AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS FUNGICOS PRODUCTORES DE CELULASAS

Lilianha Malfavn Domnguez, Baltazar Gutirrez Rodrguez, Anna Ilyin

Departamento de Biotecnologa, Facultad de Ciencias Qumicas, Universidad Autnoma de Coahuila
Blvd. V. Carranza e Ing. J. Crdenas Valds, Col. Repblica, C.P. 25280, Saltillo, Coahuila
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Palabras clave: celulasas, hongos, aislamiento

Introduccin. Las celulasas son las enzimas que poseen
capacidad de hidrolizar la celulosa como sustrato. Las
perspectivas de aplicacin de estas enzimas son muy amplias
ya que el producto de hidrlisis es la glucosa que puede ser
utilizada en diferentes procesos de fermentacin o como
alimento, adems de que estas enzimas pueden tener un
papel importante en la resolucin de los problemas
ecolgicos y problemas de tratamiento de los materiales
celulolticos (papel, textil, etc.). Es decir, existe un gran
inters por utilizar los desechos de celulosa como sustancias
nutrientes en procesos de fermentacin, lo que permitira
convertir materias primas de costo muy reducido en
productos de gran valor.
Actualmente la mayor parte de las celulasas industriales se
obtienen por fermentacin sumergida del hongo
Trichoderma reesei. La bsqueda de microorganismos
productores de las enzimas celulolticos es de gran
importancia para desarrollo de nuevas tecnologas que
implican el uso de celulosa como materia prima a tratar (1).
En el presente trabajo se propuso aislar microorganismos
fngicos probables productores de celulasas, comprobar la
produccin de las enzimas de inters, evaluando la capacidad
de stos para crecer en los medios de cultivo que en calidad
de fuente de carbono contienen la carboximetilcelulosa
(CMC) o papel filtro y describir sus caractersticas
microscpicas y macroscpicas.

Metodologa. El aislamiento de los microorganismos de
inters se realiz a partir de las muestras que contenan las
esporas de los microorganismos fngicos y mostraban las
seales de degradacin de celulosa. Aislamiento primario se
realiz en el agar Sabouraud aplicando la tcnica de
diluciones seriadas. La descripcin de la morfologa
macroscpica de las colonias se efectu despus de 96 h de
incubacin. Despus de resiembra de los hongos que
mostraron la morfologa diferente se realiz la tcnica de
microcultivo y caracterizacin microscpica de los
microorganismos. La capacidad de producir la celulasas se
evalu mediante las tcnicas microbiolgicas utilizando
agar-CMC y papel filtro como fuentes de carbono. En las
pruebas con agar CMC la produccin de celulasas se
verific mediante la observacin de la presencia de las reas
no teidas lo que indica que el CMC se ha hidrolizado (1).

Resultados y discusin. Inicialmente se logr aislar 9 cepas
que mostraban las diferencias en la morfologa de las
colonias de color crema, blanco, naranja, amarillo limn,
amarillo con el borde de color azulado y colonias de
coloracin azulada. La tcnica de microcultivo permiti
revelar que dos de estas cepas se presentan las caractersticas
microscpicas similares. Las resiembras de los
microorganismos en agar Sabouraud confirmaron la
semejanza en las propiedades de macrocultivo. Con respecto
a otras 3 cepas que mostraban las caractersticas de
microcultivo muy similares para dos de stas no se confirm
la semejanza ya que morfologa de colonias y
comportamiento de crecimiento en agar selectivo y agar-
CMC no eran similares. De esta manera, se logr el
aislamiento de 7diferentes cepas de los microorganismos
fngicos.
Finalmente se realiz la seleccin de las 6 cepas con
actividad celuloltica mediante el ensayo en placa con agar-
CMC, en el cual se observ despus de teir con rojo congo
que todas las cepas presentaron zonas claras, debido a la
hidrlisis de la fuente de carbono.
Para confirmar la produccin de celulasas se realiz un
segundo ensayo resembrando las cepas en el papel filtro
utilizado en calidad del medio slido colocndolo en las
cajas petri y manteniendo la humedad con el medio mineral.
Para evitar la presencia de los compuestos de bajo peso
molecular el papel filtro fue previamente lavado con el
medio mineral y esterilizado. El crecimiento de 6 cepas (de
las 7 seleccionadas) se observ solo despus de 10-14 das
de incubacin. La morfologa de los cultivos en el papel
filtro fue distinta a la observada en agar Sabouraud. Los
resultados obtenidos demuestran que las cepas aisladas
poseen la capacidad para aprovechar los compuestos
celulolticas en calidad de fuente de carbono lo que indica la
produccin de las enzimas de inters.

Conclusiones. Se obtuvo la coleccin de 6 microorganismos
fngicos, el crecimiento de los cuales en los medios que en
calidad de nica fuente de carbono contenas los substratos
celulolticas demostr la produccin de las enzimas
celulolticas. Se requiere un estudio ms profundo en tanto a
la caracterizacin de las propiedades de las enzimas y
definicin de las condiciones adecuadas para su produccin.

Bibliografa.
1. Sinicin A.P., Chernoglasov V.M., Gisakov A.B. (1993). Mtodos
de estudio y propiedades de las enzimas celulolticas. Mosc, 150
p. (Ruso)