC), (Bogot, Colombia)
Para el aislamiento de estos hongos se
realizaran
dos
procedimientos,
i)
obtencin por mtodo de siembra de
grnulos de suelo y ii) diluciones seriadas,
los cuales fueron sembrados en agar PDA
con una mezcla de antibiticos para evitar
bacterias y hongos de rpido crecimiento
(Cloranfenicol-0.1g/L,
Gentamicina50mg/L,
Rifampicina-50mg/L
y
Tetraciclina-50mg/L) (Posada, Snchez,
Sieverding, Aguilar, & Heredia, 2012).
i) Para la obtencion por siembra de
granulos se empelo el mtodo de filtrado
de partculas mediante tamizado hmedo

descrito en (Mueller, Bills, & Foster,

2004), cada muestra fue previamente
tamizada en seco en una malla de 2 mm,
para posteriormente tomar 1g del suelo y
lavarlo con 2 litros aproximadamente de
agua destilada en tamices de 1mm a 0,1
mm, obteniendo grnulos de suelo con
micelio vivo adherido, sin esporas o
propgulos libres (Gualdrn, Surez, &
Valencia, 1997; Posada, Snchez,
Sieverding, Aguilar, & Heredia, 2012).
Para finalmente ser sembrados 5 grnulos
en la preparacin de PDA ms
antibiticos anteriormente descritos.
ii) Para el aislamiento por diluciones
seriadas, se pesaran 10 g de suelo los
cuales fueron transferidos en condiciones
de esterilidad, a un matraz erlenmeyer de
250 ml, con 90 ml de agua destilada
estril,
luego
este
fue
agitado
mecnicamente y se dejo en reposo por
unos 10 minutos. Con una micropipeta
automtica, se tomo 1 ml del
sobrenadante de la dilucin y luego se
transfirio a 9 ml de agua destilada estril
con NaCl al 0,85 % (Mahamuni, Wani,
& Patil, 2012), dispensada en tubos de
ensayo; 0.1 ml de de las diluciones 10-2,
10-4 y 10-6, se transfirieron al medio de
cultivo PDA con 3 repeticiones por
dilucin.
Una vez puerificados en PDA se realizo
una prueba preliminar probando los
medios de cultivo PVK, NBRIP, SyS
recomendados
para
aislar
microorganismos
solubilizadores
de
fosfato (Nautiyal, 1999; Vera et al, 2002;
Lozada, 2010; Hernndez, Carrin, &
Heredia, 2011), en definitiva se
selecciono el medio SyS, los hongos
fueron
evaluados
mediante
la
cuantificando la eficiencia relativa de
solubilizacin utilizando la siguiente
frmula:

Pgina 4

Finalmente las cepas las cepas

seleccionadas como solubilizadores se
conservaron en glicerol al 10% como
crioprotector (Nopparat, Jatupornpipat, &
Rittiboon, 2009), para dar paso a la
identificacion a el analisis de los
resultados.

X
100

Resultados
Anlisis y Discusiones
Conclusiones
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