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UNIVERSIDADE JOS DO ROSRIO VELLANO

CURSO DE BIOMEDICINA

HEMATOLOGIA CLNICA
Apostila Terico-Prtica

Belo Horizonte
2011

HEMATOLOGIA CLNICA
CONTEDO:
-

Sangue Consideraes gerais


Cmara de Neubauer
Contagem de Hemcias
Dosagem de Hemoglobina
Hematcrito
Contagem Global de Leuccitos
Contagem Diferencial de Leuccitos
Contagem de Reticulcitos

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Anlise e Interpretao de Exames Laboratoriais


Prof Ana Paula Lucas Mota

Sangue Consideraes Gerais


O sangue composto de duas fases distintas: fase lquida e fase slida ou elementos
figurados. A fase lquida composta principalmente por gua (cerca de 90%) e por substncias
orgnicas e inorgnicas dissolvidas nesta gua, tais como eletrlitos, protenas, hormnios e
fatores da coagulao. Na fase slida ou elementos figurados esto as hemcias, leuccitos e
plaquetas. A fase lquida tambm conhecida como plasma e pode ser definida como soro
quando perder os fatores da coagulao logo aps a coleta sangunea.
Plasma = fase lquida (gua + todos os elementos dissolvidos)
Soro = Plasma fatores da coagulao (utilizados para formar o cogulo aps a coleta)
O volume sanguneo total cerca de 70 mL por quilo de peso, desta forma uma pessoa de 70
Kg possui cerca de 4,9 L de sangue. A perda mxima sangunea permitida e recomendada
10% do volume total, para que no ocorram grandes danos ao paciente ou doador.
As principais funes do sangue so: transporte de gases (hemoglobina e hemcias); defesa
imunolgica (leuccitos); coagulao (plaquetas e fatores da coagulao); transporte de
nutrientes (plasma); transporte de metablitos da excreo (plasma); regulao trmica;
regulao da presso arterial e manuteno do pH sanguneo.
A hematopoiese o processo de formao do sangue e comea desde a fase intrauterina de
cada indivduo. Ainda na vida uterina as clulas so formadas pela linhagem primitiva e aps o
nascimento pela linhagem definitiva (srie vermelha ou eritroctica; srie plaquetria ou
megacarioctica; srie granuloctica; srie linfocitria ou linfoctica e srie monocitria ou
monoctica).
a) Hemograma: a principal ferramenta diagnstica em Hematologia, constitudo pelos
seguintes exames:
-

Contagem de Hemcias (Hm)

Dosagem de Hemoglobina (Hb)

Determinao do Hematcrito (Ht)

ndices Hematimtricos (VCM; HCM; CHCM; RDW).

Contagem Global de Leuccitos

Contagem Diferencial de Leuccitos

Hematoscopia

Contagem de Plaquetas (*opcional)

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b) Coleta de material
O xito da coleta sangunea depende de vrios fatores, tais como: colhedor bem treinado;
veias do paciente; instrumental utilizado; identificao correta do material (etapa pr-analtica);
tipos de amostras necessrias; relao sangue-anticoagulante; anti-sepsia; tempo de
garroteamento; estancar o sangramento; homogeneizao da amostra e biossegurana.
c) Confeco e colorao dos esfregaos sanguneos

Cabea

Cauda
Corpo

d) Cmara de Neubauer
Utilizada para contagem de clulas em hematologia. dividida em 9 quadrantes idnticos em
tamanho, rea e profundidade e diferentes de acordo com as subdivises.

A
B

C
D

AULA PRTICA 01: CONTAGEM DE HEMCIAS


1) Fundamento
Diluir a amostra (sangue total) em soluo diluidora de hemcias (Lquido de Gower ou Dacie).

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2) Procedimento
Pipetar 4,0 mL do lquido diluidor em um tubo de ensaio ou frasco pequeno.
Pipetar 0,02 mL (20L) de sangue e transferir para o tubo contendo o lquido diluidor.
Homogeneizar e aguardar cerca de 5 minutos.
Encher a cmara de Neubauer com a soluo, tendo o cuidado de homogeneizar novamente antes
da pipetagem.
Levar a cmara ao microscpio para efetuar a contagem de hemcias. Focalizar com a objetiva de
10x e fazer a contagem com a objetiva de 40x, utilizando o retculo central da cmara de Neubauer.
Fazer a contagem de pelo menos 5 quadrados (1/5 da rea de contagem) e somar as parcelas.
3) Clculos
n Hm / mm3 = 10.000 x Y*
*Y = soma dos 5 quadrados contados na cmara
4) Valores de Referncia
Homem 4.500.000 a 6.000.000 / mm3
Mulher 4.000.000 a 5.500.000 / mm3
Rn

4.000.000 a 6.000.000 / mm3

5) Interpretao
Valores aumentados (policitemias)
Diarrias, desidratao, queimaduras, policitemia Vera, cardiopatia crnica, intoxicaes com
lcool etlico ou outras drogas, vmitos profusos, acidose metablica.

Valores diminudos
Anemias, leucemias, aps hemorragias intensas e nas infeces graves.

AULA PRTICA 02: DOSAGEM DE HEMOGLOBINA


1) Fundamento
O ferrocianeto transforma o ferro da hemoglobina do estado ferroso (bivalente) para o estado
frrico (trivalente), formando metahemoglobina que, por sua vez, combina com o cianeto de
potssio para produzir a cianometahemoglobina, que lida em 540 nm.

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2) Procedimento
Pipetar 5,0 mL do lquido diluidor (Drabkin) em um tubo de ensaio.
Pipetar 0,02 mL (20L) de sangue e transferir para o tubo contendo o lquido diluidor.
Homogeneizar e aguardar cerca de 10 minutos.
Fazer um tubo BRANCO apenas com o lquido diluidor e um tubo PADRO com 5,0 mL do lquido
diluidor e 0,02 mL do padro de hemoglobina.
Fazer a leitura em espectrofotmetro, no comprimento de onda de 540 nm.
3) Clculos
[Hb] g/dL = Abs Teste

10

Abs Padro
4) Valores de Referncia
Homem 13,5 a 18,0 g/dL
Mulher 12,0 a 16,0 g/dL
Rn

13,5 a 19,5 g/dL

5) Interpretao
Valores aumentados e valores diminudos esto presentes praticamente em todas as condies
que determinam aumento e diminuio das hemcias, respectivamente.

AULA PRTICA 03: HEMATCRITO (micro)


1) Fundamento
Volume ocupado pelas hemcias numa amostra de 100 mL de sangue total.
2) Procedimento

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Preencher um tubo capilar com sangue total, at cerca de 2/3 do seu comprimento.
Limpar a parede externa do tubo capilar com um papel absorvente.
Vedar a extremidade vazia (limpa) com uma massinha ou fech-la no calor.
Colocar o tubo capilar na centrfuga de microhematcrito com a parte vedada voltada para fora,
equilibrando-o com outro tubo.
Tampar a centrfuga.
Centrifugar durante 5 minutos numa velocidade de 3.500 rpm ou superior.
Fazer a leitura do resultado, utilizando a tabela prpria para microhematcrito.
O menisco inferior (hemcias) deve coincidir com a linha zero e o menisco superior (plasma)
deve coincidir com a linha cem. A leitura feita onde ocorre separao entre as duas fases
(interface).
3) Valores de Referncia
Homem 40 a 54%
Mulher 37 a 47%
Rn

44 a 64%

4) Interpretao
Valores aumentados ocorrem quando h hemoconcentrao como nas policitemias, desidrataes,
queimaduras, diarrias e vmitos intensos. Um hematcrito aumentado sugestivo de
macrocitose.
Valores diminudos ocorrem quando h reduo do nmero de eritrcitos, como nas anemias,
leucemias e infeces. Um hematcrito reduzido d idia de microcitose.

AULA PRTICA 04: CONTAGEM GLOBAL DE LEUCCITOS


1) Fundamento
Sangue + soluo diluidora de leuccitos (dilui o sangue e destri as hemcias).
2) Procedimento

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Pipetar 0,4 mL do lquido diluidor em um tubo de ensaio ou frasco pequeno.
Pipetar 0,02 mL (20L) de sangue e transferir para o tubo contendo o lquido diluidor.
Homogeneizar e aguardar cerca de 20 minutos para que haja destruio das hemcias.
Encher a cmara de Neubauer com a soluo, tendo o cuidado de homogeneizar novamente antes
da pipetagem.
Levar a cmara ao microscpio para efetuar a contagem de leuccitos. Focalizar com a objetiva de
10x e fazer a contagem com a objetiva de 10 ou 40x, utilizando os 4 retculos laterais da cmara de
Neubauer (A, B, C e D).
Fazer a contagem de todos os quadrados e somar as parcelas.
3) Clculo
n leuccitos / mm3 de sangue = Y* x 50
*Y= nmero de leuccitos contados na cmara
4) Valores de Referncia
Adultos 4.000 a 10.000 / mm3
Rn 10.000 a 26.000 / mm3
5) Interpretao
Valores aumentados (Leucocitose): ocorrem em associao aos processos inflamatrios,
infecciosos e leucemias. Fisiologicamente temos leucocitose na infncia, gravidez, durante o parto,
durante a digesto, variaes circadianas e aps exerccios fsicos extenuantes.
Valores diminudos (Leucopenia): ocorrem quando h reduo na produo dos leuccitos
(deficincia de vitamina A; depresso dos tecidos leucopoiticos por infeco ou intoxicao; uso
de medicamentos) ou no caso de aumento da destruio celular, provavelmente por anticorpos.
Algumas infeces podem cursar com leucopenia, principalmente de um nico tipo de leuccito:
febre tifide, dengue, rubola, caxumba e tripanossomose.

AULA PRTICA 05: CONTAGEM DIFERENCIAL DE LEUCCITOS


1) Fundamento
a contagem de 100 leuccitos em esfregao sanguneo, diferenciando-os segundo suas
variedades morfolgicas.
2) Procedimento

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A) CONFECO DO ESFREGAO SANGUNEO
Colocar uma gotcula de sangue em uma lmina limpa e seca.
Com o auxlio de outra lmina, colocar a gota de sangue em contato com sua borda, formando um
ngulo de 45, esfregar uma lmina sobre a outra rapidamente, antes que o sangue seque ou
coagule.
Esperar o esfregao secar.
Identificar a lmina pela cabea do esfregao com o auxilio de outra lmina ou lpis.
Fazer a colorao.
B) COLORAO DO ESFREGAO SANGUNEO
Colocar a lmina sobre um suporte de colorao com o esfregao voltado para cima.
Cobrir todo o esfregao com o corante May-Grnwald. Aguardar 2 a 3 minutos.
Aps este tempo, gotejar sobre o corante gua de torneira ou tampo fosfato (pH 7,2). Aguardar 2
minutos.
Desprezar o corante e o tampo.
Cobrir a lmina com o corante Giemsa diludo (Giemsa de uso). Aguardar 12 minutos.
Desprezar o corante e enxaguar a lmina com gua de torneira.
Esperar secar e limpar o verso da lmina com lcool.
Examinar com objetiva de imerso, fazendo a contagem diferencial de 100 leuccitos.
3) Resultado
Expresso em nmero relativo (%) e absoluto (/mm3)
4) Valores de Referncia
Neutrfilos bastonetes (b)

3 a 5%

150 a 400 / mm 3

Neutrfilos Segmentados (S)

55 a 65%

3.000 a 5.000 /mm 3

Eosinfilos (E)

2 a 4%

100 a 300 / mm 3

Basfilos (B)

0 a 1%

50 a 80 / mm 3

Moncitos (M)

4 a 8%

200 a 650 /mm 3

Linfcitos (L)

20 a 30%

1.500 a 2.500 / mm 3

5) Interpretao
Neutrofilia: frequente nas infeces bacterianas, leucemias, processos inflamatrios.
Eosinofilia: frequente nas parasitoses, processos imunoalrgicos e leucemias.
Basofilia: processos imunoalrgicos e leucemias.

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Monocitose: infeces (septicemia, mononucleose e tuberculose).
Linfocitose: infeces virais agudas e infeces crnicas (tuberculose e sfilis), leucemias,
amigdalites e processos ganglionares.

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AULA PRTICA 06: CONTAGEM DE RETICULCITOS
1) Fundamento
Sangue + corante supravital (Azul de Cresil Brilhante ACB)
2) Procedimento
Pipetar 0,2 mL (200 L) do corante ACB em um tubo de hemlise ou tubo de ensaio pequeno.
Adicionar 0,2 mL (200 L) de sangue total e homogeneizar.
Levar ao banho-maria 37C durante 20 minutos.
Homogeneizar e fazer um esfregao em lmina limpa e seca.
Fazer a contagem de 1.000 hemcias com objetiva de imerso, anotando os reticulcitos
encontrados em cada campo.
3) Resultado
Expresso em % e /mm3
4) Valores de Referncia
Rn at 6%
Adultos 0,5 a 1,5%
5) Interpretao
Reduo da porcentagem: anemias carenciais, aplasias medulares, anemias no-hemolticas.
Aumento da porcentagem: anemias hemolticas, hiperplasia medular, doena hemoltica do recmnascido, hemorragias intensas aps acidentes ou cirurgias.
Impotncia clnica: discriminar entre as anemias hemolticas e no-hemolticas. Verificar a eficcia
do tratamento nas anemias carenciais (crise reticulocitria).

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REFERNCIAS
CARVALHO, M. G.; SILVA, M. B. S. Hematologia Tcnicas laboratoriais e
Interpretao. Belo Horizonte, 1988.
Manual de Exames do Laboratrio Clnico.
LORENZI, T.F. Manual de Hematologia Propedutica e clnica. Rio de Janeiro: Medsi,
2003. 655 p.
ZAGO, M. A. et al. Hematologia Fundamentos e Prtica. So Paulo: Atheneu, 2001.
1081p.