: Comportamientosintracelulares complejo retculo endoplsmico, lisosomas de Golgi, endosomas' y peroxlsomas

T-t

pasapor la compreneucariotas de lasclulas -l estudio de membrasin de una seriede orgnulosintracelulares Entre celulares. actividades na,que llevana cabodiferentes yla transcripcinde el almacenamiento ellasseencuentran la sntesis de protelnasde secrecin, informacin gentica, largay muchosotros grasos de cadena la hidrlisisde cidos eucariticas, propios de las clulas procesos metablicos Adems de esto, esesenquetienenlugar en cadaorgnulo. entrelos orgnulos,cocial que el intercambiode molculas nocido como trfico,estreguladode forma muy precisa, que cadaorgnulo recibelos componentes para asegurar apropiadosa su estructuray funcin. As pues,el conociy de la miento del papel de las membranasintracelulares el de es bsico en estudio de funciones, compartimentacin eucariotas. las clulas los principabrevemente En el Captulo4 describimos en eucariotas lesorgnulosdelasclulas posteriormente, y de lasmitocondrias 10y 11nos ocupamos los Captulos de consideEstamos ahoraen disposicin los cloroplastos. en los Aqu nos centraremos rar en detalleotros orgnulos. queaparecen en la Figura12.1. Comenzaremos destacados y lisoy con el complejo rugoso con el retculoendoplsmico procesamiento y disqaesonloslugares de sntesis, deGolgi" y los iisosomas Luegoanalizaremos tribucin de protenas. tempranosy tardos son orLos endosomas los endosomas. en el transporte y distribucin de los gnulosesenciales ascomo en que la clulatoma por endocitosis, materiales que son los orgnulosresla maduracinde los lisosomas,

ponsables tanto de sustancias extrade la digestincelular, intracelulares supercomo de los componentes celulares, la coleccin Paraterminar discutiremos de fluos o daados. en los que tienenlufuncionespropias delosperoxisomts, perxidosy que son, qumicasque generan gar reacciones y en la en la oxidacinde cidosgrasos adems, esenciales de ciertoslpidos de membrana. sntesis tendremospreestosorgnulos, Cuandoestudiemos el aparatode Golgi,los senteque el retculo endoplsmico, (perono losperoxisomas), pery loslisosomas endosomas delas tenecen al denominadosistemade endomembranas que se analizar La envuelta nuclear, en clulaseucariotas. estesistema. Como se el Captulo18,estambinparte"de puedeapreciar externa de en la Figural2.I,la membrana la envueltanuclearescontinua con la membranadel retperinuclear,limitado por las y el espacio culo endoplsmico de la envuelta, secontina con el espacio dos membranas conocido como luz o lumen del del retculo endoplsmico, las molculas difunden libremente A resultas de esto, RE. El material tambin puede compartimientos. entre estos endoplsmico al aparato de Golgi,los el retculo fluir desde por y de deinterendosomas los lisosomas, medio vesculas que actande lanzaderas entrediferentes orgnucambio, portan lpidos y protenasde membravesculas los. Tales solubles. En suma,los orgnulosy na, ascomo molculas que los conectan, forman un sistema nico de lasvesculas y espacios internos,a serviciodel metabolismo membranas en breve. celular.como veremos

y peroxisomas 3 5 1 lisosomas deGolgi, endosomas, complejo retculo endoplsmico, Comportamientos intracelulares:

Membrana plasmtica
IVEDIO FXTRACEIULAR V e s c u l ad e Endosoma tardo

Lisosoma Envuelta nuclear

Espacio perinuclear

tsJ

Vesculas de transporte Aparato de Golgi

Luz d e lR E

@o
Vesculas de secrecin

l,P*
o o o o ooo-..-o

Vesculas de transicin

endoplsmico liso

Ribosomas Retculo endoplsmico rugoso CIToSoL

Peroxisomas

9o

\=-

Figura12'L Estructuras celulares analizadas en este captulo. Estaleccinsecentraen el estuclio del retculoendoplsmico, el complejo de Golgi y los peroxisomas, incluyendotambin referencias a la envueltanuclearv a la membranaplasmtica. El espacio perinuclearenir" las dos membranasde la envueltanuclgarescontiguo con el interior del retculo ndoplsmico. ri., u ,,-,vez,estrelacionado con los espacios internosdel complejode Golgi, de los endosomas y de los lisosomas, gracias a lasvesculas que seintercambianentre ellos.Estecon;unto de membranasy espacios internos (excluyendo a los peroxisomas) constituyenel denominadoiirt.-u de endomembranas de las clulas eucariotas; el restodel citoplasmasedenominacitosol.

El retculo endoplsrnieo
El retculo endoplsmico (RE) es una red continua de sacos aplanados,tbulos y vesculas,que se distribuye por todo el citoplasmade las clulaseucariotas. Su nombre aunque pueda sonar rimbombante, es muy descriptivo.Endoplsmicosignifica <dentro del plasma, (de la clula) y retculo, del latn reticulum, significa red pequea. Los sacosse denominan cisternas del RE y el espacioesconocido como luz o lumen del RE. En una clula tpica de mamfero, del 50 al90o/o del componente membranoso estrepresentado por el RE. Pesea todo, y a diferencia de otros orgnulos, como las mitocondrias o los cloroplastos,el RE no es visible con el microscopio ptico, a menos que seateido con un colorante o un fluorforo. El RE se describipor primera vez a finalesdel siglo xx, cuando se observ que en algunasclulaseucariotas,especialmenteen las secretoras, aparecan regionescon gran afi-

nidad por los colorantesbsicos.Dichas regionesse denominaron con el nombre genrico de ergastoplasma, cuyo significadopermaneci oscuro hastalos aos 50, con el advenimiento de la microscopaelectrnica. De estaforma, Ios bilogos celularesreconocieron la red elaboradade membranas del RE e iniciaon la investigacinde su papel en los procesoscelulares.sta es una situacin frecuente en los descubrimientoscientficos:ios progresosen el conocimiento ocurren, a menudo, a remolque de los progresos tecnolgicos en campos afines,o incluso no relacionadosdirectamente. Ms recientemente, Ios avances en la tecnologa de microchip y en tcnicasde protemica-el estudio in vitro de las interacciones protena-protena- ha arrojado ms luz al conocimiento de la estructura y funcin del RE. Hoy en da se sabeque las enzimas presentesen el RE son responsables de la sntesisde protenasque seincorporan en el propio RE, el complejo de Golgi, los endosomas, los lisosomasy la membrana plasmtica.En el RE se sinte-

352

Captulo 12 Comportamientos intracelulares: retculo endoplsmico, complejo deGolgi, y peroxisomas endosomas, lisosomas

por la ctizan tambinlasprotenasque sernsegregadas luia. Asimismo,el RE espiezaclaveen la biosntesis de lpiy compuesdos,incluyendoa los triglicridos,el colesterol El RE es la fuente de la mayorade los tos relacionados. intracelulares lpidos que forman parte de las membranas y de la membranaplasmtica. difieren Losdos tipos bsicosde etculoendoplsmico en estfucturay funcin propiosde lascluLosdostipos de retlculo endoplsmico por presencia se distinguen la o ausencia de las eucariotas, (Fila membrana ribosomas anclados en caraexternade su gtna I2.2). El retlculo endoplsmicorugoso (RE rugoso) tieneribosomas unidosen la caracitslica(externa)de su (Figura membrana 12.2a). Los ribosomscontienenRNA, bsicos responsable de la intensatincin con colorantes paraidentificar el ergastoplasma, hoy da reconociusados del RE,loseledo comoRErugoso. Un territorio especfico mentos de transicin (ETs),intervienen en la formacin de lasveslculas de transicin, que exportan lpidos y protenas hacia el aparato de Golgi. El retculo endoplsmico liso (REliso) tiene tal apariencia por la ausencia de ribosomas (FiguraI2.2b). en su membrana por su Ambos retculospueden distinguirse,adems, lasmembranas morfologa. Como seve en la Figura12.1, aplanados, miendel RE rugosoforman, en general, sacos tras que las del RE liso tienden a formar tubulos.Los elementos de transicin del RE rugoso constituyenuna excepcina estaregla,y a menudo recuerdanal RE liso. La presencia o ausencia de ribosomas,reflejala diferenciafuncional entre los dos tipos de retculosde las clulaseucala riotas. En todo caso,no son orgnulosindependientes; demuestra la continuidadentrelas microscopa electrnica puedenviajar entreel RE lucesde ambos. Asl,los materiales de vesculas de transporte. liso y el rugoso,sin necesidad

Los dos tipos de retculo estnpresentes en la mayora eucariotas, si bien su volumen vara considede las cluias rablementeen funcin de la actividad celular.Las clulas que llevan a cabouna importante actividadde sntesis de protelnas, teneruna red muy desarrollada suelen de retcuque producenhorlo rugoso.Por otra parte,en las clulas hay un claro predominio del RE liso. monas esterodicas, tejido para obtenerfracCuandose homogeneizaun lasmembranas del RE suelenrompercionessubcelulares, fragmentos, que se cierran espontnease en pequeos denominadas microsomas.Cuandolos menteen vesculas a centrifugacin microsomas sonsometidos diferencial, se puedeaislar quereuna fraccinsin y otra con ribosomas, Estetipo de preparacin flejansu lugar de procedencia. es ti1para el estudiode las dos variedades extremadamente presente que los microsomas no existenen de RE.Tngase de la tcnica. En el Anelasclulas, sino que son artefactos xo 12A se facilita informacin detalladaal respectode la fragmentacinsubcelularpor centrifugacindiferencial. El RErugosoest implicadoen la sntesisy pfooesamento de protenas Los ribosomasunidos ala caracitoslicade la membrana de la sntesis de protedel RE rugoso,sonlos responsables nas, tanto solubles,como de membrana,Estasprotenas y en suelen incorporarse en los sistemas de endomembranas o bien sonexportadas como prola membranaplasmtica, ductosde secrecin. de endomemCmoentranlasprotelnasen el sistema Muchasde ellassondescargadas haciala luz del RE branas? rugoso durante su propia slntesis(insercin cotraslaciolasprotenas nal). Despus de la biosntesis de membrana quedanancladas a la membrana del retculopor susregioo por unionescovalentes dellpidos dememneshidrfobas brana.Lasprotenassolublesylamayoria de las protenas

(a) Retculo endoplsmicorugoso

-q5tr'

(b) Retculo endoplsmico liso

r--:-;---------'l

u,5pm

liso y rugoso. (a) Micrografta electrnica del retculo endoplsmico.El RE rugoso estsalpicadocon Figwa L2.2 Retculoendoplsmico ribosomas (TEM). (b) Micrograffa electrnicadel retlculo endoplsmicoliso (TEM).

Elretculo endoplsmico 353

Anexo

Le cENrRrFUcACrN: uNA rcNrce

IMPRESCINDIBLE EN BIoLoce CELULAR
La centrifugacin esuna tcnicainsustituiblepara el aislamiento y purificacin de orgnulos y macromolculas. Este mtodo sebasaen el hechode que cuandouna partculase someteaunafuerza centrfuga, su velocidadde desplazamiento en una disolucin dada, depende deItamaoydensidad dela partcula,ascomo de la viscosidad y densidadde la solucin. Cuantomayory msdensaseala partcula,mayor esIa velocidadde sedimentacin,o de movimiento por la solucin. Puestoque la mayorade los orgnulosy macromolculas difierensustancialmente unos de otros en tamaoo densidad, centrifugandouna mezclade componentes de la clula,se separarn, o resolvern, Iosde migracinmsrpidade los ms lentos.Esteprocedimientoseconocecomo fraccionamiento subcelulary permite a los investigadores aislary purificar orgnulos especficos y macromolculas, parasu posterior manipulaciny estudio. En 1974Albert Claude,GeorgePalade y Christiande Duve compartieronel Premio Nobel,por sustrabajospionerosen la centrifugacin y fraccionamiento subcelular. Claudedesempe un papelesencial en el desarrollode la centrifugacin diferencial, como mtodo de aislamiento de orgnulos. Palade estuvoprestoa usarestatcnicaen el estudiodel retculo endoplsmico y complejode Gogi,estableciendo lasfunciones de estos orgnulos en la biosntesis, procesamiento y secrecin de protenas. De Duve,por su parte,descubri dosnuevos -lisosomas y peroxisomas-.El descubrimiento orgnulos de los lisosomas por de Duve sebas enla centrifugacin diferencial, mientrasque su descubrimiento de los perodsomas, analizados en estecaptulo,seapoy enla centrifugacin en equilibriode densidad. Adems de la centrifugacindiferencialy Ia de equilibrio de densidad,Iacentrifugacin engradiente de densidad seempleahabitualmente pararesolverorgnulos. Estas dosltimastcnicas sontambinusadas paraseparar macromolcuias, como cidos nucleicos y protenas. Analizaremos cadauna de ellas, empezando con una generalde lascentrfugas consideracin y Ia preparacinde las muestras.

Partcula a sedmentar

Centrfugas
Una centrfugaestformada,bsicamente, por un rotor -a menudo confinadoen una cmara refrigerada- impuisadopor un motor elctrico. El rotor estunido al soportede los tubos que contienenlassoluciones o suspensiones de partculasa fraccionar. Existendos tipos principalesde rotores:rotores de ngulo fijo, en los que los tubos semantienencon un determinadongulo (Figura l2A.la) y rotores que flotanfes, permiten que los tubos alcancen la posicinhorizontal,como consecuencia del giro del rotor (Figural2A.lb). Para centrifugara altavelocidad-por encimade 20.000 por minuto (rpm)- serequiereuna revoluciones ultracentrfuga equipadacon un sistema de vacopara reducir la friccin (entreel rotor y el aire)y con una jaula de proteccin alrededordelacmara,por si seprodujeraun accidente. Algunasultracentrfugas giran a unas 100.000 rpm, sometiendo

(b) Rotor basculante Figura L2,A1" Rotores de centrifuga. Losrotores (a) decentrfuga pueden mantener a lostubosconun ngulofijo (b) o bientenerun cabezal quepermiteal tubo alcanzar basculante, la posicin paralela a la direccin dela fuerza centrfuga. que la fuerzade a lasmuestras a fuerzas 500.000 veces mayores (g). gravedad

Preparacin de lasmuestras
Los tejidosdebenserhomogeneizados antesde que los componentes puedanserseparados celulares por centrifugacin. Parapreservar la integridadde los orgnulos, la homogeneizacinsehace,habitualmente, en una solucin isotnicafra, como sacarosa 0,25M. La ruptura de las clulas puedeconseguirse hacindolas pasarpor un orificio estrecho,

354

Capitulo 12 Compoftamientos intracelulares: retculo endoplsmico, y peroxisomas complejo deGolgi, endosomas, lisosomas

\-/

l_lol_l -ln o

\-/

lill UU

elevado o Partculas con coeficiente de sedimentacin Partculas intermedio con coeficiente de sedimentacin . Partculas bajo con coeficiente de sedimentacin Figwa L2,A2 Centrifugacin diferencial. Esta centrifugacin permite separarpartculas en basea sus diferenciasen la velocidad de sedimentacin,que refleja,a su vez,diferenciasen tamao o densidad.Seilustra aqu la tcnica para tres partculas que difieren a cinco significativamenteen tamao. Las partculas,que forman parte de un homogeneizadoinicial, sesometen sucesivamente moradas), sedimentan rpidamente,las centrifugacionesiguales (nmeros encerradosen crculos). Las partculas grandeso densas(esferas azules),sedimentan algo ms lentamente y las menores o de ms baja densidad (esferasnegras), de tamao o densidad intermedias (esferas sedimentanmuy lentamente.Finalmente todas las partculas alcanzarnel fondo del tubo, a menos que el procesose interrumpa pasadoun cierto tiempo.

por choque sometiendo al tejido a vibracin ultrasnica, con mortero y almirez.El osmticoo manualmente, de orgnulos, resultante esuna suspensin homogeneizado y molculas. pequeos celulares Si el tejido se componentes la mayorade los homogeneiza con suficientesuavidad, y otrasestructuras permanecen reteniendo ntegros, orgnulos suspropiedades bioqumicas originales.

diferencial Centrifugacin
orgnulosen La centrifugacin diferencial permite separar Como seindicaen la Figura funcinde su tamaoo densidad. (esferas moradas), mayores o msdensas IZ{.2,las partculas lasde tamaoo densidad intermedio sedimentan rpidamente,

(esferas y las intermedia azules), sedimentan a una velocidad (esferas negras), mspequeas o de menordensidad sedimentan lentamente. el tamaorelativode un orgnuloo Podemos expresar en trminos de coeficientede sedimentacin, macromolcula a la que sedimenta una partcula, una medidade la velocidad El coeficiente de cuandoessometidaa centrifugacin. (S),en seexpresa en unidadesSvedberg sedimentacin que a TheodorSvedberg, el qumicosueco reconocimiento la ultracentrfuga, entre 1920y 1940. En Ia Figura desarroll de sedimentacin de algunos 12A.3seindicanlos coeficientes macromolculas y virus. orgnulos,

(contina)

-DRNA
1,9 tr DNA Figura12,A3 Coeficientes de sedimentacin de orgnulos, y virus. El coeficientede macromolculas sedimentacin de una partcula, expresadoen unidades Svedberg(S), indica cun rpidamente sedimentar cuando seasometida a una fuerza centrfuga.Los valores altos de S indican una mayor velocidad de sedimentacin. ds5i4ad de una partcula (expresada en g/cmr), determina qu banda alcanzar cuando seasometida a centrifugacin en equilibrio de densidad. ( Vase elProblema12.1 1.)

o l,/ o)

-) Protenas ,/ \ .,. \ y polisomas Ribosomas

( 'a
o
q)

15

solubles solubles

b &

V*
100

-/

\r

Peroxisomas

--.-----aNcleos

f icncnmae

l-""".

N/itocondrias Cloroplastos

106 105 ------------> Coeficiente de sed imentacln (S) 1000 104

Elretculo endoplsmico 3 5 5

Anexo

La Figura 12A.4ilustra un ejemplode la centrifugacin diferencial. Primero sehomogeneiza eI tejdo de intersO. Luegoseprocedeal aislamiento de lasfracciones subcelulares, sometiendo al homogeneizado y subsiguientes sobrenadantes a centrifugaciones que van aumentandoen intensidady sucesivas, duracin (@-O). El sobrenadante esla suspensin de aspecto msclaro que quedadespus de que laspartculas, de un tamaoy densidaddadas, hayansido retiradasen forma de perla (<pelleb), despus de cadacentifugacin. En cadacaso, el sobrenadante sedecanta, o pipetea,sobreun nuevotubo de centrifugacin y sevuelvea centrifugar, con mayor fuerza,para obtenerel siguiente pellet.En lassucesivas etapas, los pellets estnenriquecidos en: ncleos, clulas enteras y restos @; mitocondrias,lisosomas y peroxisomas @; RE y otros fragmentos de membrana@ y ribosomaslibresy macromolculas grandes @. El materialde cadapelletpuede resuspenderse y usarse para estudios al microscopioelectrnico o bioqumicos.El ltimo sobrenadante, denominadoclfosol estformado principalmentepor componentes celulares solubles. Cadafraccinobtenidaestenriquecida en los respectivos orgnulos, pero tambin estnparcialmente contaminadas con otrosorgnulos y componentes celulares. A menudo, la mayora de los contaminantes del pelletpuedeneliminarse, resuspendindolos en una solucinisotnicay centrifugandode nuevo.

Triturado y homogeneizado del tejido en un medo isotnicofro

Homogeneizado (fragmentos celulares en suspensin)

Centrifugado 1.000 9 durante 1 0m i n

Sobrenadante postnuctear Precipitado de ncleos y clulas sin fragmentar

Centrifugado g 20,000 durante 2 0m i n

r lr=-l J ll +- Sobrenadante postmitocondrial I . \Ia ll ^

- Pfectpttaoo

l - tI

de partculas grandes (mitocondrias, y lrsosomas peroxrsomas)

Centrifugacin engradente dedensidad

En el ejemploprecedente de centrifugacindiferencial, las partculasa separar estaban uniformementedistribuidasen la solucin,antesde la centrifugacin. La centrifugacin en gradientede densidad(o zonal) esuna variantede la anterior, en la que la muestraa fraccionarseextiendecomo una fina capa sobreIa superficiede un gradiente de soluto. El gradientese consigue con concentraciones crecientes del soluto-y por tanto de densidad- desde la superficiehastaIa basedel tubo. Cuandosesometenalafserza centrfuga, laspartculasque difierenen tamaoo densidad, sedesplazan haciaabajo,en bandas o zonasdiscretas, queemigrancon una tasadiferente. Debido al gradientedel soluto,laspartculas, conforme emigran, van encontrando soluciones ligeramente msdensas, que lasvan frenando.Como resultado, cadazonaquedabien definida,maximizandola resolucinde laspartculas. El proceso semuestra en la Figurat2A.6.Laspartculas (moradas)encuentran grandes o densas su bandarpidamente, lasde tamao o densidadintermedio (azules), sedimentan ms (negras), lentamente y lasmspequas lo hacen lentamente. La centrifugacin debedetenerse despus de que lasbandasde intershayanemigradolo suficientecomo para serresueltas, pero antes de que cualquierade lasbandasalcance el fondo del tubo. Pararlaen estepunto esesencial, puestodaslaspartculas son msdensas que la solucindel tubo, incluso que la de ms

Centrifugado g 80.000 durante th

j ll -'t- Sobrenadante 1 | ll postmitocondrial tu tl

q Precipitado

tl (lf=

t-t

con fragmentos de membranas

^l^^-+i^^^ Prar ilduua,

d e l R E Ly d e l R E R (fraccin microsomal)

Centrifugado g 200.000 durante 2h

Citosol (componentes) celulares solubles)

Proninitln

de ribosomas, virus y macromolculas grandes

y aislamiento Figura 12.A4 Gentrifugacin diferencial de orgnulos. Para aislar componentescelularesespecficos, se someteal homogeneizadode tejido a varias centrifugaciones.En cada una de ellasse emplea el sobrenadanteobtenido en la anterior y seaplica una mayor fuerzag, durante ms tiempo.

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Capitulo 12 Comportamientos intracelulares: retculo endoplsmico, complejo y peroxisomas deGolgi, endosomas, lisosomas

Mezclade partculas Gradiente de densidad

^ u ^""ih^ 4t I tua ^h^i^ aualu

l-=

Ir---1

T---1

tftl
tl

f-1

.t)
a Partculas con coeficientede sedimentacin elevado o Partculas medio con coeficientede sedimentacin ' Partculas de sedimentacin bajo con coeficiente

Figura12.A5 Gentdfugacin en gradientede densidad. Al igual que la centrifugacin diferencid, (vaseIaFgura 12A.2),esuna tcnica que permite separarpartculas en basea diferenciasen la velocidad de sedimentacin.Aqu, sin embargo,la muestra a fraccionar se dispone en la superficie de un gradiente de soluto cuya densidad aumenta progresivamentedesdela parte superior del tubo a la inferior. El ejemplo aqul mostrado espara tres partculas que difieren significativamenteen tamao. Sometidasa cinco centrifugacionesconsecutivas de igual fuerza (nrimeros encerradosen crculos), las partculas emigran a travs del gradiente,en forma de bandas diferentes.

abajo.Si la centrifugacin seprolongademasiado, lasbandas van alcanzando, una tras otra, el fondo del tubo, arruinandoel propsitodel proceso. verdadero La centrifugacinen gradientede densidad sueleutilizarse para separar, tanto orgnulos, como macromolculas. En la Figura 12A.6seaprecia la separacin de mitocondriasy lisosomas, con estatcnica. El tejido a estudiarsehomogeneiza y sometea centrifugacindiferencial, para obtenerun pellet enriquecidoen mitocondriasy lisosomas se O. Posteriormente, resuspende el pellet en un pequeovolumen de solucin isotnicay secolocasobreun gradientede soluto,dispuesto en tubo de plsticoy cuyaconcentracin crecedesde la parte superioral fondo @. Durante la centrifugacin, lasmitocondrias,que son y msdensas que los lisosomas, por el mayores sedesplazan gradiente, rpida@. como una bandade sedimentacin Despus de un tiempo apropiado, sedetienela centrfuga, se pinchala basedel tubo y secolectanlasfracciones@.Las que los mitocondrias,que sedesplazan msrpidamente lisosomas, estnmsprximasal fondo del tubo y por tanto, se primero. Los lisosomas recolectan aparecern en fracciones ms tardas. Analizandolasfracciones con marcadores de enzimas para mitocondriasy lisosomas, especficas sepodrn identificar las fracciones, ascomo el grado de contaminacinen cadauna de ellas.

Centrifugacin enequlbrio de densidad

La centrifugacin en equibrio de densidad(o isopcnica)es parala separacin y un mtodo muy efrcaz de orgnulos macromolculas, basado en diferencias de densidad(Figura I2A.3). Como la centrifugacin en gradientede densidad, en estecasoseempleaun gradientecreciente, pero en estecaso, la

del soluto seencuentra concentracin en los valoresde que sepretenden densidadde los orgnuloso macromolculas Paraseparar orgnulos, separar. sueleemplearse un gradientede establecido entre1,10 y 1,30g/cm' (0,75-2,3 sacarosa, M de Estemtodo tambin esvilido paraseparar sacarosa). las formasde DNA y RNA, en basea susdiferentes diferentes densidades. Dado que estas macromolculas son ms densas que los orgnulos, el gradientesuelehacerse con sales de pesados, como el cloruro de cesio(CsCl).En Ia figura metales 19.4seresumeun experimentoclsicoen el que seempleaun gradientede cesioparaseparar DNA dicatenario, que contiene el istoporaNdel que tiene el istopo lsN, aslcomo DNAs hbridos. La Figura l2 A.7 describe la separacin de orgnulos basada en la centrifugacinen equilibrio de densidad. El tejido de interssehomogeneiza y secentrifugadiferencialmente, para obtenerun pelletenriquecidoen mitocondrias,Iisosomas y peroxisomas luegoen una solucinde @. El pellet seresuspende sacarosa 0,25My sedisponesobreun gradientede sacarosa, que abarque lasdensidades de los tresorgnulos @. Durante la por el gradiente, centrifugacin, los orgnulossedesplazan hastaalcanzar su densidadde equilibrioo flotacin-el punto en el que la densidad de la sacarosa igualaa la densidaddel orgnulo- @. En la densidadde flotacin,lasfuerzassobreel orgnuloseanulany, por tanto, no sedesplaza. Pasado un tiempo pertinente,todos los orgnulosalcanzan su densidad de flotacin caracterstica, detenindose en la correspondiente posicin.Cuandosesuponeque todos los orgnulos han alcanzado el equilibrio, sedetienela centrfuga, seperfora la lasfracciones basedel tubo y secolectan @. Dadassus diferentes los tres orgnulosserecogen densidades, en fracciones diferentes @. (contina)

Elretculo endoplsmico 357

A ne x o

Aislamiento delprecipitado F granoes oe panrcuras I

(pasos 1-3 dera Fisura 12A.4)

Aislamiento del precipitado P grandes de partculas I I (pasos 1-3de la Figura 12A.4) l__l

lf=| lttl

tf--ll iltl
|il

r{V
I R"rrspensindel DrectDtiaoo en una solucinde sacarosa, que se coloca sobre un gradiente Sacarosa oe sacarosa

iltl

ilil

o
Gradiente de densidad de sacarosa

0,15 M Sacarosa 0,60M g Centrifugado 20.000 durante t h, laspartculas porel gradienie, se desplazan enfuncin de su coeficiente de sedimentacin, formando bandas

Resuspensin del t I precipitado en una \ I I solucin de sacarosa, \ lafl quese coroca soore A ll Gradiente un oradiente ,/ | ll de densidad Sacarosa/ ll ll de sacarosa de acarosa

a'v

0,75 M

Lisosomas ll-lf- L Mitocondrias lFlf-n

t-t It-l
+

Sacarosa--\o/ 2,30 M I

ll il

Centrifugado 60.000 9 durante 2 h, laspartculas porel gradlente, se desplazan en funcin de sucoeflciente, hasta alcanzar su densidad de eouilibrio

U
Perforacin del tubo y recoleccinde las gotas en diferentes viales

t-1 tl

Perforacin del tubo y recoleccinde las gotas en diferentes viales

ldentificacin de las fracciones enriquecidas

V Er,rqFrT
|||||l

lfl
U I.-J

Parte alta del gradiente ldentificacin de las fracciones enriquecidas

UUUUUT
Fracciones ricas en mitocondrias

nFnnEry nn n55
UUUUt
\__YJ

Fracciones ricas en mitocondrias

Figura 12.AGCentilfugacin y aislamiento Figuta engradiente dedensidad L2.A7 Centdtugacin y aislamiento enequilibrio dedensidad deorgnulos. deorgnulos.

de secrecin seviertena luz del RE.Algunasprotenas seincorporanen el retculodespus de sertraducidas(insercin postraslacional), circunstancia estaqueesla quetienelugar, de forma generalizada en los peroxisomas, las mitocondriasy los cloroplastos. En el Captulo 22 se analizarn en detallelos mecanismos debiosntesis y distribucindeprotenas en el RE. Ademsde la sntesis de polipptidos,el RE esel lugar dondetienenlugar lasprimerasetapas de adiciny proce-

samiento delos gruposhidrocarbonados delasglicoprotenas,el plegamientode protenas,el reconocimientoy eliminacin de polipptidosmal plegados y el ensamblaje de protenas multimricas. Como eslgico,la dotacinproteicadel RL incluyelasenzimas que catalizan lasmodificaciones co- y post-traduccin. La glicosilacin de protenas seestudiar en este mismo captulo.Un ejemplode protena implicadaen el plegamientode cadenas polipeptdicas esladisulfuroisomerasa,que cataliza la formaciny ruptu-

Gapitulo 12 Comportamentos intracelulares: retculo endoplsmico, complejo y peroxtsomas deGolgi, endosomas, lisosomas

Como ya de cistena. ra de puentes disulfuro entreresiduos en el Captulo 3, la formacin de estosenlaces estudiamos parael correctoplegamiento de los polipptidos esesencial (vanse a considerar el pleFiguras 3.5y 3.7).Volveremos gamientoproteicoen el Captulo22. y ensamblaje deprode facilitarel plegamiento Adems Lasprotenas el REesel lugar del control de calidad. tenas, plegadas o enmodificadas, queno han sido correctamente sambladas, se expulsandel RE en un procesoconocido de queesalkE (ERAD).Antes asociada comodegradacin por el aparatoGolgi,sondegradadas tasprotenas alcancen Fig,sr a 23.38).Variasendel citosol (vase los proteasomas la fibrosisqustica entrelasque seencuentran fermedades, yla hipercolesterolemia familiat tienensu origenen defecprocesos. tos en estos en la detoxificacion, El REliso est mplcado y ottos procesos de carbono de hidratos el metabolismo celulafes inclucelulares, El REliso intervieneen multiplesprocesos yendola eliminacinde sustancias txicas,el metabolismo de calcio o la de hidratos de carbono,el almacenamiento es Dentro de estaltima categora, de esteroides. biosntesis de las hormonasseimportantela sntesis especialmente de y lashormonasesterodicas y femenina xuales masculina adrenal. la corteza deflmacos. Una reacincomn a la mayoDetoxificacin y de la biosntesis de estera de lasrutas de detoxificacin roides,esla hidroxilacin, esdecir,laadicinde gruposhila En cadacaso, aceptoras. droxilo a molculas orgnicas de la familia de prode un elemento hidroxilacindepende Losmiembrosde estafama estn tenascitocromoP-450. en el REliso delos hepabien representados esp,ecialmente tambin en los tocitos (clulasdel hgado),pero aparecen pulmonesy en clulas del intestino.En el RE liso existeun desdeel sistema de transporte,que transfiereelectrones protena P450. La forcitocromo o el NADH a una NADPH de donar protena es ahora capaz de la P-450, ma reducida (Or), permitiendo la himolecular un electrnal oxgeno se muesLa siguiente reaccin droxilacinde la molcula. proteicodehidondeR esel aceptor tra esquemticamente, droxilos,actuandoel NADPH, o el NADH, como donante de electrn es: RH + NAD(P)H + H+ + or---ROH + NAD(P)+ + H2o (12.1) para Mientrasque el NADH esel donantede electrones y la sntesis de esteroides, el NADH eseI rela detoxificacin Ademsdel ductor en la hidroxilacinde cidosgrasos. NADPH o el NADH, el ogeno molecularesla otra molComoseindicaen Ia reacenlashidroxilaciones. culaesecial se de oxgeno, cin I2.I, uno de los tomosde la molcula mientrasque el otro esreusapara hidroxilar al sustrato,

quecatalizan reacciones estas se enzimas ducido aagaa.Las o monooxigenasas. de mixta oxidasas denominan funcin La hidroxilacin aumentala solubilidaden aguade la Estamodificacinescrhidrfobas. mayorade lasdrogas hidrfobossonsotica,puesla mayorade los compuestos y son,por tanto,relublesen los lipdosde lasmembranas mientrasque los compuestos tenidospor el organismo, primero haciala sanseeliminan fcilmente, hidrosolubles gre,y luegohaciael exterior(excrecin). Por ejemplo,la eliminacinde barbitricosaumenta cuando son hidroxiladospor las enzimasdel RE liso. Esto fenoa una rata,el sedante sepuededemostrarinyectando barbital. Uno de los efectosms notableses el rpido detoxificantes debarbitricosen el aumentode lasenzimas de una proliferacindramticadel hgado,acompaado que,en las personas secomprueba RE liso.Anlogamene con fenobarbital, seprecisan regularmente administradas losmismos efecdelmismo,paraconseguir dosis crecientes de las oxidasas Ms an,la especificidad de tos sedativos. puedenhidroxilar por funcin mifa estan amplia,.que tiles,como antia muchosotros agentes tanto solubilizar, El y esteroides. uso crnicodelos biticos, anticoagulantes la disminucindela efibarbitricos,tienecomo resultado y otrosmuchosfrmacos. de los barbitricos cacia P-450propiasdel Otro grupo importantede protenas de hidroxilacin, tambinen reacciones REliso,implicadas esel de las enzimasdel complejo denominadohidroxilasa participa en el medearilo.Este complejo dehidrocarburos policclicos, que son molculas tabolismo de hidrocarburos por dos o ms anillosbencnicos compuestas orgnicas molculas txicas unidos. Si bien la hidroxilacin de estas puedeser til, puesaumentasu solubilidaden agua,los productosoxidadosson, a menudo,inclusoms txicos quela hiquelos compuestos de partida.Seha comprobado droxilasade hidrocarburosde arilo puedeconvertir a carpotenciales en susformasqumicamente acticingenos vas. Los ratones que expresanniveles elevadosde la presentan una mayor incidenciaen el desarrohidroxilasa, quelos ratones normales, miende cnceres, llo espontneo la hidroxilasa que con un inhibidor de de los tratados tras pocos tumores. Cabe de arilo, desarrollan hidrocarburos citar aqu, que el humo del tabacoesun potenteinductor de la hidroxilasade hidrocarburosde arilo. dehidratos decarbono.El REliso de los hepaMetabolismo tocitos esttambin involucradoen la hidrlisisenzimtila presencia comolo demuestra delaglucadel glucgeno, es una de las La glucosa-6-fosfatasa cosa-6-fosfatasa. de la membranadel RE y seusa,a meenzimasexclusivas nudo, como marcador del retculo durante el fraccionadel grupo fosfatodesmiento celular.Catalizalaliberacin para formar glucosa libre y fosfato de la glucosa-6-fosfato, (P1): inorgnico * HrO -----+ * Pr glusosa Glucosa-6-fosfato (12.2)

Elretculo endoplsmico 359

Paracomprender la importancia de estafosfatasa, necesitamos recordar primero cmo almacenan el glucgeno las clulashepticasy las razonesy mecanismosde su posterior ruptura. Uno de los papelesprincipales del hgado es el mantenimiento, relativamenteconstante,de los nivelesde glucosa en sangre.Almacena la glucosa en forma de glucgeno y la libera segnla va requiriendo el cuerpo, especialmente entre comidas y como respuesta a la actividad muscular. El glucgeno heptico se almacena en forma de grnuios asociadosal RE liso (Figura 12.3a).La liberacin del glucgenoheptico estbajo control hormonal (vqselaFigura 14.24)y precisa de la activacin de la glucgeno fosforilasq, enzima que rompe al glucgeno en unidades de (Figura 12.3b).La glucosa-l-fosfatose glucosa-1-fosfato convierte fcilmente en el citosol en glucosa-6-fosfato, gracias a la enzima fosfoglucomutasa. Sin embargo,las membranassuelenserbastanteimpermeables alos azucares fosforilados.Para abandonar la clula hepticay entrar en el torrente sanguneo,Ia glucosa6-fosfato debe ser transformada en giucosa libre. La glucosa-6-fosfatasa unida a las membranas del RE, elimina el fosfato,permitiendo a la glucosasalir del hepatocito,gra(e1transportadorde glucosadei Capciasa una permeasa tulo 8; yaselaFigura 8.8).Una vez en la sangre, se distribuye hacia otras clulas que necesitenenerga.Resulta interesanterecordar que la actividad glucosa-6-fosfatasa es

propia del hgado,rin e intestino, faltando en msculo y sistemanervioso. Las clulasmuscularesy nerviosasretienen la glucosa-6-fosfatoy la emplean para satisfacersus propias necesidades energticas. Almacenamiento de calcio, En ciertasclulas, como lasmusculares, existensubdominios en el RE liso, especializados en el almacenarnientode iones calcio. En estasclulas,la luz del RE presentaconcentraciones elevadas de protenasligantes de calcio.Los iones de calcio son bombeadosal interior del RE por bombasde calciodependientes deATP (NlPasas)y se liberan en respuesta (vaselaFigua seales extracelulares ra 14.12).EI retculosarcoplsmico de las clulasmusculares es un ejemplo de RE liso especializadoen el almacenamiento de calcio.Las ATPasas de calcio estnintroduciendo constantementee1ion en el retculo sarcoplsmico. La unin de los neurotransmisoresa sus receptoresde la superficie de las clulasmusculares,desencadenada una cascada de sealizacinque culmina con Ia liberacin de calcio y Ia contraccin de las fibras musculares.

ElREdesempea unpapel esencial enla biosntesis demembranas Los estudios delabiosntesis deipidos y losdestinos destos en las ciulaseucariotas,reveian que el RE es la fuente primaria de lpidos de membrana, incluyendo a los fosfol-

Grnulos
do nlr nann

R Ei i s o

Mitocondria

HEPATOCITO

(a) Proximidad del glucgeno a l R Ei i s o

05rrm

irir:i,it,;r i.:.-:r Papeldel REliso en el catabolismo heptico del glucgeno. (a) En estamicrografaelectrnica de una clula hepticade mono, seobservannumerosos grnulosde glucgeno en ntima asociacin con el RE liso (TEM). (b) La degradacin del glucgeno se realizaeliminando unidades de glucosa,en forma de glucosa-1-fosfato, que son luego convertidas a glucosa-6-fosfato en el citosol.La liberacindel grupo fosfatodependede 1aglucosa-6fosfatasa, enzimaasociada a la membranade1RE liso. Una vezlibre, 1agiucosa salehaciala sangre, gracias a una permeasa de la membranaplasmtica.

RE liso

(b) Process of glycogenbreakdown in liver

360

Captulo 12 Compoftamientos intracelulares: retculo endoplsmico, y peroxisomas complejo deGolgi, endosomas, lisosomas

De hecho,la mayorade las enzimas pidosy el colesterol. de varios fosfolpidosde que se requierenpara la sntesis en ningunaotra partedela cno seencuentran membrana mientras Por ejemplo, lula. Ha pesea todo, excepciones. el RE toda la fosfatique las mitocondriasimportan desde de sus y la fosfatidilserina dilcolina,el fosfatidilinositol tanto externa,como interna, la fosfatidiletamembranas, nolamina Ia sintetizanellasmismas,por descarboxilacin previamente importada.Otrasexcepde la fosfatidilserina, y el dodel colesterol sonla biosntesis cionessignificativas deloscloy la deloslpidospropios licoldelosperoxisomas quetienelugaren dichosorgnulos. roplastos, de los fosfolpidosestrestringidaa una La biosntesis monocapade la membranadel RE.Los centrosactivosde haciael citosoly los estnexpuestos implicadas lasenzimas se incorporan a la monocapa lpidos recin sintetizados, celasmembranas Sin embargo, que mira haciael citosol. en ambosIalipdicas, con fosfolpidos Iularessonbicapas de transferencia dos.As pues,debeexistirun mecanismo desfaDado que estermodinmicamente de fosfolpidos. pasen de forma espontnea,y vorableque los fosfolpidos de un lado al otro de la memcon una tasasignificativa, de fosdepende delostraslocadores brana,la transferencia en las dichatraslocacin folpidos o flipasas,quecatalizan del RE. membranas como otrasenzimas, de fosfolpidos, Los traslocadores la velocidad delproy slo a afectan tan muy especficos son distransportadores la de ser dotacin En definitiva, ceso. transson qu tipo de fosfolpidos que ponibles,la determine de los traslocadores feridos.As pues,la especificidad en el Cadescrila la membrana, de contribuyeaIa asimetra el traslocadel RE tiene la membrana ptulo 7.Porejemplo, pero de fosfatidiletanolamina, no los dor de fosfatidilcolina, la fosEn consecuencia, fosfatidilinositolo fosfatidilserina. de la memcaras distribuidaen ambas fatidil colina aparece quedan branadelRE,mientrasquelos otrostresfosfolpidos forCuandolasvesculas en la caracitoslica. confinados del sistema con otrosorgnulos madas en el REsefusionen estadistribucindiferencialestablecide endomembranas, celulares. setransferira las otrasmembranas da en el R-E, el REa lasmidesde El movimientode los fosfolpidos entraa una dificultadaadiy loscloroplastos, tocondrias de endomemdel sistema delos orgnulos da.A diferencia por no crecen y los cloroplastos Iasmiotocondrias branas, en el derivadas del RE.En lugardeeso, fusinconvesculas citoplasmaexistenunasprotenasde intercambio de fosque defosfolpidos), de transferencia folpidos (o protenas la membranadel RE a las desde llevana los fosfolpidos y loscloroplastos. externas delasmitocondrias membranas un tipo esreconoce de intercambio Cadatipo de protena y lo llequeextrae deuna membrana pecfico de fosfolpido, Estatransfeva, a travsdel citosol,a la otra membrana. rencia contribuyetambin al movimiento de fosfolpidos de la clula,incluyendoa la desde el RE a otrasmembranas membrana olasmtica.

Aunqueel retculoesla fuentede la mayorade los lpisu composicinvarasignificativamendos de membrana, Por de la clula(Tabla12.1). te de la de otrasmembranas plasmtpicade la membrana una carcterstica ejemplo, bajo essu contenidorelativamente tica de los hepatocitos, esfingomielina y gliy de colesterol, alto fosfoglicridos de que produce se un aupodido comprobar Se ha colpidos. las membranas, durante en progresivo de colesterol mento el RE haciaotros compartimientos desde su progresin plasmtica. Paralelamente, haciala membrana finalmente, en el grosorde la de incremento seregistraun gradiente tienen un grosoraprodel RE Lasmembranas membrana. plasmque la membrana ximadode unos5 nm, mientras que el aulos 8 nm. Algunos bilogos creen tca alcanza en los fenmenos de mentoen grosortieneimplicaciones que demembrana, y distribucin deprotenas ciasificacin el aparato de dequeconsideremos despus sern discutidos en el procesamiento de Golgi y el papelque desempea protenas. t2.l Tabla delRE delasmembranas Composicin y plasmtica de rata en hepatocitos Membrana delleticulo Membrana plasmtica

Gomponentes dela membrana

Pesoporcentual de cadacomponentede membrana,referido al pesototal de la membrana Carbohidratos Protenas Lpidostotales 10 62 27 10 54 36

porcentual de los lpidos de membrana,referido al total Peso de lpidos Fosfatidiicolina Fosfatidiletanolamina Fosfatidilserina Colesterol Esfingomielina Glicolpidos Otroslpidos 40 t77 54 617 519 frazas 27 7 22 24

El complejo de Golgi
Nos centraremos ahora en el complejo de Golgi, un componente del sistemade endomembranas,ntimamente ligado al RE, tanto fsica,como funcionalmente. El complejo de Gol$ (o aparato de Golgi) debe su nombre a Camillo Golgi, el bilogo italiano que lo describi por primera vez en 1898. Utilizando tetrxido de osmio para teir neuronas, not la presenciade un precipitado del metal, formando una red delicada alrededor del ncleo. Posteriormente se pudo comprobar el mismo tipo de reaccin en diferentes tipos celulaPesea todo, los resultados resy con distintos metalespesados. eran inconsistentesy no sepudo identificar ninguna estrucElcomplejo deGolgi

36r

grafas electrnicas, comola de la Figura12.4b, puedenresultar equvocas; estosorgnulosson, en realidad,estructuras muy dinmicas.Tanto el RE como el complejo de Golgi estnrodeadosde multitud de vesculasde transporte, quepartende susmembranas en una regindela clula y sefusionancon otrasmembranas. Thles porvesculas tan lpidosy protenas desde los elementos detransicindel RE al complejode Golgi, entrelascisternas del propio dictiosomay desde el complejode Golgi hastavariosdestinos celulares, comolos grnulos de secrecin, los endosomas y los lisosomas. El complejo de Golgiestfomado por unaseile Lamayoria de lasvesculas implicadasen la transferende cistemas cia de lpidos y protenas, seconsideran vesculas cubiertas, debidoa la presencia El complejo de Golgi estintegradopor una seriede cisde cubiertas, o capas, deprotenas, que rodeana su caracitoplsmica, ternasaplanadas a medidaque la vescula de membrana, con forma de sacos discoise Lascubiertas dales,apiladoscomo se muestraen la Figura 12.4a.Cada va formando. sonresponsables de incurvara Ia membrana, agrupacinsedenominapila de Golgi (o dictiosoma) facilitando la vesiculacin y fy desaparecen de la vescula antes de questa cilmenteidentificableen el microscopioelectrnico(Figusefusione conla membrana de destino. ra 12.4b).Generalmente La composicin hay de 3 a 8 cisternas por cada de la cubiertadepende de Ia funpila,si bien en algunos cin de cadavescula puedenservariasdocenas. en particular.Las protenas casos El de cunmeroy tamaode los dictiosomas biertas ms estudiadas sonla clatrina.COPIy COPI/.(COP depende del tipo celular y de la actividadmetablicade la clula.Algunastieesla abreviatura de <coat protein>, en espaol, protena de -espenen un nicograndictiosoma, mientras queotras la cubierta.) La presencia de vesculas cubiertas esuna cacialmente lasmuy activas en secrecin- poseen centenares, racterstica comn en la mayora de los procesos celulares e inclusomillares, de apilamientos relacionados de Golgi.La luz del comcon la transferencia o intercambio de sustanplejo de Golgi,espartedela red de espacios internosdel siscias,bien entrelos diferentes compartimientos de mem(Figura12.1). temade endomembranas branade una clulaeucariota, bienentreel interiory el exterior celular. Analizaremos mstardeen estecaptulo, la Vesculas de tmnsporte. La visin esttica del retculo enformacinde lasvesculas cubiertas y su papelen el transy el aparato doplsmico de Golgi,queresulta de lasmicroporte de lpidosy protenas.

tura celularresponsable de la tincin. Como consecuencia, lanaturaleza-e inclusola propia existencia- del complejo de Golgi,fue muy controvertida hastalos aos50,cuando pudo por fin identificarse, graciasal microscopioelectrnico. Desdeentonces se ha progresado mucho en la comprensin de la estructura y funcin del aparatode Golgi, susrelaciones con el REy su papelen lasmodificaciones qumicas, y empaquetamiento clasificacin de lasprotenas que recibe, va vesculas de transicin,desde el RE.

e e e
intermedias

Vesfculas de

\'\9

ffi[{i[\'e'!
(b) Dictiosoma en una clulade un alga RTG

(a) Dictiosoma en una clulaanimal

FigutaL2,4 Apatato de Golgi. Cada unidad (dictiosoma) del aparato o complejo de Golgi, estformado por un nmero reducido de cisternasaplanadas.(a) En la cara cis,lasvesculasde transicin provenientesdel RE se fusionan con las membranas de la red cls-Golgr (RCG).Desdelacaratranspartenvesculasdetransporte,queseformanenlared trans-Golgi(RTG).Lasvesculasdetransportellevn Ipidos y protenas hacia otros componentesdel sistemade endomembranas,o forman vesculas de secrecin.(b) En estamicrografa electrnica de una clula de un alga,se muestra un dictiosoma del aparato de Golgi (destacadoen azul), junto a Ia en'uelta nuclear (TEM).

362

Gaptulo 12 Comportamientos intracelulares: retculo endoplsmico, y peroxisomas complejo deGolgi, endosomas, lisosomas

Lasdoscarasdel dictiosoma.Cadapila del Golgi tiene dos Iados(o caras)distintas(Figura 12.4).Lacaracis(o de formacin), mira hacialos elementos de transicindel RE.El compartimientodel Golgi msprximo a dichoselementos red cis-Golgi detransicin,esuna red tubular denominada (RCG).Lasvesculas provenientes del RE,cargadas cubiertas estnllegando con lpidos y protenasrecinsintetizados, membranas sefusionan. continuamente a la RCG,concuyas La caraopuesta del complejode Golgi esla cara trans (o de maduracin). Los compartimientos de estelado, anlogamentea la RCG.forman una red detbulos,conocida como vered trans-Golgi(RTG).Aqu seforman constantemente quellevanlasprotenas prosculas cubiertas de transporte, los grnulos cesadas, desde el complejode Golgi hasta deselos lisosomasy Ia membrana crecin,los endosomas, plasmtica. Lascisternas situadas entrela RCGyla RTG,son y en ellastienelulascisternas intermediasdel dictiosoma protenas. gar gran partedel procesamiento de intermedias, LasredesRCG y RTG y las cisternas son diferentes; cadacompartibioqumicay funcionalmente mientotienesu propiadotacinde enzimas, necesarias en paso y membranas. Las cada delprocesamiento deprotenas y citoqumicas, han detcnicas de tincin inmunolgicas que en la RCGseacumulan protenas reciertas mostrado del complejo FigwaL2.5 Tincininmunocitoquimica de Golgi, y enzimas, interdiferentes de lasde lascisternas ceptoras micrografa electrnica se puede apreciar un dictiosomade En esta mediaso de las de la RTG.Estapolaridadbioqumicase celularseha teido una clularenalde conejo.La seccin quemuestra un dictiosoma deuna ilustraenla Figura12.5, para demostrarla presencia de la enzima especficamente, La tincin especfica de la N-acetil- N-acetilglucosaminatransferasa clularenalde conejo. I que interviene en la glicosilacin glucosamina I, la enzimaque aadeN-acetil- terminal de protenas.La flechay el corchetesealana cisternasno transfereasa glucosamina glucdicas a lascadenas de lasglicoprotenas, teidas,demostrandoque la enzimaseconcentraen unaspocas prximas ala cara clsdel dictiosoma.De aqu cisternas mediales, que la enzimaseconcentra en Iascisternas indemuestra puedeconcluirseque la adicin de N-acetilglucosamina a Ios termedias del complejode Golgi. unidos previamente a protenas, seproduceal poco oligosacridos RCGy RTGy lascisternas intermedias, tamLasredes ingresen en el aparatode Golgi (TEM). de que dichasprotenas que llevan cubiertas bin difierenen los tipos de vesculas asociadas. Lasvesculas formadas en el REparael transporpor y lpidoshaciala RCG,estn revestidas te de protenas transporte; por el contrario, las molculas pertenecientes al que partende protenas COPII,mientrasque lasvesculas RE y sucesivos compartimientos del Golgi, deben ser retepor la RTG o de las cisternas intermedias, estncubiertas nidas o recuperadas. estar cuCOPI.Porltimo,lasvesculas dela RTG,pueden De acuerdo con el segundo modelo, conocido como por COPI o clatrina. biertas modelo de maduracin cisternal, las cisternas del Golgi
son compartimientos transitorios, que cambian gradualmente desdela RCG a la RTG, pasandopor las cisternasiny proteinas Flujode lpidos a travsdel complejo de Golgi termedias.En estemodelo, Ias vesculasdel transicin del paraexplicar RE convergenpara formar la RCG, en la que se acumulan Sehan propuesto dosmodelos el movimienpara el procesamientoinicial de las to de lpidosy protenas desde la RCG a la RTG,pasando las enzimas necesarias paso, por las cisternas protenas.Pasoa mientras adquieren enzimasadiciointermedias del complejode Golgi. De nales,cadacisternaclsseva transformando primero en cisacuerdo con el modelo de cisternaestacionaria, cadacompartimiento del dictiosomaes una estructuraestable. El terna intermedia y luego en cisterna trans.Lasenzimasque regresan, va vesculas, van dejando de ser necesarias, trfico intercisternalestmediadopor vesculas de transdesporte,queseformanpor gemacin y sefuen una cisterna de los compartimientos tardos a los tempranos. Por ultimo, la siguiente o grnulos de secrecinde contenisionancon otra,generalmente de la secuencia la RTG forma vesculas que serndirigidos a diferentesdestinosms protenas do especfico, de cisa trans.Las destinadas a la RTG-que sey empaquetadas rn clasificadas en vesculas con mltiples all del complejo de Golgi. y conLos dos modelos no tienen por qu sermutuamente exdestinos- no tienennecesidad de serseleccionadas de cluyentes: de hecho, ambos deben coexistir en cierto grado, centradas, sino que viajan hacia adelante, en vesculas

Elcomplejo deGolgi

363

dependiendo del organismoy del papelde la clula.Auntalizadas enzimticamente. Existen dos tipos de glicosilaque el primer modelo estapoyadopor muchasevidenciones (vaselaFigura 7.25).La glicosilacin asociadaa N parece cias, claroquealgunos (o glicosilacin en N) supone la adicin de una unidad escomponentes dela clulapresentes en el compartimientointermedio,son demasiado pecfica de oligosacrido al grupo amino terminal de ciergrandes parasertransportados enlaspequeas vesculas de tos residuos de asparagina, que aparecencomo parte de la transporte.Por ejemplo,las escamas polisacardicas de alsecuencia de tres residuosAsn-X-Ser o Thr, siendo X cualgunas especies de algas, seforman en los compartimientos quier aminocido, exceptoprolina (vaselaThbla 3.3, para tempranos del Golgi.Pese a serexcesivamente grandes para las abreviaturas de los aminocidos). La glicosilacin en O caberen lasvesculas de transporte,acaban apareciendo en consiste en la adicin del oligosacrido al grupo hidroxilo los compartimientos tardos,que finalmentese fusionan de determinadosresiduosde serinaso treoninas.Cada etacon Ia membranaplasmtica, liberando el producto final pa de la glicosilacin es estrictamente dependiente del paso queseincorporaa la paredvegetal. precedente.lJn error en una etapa, debido quiza una eny antetgtado.El desplazamiento Tlanspolte rettgtado de materialdesde el RE haciael complejode Golgi y la membrana plasmtica, se denomina transporte antergrado. |unto con los lpidos y lasprotenasa transportar (el <cargo>) en lasvesculas estnpresentes las molculas esencialesparael empaquetamiento del cargoy paradirigir a lasvesculas haciael destinoapropiado.Cadavezque un grnulo de secrecin sefusionacon la membrana plasmtica, liberando su contenidopor exocitosis, una fraccindela membranaqueseoriginen el RE,pasa a formar partedela superficie celular.Paramantenerel balanceen el flujo de lpidoshaciala membrana plasmtica, asegurando la entradade componentes parala formacinde nuevas vesculas,la clularecicla los lpidosy protenas, queya han cubierto sus funciones en etapastardas del transporte antergrado. Estafuncin severificapor medio del transporte retrgrado,esdeci el flujo devesculas devueltadesde el complejode Golgi al RE. En el modelode cisterna estacionaria, el flujo retrgrado facilitala recuperacin delpidosy protenas especficos, quepasan del REa la caraclsde un dictiosoma prximo,o el retornode protenas especficas de cadapartede lascisternasmediales. El materialdestinado a la RTG contina haciaadelante. No est clarosi este flujo retrgrado seproducedesde cadacisterna intermedia haciael RE,o si tiene lugar de forma discreta,retrocediendosucesivamente, de cisterna en cisterna. En el modelodemaduracin cisternal. el flujo retrgradorecupera el materialgracias a compartimientosrecinformados, en los que seincluyenlos receptoresy enzimas, queya no sonnecesarios en los compartimientosmsmaduros.
zima an6mala, puede bloquear futuras modificaciones del carbohidrato y terminar con consecuenciasgraves para el metabolismo celular, que a menudo provocan la enfermedad del organismo. Nos centraremos ahora en la glicosilacin en N. Conceptualmente, el proceso puede dividirse en dos etapas -la glicosilacin inicial y las modificaciones posteriores en la cadenalateral-. Como seilustra en la Figura I2.6,las enzimasque catalizanvarios pasosde la glicosilaciny modificacionessubsecuentes, seencuentranen diferentescompartimientos, o grupos de compartimientos, del RE y el complejo de Golgi. La primera etapa de la glicosilacin en N, denominada glicosilacin central, se verifica en el RE. El az,car que se une directamentea la asparagina, essiempre N-acetilglucosamina (GIcNAc),hidrato de carbono modificado, que ya vimos en el Captulo 3 (vaseFigura3.26a). Pese a la variedad de oligosacridos encontradosen las glicoprotenasmaduras, todos los hidratos de carbono aadidos a las protenas en el RE, tienen un esqueletocomn rico en manosa, formado por dos unidadesde GlcNAc, nueve de manosay tres de glucosa.Este oligosacrido central, se ensamblapor la adicin secuencialde los monosacridosa un transportador activado, de naturalezalipidica, denominado dolicol fosfato.El ensamblajedel oligosacridocentral se muestra en la Figura 12.7.Obsrveseque las etapastempranas del proceso tienen lugar en la caracitoslica de la membrana del RE y las tardas en Ia luz del propio RE. La traslocacin desde el citosol hacia la luz del RE, est catalizadapor una flipasa especfica. Unavez completado el ncleo, se transfiere por completo desdeel dolicol al residuo de asparagina de la protena, reaccin catalzadapor la enzima de membrana, oligosacaril transferasa.Normalmente la adicin del oligosacridocentral se produce conforme se sintetiza el polipptido, en un ribosoma asociadoa la membrana del RE. Esta glicosilacin cotraslacionalcolabora en el correcto plegamiento de la protena. La inhibicin de la glicosilacinresulta en la aparicin de agregados de protenas mal plegadas. Durante la segunda etapa de la glicosilacin en N, el oligosacridocentral serecorta y modifica. Como en la glicosilacin central, las etapas iniciales se producen en el RE y a menudo ocurren antesde que sehaya completado la bio-

Papel del RE y el complejo de Golgi en la glicosilacin de protenas

Buena parte del procesamiento de protenas que tiene lugar en el complejo de Golgi, est relacionado con la glicosilacin, es decir, la adicin de cadenaslaterales de hidratos de carbono, a residuosaminoaclicosespecficos de protenas, para formar las glicoprotenas. Posteriormente se modifica el oligosacridoaadido, en una serie de reaccionesca364

Gapitulo 12 Compoftamientos intracelulares: retculo endoplsmico, y peroxisomas complejo deGolgi, endosomas, lisosomas

consiguiendo plegadas, aadiendouna unidad de glucosa, que la glicoprotenaentre en un nuevo ciclo de unin a disulfuro.Una vez que la CNX/CRT,para formar puestes no vuelve a serrecocorrectamente, protena seha plegado nocida por la UGGT y eslibre para salir del RE y alcanzar el complejode Golgi.Cuandollegueaqu,laglicoprotena a medidaquevayapasando, modificaciones, sufrir nuevas intermediasy la cara hacia las cisternas desdela cara cis, trans.Estasglicosilacionesterminales muestranuna vaen que responde a la gran diversidad riabilidad destacable, -A \J^u-r\-\-/laterales de oligosacride las cadenas y funcin . estructura \) l',r-acEiilgaracto.urn,nu unlon de ) a serinao treonina (^) dosde lasglicoprotenas. I o . Prlmera etapaen la toslorllaclon I -^. la eliminacin terminal incluyesiempre La glicosilacin O que se aadieroncomo de las unidades unas cuantas a) de ! no hay o central.En algunoscasos parte del oligosacrido '. Eliminacin de manosa el o cuandola glicoproteinaalcanza ningn procesamiento . Segundaetapaen la fosforilacin E o ricosen manosarecomplejo de Golgi. Los oligosacridos o) retienenlas dos unidadesde GlcNAcy de seisa sultantes, o Eliminacin de manosa oligosacrisegeneran En otroscasos .c) ochode lasmanosas. . Unin de N-acetilglucosamina ( de N-acetil-glucosamiulterior por adicin dos complejos, .: C el cidosilico comola galactosa, na y otroscarbohidratos) c ' y (las galactosa cidosilila del de estructuras o la fucosa . Adicin de cidosilico del carboEn funcin la Figura 7.26a). en co semuestran = compartimiento melugar en un hidrato,la adicintendr de Adicin complejo de Golgi, o en la dial,prximo a la caratransdel Sulfatacin del complejo de Golsalen lasglicoprotenas RTG.Cuando ricos en oligosacridos gi, puedenllevar exclusivamente o ambos. complejos, oligosacridos manosa, de Golgien Ia glicosilacin, Visto el papeldel complejo categoras de quedosdelasmsimportantes no sorprende de las etapasde la $icosllaciny Figura12.6 Compartlmentacin lasglucn sean sintepresentes en losdictiosomas) enzimas de ptoteinas' Las enzimasque modificaclones subsecuentes cataliLasglucnsintetasas glucosiltransferasal tasasylas catalizanla glicosilacin y modificaciones posterioresde Ias a partir demonosacrizanla formacinde oligosacridos protenas,residen en diferentescompartimientos, o grupos de a las unen carbohidratos compartimientos, del RE y el complejo de Golgi. El procesamiento dos,y las glucosiltransferasas conforme las protenas emigran de un tiene lugar secuencialmente, complejidad delas dela posible protenas. Comoindicador compartimiento a otro. Las etapasenumeradasen la figura, son baste citar quehayciende oligosacridos, laterales cadenas posibles, que no tienen porqu ocurrir ejemplosde modificaciones en el REy el complediferentes transferasas glicosil tos de en todas las glicoprotenas. jo de Golgi.Estas en el dicsedistribuyen y otrasenzimas de consupapelen el proceso tiosomadeforma consistente quecada contiene una cocisterna de manera glicosilacin, sntesis de la cadena polipeptdica. Por la accin de glucode glucode enzimas. y manosidasas, especfica seeliminantresunidades Ieccin sidasas quela glicosilacin ocurreexclusivavaproceso, interaccionan destacar Duranteeste Conviene say una demanosa. de Iasmemrecinsintetizada, menteen la caraluminaly no en la citoslica del REcon la glicoprotena riasprotenas y gliLa calnexina(CNX' branasdel REy complejode Golgi.Lasglicoprotenas paraasegurar su correctoplegamiento. orgnulos son,por tanto, en estos ensamblados colpidos protena de membrana)o la calreticulina (CRT,soluble) y proque contribuyena la asimetrade la membra'ha. monoglucosilada puedenunirsea la glicoprotena elementos y lpidos glicosilaa queforlas protenas disulfuro,gracias Siguiendoa su biosntesis, moverla formacinde puentes y una tiol oxidorre- dos miran alaluz del REy complejode Golgi. Cuandolas con la glicoprotena man un comPlejo parafupartende estos orgnulos de transporte conocidacomoErp57.Una vezformado el puente vesculas ductasa tambinseexportaIa asiy la unidadfinal con otrasmembranas, el complejoproticosedisocia sionarse disulfuro, Dado quela cara II. durantela glicosilacin. metraestablecida seeliminapor la enzimaglucosidasa de glucosa equivalente a la superdel retculo,la luminal del RE estopolgicamente En estepunto, una glucosiltransferasa qu por todos los (uDPglucotransferasa) actua se comprende de la clula, glucosa:glicoprotena ficie externa UGGT glicoprotenas, se encuentran en la la glicoproteplegamiento de de las del correcto oligosacridos comoun sensor plasmtica. protenas mal la mernbrana a las de La se une extracelular UGGT cara na recinsintetizada.
. Biosntesis central del oligosacrido para la glicosilacin en N de residuos de asparagina . Procesamiento inicial central del oligosacrido . ldentificacin y eliminacin mal plegadas de protenas
O @

\sr

y el complejo deproteinas 365 deGolgi enlaglicosilacin Papel delRE

MEMBRANA DELRE (a) Dolicol fosfato

(b) Sntesis secuencial del oligosacrido central

UDP-GlcNAc

l' i' lI cHr-c : cH-cHr-l:Hr- c : cH- cH

CH.

CH

-cH2-cr.-or-cH2-c cH,

?\
e-o ,/ "

) UIVIP

LUZ DEL RE

CITOSOL

5 GDP*manosa 5 GDP

(c) Translocacin desde el ctosol a la luz del RE

4 Dolicol-Pmanosa 4 Dolicol-P

3 Dolicol-P-glucosa

3 Dolcol-P

l l
(d) Transferencia a la protena cH

HO N - C -cHr-

til

/ \

Asparagina de la protefna (e) Procesamiento fnal del oligosacrido

N -C-CH2-CH

?fl

i
I c

FilutaL2'7 Glicosilacin en N: ensamblaie del oligosacrido central y transferenciaa una protena. (a) El fosfato de dolicol esel transportador de unidades del oligosacrido,que se transfieren a residuos de asparaginade determinadasprotenas.En mamferos, n suele ser 18. (b) Sntesis secuencialdel oligosacrido central,rico en manosa, por adi-in iucesivade unidadese N-acetilglucosamin (N), manosa (M) y glucosa (G)' a la cadenaen crecimiento. (c) Un translocaor de fosfolpidos (flipasa) expone al oligosicrido, arin incmpleto, hacia el interior del RE. (d) El oligosacridocentral, ya maduro, setransfiere desdeel dolicol a-un residuo de asparaginade la protena. (e) Eliminacin en el RI' de ciertasunidades de glucosay manosa,antesde que la glicoprotena seatransferida f CJfgi.

366

Captulo 12 Comportamientos intracelulares: retculo endoplsmico, complejo deGolgi, y peroxtsomas endosomas, Iisosomas

Funciones del RE y el complejo de Golgi en el trfico de protenas

Las protenas solubles y de membrana sintetizadasen ribosomas asociadosal RE rugoso, deben dirigirse a diferenteslocalizacionesintracelulares,que incluyen al propio y a los lisosomas. RE, al complejo de Golgi, a los endosomas Es ms, una vez que una protena llega al orgnulo en el que se supone debe permanecer,tiene que apoyarseen algn mecanismo que impida su salida.Otro grupo de protenas sintetizadasen el RE rugoso, estn destinadasa su incorporacin en la membrana plasmtica o a su liberacin hacia el medio extracelular.Cada protena tiene una <etiqueta> especficaque permite su inclusin en la vescula de transporte apropiada. En funcin de la protena y su destino, la marca puede ser una secuenciaespecficade aminocidos, una cadenalateral oligosacardica,un dominio

hidrfobo u otra particularidad. Las etiquetas se pueden utilizar tambin como elementos a excluir de ciertas vesculas. Recientementeseha demostrado que los lpidos de membrana tambin se pueden etiquetar, facilitando que las vesculas alcancenlos destinos apropiados. La marca puede ser uno o ms fosfatosaadidosa las posiciones3,4 5 de una molcula de fosfatidil inositol (PI) de la membrana. As, por ejemplo, seha visto que para sedistribuyan correctamentelas hacia la vacuola de una levadura, espreciso que est vesculas presenteuna Pl-3-quinasa funcional. La inhibicin de las quinasasde inostidos en mamferos, perturban el trfico de la longiAdemsde lasetiquetas, vesculas haciael lisosoma. lpidos membrana, de tud y e1grado de saturacinde ciertos parecenser importantes en el trfico de vesculas. El trfico asociadoal RE y el complejo de Golgi se esde protenas quematizaen Ia Figura l2.8.La clasificacin comienza en el retculo y compartimientos tempranos del

oP... o o
-\

Transporte antergrado

Secrecin constitutiva

@ @@. ee_q (& ' e

\

Exocitosis

-gJfuI r"ru C
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'". | o "l:"'"'J"?:'

Vescutas

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\
Membrana plasmtica

Endocitosis

oo
I nr rugo.o

r'\J
Transporte retrgrado

puedenseguirvariasrutas desdeel que transportanlpidosy protenas Figuta12,8 Tlficoen el sistemade endomemblanas.Lasvesculas sesintetizanen ios ribosomas y lisosomas. de secrecin, endosomas @ Lasprotenas RE y el compiejode Golgi, dando lugar a vesculas de transicin tienen lugar en la luz del RE. Lasvesculas inicialesde la glicosilacin unidos a la caracitoslicadel RE rugoso.@ Lasetapas por el dictiosomagracias a recinsintetizados. llevanhaciala RCG a Ios lpidos y glicoprotenas @ Los lpidos y protenassedesplazan de secrecin@ y las que formarn parte de los o a cisternasque van madurando. Desdela RTG parten las que sernlas vesculas vesculas donde liberan,su sedirigen haciala membranaplasmtica, de secrecin endosomas @, en funcin de su contenidoproteico.Lasvesculas y otros a una seal. bien @ como respuesta bien @ constitutiva, @ La clulatoma por endocitosis contenidopor exocitosis, Protenas no destinados a Ia tempranos. que sefusionancon los endosomas de endocitosis, @ Los componentes materiales, fabricandoasvesculas digestin que sigue a la endocitosis,son recicladoshacia la membrana plasmtica.@ Los endosomastempranos, con el material destinado a la digestin, maduran dando lugar, primero a los endosomastardos, y luego a los lisosomas.@ El trfico retrgrado permite el retorno de a suscompartimentoscorrespondientes. protenas especficas

y el complelo deprotenas 367 deGolgi eneltrfco Funciones delRE

dictiosoma, en los cuales existen mecanismos para recuperar o retener sus protenasespecficas. ste es un paso importante en el proceso de clasificacin,pues preservala funcin inherente al compartimiento, que permite que se puedan llevar a cabo la glicosilacin y otros procesamientos. La clasificacin final del material que debe abandonar el complejo de Golgi, tiene lugar en la RTG, donde lpidos y protenas se empaquetan selectivamente en diferentes poblacionesde vesculasde transporte, cadauna destinadaa un lugar diferente de la clula. En algunas clulas,el complejo de Golgi est tambin involucrado en el procesamiento de protenas que entran en la clula por endocitosis.

Lasprotenas delcomplejo pueden deGolgise clasificar porla longitud desusdominios transmembrana Al igualqueocurre conlasprotenas delER, probable es que
algunasde las protenas residentesen el aparato de Golgi, posean secuencias de aminocidos, que sirvan como etiquetaspara la retencin o la recuperacin. Adems,y como ya se sugiri para las protenas especficasdel RE, en el aparato de Golgi se pueden formar grandes complejos, que quedan fsicamenteexcluidos de las vesculas de transporte. Por ltimo, hay un tercer mecanismo de clasificacin, especfico de esteorgnulo. Todaslasprotenasresidentes conocidasdel complejo de Golgi estnen la membrana.Por tanto, cadauna de ellastiene uno o ms dominios hidrfobos, que la atraviesan, facilitando su anclaje.La longitud de una protena en particular, puede determinar en qu cisterna queda confinada, conforme avanzapor el dictiosoma. Recordemos que el grosor de la membrana aumenta progresivamentedesdeel RE (unos 5 nm) a la membrana plasmtica(unos 8 nm). En el complejo de Golgi se comprueba que hay un incremento en la longitud de los segmentostransmembrana de las protenas,desdela RCG a la RTG. Las protenas tienden a desplazarse de compartimiento en compartimiento, hasta que el grosor de la membrana excede la longitud de los segmentos transmembrana,detenindose la emieracin.

Lasprotenas especficas delREllevan etiquetas derecuperacin

La composicin del RE se mantiene a base de prevenir la fuga de protenasdurante los fenmenos de vesiculacin, y de recuperar a las protenas que han alcanzadola RCG. No estclaro cmo se retienen las protenas,ni culesson las sealesque permiten tal retencin. De acuerdo con una teora, las protenas que permanecen en el RE rugoso forman complejos muy extensos,que quedan fsicamente excluidos de las vesculas de transicin. La recuperacin-que se produce por flujo retrgrado de vesculas de transporte desdela RCG al RE (Figura 12.8, @)- es mucho mejor conocida. Muchas de las protenas solubles residentesdel R-E, llevan etiquetasque se unen a receptoresde membrana especficos, orientados hacia la luz del complejo de Golgi. Estasetiquetas son secuencias cortas de aminocidos, como KDEL (Lys-Asp-Glu-Leu), en mamferos y HDEL (His-Asp-Glu-Leu), en levaduras (secuencias basadas en las abreviaturasde aminocidos de una sola letra1'vaselalistaen Ia Thbla 3.3). Cuando una protena que lleve esta seal se una al receptor, ste sufrir un cambio conformacional y el complejo receptor-ligadose empaquetar en vesculasde transporte, que retornarn al RE. La importancia de las etiquetasde recuperacin se evidencia en experimentos con protenas quimricas. Una protena quimrica est formada por fragmentos polipeptdicos derivadosde dos protenasdiferentes,que se unen para formar un polipptido nico. En estetipo de experimentos, sealtera una protena de secrecinpara que incluya una secuencia que contiene una etiqueta de retencin en el RE. En muchos casos,estasprotenas vuelven al RE tras sufrir un procesamientoparcial en el complejo de Golgi. El procesamiento de las protenasquimricaspor enzimasque slo se encuentranen el aparatode Golgi, indica que la etiquetano se limita a impedir el escapede las protenas, sino que se produce una autntica recuperacin desdeel dictiosoma. Lo que no estclaro an, es si el transporte retrgrado seproduce desdeuna cisternacualquieradel dictiosoma directamente al RE, o si seocurre pasandode una cisternaa la precedentey as,de una en una, hasta alcanzarel RE. 368

Ladistribucin deprotenas lisosomales hacia y lisosomas, losendosomas es unejemplo dela clasificacin deprotenas enla RTG Durante suviaje atravs delREyloscompartimientos tempranos del aparato de Golgi, las enzimas lisosomalessolubles y otras glicoprotenas,sufren la glicosilacin en N, seguida de eliminacin de unidades de glucosa y manosa. Posteriormente,dentro del complejo de Golgi, sefosforilan los residuosde manosade las cadenas glucdicaslaterales de las enzimas lisosomales,dando lugar a oligosacridosque poseenmanosas-6-fosfato. Esta etiqueta oligosacridadistingue a las protenas lisosomalessolubles de otras glicoprotenasy asegurasu llegadaa los lisosomas(Figura 12.9). La fosforilacin de los residuosde manosa estcatalizada por dos enzimasespecficas del Golgi. La primera, localizada en un compartimiento temprano del dictiosoma, es una fosfotransfererasa que aadeGlcNAc-1-fosfato al tomo de carbono 6 de la manosa. La segunda,propia de un compartimiento intermedio del Golgi, elimina GlcNAc, destapandoel residuo manosa-6-fosfato. En correspondencia,la superficie interna de la membrana de la RTG, presenta receptores manosa-6-fosfato (RMF).El pH en la RTG esten torno a 6,4,1oque favorece la unin de las enzimassolubleslisosomalesa los receotores.Una vez unidas a los RMF, los complejos receptor-iigando se empaquetan en vesculasde transporte cubiertas por clatrina y sedistribuyen hacia los endosomas. En las c-

Captulo 12 Compoftamientos intracelulares: retculo endoplsmico, complejo deGolgi, y peroxisomas endosomas, lisosomas

Sintesis de la enzima y aotcton ilsosomat del azcar

RE rugoso

Red ClsGolgi

8
! Reciclaoo
a1l r^t^r

Fosforilacin de manosa, por la accin secuencial de dos enzimas

Red Irans Golgi

Iv

La manosa-6josfato se une al receptor y lasenzrmas

a mn i^rralan

en vesrculas de transporte

Iv

Erouo PHde los

enoosomas Iarotos promueve la disociacin
da anTim \/ ra.ant^r

@-

Lrsosoma

por la etiquetamanosa-6-fosfato. y lisosomas, mediada hacialos endosomas Figura12.9 Distribucin de enzimas lisosomales solubles @ En el y manosa. en N, seguida de eliminacinde unidadesde glucosa RE,las enzimaslisosomales sufrenuna glicosilacin @ Una vez en el En la primera seaadeNsefosforilanen dos reacciones enzimticas. complejode Golgi, los residuosde manosade las enzimaslisosomales, exponiendoel residuode manosa seelimina N-acetilglucosamina, al carbono 6 de la manosay en Ia segunda acetilglucosanina1-fosfato fosforilada.@ Las enzimaslisosomales,ahora etiquetadas,se unen a los receptoresmanosa-6-fosfatode la RTG y seempaquetanen vesculas de la luz de los endosomas tardos,haceque sedisocienlas tardos.@La actdez a los endosomas cubiertasde transporte,que alcanzan que vuelven a la RTG. Los endosomastardos maduran, formando encimasde sus receptores. @ Los receptoresse reciclan en vesculas lisosomas,o transfieren su contenido a un lisosoma activo.

para la delulas animales,las enzimas lisosomalesnecesarias gradacin del material tomado por endocitosis,se transportan desdela RTG, hasta unos orgnulos conocidos como endosomas tardos. stos constituyen la evolucin de los endosomas tempranos, formados por la reunin de vesculas originadas en la RTG y en la membrana plasmtica. Conforme maduran hacia endosomastardos, el pH en la luzbaja hasta aproximadamente 5,5. Esta acidez hace que las enzimaslisosomalesse disocien de sus RMF y previene el movimiento retrgrado de dichasenzimashacia el com-

plejo Golgi durante el recicladode los receptores, que l.uelven en vesculasa la RTG. Por ltimo, el endosoma tardo madura para formar un nuevo lisosoma o libera su contenido en un lisosomaactivo.Lasprotenasde membranaasosiguen una ruta ms larga, viajando ciadasa los lisosomas hacia la membrana plasmtica y reentrando en la clula por endocitosisy transporte hacia un endosomatemprano. En el conocimiento de estaforma de distribucin de las han sido esenciales los estudiosde una enzimaslisosomales, alteracin hereditaria humana, conocida como mucolipi-

Elretculo endoplsmico 369

dosisde tipo II. Los fibroblastosde los pacientes son capacesde sintetiza\ en cultivo, todaslas enzimaslisosomales, ( pero en lugar de incorporarlas en los lisosomas, viertenla mayorade ellashaciael medio extracelular. La ausencia de C.o residuos manosa-6-fosfato enlascadenas laterales oligosa(0 cridas, es una caracterstica comn a todaslas protenas ' ; ( mal dirigidas.Es evidentede la etiquetaglucdicamodifi-!o cadaesla responsable del desvo delasglicoprotenas soluo! r@ bleshaciala ruta de secrecin. Hoy da sesabe quela muoc) !( colipidosisde tipo II estoriginadapor una deficiencia en la fosfotransferasa, la primera de lasenzimas implicadas en o la adicinde manosa-6-fosfato a las enzimas lisosomales. O De todasformas,adems de los residuos manosa-6-fosfa- o_ to, debehaberotros mecanismos implicados en la distribucin de lasenzimas, puesen los enfermos de mucolipidosisde tipo II, s sedetectan hidrolasas cidas lisosomales en lasclulas hepticas. Leyendas:- - L

90

180

270

360

Minutos despusdel mensaje RE rugoso Complejo Golgi Vesculas TGN Grnulos de secrecin

Lasrutasde secrecin transportan molculas hacia el extedor de la clula Lasrutas de secrecinforman parte del trfico de vesculasesquematizado en la Figura12.8. Estas rutassebasan en el desplazamiento de protenas desde el RE y u travsdel complejo de Golgi, hastalasvesculas de secreciny grnulos de secrecin, queluegodescargan sucontenidoal exterior (@). El papelcoordinado del REy el aparato de Golgi en la secrecin, fue demostrado por primera yez por George Palade y suscolaboradores, queemplearon mtodos autorradiogrficos paratrazareldestino deprotenas marcadas radiactivamente, en clulas de lasglndulas salivales. Losresultados de uno de los experimentos de Palade se resumen en la Figura12.10. A los pocosminutosde inyectar en conejos un aminocido radiactivo, lasprotenas recinsintetizadas, identificables por contener el aminocido radiactivo, seencuentran sloen el RE del tejido secretor. Pocodespus, la radiactividadse empieza a detectaren el complejode Golgi,alcanzando el mximoa los 30-40minutos. A los 30 minutos,lasprotenas marcadas seencuentran tambinen vesculas que partende Ia RTG,a las que Palade llam vacuolas decondensacin. Alos 90 minutos,la radiactividad seacumula en los grnulos de secrecin, que sonvesculas quevacansucontenidohaciael exterior. Aunqueno semuestra en la figura,lasprotenas marcadas terminan por aparecer en el medioextracelular, demostrando quelos grnulos de secrecin, realmente viertensu contenido ms allde la membranaplasmtica. Gracias a los experimentos y colaboradores de Palade y a otrossimilares realizados posteriormente, la rutasde secrecinde la Figura12.8, son hoy da bastante bien conocidas. En lasclulas eucariotas existen dosformasde secrecin. La secrecin constitutivaes la descarga continua de vesculas en la membranaplasmtica, mientras quela reguladase caracterizapor la descarga rpiday controlada, generalmente en respuesta a una sealextracelular.
370

Figwa t2.L0 Autonadiografa de la ruta de secrecin, para seguir el destino de las protenas recin sintetizadasen una clula,George Paladey sus colaboradoresinyectaron conejos con un aminocido radiactivo e hicieron autorradiogramas de las glndulassalivales, a diferentestiempos post-inyeccin,para comprobar la distribucin de las protenas radiactivas.En el Apndice se describela autorradiograffa aplicadaa la microscopa.

Secrecin constitutiva.Despus de suformacinen la RTG, algunas de lasvesculas de secrecin sedirigen directamente a la superficiecelular,donde se fusionan de inmediato con la membrana plasmtica y liberansu contenido. Este proceso, que escontinuo e independiente de seales extracelulares especfi.cas, seconocecomo secrecinconstitutirra.Como ejemplo,citemosa la secrecin de mucus por partedelasclulas quetapizan el intestinoo la secrecin de glicoprotenas haciala matriz extracelular. Durantemuchosaos,seha supuesto quela secrecin constitutiva erala ruta por defecto para las protenassintetizadas en ribosomas asociados al RE.De acuerdo con este modelo,todaslasprotenas destinadas al transporte desde el RE al complejode Golgi,debanteneretiquetas que les permitieran salirde la secrecin constitutiva. A menosque una secuencia aminoaclica o un oligosacrido lateralsealarana una protena parasu retencin, sta sedesplazara por el sistema de endomembranas, hastaserliberada al exterior. Estemodeloestaba apoyado en estudios en los que se eliminabanlas etiquetas de recuperacin de protenas especficas del RE y seexplorabasu nuevo destino.La eliminacindelassecuencias KDEL deprotenas residentes en el RE,generalmente resultanen su secrecin, Sin embargo, hay evidencias recientes que permiten suponerla existencia devariassecuencias cortasde aminocidos, quemarcan a lasprotenas paraseguiruna de lasdiferentes rutas de secrecinconstitutiva.

Captulo 12 Comportamientos intracelulares: retculo endoplsmico, complejo y peroxtsomas deGolgi, endosomas, lisosomas

que contiefegulada. Mientras que lasvesculas Seclecin estn siendo protenas de secrecin constitutiva, nen las la membrana desde la RTG a constantementeenviadas regulaimplicadas en la secrecin plasmtica, lasvesculas y con la memda, seacumulanen la clula slosefusionan brana plasmticacuando reciben una orden extracelular especfica. Un ejemplo bien conocido es la liberacin de que serdescritaen el Captulo 13 (Fineurotransmisores deinmssonlaliberacin gura13.19). Otrosdosejemplos del pnde Langerhans sulinapor lasclulas B delos islotes por las clulas creasy la secrecinde enzimasdigestivas del pncreas. acinares reguladasalende la RTG Las vesculas de secrecin inmaduras,que pierdenla cubiertade clacomo vesculas trina e inician un procesode maduracin.staimplica la de las protenas-conocida como condenconcentracin proteoltico de la sacin- a menudo,el procesamiento protena.La veslcula madurasedirige haciala reginpor la hastarecibir la seque sersecretada, dondepermanecer al de liberacinpor exocitosis. reguladamadurassuelenser de secrecin Lasveslculas de proy llevanuna mayorconcentracin mucho mayores veslconstitutiva.Estasgrandes teia que las de secrecin de grnulos desecrecino culassedenominangeneralinente Como se para distinguirlas de otras vesculas. zimgeno, (ZG) grnulos de zimgeno muestra en la Figura12.11,Ios de en la reginsituadaentrelos dictiosomas, seconcentran proceden, y la porcin de membranaplasmtica los cuales los grinulos. que limita la luz en la que descargarn

dirigir a una protena La informacinnecesariapara inherente a supropiaseesposiblemente haciaunavescula, si bien lanattraleza de la sealy los cuenciaaminoaclica, no estnclaros.Hay evidenmecanismos de clasificacin, forman grandes de secrecin agreciasde quelasprotenas a protenas no secretoras. Estefenmegados,que excluyen no podra tener lugar, bien en la RTG, en la que slo los en vesculas destinadas se empaquetaran a ser agregados propios grnulosde segrnulosde secrecin, o bien en los crecin.El pH de la RTG y de los grnulosde secrecin, puede servir como desencadenante de la agregacin. Las queno puedanintegrarse protenas en el agregado solubles podran serempaqueen la RTGo el grnulode secrecin, de transportey dirigidashaciaotros destadasen vesculas tinos.

Exocitosis y endocitosis:transporte de material a travs de la membrana plasmtica

Los dos mtodosde intercambiode materiala travsde la por la cual los grmembranaplasmticasonla exocitosis, segregan su contenidohaciael exterior nulos de secrecin por la que las clulas introducenlos mateyla endocitosis, son exclusivos de clurialesdel exterior.Ambos procesos primero la exocitosis por ser Consideraremos laseucariotas. quecomienza en el RE el pasofinal de una ruta de secrecin y el complejode Golgi. La exocitosisliberamolculasde la clula en el medio extracelulal las protenasretenidas en el interior de la En la exocitosis, sedescargan al exterior,cuandola veslcula sefuvescula, plasmtica. Por este mtodo a la membrana se exsiona portan multitud deprotenas, en las clulas animales, tanto pptiLasclulas animales segregan como en lasvegetales. protenas lcteas y enhormonales, mucus, dosy protenas y lasbacterias, Lasclulas de vegetales zimasdigestivas. segregan protenas con la paredcelular, incluyendo asociadas y enzimticas. a protenasestructurales seilustran esquemticamenLasetapas de la exocitosis que contienen los prote en la FiguraI2.l2.Las vesculas a la secrecin, sedirigen a la sudestinados ductoscelulares perficiecelular(@), dondesefundenlasmembranas vesical ( @ ). La membranaplasmtica y plasmtica seexpande, fa(@). Duranteel proceso, la membracilitandola secrecin de na de la vescula seintegraen la membranaplasmtica, se forma que la superfrcieinterna (luninal) de la vescula, convierteen la superficieexternade la membranaplasmy glicolpidosquepermanecen tica ( @ ). Lasglicoprotenas ancladosa la membrana,se exponenhacia el espacioextracelular.

L U Z O e ra c r n o

'

2,5 rm

de zimgeno. Micrografia electrnica de figwaL2.LL Grnulos los grnulos de zimgeno (ZG) de una clula acinar (secretora)del pncreasexocrino de una rata. Los grnulos de zimgeno suelen concentrarseentre la zona del complejo de Golgi, a partir de la cual se forman y Ia membrana plasmticaque bordea la luz del acino, a la cual vierten precisamentesu contenido, por exocitosis(TEM).

plasmtica 371 a travs de la membrana de material transporte Exocitosis v endocitosisi:

CIToSoL

Rproximacin de la vescula de secrecin plasmtica a la membrana

Interior de la vescula Membrana de la vescula

MFDIO EXTRACELULAR

I Vescula

I secrelora J

do al medio extracelular. Pesea todo, el papel concreto del calcio est an por determinar, si bien parece que es responsable de la activacin de quinasas de protenas, cuyas dianas son componentes de la membrana de la vesculao de la propia membrana plasmtica. polatzada.En muchos casos, Secrecin la exocitosis de protenas estlimitada a determinadas reasde la superficie celular. Por ejemplo, las clulasque tapizan la luz del intestino, descarganlas enzimas digestivasslo por la cara que mira hacia la cavidadintestinal. Hacia el lado opuesto de la clula,sesegregan protenascompletamentediferentes. Este fenmeno, denominado secrecin polarizada, se observa en las neuronas,que liberan el neurotransmisor solamente en los puntos de contacto con las otras neuronas (vasela Figura B.fr. Las protenasdestinadasa la secrecinpolarizada,as como los lpidos y protenasde las dos capasde la membrana, sedistribuyen en vesculas, que sefusionarn con subdominios precisosde la membrana plasmtica. La endocitosis f a c i l i t al a i m p o r t a c i na , sociada

Membrana plasmtica

fusiOn de membranas
Protenas de la hoja interna de la membrana

Ruptura de la membrana

Liberacion delcontenido de la vescula hacia el exterior, La membrana de la vescula se integra

plasmtica en la membrana

a vesculas. demolculas extracelulares

Figwa 12.12 Exocitosis. Liberacin al exterior delcontenido de un grnulo o vescula desecrecin. Para mayorclaridad, sehan y fusin omitidolasprotenas quefacilitan el anclaje dela vescula conla membana plasmtica. Vase\a Figura 12.19 params detalles. La mayora de Ias clulas eucariotasllevan a cabo una o ms formas de endocitosis.Durante esteproceso,una zona limitada de la membrana se invagina progresivamente(Figura 12.13,@ ) hasta que seestrangulay forma una vescula de endocitosis, que contiene diferentessustancias o partculas (@ y @). De estaforma, se consigueintroducir a algunos de los materialesque estabanen el exterior de la clula (@). La exocitosises esencialen muchos procesos celulares,como la ingestade nutrientes o la lucha contra microorganismos. La exocitosisy la endocitosistienen efectosclaramente opuestos, por 1o que respecta al de flujo de membrana. Mientras que durante la fusin de una vesculade exocitosis se aaden lpidos y protenas a la membrana plasmtica, en Ia endocitosisse pierden partes de dicha membrana. As pues, en el estado estacionario,la composicin de la membrana plasmticaesuna consecuencia del balanceentre la exocitosisy la endocitosis.Graciasa la endocitosisy el transporte retrgrado, la clula puede recuperar molculas que precisarpara Ia exocitosis,como los lpidos y protenas,que volvern de nuevo a la membrana. La magnitud del intercambio de membrana es realmente impresionante.Por ejemplo, una clulasecretoradel pncreai recicla una cantidad de membrana equivalentea su superficie total, cada 90 minutos. Los macrfagos (glbulos blancos muy voluminosos) son incluso ms rpidos, empleando tan slo 30 minutosl El trmino endocitosisagrupa a varios procesosque difieren por la naturalezadel material ingerido y el mecanismo empleado.En cualquier caso,la membrana de la vescula de endocitosis, asla del citosol a las sustancias introducidas. La mayora de las vesculasde endocitosis

Los mecanismosque subyacenal desplazamiento de las vesculasde exocitosis,no estn claros an. Las evidencias actualesapuntan hacia los microtbulos, tanto en la exocitosis,como en la endocitosis.Por ejemplo, en algunasclulas, las vesculasparecen desplazarse desdeel complejo de Golgi hacia la membrana plasmtica,a lo largo de <rieles, de microtbulos, orientados en la direccin del desplazamiento. Es ms, el movimiento se detiene si las clulasson tratadascon colchicina,un alcaloidevegetalque seune a los monmeros de tubulina, impidiendo su ensamblamiento. Discutiremos el movimiento de vesculasasociado a microtbulos en el Captulo 16. Papeldel calcioen el desencadenamiento de la exocitosis, La fusin de las vesculasde secrecinregulada con la membrana plasmtica,se produce generalmentepor una seal extracelular. En la mayora de los casos, la sealesuna hormona o un neurotransmisor,que se une a receptoresespecficos de Ia superficie celular y activa la sntesiso liberacin deun segundo mensajero,como analizaremosen el Captulo 14.La elevacintransitoria en la concentracin de iones calcio,que se produce durante la secrecinregulada,parece ser un paso esencialen la cascada de sealizacin,activada por receptoresde membrana. La simple microinyeccin de calcio en el citoplasmade clulasdel pncreas, hace que los grnulos de secrecinmaduros liberen su conteni-

372

Captulo 12 Compoftamientos intracelulares: retculo endoplsmico, complejo y peroxisomas deGolgi, endosomas, lisosomas

CITOSOL La membrana se invagina formandoun bolsillo que engrooa a macromolculas y otros materiales del exterior de la clula

Membrana plasmtica Protenas de la hoja

exlernaoe ta memorana Proteinas de la hoja interna de la membrana

La vescula en formacin se estranguta, encerrando el material extracelular

Vescula I recren 1 formada I

lnterior de la vescula de la vescula

La membrana se cierra alrededor del material invaginado, formando Iavescula La vescula se separa de plasmtica, la membrana llevando el material del exterior encerrado en una quederiva membrana, de plasmiica la membrana

pueden actuar, adems, como (rastreadores>,ingiriendo restos celularespresentesen Ia sangre.En ciertas circunstancias hay otras clulas de mamferos capacesde fagocitar. Por ejemplo,los fibroblastos del tejido conjuntivo, pueden fagocitar colgeno,para remodelar el tejido y las clulas dendrticas del bazo, fagocitan bacterias,como parte de la respuesta inmune. La fagocitosisse ha estudiado en detalle en las amebas. La superficiede la mayora de estas clulasestrodeadapor una cubierta, de glicosaminoglicanos, en la que stospueden formar prolongacionesfinas, que adsorben y atrapan alimentos,partculas u organismos ms pequeos.El contacto con las dianas apropiadas,desencadena la respuestafagoctica que se muestra en la Figura I2.l4.La actina polimeriza haciendo que la membrana desarrolle repliegues

Bacteria

Pseudpodo

Figwa L2,L3 Endocitosis, Toma de materialesdel erteior. Para mayor claridad,sehan omitido las protenas de la cubierta,tanto en la zona de invaginacin, como alrededorde la vescula de endocitosis. La Figura 12.15detallala endocitosis dependiente de clatrina.

Vescula de fagocitosis

evolucionan hacia endosomas, que se fusionan con las ve-

sculasde la RTG, adquiriendo enzimasdigestivas y madurando para formar nuevos lisosomas.Generalmentesuele distinguirse entre fagocitosls (del griego, ingesta celular) y pinocitosis(bebida celular).A su vez, la pinocitosis se subdivide en endocitosis mediada por receptores-tambin conocida como endocitosis dependiente de clatrina-y endocitosisindependiente de clatrina. Fagocitosis. La toma de grandes partculas ()0,5 lm de dimetro), incluyendo agregados partes macromoleculares, de otras clulas, microorganismose incluso otras clulas,se denomina fagocitosis.Paramuchos organismoseucariotas unicelulares,como las amebasy los protozoos ciliados, la fagocitosis esuna forma habitual de alimentacin. En muchos animalesprimitivos, como los platelmintos, los celenterados y las esponjas, siguesiendo un mecanismo de uso relativamente habitual. Sin embargo,en organismosms complejos, la fagocitosissuele quedar limitada a unas clulas especiales, Ilamadas fagocitos. Por ejemplo, en nuestro cuerpo hay dos clases de leucocitos,que fagocitande forma rutinaria: neutrfilos y macrfagos. Ambos tipos de clulas se valen de la fagocitosis para realizar funciones de defensa,ms que de nutricin. Engloban y digieren los materiales extraos,as como los microorganismos invasivos,presentes en la sangreo en tejidos erosionados. Los macrfagos

Endosoma temprano

Contacto transitorio, durante la maduracin, conendosomas tempranos

. y tardios

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por las hidrolasas lisosomales)

Figwa L2.t4 Fagocitosis. La unin de partculas o microorganismos a los receptoresde la superficie celular, desencadena el inicio de la fagocitosis.La membrana desarrolla unos replieguesllamados pseudpodos, cuya formacin dependela polimerizacin de actina, que engloban a la partcula. Finalmente, los bordes del pseudpodo seencuentran y se forma :unayacuola fagoctica.Posteriormente,Ia vacuola sefusiona @ con un endosomatemprano o se conecta@ transitoriamente (indicado por las lneas de puntos) con endosomastempranos y tardos, madurando para dar lugar a un lisosoma,en el cual se digiere el material interiorizado.

y endocitosisi: plasmtica 373 Exocitosis dematerial transpofte a travs dela membrana

denominadospseudpodos, que rodean progresivamenteal objeto. Finalmentelos pseudpodosseencuentrany encierran a la partcula, formando una vacuola fagoctica intracelular. Esta vescula,llamada tambn fagosoma)sefusiona posteriormente con un endosoma tardo o madura directamente hacia lisosoma,formando una gran vacuola en la que se digiere el material capturado. En las vacuolasfagocticas de los macrfagos, con el fin de aumentar Ia capacidad de destruir a los microorganismos, se generan varios oxidantes,como el perxido de hidrgeno o el cido hipocloroso. por receptores. Denominada tambin Endocitosis mediada endocitosis dependiente de clatrina, permite la concentracin e ingestin de molculasextraceluiares, graciasa la presenciade receptoresespecficos en Ia superficie externa de la membrana. (Aunque 1afagocitosisest tambin mediada por receptotes, en ella no seconcentran sustancias, ni esdependiente de clatrina.)La endocitosis mediadapor receptoreses el mecanismo ms importante de introduccin de la mayora de las macromolculas,en las clulas eucariotas. Segn el tipo celular,las clulasde mamferos pueden ingerir, por estesistema,hormonas, factoresde crecimiento, enzimas, protenas sricas,anticuerpos, hierro e incluso algunosvirus y toxinas bacterianas. El descubrimiento de la endocitosismediada por receptores y su papel en la entrada de las lipoprotenasde baja

densidad(LDL), se analiza en el Anexo l2B.La endocitosis de LDL permite la entrada de colesterolen las clulasde mamferos. Su interspor el estudio de la hipercolesterolemia familiar, predisposicin hereditaria a tener elevadosniveles de colesterolen sangrey, por tanto a la aterosclerosis y dolencias cardacas, permiti a Michael Brown y loseph Goldstein descubrirla endocitosismediada por receptores, hecho por el cual compartieron el Premio Nobel en 1986. El proceso se ilustra en la Figura 12.15.Comienza con la unin de las molculas de ligando a sus respectivosreceptoresde la superficieexternade la membrana plasmtica (O). Conforme el compiejo receptor-ligandova desplazndosepor la membrana, puede encontrarsecon unas -denominadas regiones especializadas fosas cubiertasque sirven como lugaresde recolecciny entrada de tales complejos (@).En una clulatpica de un mamfero,lasfosascubiertasrepresentan aproximadamente el20o/o de la superficie total de ia membrana plasmtica.La acumulacin de los complejos receptor-ligandoen las fosascubiertas,fa-protenas adapcilita la reunin de protenasadicionales tadoras,clatrina y dinamina- requeridaspara que la membrana se incurve, inicindosela invaginacin(@). Estas protenas se disponen en la cara interna de la membrana plasmtica.La invaginacin contina hasta que la vescula se estrangula y libera, formando una vescula cubierta (@). Inmediatamente,la cubierta de clatrina selibera, quedando la vesculadesnuda (@). Las protenasde la cubierFigutaL2.L5 Endocitosis por mediada teceptofes, En esteesquema de la endocitosis mediadapor receptores, las molculas a introducir, @ seunen a receptores especficos de la membranaplasmtica. @ Los complejos receptor-ligando seacumulanen fosas cubiertas @, en las que la protenaadaptadora clatrinay la dinamina,ambasen la cara citoslica de la membrana,facilitanla invaginacin. Como resultadoseforma una vescula cubierta@ qu. r. desnuda rpidamente ahora @. La vescula, descubierta, puedefusionarse @ con otras membranas intracelulares, generalmente la de un endosomatemprano,en el cual seclasifica el materialintroducido.El destinode los receptores y ligandos,dependede la naturaleza del materialingerido.Lasvesculas de transporte@ llevanel materiala los endosomas tardos,para su digestin. Las rutas alternativasson el reciclado hacia la membranaplasmtica @ o el transportey exocitosis por otra regin de Ia membrana@ (proceso denominadotranscitosis).

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374

Captulo 12 Comportamientos intracelulares: retculo y peroxisomas endoplsmico, complejo deGolgi, endosomas, lisosomas

tayla dinamina sereciclande vuelta haciala membrana, donde estnen disposicinde formar nuevasvesculas, puede fusionarse mientras que la vesculade endocitosis y cobertucon un endosoma temprano(@). La velocidad ra de la endocitosis mediadapor receptores es impresionante.Una fosacubiertasesueleinvaginarun minuto despus de iniciar su formacin y se ha estimadoque, un fibroblastoen cultivo, puedeformar hasta2.500vesculas por minuto. La Figura 12.16muestraun oocito de pollo partculas capturando devitelo en una fosacubiertay cmo evoluciona sta hastaformar una vescula cubierta.En la siguienteseccin analizaremos el papelde lasprotenas de la cubiertaen la formaciny transportede lasvesculas. Existenformasalternativas mediadapor de endocitosis (EGF), por receptores. El factordecrecimiento epidrmico Losreceptores ejemplo, sigueel patrn de la Figura12.15. del EGFserenenen lasfosas cubiertas, despus de quese hayanformado los complejos receptor-ligando. En otros permanentemente los receptores casos, residen en lasfosas que cubiertas. En estos casos, la unin delligandoesla seal activael proceso de invaginacin. En otra variante, los receptores, no sloresiden en la fosacubierta, sino queseproduce constitutivamente Ia endocitosis, con independencia

de que sehayanunido o no los ligandos.Por ejemplo,los receptores de lasLDL, que sedescriben en el Anexo 12B,se introducen de forma constitutiva. por receptores, Despus de la endocitosis asistida lasvesculas descubiertas sefusionan con las que emanande la RIG, formandolos endosomas queselocalizan tempranos, enla periferiadela clula. Losendosomas tempranos sonesy reciclado tructurasde clasificacin del materialextraceluproteicas lar, tomado por endocitosis. Lasmolculas necepara subsiguientes sarias ciclosde endocitosis, a menudo -aunque no siempre- sereciclan,despus de que hayan sido separadas del materialdestinado a la digestin.Loslitempranos continanadquiriendo protenas sosomas lisoprovenientes de la somales RTG,madurando hacia endosomas tardos,que,por ultimo, terminanen lisosomas. Las delos endosomas funciones enlos procesos de digestin celular, seexaminarn msadelante, en estemismo captulo. El reciclado de los receptores por la acidiseconsigue ficacinde los endosomas tempranos. El interior de una vescula de endocitosis tienevalores de pH en torno a 7,0, queen el endosoma, mientras sesitaentre5,9y 6,5.Labajadade pH seconsigue gracias a la presencia de :una bomba de protonesdependiente de KlP, presenteen la mem-

Partculas de viteloen una fosa cubierta Cubierta de clatrina

Fosa cuberta

Membranas justoantes de fusionarse

Cubierta de clatrina Vescula cubierta

---r ozsrm

Figwa L2.LB Endocitosismediadapot receptotesde proteinasde la yema de huevode un oocito de pollo. Esta seriede micrograffas electrnicasresumen la formacin de una vecula cubierta, a partir de una fosa cubierta, durante la endocitosismediada por receptores. Las partculas de vitelo O se acumulan en una fosa cubierta, que aparececomo una ligera invaginacin de la membrana @ asociadaa Ia presenciade clatrina en la cara interna. @ Estadio final de formacin de la vesculacubierta, justo antesdel estrangulamientodel cuello de la vescula. @ Vesculacubierta recin formada, en la que persistean la cubierta de clatrina.

y endocitosisi: plasmtica 375 Exocitosis transporte dematerial a travs dela membrana

&ex*l irF.

.-. ,.La endocitosismediada por receptores(EMR) es la forma en que las clulaseucariotascapturan macromolculasespecficas, con alta eficacia.Con estesistemase pueden tomar macromolculasde muy diversostipos, cada una de ellas reconocidaspor receptoresespecficos de la membrana plasmtica.Sin embargo, cuando se analiza el descubrimiento de la EMR, las descripcionesse centran en un receptor especfico, relacionado con un problema de salud que nos concierne:los nivelesde colesterolen sangre. Como debe saber,uno de los principales factoresde predisposicin al infarto cardacoson 1osnivelesanormalmente altos de colesterolen el suero sanguneo,condicin conocida como hipercolesterolemia. Dada 1ainsolubilidad del colesterolen ei suero,stetiende a depositarseen e1interior de las paredesde Ios vasossanguneos. Los depsitosvan aumentando con el tiempo, dando iugar alas placasaterosclertica.s, que causanla aterosclerosis, comnmente conocida como endurecimiento de las arterias.Al final, las placasllegan a bloquear el flujo sanguneo,causandoinfartos cerebrales o cardacos. Recurdese que, pesea todo, el colesteroles un componente de ia membrana de las clulasanimales-as pues,e requieren unos nivelesmoderados de colesterol- y que el organismo sintetizarcolesterol,si Ia ingestadel mismo es insuficiente. Aunque los nivelesde colesterolen sangrealtos estna menudo ligados a la ingestadel propio colesterolv de cidos grasos,ciertaspersonastienen predisposicingenticaa la hipercolesterolemia v ataques por tanto, a la aterosclerosis cardacos. Estapredisposicinhereditaria,conocida como hipercolesterolemia famar (HF) es especialmente severaen los individuos homozigotos -es decir, aquellosque han heredado un gen HF deficientede cada parental-. Las personas afectadas de HF presentanelevadosnivelesde colesterolsrico (unos 650-1.000 mg/100 mL de suerosanguneo, fentea los valoresnormales de 130-200mg/ml) r.desarrollanla aterosclerosis muy pronto, falleciendode dolenciascardacas, a -aquellos que menudo, antesde los 20 aos.Los heterozigotos tienen una copia deficientey otra normal del gen- se ven pesea lo cual sus nivelesde colesterolen sangre menos afectados, son elevados(unos 250-500 mg/100 mL) y tienen un riesgo alto de sufrir ataques al corazn a partir de los treienta aos. La reiacin entre la HF y la EMR se dio a conocer en 1972, graciasa un estudio de Michael Brown y loseph Goldstein,que Iessupuso adems,el Premio Nobel, en 1986.Brown )'Goldstein empezaron por cultivar fibroblastos de pacientes afectados de HF, comprobando que sintetizaban colesterol con una tasa anormalmente alta. Su siguiente observacin clave fue que las cluias normales tambin sintetizaban cantidades anormalmente elevadasde colesterol, cuando eran privadas de las lipoprotenas de baja densidad (LDL), usualmentepresentes en el medio de cultivo. Las LDLs permiten el transporte de colesterol en sangre y pueden ser tomadas por las clulas. Las LDLs son unas de las muchas lipoprotenassanguneas, que se clasifican de acuerdo a su densidad. Otro tipo son las lipoprotenas de alta densidad (HDL), cuyos niveles moderados en sangre se consideran saludables.Una partcula de lipoprotena es,en esencia, una monocapa de molculasde fosfolpidosy colesterol y una o ms molculasproteicas,en 1aque los lpidos se orientan con sus cabezas polareshacia el exterior (el medio acuoso)y las colas,hacia el interior de la partcula (Figura 12B.1). Las LDLs son las lipoprotenas que ms colesterol contienen: el colesterol,libre o esterificado, constituye en peso,ms de la mitad de la partcula.Las formas esterificadas del colesterolprotan una larga cadenade cido graso,por lo que son muy hidrfobas.En cantidades de unas 1.500 molculaspor partcula,tienden a agruparseen el interior de la misma, mientras que el colesterol libre (unas 500 molculaspor partcula) se sita principalmente en la monocapalipdica(Figura 128.1). Adems de fosfolpidos y colesterol,cada partcula de LDL lleva, embebida en la monocapa lipdica, una molcula de una protena muy voluminosa, denominada apoprotena 8100. Esta protena es crucial para la comprensin de las diferenciasen las respuestas de las clulasFH y las normales, ante la presenciade LDL en el medio. Brown y Goldstein comprobaron que Ia capacidadde los fibroblastos de mantener una tasa relativamentebaja de sntesisde colesterol,dependade la presenciade LDLs en el medio, circunstanciaque les permiti suponer que las LDLs estabanimplicadas en el transporte de colesterol,el cual regularasu propia sntesispor inhibicin (o r etr oinhib i cin) alostrica (t as e F igu.r a 6. 16 ). Lo s fi broblastos FH, por otra parte, sintetizan colesterolen cantidadeselevadas, independientementede que haya o no LDLs en el medio, lo cual sugiereque estasclulaspodran ser deficientesen Ia toma de colesteroldependientede LDLs. Basndose en estasobservaciones, Brown y Goldstein propusieron que la toma de colesterolpor las clulas,requiere Ia presenciade un receptor especficoen la superficie de Ia clula y que dicho receptor seradeficiente o faltara en los pacientescon HF. En una seriebrillante de experimentos,estosinvestigadores y sus colaboradores, demostraron la existenciade una protena especfica de membrana, el receptor de LDL, y que ste reconocaa la apoprotena B100 presenteen cada partcula de LDL. Asimismo comprobaron que las clulasde los pacientes con HR o bien carecande1receptor,o bien stepresentaba alguna anomala.

brana del endosoma. El ambiente ligeramente cido produce una disminucin en la afinidad de la mayora de los

brana, mientras que el material ingerido alcanzar otros

(por ejemplo, complejos receptor-ligando LDL y su receppuedenahorareciclarse tor); los receptores haciala mem376

destinos. El repartono essiempre algotan sencillo como enviar a los receptores a la membrana y retener a los ligandos en

Capitulo 12 Comportamientos intracelulares: retculo endoplsmic0, y peroxisomas complejo deGolgi, endosomas, lisosomas

Fosfolpldo Protena

Figuta12.81 Estructurade las LDL. Una partcula lipoproteica tpica estformada por que una monocapa de fosfoldidos y molculasde colesterollibres (no esterificadas), rodean a un interior hidrfobo. En la monocapa se insertan una o ms molculas por cidosgrasosde cadenalarga, son proteicas.Las molculasde colesterolesterificadas muy hidrfobas y tienden a agruparseen el interior de la lipoprotena. stasdifieren entre s por su densidad,que dependede la proporcin relativa de lpidos y protenas. que las protenas, la densidadde la partculaes Dado que los lpidos son menosdensos inversamenteproporcional a la cantidad de lpidos que posea.La lipoprotena mostrada g/ml. Una partculaLDL tpica aqu esde baja densidad(LDL), con un valor de 1,02-1,06 de fosfolpidoy 500 de colesterol libre, en la monocapay unas tiene unas 800 molculas en e1interior. La nica protenapresente, 1.500de colesterol esterificado denominada y estinsertadaen la B- 100,tiene un pesomolecularde unos 500.000 apoprotena estructuraia la partculee interviene monocapalipdica.La protenaconfiereestabilidad especficos de la superficiede las clulas. en la unin de la LDL a los receptores

Partculas LDL conJUgadas conferritina

Membrana
prdr ildUUd

Vescula cubierta

Fosa cubierta

Partculas LDL
uvr rluvau4J

conferritina, dentro de la (a) Laspartculas se unena losreceptores en un hoyo recubierto

que se forma (b) Vescula recubierta en un hoyo vescula

Figwa L2.82 Unina la membrana de las pattculas LDL, La conjugacin de partculas LDL con la protena ligadora de hierro, ferritina, permite observar estaspartculas en el microscopio electrnico,debido precisamentea Ia electrodensidadde los tomos de hierro. (a) Los conjugadosde LDL-ferritina aparecencomo motas oscuras,unidas a receptoresconcentradosen una fosa cubierta, de un fibroblasto humano en cultivo. (b) El conjugado LDl-ferritina se internaliza cuando se forma una vesculacubierta en Ia regin correspondientea la fosacubierta(TEMs). Para observar las partculas de LDL, estoscientficoslas conjugaron con molculas de ferritina, protena que liga tomos de hierro. Dado que los tomos de hierro son densosa los electrones,aparecencomo puntos oscuros en el microscopio electrnico (Figura 12F..2). Sirvindose de esta tcnica, Brown I Goldstein demostraron que las partculas de LDL conjugadas con ferritina, se unin a Ia superficie de la clula, acumulndose en lugares precisos (Figura 128.2a). Hoy da conocemos a dichos lugares como fosas cubiertas,que son territorios de la por la presenciade clatrina, hacia la membrana, caracterizados cara citoplsmicay de un acmulo de complejos receptorligando, en el exterior de la membrana. Sevio tambin la presenciade los puntos oscuros en el interior de las veculasformadas por invaginacin y posterior estrangulamiento de las fosascubiertas (Figura 12B.2b).En otras palabras,que el recePtor no slo reconocea la LDL, sino q.t. pareca intervenir tambin en su internalizacin en vesculas.En suma, estos investigadores haban descubierto un nuevo mecanismo por el que las clulas toman macromolculas del medio. Y como era un proceso de endocitosis en el que estaban mediados receptores, 1o denominaron con el nombre que lo conocemoshoy da, endocitosismediada Por receptores.

el endosoma.Algunos complejos receptorligando no sedisocian en el endosoma temprano. Los ligandos disociados son destinadosa los lisosomas,pero aquellos que permanecenunidos a los receptores, requieren ser diferidos hacia

vesculas de transporte. Existen,al menos,tres alternativas: (1) Algunos complejos receptor-ligando (por ejemplo, el factor de crecimiento epidrmico y su receptor) son dirigidos hacia los lisosomas,para su degradacin.(2) Otros son

plasmtca 377 y endocitosisi: dematerial a travs Exocitosis transporte dela membrana

conducidos hacia la RTG, donde se integran en diferentes rutas de transporte del sistemade endomembranas.(3) Los complejos pueden tambin viajar, en vesculasde transporte, hacia diferentesregionesde la membrana plasmtica, donde se segregancomo parte del proceso conocido como transcitosis. La trancitosis posibilita la transferencia de material extracelular desdeun lado de la clula (endocitosis) hasta el lado opuesto (exocitosis).De estaforma, se transfieren las inmunoglobulinas, a travsde clulasepiteliales,desdela sangrede la madre a la sangredel feto. Endocitosis independiente de clatilna. Un ejemplo de endocitosis independiente de clatrina, es el de la ruta conocida como endocitosisde fasefluida, que es una variedad de pinocitosis no especfica de fluidos extracelulares. La endocitosis de fasefluida, a diferencia de la endocitosismediada por receptores, no concentrael material ingerido. Dado que no hay un mecanismo de recoleccino exclusin especficas,lo que seintroduce esun reflejo de lo que hay en el medio extracelular.Los componentes de la membrana plasmtica, como por ejemplo los receptores,pueden ser incluidos indiscriminadamente,en vesculas de endocitosis de fasefluida. A diferencia de otras formas de endocitosis, staacontece de forma ms o menos continua. con una tasa constante en muchas clulas,posiblementeconstituye el mecanismo primordial de compensacin de las ganancias de membrana, que son consecuenciade la exocitosis.As pues,puede ser una forma de control de la superficiey voIumen celulares. Una vez dentro de la clula,lasvesculas de fasefluida, al igual que las de la endocitosisdependientepor clatrina, son conducidas a los endosomastempranos.

Las vesculascubiertas en los procesoscelulares de transporte

por primeravezpor Lasvesculas cubiertas fuerondescritas ThomasRothy KeithPorter, en 1964, conrelacin a supapel en la capturade lasprotenas de la yemaen los oocitos quesonvidemosquito. Desde entonces seha comprobado procesos Anteriormente tales en mltiples celulares. hemos y susprecursores, visto quelasvesculas cubiertas lasfosas implicadas cubiertas, estn en el transporte de vesculas en Tabla L2.2 Vesiculas cubiertas declulas eucariotas
Vesicula cubieila
Clatrina Clatrina COPI COPII Caveolina

el sistemade endomembranas,as como durante la endocitosisy la exocitosis. Es probable que estas vesculas participen en la mayora, sino en todas, las formas de trfico de que, en las clulaseucariotas,relacionan a los orvesculas gnulos de membrana con la membrana plasmtica. Una caractersticacomn de las vesculascubiertas esla presenciade una capade protenas,o cubierta,hacia el lado citoplsmico de la membrana vesical.Como se indic anteriormente, lasprotenasde la cubierta ms estudiadas son clatrina, COPIy COPil. Una cuarta, y peor conocida proLas protenasde la cubierta participan tena,esla cayeolina. en varias de las etapas de formacin de las vesculasde transporte. La diversidad de estasprotenas es el reflejo de su participacin en la clasificacinde diferentesmolculas, con destinos particulares,que viajan en vesculasespecficas.Entre las principales funciones se encuentran la de deformar las membranasplanas,paraforzar Ia gemacin,prevenir la fusin prematura con las membranas prximas de una vescuiaen formacin y regular las interaccionesentre lasvesculas en gemaciny los microtbulos, que son esenpor la clula. cialespara el desplazamientode las vesculas La dotacin particular de protenasdel exterior de una vescula,es un indicador de su origen y destino en la clula (Tabla 12.2).Como ya sabemos,las vesculas con cubiertas de clatrina, estnimplicadas en el transporte de protenas desde la RTG a los endosomasy en la endocitosis de complejos receptor-ligando de la membrana plasmtica. Las vesculas de COPI,por su parte, facilitan el transporte de retorno de protenasdesdeel Golgi hacia el RE, ascomo el intercambio entre cisternasdel propio complejo de Golgi. Las vesculas de COPil permiten el transporte de material desdeel RE al Golgi. El papel delas vesculas cubiertasde cayeolina,denominadas cayeolas,es an controvertido.Seforman caveolas transitorias en la membrana y el material endocitado aparece en los endosomas, pero la ruta de conexin entre la membrana plasmticay los endosomas, es an poco clara.

Lasvesculas cubertas declatrina estn rodeadas porledes y protenas declatdna adaptadoras

Las vesculas de clatrina estnrodeadaspor cubiertascompuestas por dos protenas multimricas, clatrina y pro-

Protenas de la cubielta*
AP1,ARF Clatrina, Clatrina, AP2 COPI,ARF I y Sec23 COPII (Sec13/3 I 24),Sarl Caveolina

0dgen
TGN plasmtica Membrana Complejo de Golgi RI, Membranaplasmtica

Destino
Endosomas Endosomas RE o complejo de Golgi Complejode Golgi
?

*ARF esel factor de ribosilacindeADP; AP1 y AP2 son complejosproteicosadaptadores (tambinllamadoscomplejosproteicos de ensamblaje).

378

y peroxisomas Captulo 12 Comportamientos intracelulares: retculo lisosomas endoplsmico, complejo deGolgi, endosomas,

tenasadaptadoras (AP). El trmino clatrina proviene del que significa <malla>y como sepuede comlatin clathratu.s, probar en la Figura l2.l7,la clatrina y la AP se ensamblan formando mallaspoligonales.Lasmallasplanasestnconstituidas exclusivamentepor hexgonos,mientras que en las mallas curvas, que se forman bajo las fosas cubiertas y alreha tanto hexgonos,como pentdedor de las vesculas, gonos. Las vesculascubiertas de clatrina se disocian rpidamente en complejos de clatrina solubles,complejos de prodesnudas. Estoselementos,a tenasadaptadorasy vesculas bajo las condiciones aprosu vez, pueden reensamblarse, piadas.En solucionesligeramente cidasy con iones Ca'-, los complejos de clatrina se arman, independientemente forde la presenciade protenas adaptadorasy vesculas, denominados cajas de clqtrina.El mando unos caparazones ensamblajese produce muy rpidamente -apenas unos

segundos, en condiciones favorables-. El ensamblaje y rpido es una caractersticaesencialde la desensamblaje cubierta, pues pareceque es necesarioque stadesaparezca, total o parcialmente, antes de que se produzca la fusin de la vesculacon una membrana. de las mallasde clattina. En 1981,Ernst UnComponentes gelwickell y Daniel Branton determinaron que la unidad estructural bsicade las redesde clatrina, era un elemento formado por tres brazos, denominado triesqueleto (Figura 12.I8a). Cadatriesqueletoesuna protena multimrica formada por tres polipptidos grandes y tres pequeos,que confluyen en un punto central, como se apreciaen la Figucadauno con un peso ra 12.18b.Los polipptidosmayores, pesadas son las cadenas de clatrinay molecular de 192.000, forman los brazos del triesqueleto.Cada brazo estligeramente curvado en su mitad, el codo, y ftnaliza con un dominio globular.Los polipptidos menores,con un pesomoligeras lecular en el rango de 30.000a 36.000,son las cadenas las dirigidos contra cadenas lide clqtrina. Los anticuerpos vrtice central, lo cual gerasse unen a los brazos cerca del indica que se asociana la regin interna de cadabrazo. Combinando la informacin obtenida por microscopa electrnicay cristalografade rayos X, se ha establecidoel modelo de organzacin caracterstico de hexgonos y pende clatrina (Figura 12.18c). tgonosde lasfosasyvesculas Segndicho modelo, en cadavrtice de la malla poligonal, se sita un triesqueleto.Cada brazo se extiende en dos lados del polgono, coincidiendo el codo con un vrtice adpesadas yacente. Dado que los codosde lascadenas sesitan en los vrticescontiguos,en cadalado de la malla de clatriEstadisna, se superponen los brazos de tres triesqueletos. asegura un alto grado de posicin en redessuperpuestas, contacto entre los polipptidos de clatrina. Thlescontactos mecnicaapropiada paralaformaconfieren la resistencia cin de la vescula.Por otra parte, en los codos no se produce interaccin, lo que confiere la flexibilidad necesaria para formar, tanto hexgonos,como pentgonosy facilitar de diferentestamaos. el acomodo para vesculas El otro componente bsico de las cubiertas de clatrina -Ias protenas adaptadoras,PA- fue identificado en base a su capacidadpara promover el ensamblajede la cubierta; staesla razn por la cual son tambin conocidas como proHoy da se sabeque las clulaseucatenasde ensamblaje. riotas tienen, al menos, cuatro tipos de complejos PA, cada uno compuestopor cuatro polipptidos-dos subunidades de adaptina, una cadena intermedia y una cadenapequea-. Los cuatro polipptidos, que son ligeramentedistintos en cada tipo de complejo PA, se unen a diferentesreceptores transmembrana, confiriendo especificidad a la vescula, durante su formacin y para encontrar su destino. la reunin de las molculasapropiadas Adems de asegurar en las fosascubiertas, los complejos PA intervienen tambin en el anclaje de la clatrina a la membrana plasmtica. Considerando estasfunciones, no es de extraar que los

;d it
'50nm (b)
5UU NM

(c)

(d)

FiguraL2.17 Redesde clatdna. Las vesculascubiertas de clatrina intervienen en mltiples procesosde transporte en las clulas Cadavescula serodeade una jaula de complejosde eucariotas. clatrina enlazados.(a) Micrograffa electrnica de criograbado de una red de clatrina de una clula de un carcinoma humano. Esta (b) Micrografa red plana estformada por unidadeshexagonales. y hexagonales, electrnica de jaulas de clatrina, pentagonales aisladas de cerebrobovino (TEMs). (c) y (d) Interpretacin esquemtica de las redesyjaulas de clatrinade las figuras(a) y (b).

enlosorocesos celulares detransoorte 379 Las vesculas cubiertas

Dominio globular terminal

Cadenaspesadas de clatrina

(a) Triesqueletos de clatrina

f---;:-

5U nm

(b) Estructura del triesqueleto de clatrina

%(c) Modelode ensamblaje de triesqueletos de clatrina

Pentgono

Hexgono

FigutaL2.LS Triesqueletos de clatlina. (a) Esta micrografa muestra esqueletos individuales de clatrina (SEM). (b) Cada triesqueleto estformado por tres cadenaspesadas de clatrina, que irradian desdeun vrtice central, cada una de ellasrematada por un dominio globular y una cadenaIigera de clatrina unida a la mitad interna de cadauna de los radios (no semuestran los complejos proteicos adaptadores, presentestambin en las cubiertas de clatrina). (c) Cuando las condiciones son apropiadas,los triesqueletosde clatrina se ensamblanen estructutaspentagonales y propias de fosasy vesculas hexagonales, cubiertas. De acuerdo con el modelo que sepresentaaqu, un triesqueletode clatrina selocaliza en el vrtice de un poliedro y cadabrazo se asociaen paralelo con cadauno de los brazosde los dos triesoueletos vecinos.

complejosPA seansuietosde regulacindel ensamblaje y disolucinde la clatrina.As,la capacidad de unin de los complejosPA a la clatrina,seve afectada por el pH, la fosforilacin y la defosforilacin. Elensamblaje de las cubiertasde clatilnadiilge plasmtica la fomacin de vesculas en la membrana y en la RTG Tnto la unin de los complejosPA a la membranaplasmtica, como la concentracinde los receptores, o complejosreceptor-ligando, en las fosascubiertas, precisande ATPy GTP-si bien,quizslopararegularel proceso. Sin embargo, el ensamblaje de las cubiertasde clatrina alrede380

puedetenerlugar sin necesidad dor de lasvesculas, de que se adicionemsATP o GTR exceptoen las vesculas de la RTG,que requierenla hidrlisis de nucletidostrifosfato. La acumulacinde los triesqueletos y el ensamblaje de la cubiertaen la caracitoslicade una membrana, parecen conferir parte de la fuerzamotriz necesaria para formar una vescula. En el casode la endocitosis por remediada ceptores, la formacin de la red de clatrina en la carainterna de la membrana,haceque staseinvagine.Inicialmente todaslas unidadesde clatrina son hexgonos dispuestos en un plano,esdecir,forman una estructura bidimensional. Conformesevan incorporandomstriesqueletos, aparecen pentagonales, configuraciones quejunto conlos hexgonos promuevenla curvaturay gemacinde Ia vescula.

Capitulo 12 Comportamientos intracelulares: y peroxisomas retculo endoplsmico, complejo deGolgi, endosomas, lisosomas

Paralelamente a la acumulacinde clatrina alrededor de la vescula en formacin,se incorpora,al menos,una nuevaprotena, que se la dinamina. EstaGTPasa citoslica, identificpor primeravezen Drosophlla, interviene en el esque trangulamientoy liberacinde la vescula. Lasmoscas presentaban una forma de la dinaminasensible a temperatura, se paralizaban de inmediato tras un cambiotrmico. queen lasmoscas Posteriormente secomprob, afectadas, se produca una acumulacinde fosascubiertasen las membranas presinpticas de lasunionesneuromusculares. La unin del GTR posiblementefacilita la formacin de anilloshelicoidales alrededordel cuello de la fosacubierta en gemacin. Cuandosehidrolizael GTP, los anillossecontraen,y se separa de la membranauna vescula perfectamentesellada. paradestambinalgntipo de mecanismo Seprecisa cubrirlasmembranas recubiertas Es ms, de clatrina. este proceso puesla cubiertapermanece debeestarregulado, pero sedisocia durantela formacinde la vescula, instantesmstarde. Al igualquela formacin,ladisgregacin de la cubierta esun proceso queconsume energa, estimada en unostresATPspor triesqueleto disociado. Serequiere como mnimo una protena,la GTPasa liberadora de la cubierta. que separa los triesqueletos de clatrinade los complejos PA;an no sehan aislado los factores responsables de la separacin y la membrana. entrelos complejos adaptadores y COPll, Lasvesiculas cubertas de tipo COP| conectan y el RE las cisternas del complejo de Golgi

multmerosde COPI,y la cubiertaasformadaproducela gemacinde una nuevavescula. Cuandola veslculaseha independizado, una protenade membranadesencadena la hidrlisis de GTP y el ARF libera a las protenasde la cubierta,que estnlistasparaun nuevociclo. Las vesculas cubiertasde COPII fueron descritas inicialmenteen levaduras, dondeintervienenen el transporte desdeel RE al complejo de Golgi. Sehan podido aislar, en clulas de mamferos, algunos componentes homlogos parece a los del sistema COPII de hecho, queel mecanismo de exportacin desde el RE al Golgi,mediado por COPII, estmuy conservado entrelevaduras y mamferos. La cubiertaCOPII de levaduras se ensambla a partir de dos -Sec13l3l y Sec23l24-y unaproteiproteicos complejos na G monomrica, similara ARFy que sedenominaSarL parecido Con un mecanismo al de COPI,la molcula SarI con GDP unido seaproximaa la membranaqueva a dar lugar aIa vescula. En esemomento,una protena perifrica de la membrana, intercambia GTP por GDP,facilitando que SarI seuna a Secl3/31 y a Sec23l24. Posteriormente, cuandosehaya formadola vescula, uno deloscomponentesde la cubierta COPII induceIa hidrlisisdel GTPv SarI y Sec23l24. sesepara de Secl3/31 Lasprotenas SNARE facilitanla fusinde las vesculas con las membranas de destino

La mayoradel trfico intracelularmediadopor veslculas cubiertas esmuy especfico. Comoya seha sealado, el paso final dela clasificacin delasprotenas sintetizadas en el RE, Lasvesculas presentes cubiertas de COPIestn entodas las tienelugar en la RTG,dondelos lpidosy lasprotenas se eucariotas clulas analizadas, desde levaduras a mamferos, empaquetan en vesculas de transporte,con destinos diverpasando por losinsectos. por Lascubiertas estn integradas sos.Recordemos tambin que, en las vesculas de clatrina quepartende la RTG,loscomplejos COPI y el factor de ribosilacin de ADP (ARF).Vistasen adaptadores incluyen el microscopio electrnico, lasvesculas con cubiertas COPI a lasdos subunidades de adaptina. Sonstas lasresponsano muestran las configuraciones polidricas tpicasde las bles,en parte,de la especificidad en el tipo de receptorque vesculas de clatrina,sinoquetienenaspecto algodonoso. El serincluido en la vescula. Una vezformadala vescula. se principalcomponente de la cubierta, requieren protenas COPI,esuna proteadicionales, responsables de quellegue na multimrica, formadapor sietesubunidades. al destino apropiado. Estopuedesermuy complejoen una Lasvesculas cubiertas de COPI intervienenen el transclulaen Ia cualhayun intercambioconstante devesculas, porteretrgrado desde el Golgihaciael REy entrelasprode ida y vuelta,entre el RE y el aparatode Golgi, entrelas piascisternas del complejo de Golgi,si bien supapelesobcisternas de esteltimo y entre el Golgi y la membrana jeto de controversia. plasmtica. Lasprimerasevidencias estaban Debe existir,por tanto, un medio de prevenir a favor quelasvesculas de quelascubiertas COPIseformaran,tanto en el RE,como en emigracin sefusionencon membranas en el Golgi.Sinembargo, no ha podidodemostrarse, en ininadecuadas. La hiptesisSNARXsebasa en un modelode vestigaciones recientes, la formacin de vesculas transporte intracelular,que satisface la importante etapa COPI en que sonvesculas el RE,por lo que sesupone retrgradas. de clasificacin y distribucin(FiguraI2.I9). El ensamblaje estdirigido por ARF,que esuna proteDe acuerdo con estahiptesis, los componentes molena G monomrica. ARF estpresente responsables en el citosolen forma culares de la clasificacin y distribucinde de complejoARF-GTP. CuandoARF encuentra en la memvesculas, en mamferos,son dos familias de proteinas brana que esta punto de dar origen a la vescula, el factor SNARE(receptores de SNAP):lasv-SNAREs(receptores intercambiador de nucletidos presentes deguaninaapropiado, interSNAPdevesculas), en la vescula y last-SNAREs (receptoresSNAPde la membrana diana), propios de la cambiaGDP por GTP.En estaconfiguracin, ARF puede unirsea la membrana, insertandouna reginhidrfoba en diana.Lasv y I-SNAREsson protelnascomplementarias, la bicapalip dica.Unavez firmemente, quejunto con los factores permitenque una anclada reclutaa los de <amarre>,
Las vesculas cubiertas enlosprocesos celulares detransporte 3 8 1

Membrana de origen GTPasa Rab

I u".,",,u o"t'.unrnort"
J
V-SNARE -----r-+

Hlice enrollada de la protena de amarre

Membrana de destino

l.
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\\o

)i-*' o

l.

para el envoy fusin Oelas vesiculasde transporte, Los componentesmolecularesbsicosque intervienen Figura12,19 La hiptesisSNARE en la clasificaciny distribucin de vesculas, en clulaseucariotas,son las protelnas de amare, las v-SNAREsen la veslculade transporte, las I-SNAREs en la membrana de destino,la GTPasaRab,NSF yvarias SNAPs.O Las protenas de amarre de Ia membrana de destino, una con estructura de hlice enrollada y la otra, un complejo multimrico, reconoceny seunen a la vescula.@ La ATPasaRab se une a la vesculay estimula Ia formacin de una hlice cudruple formada por una hlice v-SNARE y tres hlicesI-SNARE. (Las protelnas de amarre no se nrelven a mostrar.) @ La fusin de la membrana de la vesculacon la membrana de desno estpromovida por Ia interaccin de la vSNARE con la t-SNARE. @ La unin de NSF y SNAPs,desencadena la disociacin de los complejos SNARE.El momento preciso de la hidrlisis del GTP o AIP no seconoce an, pero posiblementeocurra despusde la fusin.

vescula encuentrea su diana.Ambas fueron descubiertas duranteel estudiode la exocitosis neuronal.Despus de su descubrimiento en el sistema nervioso,sehan encontrado tambin en levaduras y otros organismos. Cuando la vesculaalcanza su destino,interviene una tercerafamilia de protenas,las GTPasasRab. stasson y cada tambinespecficas tipo dedestinollevaasociada una particular de protenas coleccin Rab.Como seapreciaen 382

la Figura I2.I9,las SNAREs complementarias v y t forman una hliceestable de cuatro hebras. Estoasegura que,una vez han colisionado,permanecenen contacto el tiempo preciso paraquela protenaRabasociada a la vescula afiancede forma estable a lasv-SNAREcon lasI-SNAREs. Despusde la fusin de las vesculas) una nueva coleccin de protenas,entre las que estnel factor sensible a N-etilmaleimida (NSF) y las SNAPs (protelnas de

12 Comportamientos y peroxisomas Captulo intracelulares: retculo endoplsmico, complejo deGolgi, endosomas, lisosomas

unin a NSF soluble), posibilitan la liberacin de las v y I-SNAREs de vesculay destino, posiblemente acompaada de hidrlisis de ATP. El hecho de que NSF y las SNAPs estnimplicadas en la fusin de membranas muy diversas, de la selectihace pensar que ellasno son las responsables vidad. En estudios recientesseha llegado a la conclusin de que de las protenas SNARE solasno son las nicas responsables la especificidad. Se precisan otras, conocidascomo protenas de amarre, que actan alarga distancia y proveen de una especificidadtemprana, anterior a la interaccin entre vAs, se ha visto que la SNARE y I-SNARE (Figura 1,2.19). fragmentacin de protenas SNARE por ciertas toxinas in vivo, puede bloquear la formacin del complejo SNARE, sin que se vea afectadala asociacinentre vesculay membrana. Incluso, en sistemasreconstituidos in vitro, las vesculas derivadasdel RE se pueden unir a las membranas del Golgi, sin adicin de protenasSNARE. En la actualidad se conocen dos tipos principales de protenas de amarre -protenas superenrolladasy comcomo plejosmultimricos-. Lasprotenassuperenrolladas, las golginas, son importantes en el reconocimiento inicial y COPI y COPII. unin al complejo de Golgi, de las vesculas Las golginas se anclan por un extremo a la membrana del Golgi y con el otro contactan con las vesculasen paso. Adems,intervienen tambin en la conexin entre las cisternas del complejo de Golgi. Los anticuerpos contra cierde bloquear su funcin, protas golginas,que son capaces ducen la desorganizacinde la estructura de las cisternas medialesdel Golgi. La segundacategorade protenas de amarre estintegrada por varias familias de protenas multimricas, cada una de ellasde cuatro a ocho, o incluso ms, polipptidos. de levadurasy mamfePor ejemplo, el complejo exoquiste proteica,unindosea la memros, intervieneen la secrecin a la de la RTG, destinadas brana plasmticay a las vesculas exportacin. Otros ejemplos de estacategorade protenas son los complejos GOG (protena oligomricaconservada del Golgi), GARP (protena retrgrada asociada al Golgi) y TRAPP (partcula de transportedeprotenas).Todos ellos estn implicados en el reconocimiento temprano y especificidad de las interaccionesentre la vesculay la membrana de destino.La mayora de los complejosestnbastanteconservadosentre organismostan alejadoscomo las levaduras y el hombre. La asignacinde funciones a cadacomplejo y, dentro de stos,a cada subunidad, es uno de los campos ms intrigantes de Ia Biologa Celular actual.

para degradar el materialextrason necesarias digestivas y paradigecelularquela clulaha tomadopor exocitosis o macromolculas daadas o intracelulares rir estructuras primero el rganuloy luego Analizaremos innecesarias. los procesos digestivos, as como las enconsideraremos del mal funcionamiento de los liresultantes fermedades sosomas. digestivas, del testo aslana las enzimas Loslisosomas de la clula fuerondescuComovimos en el Captulo4, los lisosomas a prinbiertospor Christiande Duvey suscolaboradores, Anexo48), La centrifugacin cipiosde los aos50 (vase darsecuentade permiti a los investigadores diferencial inicialmente adscrita a las quela actividad fosfatasa cida, tipo de partculas, que asociada a un estaba mitocondrias, Adems de Ia fosanteriormente. no habasido descrita fatasacisa,el nuevo orgnulo contenaotras encimas una desoxirribonucomola B-glucoronidasa, hidrolticas, proteasa. y una Dado el aparente una ribonucleasa cleasa, papel en la lisis celular,de Duve llam a esteorgnulo, lisosoma. del lisosoma hubiera de que la existencia Slodespus y especificada suspropiedades su descritas sido predicha, se pudo observaren el microscopio dotacin enzimtica, queeraun orgnulo caractersdeterminando electrnico, animales. La confirmacin de lasclulas tico de la mayora histoqumicas, capafinal vino de la mano de lastinciones fosfatasa cidayotrasenzimas la actividad cesde localizar quehaban especficas, sidovisen estructuras lisosomales, (Figura12.20). electrnico tasen el microscopio en formay tamavaransustancialmente Loslisosomas en torno a los 0,5 pm de diencontrarse o, pero suelen de Golgi,estrodeadode metro.Como el REy el aparato al restode la staescrucialparaproteger una membrana. presentes en su interior. hidrolticas, clulade lasenzimas estaltamente El lado luninal de la membranalisosomal glicosilado, formando una cubiertacasicontinua,que Ia protegede las proteasas. El ambientecido (pH 4,0-5,0), semantiene la digestin de macromolculas, que favorece de ATP.Los gracias a bombasde protonesdependientes -bien activa, bien productosdela digestinsetransportan haciael citosol, pasivamente- a travsde la membrana, o son exportados de dondeentranen lasrutascatablicas la clula. lisosomales ha crecido consiLa nminadelasenzimas pero Duve, trabajo original de de todesde el derablemente que cidas-enzimas el son hidrolasas dastienenen comn con un pH ptimo en torno a 5,0-. La listaincluyecomo y peptidasas, 2 nucleasas, l4 proteasas mnimo,5 fosfatasas, pueden y En conjunto, 7 sulfatasas. 13glicosidasas 6 lipasas, biolgicas. No sordigerir a la mayorade las molculas aisladas del restode la prende,por tanto,que permanezcan estragos. en Ia que causaran clula,
y ladigestin Los lisosomas celular

Los lisosomasy la digestin celular

Los lisosomas son orgnulosque contienenlas enzimas lasprincipales macromolde degradar digestivas capaces los incluyendoa los lpidos, hidratosde culasbiolgicas, y lasprotenas. Lasenzimas nucleicos los cidos carbono,

383

Lrsosoma
n n

H-C-OH

H_ C _ O _ P _ O H

til

H-C-OH

pH5.0
Fosfatasa cida

lll -C-OH I
t-l

H-C-OH
H

O-

I -C-OH I
r-l

+ HO-P-O-

o tl

I o-

\_
-+ ph2*

B-glicerofosfato (sustrato) (a) Reaccin citoqumica

Glicerol

foslato Oe PIOffiO (insolubte)

(b) Lisosomas teidosen ctulas tratadas

-'1;

FiSutaL2.20 Localizacin citoquimicade la enzimalisosomalfosfatasacida. (a) Cortes finos de tejido fijado con glutaraldehdo e incubado con B-glicerofosfato(sustrato de la fosfatasacida) y una sal de piomo soluble (generilmenie nitrato e piomo). La fosfatasa 9n 9n-m9di,o cida hidroliza al B-glicerofosfato,liberando glicerol y anin fosfato.Estosltimos reaccionaricon los iones de plomo, forma.ro fo.iato de plomo, que precipita en el lugar de la actividad enzmfica.(b) La microscopa electrnicarevelala localizacin de la fosfatasa cida en la clula.Los orgnulosteidosde oscuro,que semuestranaqu,son lisosomai,destacados por la presencia de depsitos electrodensos de fosfato de plomo. Los orgnulos ms claros son mitocondrias (TEM).

Los lisosomas se fotman a paftr de los endosomas Las enzimaslisosomalesse sintetizan en los ribosomas del RE rugoso, acuyaluzse incorporan, para ser transportadas hacia el complejo de Golgi. Tias las modificacionesen el RE y los compartimientos del complejo de Golgi, por algunas de las mismas enzimasque procesanlas protenasde secrecin y las de membrana, las enzimaslisosomales seseparan de otras protenas,en la RTG. Ateriormente se ha descrito, en estemismo captulo, la adicin de una etiqueta manosa-6-fosfatoa las enzimassolublesde los lisosomas.Hay tambin sealescaractersticas para las protenas de la membrana del lisosoma.Las enzimasse empaquetanen vesculascubiertasde clatrina, que seforman en la RTG, pierden sus cubiertas y viajan hacia alguno de los compartimientos del endosoma (Figura 12.9). La mayora de las enzimas lisosomales son enviadas desdela RTG a un endosoma tardo. Recordemoscue los endosomastempranos se forman por la coales."n.iu de vesculas de la RTG y la membrana plasmtica.Con el tiempo, el endosoma temprano madura y se transforma en un endosoma tardo, orgnulo que tiene una dotacin completa de hidrolasascidas,pero que no est realizando ninguna funcin digestiva. Durante estelapso, las bombas de protones dependientes de AIR bajan el pH de la luz del endosoma temprano de 6,0 a 5,5 y el orgnulo pierde su capacidad para unirse a ms vesculas. El endosomatardo es,en esencia, una coleccin de enzimas digestivasrecin sintetizadas, as como de sustanciasextra e intracelulares. destinadasa la digestin y empaquetadas de manera que la clula quede a salvo de las hidrolasas; finalmente, madura hacia lisosoma, o descarga su contenido en un lisosomapreexistente. La etapa final en el desarrollo del lisosoma es la activacin de las hidrolasascidas.sta pasa por desplazara las 384

enzimasy sus sustratoshacia un ambiente ms cido.Existen dos manerasde alcanzaresterequerimiento. LasAIpasasde protones pueden rebajar el pH de la luz del endosoma tardo hasta 4,0-5,0, transformndose en lisosoma y generando,por tanto, un nuevo orgnulo.Alternativamente, el endosomatardo puede transferir su contenido a la luz de un lisosoma ya existente.Ha como mnimo, dos formas de transferenciadesdeel endosoma tardo al lisosoma.En el modelo de fusin transitoria, los endosomastardos se conectantransitoriamente con los lisosomas.Slo setransfieren las nuevasprotenas y lpidos lisosomales, as como el material a digerir. Posteriormente, ambos orgnulos sedisocian.En el modelo hbrido, el endosomatardo y el lisosoma sefusionan para formar un orgnulo hbrido temporal, en el que las protelnas y lpidos de ambos, no estn claramentesegregados. Estepasova seguidode la clasificacin y reciclado del componente endosmico hacia compartimientos ms tempranos y de la digestin del material remanente.

Lasenzimas lisosomales intervienen pfocesos envarios digestivos

Loslisosomas sonnecesarios paraactividades celulares tan variadas como la nutricin,defensa, reciclado de componentescelulares y diferenciacin. Podemos distinguirlos procesos digestivos quedependen delasenzimas lisosomales,tantopor el lugaren el quesonactivas, comopor el origendel materiala digerir (FiguraI2.2I).Aunquela digestin es,casi siempre,intracelular,en algunoscasoslas por lo enzimas lisosomales son segregadas por exocitosis. querespecta al origendelos materiales a digerir,cuandostos provienendel exterior,sehablade lisosomasheterofgicos,mientrasque si el material esde origen intracelular

Capitulo 12 Compoftamientos intracelulares: retculo endoplsmico, complejo deGolgi, endosomas, y peroxisomas Iisosomas

Endocitosis

ilLl;t"#" ,q,'"?x;t"ilt/o":::'iiifi ") cdas

de lisosomasy su Fitura L2.2L Formacin papelen los procesosde digestincelular. En esteesquemasemuestran los principales procesos en los que participanlos lisosomas. Las rutas mostradasson @ fagocitosis, mediadapo. .Jcepto.es, @ endocitosis @ autofagiay @ dig.rtion extrcelular.

c{\"-"P

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Membrana plasmtica

@$K',e*-#lmY,
:,.".","q^*j:i
.J Vacuolaautolaglca

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Formacin-de.rna

se denominan lisosomas autofgicos. Los procesosen los cualesintervienen las enzimas lisomales son:fagocitosis,enautofagia y digestinextradocito sismediada por receptores, seilustran en Ia Figura l2.2l,como rutas @, celular.stos @, @ y @, respectivamente. papelde los por receptores: y endocitosis mediadas Fagocitosis y nutricin. Una de las principaies lisosomas en la defensa funciones de las enzimaslisosomaleses la degradacin de los materialesextraos introducidos en la clula por fago(Figuras 12.14y y endocitosis citosis mediadapor receptores en lisosomas transforman Lasvacuolasfagocticas se 12.15). (ruta por medio de, al menos, dos mecanismos @ de la Fipueden, bien (1) de endocitosis gura 12.21).Estasvesculas temformando conexiones acumular protenaslisosomales, que la fuporales con endosomastempranos y tardos, sin sin seapermanente, o bien (2) se fusionan directamente los lisocon endosomastempranos. Como consecuencia, somasgeneradospor fagocitosisvarian mucho en tamao, apariencia, contenido del material digeribley etapade la digestin.La mayora de lo que ingiere una clula por endosigue una ruta sencilla.Las citosis mediada por receptores, molculas,una vez introducidas, son distribuidas por los endosomasms tempranos; el material a digerir permanece en los endosomas,a 7a vez que stos van madurando para formar endosomastardos y lisosomas,hasta que entra en contacto con las hidrolasascidas (ruta @ de la Figura2\).

Los productos solublesde la ingestin, tales como azcares,aminocidos y nucletidos, son exportados a travs de la membrana del lisosoma hacia el citosol, donde son empleadoscomo fuente de nutrientes. Algunos pasan por difusin facilitada,mientras que otros Io hacen por transporte activo. La acidezde la luz del lisosoma contribuye a generarun gradientede protones a travsde la membrana, para el transporque puede proveer de la energanecesaria y te hacia desdeel citosol. Al final de la digestin, slo el material no digerible permanece en el lisosoma, que queda como un cuerpo residual. En los protozoos, los cuerpos residualesse fusionan con Ia membrana plasmticay expulsansu contenido por exocitosis,como se ilustra en la Figura l2.2l.En los vertebrados, no existetal mecanismo,por lo que los cuerpos residuales se acumulan en el citoplasma. Pareceser que la acumulacin de restoscontribuye al envejecimiento celular, especialmenteen aquellas clulas longevas,como las del sistemanervioso. Autofagia:el sistema originalde reciclado, Una segunda e importante tarea de los lisosomas,es Ia destruccin de estructuras y componentes celulares que estn daados, o que ya no son necesarios. La mayoria de los orgnulos esflujo donde los nuevosorga un dinmico, tn sometidos reemplazan a los viejos, que son nulos recin sintetizados, Esta de orgnulos u otras estructuras digestin eliminados. que en griego significelulares,se conoce como autofagia,

y ladigestin Los lisosomas celular

38s

ca (comerse a s mismo). La autofagia se muestra como la ruta @ delaFigura 72.2L Hay dos tipos de autofagia-macrofagiay microfagia-. La macrofagia se produce cuando un orgnulo u otra estructura son encerradospor una doble membrana derivada del RE. La vescula resultante se denomina vacuola autofgica (o autofagosoma). A menudo esfcil identificar restosde estructuras celularesen dichasvacuolas,como se observa en la Figura 12.22.La microfagia supone la formacin de una vacuola autofgicamucho menor, rodeadapor una bicapa lipdica, que encierrapequeosfragmentos de citoplasma,ms que orgnulos completos. El destino de una vacuola de autofagia esligeramentedistinto al de unavacuola fagoctica.En lugar de producirse una acumulacin gradual de enzimas lisosomales,las vacuolasde autofagia tienden a fusionarsecon endosomas tardos o, directamente, con lisosomas acttvos. La autofagia tiene lugar en la mayora de las clulas,en muy diferentes condicionesy con diferentestasas,siendo especialmentedestacadaen determinados momentos del desarrollo.Por ejemplo, durante la maduracin de un eritrocito, sedestruyeprcticamentetodo el contenido celular, afectandoa todas las mitocondrias. Esteprocesose verifica por digestinautofgica. Tambien seobseruaun incremento notable en la autofagia, en clulas sometidas a arno. posiblemente,la respuesta represente un intento desesperado por parte de la clula,para continuar obteniendo energa, a pesarde tener que consumir suspropias estructuras.

Digestin extracelular. Lamayoade los procesosde gestin en los que intervienen enzimas lisosomales,se verifican dentro de la clula,bien por endocitosis,o bien formando una vacuola autofgica. Sin embargo, en algunos casos,los lisosomasvierten susenzimaspor exocitosis hacia el medio extracelular, producindose la digestin extracelular (Figara I2.2I, ruta @). La digestin extracelularocurre, por ejemplo,durante la fecundacinde los oocitos de animales. La cabezadel espermatozoidelibera enzimas lisosomales capaces de franquear las barreras qumicas que, de otra manera, impiden que el espermatozoide penetre la superficie del huevo. Ciertasenfermedades inflamatorias,como la artritis reumatoide,pueden serla consecuencia de una secrecin anmala de enzimaslisosomales en las articulaciones, por parte de los leucocitos.En relacin con esto,es interesante destacarque las hormonas esterodicas, cortisona e hidrocortisona, son agentesantiinflamatorios eficaces, puesto que estabilizan las membranas lisosomales,inhibiendo asla liberacin de enzimas.

Las enfermedades lisosomales deacumulacin, suelen deberse a la retencin demateriales nodigeribles EI papel fundamental de los lisosomas en el reciclado de
componentes celulares,se manifiesta claramente en las alteracionescausadas por deficienciasen determinadas protenaslisosomales. Se conocen unas 40 alteraciones de

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Vacuolas autofgicas con restos de mitocondrias

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Figwa L2'22 Digestinautof$ica, Etapastemprana y tarda de la digestin en una clula heptica de rata. A Ia izquierda seve una mitocondria-rodeadapor una membrana derivada del RE, en proc..o e formacin de una vaiuola autofgica.A la derechase observan varias vacuolasautofgicas, que contienen restosde mitocondiias (TEM). La digestin autofgicaesla fora por la cual seeliminan la mayoriade los orgnulosviejos.

386

Captulo 12 Compoftamientos intracelulares: retculo endoplsmico, complejo y peroxrsomas deGolgi, endosomas, lisosomas

-por la acumulacin acumulacinlisosomal,caracterizadas generalmente polisacridos nocivade sustancias especficas, las o lpidos (vase el Anexo4A). En la mayorade los casos, porque las enzimasdigestivas falsustancias sealmacenan pero a veces, tan o son deficientes, la alteracinseproduce quetransportan en lasprotenas losproductos dedegradacin,desde la luz del lisosoma haciael citosol.En amboscaqueacumulanel materialsufrenalteraciones sos, lasclulas graves El resultado suele consistiren e inclusosedestruyen. y retraso deformaciones esquelticas, atonamuscular mental,y frecuentemente sonletales. Desgraciadamente, la mayora de las enfermedades lisosomales de acumulacinno sontratables. La primeraenfermedad de acumulacin conocida, fue por la retencinexla glucogenosis de tipo II, caracterizada de glucgeno en el hgado, corazny msculos escesiva quegeneralmente quelticos de niospequeos, muerena El problema tienesu origenen una forma edadtemprana. quecadeficiente dela enzima lisosomal a-1,4-glucosidasa, en clulasnormales.El talizala hidrlisis de glucgeno metabolismo del glucgeno tienelugar,en su casitotalidad, perouna pequea partedel polisacrido pueen el citosol, y por de entrar en el lisosoma, un mecanismo autofgico glucosa, pelihastaniveles si no sehidrolizaa seacumula grosos. Dosdelaspatologas lisosomal mscode acumulacin nocidassoneI sndrome deHuilery el sndrome deHunter. Ambastienensu origenen deficiencias en la degradacin de quesonel principalcomponente glicosaminoglicanos, glu(vacdicode los proteoglicanos de la matriz extracelular alterada en un paciente seelCaptulo17).Laenzima con el parala de Hurler eslaa-L-iuronidasq, necesaria sndrome La observacin en el degradacin de glicosaminoglicanos. microscopio electrnico delasglndulas sudorparas de un enfermocon estesndrome,revelala existencia de un elequesetien,tanto para vadonmerode vacuolas atpicas, fosfatasa cida,como para glicosaminoglicanos. Aparentellemente, lasvacuolas sonendosomas tardosaberrantes, nos de materialno digerido. El retrasomentalesuna caracterstica comn a muchas porqueafectan enfermedades de acumulacin, al metaboquesoncomponentes lismo deglicolpidos, esenciales de las y delasenvueltas querodeana los axones. nerviosas clulas Un ejemploparticularmente bien conocido,eslaenfermedad de Tay-Sachs, alteracinhereditariade carcter recesivo. Los nios afectados sufrenun deterioromental rpido y falleen torno al sextomesde edad,seguidode parlisis cimientoantes delostresaos. El origenest en Ia acumu(un tipo de lacinen el tejido nerviosode un ganglisido glicolpido).La enzimadeficiente en este caso esla B-N-aceresponsable til hexosaminidasa, del recortedela N-acetil-galactosamina terminaldel carbohidrato del ganglisido. Los lisosomas de los niosquepadecen la enfermedad estn lleque contienen nos de fragmentos de membrana, los ganglisidos no digeridos.

Las vacuolas vegetales:orgnulos multifuncionales

Las clulas vegetalestienen compartimientos cidos rodeados de membrana, denominados vacuolas,que recuerdan a los lisosomas encontrados en la mayora de las clulas animales,pero que cubren, adems,funciones adicionales.La biognesisde las vacuolases muy parecida a la de los lisosomas.Lamayoria de sus componentes se sintetizan en el RE y son luego transferidos al complejo de Golgi, donde las protenas terminan su maduracin. Desde aqu parten vesculascubiertas que contienen los lpidos y las protenas destinados a las vacuolas,que forman una proyacuola, anloga del endosoma.La provacuola madura y forma una vacuola funcional, que puede ocupar hasta el 90o/odel volumen de una clula vegetal. Adems de tener enzimas hidrolticas, las vacuolas cumplen otras funciones esenciales para la viabilidad de las cLa mayora de talesfunciones estnen relalulas vegetales. que las hace cin con la imposibilidad de desplazamiento, muy susceptibles a los cambios que se producen en el medio. Como se mencion en el Captulo 4, una de las tareas esenciales de una vacuola, esel mantenimiento dela presin de turgor,la presin osmtica que hace que las clulasvegetalesno se colapseny que, en casode necesidad, puedan expandirse.Durante el crecimiento,la reduccin en la consistenciade la pared celular -acompaada de un aumento de la presin de turgor- permite que la clula se expanda. La direccin de la expansin se puede controlar de forma selectiva, haciendo que seanmenos resistentes, ciertos segmentosde la pared celular. EI mantenimiento del turgor esten relacin directa con otras funcionesde lasvacuolas:la regulacin de la concentracin citoplsmica de varios solutos.Un ejemplo a destacar, es la regulacin del pH del citosol. Las bombas de protones dependientesde ATP de la membrana de la vacuola,pueden compensaruna bajada del pH del citosol (quiz debida a un cambio en el medio extracelular)bombeando protones desdeel citosol hacia la luz de la vacuola. La vacuola es tambin un lugar de almacenamiento. Las protenasque almacenanlas semillassuelensintetizarse en ribosomas asociados al RE rugoso,incorporndose a Ia luz del retculo. Algunas de estasprotenas permanecen en el RE, mientras que otras setransfieren a las vacuolas,bien por autofagia de vesculasque parten del RE, bien por la ruta del Golgi. Cuando las semillas germinan, Ias protenas de almacenamientoestnprestasa ser hidrolizadaspor las proliberando aminocidosque seemplearn teasas vacuolares, en la sntesisde nuevasprotenas. Otros de los productos almacenados en las vacuolas son el malato, particularmente en los vegetalesCAM (vaseCaptulo 11), las antocianinas, responsables del color de las flores, que atraen a los insectos y avespolinizantes, sustanciastxicas, que ahuyentan a posibles predadores,productos que protegen a las clulasde la luz ultravioleta y sustanciasde desecho.El almacena-

Las vacuolas vegetales: multifuncionales387 orgnulos

tenala urato oxidasa, como la catalasa y la D-aminocido oxidqsa. Como ya hemosvisto,la catalasa degrada el HrO2; al igual que la urato oxidasa, la de D-aminocidooxidasa generaHrOr. Debido a su implicacin en el metabolismo del perxido de hidrgeno,el nuevo orgnulo recibi el nombre qtteperoxisoma.Desde entonces sehan identificado nuevas enzimas caractersticas y en la actualidad sesabe que el complementoenzimtico del orgnulo,vara considerablemente entre especies, rganos en algunoscasos, inclusocon el estado d desarroldel rgano. En todo caso, Los peroxisomas la presencia de catalasa y una o msoxidasas, que generan perxido de hidrgeno,constituyenla caracterstica difeLosperoxisomas, al igual que el complejode Golgi y los lirencialde todoslos peroxisomas. sosomas, son orgnulosrodeados por una membranasenDespus de haber sido identificadosy aislados bioqucilla; pesea todo, no derivan del retculo endoplsmico micamente, la existencia de los peroxisomas fue confirmapor tanto, no son parte del sistemade endomembranas, da con el microscopioelectrnico -primero en fracciones que incluye a los otros orgnulosestudiados en estecapde peroxisomas aisladas a partir de gradientes de densidad tulo. Estnpresentes en todaslas clulas eucariticas, sienyluego en clulas intactas-. Losperoxisomas resultaron ser do especialmente abundantes en las clulas del rin e hlos equivalentes funcionalesde los orgnulosque hablan gado de mamferos,en algasy clulasfosintticasde sido observados previamente en micrograffaselectrnicas, vegetales y en semillas oleosas en germinacin. Losperoxitanto de clulas animales, como de clulas vegetales. Como somas, son ligeramente menores que las mitocondrias, si su funcin eradesconocida en aqueltiempo, fueron denobien hay una considerable variacinde tamao,depen- minadossimplemente como microcuerpos.En las clulas diendo del tejido en el que aparecen. animalesy vegetales, un microcuerpo mide aproximadaPrescindiendo de su localizacino tamao,la caracte- mentede 0,2 a2,0 estrodeado por una tmde dimetro, rstica definitoria de un peroxisoma,es la presenciade membranasimple en general, tiene una matriz (interior catalasa" una enzimaesencial para la degradacindel perdel orgnulo)de aspecto finamentegranular. xido de hidrgeno(HzOz).Este es un compuesto potenComo seve en la Figura 12,23,7os peroxisomas animacialmentetxico, que seforma en diferentes reacciones de lessuelencontenerun nricleocristalino,generalmente foroxidacin,catalizadas por oxidasas.Thnto la catalasa, como lasoxidasas, quedanconfinadas a los peroxisomas. Aspues, la generacin y degradacin del HrO, ocurrenen el mismo orgnulo,protegiendoa otraspartesde la clula,a la exposicin a estecompuestonocivo.Antes de discutir las funcionesdelos peroxisomas) veamos cmo fuerondescubiertosy cmopuedendiferenciarse de otrosorgnulos, cuando seobservan en el microscopioelectrnico. El descubrimiento de los peroxisomas gracias fue posible a nnovacones metodolgicas en la centrifugacin en gradiente de densidad Christian de Duve y suscolaboradores no slo descubrieron los lisosomas, sino tambinlos peroxisomas. En el cursode susestudios inicialesconlos lisosomas, determinaron, al menosuna enzima,la urato oxidasa, que apareca en la fraccinlisosomal, pese a no seruna hidrolasa. Empleando un gradientede concentracin (Figura I2.7a), de sacarosa estosinvestigadores encontraronque la urato oxidasadel hgadode rata, serecuperaba en una regin del gradiente, cuyadensidad eraligeramente superior(L,25g cm3)aIade otros orgnulos, talescomo los lisosomas (alrededor de I,20-1,24 gi.m') y mitocondrias (en torno a 1,19g/cm3). Una vez que se pudo separarestenuevo orgnulo,se identificaronnuevas enzimas en la mismafraccinquecon388

miento de restos, solubleso insolubles, esuna importante funcin de las vacuolasvegetales. A diferenciade lo que ocurre en las clulasanimales,en las clulasvegetales no existenmecanismos de excrecin de residuos solubles. Las inmensas vacuolas encontradas en lasclulas vegetales, permiten a stas acumularsolutoshastanivelesque impediran o restringiranlos procesos metablicos, si el material permaneciera libre en el citosol.

Figwa L2,23 Peroxisomas de clulas animales. Esta micrografla electrnicamuestra varios peroxisomas(microcuerpos) en el citoplasma de un hepatocitode rata.Los ncleoscrtalinos son fcilmente observables. En los microcuerpos de clulasanimales,el ncleo cristalino estconstituido, casisiempre,por urato oxidasa (TEM).

Captulo 12 Comportamientos intracelulares: retculo endoplsmico, complejo deGolgi, endosomas, y peroxisomas lisosomas

madopor cristales deuratooxidasa. Losncleos cristalinos son tambincaractersticos de los peroxisomas foliares(de hojasdeplantas), por la casi bien stos estn constituidos (vase talasa Figura4.20).Cuandoestnpresentes dichos ncleos, esfcil identificara los microcuerpos comoperoxisomas, dadoquela urato oxidasaylacatalasa sonenzimas que definena dichosorgnulos. En ausencia del cristal,no es siemprefcil el reconocimientoultraestructuralde los peroxisomas. En talescasos esmuy til el empleode una tcnicacitoqumica, conocida comoreaccin dela diaminobencidina (DAB). Esteensayo depende de la capacidad de la catalasa de oxidara la DAB,formandoun polmeroquefaciiitala retencinde tomosde osmio,densos a los electrones, cuando el tejidosetratacontetrxidodeosmio(OsOn). Losdepsitosson fcilmentevisiblesen las clulasde los tejidos teidosde estamanera.En los peroxisomas animales, la matriz suele teirseintensamente con DAB, indicandoque la catalasa esuna enzimasoluble,distribuida de forma homognea. En las clulas de las hojasde vegetales, el tratamiento con DAB tie,preferentemente, los ncleos crista(Figura 12.24),lo cual permite linos de los peroxisomas queestos asegurar, ncleos por estn formados, realmente, cristales de catalasa. Como Ia catalasa esla nica enzima presente y ausente en todoslos peroxisomas en cualquier otro orgnulo, la reaccin de Ia DAB esuna forma segura de identificara los peroxisomas.
Peroxisoma Cloroplasto teidocon DAB

Lamayoria delasfunciones delospeloxisomas estnrelaconadas conel metabolismo delperxdo dehidrgeno

Losperoxisomas estn bien representados en animales, vegetales superiores, algas y algunos hongos. En los animales, son especialmente abundantes en el hgadoy el rin. Sus funciones han empezado a comprenderse recientemente, 1o cual ha estimuladoel estudiode lasrutas metablicas propiasdel peroxisoma y de lasalteraciones que seproducen cuandoalgunosde los intermediarios de stas son deficientes. Sehan descritocinco funciones diferentes: metabolismo del perxidohidrgeno, detoxificacin de compuestos nocivos, oxidacin de cidos grasos, metabolismo nitrogenados y catabolismo de compuestos de sustancias infrecuentes. Metabolismo del perxido de hidrgeno. El papelmsobvio de los peroxisomas de las clulas eucariotas esla detoxifique seproducepor la coexistencia cacinde H2O2, en el mismo orgnulode la catalasa y las oxidasas que generan HrOr. La especificidad de lasoxidasas esvariable, pero todasellastienenen comn la capacidad de transferirelectrones, directamente, desde susrespectivos sustratos, al oxgeno molecular(Or), formando HrOr. Suponiendo que RH, esun sustratooxidable,la reaccingenricacatalizapuedeescribirse da por lasoxidasas como
RH2+Oz------->R+H2O2

( r 2.3)

Mitocondria

fA 'r.:.
a

El perxidode hidrgeno asformadoseescinde por la catalasa, de dosmaneras. Generalmente, la catalasa funciona en lo queseconoce como modocataltico, en el queuna y una segunda molcula de HrO, seoxidaa oxgeno sereducea agua:
2H2O2 >02+2H2O

(r2.4)

":,l

,. ,.tt ,'s
".u* r,. .* lr

Dividiendo entre 2 a la ReaccinI2.4 y conjugndola 12.3, con la Reaccn seobtiene la reaccin conjunta: RH2+iOr-R+H2O

\r2.s)

puedefuncionaren modo Alternativamente, la catalasa peroxidasa,usando electrones derivados deun donadororparareducirel perxidode hidrgeno gnico, a agua:
R'H2+HzOz------->R'+2H2O

(r2.6)

i____r

Figwa L2.24 Localizacin citoqumicade la catalasaen peroxisomas vegetales. Imagen de una clula foliar de tabaco,similar a la mostradaen la Figura4.20,peroteida con diaminobencidina (DAB). La tcnica de tincin es anlogaal test citoqumico de la Figura 12.20.La catalasa oxida a la DAB que polimeriza y retiene tomos de osmio, densosa los electrones, cuando el tejido setrata con tetrxido de osmio (OsOn).La tcnica de la DAB demuestra que el depsito osmio queda confinado a los peroxisomasy, por tanto, la catalasa es un componente del ncleo cristalino (TEM).

(La notacin prima del grupo R indica que estesustrapuede to ser diferente del de Ia Reaccin 12.3).La correspondiente reaccin conjunta es ahora: RH2+ R'H2+ Oz-R + R' + 2H2O (12.7)

En cada caso,el resultado esel mismo: el perxido de hidrgeno se degradasin abandonar el peroxisoma.Dada la toxicidad de este compuesto (que es el principal componente activo de muchos desinfectantes), parecelgico que las enzimas responsablesde su generacin, aparczcanen el peroxrs0mas 389 LOs

que cataliza mismo compartimientoqueIa catalasa, su degradacin.De hecho,la catalasa esla protenams abundanteen lamayoriadelos peroxisomas, representando hasta el I5o/odel total proteico.As, cualquiermolculade perxidode hidrgenogenerada por una oxidasa, encontrar una molculade catalasa, lista para su degradacin. Degradacin de compuestos nocivos,En su modo peroxidante(Reaccin 12.6),la catalasa emplea diferentes sustanciascomo donantes de electrones, talescomo el metanol,el etanol,el cidofrmico, el formaldehdo, nitritos y fenoles. Comotodosestos compuestos sonnocivos paralasclulas, por la catalasa su detoxificacin esuna funcin vital de los perosomas. Posiblemente sta esla causa de quelosperoxisomas sean tan abundantes en el hgado y el rin. grasos. Losperoxisomas de cidos Oxidacin de lasclulas y vegetales paraoxianimales tienenlasenzimas necesarias grasos. dar los cidos Esteproceso, conocidocomo B-oxidacin,tambintienelugar en las mitocondrias, comoya vimos en el Captulo10.Entre el25 y el 50% de la oxidagrasos cin de cidos en lostejidosanimales, tienelugaren los peroxisomas; el restoocurreen las mitocondrias. Sin en las levaduras y las clulas vegetales, embargo, toda la severificaen los peroxisomas. B-oxidacin En lasclulas animales la B-oxidacin en los peroxisomasparece parael catabolisserespecialmente importante mo de los cidos grasos de cadena larga(16-20tomosde y de cacarbono), de cadena muy larga(24-26carbonos) dena ramificada. El producto primario, Ia acetil-CoA, se exportaal citosoldondeseintegrar en lasrutasbiosintticas. Una vezquelos cidos grasos sehan recortado haSta tenermenosde 16carbonos. el restode la oxidacin suele tenerlugar enlasmitocondrias. Estoquieredecir,queenlos losperoxisomas grasos, prepaanimales, acortan loscidos paralassubsiguientes rndolos que secompletarn etapas en las mitocondrias, msque parahidrolizarlos por completo hastaacetil-CoA. y levaduras, En los vegetales Ia situacin esdistinta,y los peroxisomas llevana caboel catabolismocompletode cidos grasos, rindiendoacetil-CoA. Metabolismo decompuestos nitrogenados, Con la excepcin de los primates, la mayorade los animales necesita a la (tambinllamadauricasa) urato oxidasa paraoxidarel urato, una purina que seforma duranteel catabolismo de los nucleicos y de algunas protenas. cidos Comootrasoxidasas, la urato oxidasa catalizalatransferencia directade electrones desdeel sustratoal oxgenomolecular,generando Htor: Urato * Oz-Alantona +H2O2 (12.8)

En el metabolismo de los compuestos nitrogenados estn tambin implicadas una serie de enzimas conocidas como aminotransferasas.Entre ellas se encuentran las enzimas que catalizan la transferencia de grupos amino (-NHr) desdelos aminocidos hasta los a-cetocidos: H "r .N+O O O

R-C-C-OAminocido

il

+ R'-C-C-Oa-cetocido

il il

i-

R-C-C-Oa-cetocido

il il

HN+o
+ R'-C-C-OAminocido

ll

(12.9)

Estas enzimas son esenciales en la biosntesis y degradacinde aminocidos, transfiriendo los gruposaminode una molcula a otra. desustancias infiecuentes. Algunosde los susCatabolismo tratosde lasoxidasas del peroxisoma, son compuestos raros,paralos cuales la clula no ha desarrollado rutasde degradacin. Entre estoscompuestos se encuentran los por las enzimas l-aminocidos,que no son reconocidos que degradan propiosdelos polippa los l-aminocidos, tidos.En algunos hongos, losperoxisomas estn dotados de algunas infrecuentes enzimasque degradan sustancias dequmicosajenosa nominadas xenobiticos,compuestos los organismos vivos.En estacategora seincluyenlos alcacortapresentes en el petrleo nos,hidrocarburos decadena y algunos Los hongoscapaces de susderivados. de metaparala descontaxenobiticos bolizarestos son utilizados minacintrasun vertidode petrleo. Enfermedades asocadas a losperoxsomas, Considerando la que tienenlugar en los pevariedadde rutasmetablicas que un nmeroelevado roxisomas, no sorprende de patologas, deprotenas tengasu origenen deficiencias de estos (vase elAnexo4A). La alteracin msfrecuenorgnulos ligadaal cromosoma te esla adrenoleucodistrofia X. La prode estaenfermedad, tena deficienteresponsable es una posiblemente protenaintegralde membrana, responsable de la entradapara su oxidacinen el peroxisoma, de grasos cidos de cadena larga. La acumulacin de estos cilasenvueltas dosgrasos desorganiza demielinadel sistema nervioso. Lasclulasvegetales tienenperoxsomas especales, no encontrados en las clulas anmales y algas Losperoxisomas deplantas estn implicados en aspectos queya disespecficos del metabolismo energtico, 10y 11.Aqu slopresentaremos cutimosen los Captulos y considea variosperoxisomas caractersticos devegetales raremos, brevemente, susfunciones.

previamente, Comoya seha comentado el HrO, sedegrada de inmediato en el peroxisoma, por la catalasa. La alantonaprosiguesu metabolismo y seexcreta, bien como cidoalantico, o bien en forma de urea,en el casode los peces y anfibios. crustceos,
39O

y peroxisomas Capitulo 12 Comportamientos intracelulares: lisosomas reticulo endoplsmico, complejo deGolgi, endosomas,

Peroxisomas foliares, Lasclulas de lashojasy otrostejidos fotosintticos devegetales, tienengrandes peroxisomas, denominados peroxisomas foliares, que aparecen frecuentementeprximosa cloroplastos (vanselas y mitocondras FigurasILl4y 4.20).La proximidadespacial entreestos tresorgnulos, posiblemente refleja su implicacinmutua (vasela enla ruta delglicolato Figura11.15), tambinllamada ruta fotorespiratoria, puesen ella seproducela captura de Ory la liberacinde CO2,dependientes de la luz. Varias de lasenzimas de esta ruta, entrelasqueseencuentran una oxidasa generadora de perxidode hidrgenoy dos aminotransferasas, estnconfinadas en los peroxisomasfoliares. Glioxisomas. Otro tipo de peroxisoma vegetal, es el que aparece transitoriamente en semillasen germinacin,que almacenan el carbono y la energa (funen forma de grasas damentalmente triacilgliceroles). En estas especies, lostriacilgliceroles almacenados, semovilizan y conviertenen sacarosa) durantela etapapostgerminal temprana,en una secuencia de eventos, que incluyela oxidacinde cidos grasos y la ruta conocidacomo el ciclodelglioxilato.Todas las enzimas necesarias para estos procesos selocalizan en unos peroxisomas especiales denominados glioxisomas (tase eI Anexo10A).Losglioxisomas seencuentran sloen los tejidoscapaces (segn de almacenar grasas lasespecies, el endospermo o los cotiledones) y aparecen tan slo durante el periodo de tiempo,relativamente corto)duranteel cual,la semillaen germinacinconsumesusreservas lipdicas.Una vezcompletada estafuncin, los gliosomasse conviertenen peroxisomas. Losglioxisomas puedenreapareceren tejidos senescentes de algunas plantas,posiblementeparadegradar lpidosderivados delasmembranas de lasclulas envejecidas. Sin embargo, no estclarohastaqu punto son importantes en los procesos de envejecimiento celular. 0trostiposde peloxisomas vegetales, Adems de estarpresentes en los tejidos que llevan a cabola fotorespiracino la B-oxidacin de cidos grasos, los peroxisomas aparecen tambinen otrostejidos vegetales. Porejemplo, lospropios delos ndulos, estructuras de lasraces plantasen de ciertas las que seconcentran bacterias, que facilitanla fijacin del nitrgeno atmosfrico(esdecir,la conversin del N, en la forma orgnica). Losperoxisomas de estas clulas estn implicados en el proceso de fijacindel nitrgeno. La biognesis de los peroxisomas ocurlepor divisin preexstentes de peloxisomas Como otros orgnulos, los peroxisomas aumentanen nmero cuandoIa clulacrece y sedivide.La proliferacinde orgnulosseconocecomobiognesls y lasprotenas del peroxisomaqueserequieren paraeste proceso, sedenominan peroxinas. En el casode los endosomas y lisosomas, la bio-

gnesis seproducepor fusindevesculas queseforman en el complejode Golgi.En su da sepensque los peroxisomas seformaban de una manerasimilar.Posteriormente, muchosinvestigadores erande la opinin de quesu biognesissloseproducapor divisin de peroxisomas preexistentes, de manerasimilar a como lo hacenlasmitocondrias y los cloroplastos. En Ia actualidadhay suficientes evidenciasparapensar quelosperoxisomas sepueden formarpor cualquiera de estosdos procedimientos, e inclusopor la combinacin de ambos. En todo caso subiognesis plantea doscuestiones esenciales. La primera,de dndeprovienen los lpidosnecesarios paralasmembranas recinformadas? La respuesta esque una partedeloslpidossonsintetizados por enzimas del peroxisomay el resto,especialmente la fosfatidilcolinay la fosfatidiletanolamina, viajandesde el RE.La mayorade los lpidosson conducidos hacialos peroxisomas por los intercambiadores de fosfolpidos, ya mencionados con anterioridad. Sin embargo, hay algunaevidencia de que esas protenas de intercambio puedanno serlo suficientemente eficientes parala incorporacinrpidadenuevos lpidos, por lo que senecesita la contribucin de vesculas derivadasdel RE. La segunda, sesintetizan lasenzimas y otrasprodnde tenas, tanto de la membrana) como delamatriz del peroxisoma? Lasprotenas sesintetizan en ribosomas libres, no asociados al RE.As pues, los pptidos completos seincorporan,despus de su traduccin, a los peroxisomas preexistentes. El pasode polipptidos a travs de la membrana del peroxisoma, esun proceso dependiente de ATB mediado por peroxinas de la membrana, si bien el papelpreciso del ATP esincierto. La Figura12.25 esquematizala incorporacin desde citosolde los componentes de la membrana y enzimas de la matriz,ascomo la formacin de nuevosperoxisomas, por divisin de orgnulospreexistentes. La protenarepresentadaen la figura esla catalasa, protenatetramricacon un grupo hemounido a cadauna de sussubunidades. Lassubunidadessesintetizande forma individual en ribosomas de citosol, seimportanpor el peroxisoma y sepliegan y enjunto con los gruposhemo,dandolugar a la enzisamblan ma tetramricaactiva.Seha comprobadoque los peroxisomasson capaces de importar no slo los polipptidos desplegados, sinotambingrandes polipptidos plegados e inclusoprotenas oligomricas. En recientes publicaciones seha sugerido que algunas de lasperoxinas sesintetizan en el citosol,pero sedirigen luegohaciael RE,antes de serincorporadas en los peroxisomas. Como evidencia estla presencia, en ciertas peroxinas,de oligosacridos en N, tpicosen lasprotenas sintetizadasen el RE. Por otra parte el tratamiento de levaduras con la toxinabrefeldinaA,queevitala formacin de vesculas derivadas del RE,producela acumulacinen el retculode la peroxinaPex3p. De forma anloga, en las clulasvegetales, la oxidasadel ascorbato parecedirigirse
Losperoxisomas 391

Peroxisoma

Fosfolpidos

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Vesculas oesoe e lR E

emo

Polpptidos de catalasa

de los peroxisomas. Los FiguraL2,25 Biognesis peroxisomasseforman por divisin de peroxisomas preexistentes, en lugar de por fusin con vesculas provenientesdel complejo de Golgi. @ Los lpidos, las protenas de membrana y las enzimasde la matriz se aadendesdeel citosol. La enzima que se Los muestra aqu esla protena tetrmera catalasa. polipptidos sesintetizan en ribosomas del citosol y sufren una traslocacin post-traduccin, a travs de la membrana. El cofactor hemo entra por una va independiente.Posteriormente,los polipptidos se pliegan y ensamblan,para formar la protena tetrmera activa.@ Despusde la incorporacin de lpidos y protenas,los peroxisomaspueden dividirse, formando nuevos orgnulos.@ Algunos autorescreen que los peroxisomaspueden obtener las protenas e incluso formarse de novo, a partir de del ER (protoperoxisomas). vesculas derivadas

hacia un subdominio del RE despusde su sntesisen el citosol y antes de su incorporacin en el peroxisoma. Este subdominio, presumiblemente implicado en la distribucin de protenasdel citosol destinadashacia los peroxisomas, ha sido denominado como el retculodel peroxisoma (pER), si bien su existenciaes controvertida. De Ia misma manera tambin es debatida Ia existencia delos protoperoxisomas,vesculasderivadas del ER, que algunos investigadores suponen capacesde evolucionar hacia nuevos peroxisomas. de la Paraque pueda tener lugar la importacin despus traduccin, las protenas dirigidas a un orgnulo especfique las dirijan. Estas caractersticas co deben tener seales son reconocidaspor receptoresapropiados u otras seales en la superficie de la membrana. Las estructuraspresentes seales son segmentosde aminocidos,que difieren por su Iongitud y posicin dentro de la protena.Lassesecuencia, alestpicas de, al menos algunasde las protenasdel peroxisoma, consistenen tan slo tres aminocidos,situadosen o cerca del extermo carboxilo terminal. Una de las secuencias ms habituales es la de serina-lisina-leucina(SKI), si bien son posiblesciertasvariaciones en cualquiera de las tres posiciones. Estetripptido terminal, conocido como PTS-l (seal1 de destinoaI peroxisoma)esreconocido por la peroxina del citosol Pex5p.Una segunda seal,situada en el extremo Nterminal y que recibeel nombre de PTS-2,interaccionacon la peroxina Pex7p. Ambas peroxinas llevan a la protena que porta las secuenciasPTS hacia el peroxisoma, al cual es traslocada,por un mecanismo an poco conocido. En la

membrana del peroxisoma, Pex5p y PexTp interaccionan con una o ms protenasde anclaje.Aparentemente,penetran en el peroxisoma llevando su carga,que liberan antes de serexportadasal citosol,para participar en nuevosciclos de transporte. Suresh Subramani y otros cientficos han demostrado que una protena que normalmente sedirige al peroxisoma graciasa su etiquetaPTS-l, permaneceen el citosol,si seelimina la secuenciaSLK. En la misma lnea, la adicin de una secuenciaSLK a una protena de citosol, es suficiente para dirigirla hacia el peroxisoma. En suma, la secuencia es necesariay suficientepara diSLK o susposiblesvariantes, rigir protenashacia los peroxisomas.Es ms, una secuena menudo funcia propia de peroxisomasde una especie, tan distantes como vegetales, ciona en otras especies, levaduras,insectosy vertebrados.Por ejemplo, el gen de la luciferasa,una enzima del peroxisoma que permite emitir se puede transferir a clulasvegetales, luz a las lucirnagas, a partir de las cuales se hacen crecer plantas completas. Cuando las clulas de Ia planta genricamente transformase puede detectarIa preda se examinan cuidadosamente, senciade la luciferasaen los peroxisomas,los mismos orgnulos en los cuales se localiza en las lucirnagas.El conocimiento de los mecanismos de importacin por el peroxisoma y la identificacin de numerosasperoxinas conservadasdesdelevaduras hasta el hombre, en conjuncin mtodos genticosde los que se dispocon los sofisticados ne en modelos de levaduras,permitirn conocery tratar las por deficienciasen la biognesiso enfermedadescausadas importacin de protenasen los peroxisomas.

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y peroxisomas endosomas, lisosomas retculo complejo deGolgi, Capitulo 12 Comportamientos intracelulares: endoplsmico,

El conocimientode las clulaseucariotas diante la invaginacin de la membrana cepasapor Ia comprensin de susmembraIular. La endocitosis mediada por receptoy cmo stas nasintracelulares sonlasresres es muy especfica,pues depende de la ponsables dela compartimentacin defuninteraccin entre ligandos y receptoresde la ciones. El sistema de endomembranas est membrana. Los complejos receptor-liganformadopor una serieelaborada de orgdo se concentran en las fosascubiertas por nulos de membrana, quederivandirectao clatrina. Una vez dentro de la clula, Iasveindirectamente del retculoendoplsmico sculaspierden sus cubiertasproteicasy se (RE).El RE esuna red de sculos, tbulos fusionan con membranas intracelulares, y vesculas que separanalaluz del RE del generalmente las de los endosomas temquelo rodea. citoplasma El RErugosoest pranos, que son los Iugaresdonde se clasisalpicado de ribosomas y esel lugar de la fica el material ingerido. Los receptores y sntesis de protenas, cuyodestinoesla inlos lpidos de membrana, a menudo se re-la corporacina diferentes orgnulos ciclan hacia la membrana plasmtica, envuelta nuclear, el complejode Golgi,Ios mientras que el material destinado a la deylos lisosomas- o la secrecin gradacin se mantiene en los endosomas, endosomas al exterior. Tantoel RErugoso, comoel liso, mientras stos van madurando hacia ensintetizan lpidos para las membranas cedosomas tardos y finalmente lisosomas. Iulares;en el RE liso se verifican adems Los endosomas tardos son orgnulos procesos, otrosmuchos que contienen hidrolasas cidas inactivas. entrelosqueseincluyela detoxificacin de drogas, el metaLas bombas de protones dependientes de bolismodehidratosdecarbono, el almace- AIP, presentesen la membrana, rebajan el namiento de calcio y la biosntesis pH de la luz del endosoma, transformando de esteroides. Una vezquelasprotenas abanlos endosomastardos en lisosomas.De fordonanel REenveslculas de transicin. inima alternativa, un endosoma tardo puede cian las primerasetapas de su modificafusionarse con un lisosoma preexistente,al cin. Una seriede protenas residentes cual vierte su contenido. En ambos casos del RE,cataliza la glicosilacin y plegamiento las hidrolasascidaslatentes,capaces de dedepolipptidos,la eliminacin deprotenas gradar ala mayora de las molculas bioly el ensamblaje mal plegadas gicas,seluelven activas.Las vacuolas de fade lasprotenasmultimricas. gocitosisadquieren las enzimaslisosomales El complejode Golgi desempea un fusionndose con los endosomas tempraimportantepapelen la glicosilacin y disnos o estableciendoconexionestemporales tribucin de protenas haciaotrosorgnucon los endosomas.Lasvacuolasde autofaIosy la membranaplasmtica. Lasvescugocitosis suelen fusionarse con endosomas las de transicinque parten del RE, se tardos o lisosomas activos.La autofagia es fusionanconla red cls-Golgi, transfiriendo necesaria para el reciclado de estructuras lpidosy protenas haciael complejode celularesdaadas o que ya no se precisan. Golgi. Lasprotenas se van desplazando Las vesculasde transporte, llevan a los luegopor los diferentes elementos del dicmateriales a travs del sistema de endotiosomahastaalcanzar la red trans-GoIg. membranas. Las protenas de las cubiertas -las que estn la clatrina, COPI, COPII y Duranteeste viaje, lasprotenas sufrennuevasmodificaciones, y glicomolosrecortes caveolina- participan en la distribucin cosilaciones en lascadenas laterales de olide molculas destinadasa diferentes lugagosacridos. Las vesculas de transporte res, y tambin en Ia formacin de las vesformadas en Ia red trans-GoIgi,lIevan a las culas.El conjunto de protenas que cubren protenas procesadas hastasusdestinos fiel exterior de una vescula,determina el orinales. Entrelasprotenas procesadas por el gen de la misma y su destino dentro de la aparatode Golgi,estnaquellas que sern clula. Cuando Ia vesculaalcanzasu diana, por exocitosis. segregadas Las vesculas y es reconocida y unida por las protenas de grnulos de secrecin vacansu contenido amarre de la membrana de destino. En ese en el medio extracelular, despus de fusiommento, interenen varias protenas adinarsecon la membrana plasmtica. cionalesque catalizanla fusin de las memque aade La exocitosis, lpidosy probranas. Inmediatamente despus,se protenasa Ia membranaplasmtica, se conduce la interaccin entre dos familias de trarresta con la endocitosis, quepermitela receptores proteicos complementarios, las ingestinde sustancias extracelulares, mev-SNARE y las t-SNARE. Una tercera fa-

milia deprotenas,las GTPasas Rab,dirigen Ia complementariedad de las v- y t-SNAjustoantes RES, dela fusin.Finalmente, el factorNSFy lasprotenas SNAPs catalizan la disociacin de las SNAREs, producindosela fusin de la membranade la vesculacon la membranade destino. Losperoxisomas, queno sonelementos propiosdel sistema de endomembranas, parecen proliferarpor divisinde orgnulos preexistentes, msquepor coalescencia de vesculas. Pese a todo, hay autoresque defienden la existencia de los protoperoxisomas, vesculas que,partiendodelREmaduraran hasta formarnuevos peroxisomas. Algunosde loslpidosde la membrana del peroxisoma estn sintetizados por enzimas delpropio orgnulo; el restosontransportadosdesde el RI gracias a protenas intercambiadoras defosfolpidos. La mayora de las protenasdel peroxisoma se sintetizan en ribosomas del citosol,siendoimportadasuna vez traducidas, Sepiensaque otrasmaduranpreviamente en un supuesto subdominiodel RL, conocidocomo el (pER).La enzima retculoperoxismico que definea un peroxisoma esla catalasa. stadegrada el perxidodehidrgeno, que por variasoxidasas, es generado antesde que esteproductopuedamalograra los componentes celulares. En Iasclulas animales, las reacciones que ocurrenen los peroxisomas sonimportantes parala detoxificacinde sustancias nocivas, la oxidacin de cidosgrasos y el metabolismo de compuestos nitrogenados. En Iosvegetales, los peroxisomas intervieneen la conversin de lpidos de almacenamiento en hidratosde carbono(glioxisomas) y enla fo(peroxisomas torespiracin foliares). En este captulo hemos considerado variasdelasprincipales estructuras de membranaque seencuentran en lasclulas eucariotas, incluyendoel RE,el complejode Golgi, losendosomas,los lisosomas,las vesculas de exocitosis y endocitosis y los peroxisomas. En cadacaso, hemoscomprobadoquecadaestructura secaracterizapor la posesin deun juegopropio deprotenas y por el desempeo de funciones especificasdentro de la clula.En la actualidad una de las preguntas ms excitantes de la biologacelular, concierne al trficode endomembranas: tancmoselas arreglan tas protenas y lpidospara alcanzar sus destinos caractersticos dentro de la clula y en el momento apropiado?

Perpestiva 393

Problemas
problemas Los demayor dificultad estn marcados con un .. L2.1" Compartimentacin de funciones.Cadauno de los procesos estasociado a uno ms orgnulosde siguientes clulas eucariotas. Identifiqueen cadacasoel orgnulou y sugierauna ventajadel confinamientodel proceso orgnulos en el orgnuloen particular. (a) B oxidacin de cidos grasos de cadena larga. (b) Biosntesis de cholesterol. (c) Biosntesis de insulina. (hormonasexual (d) Biosntesis de testosterona masculina). (e) Degradacin de orgnulos daados o queya no se necesitan. (0 Glicosilacin de protenasde membrana. (g) Hidroxilacindefenobarbital. (h) Separacin y lasde secrecin. de lasprotenas lisosomales L2,2 Retculoendoplsmico. Seale cules de los siguientes son ciertos sloparael RE rugoso(R),parael liso supuestos (L), paraambos(RL),o paraninguno(N). (a) Contiene plasmtica. queIa membrana menoscolesterol (b) Tieneribosomas adheridos a la superficie externa (citoslica). (c) Estimplicadoen la detoxificacin de drogas. (d) Estimpiicadoen la hidrlisis del glucgeno. (e) Esel lugardondesesintetizan lasprotenas de secrecin. (0 ($ Esel lugardondesepliegan Iasprotenas de membrana. Tiendea formar estructuras tubulares. (b) La fusin de la vescula (despus de la disociacinde la cubierta)con la membranadel Golgi, estfacilitadapor y por protenasRab. una t-SNAREespecfica (c) Intervieneen el transportebidireccionalentreel RE y el complejo de Golgi. (d) Intervieneen la clasificacin para el de protenas transporteintracelularhaciadestinos especficos. (e) Intervieneen el transportede lashidrolasas cidas hacialos endosomas tardos. (0 Esesencial en todoslos procesos de endocitosis. ($ Esimportante en el trfico retrgradodel aparatode Golgi. (h) Estimplicada en el transporte de lpidosde membrana desde la RTG hastala membranaplasmtica. (i) El componente estructural bsico de la cubierta esel triesqueleto. (j) Lasprotenas de la cubiertasedisocian inmediatamente despus de formarsela vescula. (k) Entrelasprotenas de Ia cubierta siempre aparece una monomrica. GTPasa 12,5 Interpretando los datos.Cadauno de los siguientes enunciados resume losresultados de un experimento relacionado con la exocitosis o la endocitosis. Explique en cada caso la relevancia del experimento en reiacin con Ia comprensin de dichosprocesos. (a) La adicinde colchicina a un cultivode fibroblastos inhibe el movimientode lasvesculas de transporte. (b) Algunas clulas de la hipfisis segregan lamininade forma y hormonaadrenocorticotropa continua en respuesta a seales especficas. (c) Clulas puedensegregar de lasglndulas adrenales adrenalina en respuesta a una elevacin experimental en la concentracin de calciointracelular. (d) Lasclulas quepresentan una forma sensible a temperatura de la dinamina,seven privadasde endocitosis mediadapor receptores, cuandoseproduceuna variacin en la temperatura, si bien continan con la ingesta de ruido (inicialmentea un nivel reducidoy pasados extracelular normales). unos30-60minutos,a niveles L2.6 Digestin celular.Indique cundoson correctos cada enunciados, con relacinal procesode uno de los siguientes (F), endocitosis mediadapor receptores digestin: fagocitosis (R),autofagia (A), o digestin (E).En cadaapartado extracelular puedehaberuna respuesta correcta, variaso ninguna (N). (a) Puede implicara la exocitosis. (b) Puedeproducirsela fusin de vesculas o vacuolas con un lisosoma. (c) El materialdigeridoesde origen extracelular. (d) El materialdigeridoesde origenintracelular. (e) Esesencial parala penetracin del espermatozoide en el lulo. (0 Esimportante en ciertasetapas del desarrollo. ($ Intervienenhidrolasas cidas.

(h) Generalmente formadopor sculos est aplanados. (i) Esvisibleslocon el microscopio electrnico. L2.3 Biosntesisde las protenasintegralesde membrana. Ademsde su papelen la secrecin celular,el RE rugosoy el de Ia biosntesis complejode Golgi,son responsables de las protenas integrales de membrana. Ms concretamente, esos orgnulosson la fuentede lasglicoprotenas comnmente encontradas en Ia monocapaexternade fosfolpidosde la plasmtica. membrana (a) Muestreesquemticamente Ia sntesis y glicosilacin de las glicoprotenas de la membranaplasmtica. (b) Expliquepor qu los gruposglucdicos de las glicoprotenas aparecen siemprehaciala caraexternade la membrana. (c) Qu ha asumidousteden relacincon lasmembranas paradibujarlos esquemas biolgicas, del apartado ay responder a la cuestindel apartadob? L2.4 Vesculas cubiertasy transporte intracelular. Seale cules de los siguientes apartados son ciertosparavesculas (II). Cada cubiertas de clatrina,(C), COPI- (I), o COPII-coated uno puedesercierto para una,varias,o ninguna (N) de las vesculas cubiertas estudiadas en estecaptulo. (a) La unin de la protenade la cubiertaa un receptorLDL estmediadapor un complejoproteicoadaptador.

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y peroxisomas Capitulo 12 Comportamientos intracelulares: retculo endoplsmico, complejo deGolgi, endosomas, lisosomas

(h) Sefusionanvesculas de endocitosis con endosomas tempranos. (i) Sefusionanlos lisosomas con la membranaplasmtica. (j) Tienelugar en los lisosomas. (k) Sirvecomo fuentede nutrientesparala clula. cundola L2.7 Propiedades de los peroxisomas. Seale (A), o ninguno(N) respuesta esciertaparatodos(T), algunos en estecaptulo. descritos de los variostipos de peroxisomas Razone la respuesta. (a) Reciben lasprotenas del REy del complejode Golgi. (b) Son capaces de catabolizar cidoscasos. (c) Tienenhidrolasas cidas. (d) Tienencatalasa. (e) En ellosseverificanreacciones qumicasde generacin de perxido de hidrgeno. (0 Tienengenes que codificanparala luciferasa. (g) Tienenurato oxidasa. (h) Sonfuentede dolicol. (i) por una bicapa lipdica. Estn rodeados a que lisosomales de acumulacin.Pese L2.8 Enfermedades lasenfermedades lisosomales de la sintomatologa esdiversa, comunes. En tienenunascuantas caractersticas acumulacin, enunciados, indiquesi la cadauno de los siguientes (M), si de lasenfermedades escomna la mayora caracterstica (S),o si no es alteracin hizo sumarconcreta esciertaalguna (N). ciertaen ningunode los casos (a) El metabolismodeficientede glicolpidoscausa deterioro mental, (b) Produce en el de productos de degradacin la acumulacin Iisosoma, (c) Producela acumulacinde excesiva cantidadde glucgeno en loslisosomas. (d) Afectaa la capacidad de regularla sntesis de glicosaminoglicanos. (e) Seoriginapor la ausencia cidas funcionales. de hidrolasas (f) en Ia clula. Producela acumulacinde lisosomas (g) Entre los sntomas estnla atonamusculary el retraso mental. (h) Desencadena quecontienen de orgnulos la proliferacin catalasa. L2S Distribucin de protelnas. Parael transportede protenas intra y extracelulares, existen haciadiferentes destinos En estecaptulohan sido diferentes estrategias estructurales. ( 1) el pptidocorto Lys-Asp-Glu-Leu, tresejemplos: descritos (2) los dominios hidrfobostransmembrana y caractersticos, (3) los residuos de manosa-6-fosfato de cadenas laterales preguntas paracada Conteste a lassiguientes oligosacridos. referidas: una de lasestrategias (a) En qupartede la clulaseincorporala seal en la protena? (b) Cmoasegura la sealque la protenavayaa su destino? (c) Hacia dnde sedirigira la protenasi sele quitara la seal?

. L2,L0 Silicosisy asbestosis. La silicosis esuna enfermedad debilitantede los mineros que seorigina por Ia ingestin de slice(comolasde la arena o el vidrio) de partculas pulmonares.La Asbestosis por los macrfagos eswa por la ingestade fibras de tambin grave,causada enfermedad laspartculas o fibrasseencuentran asbesto. En amboscasos, y seestimulaa los fibroblastosparala en los lisosomas en los pulmones, formacin de ndulos de fibras de colgeno pulmonary reduccin de la capacidad con la consecuente finalmentela alteracinde la funcin resniratoriav causando muerte. (a) Cmo creequelasfibrasllegana los lisosomas? (b) Qu pueden produciren los lisosomas efectos las partculasacumuladas? (c) Cmosepuedeexplicarla muerte de lasclulas que contienensliceo asbesto? (d) Qucreeque ocurre con laspartculasde slicey lasfibras de asbesto cuandomuerela clula? Porqu siguen pesea que hayacesado indefinidamente, muriendo clulas la exposicinal sliceo al asbesto? (e) Los fibroblastos colgeno en cultivo siguensegregando y produciendofibras conectivas tras Ia adicin al cultivo de un cultivo de macrfagos del materialproveniente que ha sido expuesto pulmonares, a partculasde indica esto al respecto de la deposicin de sflice. Qu en lospulmones de los pacientes ndulosde colgeno silicticos? , U1L FraccionamientoSubcelular. La Figura 12A.3 bidimensional de los coeficientes de muestra un diagrama (en unidades (en y lasdensidades Svedberg) sedimentacin y virus.En cadacaso, g/cm3) molculas en variosorgnulos, el oval delimita el rangode los valores reaapromadamente de una partculadada.Bsese frecuentes de Sy lasdensidades en y susconocimientos de lastcnicas l y en la Figura12A.3 de en el Anexo 72A,paracontestar a las centrifugacindescritas siguientes cuestiones: (a) Qu o molculas tienenlos menores valores orgnulos de menoresdensidades? mayores S?Ylos mayores? Las Las densidades? (b) Compare de un ribosoma con lasdel RNA o la densidad susconocimientos acerca una protena, Considerando de puedeexplicar su observacin? los ribosomas, cmo (c) Dado que la mayorade los virus estnformadospor DNA de o RNA unidos a protenas, porqu el coeficiente sedimentacin de un virus tpico esmayor que el de las molculas individualesde DNA RNA o protena? (d) Se puedeusarla centrifugacindiferencialpara separar los puedeemplear ncleosde lasmitocondrias? Porqu?Se paraseparar tcnica los microsomas de las esta mitocondrias? Porqu? (e) Se puedeusarla tcnicade la centrifugacin en gradiente para separar microsomas de mitocondrias? de densidad puedeusarparala separacin de RNA y Porqu?Se qu? DNA?Por (0 Diseeun esquema de purificacin en el que sepuedan primero, Iisosomas, peroxisomas y mitocondrias separar, Problemas

39s

de otros componentes obtenidosde un homogenado y luegoseparar Iamezclade los orgnuloseq tres fracciones diferentes. . L2,L2 Enzimasy orgnulos.La mayorade los orgnulosse identificany describen por lasenzimas que presentan. Tantolos lisosomas, como los peroxisomas, fueron descubiertos por la presencia de enzimas cuyapresencia no eraf,cil de explicaren ya conocidas. estructuras

(a) Qu para identificar de forma criterio empleara

inequvoca un nuevoorgnulo,basado en lasenzimas que contuviera? (b) Valdra estecriterio para identificarlisosomas en una preparacinde mitocondrias? Razone la respuesta. (c) Sera vlido estecriterio paraidentificar peroxisomas en una preparacinde lisosomas? Razone la respuesta.

Bibliografa recomendada
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Capitulo 12 Comportamientos intracelulares: retculo y peroxisomas endoplsmico, complejo deGolgi, endosomas, lisosomas