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J ULIANA RIBEIRO MARIOTTO

ESTGIO DE DOCNCIA
Enzimas





JULHO 2006
ENZIMAS
1 Conceito
Enzimas so catalisadores biolgicos, formados por longas cadeias de molculas
pequenas, chamadas de aminocidos. So, portanto, um tipo de protena com atividade
cataltica, sendo encontradas na natureza em todos os seres vivos. Sua funo viabilizar a
atividade das clulas, quebrando molculas ou juntando-as para formar novos compostos. A
singularidade desses compostos decorre do elevado grau de especificidade ao substrato em
condies moderadas, sob as quais atuam. Algumas enzimas so especficas para determinado
tipo de ligao qumica, como por exemplo, a capacidade da -amilase de romper unicamente
as ligaes -1,4 das molculas de amido. Outras so especficas para um tipo particular de
ismeros pticos, como a oxidao da -D-glicose pela glicose oxidase.
Toda a enzima uma protena, mas nem toda protena uma enzima.
2 Caractersticas das Enzimas
So produtos naturais biolgicos;
Apresentam um alto grau de especificidade;
Reaes baratas e seguras;
Possuem mecanismo de turnover, desempenhando a mesma funo consecutivamente,
sem serem consumidas no processo;
So altamente eficientes, acelerando a velocidade das reaes de 10
8
a 10
11
vezes;
So econmicas, reduzindo a energia de ativao necessria para a reao catalisada;
No so txicas.
3 Protenas
Exceto um grupo de molculas de RNA com propriedades catalticas (ribozimas),
todas as enzimas so protenas. A atividade cataltica depende da sua conformao protica
nativa, sendo esta perdida quando a enzima desnaturada ou dissociada em subunidades.
Os componentes das enzimas, os aminocidos, apresentam um tomo de carbono
ligado a uma carboxila, a um grupo amino e a um tomo de hidrognio. O quarto substituinte
uma cadeia (grupo R) especfica para cada aminocido (Figura 1).

Figura 1. Representao esquemtica do aminocido.

Para serem ativas, algumas enzimas requerem apenas seus resduos de aminocidos.
Outras requerem componentes qumicos adicionais chamados cofatores. Um cofator pode ser
um ou mais ons inorgnicos, tais como Fe
2+
, Mg
2+
, Mn
2+
ou Zn
2+
, ou uma molcula orgnica
complexa, chamada coenzimas. Algumas enzimas requerem ambos, coenzima e on metlico
para exibirem sua atividade. Uma coenzima, ou on metlico, que est covalentemente ligada
parte protica da enzima chamada grupo prosttico. Uma enzima completa,
cataliticamente ativa, unida sua coenzima e/ou ons metlicos, chamada de holoenzima. A
parte exclusivamente protica desta enzima chamada de apoenzima ou apoprotena.
3.1 Coenzimas
So aceptores de tomos ou grupos funcionais retirados do substrato em uma dada
reao e como doadores destes mesmos grupos ao participarem de uma outra reao e, por
isto, diz-se que as coenzimas so transportadoras de determinados grupos (Tabela 1). O fato
de as coenzimas estarem sendo constantemente recicladas permite que suas concentraes
celulares possam ser bastante reduzidas, muito menores do que as concentraes do substrato.
Tabela 1. Coenzimas e grupos aos quais se ligam/desligam em diferentes reaes.
Coenzima Grupo transportado
Adenosina trifosfato (ATP) Fosfato
Biotina CO
2

Coenzima A Acila
Flavina adenina dinucleotdeo (FAD) Hidrognio
Tetraidrofolato Carbono
Nicotinamida adenina dinucleotdeo (NAD
+
) Hidreto
Tiamina pirofosfato (TPP) Aldedo

Em alguns casos, a coenzima encontra-se covalentemente ligada molcula
enzimtica, constituindo um grupo prosttico da protena; em outros casos, a coenzima uma
molcula livre, reunindo-se enzima apenas no momento da catlise.
Algumas coenzimas so integralmente sintetizadas pelas clulas; outras apresentam
em sua molcula um componente orgnico que no pode ser sintetizado pelos animais
superiores. Esse componente, ou um precursor imediato, deve ento ser obtido atravs da
dieta, constituindo uma vitamina. As vitaminas so compostos orgnicos indispensveis ao
crescimento e funes normais dos animais superiores. Estas so classicamente divididas em
hidrossolveis e lipossolveis, sendo as vitaminas hidrossolveis aquelas que possuem funo
de coenzima ou fazem parte de molculas de coenzimas.
4 Estruturas das enzimas
4.1 Estrutura primria
Na molcula protica, os aminocidos esto ligados uns aos outros atravs da ligao
peptdica (Figura 2), estabelecida entre o grupo -carboxila de um aminocido e o grupo -
amino do aminocido subseqente, formando uma longa cadeia. Grupos carboxila e grupos
amino do radical R jamais participam da ligao peptdica.
O que caracteriza cada enzima o nmero de aminocidos componentes de sua cadeia
e a ordem em que eles se encontram, ou seja, a sua estrutura primria. Assim, apesar de
constitudas por apenas 20 aminocidos diferentes, as possibilidades de estruturas diversas
para as protenas so muito grandes. A estrutura primria responsvel pelas estruturas de
ordem superior que a protena exibe em sua forma celular, ou nativa.

Figura 2. Esquema da formao da ligao peptdica.

4.2 Estrutura secundria
Dois tipos diferentes de organizao regular, chamadas estruturas secundrias, so
encontradas nas enzimas. A cadeia peptdica pode ter segmentos organizados em -hlice,
sendo formada e estabilizada por pontes de hidrognio estabelecidas entre o tomo de
nitrognio e o tomo de oxignio (Figura 3).
Cada ligao peptdica oferece os elementos para a formao da ponte de hidrognio:
um tomo de hidrognio covalentemente ligado ao nitrognio e o oxignio, preso ao carbono
por uma dupla ligao. A ligao por ponte de hidrognio estabelecida entre os tomos
constituintes de uma ligao peptdica qualquer e os tomos da quarta ligao peptdica
subseqente, que a volta da hlice aproximou da primeira. Cada ponte de hidrognio uma
ligao fraca, mas o grande nmero dessas interaes confere muita estabilidade estrutura
que mantm. (Figura 4).

Figura 3. Ponte de hidrognio, formada com os elementos da ligao peptdica.


Figura 4. Esquema da -hlice, estabilizada por pontes de hidrognio.
A folha -pregueada formada por um arranjo paralelo de dois ou mais segmentos de
cadeias peptdicas, mantidas por pontes de hidrognio formadas pelos mesmos elementos que
constituem as pontes de hidrognio da -hlice (Figura 5). Nesse caso a ponte de hidrognio
une dois segmentos distintos da cadeia protica.

Figura 5. Esquema da folha -pregueada, estabilizada por pontes de hidrognio.

As enzimas apresentam, em sua conformao espacial, as duas estruturas secundrias;
parte da cadeia est organizada em -hlice e parte em folha -pregueada. Aparecem tambm
regies de conformao irregular, conectando os segmentos com arranjo definido (Figura 6).

Figura 6. Estrutura da lisozima, indicando segmentos em -hlice, segmentos em folha -pregueada e
regies sem estrutura regular.

4.3 Estrutura terciria
Esta estrutura descreve a conformao tridimensional que a molcula protica assume
em soluo, explicando o dobramento da cadeia peptdica com os enrolamentos, dobras e
voltas que a compem e que a levam a uma forma geral globular. As ligaes qumicas que
estabelecem e mantm a estrutura terciria so formadas sempre entre os grupos R dos
aminocidos. Estes grupos R podem ser divididos em dois tipos: apolares (hidrofbicos) e
polares. Como a gua um solvente polar, os grupos R apolares tendem a aproximar-se uns
dos outros, excluindo a gua, situando-se no interior da molcula, enquanto os grupos polares
voltam-se para a superfcie. Essa localizao dos grupos R constitui uma fora poderosa de
dobramento da cadeia polipeptdica.
Outras foras devem ser consideradas. Grupos R com carga eltrica positiva fazem
ligaes eletrostticas com grupos R com carga negativa. Outras foras importantes so as
pontes de hidrognio, formadas entre grupos R. Ao contrrio das pontes de hidrognio da
estrutura secundria, estas no apresentam qualquer padro regular, pois a localizao dos
grupos R, capazes de oferecer os elementos para a formao da ponte de hidrognio, esto
distribudos irregularmente ao longo da cadeia peptdica segundo a estrutura primria da
enzima.
As interaes responsveis pela estrutura tridimensional das enzimas so todas foras
fracas. Mas pode ser encontrada tambm uma ligao covalente fazendo parte das ligaes
que mantm a estrutura terciria: so as pontes dissulfeto, ou pontes S-S, formadas pela
oxidao de dois grupos SH, cada um dos quais presente na cadeia lateral de um resduo de
cistena, o nico aminocido a apresentar SH no grupo R. Designa-se resduo de aminocido
frao da molcula de aminocido efetivamente inserida na cadeia protica. A Figura 7
mostra as principais ligaes da estrutura terciria.
Obs: A forma espacial da enzima, responsvel pela sua funo, resultado indireto de sua
estrutura primria.


Figura 7. Esquema das principais ligaes responsveis pela estrutura terciria das enzimas. (a)
interao hidrofbica; (b) ponte dissulfeto; (c) ligao eletrosttica; (d) ponte de hidrognio; (e) regio
sem estrutura definida.

4.4 Estrutura quaternria
Estrutura quaternria a organizao presente nas protenas compostas de uma cadeia
polipeptdica e descreve quantos e quais monmeros compem a molcula e como estes
monmeros esto associados. As foras que mantm unidos os monmeros so as mesmas
que mantm a estrutura terciria: interaes hidrofbicas, pontes de hidrognio e ligaes
salinas, formadas, entre grupos R de aminocidos pertencentes a cadeias polipeptdicas
diferentes (Figura 8). A exceo so as pontes dissulfeto, ausentes na estrutura quaternria.

Figura 8. Estrutura quaternria da hemoglobina (protena no-enzimtica), composta por quatro
cadeias polipeptdicas, iguais duas a duas.
5 Classificao e nomenclatura das enzimas
A Comisso de Enzimas (CE) da Unio Internacional de Bioqumica (IUB) coloca
todas as enzimas em seis grandes classes (Tabela 2), cada uma delas comportando subclasses
conforme o tipo de reao catalisada. A cada enzima assinalado um nmero classificatrio
de quatro dgitos de um nome sistemtico:
Primeiro nmero designa a qual das seis classes a enzima pertence;
Segundo nmero indica o tipo de ligao que a enzima atua;
Terceiro nmero uma subclassificao do tipo de ligao;
Quarto nmero apenas um nmero de srie.

Tabela 2. Principais classes das enzimas.
N Classe da enzima Tipo de reao catalisada Atuao
1 Oxidorredutases
Reaes de oxidao-reduo ou
transferncia de eltrons
CH-OH
C=O
C=O-
CH-NH
2

CH-NH-
NADH, NADPH
2 Transferases
Transferem grupos funcionais
entre molculas
Grupos com um carbono
Grupos aldedo ou cetona
Grupos acil
Grupos glicosil
Grupos fosfatos
Grupos contendo enxofre
3 Hidrolases Reaes de Hidrlise
steres
Ligaes glicosdicas
Ligaespeptdicas
Outras ligaes C-N
Anidridos cidos
4 Liases
Catalisam a quebra de ligaes
covalentes e a remoo de
molculas de gua, amnia e gs
carbnico
=C=C=
=C=O
=C=N-
5 Isomerases
Transferncia de grupos dentro da
mesma molcula para formar
ismeros
racemases
6 Ligases
Catalisam reaes de formao de
novas molculas a partir da ligao
entre duas pr-existentes, sempre
s custas de energia
C-O
C-S
C-N
C-C
Exemplo: ATP +D-glicose ADP +D-glicose-6-fosfato
O nome sistemtico formal da enzima que catalisa a reao ATP:glicose
fosfotransferase, indicando que ela catalisa a transferncia de um grupo fosfato do ATP para a
glicose. O seu nmero na classificao enzimtica 2.7.1.1; o primeiro dgito (2) denota o
nome da classe (transferase); o segundo dgito (7) a subclasse (fosfotransferase); o terceiro
dgito (1), fosfotransferases que trabalham com um grupo hidroxila como receptor; e o quarto
dgito (1), indica ser a D-glicose o receptor do grupo fosfato. Quando o nome sistemtico de
uma enzima muito longo ou de uso difcil, um nome trivial pode ser usado, no exemplo este
nome hexoquinase.
6 Ao cataltica
O primeiro ponto a considerar a grande diferena de tamanho entre a enzima e seus
substratos. Um exemplo numrico: a enzima urase, que catalisa a reao de hidrlise da uria
tem peso molecular aproximado de 500.000 dltons, enquanto a uria tem peso molecular de
60 e a gua de 18. O investimento energtico para a sntese de uma molcula protica to
grande justifica-se pela obteno de uma estrutura muito precisa, com reentrncias de forma
apropriada e com grupos qumicos localizados em posies exatas para servir catalise. Para
que esta seja exercida, os reagentes, chamados de substratos, devem ligar-se molcula da
enzima em uma regio especfica, chamada stio ativo. O stio ativo uma cavidade com
forma definida, aberta na superfcie da molcula globular da enzima, constituda por grupos R
de aminocidos. Essa forma do stio ativo confere especificidade catalise enzimtica: para
ser reconhecida como substrato uma molcula deve ter a forma adequada para acomodar-se
no stio ativo e os grupos qumicos capazes de estabelecer ligaes com os grupos R ali
presentes (Figura 9).

Figura 9. Esquema da ligao do substrato no stio ativo.
6.1 Modelos enzima e substrato
Emil Fischer props, em 1894, que as enzimas se ajustavam como o modelo chave e
fechadura, isto , eram estruturalmente complementares em tamanho, forma e natureza
qumica a seus substratos (Figura 10).

Figura 10. Modelo chave-fechadura.

Uma enzima completamente complementar a seu substrato seria pouco eficiente. A
aproximao e a ligao do substrato enzima altera o balano de foras responsveis pela
manuteno da estrutura tridimensional da enzima, amoldando sua forma forma do substrato
e fazendo-a adquirir uma nova conformao, ideal para a catlise (Koshland, 1958, modelo do
encaixe induzido). A conformao dos substratos tambm tensionada e distorcida,
aproximando-se da conformao do estado de transio (Figura 11). esse conjunto de
mecanismos que torna a catlise enzimtica to eficiente.

Figura 11. Esquema do modelo de encaixe induzido.
7 Velocidade das reaes
Uma reao enzimtica simples pode ser escrita assim:
E +S ES EP E +P
E, S e P representam a enzima, o substrato e o produto. ES e EP so complexos da
molcula da enzima com o substrato e com o produto, respectivamente.
A funo de um catalisador aumentar a velocidade de uma reao, no afetando o
equilbrio da reao. Qualquer reao pode ser descrita por um diagrama de coordenadas da
reao (Figura 12), sendo esta uma representao grfica do curso energtico da reao. A
energia nos sistemas biolgicos descrita em termos da energia livre G. Em sua forma normal
estvel ou nvel basal, qualquer molcula (S ou P) contm uma quantidade caracterstica de
energia livre.

Figura 12. Diagrama de coordenadas da reao.

O equilbrio entre S e P reflete a diferena em energia livre dos seus estados basais.
No exemplo da Figura 12, a energia livre do estado basal de P menor que aquela de S, assim
G
0


para a reao negativa, e o equilbrio favorece P.
Um equilbrio favorvel no significa que a converso S P seja rpida. Existe
uma barreira energtica entre S e P que representa as transformaes necessrias para que a
reao ocorra em uma direo ou outra (colina de energia na Figura 12). Para sofrer a
reao, as molculas precisam superar esta barreira e, portanto, precisam ser elevadas a um
nvel superior de energia. No topo da colina da energia est um ponto no qual a queda para o
estado de S ou P igualmente provvel (caminho morro abaixo), sendo este ponto chamado
de estado de transio. A diferena entre os nveis de energia do estado basal e o estado de
transio chamada de energia de ativao (G
++
). A energia de ativao pode ser diminuda
pela adio de um catalisador, que aumenta a velocidade das reaes pela diminuio das
energias de ativao.
8 Medida da atividade enzimtica
A dosagem de enzimas sempre feita atravs da medida de sua atividade, que
avaliada pela velocidade da reao que a enzima catalisa. Para efetuar essas dosagens, uma
amostra da soluo contendo a enzima incubada com concentraes altas de substrato (para
garantir a velocidade mxima e impedir que pequenas variaes na concentrao do substrato
possam afetar as medidas). A velocidade da reao medida e expressa em Unidades
Internacionais. Uma Unidade Internacional (U) a quantidade de enzima capaz de formar 1
mol de produto por minuto em condies timas de medida (pH, temperatura, etc.),
especificadas para cada caso.