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Manual de Prcticas de Microbiologa

Marav, A.

PRESENTACIN El Manual de Microbiologa Parasitologa, se elabor con la finalidad de proporcionar un material ordenado y de fcil acceso al trabajo acadmico, el cual se complementa con la actividad cientfica en el laboratorio. ctualmente, toda carrera profesional !ue est relacionada con el campo de la salud "umana, debe contar con un Manual de Prcticas de Microbiologa, tal como los estudiantes de #iologa, Enfermera, $armacia y #io!umica, %dontologa, etc. Es por esta ra&n !ue me di a la tarea de elaborar un manual !ue satisfaga las necesidades del estudiantado, !uienes deben complementar el aspecto terico, llevado en el aula, con la actividad cientfica desarrollada en el laboratorio de tal forma !ue se facilite el trabajo ordenado y uniforme en todos los niveles de pre grado. El Manual consta de diecioc"o prcticas y fue elaborado tomando en cuenta las referencias bibliogrficas !ue se mencionan en los diferentes currculos acadmicos de la 'niversidad (acional de )*an +us ,on&aga- de .ca, para la asignatura de Microbiologa. +a elaboracin del Manual se reali& en varias etapas mediante la recopilacin de prcticas. /ada prctica inicia con el ttulo en la parte central el cual se seleccion de acuerdo a la dosificacin del programa por semana. El objetivo "ace referencia al aspecto significativo !ue se pretende !ue los alumnos logren al final del e0perimento. +a introduccin es la parte terica de cada una de las prcticas, fue tomada de diversas referencias bibliogrficas. En la parte e0perimental el procedimiento se tom de diversos manuales de otras 'niversidades y de la misma 'niversidad de .ca. El cuestionario en el !ue el alumno demuestra su aprovec"amiento logrado al final de la secuencia de aprendi&aje se elabor basado en el aspecto introductorio y resultados e0perimentales !ue se esperan de cada prctica. s mismo, se complementa con observaciones !ue el alumno reali&ar mediante dibujos o es!uemas y finali&ar con conclusiones personales del mismo. Los autores

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INDICE DE PRCTICAS Recomendaciones Generales N Prctica N ! N "! N #! N $! N %! N &! N '! N (! N )! N *! N ! N "! N #! N $! N %! N &! N '! N (! +ibliogra,-a Nombre de la prctica 3econocimiento de materiales y e!uipos de +aboratorio Manejo del microscopio y el mundo microbiano /oloraciones bacterianas7 /oloracin ,ram /oloracin cido alco"ol resistente Medios de cultivo Estudio de "ongos /ontrol de los microorganismos7 agentes fsicos /ontrol de los microorganismos7 El antibiograma islamiento de bacterias patgenas de "eridas islamiento de patgenos de infeccin urinaria Estudio serolgico7 ntgenos febriles El s"oc> anafilctico Estudio parasitolgico Proto&oarios intestinales Proto&oarios "emticos, tisulares y urogenitales Estudio parasitolgico7 ?rematodos Estudio parasitolgico7 /estodos Estudio parasitolgico7 (ematodos Pgina 45 46 28 29 2: ;8 ;< 8= 86 54 5= 56 =8 =9 =6 95 9: <8 <<

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REC./ENDACI.NES GENERA0ES 2. ;. 8. 5. =. 9. <. :. 6. 24. 22. 2;. 28. 25. 2=. 29. +a "ora de entrada al laboratorio tendr 24 minutos de tolerancia, despus de este tiempo, no se te permitir el acceso a dic"o ambiente. l entrar al laboratorio, debers ponerte la bata y abotonarla completamente, slo podrs !uitrtela al salir de ste. +as mesas debern estar siempre limpias y desocupadas, tu moc"ila debe ser colocada en el lugar indicado por el profesor. ?erminantemente pro"ibido comer ni fumar en el laboratorio, no debes introducirte ning@n objeto a la boca. Para las seAoritas, recgete el pelo para efectuar el trabajo de laboratorio. +impia y desinfecta el rea de trabajo antes y despus de usarlo. (o pasees entre las mesas del laboratorio, el trabajo debes efectuarlo sentado y en tu e!uipo de trabajo. Bas antes de iniciar la prctica lee cuidadosamente !ue es lo !ue se va a reali&ar, si no entiendes pregunta al profesor. *i "ay necesidad de llevar material biolgico para la reali&acin de la prctica, es necesario !ue lo consigas, de lo contrario la prctica se suspender para todo el e!uipo. .nforma al profesor de cual!uier accidente !ue ocurra. En caso de derramar material !ue contenga microorganismos, c@brelo con fenol y deja actuar die& minutos. visa al profesor. ?odo el material !ue vas a incubar o desec"ar, debes colocarlo en el sitio indicado por el profesor. Eti!ueta todo el material !ue vas a incubar con los siguientes datos7 e!uipo, grupo, fec"a y nombre del material Bespus de la incubacin es necesario la esterili&acin del material para eliminar microorganismos !ue pudieran "acernos daAo a nuestra salud. +vate las manos con agua y jabn antes de salir del laboratorio. Es obligacin de cada e!uipo entregar todo el material limpio.

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PRACTICA N1 * REC.N.CI/IENT. DE /ATERIA0ES 2 E34IP.S DE 0A+.RAT.RI. .+5ETI6. /ada estudiante del curso de Microbiologa debe identificar y reconocer los materiales de laboratorio. /ATERIA0ES! 7 T4+.S DE ENSA2.! *on de vidrio, es empleado para conservar microorganismos en medios de cultivo l!uido o slido. Cay de diferentes formas y capacidades, con borde o sin borde pero, lo !ue ms importa es su calidad termo resistente, es decir, su resistencia al calentamiento y a los cambios bruscos de temperatura.

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P0ACAS PETRI! *on materiales de vidrio !ue se utili&a para aislar microorganismos provenientes de diversas fuentes infecciosas.

#7

PIPETAS! *on materiales de vidrio destinados a medir vol@menes pe!ueAos de medios de cultivo l!uidos u otras sustancias. Cay graduadas de 4.2 ml "asta 24 ml.

Pipetas graduadas con jeringa "ermticamente esmerilada

$7

/ATRA8 DE ER0EN/E2ER! *on recipientes de vidrio en forma cnica !ue disponen una escala graduada y permiten estimar o apro0imar vol@menes de l!uidos. *e emplea para disolver medios de cultivos y conservarlosD los "ay de varias capacidades de ;= ml "asta = litros.

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%7

+A0.NES! *on recipientes de vidrio de fondo plano Ematra& $lorenciaF, !ue sirve mayormente como contenedor, tiene similar funcin !ue el matra& de Erlenmeyer

&7

/ATRA8 DE 9ITASAT.! *on recipientes de vidrio, de forma cnica, similar al Erlenmeyer, con la diferencia !ue en la parte del cuello posee un orificio lateral de salida. *e emplea para reali&ar filtraciones al vaco.

'7

PR.+ETAS! *on recipientes cilndricos graduados de vidrio grueso, con pico y con base para poderlos parar. *e emplean para medir vol@menes de l!uidos. Cay de diferentes vol@menes, de = ml a ; litros

(7

+AG4ETA! +lamadas tambin agitadores. *on varillas slidas de vidrio. El largo del agitador est determinado por el tamaAo y la forma del recipiente en !ue se emplea, as en vasos de precipitados. *irven para "omogeni&ar muestras y transportar pe!ueAas cantidades de ellaD agitar y trasvasar l!uidosD desprender partculas de precipitados ad"eridos al recipiente !ue no se pueden sacar.

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)7

+EA9ER! *on vasos de vidrio !ue se utili&an para efectuar me&clas y titulaciones. Cay de diferentes vol@menes, de ;= ml a =44 ml

*7

5ERINGAS 2 AG45AS :IP.DER/ICAS! son materiales peligrosos !ue necesitan manejarse con precaucin para evitar la inyeccin accidental o a generacin de aerosoles durante las inoculaciones. ,eneralmente, la utili&acin de las mismas debe restringirse a los procedimientos para los !ue no e0iste una alternativa. +as agujas no deben doblarse, romperse, guardarse en la funda, o !uitarlas de la jeringa despus de su uso.

P.RTA 2 C4+RE .+5ET.S! *on de vidrio. El porta objetos sirve para montar muestras de microorganismos, es ms grande y ms grueso !ue el cubre objetos, ya !ue ste sirve para cubrir las muestras montadas y permitir una mejor visuali&acin.

"7

PIPETAS PARA REC4ENT. DE G0.+40.S R.5.S! Es graduada a una dilucin de 2G;44. Es de vidrio con una cpsula en la parte sub terminal !ue permite almacenar el l!uido diluyente en la sangre para una me&cla adecuada.

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#7

CA/PANA DE +RE;ER! *on de vidrio pire0, grueso y tienen mayor resistencia mecnica y trmica. *e usa para mantener una ambiente carente de o0geno cuando se trabajan con bacterias e0igentes. El borde esmerilado debe estar ligeramente cubierto con vaselina blanca o alguna grasa blanca especial, para conseguir un cierre "ermtico al aire.

$7

ASA DE 9.00E! /onsiste de dos pie&as7 el mango de Holle y el asa, de bronce cromado y mango con ba>elita. *on de un material ino0idable. *irve para tomar muestras y poder reali&ar el cultivo en las placas petri.

%7

/EC:ER. DE +4NSEN! *on aparatos para mantener un ambiente de esterilidad cuando se trabajan con siembra de microorganismos.

&7

TRIP.DE! Es de metal, construido de un anillo circular apoyado en tres patas e!uidistantes, !ue son varilla delgadas. *e utili&an para colocar sobre el la malla de asbesto en una operacin de calentamiento de cual!uier matraces con medios de cultivo.

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'7

GRADI00A! Es de metal o de madera. Es una especie de escalerilla porttil y sencilla. *irve para portar a los tubos de ensayo durante un trabajo con stos.

(7

G.TER.! *on tubos de vidrio cortos y delgados, donde en uno de los e0tremos se adapta una perilla o bombilla de goma y en el otro e0tremo se encuentra estrangulado. *e emplea para la adicin de pe!ueAos vol@menes EgotasF de colorantes en tinciones.

7 "7

E34IP.S A4T.C0A6E! Es un e!uipo cuyo uso se destina a la esterili&acin de material para laboratorio. En la parte superior "ay un termmetro y un barmetro !ue funciona7 esterili&acin por aumento de la temperatura a altas presiones. INC4+AD.RA! *irve para mantener en la temperatura adecuada al cultivo de bacterias. Mantiene a una temperatura de 8< a 85 I/

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PRACTICA N *" /ANE5. DE0 /ICR.SCPI. 2 E0 /4ND. /ICR.+IAN. .+5ETI6. El alumno reconocer el microscopio compuesto, identificar cada una de sus partes y lo manejar correctamente observando la presencia de microorganismos en muestras biolgicas /ATERIA0 Microscopio compuesto Porta y cubre objetos Palillo Cisopo gua estancada INTR.D4CCI.N El microscopio es el instrumento ms frecuentemente utili&ado y el ms @til en un laboratorio de Microbiologa, proporciona la amplificacin o agrandamiento !ue nos permite ver organismos y estructuras invisibles a simple vista. +os microscopios permiten una amplia gama de amplificaciones, desde cien veces a cientos de miles de veces. +as dos categoras de microscopios disponibles son los microscopios pticos y los microscopios electrnicos. +os microscopios pticos utili&an un sistema de lentes pticas y comprenden los microscopios de campo claro, campo oscuro, fluorescencia y contraste de fases. +os microscopios electrnicos emplean "aces de electrones en lugar de ondas de lu& para producir una imagen ampliada. /ANE5. 2 4S. DE0 /ICR.SC.PI. PTIC. /olocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y bajar la platina completamente. *i el microscopio se recogi correctamente en el uso anterior, ya debera estar en esas condiciones. /olocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las pin&as metlicas. /omen&ar la observacin con el objetivo de 50 Eya est en posicinF o colocar el de 24 aumentos E240F si la preparacin es de bacterias. Para reali&ar el enfo!ue7 cercar al m0imo la lente del objetivo a la preparacin, empleando el tornillo macromtrico. Esto debe "acerse mirando directamente y no a travs del ocular, ya !ue se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparacin pudindose daAar alguno de ellos o ambos. Mirando, a"ora s, a travs de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparacin con el macromtrico y, cuando se observe algo ntido la muestra, girar el micromtrico "asta obtener un enfo!ue fino. Pasar al siguiente objetivo. +a imagen debera estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micromtrico para lograr el enfo!ue fino. *i al cambiar de objetivo se perdi por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operacin desde el paso 8. El objetivo de 540 enfoca a muy poca distancia de la preparacin y por ello es fcil !ue ocurran dos tipos de percances7 incrustarlo en la preparacin si se descuidan las precauciones anteriores y manc"arlo con aceite de inmersin si se observa una preparacin !ue ya se enfoc con el objetivo de inmersin.

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PR.CEDI/IENT. T<cnicas de monta=e >?medo +a gota pendiente o las preparaciones "@medas permiten e0aminar organismos vivos suspendidos en un fluido. +as preparaciones "@medas se "acen colocando una gota del fluido !ue contiene el organismo sobre una lmina de vidrio y cubrindola con una fina pie&a de vidrio EcubreobjetosF7 para reducir la tasa de evaporacin y eliminar corrientes de aire, generalmente se rodea la gota con vaselina. /uando se e0aminan las preparaciones "@medas por microscopa de campo claro, es importante ajustar la fuente de lu& de forma adecuada. Es posible disminuir la intensidad de la lu& mediante la utili&acin de filtros especiales. 'tili&ada para estudiar la movilidad de los microorganismos En el centro de un portaobjetos coloca una gota de agua estancada /on una laminilla cubre cuidadosamente dic"a gota, sin formar burbujas de aire E0amina con objetivos de 24J y 54J. C4ESTI.NARI.! 2. KLu es poder de resolucinM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN K/on !u finalidad se utili&a el microscopio compuestoM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN K/ual es la importancia !ue tiene el diafragma en el microscopioM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN KLu diferencias "ay entre el microscopio ptico y electrnicoM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN KLue importancia tiene el estudiar y observar los microorganismos en muestras biolgicas frescasM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN Escribe el nombre de cada una de las partes del microscopio compuesto

;. 8. 5. =.

9.

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.+SER6ACI.NES Bibuja lo observado en los diferentes objetivos para cada muestra !ue preparaste durante el e0perimento.

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C.NC04SI.NES7 NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN Prctica N *" (ombre del lumno7NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN ,rupoNNNNNNNNNNN

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Prof. de +aboratorio NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN /alif7NNNNNNNNNNN

PRCTICA N *# C.0.RACI.NES +ACTERIANAS! C.0.RACIN DE GRA/ .+5ETI6. El alumno aplicar una tcnica de coloracin diferencial para la identificacin de bacterias ,ram positivas y ,ram negativas. /ATERIA0 sa de Holle Microscopio Porta objetos /ultivo de Staphylococcus aureus /ultivos de Escherichia coli /ultivo de Candida albicans ceite de inmersin /olorante cristal violeta *olucin decolorante alco"ol acetona /olorante safranina +ugol para ,ram INTR.D4CCIN TINCI.N DE GRA/ ?incin empleada en microbiologa para la visuali&acin de bacterias en muestras clnicas. ?ambin se emplea como primer paso en la diferenciacin bacteriana. El e0amen con microscopio ptico de preparacin con tincin de ,ram se emplea de rutina para determinar la forma de las bacterias. +as formas comunes son cocos, bacilos y formas espiraladas +as bacterias pueden diferenciarse con esta tincin en dos grupos. +os microorganismos ,ram positivos se tiAen de a&ul, mientras !ue apro0imadamente un tercio de los cocos, la mitad de los bacilos y todos los organismos espiralados se tiAen de rojo y se dice !ue son ,ram negativos. +as aplicaciones ms comunes de la coloracin de ,ram son las siguientes7 +a presencia de cocos ,ram positivos agrupados sugiere estafilococosD en cadenas sugiere estreptococosD en forma de lanceta a los diplococos +a presencia de diplococos ,ram negativos son caractersticas de especies de (eisseria +os bacilos ,ram positivos grandes sugieren especies de #acillus o /lostridium, los bacilos ,ram positivos pe!ueAos sugieren especies de +isteria o una de las corineiformes EdifteroidesF +os bacilos ,ram negativos son las bacterias ms comunes "alladas en los laboratorios clnicos e incluyen a Enterobacteriaceae, bacilos no fermentados y especies de Caemop"ilus. El valor diagnstico de esta tincin es variableD normalmente permite una buena orientacin al microbilogo para seleccionar las tcnicas de cultivo ms adecuadas y tambin tiene valor en orientar "acia un diagnstico etiolgico, en especial para instaurar un tratamiento inicial. 1 28 1

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PR.CEDI/IENT. REA0I8ACIN DE0 @R.TIS /oloca una pe!ueAa gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo !ue se puede usar el asa de siembra, ya !ue en el e0tremo curvo de su filamento !ueda retenida una mnima gota de agua, !ue resulta suficiente. $lamea el asa de siembra y toma en condiciones aspticas una pe!ueAa cantidad del cultivo bacteriano y transfirelo a la gota de agua. 3emueve la me&cla con el asa de siembra "asta formar una suspensin "omognea !ue !uede bastante e0tendida para facilitar su secado. *i la muestra se toma de un cultivo en medio l!uido, no es necesario !ue realices los dos primeros pasos ya !ue basta con colocar y e0tender una gota de la suspensin bacteriana, !ue se toma con el asa de siembra, directamente sobre el portaobjetos. @I5ACIN cerca la lmina a la llama del mec"ero para !ue la muestra se se!ue en forma paulatina. En este caso "ay !ue tener muc"a precaucin de no calentar demasiado la lmina, pues las clulas pueden deformarse o romperse. C.0.RACIN ?iAe con cristal violeta, 2minuto. +ava con abundante agua el e0ceso de colorante. /ubre con +ugol, 2 minuto. +ava con agua el e0ceso de +ugol. Becolora con alco"ol1acetona o simplemente con alco"ol "asta !ue la preparacin deje de perder color E84segF +ava con abundante agua para eliminar el resto de disolvente. ?iAe con safranina 2 minuto. +ava con agua para eliminar el colorante de contraste. *eca la preparacin. E0amina al microscopio con aceite de inmersin y fijndote sobre todo en el color de cada preparacin.

C4ESTI.NARI. 2. KLu es un coloranteM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 1 25 1

Manual de Prcticas de Microbiologa ;. 8. 5.1

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K/on !u finalidad se fija la muestra de microorganismos en el porta objetosM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN KLu tipos de coloraciones conoces, describe brevemente NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN KPor !u es necesario emplear aceite de inmersin para la observacin de los microorganismosM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN Be los reactivos !ue utili&aste para la tincin de ,ram, KEl cristal violeta a !u estructuras de la bacteria coloreaM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN KPor !u se dice !ue la coloracin ,ram es de orientacinM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN Menciona tres bacterias ,ram positivas y escribe la enfermedad !ue causa cada una de ellas NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN Menciona tres bacterias ,ram negativas y escribe la enfermedad !ue causa cada una de ellas NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN

.+SER6ACI.NES! 3eali&a los dibujos y es!uemas correspondientes a las tinciones reali&adas

C.NC04SI.NES! NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN Prctica N *#

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Manual de Prcticas de Microbiologa (ombre del lumno7NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN ,rupoNNNNNN Profesor de +aboratorioNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN /alif7NNNNNN

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PRCTICA N *$ C.0.RACIN CID.AA0C.:.0 RESISTENTE .+5ETI6.! El alumno aplicar las tcnicas de coloracin de microorganismos cido1 resistentes para diferenciarlos e identificarlos, en base a sus propiedades morfolgicas /ATERIA0! Esputo de tuberculoso procesado en autoclave. $ucsina fenicada de Oie"l1 (eelsen &ul de metileno lco"ol acidulado $enol al =P INTR.D4CCIN +os microorganismos pertenecientes al gnero Mycobacterium se caracteri&an por tener una pared celular completamente diferente a las restantes bacterias. +a pared de las Mycobacterias posee un alto contenido de lpidos Ecidos miclicosF, !ue la "ace impermeable a los agentes "idroflicos. +as Mycobacterias son teAidas adecuadamente por el mtodo de Oie"l1(eelsen E?incin Qcido13pida o cid1$ast *tainF !ue utili&a como solucin decolorante una me&cla de etanol y cido clor"drico. *on bacilos cido1alco"ol resistentes E# 3F por lo !ue la tincin de Oie"l1(eelsen es @til para la coloracin de estos microorganismos obtenidos de muestras clnicas o de cultivo. /on esta tincin, los bacilos aparecen de color rojo brillante sobre un fondo a&ul. +os bacilos tuberculosos son difciles de teAir con la tincin de ,ram, y se observan como bacilos ,ram positivos con tincin irregular. Estos microorganismos una ve& coloreados son resistentes a la decoloracin cido1alco"lica y por eso se denominan #acilos Qcido lco"ol 3esistentes E# 3F El gnero Mycobacterium incluye ms de 244 especies !ue pueden clasificarse en seis grupos desde el punto de vista bacteriolgico, pero con fines didcticos se dividen en tres apartados7 /omplejo tuberculosis. .ncluye las especies M. tuberculosis, Mycobacterium bovis y Mycobacterium africanum, productoras todas ellas de tuberculosis. *e incluye tambin Mycobacterium microti, productor de tuberculosis en rata. /omplejo lepra, en el !ue se incluyen las especies M. leprae, productor de la lepra "umana y Mycobacterium lepraemurium, !ue produce lepra en roedores. El Mycobacterium leprae !ue es un parsito intracelular obligado !ue se multiplica lentamente en clulas fagocitarias mononucleares como los "istiocitos de la piel y en las clulas de *"Ran de los nervios %tras Micobacterias, no comprendidas en los dos grupos anteriores, slo algunas de ellas suelen ser patgenas, otras pueden ser patgenas oportunistas y finalmente otras suelen ser saprofitas. Producen las denominadas micobacteriosis las infecciones producidas por M. avium, M. ansa ii, M. fortuitum y M. chelonei son consideradas oportunistas y no tuberculosas PR.CEDI/IENT. Prepara un frotis del esputo, "aciendo un delgado e0tendido del material para su estudio y deja !ue se se!ue al aire. /ubre la preparacin con fucsina fenicada

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/alienta la preparacin en un mec"ero #unsen durante = minutos, no debe "ervir. *i se evapora, aAade ms fucsina para !ue no se se!ue en ning@n momento. +ava con agua el resto de colorante. Becolora con cido1alco"ol, "asta !ue ad!uiera un tenue color rosa. +ava con agua para !ue no prosiga la decoloracin. ?iAe con a&ul de metileno por 2 minuto. +ava con agua el resto de colorante. *eca la preparacin al medio ambiente. E0amina al microscopio con objetivo de inmersin por 244 J EaceiteF +a tincin es positiva para bacilos rojos contra un fondo a&ul claro C4ESTI.NARI. 2. Bescribe las caractersticas morfolgicas del bacilo de la tuberculosis NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN ;. KPor !u el bacilo de Hoc" tiene muc"a resistencia a la desecacinM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 8. K/ul es el protocolo de tratamiento para un paciente con ?#/M NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 5. KEn !u casos el mdico solicita el cultivo de esputo para el diagnstico de una posible ?#/M NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN K/mo se "ace el reporte de la coloracin Oie"l 1 (eelsenM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN

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.+SER6ACI.NES! Ca& un es!uema de los pasos !ue reali&aste durante la reali&acin de la prctica, as como el dibujo de las bacterias bacilares observadas en el microscopio.

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C.NC04SI.NES! NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN

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NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN Prctica N *$ (ombre del lumno7NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN ,rupoNNNNNN Profesor de +aboratorioNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN /alif7NNNNNN

PRACTICA N *% /EDI.S DE C40TI6. .+5ETI6. /onocer los medios de cultivo y la finalidad !ue cumplen. plicar tcnicas de siembre y observar la variedad de microorganismos presentes en el medio ambiente. /ATERIA0 Placas con gar nutritivo Placas con gar Mac /on>ey Placas con gar Manitol *alado ; Mec"eros caja de "isopos estriles sin abrir toallas de papel cinta ad"esiva marcador permanente o lpi& de cera un desinfectante con <4P de solucin de alco"ol, 24P de una solucin blan!ueadora, jabn l!uido E0tran o al>o0. INTR.D4CCIN 'no de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el !ue crecen los microorganismos es el /edio de CBltiCo. Para !ue las bacterias cre&can adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son7 temperatura, grado de "umedad y presin de o0geno adecuado, as como un grado correcto de acide& o alcalinidad. 'n medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar e0ento de todo microorganismo contaminante. +a mayora de las bacterias patgenas re!uieren nutrientes complejos similares en composicin a los l!uidos orgnicos del cuerpo "umano. Por eso, la base de muc"os medios de cultivo es una infusin de e0tractos de carne y Peptona a la !ue se aAadirn otros ingredientes. El gar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de medios de cultivo. En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enri!uecimiento como carbo"idratos, suero, sangre completa, bilis, etc. +os carbo"idratos se adicionan por dos motivos fundamentales7 para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin de los microorganismos !ue ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se aAaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes. C0ASI@ICACIN DE 0.S /EDI.S DE C40TI6.! AD P.R S4 ASPECT. @ISIC. Medios l!uidos. *e emplean fundamentalmente para7

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/ultivar los microorganismos y obtener grandes cantidades de los mismos. +a multiplicacin bacteriana en los medios de cultivos l!uidos se manifiesta generalmente por el enturbiamiento de steD Estimular y promover la seleccin de alg@n o algunos microorganismos e impedir !ue otros se multipli!uen. .dentificar al microorganismo estudiado mediante pruebas bio!umicas. Medios semislidos.1 *e utili&an para identificaciones bio!umicas y averiguar si el germen estudiado es mvil. +os medios semislidos tienen una consistencia blanda. E4.= gramos de agar por 244 mlF Medios slidos.1 *e utili&an para obtener colonias aisladas de microorganismos. En los medios de cultivos slidos la multiplicacin bacteriana se manifiesta por una formacin macroscpica denominada colonia bacteriana, !ue es el resultado de la multiplicacin de una sola clula bacteriana. E; gramos por 244 mlF +D P.R S4 @4NCI.N I7 /edios de cBltiCos comBnes o bsicos7 *e caracteri&an por !ue el material nutritivo, permite el crecimiento de diferentes especies de bacterias, constituyen la base para la preparacin de otros medios. /omo ejemplo pueden citarse el caldo nutritivo y el agar nutritivo. II7 /edios de cBltiCos especiales. Entre estos se encuentran7 aF Medios enri!uecidos. En general son los mismos medios bsicos a los !ue se les agrega una sustancia enri!uecedora como sangre, suero, etc. El uso est orientado especialmente a obtener buen desarrollo de bacterias e0igentes, se utili&an en primera instancia en el aislamiento bacteriano de productos patolgicos. +os medios de este tipo de uso ms frecuente son7 gar sangre, gar c"ocolate. bF Medios selectivos. *on medios !ue contienen sustancias !ue impiden el crecimiento de algunas especies microbianas y permiten el desarrollo de otras. *e incluyen en este grupo el agar cristal violeta para el aislamiento de bacterias ,ramE1F y el agar telurito de potasio para el aislamiento de bacterias ,ramESF. cF Medios de cultivos diferenciales. *e emplean para demostrar alguna propiedad bio!umica de la bacteria como degradacin de carbo"idratos, protenas, etc., contienen indicadores de cido base, redo0 o sustancias !ue detectan cambios en el medio o en las caractersticas tpicas de las colonias. Entre los de uso ms corriente se encuentran7 gar fierro1triple1a&@car E?*. agarF Medio de *.M. dF Medios de transporte. Estos medios impiden !ue se altere la proporcin original de la flora microbiana en los especimenes, es decir, !ue no permiten la multiplicacin de las bacterias mantenindolos viables. T<cnicas de siembra +a poblacin microbiana e0istente en nuestro entorno es grande y compleja. /ientos de especies microbianas "abitan normalmente en distintas partes de nuestro cuerpo, incluidas la boca, el tracto intestinal y la piel. l nacer, los microbios inmediatamente empie&an a coloni&ar nuestros cuerpos, as como a casi todos los objetos del mundo. Ellos flotan alrededor "asta !ue entran en contacto con una superficie !ue ofre&ca comida y resguardo. *e encuentran ms frecuentemente en la oscuridad, en objetos "@medos !ue a menudo entran en contacto con la comida, la suciedad o la vegetacin. +as superficies del baAo, los cepillos para el cabello, los refrigeradores, los lavaplatos y las tablas de cocina tienen a menudo muc"os microbios. +as manijas y las paredes tienen menos por!ue son pobres en nutrientes y secos. 'n estudio adecuado de microorganismos !ue "ay en este "bitat re!uiere tcnicas !ue permitan conocer y ordenar la compleja poblacin mi0ta o cultivo mi0to, separndole en sus distintas especies como cultivos puros. 'n cultivo puro consta de una poblacin de clulas derivadas todas ellas de una clula parental. El material !ue

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se inocula sobre el medio se denomina inculo mediante alguna tcnica. Burante la incubacin a 8<I/, las clulas microbianas individuales se reproducen tan rpidamente !ue en un lapso de 2: a ;5 "oras producen colonias. *i dos clulas microbianas procedentes del inculo original !uedan muy cerca una de otra sobre el medio de gar, la masa de clulas observables no ser un cultivo puro. +a mayora de los microbios en nuestro cuerpo y otras superficies son inofensivas, pero algunos son patgenos o causan enfermedad. +a siembra de microorganismos puede reali&arse en medios l!uidos o en medios slidos. En el primer caso, para la inoculacin se utili&ar asa estril si el medio de partida es slido, o pipeta estril EPasteur o graduadaF si es l!uido. En el segundo caso, cuando se parte de otro medio slido, se utili&a el asa de platino normal para siembra en placa o tubo inclinado y el asa recta para siembra en picadura en tubos rectos o, en general, cuando se !uiere introducir el microorganismo en el seno del medio de cultivo slidoD cuando el medio de partida es l!uido, se puede pasar al medio slido con un asa de platino calibrada, con la !ue se e0tiende la muestra directamente, o con pipeta, depositando la muestra !ue luego se e0tender sobre la placa con un asa de Bigrals>y o con una varilla doblada. PR.CEDI/IENT. En esta actividad escogers un fomite Ecual!uier objeto inanimado !ue pueda causar enfermedad en los organismos por contener microorganismos como7 la manija, el marco, el control remoto de la televisin, una monedaF. Este fomite ayudar a confirmar la presencia de microbios y los efectos de un desinfectante por medio del crecimiento de colonias de bacterias en un medio de cultivo en placas de Petri. 2. *i tienes el cabello largo, recgetelo para mantenerlo lejos de las placas de Petri cuando ests trabajando. +ava tus manos. +impia t@ rea de trabajo frotando suavemente, con la solucin desinfectante en una toalla de papel. *aca tus placas de Petri pero no las abras "asta !ue se te indi!ue. ;. Escoge un objeto del saln de laboratorio Ela manija, el marco, el control remoto de la televisin, una moneda, etc.F. ?oma una placa de Petri sin abrir y con t@ lpi& de cera o marcador, divide la base de la caja en cuatro secciones iguales. Escribe el nombre del objeto al otro lado y designa las secciones de 2 "asta 5. bre la caja de "isopos de algodn y escoge uno con cuidado para no tocar la punta. +impia tu objeto escogido con todos los lados de la punta del "isopo voltendolo y retorciendo el "isopo a medida !ue lo mueves por la superficie del objeto. 8. "ora abre la tapa de la placa y sBaCemente "a& cuatro siembras sobre la superficie del medio de cultivo como se muestra en la ilustracin, empe&ando en la seccin designada T2T y continuando en el orden de las secciones, de manera !ue la @ltima siembra est en la seccin 5. Presiona firme pero suavemente y no repitas las siembras anteriores. ?us siembras slo deben dejar una impresin muy ligera en el gar. /ierra la placa. (o cubras la caja con cinta o no podrs verla bien. 5. Bivide una segunda caja de Petri en 5 secciones numeradas de 2 "asta 5 y desgnala EControl7F +impia la mitad del objeto !ue escogiste anteriormente con una toalla de papel "umedecida con agBa, solo frtala un par de vecesG no la restriegBes. /on un nuevo "isopo estril, toma muestra del rea limpiada. bre la tapa de la segunda placa y "a& *' UEME(?E 5 siembras en la superficie, siguiendo el orden de las secciones numeradas como lo "iciste previamente. /ierra la placa.

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Bivide la tercera placa de Petri en 5 secciones numeradas y desgnalas con el nombre del desin,ectante !ue escogiste Epor ejemplo Tblan!ueadorTF. 'sa el desinfectante escogido para limpiar la otra mitad del objeto !ue trabajaste antes. /on un nuevo "isopo estril, toma muestra del rea. 3epite el proceso de sembrar la placa y cirrala. Esterili&a los "isopos usados con desinfectante y descrtalos. Pon las placas en un lugar apartado e inc@balas a 8<I/ por ;5 "oras. +impia tu rea de trabajo con la solucin desinfectante y lava tus manos. 3epite todo el e0perimento utili&ando placas con cultivo de gar sangre slo !ue a"ora selecciona otro @omite !ue no "ayas empleado Bespus de !ue "ayan pasado ;5 "oras, mira las placas de Petri iniciales. (o la abras. /rea una tabla !ue compare las placas sembradas antes y despus de limpiar el objeto Emira la tabla de ejemploF. seg@rate de indicar si los microbios crecieron en cada siembra. Nota! el pro,esor sBperCisor debe >acer este paso pre,eriblemente /uidadosamente abre las placas de Petri en un lavadero e in@ndalas con blan!ueador o alco"ol sin diluir. Bjalas por una "ora y enjugalas completamenteD colcalas en una bolsa plstica, amrrala y descrtala. seg@rate de no tocar la superficie de las placas cuando las abras y lava tus manos cuidadosamente despus de manipularlas. +impia t@ rea de trabajo con la solucin desinfectante.

C4ESTI.NARI. 2. KLu es metabolismo bacterianoM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN ;. KLu finalidad tiene utili&ar medios de cultivo slidosM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 8. Escribe el nombre de = medios de cultivo !ue se emplean en el laboratorio de microbiologa NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 5. KPor !u la base de muc"os medios de cultivo es una infusin de e0tractos de carne y peptonaM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN =. KLu medios de cultivo se emplean para aislar bacterias causantes de meningitis, tifoidea y neumonaM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 9. K/mo podemos controlar la contaminacin microbianaM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN <. /ompleta en la siguiente tabla anotando H en los espacios correspondientes a las divisiones reali&adas en donde "ayan crecido los microorganismos7 F MEB.%* BE /'+?.U% /%( , 3 ('?3.?.U% Placa 2 *iembra 2 ; 8 5 Placa ; 2 ; 8 5 Placa 8 2 ; 8 5

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/recimiento

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MEB.%* BE /'+?.U% /%( , 3 * (,3E Placa 2 *iembra /recimiento 2 ; 8 5 Placa ; 2 ; 8 5 Placa 8 2 ; 8 5

.+SER6ACI.NES. Bibuja todos los pasos empleados en el sembrado de las placas de petri y los resultados de las colonias bacterianas !ue crecieron.

C.NC04SI.NES! NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN

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Prctica N *% (ombre del lumno7NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN ,rupoNNNNNN Profesor de +aboratorioNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN /alif7NNNNNNN

PRCTICA N *& EST4DI. DE :.NG.S .+5ETI6.7 islar "ongos ambientales de un establecimiento de salud mediante el mtodo de e0posicin en placa 3eali&ar preparaciones en fresco y en cinta ad"esiva de distintas especies de mo"os. %bservar la morfologa de los "ongos y distinguir entre "ifas septadas y no septadas y entre distintos tipos de esporas y las estructuras !ue las originan /ATERIA0 mbientes de un establecimiento de salud 5 placas con medio de cultivo estril de gar *abouraud +upas 2 varilla de vidrio doblada sa bacteriolgica lco"ol al <4P Microscopio Porta y cubreobjetos E;;0;; mmF limpios y desengrasados con alco"ol *olucin de lactofenol al a&ul algodn /inta ad"esiva transparente INTR.D4CCI.N +os "ongos no son plantas ni animales, aun!ue se pare&can en algunas de sus caractersticas tanto a las unas como a los otros. las plantas, por ser organismos sedentarios !ue se encuentran fijos a un sustrato y, mientras estn vivos, no cesan de crecer. los animales, pues, aun!ue las clulas de los "ongos poseen pared como las de las plantas, las paredes celulares f@ngicas son ricas en !uitina, la misma sustancia !ue "ace duro el es!ueleto e0terno de los insectos. En realidad, los organismos !ue conocemos como "ongos tienen diferentes orgenes en el rbol de la vida, ra&n por la cual conforman el reino de los "ongos E!ungi o EumycotaF. *e estima !ue e0iste ms de un milln de especies de "ongos en el planeta, pero tan slo unas <4,444 de ellas "an sido descritas por los especialistas, lo cual "ace evidente la necesidad de contar con ms cientficos EmiclogosF !ue estudien estos organismos. Mientras tanto, muc"as especies de "ongos se "an e0tinguido y otras se encuentran amena&adas en todo el mundo. +os "ongos tienen distintos "bitos de vida. +os "ongos saprfitos, es decir descomponedores de materia orgnica, cumplen una funcin ecolgica de la mayor relevancia pues garanti&an el reciclaje de la materia muerta y, por lo tanto, la recirculacin de sustancias nutritivas en los ecosistemas. +os "ongos parsitos, !ue

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viven sobre o dentro de otros seres vivos, obtienen su alimento de stos y llegan a producir enfermedad en su "ospedero. +os "ongos simbiontes !ue se asocian de manera mutualista con otros organismos constituyen alian&as vivas de beneficio mutuo como por ejemplo los l!uenes Easociacin de "ongo y algaF y las micorri&as Easociacin de "ongo y ra& de una plantaF, simbiosis estas de gran importancia en la naturale&a en procesos de coloni&acin de "bitats y de circulacin de nutrientes. Besde la perspectiva econmica, los "ongos ofrecen m@ltiples servicios, pues se utili&an como alimentos, levaduras de la masa de pan, fermentadores en la produccin de vino y cerve&a, en la maduracin de !uesos y en el control biolgico de plagas agrcolas. dems, como fuentes de sustancias !ue por su actividad biolgica pueden ser de enorme utilidad en medicina y en la bioindustria Eej. antibiticosF y como agentes para estimular el desarrollo de las plantas E"ongos formadores de micorri&aF. *in embargo, tambin son daAinos cuando act@an como parsitos de plantas y animales o cuando estropean estructuras de madera, alimentos almacenados, libros y "asta obras de arte, amn de ser peligrosos si, por desconocimiento, se consumen a!uellos !ue tienen principios t0icos o alucingenos. PR.CEDI/IENT. AIS0A/IENT. DE :.NG.S A/+IENTA0ES Bebes tener tus placas de petri con gar *abouraud a la !ue se aAadi antibitico para evitar el crecimiento de microorganismos diferentes a los "ongos /on la compaAa de tu profesor supervisor, acude a un ambiente asistencial del establecimiento de salud. /uando te encuentres en dic"o ambiente, saca tu placa petri y colcala sobre la superficie de una mesa +uego, abre la tapa de placa y djala en e0posicin por espacio de ; minutos ?ranscurrido el tiempo, tpala nuevamente y rotula las placas de petri el nombre del servicio asistencial Ca& el mismo procedimiento con otras placas y en diferentes servicios del establecimiento de salud, anotando siempre el nombre del ambiente +uego, traslada tus placas al laboratorio y djalas incubando a temperatura de 84I/ por 8 o ms das %bserva el crecimiento de colonias de "ongos EST4DI. /ICR.SCPIC. PreparaciIn en cinta ad>esiCa T<cnica /oloca sobre un portaobjetos una gota de solucin de lactofenol no demasiado grande. /orta un tro&o de cinta ad"esiva transparente de apro0imadamente ;cm. ?oca con el lado ad"esivo de la cinta la superficie de la fruta o el pan enmo"ecido o el borde de una colonia de "ongo de un cultivo. En la &ona central de una colonia puede "aber una e0cesiva concentracin de esporas. Pega la cinta ad"esiva sobre la gota del portaobjetos. Elimina el colorante sobrante con un papel de filtro. C4ESTI.NARI. 2. KLu es un "ongoM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN ;. KPor !u los "ongos !ue causan micosis cutnea se llaman !ueratinoflicosM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 8. Menciona 5 "ongos causantes de micosis subcutnea en los "umanos

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5.

=. 9.

NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN KBebido a !u Candida albican es conocido como un "ongo causante de micosis oportunistaM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN Menciona la forma de prevencin de las micosis cutneas NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN KPor !u se aAade antibitico al medio de cultivo para aislar "ongosM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN

.+SER6ACI.NES Bibuja todo el proceso llevado a cabo para el aislamiento de "ongos, as como los resultados obtenidos.

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C.NC04SI.NES NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN Prctica N *& 1 ;9 1

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(ombre del lumno7NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN ,rupoNNNNNN Profesor de +aboratorioNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN /alif7 NNNNNNN

PRCTICA N *' C.NTR.0 DE 0.S /ICR..RGANIS/.S! ACCIN DE 0.S AGENTES @JSIC.S .+5ETI6.7 El alumno utili&ar diversos tipos de agentes fsicos para eliminar cual!uier microorganismo impregnado en el material de laboratorio. /ATERIA0 ?ubos con caldo nutritivo ?ubos con caldo nutritivo a pC7 8, < y 6 ?ubos con caldo nutritivo con (a/l al 4.=P y <P /epas de Escherichia coli /epas de Staphylococcus aureus /epas de "acillus subtilis sa de Holle INTR.D4CCIN ?E3M.(%+%,V Esterili&acin7 eliminacin de toda forma de vida, incluidas las esporas. Besinfeccin7 proceso de destruir los agentes infecciosos. ntisepsia7 operaciones o tcnicas encaminadas a crear un ambiente !ue impida el desarrollo de los microorganismos e incluso pueda matarlos. sepsia7 tcnicas empleadas para impedir el acceso de microorganismos al campo de trabajo. ntibiosis7 fenmeno biolgico en el !ue e0iste una detencin o destruccin del crecimiento microbiano debido a sustancias producidas por otro ser vivo. ntimicrobianos7 sustancias !ue matan o in"iben el crecimiento de los microorganismos Eantibacterianos, antif@ngicos, etc.F. Microbicidas7 sustancias !ue matan las formas vegetativas, pero no necesariamente las esporas de un microorganismo Ebactericida, fungicida, etc.F. Microbiostticos7 sustancias !ue in"iben el crecimiento de microorganismos Ebacteriostticos, fungistticos, etc.F. ntispticos7 se refiere a sustancias !ue se aplican sobre el cuerpo. Besinfectantes7 se refiere a sustancias empleadas sobre objetos inanimados. gentes teraputicos7 antimicrobianos empleados en el tratamiento de infecciones. gentes !uimioteraputicos7 sustancias !umicas empleadas en el tratamiento de enfermedades infecciosas o enfermedades causadas por la proliferacin de clulas malignas.

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ntibiticos7 sustancias producidas por un ser vivo !ue se oponen a la vida de otro ser vivo. ESTERI0I8ACIN aD Por calor seco +a muerte microbiana se produce por una esterili&acin, ya sea como consecuencia de mecanismos de transferencia de energa, adems de la o0idacin. En la esteriliKaciIn por calor seco e0iste una destruccin de los microorganismos o0idando sus constituyentes !umicos, desnaturali&ando las protenas y los cidos nucleicos de las clulas as como fragmentando las membranas celulares. Para materiales !ue deben permanecer secos como ciertos instrumentos de vidrio de laboratorio tales como7 placas de petri, pipetas, as como aceites, los materiales !ue no se pueden esterili&ar por calor seco son7 material te0til Ealgodn, sedas, lino, etc.F, gomas y materiales sintticos El material se dispone en "ornos elctricos por los !ue circula aire caliente, en vista de !ue el calor es menos efica& en materiales secos, se acostumbra a aplicar una temperatura de 294W/ a 2<4W/ durante una "ora o ms. Para materiales de vidrio de laboratorio es suficiente una e0posicin de dos "oras de duracin a 294W/ para !ue !uede esterili&ado. %tras formas de calor seco incluyen incineracin y flameados por pasaje de agujas o pe!ueAos instrumentos a travs de la llama de un mec"ero bunsen bD Por calor >?medo +a temperatura elevada, combinada con una "umedad elevada, es uno de los mtodos ms efectivos para matar microorganismos. El calor "@medo mata a los microorganismos coagulando sus protenas. Es muc"o ms rpido y efectivo !ue el calor seco. El vapor a presin proporciona temperaturas por encima de las !ue se pueden obtener al "ervir. ?iene la ventaja de un calentamiento rpido, as como penetracin rpida y abundante "umedad. El aparato a esterili&ar !ue utili&a vapor de agua a presin regulada se denomina autoclave. /onsta de una cmara de doble pared !ue se llena de vapor saturado libre de aire y se mantiene a la temperatura indicada y a la presin establecida durante un periodo de tiempo determinado. ,eneralmente el autoclave funciona a una presin de 2= librasG pulgada cuadrada a 2;2W/. El tiempo de funcionamiento para lograr la esterilidad depende de la naturale&a del material !ue se va a esterili&ar, del tipo de envase y del volumen del material. 'na temperatura de l44I/ es la suficiente para matar a todas las formas bacterianas en ; o 8 minutos, e0cepto a las esporas, para matar a estas se re!uiere una temperatura de 2;2I/ durante 2= minutos y a una presin de 2= libras. Este mtodo es adecuado para esterili&ar aparatos !ue tienen "ule, jeringas !ue contienen metal, para medios de cultivo !ue contienen como a&@car de0trosa. PR.CEDI/IENT. 7 AcciIn de la temperatBra aF $orma dos series de tubos Etres tubos por serieF en cada serie siembra por separado los microorganismos por inoculacin o agitacin. bF .ncuba los tubos sembrados a las siguientes temperaturas7 5W/ ErefrigeracinF, 8< W/ y =4 W/ EestufaF durante ;5 "oras. "7 AcciIn del p: aF $orma tres series de tubos de pC7 8, < y 6 Etres tubos por serieF en cada serie siembra los microorganismos por agitacin. bF +leva los tubos a la estufa a 8< W/ por ;5 "oras. #7 AcciIn de la presiIn osmItica aF $orma dos series de tubos de (a/l 4.=P y <P Etres tubos por serieF en cada serie siembra los microorganismos por agitacin. bF +leva a incubar los tubos a 8< W/ durante ;5 "oras. C4ESTI.NARI.7

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8.

5. =.

KLu finalidad tiene el lavar el material !ue se emplear en la reali&acin de prcticas de microbiologaM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN KPor !u se recomienda !ue la temperatura del lavado del material sea entre 54W/ y =4W/M NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN KLue finalidad tiene el empacado antes de la esterili&acinM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN KLue desventaja tiene el utili&ar la esterili&acin por calor secoM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN K/mo act@a la radiacin ultravioleta en los microorganismosM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN K/ul es el proceso de esterili&acin de los materiales sintticos !ue se utili&an en los "ospitalesM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN K/mo act@a el proceso de desecacin en los microorganismosM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN K !u condiciones de temperatura y presin se destruyen todas las formas vegetativas y esporasM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN K/mo act@a la esterili&acin por calor "@medo en los microorganismosM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN KLu es B ( y cules son sus ventajas y desventajasM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN

9.

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6. 24.

.+SER6ACI.NES Bibuja a manera de diagrama el procedimiento !ue empleaste durante la prctica.

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C.NC04SI.NES NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN Prctica N *' (ombre del lumno7NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN ,rupoNNNNNN Profesor de +aboratorioNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN /alif7NNNNNN

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PRCTICA N *( C.NTR.0 DE 0.S /ICR..RGANIS/.S! E0 ANTI+I.GRA/A .+5ETI6.7 El alumno manejar algunas tcnicas para poner de manifiesto la actividad de los antibiticos sobre el crecimiento microbiano. /ATERIA07 Placas de petri con medios de cultivo Mueller1Cinton. sa bacteriolgica Mec"ero *ensidiscos EantibiogramasF $enol al =P /ultivo de en caldo nutritivo de 2: "oras de Pseudomonas aeruginosa /ultivo de 2: "oras Staphylococcus aureus en manitol sal gar /ultivo de 2: "oras de Salmonella typhi en medio Mac /on>ey INTR.D4CCIN ANTI+ITIC.S *on sustancias capaces de destruir y eliminar los microorganismos causantes de una infeccin producida por bacterias Efaringitis, bron!uitis, otitis, neumona, amigdalitis, etcF. (o son eficaces cuando la infeccin es producida por virus EgripeF. /ada tipo de antibitico ser efectivo para destruir una clase de microorganismos en funcin de su modo de actuacin. *e les llama antibiticos de amplio espectro a los !ue son efectivos frente a un gran n@mero de agentes microbianos, los microorganismos causantes de la infeccin son capaces de desarrollar resistencias al antibitico de manera !ue este no ser efica& para eliminarlos. /ada aAo se investiga creando nuevos antibiticos eficaces para las formas microbianas resistentes a sus anteriores tratamientos. *e deben usar siempre bajo prescripcin mdica. E0isten pruebas EantibiogramasF !ue determinan el antibitico ms efica& para cada infeccin, pero normalmente se sigue un protocolo de actuacin de los antibiticos de eleccin para cada tipo de infeccin. Es el mdico el profesional !ue ju&ga la infeccin e0istente y el antibitico efica& para su tratamiento. +os antibiticos siempre se deben tomar bajo prescripcin mdica y cumplir el tratamiento completo. El incumplimiento del tratamiento puede dar lugar a recadas !ue precisarn el tratamiento con otro tipo de antibitico por "aber desarrollado resistencia al primero /.D. DE ACCI.N DE 0.S ANTI+ITIC.S .n"ibicin de la sntesis de la pared celular. 1 82 1

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lteracin sobre la membrana citoplsmica. .n"ibicin de la sntesis proteica. #lo!ueo de la sntesis de los cidos nucleicos. ANTI+I.GRA/AS Para estudiar la sensibilidad de un microorganismo por tcnicas de difusin se dispone de dos sistemas, el de discos de papel impregnados con el antibitico y las tabletas, consistentes en una suspensin del antibitico liofili&ada y comprimida en material inerte. +os fabricantes recomiendan conservar los discos a ;4 I/ para largos periodos o entre ; y : I/ si se utili&an en el pla&o de una semana. Por el contrario, las tabletas se "an considerado ms estables, pudindose almacenar a temperatura ambiente y manteniendo su actividad ms tiempo !ue los discos .Por lo !ue respecta a la temperatura de conservacin, al comparar para cada antibitico los dimetros de los "alos de in"ibicin de los discos conservados entre 5 y 9 I/ con los conservados a temperatura ambiente no se encontraron diferencias significativas a lo largo de todo el estudioD tampoco se encontraron diferencias al comparar los "alos de las pastillas conservadas entre 5 y 9 I/ con las conservadas a temperatura ambiente, de modo !ue tanto los antibiticos !ue permanecieron estables durante el tiempo del estudio como los !ue disminuyeron su actividad lo "icieron de modo paralelo a ambas temperaturas PR.CEDI/IENT.! AD PREPARACIN DE 0AS S4SPENSI.NES /ICR.+IANAS *uspende la cepa bacteriana en agua destilada logrado obtener una turbiedad del (I 24 del nefelmetro de Mac1 $arland. En caso de no tener el nefelmetro solo ve la turbiedad a manera de suspensin. +D ACTI6IDAD DE 0.S ANTI+ITIC.S EN DISC. Marca 8 placas Muller1Cinton, o gar nutritivo con el nombre de la cepa S. aureus, Salmonella typhi y otra con Ps. aeruginosa. ?oma con un "isopo diferente las muestras !ue fueron preparadas en el inciso de este procedimiento y siembra las placas rotuladas Luema el "isopo y desc"alo. /oloca los discos individuales sobre las placas y presiona ligeramente los discos contra la gelosa .ncuba las placas a 8<W/ durante ;5 "oras Mide el dimetro de los "alos de in"ibicin del crecimiento producidos por cada antibitico y anota los resultados

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DETER/INACIN DE IN:I+ID.RES EN 0A 0EC:E Prepara medio de cultivo Muller1Cinton, a 54W/

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Aade 4.= ml de ". subtilis obtenido de un cultivo de 2: "oras en caldo nutritivo. Ec"a 2= ml del medio de cultivo ya enfriado a 54W/ y distribuye en forma "omognea Beja !ue solidifi!ue. ?oma una muestra de lec"e y calienta en baAo Mara a :4W/ durante 8 minutos e0actamente, enfra bruscamente la lec"e en un baAo con "ielo .mpregna un disco de papel filtro con la lec"e fra, scalo ligeramente y con unas pin&as esterili&adas deposita en el centro de la placa de petri preparada anteriormente .ncuba la placa de 2: a ;4 "oras a 8<W/ y observa las &onas de in"ibicin causadas por los antibiticos sobre ". subtilis. *i la muestra de lec"e contiene antibiticos, alrededor del disco se formar un "alo, el cual indica la in"ibicin de microorganismos y presencia de antibiticos en concentraciones superiores a las permitidas

C4ESTI.NARI. 2. KLu funcin tienen los antibiticosM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN ;. E0plica la accin de los antibiticos en la in"ibicin de la sntesis de protenas bacterianas NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 8. Menciona dos causas del por!ue los microorganismos pueden llegar a "acerse resistentes a los antibiticos NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 5. *eAala 8 antibiticos !ue act@an sobre la pared celular bacteriana NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN =. Be !u fuentes se obtienen los siguientes medicamentos7 estreptomicina, eritromicina, cefalosporina y cloranfenicol NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 9. *eg@n los resultados de tu prctica. KLu medicamentos puedes utili&ar para destruir y eliminar a *tap"ylococcus y Escherichia coli7 NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN <. .nvestiga !ue tipo de enfermedades pueden ocasionar los microorganismos estudiados en la prctica NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN :. K/ul es la accin farmacolgica de los siguientes medicamentos7 cloranfenicol, penicilina, cefalosporinas, gentamicina, cido nalid0icoM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN .+SER6ACI.NES 3eali&a dibujos de los resultados obtenidos a las ;5 "oras de incubacin

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C.NC04SI.NES NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN Prctica N *( (ombre del lumno7NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN ,rupoNNNNNN Profesor de +aboratorioNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN /alif7NNNNNN

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PRCTICA N *) AIS0A/IENT. DE +ACTERIAS PATGENAS DE :ERIDAS 2 SECRECI.NES .+5ETI6.7 Bemostracin de la presencia de bacterias patgenas en la piel y garganta, mediante el mtodo de siembra en placa. /ATERIA0 Placas de petri con gar1 *angre E,*F Placas de petri con Manitol sal gar EM* F Placas de petri con gar vogel y Xonson E UXF *olucin salina estril E0udado farngeo 3aspado de piel Mec"ero sa de platino Cisopos estriles INTR.D4CCIN +a piel Een condiciones normalesF es una barrera !ue impide la penetracin de los grmenes, por ello act@a como mecanismo de defensa. +os mamferos son frecuentemente infectados por algunas de las bacterias pree0istentes en su medio ambiente, aun!ue en general viven en e!uilibrio con estos microorganismos, mantenindoles limitados a &onas relativamente superficiales de su organismo. *in embargo las bacterias infecciosas producen enfermedades al invadir tejidos ms profundos. Por lo tanto para mantener la salud, el "usped debe defenderse constantemente frente a la invasin por parte de las bacterias. +os factores mecnicos, !umicos y microbianos desempeAan un papel importante al restringir la coloni&acin de las bacterias a las superficies corporales. @actores mecnicos7 +as superficies epiteliales de la piel y de las mucosas constituyen barreras !ue resultan ms o menos impermeables a las bacterias. +a impermeabilidad de la piel es mayor !ue en la mayora de las mucosas. /uando se altera la integridad de la superficie epitelial, pueden desarrollarse infecciones subcutneas. +as bacterias !ue causan ms frecuentemente estas infecciones son las !ue e0isten "abitualmente en la superficie cutnea, folculos pilosos y glndulas sudorparas en la piel, es decir los estafilococos. @actores LB-micos! 0a acide& de las secreciones gstricas mantienen sin duda la esterilidad "abitual del estmago. El pC bajo de la piel E81=F, debido en gran parte a 1 8= 1

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los productos cidos del metabolismo bacteriano, frena sin duda el crecimiento de muc"os microorganismos !ue toman contacto con sus superficie @actores microbianos! El antagonismo microbiano in"ibe el crecimiento de muc"as bacterias y "ongos potencial mente patgenos en lugares superficiales donde de no ser as, podran producirse enfermedades. +a flora de la regin farngea presenta problemas peculiares para el aislamiento e identificacin de microorganismos, por lo tanto se refiere a los componentes de la flora normal como a microorganismos con accin patgena. Es importante recordar !ue algunos microorganismos tienen capacidad patgena definida y su presencia es un indicio claro de enfermedades, en tanto !ue otros, llamados oportunistas, guardan una posicin ambigua y pueden encontrarse tanto como componentes de la flora normal, como asociados a procesos patolgicos, causados por otros microorganismos !ue son verdaderos responsables Epor ejemplo los virusF +os estafilococos estn entre las primeras bacterias !ue se reconocieron como patgenas, y se descubrieron por primera ve& a principios de la dcada de2::4. *e encuentran ampliamente distribuidos por la naturale&a, y a menudo forman parte de la flora bacteriana de la piel y el tracto respiratorio superiorD muc"as de las especies !ue se encuentran en el "ombre son comensales. +a especie predominante patgena para el "ombre es el Staphylococcus aureus, constituye la causa ms com@n de las infecciones supurativas para el "ombre. El aislamiento de S. aureus a partir del e0udado farngeo y e0udado de piel, no tiene importancia diagnstica, ya !ue se considera parte de la flora normal de la faringe y nasofaringe, por lo !ue no tiene significado clnico. PR.CEDI/IENT.! +impia y esterili&a el rea a trabajar con fenol al =P Prende el mec"ero cerca de donde se va a trabajar, si es posible coloca otro Cumedece el "isopo en solucin salina estril, psalo sobre la superficie de la piel Econ o sin peloF Bescarga el "isopo en tres placas de petri con el medio ya preparado. EEs recomendable !ue para cada dos placas se utilice un solo "isopo con muestraF. (o retires completamente las tapas de los medios de cultivo para evitar !ue se contaminen Luema el "isopo y desc"alo. Esterili&a el asa de platino "asta el rojo vivo, enfralo introducindolo en un e0tremo del gar 3eali&a el sembrado de los microorganismos por el mtodo de estra utili&ando el asa y como se muestra en la figura. Evita destapar completamente la tapa de los medios de cultivo. .ncuba a 8<W/ por ;515: "oras y observa los resultados. 3epite el mismo procedimiento pero a"ora toma muestra de la faringe con "isopos estriles en las &onas afectadas como7 amgdalas, pared posterior de la faringe, en general cual!uier rea !ue manifiesta signos de inflamacin, e0udados y @lceras, procurando no tocar con el "isopo la lengua.

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INTERPRETACIN DE RES40TAD.S! AD REACCI.NES P.SITI6AS EN DISTINT.S /EDI.S AGAR SANGRE Para el aislamiento, cultivo y deteccin de actividad "emoltica de *tap"ylococcus, *treptococcus y otros microorganismos e0igentes. *e observan colonias blancas casi grises, grandes, conve0as de consistencia butircea, Presentan bordes regulares. *e observa !ue presenta "emlisis. +as colonias en medio slido son redondeadas, uniformes, estos crecen rpidamente a 8<W/ pero tienden a formar pigmentos mejor a temperatura ambiente E;4W/F. /ANIT.0 SA0 AGAR M/SAD *e utili&a como medio selectivo, para cultivar y enumerar especies clnicas de estafilococos El manitol cuando es utili&ado por los microorganismos, vira de su color original rojo a amarillo. *e observan colonias c"icas, blancas, conve0as, de consistencia butircea, presentan bordes irregulares. S. aureus forma colonia amarilla, S. Epidermidis, colonia incolora AGAR 6.GE0 2 5.NS.N MA65D Para la deteccin de Staphylococcus aureus coagulasa1positivo, se observan colonias negras pe!ueAas, bordes irregulares con "alo amarillo. Para S. epidermidis y otros pe!ueAas, negro1grisceos, sin "alo, el medio presenta un vire de rojo plido a amarillo. +D DESCRIPCIN DE0 TIP. DE C.0.NIAS .+TENIDAS %bservar las colonias obtenidas y describirlas teniendo en cuenta las siguientes caractersticas7 @.R/A7 Puntiforme, circular, ri&oide, irregular, filamentosa. TA/AN. 7 ,rande Ems de 8 mm.F, mediana E;18 mm.F, pe!ueAa E21; mm.F C.0.R. 3eportar el color final despus de la incubacin +.RDE7 Entero, ondulado, lobulado, filamentoso, ondeado E0E6ACIN7 Plano, elevado, conve0o, pulvinado, umbonado S4PER@ICIE! Suave, brillante, rugosa, plegada, seca, polvorienta

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C4ESTI.NARI.! 2. E0plica a !u se debe !ue las bacterias son conocidas como pigenas NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN ;. KLu tipo de bacterias son encontradas con mayor frecuencia en !uemadurasM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 8. KLu finalidad tiene "umedecer el "isopo con solucin salina estrilM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 5. KLu son "emolisinas y cuantos tipos "ayM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN =. KLu es la infeccin intra"ospitalariaM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 9. KLu otros patgenos pueden encontrarse en "eridasM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN <. Bespus de "aber incubado a 8<W/ por 5: "oras describe las colonias obtenidas en cada medio de cultivo utili&ado GE0.SA SANGRE .@.R/A7 7TA/AN. 7 7C.0.R. .+.RDE7 7E0E6ACIN7 AGAR 6.GE0 2 5.NS.N MA65D .@.R/A7 7TA/AN. 7 7C.0.R. .+.RDE7 7E0E6ACIN7 /ANIT.0 SA0 AGAR M/SAD @.R/A! TA/AN.! C.0.R! +.RDE! E0E6ACIN! ESTA@I0.C.C. S @.R/A! TA/AN.! C.0.R! +.RDE! E0E6ACIN! *

.+SER6ACI.NES Bibuja y colorea todos los resultados obtenidos despus de las 5: "oras de "aber sido incubados. 1 8: 1

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C.NC04SI.NES! ONNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN Prctica N *) (ombre del lumno7NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN ,rupoNNNNNN Profesor de +aboratorioNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN /alif7NNNNNNNN

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PRCTICA N * AIS0A/IENT. DE PATGEN.S EN IN@ECCIN 4RINARIA .+5ETI6.S Lue los alumnos cono&can los patgenos causantes de infeccin urinaria. Presenciar la tcnica !ue se utili&a para el urocultivo. .nterpretar dic"a tcnica /ATERIA0 Muestra de orina ?ubos con solucin salina fisiolgica estril E6 mlF gar ?ripticase *oya gar Eosina &ul de Metileno EEM#F gar Mac /on>ey Pipetas de 2 ml estriles Placas Petri estriles sa de Holle

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Mec"ero INTR.D4CCIN +a .?' es una de las enfermedades ms frecuentes, !ue consiste en la infeccin por alg@n agente patgeno Ebacterias con mayor frecuenciaF, de cual!uiera de los segmentos del aparato urinario7 riAones, urteres, vejiga o uretra. PIE0.NE@RITIS! es la infeccin del riAn. 4RETERITIS! es la infeccin de uno o de los dos urteres. CISTITIS! es la infeccin de la vejiga. 4RETRITIS! es la infeccin de la uretra. las Pielonefritis se les conoce tambin como .nfecciones del ?racto 'rinario lto. las /istitis y 'retritis tambin se les conoce como infecciones del ?racto 'rinario #ajo +as 'reteritis son generalmente una e0tensin de la infeccin en el riAn o en vejiga E/istitisF. @ACT.RES PREDISP.NENTES A 4NA IT4 El sePo ,emeninoQ por!ue la longitud de la uretra femenina es pe!ueAa, y se favorece !ue las infecciones asciendan desde la regin perineal. 0os Carones LBe tienen la prIstata aBmentada de tamaRoQ por!ue se tiende a retener la orina debido a !ue la prstata aumentada de tamaAo genera obstruccin parcial o total en el segmento !ue corresponde a la uretra. 4so de ropas a=BstadasQ predispone a desarrollar infecciones urinarias por la presin !ue ejercen estos !ue "acen !ue la orina refluya "acia el interior de las vas urinarias favoreciendo la contaminacin de estas. 0a retenciIn ColBntaria de la orinaQ es importante !ue una persona use el uirinario, tan pronto siente ganas de "acerlo 0as personas LBe ingieren poca ingesta de l-LBidos7 0as personas diab<ticasQ por la facilidad !ue tienen para todo tipo de infeccin. ALBellos LBe tienen algBna mal,ormaciIn cong<nita de las C-as Brinarias7 SJNT./AS DE 0AS IT4 +o fundamental es el ardor al orinar conocido como disuria, otros sntomas agregados pueden pola!uiuria Eorinar varias veces en cantidad menor a lo "abitualF, dolor al final de la emisin, fiebre, nuseas, vmitos, malestar general, dolor lumbar dependiendo de la locali&acin de la infeccin. /uando es una infeccin urinaria alta se suele acompaAar de fiebre, malestar general, dolor lumbar, nuseas o vmitosD mientras !ue cuando es baja no. *i se trata de una uretritis gonoccica Ese "ace @nicamente evidente en el varnF, !ue es una enfermedad de transmisin se0ual, se presenta ardor al orinar y al inicio de la miccin se evidencia una secrecin blan!uecina maloliente con el color parecido al de la Tlec"e condensadaT. 4R.C40TI6. E+ urocultivo se utili&a para diagnosticar bacteriuria, la orina constituye un mtodo e0celente para cultivar la mayor parte de microorganismos !ue infectan el aparato urinario. +a combinacin de piuria con bacteriuria considerable sugiere la presencia de una infeccin urinaria. 4tilidad Cl-nica /uando los sntomas indican una posible infeccin urinaria como7 dolor y sensacin de calor al orinar, as como urgencia frecuente de orinar. /uando un paciente esta canali&ado por largo tiempo, aun!ue no muestre sntomas de infeccin. En mujeres embara&adas para monitorear cual!uier bacteria en la orina !ue pueda causar alg@n problema al beb.

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PR.CEDI/IENT. Toma de mBestra en mB=eres +a muestra debe ser tomada preferentemente en el +aboratorio. *i ello no es posible, seguir las mismas instrucciones en su casa. Bebe "acerse una antisepsia previa de la &ona genital, por lo tanto debe tener a la mano lo siguiente7 jabn desinfectante agua "ervida o agua estril gasa estril o un paAo acabado de lavar el recipiente para tomar la muestra. Proceda primero a lavarse las manos y luego sintese en el inodoro, lo ms "acia atrs !ue pueda. *epare los labios genitales con una mano y mantenga los pliegues separados y proceda a asearse toda la &ona genital con el jabn desinfectante. Enjuague con abundante agua estril y luego se!ue bien con gasa estril o con un paAo limpio. Proceda a recoger la orina, destapando previamente el frasco *Y+% E( E+ M%ME(?% BE + M.//.Y( y sin tocar con los dedos su interior, colo!ue la tapa con el lado plano "acia abajo. (o to!ue el interior del recipiente o de la tapa. Empiece a orinar y recoja en el frasco, slo la muestra del c"orro del medio es decir, no debe recoger ni la primera, ni la @ltima parte del c"orro de orina.

?ape muy bien el frasco y rot@lelo con su nombre. ?rigalo al +aboratorio lo ms pronto posible, en un recipiente con "ielo, cuidando de !ue no se bote el contenido. EPamen cBantitatiCo Mtodo de conteo en placa o recuento de colonias . .ntroducido por Hass para evitar los riesgos del cateterismo vesical y diferenciar bacteriuria verdadera de contaminacin, se reali&a de la siguiente manera7 Comogenei&a la muestra mediante agitacin. Biluye al 2724, colocando 2 ml. de orina en 6 ml. de suero fisiolgico estril. Prepara diluciones al 27244D 27 2444 y 2724 444, a partir de la dilucin al 2724. Beposita 2 ml. de cada dilucin en placas Petri esterili&adas, sobre las cuales vaca un tubo de agar tripticase soya, fundido y enfriado a 5=I. Mediante rotacin suave, distribuye "omogneamente la siembra. +leva a incubar todas las siembras a 8<W/ durante ;5 a 5: "oras. Para calcular el n@mero de colonias elige placas !ue contengan entre 84 y 844 colonias. /ontadas stas, basta multiplicar su n@mero por la dilucin respectiva para obtener la cuenta total. +os resultados del estudio cuantitativo se informan de la siguiente manera7 (o "ubo desarrollo microbiano. Menos de 24 444 colonias por ml.

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Entre 24 444 y 244 444 colonias por ml. Ms de 244 444 colonias por ml. Por lo general, las muestras contaminadas tienden a mostrar cuentas inferiores a 24 444 coloniasGml. /uando el recuento revela valores intermedios, entre 24 4444 y 244 444 coloniasGml, el e0amen debe repetirse. /onviene advertir !ue pueden pasar inadvertidas infecciones urinarias verdaderas, si no se toman en cuenta cuentas inferiores a 244 444 colonias por ml, ya !ue e0isten diversos factores !ue pueden e0plicar recuentos bajos en infecciones urinarias verdaderas, diuresis acentuada, obstruccin uretral, infecciones crnicas e infecciones por cocos grampositivos. EPamen cBalitatiCo El estudio cualitativo, !ue conduce a la identificacin del agente, se reali&a mediante la siembra de la muestra "omogenei&ada, en placas con agar eosina a&ul de metileno EEM#F o Mac/on>ey. +a identificacin final de los agentes se "ace mediante el estudio de sus propiedades bio!umicas y caractersticas serolgicas. Esto permite establecer relaciones de identidad entre microorganismos aislados en cultivos sucesivos o de control, y definir el estado de revivida o de reinfeccin. Be esto deriva el valor !ue tiene el conocimiento del biotipo, del serotipo Eparticularmente en E. coliF, del piocinotipo Een especial cuando es de Ps. aeruginosa# y del antibitico. Zste @ltimo se obtiene al comparar el antibiograma de cepas aisladas de muestras obtenidas de diferentes oportunidades en un mismo paciente *i e0iste correspondencia, se concluye !ue se trata de una misma cepa. C4ESTI.NARI. 2. KLu tipos de bacterias pueden causar infeccin urinariaM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN ;. KLu puede suceder cuando una mujer tiene bacteriuria asintomticaM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 8. KPor !u la mujer es ms propensa a la .?'M NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 5. KLu medidas se debe seguir para evitar las .?'M NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN =. .nvestiga !u grupo de edad tiene mayores casos de .?' en los tres "ospitales de .ca NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN .+SER6ACI.NES Bibuja lo !ue observaste en la prctica

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C.NC04SI.NES! NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN Prctica N * (ombre del lumno7NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN ,rupoNNNNNN Profesor de +aboratorioNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN /alif7NNNNNNNN

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PRCTICA N EST4DI. SER.0GIC.! ANTJGEN.S @E+RI0ES .+5ETI6.7 Bescribir la accin antgeno anticuerpo en casos infecciosos plicar la reaccin de [idal en la identificacin de pacientes con tifoidea. .nterpretar los resultados de la prueba de [idal /ATERIA0 *angre venosa *et de antgeno febriles Micropipetas +minas e0cavadas INTR.D4CCI.N ntgenos $ebriles es un trmino referido a un grupo de suspensiones bacterianas, representativo de un n@mero de bacterias patgenas para la especie

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"umana y responsables de la aparicin de infecciones Ebrucelosis, salmonelosis y ciertas ric>ettsiosisF !ue cursan con un cuadro febril en el "usped infectado. +a mejor forma para establecer la etiologa de una enfermedad infecciosa es el aislamiento e identificacin del agente causal de la misma. *in embargo, estos medios de diagnstico no son siempre de fcil aplicacin y es a" donde radica la importancia del uso de las suspensiones bacterianas en la deteccin de los anticuerpos presentes en el suero del paciente Emtodo indirecto de diagnsticoF. En el diagnstico clnico, los resultados obtenidos con el uso de los ntgenos $ebriles deben ser considerados siempre en relacin a los "alla&gos clnicos y otras pruebas de laboratorio. (uestra sangre consta de un l!uido amarillento denominado plasma. /uando la sangre se coagula se obtiene una porcin acuosa a la cual se le denomina suero. En esta porcin estn suspendidas glucoprotenas, llamadas inmunoglobulinas o ) nticuerpos-, !ue son sinteti&ados en nuestro organismo. nte una e0posicin a una sustancia o microorganismo e0traAo ESalmonella typhi en este casoF, un tipo de clulas llamadas +infocitos # E.nmunidad mediada por clulasF produce estos anticuerpos en su forma unida a la membrana. Este anticuerpo unido a la membrana constituye el receptor de antgenos de la clula #. +os linfocitos # secretan anticuerpos slo tras su diferenciacin, inducida por la interaccin del antgeno con el anticuerpo de membrana de este tipo celular. Esta interaccin constituye la fase de reconocimiento de la inmunidad. !uellas partes de la molcula !ue interact@an y !ue son reconocidas con ms frecuencia por los anticuerpos se denominan TBeterminantes antignicos inmunodominantesT o TeptopesT. +os +infocitos # se activan ante la presencia del antgeno, se multiplican originando un clon de clulas iguales y se diferencian en clulas plasmticas capaces de elaborar el mismo tipo de nticuerpo especfico contra el antgeno. +os linfocitos # no empie&an su diferenciacin y produccin de anticuerpos "asta !ue no reciben la )seAal- de los linfocitos ?C colaboradores. /ada molcula de .g EinmunoglobulinaF est formada por 5 cadenas polipeptdicas !ue en conjunto adoptan la forma de \. En la molcula se diferencian 8 &onas7 la subunidad $c Epie de la \F y las dos subunidades $ab Ebra&os de la \F !ue son las !ue permiten el acoplamiento al antgeno. E0isten = tipos de inmunoglobulinas "umanas7 .g,7 ntibacterianas y antivirales. $avorecen la fagocitosis. .g 7 presentes en las secreciones Emucus, saliva, etc.F. Evitan fijacin virus. .gM7 ctivacin del complemento y precipitacin de antgenos solubles. .gE7 .ntervienen en procesos alrgicos. .gB7 Estimulan la produccin de anticuerpos por parte de los linfocitos # (?V,E(% E!ue engendra a su contrarioF7 Molculas ajenas a un organismo, !ue son reconocidas como tales y !ue desencadenan contra el organismo !ue las presenta, una respuesta inmunitaria. +a unin entre el antgeno y el anticuerpo es especfica7 cada anticuerpo reconoce y se une a un determinado antgeno. *u unin puede provocar7 (eutrali&acin7 se produce sobre to0inas y virus. El anticuerpo se une al antgeno e impide !ue se fije a las membranas celulares, neutrali&ando su accin. Precipitacin7 se produce cuando el antgeno se encuentra disuelto, de forma !ue la unin antgeno1anticuerpo resulta insoluble y precipita. glutinacin7 cada anticuerpo se une a dos antgenos y el resultado es la formacin de un entramado de complejos antgeno1anticuerpo aglutinados. $acilita la accin de los fagocitos. %psoni&acin7 estimula la accin de los fagocitos. Para esta prueba, en el laboratorio se utili&an suero de conejo. El conejo fue previamente inmuni&ado inyectndole la bacteria atenuadaD su sistema inmune crea 1 59 1

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anticuerpos contra las salmonellas, entonces se e0trae la sangre del conejo, y se purifica todo el contenido de inmunoglobulinasD esto es en laboratorios con e!uipo y mtodos adecuados. PR.CEDI/IENT. /ST.D. DE PR4E+A RPIDA EN P0ACA. l paciente se le reali&a una venopuncin, e0trayendo la sangre en un tubo sin anticoagulante y es centrifugada por 24 minutos a 8444 revoluciones por minuto. *e separa el suero el cual se utili&a para la determinacin de los anticuerpos. Marcar en una placa de vidrio correctamente indicando el antgeno !ue se est usando7 ?fico )%- 1 Salmonella typhiD ntgeno somtico, pC7 9.= ] 2.4 ?fico )C- 1 Salmonella typhiD ntgeno flagelar, pC7 9.= ] 2.4 (%? 7 El reactivo as como los sueros, deben alcan&ar la temperatura ambiente para comen&ar la prueba. 2. Beposita en sitios diferentes de la placa una gota de suero E84 ulF. ;. gita el antgeno a utili&ar para tener una suspensin uniforme. 8. Aade 84 ul de la suspensin de antgeno a cada una de los sueros. *e recomienda utili&ar pipetas automticas Eel gotero incluido proporciona una gota de 84154 ulF. 5. Me&cla el antgeno y el suero utili&ando un aplicador diferente para cada una de las cantidades de suero. =. ,ira la placa manualmente o utili&a un agitador mecnico E2;4 rpmF durante ; minutos. 9. 3eali&a la lectura utili&ando una fuente de lu& directa y observa la aglutinacin macroscpica. <. *e recomienda incluir controles Positivo y (egativo. INTERPRETACIN DE 0.S RES40TAD.S %bservar la aglutinacin con ayuda de una lmpara. /uando "ay reaccin positiva se repite la tcnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma7

Mililitros de suero 4.4: 4.45 4.4; 4.42 4.44=

Bilucin 27;4 2754 27:4 27294 278;6

INTERPRETACIN7 El informe del resultado de la prueba se "ace tomando en consideracin la dilucin ms alta !ue se observe en la reaccin positiva. En tifoideas los anticuerpos llegan a tener ttulos diagnsticos "asta los : das despus de la fiebre. 0I/ITACI.NES DE0 PR.CEDI/IENT. 2. lgunos sueros normales pueden dar un titulo de 27;4 a 2754 y "asta 27:4 pero esto puede ser debido a vacunaciones o alguna infeccin anterior. (o siempre se presenta produccin de aglutininas en infecciones bacterianas. ;. *e pueden producir reacciones cru&adas de aglutininas debido a vacunaciones para ciertas enfermedades. +a vacuna tfica puede producir aglutininas contra antgenos Proteus.

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Manual de Prcticas de Microbiologa C4ESTI.NARI. 2. ;. 8. 5. =.

Marav, A.

Menciones algunas caractersticas del gnero *almonella. NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN KBnde se locali&a en antgeno )%-M NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN KBnde se locali&a el antgeno )C-M NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN Menciona otros mtodos de laboratorio para el diagnstico de salmonelosis. NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN Menciona algunas propiedades generales del gnero #rucella. NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN Es!uemati&a tus observaciones

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C.NC04SI.NES! NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN Prctica N (ombre del lumno7NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN ,rupoNNNNNN Profesor de +aboratorioNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN /alif7NNNNNNNN

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PRCTICA N " E0 S:.C9 ANA@I0ACTIC. .+5ETI6. Lue el alumno cono&ca la fisiopatologa y sntomas de la anafila0ia inmediata /ATERIA0 ; conejos adultos ; jeringas "ipodrmicas de 24 ml *olucin al =P de alb@mina bovina *olucin al =P de alb@mina de "uevo lco"ol lgodn INTR.D4CCIN

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Marav, A.

+as reacciones anafilcticas constituyen una urgencia clnica. Pueden conducir a una insuficiencia respiratoria, s"oc> y muerte s@bita. +a lista de causas potenciales de reacciones anafilcticas es muy grande7 ntibiticos. gentes diagnsticos y !uimioterape@ticas. nestsicos. Medicamentos. /iertos alimentos. +a anafila0is es el resultado de la respuesta en dos fases del sistema inmunitario a un antgeno e0traAo7 aF En la primera de ellas, el contacto inicial con el antgeno determina la sntesis de una inmunoglobulina .gE especfico para ese antgeno. continuacin, estos complejos antgeno1anticuerpo .gE especfico se fijan a los mastocitos del tejido conectivo !ue rodean a los vasos sanguneos y a los basfilos !ue circulan por la sangre. partir de este momento la persona esta sensibili&ada al antgeno. bF +a segunda fase se inicia cuando un antgeno frente a la cual la persona "a desarrollado sensibilidad logra penetrar nuevamente en su organismo a travs de la piel, el tracto digestivo, o las vas respiratorias. +a interaccin del antgeno y el anticuerpo .gE a nivel de los mastocitos desencadena la liberacin de una serie de mediadores !umicos. Entre estos mediadores figura la "istamina, sustancia !ue afecta numerosos tejidos y sistemas orgnicos, determinando en definitiva la respuesta fisiolgica caracterstica del paciente con una reaccin anafilctica. +a forma de aparicin y la naturale&a de una reaccin anafilctica dependen de diversos factores7 +a va por la !ue el antgeno penetra en el organismo. +a cantidad de antgeno absorbido. +a velocidad de absorcin. El grado de "ipersensibilidad de la persona. /uanto mas rpido se produce la reaccin mas grave suele ser esta y por tanto, es importante reconocer los signos y sntomas de cara a una reaccin inmediata. +os signos y sntomas iniciales ms comunes de la reaccin anafilctica son de tipo cutneo, progresando tpicamente desde prurito y eritema difuso a urticaria generali&ada y edema vascular especialmente en los labios, prpados y lengua. ?ambin el paciente puede referir muc"o calor. 0os trastornos respiratorios se inician con sensacin de nudo en la garganta para seguir con ron!uera, tos o estornudos, disnea y estridor. +a @vula cuerdas vocales y parte posterior de la faringe pueden aparecer tumefactas. la auscultacin, se detectan sibilncias difusas. partir de este momento el paciente corre grave peligro por insuficiencia respiratoria por obstruccin de las vas respiratorias altas o bajas. 'na complicacin frecuente es el edema larngeo. Be "ec"o, la causa inmediata mas "abitual de fallecimiento en los casos de reaccin anafilctica es la asfi0ia secundaria a edema laringe y broncoespasmos. 0os problemas cardioCascBlares cuando aparecen durante una reaccin anafilctica, pueden dividirse en dos etapas. En primer lugar, el volumen plasmtico disminuye de forma notable como consecuencia de una dilatacin vascular, y la consecuente salida del l!uido intravascular "acia el espacio e0travascular, as pues, se puede observar7 Cipotensin, s"oc>.

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El "ematocrito puede ser mayor de lo normal como resultado de una "emoconcentracin. lteraciones electrocardiogrficas como ta!uicardia, bradicardia e is!uemia. En la segunda fase de las complicaciones cardiovasculares puede aparecer depresin miocrdica. Entre las alteraciones metablicas figura un aumento de los niveles sricos de "istamina, acidosis lctica y deplecin de los factores de coagulacin. +os trastornos digestivos suelen ser infrecuentes, los signos y sntomas ms "abituales son nuseas, calambres abdominales, vmitos y diarrea intensa secundaria a los espasmos de la musculatura lisa. +a prioridad m0ima es valorar inmediatamente el estado respiratorio del paciente7 *i "a dejado de respirar inicie reanimacin respiratoria. *i adems carece de pulso, inicie reanimacin cardiorrespiratoria. dministrar o0igeno seg@n necesidades. Estar preparados para una intubacin endotra!ueal. *i el edema larngeo "a ocluido las vas respiratorias, el medico efectuara una tra!ueostoma de urgencia. .nsertar una va intravenosa. P3EUE(/.Y( BE + ( $.+ J.* Preguntar siempre acerca de posibles alergias cuando se elabore la "istoria del paciente. parte de citar los alergenos responsables describa las caractersticas y la gravedad de las reacciones. Bestacar los antecedentes de alergia en la grfica y en le plan de cuidados del paciente. *iempre !ue se deba administrar alg@n medicamento !ue pueda desencadenar anfila0is, preguntar al paciente si "a presentado alguna reaccin y permane&ca con el paciente y observar si aparecen manifestaciones de rec"a&o. ?ener cuidado con los medicamentos !ue son familia de los medicamentos de los cuales el paciente es alrgico E (?.#.%?./%*F. Por ejemplo los pacientes con antecedentes de sensibilidad a las penicilinas no deben ser tratados con cefalosporinas. ?odo paciente con riesgo a anafila0is debe de ser advertido de la posible gravedad de este tipo de reacciones. EnseAarle las precauciones !ue debe de tomar. PR.CEDI/IENT. aD Dosis sensibiliKante 2. 'na persona debe sujetar firmemente al conejo y lo mantendr con la posicin en declive y con la cabe&a "acia abajo. ;. .ntroduce la aguja bajo la piel, luego, levantando ligeramente la mano, debes for&ar el paso de la punta de la aguja a travs de la capa muscular y el peritoneo 8. +uego de ello, inocula ;.= ml de solucin de alb@mina bovina. 5. Ca& lo mismo con el conejo #D pero, en este caso inocula solucin de alb@mina de "uevo =. Beja en descanso a los conejos por espacio de ;2 das bD Dosis desencadenante 2. .nocula lentamente por va cardaca 8 ml de alb@mina bovina al conejo y al conejo # ;. %bserva los resultados C4ESTI.NARI.

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Manual de Prcticas de Microbiologa 2.

Marav, A.

K/mo se diagnostica el s"oc> anafilctico en una personaM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN ;. KLu tratamiento se debe dar en estos casosM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 8. KLu tipos de "ipersensibilidad conocesM Bescrbelos NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 5. En la prctica. KPor !u se "i&o la primera inoculacin a los conejosM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN =. KLu observaste cuando se "i&o la segunda inoculacin a los conejosM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 9. K !u se debe elloM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN .+SER6ACI.NES 3epresenta grficamente lo !ue "as observado durante el desarrollo de la prctica.

C.NC04SI.NES! NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN Prctica N " (ombre del lumno7NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN ,rupoNNNNNN Profesor de +aboratorioNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN /alif7NNNNNNNN

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Marav, A.

PRCTICA N # EST4DI. PARASIT.0GIC. .+5ETI6. Lue el alumno cono&ca la morfologa de las diferentes estructuras de los parsitos /ATERIA0ES Materia fecal +minas portaobjetos +minas cubreobjetos

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Palitos mondadientes *olucin lugol *olucin salina fisiolgica Microscopio INTR.D4CCIN PARASITIS/. INTESTINA0 Este trmino define la infeccin del tracto gastrointestinal por organismos !ue se aprovec"an de los nutrientes del cuerpo "umano donde cumplen su ciclo vital. E0isten muc"os parsitos causantes de sntomas en el ser "umano. Be una manera simplificada podemos agrupar los parsitos intestinales ms comunes en dos grupos7 D Proto&oarios EmicroscpicosF7 mebas, ,iardia y /riptosporidium. "D Celmintos ETgusanosTF7 %0iuro, scaris, ?ricocfalo, ncylostoma, (ecator, *trongyloides y ?o0ocara. El mecanismo de contagio vara dependiendo de cada parsito. +a mayora de ellos se ad!uieren al ingerir agua o alimentos contaminados con sus !uistes o "uevosD otros penetran a travs de la piel, cuando la persona o el niAo camina descal&o sobre la tierra. +os sntomas producidos por los parsitos dependern del organismo causante y en muc"as ocasiones no se presenta ninguna molestia. +os parsitos proto&oarios causarn sntomas predominantemente intestinales Ediarrea, distensin y dolor abdominalFD en cambio los "elmintos, adems de producir los mismos sntomas, pueden ocasionar molestias generales o en otros rganos y sistemas Edebilidad, palide&, prdida de peso, deficiencias nutricionales progresivas, anemia, tos crnica, pica&n analF. El diagnstico se logra mediante la visuali&acin de !uistes o "uevos en e0menes de "eces, aun!ue ocasionalmente se pueden observar los parsitos en estudios radiolgicos intestinales o en colonoscopias. En otras ocasiones se observan en las "eces o en las mrgenes del ano. El tratamiento !ue se recomienda contra los proto&oarios se basa en el uso de diversos medicamentos, tales como7 *ecnida&ol, ?inida&ol, Metronida&ol y Biodo"idro0i!uinolina. Para el tratamiento de las "elmintos disponemos de diversos anti1"elmnticos de amplio espectro efectivos, tales como7 lbenda&ol, Mebenda&ol y Pirantel, !ue permiten eliminar diferentes variedades de parsitos con pocas dosis. En muc"as ocasiones los sntomas se deben a una infeccin mi0ta, bacteriana y parasitaria, por lo !ue se re!uerir tratamiento anti1parasitario y antibitico conjunto. En otras ocasiones son causados por varios parsitos y re!uieren tratamientos con medicamentos anti1proto&oarios y anti1"elmnticos conjuntos. PR.CEDI/IENT. 2. Para trabajar con materia fecal es recomendable !ue utilices mascarilla y guantes !uir@rgicos. ;. En una lmina portaobjetos, coloca en uno de sus e0tremos una gota de solucin salina fisiolgica y en el otro e0tremo una de lugol 8. 'tili&a un mondadientes y coge una fraccin de materia fecal 5. Me&cla con la gota de solucin salina, formando una pelcula delgada y "omognea. (o debes "acer frotices gruesos, por!ue no permiten visuali&ar. =. Ca& la misma operacin me&clando con la solucin de lugol. 9. /oloca una laminilla cada preparacin, cuidando de !ue no se formen burbujas <. E0amina al microscopio a 24J y 54J C4ESTI.NARI. 2. KPor !u elementos orgnicos est formado la materia fecal "umanaM

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NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN ;. Para diagnosticar proto&oarios KLu debes encontrar en la muestra de estudioM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 8. Para diagnosticar "elmintos KLu debes encontrar en la muestra de estudioM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 5. En la prctica. KPor !u se "i&o la primera me&cla en solucin salina fisiolgica y no en lugolM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN =. KLu estructuras de parsitos observaste en la prcticaM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN .+SER6ACI.NES 3epresenta grficamente lo !ue "as observado durante el desarrollo de la prctica.

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PRCTICA N $ EST4DI. PARASIT.0GIC.! PR.T.8.ARI.S INTESTINA0ES .+5ETI6. Lue el alumno cono&ca la morfologa de los trofo&oitos y !uistes de los proto&oarios Lue sepa diferenciar los diferentes estadios de los proto&oarios /ATERIA0ES Materia fecal diarreica Materia fecal fresco de cerdo +minas portaobjetos +minas cubreobjetos Palitos mondadientes *olucin lugol 1 =9 1

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*olucin salina fisiolgica +minas con preparados permanentes de7 Entamoeba histolytica, $iardia lamblia, "alantidium coli, Cryptosporidium sp. Microscopio INTR.D4CCIN +os proto&oarios son organismos unicelulares. (o son visibles al ojo desnudo pero pueden ser vistos bajo el microscopio. 'n espcimen de e0cremento fresco es re!uerido para encontrar a estos parsitos. El ciclo de vida de los proto&oarios es complicado. #sicamente, la infeccin resulta de la ingestin en forma de !uiste u oo!uisteF. +os !uistes invaden el recubrimiento de los intestinos donde maduran a formas adultas y son e0pelidos en las "eces. #ajo condiciones favorables se desarrollan a la forma infecciosa. lgunos absorben el alimento a travs de sus membranas celulares. %tros, como las amibas, rodean el alimento y lo engullen. %tros tienen aberturas llamadas poros bucales, con los cuales barren el alimento. ?odos los proto&oarios digieren su alimento dentro de compartimientos similares a estmagos llamados vacuolas. +as amibas son clulas muy fluidas !ue se movili&an e0tendiendo partes de sus clulas como seudpodos o Tpies falsosT. %tros proto&oarios como ,iardia se impulsan agitando estructuras llamados flagelos similares a pelos largos. %tros, como #alantidium, nadan batiendo proyecciones similares a pelos cortos llamados cilios en un patrn rtmico similar al !ue produciran muc"os min@sculos remos. +a gran mayora de proto&oarios no "acen ning@n daAo. Pero, s "ay algunos !ue causan enfermedad. 'n tipo de amiba, Entamoeba histolytica, !ue puede vivir en el intestino "umano se alimenta de las clulas sanguneas rojas y causa disentera. El proto&oario parsito Cryptosporidium parvum afect a 544.444 personas en MilRau>ee cuando contamin el agua del acueducto en 2668. %tra amena&a proto&oaria ms conocida es la $iardia lamblia, !ue causa diarrea y mal absorcin intestinal. PR.CEDI/IENT. 2. (o olvides de usar mascarilla y guantes !uir@rgicos. ;. Para !ue prepares las muestras en fresco de materia fecal diarreica y del cerdo, sigue el mismo procedimiento de la prctica anterior. 8. E0amina al microscopio a 24J y 54J 5. "ora, observa lo !ue te muestra el profesor en los microscopios, si no puedes verlo ntidamente acude slo al tornillo micromtrico y grad@a el espcimen =. %bserva el trofo&oito de E. histolytica, e identifica la forma, el ectoplasma, endoplasma, las vacuolas y el n@cleo. 9. Ca& la misma observacin con los trofo&oitos de ,iardia y #alantidium. <. /uando observes los !uistes de los 8 proto&oarios, incide en su forma y el n@mero de n@cleos. "ora, observa el oo!uiste de /ryptosporidium. C4ESTI.NARI. 2. KEn !u se diferencia el trofo&oito de E. histolytica !ue es patgena, con el trofo&oito de E. coli, !ue es comensalM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN ;. KPor !u se dice !ue /ryptosporidium es un parsito emergenteM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 8. *e dice !ue $iardia lamblia causa el sndrome de mal absorcin K !u se debe esta afirmacinM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 5. KLu diferenciaEsF e0isteEnF entre un !uiste y un oo!uisteM

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NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN =. #alantidium es causante de una &oonosis KPor !u se dice asM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN .+SER6ACI.NES 3epresenta grficamente lo !ue "as observado durante el desarrollo de la prctica.

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PRCTICA N % EST4DI. PARASIT.0GIC.! PR.T.8.ARI.S :E/ATIC.SQ TIS40ARES 2 4R.GENITA0ES .+5ETI6. Lue el alumno cono&ca la morfologa de los trofo&oitos y formas evolutivas de los proto&oarios "emticos y tisulares Lue sepa diferenciar los diferentes estadios de estos proto&oarios /ATERIA0ES Uiales con solucin salina fisiolgica 'na paciente con tricomoniasis vaginal +minas portaobjetos +ancetas estriles desec"ables

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Cisopos estriles +minas con preparados permanentes de7 %rypanosoma cru&i, %o'oplasma gondii, (eishmania bra&iliensis, Plasmodium viva', %richomonas vaginalis. Microscopio INTR.D4CCIN %rypanosoma cru&i es un proto&oario "emtico, donde se encuentra en forma de tripomastigote7 tiene aspecto fusiforme, de unas ;4 micras, con un solo flagelo largo, membrana ondulante y presencia de >inetoplasto !ue protusiona en el e0tremo opuesto al flagelo. Es un parsito !ue re!uiere dos "ospedadores para su desarrollo completo, uno vertebrado Eel "ospedero definitivoF y otro invertebrado Eel vectorF. En la c"inc"e ingresa el parsito en forma de tripomastigote en el momento de la succin, para ad!uirir 1en el intestino medio1 la forma de epimastigoteD finalmente, cuando alcan&a la ampolla rectal, recupera la forma de tripomastigote metacclico o infectivo. (inguna de las formas de tripomastigote se multiplica, mientras !ue epimastiogtes y amastigotes lo "acen por fisin binaria. +as +eis"manias, son proto&oarios !ue pertenecen a la familia ?rypanosomatidae. Morfolgicamente todas las especies son similares, con diferencias en el comportamiento biolgico, inmunolgico, tipo de enfermedad y distribucin geogrfica. En el "ospedero vertebrado afecta el sistema reticuloendotelial y se presenta intracelular en forma de amastigote. Este es ovalado o redondeado, inmvil, de ; a = micrones. El n@cleo es voluminoso, esferoidal y central y cerca est el !uinetoplasto, el cual se colorea intensamente y tiene forma de barra, asociado a un rudimento de flagelo !ue no se e0tiende fuera del parsito. +as cuatro formas de paludismo "umano pueden ser tan semejantes respecto a sus sntomas iniciales !ue dificulten su diferenciacin por especies, sin estudios de laboratorio. @n ms el patrn febril de los primeros das de la infeccin se asemeja al !ue se observa en las etapas incipientes de otras enfermedades bacterianas, vricas y parasitarias. .ncluso demostrar la presencia del parsito no significa obligadamente !ue el paciente tiene paludismo Epuede "aber tambin fiebre amarilla, de +assa y otras ms en sus comien&osF. +a forma ms grave, !ue el paludismo por P. falciparum Eterciana malignaF, puede mostrar un cuadro clnico muy variado !ue incluye fiebre, escalofros, sudores y cefalalgia, y evolucionar a ictericia, defectos de coagulacin, c"o!ue, insuficiencia renal y "eptica, encefalopata aguda, edema pulmonar y cerebral, coma y muerte. Es causa posible de coma y otros sntomas del sistema nervioso central como la desorientacin y el delirio, en cual!uier persona !ue "aya retornado, recientemente de una &ona tropical, El tratamiento rpido es esencial, incluso en los casos leves, por!ue pueden aparecer en forma repentina complicaciones irreversiblesD en los niAos no tratados y en los adultos no inmunes la tasa de letalidad e0cede considerablemente del 24P. EPamen de sangre +a preparacin de buenas e0tensiones sanguneas depender en gran medida de la pulcritud de los portaobjetos, as como del resto del material analtico, !ue debe de estar perfectamente lavado en alco"ol y secado, antes de preparar la e0tensin. Para preparaciones permanentes se debe utili&ar material nuevo. +a preparacin de sangre fresca debe ser suficientemente delgada para !ue no !ueden los parsitos enmascarados por las clulas sanguneas. *e coloca una gota en un porta Epudiendo diluirse con suero salinoF y se tapa con cubre para evitar la coagulacin. El anlisis de sangre fresca es prctico para la deteccin de trypanosomas y microfilarias, por su caracterstica forma de moverse. +os trypanosomas se ven con un objetivo potente y poca iluminacin. +as microfilarias se detectan con bajos aumentos. El movimiento en vivo de los parsitos atrae la atencin del observador facilitando el trabajo. Pero para su determinacin especfica es necesario reali&ar una posterior tincin permanente.

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Para el estudio de parsitos de la Malaria, ?rypanosomas, $ilarias y otros, se deben de "acer frotis, tanto finos como gruesos. @rotis! Es una capa de clulas sanguneas regularmente distribuidas. +os ,rotis delgados producen poca distorsin en la estructura morfolgica de los parsitos. *e usan para detectar la malaria, tripanosomas y microfilarias. *i la pelcula de sangre es demasiado gruesa no se ve la estructura del parsito. +os ,rotis grBesos, aun!ue producen la distorsin de los parsitos, permiten anali&ar mayor cantidad de sangre y aumentan la probabilidad de detectarlos, "aciendo el anlisis tres veces ms rpido. *in embargo, si se "acen mal resultan in@tiles. PR.CEDI/IENT. Es preferible emplear sangre perifrica Elbulo de la oreja, yema del dedoF eliminando previamente con alco"ol la grasa de la piel. +a incisin debe ser limpia y profunda, sin !ue se precise apretar la "erida para !ue sangre. +a e0tensin debe de ser rpida para evitar la coagulacin. Es preferible la sangre arterial pues la venosa distorsiona los resultados. $rotis delgado7 2. (o olvides de usar guantes !uir@rgicos como medida de bioseguridad. ;. Ca& la incisin en la yema del dedo, tal como se te recomienda al inicio 8. /oloca una gota de sangre a ; cms del e0tremo de la lmina portaobjetos 5. con el borde de otro porta contacta con la gota de sangre y deja !ue se e0tienda la sangre por la lnea de contacto. =. Bespla&a el segundo porta sobre el primero con una inclinacin de 84W "aciendo una e0tensin uniforme y fina. Beja secar al aire y tiAe. $rotis grueso7 2. *igue los pasos 2, ; y 8 del proceso anterior ;. /on la es!uina de otro porta se e0tiende la sangre con movimiento circular y un dimetro de 2= mm. 8. Beja secar y tiAe con ,iemsa 27=4 %bservacin de lminas coloreadas 2. "ora, observa lo !ue te muestra el profesor en los microscopios, si no puedes verlo ntidamente acude slo al tornillo micromtrico y grad@a el espcimen ;. %bserva el trofo&oito de %. cru&i, e identifica la forma, n@cleo, flagelo y membrana ondulante. "ora, observa los nidos de amastigotas. 8. Ca& la misma observacin con los amastigotas y promastigotas de +eis"mania. 5. "ora, observa las formas de Plasmodium viva'. %bservacin de %richomonas vaginalis7 2. Ca& un preparado en fresco con el "isopo conteniendo la secrecin vaginal y c@brelo con una laminilla ;. %bserva a 24J y luego a 54J, busca formas mviles del proto&oario. C4ESTI.NARI. 2. KLu diferencias observas entre las diferentes fases evolutivas de ?rypanosomaM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN ;. KLu es lo !ue "ace el Plasmodium en el interior del organismo "umanoM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 8. *e dice !ue +eis"mania es causante de la @lcera cutnea KLu enfermedades producen (. donovani y (. tropicaM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 5. KPor !u %. vaginalis causa sntomas slo en las mujeresM

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Marav, A.

NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN =. Menciona los diferentes vectores !ue transmiten a los parsitos "emticos y tisulares NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN .+SER6ACI.NES 3epresenta grficamente lo !ue "as observado durante el desarrollo de la prctica.

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NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN Prctica N % (ombre del lumno7NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN ,rupoNNNNNN Profesor de +aboratorioNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN /alif7NNNNNNNN

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Manual de Prcticas de Microbiologa PRCTICA N & EST4DI. PARASIT.0GIC.! 0.S TRE/AT.D.S

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.+5ETI6. Lue el alumno cono&ca la morfologa de los tremtodos y sus formas evolutivas. Lue sepa diferenciar los diferentes estadios de estos parsitos /ATERIA0ES Muestras de "gado con fascioliosis +minas portaobjetos +minas cubreobjetos #istur +minas con preparados permanentes de7 !asciola hepatica, Paragonimus sp, Schistosoma mansoni, Echinostoma. $ases evolutivas de "uevo, miracidio, redia, cercaria y metacercia Microscopio Estereoscopio INTR.D4CCIN +os trematodos o duelas, son una clase de platelmintos parsitos internos y e0ternos, tanto de vertebrados como invertebrados. Poseen ganc"os o ventosas en su parte ventral para sujetarse a las vctimasD su adaptacin parsita se "a traducido en una ausencia de rganos sensoriales, tales como los ojos. un!ue son "ermafroditas y se da la autofecundacin, algunos como los *c"istosomas presentan mac"o y "embra. En los trematodos del orden digen)ticos, durante sus diferentes estados larvarios ocupan otros tantos "ospederos diferentes Egeneralmente invertebradosF, para despus vivir en un "ospedero definitivo durante su etapa adulta Egeneralmente vertebradosF. +as duelas suelen vivir en el intestino y otras cavidades del cuerpo de otros animales Etambin en la sangreF. *e defienden de la accin de los jugos digestivos de sus "ospederos, mediante una cutcula muy resistente !ue reviste su superficie corporal. Peligros en el laboratorio Pueden encontrarse estadios infectivos de Schistosoma spp, EcercarlaF y !asciola spp. EmetacercariaF en el agua o en!uistados en plantas acuticas en acuarios !ue se utili&an en los laboratorios para mantener caracoles marinos, como "ospederos intermedios. +a penetracin de cercaria de *c"istosoma por la piel y la ingestin accidental de metacercaria son los peligros primarios. +a diseccin o el aplastamiento de caracoles infectados con *c"istosoma puede provocar la e0posicin de la piel o membranas mucosas a gotas conteniendo cercariasD adems, la metacercaria puede ser transferida inadvertidamente de las manos a la boca por los dedos o guantes tras el contacto con la vegetacin acutica contaminada o superficies de acuarios. +as tres formas ms evidentes de combatir la es!uistosomiasis son7 practicas "iginicas adecuadas, tratamiento de los "uspedes infectados y eliminacin de los caracoles. E0iste tratamiento seguro y efectivo para la mayora de las infecciones provocadas por trematodos. +os trematodos tienen un ciclo biolgico con diferentes fases !ue se representan en la figura 2.

@igBra 7 Ciclo biolIgico de los Trematodos

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PR.CEDI/IENT. *iempre debes utili&ar guantes 2. /on el bistur, "a& cortes del "gado y con una pin&a !uita un espcimen adulto de $asciola, observa su forma, color, tamaAo ;. +uego, con el mismo bistur secciona a la $asciola apro0imadamente a nivel de la ventosa ventral. 8. /on un mondadientes raspa la &ona seccionada sobre una gota de lugol contenido en una lmina portaobjetos 5. /@brelo con una laminilla y e0amina al microscopio a 24J, vers gran cantidad de "uevos del parsito, observa su tamaAo y color. %bservacin de lminas coloreadas 2. "ora, observa lo !ue te muestra el profesor en los microscopios, si no puedes verlo ntidamente acude slo al tornillo micromtrico y grad@a el espcimen ;. %bserva los adultos coloreados de $asciola, Paragonimus, *c"istosoma y Ec"inostoma, "a& diferencia entre las estructuras internas de estos adultos. 8. 3eali&a la misma observacin con las formas evolutivas7 miracidio, redia, cercaria y metacercaria. C4ESTI.NARI. 2. KLu diferencias observas entre las diferentes fases evolutivas de $asciolaM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN ;. Menciona en !u lugares del cuerpo "umano se ubican los adultos de los tremtodos estudiados NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 8. +os "uevos !ue "as separado de los adultos de $asciola Kson infecciosos para el "ombreM E0plica NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 5. KBe !u manera causa infeccin Schistosoma mansoni en el "ombreM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN =. KLu medidas preventivas das para evitar la infeccin con tremtodosM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 1 99 1

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.+SER6ACI.NES 3epresenta grficamente lo !ue "as observado durante el desarrollo de la prctica.

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PRCTICA N ' EST4DI. PARASIT.0GIC.! 0.S CEST.D.S .+5ETI6. Lue el alumno cono&ca la morfologa de los cestodos y sus formas larvarias. /ATERIA0ES Muestras de "gado con "idatidosis Muestras conservadas de adultos de tenias Materia fecal +minas portaobjetos

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+minas cubreobjetos #istur +minas con preparados permanentes de estructuras de7 %. saginata, %. solium, Cymenolepis, Ec"inococcus, Bypilidium, Bip"yllobot"rium. Microscopio Estereoscopio INTR.D4CCIN +os cestodos o tenias son platelmintos "ermafroditas con el cuerpo segmentado y desprovisto de tubo digestivo, ya !ue se alimentan directamente por smosis de los nutrientes e0istentes en el intestino del "ospedero. El cuerpo de las tenias adultas, llamado estrbilo, aplanado dorsoventralmente, est formado por una serie de segmentos, anillos o progltides Ede 8 a 5.444F, tanto ms grandes y maduros cuanto ms disten del escle0 o cabe&a, provisto de una serie de ventosas o ganc"os mediante los !ue se ad"ieren. En funcin del n@mero de anillos se diferencia en inmaduros y maduros o grvidos. +as tenias, "asta llegar al estado adulto, pueden pasar por diversas fases en un solo "ospedero E*ymenolepis nanaF o, lo !ue es ms frecuente, en diversos "ospederos intermediarios, !ue son especficos para cada cestodo. Estas fases son7 Cuevo o embriforo. %ncsfera o embrin "e0acanto. +arva !ue seg@n la especie puede ser7 /isticerco, /isticercoide, /enuro, Cidtide, Procercoide, Plerocercoide. dulto. El "ombre puede ser parasitado por cestodos adultos y en este caso, es el "ospedero definitivo, fijndose a la pared intestinal. El "ombre tambin puede ser parasitado por formas en estado larvario y en este caso es "ospedero intermediario, y las larvas pueden tener diversas locali&aciones7 "gado, pulmn, m@sculos, ojos, etc. +as tenias presentan distintos tipos de ciclos biolgicos !ue se representan en las figuras 2, ; y 8. +as infecciones producidas por cestodos son debidas a Echinococcus granulosus, %aenia solium e *ymenolepsis nana. +a va de penetracin en el organismo es por ingestin de "uevos infectivos de E. granulosus o %. solium. *. nana es un parsito cosmopolita !ue no re!uiere de un "ospedero intermediario y !ue se transmite directamente por ingestin o bien a travs de "eces infectadas de "umanos o roedores.

@igBra Ciclo biolIgico de Taenia saginata

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@igBra " Ciclo biolIgico de Taenia solium

@igBra # Ciclo biolIgico de Hymenolepis nana en las >eces de >BmanosQ LBe son el >ospedero de,initiCo de estos parsitos7

PrecaBciones recomendadas *e recomienda el uso de guantes para las operaciones !ue puedan implicar el contacto con "eces o con superficies contaminadas con "eces frescas procedentes de perros infectados con E. granulosus, de "eces procedentes de "umanos infectadas con %. solium y "eces de "umanos o roedores infectados con *ymenolepsis nana. PR.CEDI/IENT. *iempre debes utili&ar guantes 2. Prepara lminas portaobjetos con muestras de "eces como ya sabes "acerlo ;. %bserva al microscopio a 24J y 54J buscando "uevos de cestodos, grafcalos. %bservacin de lminas coloreadas

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Manual de Prcticas de Microbiologa 2.

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"ora, observa lo !ue te muestra el profesor en los microscopios, si no puedes verlo ntidamente acude slo al tornillo micromtrico y grad@a el espcimen ;. %bserva las diferentes formas de escle0 de las tenias estudiadas, grafcalos. 8. 3eali&a la misma observacin con los progltidos grvidos de las tenias mostradas, grafcalos. 5. %bserva el espcimen adulto de Ec"inococcus, grafcalo C4ESTI.NARI. 2. K/ules son las formas larvarias de los cestodos estudiadosM \ K/ules pueden estar como tales en el "ombreM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN ;. KPor !u es difcil eliminar los adultos de las tenias del tracto intestinalM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 8. KLu es la neurocisticercosis "umanaM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 5. KBe !u manera causa infeccin Bip"yllobot"rium en el "ombreM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN =. KLu medidas preventivas das para evitar la infeccin con cstodosM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN .+SER6ACI.NES 3epresenta grficamente lo !ue "as observado durante el desarrollo de la prctica.

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PRCTICA N ( EST4DI. PARASIT.0GIC.! 0.S NE/AT.D.S .+5ETI6. Lue el alumno est en condiciones de conocer y diferenciar la morfologa de los nematodos. /ATERIA0ES Materia fecal +minas portaobjetos +minas cubreobjetos Especimenes adultos de scaris y ?o0ocara conservados +minas con preparados permanentes de adultos de7 ?ric"uris, Enterobius, 'ncinarias. Microscopio Estereoscopio INTR.D4CCIN +os nematodos Ede nemas, "ilo, y oedes, similar, parecidoF son gusanos filiformes, con un e0tremo anterior provisto de papilas, ganc"os, placas o dientes Epara fijarse en los tejidos o abrirse paso en ellosF, y otro posterior, de morfologa variable. lgunas especies de nematodos son vivparas Etri!uinaF u ovivparas E*trongyloidesF, pero la mayora son ovparas. +os nematodos tienen diferentes tipos de ciclos vitales. +a mayora de ellos tienen un "ospedero definitivo, y se produce la transmisin a otro por ingestin de "uevos o de larvas, penetracin de stas a travs de la piel o las mucosas, o bien a travs de un "ospedero intermediario EartrpodoF, en el !ue sufre un ciclo ms o menos complicado. +os "uevos eliminados por las "eces, orina, esputo y piel se convierten en larvas, !ue presentan diversas mudas o fases "asta invadir al nuevo "ospedero. En algunas especies, el "uevo es la @nica forma infectante. *e "an descrito casos de infecciones asociadas al laboratorio con scaris, *trongyloides y Enterobius. Para a!uellas personas !ue estn sensibili&adas pueden representar un riesgo las reacciones alrgicas a diferentes componentes antagnicos de los nematodos, como por ejemplo antgenos en forma de aerosol de scaris. (o se conocen infecciones asociadas con animales de laboratorio, incluidos los artrpodos, pero las larvas infectivas de *trongyloides contenidas en las "eces de primates no "omnidos, representan un peligro potencial de infeccin para los cuidadores de animales y personal de laboratorio. +os "uevos y larvas en las "eces frescas de "ospederos infectados, en general, no son infecciosos. El desarrollo a etapas infecciosas puede transcurrir en perodos de un da a varias semanas. +a ingestin de "uevos infectados o la penetracin a travs de la piel de larvas infectivas representan el principal peligro.

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+os artrpodos infectados con filarias representan un peligro potencial para el personal de laboratorio. En este colectivo, con e0posiciones repetidas a antgenos de scaris en forma de aerosol, es frecuente desarrollar "ipersensibilidad. PR.CEDI/IENT. *iempre debes utili&ar guantes 2. Prepara lminas portaobjetos con muestras de "eces como ya sabes "acerlo ;. %bserva al microscopio a 24J y 54J buscando "uevos de nematodos, grafcalos. %bservacin de lminas coloreadas 2. "ora, observa lo !ue te muestra el profesor en los microscopios, si no puedes verlo ntidamente acude slo al tornillo micromtrico y grad@a el espcimen ;. %bserva los adultos de los diferentes nematodos, grafcalos. 8. %bserva el espcimen adulto de scaris y ?o0ocara, grafcalos C4ESTI.NARI. 2. KPor !u se dice !ue los nematodos son geo"elmintosM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN ;. KLu acciones patolgicas puede causar scaris en el organismo "umanoM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 8. KLu es la an!uilostomiasis y cmo se ad!uiereM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 5. KLu parsito causa la elefantiasis y de !u forma el "ombre ad!uiere la infeccinM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN =. KLu medidas preventivas das para evitar la infeccin con nematodosM NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN .+SER6ACI.NES 3epresenta grficamente lo !ue "as observado durante el desarrollo de la prctica.

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+I+0I.GRA@JA 2. ;. 8. tas, . Parasitologa /lnica. 5^ Edicin. Editorial El Mediterrneo. *antiago /"ile. 266: /orts, X. /anBal de prcticas de /icrobiolog-a. /ual!uiera de estas prcticas se puede "acer perfectamente en un laboratorio de instituto. '3+7 "ttp7GGRRR.joseacortes.comGpracticasG /orts El /icroscopio ptico compBesto. Prctica de laboratorio7 Manejo y Bso del microscopio ptico compBesto. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. *i se derrama sobre ella RRR.joseacortes.comGpracticasGmicroscopio."tm ,aitn, M , Manual de prcticas de #acteriologa ,eneral, $acultad de /iencias Lumicas, 'niversidad de /olima. 266< grficos obtenidos de7 "ttp7GGRRR.up"s.upenn.eduGbugdrugGantibioticNmanualGgram."tm Honeman E[, et.al. Biagnstico Microbiolgico, Panamericana, !uinta edicin, M0ico. 2665 +as tinciones 1 Monografias.com. TinciIn *imple7 utili&a un solo colorante. TinciIn de Gram7 4R0! RRR.monografias.comGtrabajos2=GtincionesGtinciones.s"tml MandellG BouglasG #ennet. TEnfermedades .nfecciosas, principios y prctica T 5W Edicin., Editorial Panamericana 266=. Martne&, 3. Manual de Prcticas de Microbiologa ,eneral, /entro de ,raduados e investigacin, .nstituto ?ecnolgico de Ueracru&, l668. ((. "ttp7GG"tml.rincondelvago.comGbiologiaN52."tml ((. "ttp7GG"tml.rincondelvago.comGtincion1de1gram."tml Pelc&ar, M, et.al, Elementos de Microbiologa, Mc,raR1 Cill, M0ico. 266=. Luero, . Parasitologa. Bepartamento de #iologa de %rganismos y *istemas E#%*F. "ttp7GGRRR.uniovi.esGbosG signaturasGParasitG 3os, . Parasitologa. ?abasco M0ico. ;444. '3+7 "ttp7GGRRR.monografias.comGtrabajos2;GparasGparas.s"tml ?orres, M. Parasitologa para Enfermera. Pontificia 'niversidad /atlica de /"ile. ;442. "ttp7GGescuela.med.puc.clGpaginasGudasGParasitologiaGParasitolN48."tml Oinsser, Microbiologa, Editorial Mdica Panamericana, 2:W edicin, M0ico. 2664

5. =. 9.

7.
:. 6. 24. 22. 2;. 28. 25. 2=. 29.

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