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Principios de gentica biotecnologa y salud Leccin 1: Biotecnologa, Manipulacin Gnica y Salud N 5

Mdulo: Desarrollo Objetivos de Aprendizaje

Biotecnologa, Manipulacin Gnica y Salud

1. Qu es Biotecnologa?
Desde un punto de vista amplio, el trmino biotecnologa se refiere a un conjunto de procesos mediante los cuales se manipulan organismos vivos para elaborar productos tiles. Es decir, biotecnologa es: utilizacin de organismos para elaborar productos que son de utilidad para el ser humano.

As definida, la biotecnologa no es ninguna invencin reciente, sino que forma parte del repertorio de obras de la civilizacin humana, desde hace ya muchos miles de aos. Los antiguos tracios, habitantes de lo que hoy es Bulgaria, ya fabricaban y consuman yogurt y quesos, unos 4.000 aos a.C. y de acuerdo a las evidencias arqueolgicas se cree que sumerios y egipcios fabricaban cerveza, unos 3.500 aos a.C. Ambos son productos biotecnolgicos, ya que en la fabricacin del yogurt y quesos intervienen bacterias de los gneros lactobacilos y estreptococos, mientras que en la fermentacin de la cebada, acta un hongo unicelular del tipo levadura.

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Utilizacin de procesos biotecnolgicos en el antiguo Egipto.

Elaboracin del pan en una Escultura que representa panadera del palacio del Mural que representa fabricacin de vino. una ofrenda de cerveza. faran. la

Como stos, son muchos otros los productos biotecnolgicos en los que son empleados desde la antigedad, microorganismos fermentadores que participan en la produccin de alimentos para el ser humano y los animales. El hongo de las levaduras (Saccharomyces) y las familias de lactobacilos hacen "subir" las masas en la produccin del pan, las levaduras convierten, por fermentacin, los cocimientos de cereales en cerveza, los jugos de manzana en sidra y el jugo de uvas en vino. Los estreptococos y algunas especies de lactobacilos convierten la leche en yogurt o en queso, las acetobacterias y bacterias del gnero Erwinia hacen fermentar a los granos de caf o a las hojas de t, y los

lactobacilos, convierten mediante el proceso de ensilado, a las plantas frescas, en un nutritivo forraje para los animales. Es claro que el hombre no conoca el fundamento biolgico de estos procesos, pero ya utilizaba microorganismos para producir sustancias y alimentos que son parte de la historia de la humanidad.

Con el descubrimiento de los microorganismos y el avance de los conocimientos en al rea de la bioqumica, desde inicios del siglo XX, algunos de estos procesos se industrializaron y ampliaron a otros compuestos obtenindose de las bacterias y levaduras un gran nmero de productos, como disolventes orgnicos, como el etanol o la acetona, cidos orgnicos, como el cido ctrico o el cido lctico, polisacridos como el dextrano, aminocidos, como el cido L-glutmico o la L-lisina, vitaminas, como la B-12 o la

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vitamina C, antibiticos, como la penicilina y sus derivados, o la tetraciclina, alcaloides de uso clnico, enzimas para la industria qumica, como las lipasas que se usan en los detergentes, o como las amilasas que se usan en la industria alimenticia, hormonas peptdicas y esteroides, como la 1-hidroxiprogesterona o la insulina humana, producida mediante ingeniera gentica.

Un caso aparte de gran importancia econmica en pases productores como el nuestro, es el uso de bacterias en los procesos de lixiviacin de minerales, que permiten recuperar minerales de los relaves de muy baja calidad, luego de ser procesados metablicamente por bacterias.

Aplicaciones biotecnolgicas en la actualidad

Inyeccin de insulina humana obtenida a Planchas de cobre obtenidas por lixiviacin partir de bacterias transgnicas. utilizando quimiobacterias.

2. La Biotecnologa en la Actualidad
En la actualidad, la biotecnologa pas del simple uso de los microorganismos aprovechando sus capacidades naturales para producir ciertas sustancias, a la manipulacin directa del ADN de ciertas especies, para modificarlas genticamente y as obtener productos que esas especies jams podran producir en su estado natural, lo que se ha conseguido mediante el uso de tcnicas de ingeniera gentica.

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Pero adems, hoy da la biotecnologa se ha ampliado a la produccin de otros productos biotecnolgicos, como por ejemplo, la clonacin de lneas celulares de tejidos para producir piel humana y otros rganos que an estn en desarrollo.

Se emplea biotecnologa para la produccin de tejidos o componentes de tejidos, para tratar ciertas afecciones, por ejemplo, la obtencin y uso de plaquetas y protenas de la matriz extracelular para acelerar la regeneracin de tejidos. Se usa biotecnologa en la fabricacin de prtesis o refacciones que combinan elementos biolgicos y sintticos, como vasos sanguneos, vlvulas cardiacas y algunos componentes de prtesis articulares. Tambin la biotecnologa se ha derivado a la genmica o determinacin del genoma de las especies, que ha dado pie a una serie de aplicaciones como diagnstico gentico y el seguimiento de la huella gentica, a la protemica, o estudio de las protenas y sus interacciones biolgicas y a la clonacin de organismos animales para obtener clones que pueden ser utilizados con diferentes propsitos. Finalmente, una de las ramas ms recientes de la biotecnologa es la bioinformtica, que corresponde al uso de programas computacionales para analizar y secuenciar a nivel molecular, fenmenos biolgicos muy extensos o complejos.

3. Herramientas y Tcnicas usadas en Ingeniera Gentica

El trmino ingeniera gentica se refiere a la modificacin deliberada de la informacin gentica de un organismo, cambiando parte de su ADN y modificando directamente su genoma. La ingeniera gentica se vale de varias tcnicas que se han ido descubriendo y desarrollando con el tiempo, siendo las ms importantes, la tecnologa del ADN recombinante (ADNr) y la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR).

3.1 La Tecnologa del ADN Recombinante

Con el nombre de ADN recombinante o ADNr se denomina a un conjunto de procedimientos que permiten crear molculas de ADN compuesto, formado por ADN proveniente de dos especies diferentes. Este ADN recombinante puede ser usado luego

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con diferentes fines: para identificar alteraciones genticas, para formar especies transgnicas, para terapia gnica, o para otros fines econmicos y cientficos.

Herramientas Moleculares usadas para obtener ADN Recombinante

Esta tcnica que es comn hoy en da, fue posible gracias a una serie de pequeos descubrimientos, que permitieron dar con herramientas moleculares, sin las cuales no habra sido posible realizar este proceso. Entre estas herramientas estn, los plasmidios, enzimas de restriccin, ligasas y transcriptasas inversas.

a) Los plasmidios son fragmentos cortos de ADN bacteriano (circular) extracromosomal, que suelen tener muy pocos genes. Estos fragmentos pueden incorporar genes exgenos y replicarlos como si fueran genes propios, por lo cual son tiles para clonar o amplificar genes y para usarlos como vectores para transportar genes y/o introducir genes de otras especies.
Estructura de un plasmidio

b) Las enzimas de restriccin o restrictasas son enzimas capaces de reconocer secuencias especficas de inicio y trmino de un gen por lo cual actan como verdaderas tijeras moleculares que cortan genes, dejando extremos adherentes, los cuales se pueden unir a otras secuencias 5

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tratadas con enzimas de restriccin. Estas enzimas fueron descubiertas en las bacterias a quienes les sirven para romper el ADN de los virus cuando son atacadas por bacterifagos. La enzima realiza cortes escalonados en las dos cadenas de ADN para formar extremos cohesivos o pegajosos. Los extremos cohesivos o adherentes del ADN se asocian entre s mediante apareamiento de bases (anillamiento) y la unin de los fragmentos se logra por accin de la enzima DNA ligasa.

Enzima de restriccin

c) Las ligasas son enzimas capaces de reconocer los extremos adherentes o pegajosos (A) y unir las secuencias de ADN que los poseen (B). De esta forma pueden empalmar secuencias de ADN aunque no provengan de un mismo organismo.

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d) Las transcriptasas inversas son enzimas exclusivas de los virus ARN o retrovirus y son capaces molcula de formar de una ADN (ADNc)

complementario

para que la maquinaria celular pueda replicar y transcribir la informacin viral. Al identificar un gen que se est transcribiendo, gracias a estas enzimas se puede tomar ese ARN mensajero y con ayuda de la transcriptasa, obtener una copia del gen transcrito, pero ya procesado, es decir sin intrones, ya que es la nica forma que un ADN eucarionte pueda integrarse a los plasmidios. Recuerde que los intrones son segmentos no codificantes que estn intercalados entre segmentos codificantes de los genes y que el ADN bacteriano no posee intrones.

Procedimiento para obtener ADN Recombinante

El procedimiento para obtener un ADNr final, es complejo y sigue varias etapas.

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a) La primera etapa es aislar el gen de inters. Para esto lo que generalmente se hace es usar ARNm, tratarlo con transcriptasas inversas y as obtener moldes limpios de ADNc de muchos genes distintos, a los cuales se les han eliminado los intrones (secuencias no codificantes). Hoy da tambin es posible obtener el gen directamente, a partir de ADN tratado con enzimas de restriccin, sin embargo, como este ADN contiene intrones, se usa una mquina llamada sintetizador de ADN que rene y empalma solo las secuencias de ADN codificante, para armar el ADN libre de intrones.

Sea cual sea el mtodo empleado, el paso siguiente ser aislar plasmidios, tratarlos con restrictasas para romperlos y luego introducirles los genes del ADNc o el fabricado mediante el sintetizador, obtenindose de esta forma ADN plasmidiales recombinados. Una vez obtenidos los plasmidios con ADNr (ADN recombinante), se introducen en bacterias receptoras, se cultivan, y se espera a que algunas de ellas exprese la caracterstica en cuestin. Cuando se expresa, se aslan las colonias de inters.

Hoy en da, como ya se conoce el genoma humano y de otras especies, en estos casos, no es necesario hacer todos estos procedimientos para aislar

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el gen, porque ya est identificado. Solo se toma la secuencia de ADN que contiene al gen, se lo trata con enzimas de restriccin, y mediante el sintetizador de ADN, se obtiene el ADN ya separado y libre de intrones. b) La segunda etapa es amplificar el gen. Una vez identificado y aislado el gen de inters, lo que sigue es clonarlo para obtener muchsimas copias de l, a fin de que se pueda utilizar y recombinar exitosamente despus. En el caso de haber sido identificado a partir bacterias con plasmidios recombinantes, stas se siembran para obtener nuevas colonias que solo contienen ese transgen, obtenindose de esta manera millones de copias del gen individualizado.

En caso de ser obtenido mediante el sintetizador de ADN, el gen individualizado se puede introducir en bacterias, utilizando plasmidios y proceder a multiplicarlas mediante cultivo, o bien, se puede hacer la clonacin directamente mediante la mquina de PCR.

c) La tercera etapa es inocular el gen de inters en la especie receptora . Para estos se utilizan vectores, siendo los ms comunes, los plasmidios, los csmidos, que son plasmidios que contienen ciertas secuencias de ADN de virus bacterifagos, los bacterifagos, que son virus que infectan bacterias, otros virus que infectan clulas eucariontes y micropartculas

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capaces de introducir genes al interior del ncleo, como en el caso de la biobalstica. Se trata tpicamente de pequeas molculas de ADN bien caracterizadas, que contienen reguladores y promotores de la replicacin, y al menos un origen de replicacin por lo que son capaces de replicarse en el interior del husped apropiado aunque lleven un ADN extrao o transgen, es decir, un gen de otra especie que se ha integrado al genoma de la especie receptora.

La forma ms simple y empleada para

introducir el gen es utilizando plasmidios. As por ejemplo, un plasmidio que

contienen el gen de la insulina humana

puede ser inoculado en una bacteria y est

receptora

comenzar a fabricar la insulina. Los

plasmidios tambin pueden ser incorporados a bacterias que infectan vegetales, como Agrobacterium, y de esta forma se puede introducir transgenes a los tejidos vegetales. Bacterifagos modificados con ingeniera gentica pueden ser utilizados para introducir transgenes en bacterias. Gracias a la propiedad de algunos virus de integrar su ADN al genoma de las clulas que son infectadas, tambin se pueden utilizar virus modificados genticamente para introducir transgenes, tanto en especies vegetales como animales. Por ltimo, hoy existen tcnicas que permiten introducir transgenes directamente en vulos fecundados y clulas embrionarias o de tejidos indiferenciados. La biobalstica es una de las tcnicas ms eficaces, y consiste en disparar micro proyectiles con ADN al interior de las clulas (vegetales y animales), usando pistolas que utilizan descargas elctricas o

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gas a alta presin para propulsar el ADN hacia el interior del ncleo de las clulas receptoras e integrarlo a sus cromosomas.

3.2 La Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR)

La reaccin en cadena de la polimerasa o PCR por sus siglas en ingls (polymerase chain reaction), consiste en la creacin en condiciones de laboratorio, de mltiples copias de ADN con una extraordinaria rapidez, a partir de una secuencia de ADN

seleccionado, utilizando para ello una enzima ADN polimerasa y un suministro adecuado de nucletidos de ADN. El proceso se denomina reaccin en cadena porque puede ocurrir en forma indefinida mientras haya suministros en el medio.

El desarrollo de esta tcnica fue posible gracias al descubrimiento de una enzima ADN polimerasa extraordinariamente resistente a la temperatura obtenido de la bacteria Thermus acuaticus que vive en manantiales de aguas termales. Las altas temperaturas del medio en que se realiza el proceso, permite que las dos hebras de ADN se separen sin la presencia de las enzimas que normalmente se requeriran para esta accin, ya que se separan debido a la temperatura, pero adems permite que la enzima pueda trabajar, cosa que no podra hacer una ADN polimerasa normal.

Hoy existen mquinas que permiten automatizar el proceso y se puede amplificar secuencias especficas de ADN que pueden llegar a ser menores a una millonsima parte del ADN original. Este ADN clonado o amplificado luego puede ser empleado en distintos procedimientos de inters cientfico o comercial.

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Aplicaciones de la Reaccin en Cadena de la Polimerasa

La posibilidad de clonar secuencias aunque sean muy cortas de ADN, es una herramienta invaluable para poder comparar dichas secuencias con otras secuencias conocidas a fin de establecer relaciones entre ellas. Por ejemplo, el ADN mitocondrial amplificado mediante PCR, sirvi para hacer un estudio de la evolucin de las poblaciones humanas a nivel mundial, lo que permiti establecer de donde surgimos y el camino evolutivo que sigui nuestra especie hasta la actualidad, estableciendo los patrones de dispersin y de surgimiento de las razas humanas en las distintas regiones del planeta. Gracias a la tcnica de PCR tambin se puede hacer estudios comparativos a partir de pequesimas muestras de ADN obtenidos de organismos momificados.

Otra de las aplicaciones ms utilizadas de la tcnica de PCR consiste en el rastreo de la huella de ADN un procedimiento que hoy hace posible esclarecer, desde conflictos de paternidad, hasta resolver casos criminales de homicidios y

violaciones,

identificar

secuencias

anormales en genes en desrdenes genticos, o incluso reconocer la identidad de personas a partir de restos de cuerpos que son irreconocibles por otros medios.

Esta tcnica es muy simple y consiste en obtener un conjunto de secuencias cortas de ADN obtenidas con enzimas de restriccin, las que luego son amplificadas mediante la PCR. Estas secuencias son nicas en cuanto a su tamao y por lo tanto se pueden comparar con muestras de ADN provenientes de otras fuentes. Una vez obtenidas miles de copias de las secuencias identificadas, estas se introducen en un gel de electroforesis, donde se separan en funcin de su relacin carga/tamao, dando un patrn de bandeo caracterstico que no admite error. Al hacer lo mismo con una muestra de ADN relacionada el patrn de bandeo mostrar coincidencias que

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nicamente pueden ser atribuidas a que se trata de ADN relacionado a la muestra original. As por ejemplo se resuelven los conflictos de paternidad, ya que en el hijo habr bandas que coinciden con el ADN materno, y bandas que necesariamente van a coincidir con el ADN del padre y eso no se puede alterar. Cuando el patrn de bandeo coincide con el de un virus o un gen mutado, significa que el ADN fue afectado por una infeccin viral, o se est en presencia de una mutacin o cncer; cuando el patrn de bandeo de un sospechoso coincide con el de la esperma tomada de una violacin, significa Huella gentica que delata al sospechoso 4 presencia que estamos en

del

violador;

cuando el bandeo obtenido a partir de restos de sangre o tejidos levantados en una escena del crimen coincide con el del presunto autor, no hay dudas de su autora y es prueba suficiente para condenarlo; cuando el ADN tomado de los restos de un cuerpo calcinado coincide con el de algunos de los posibles familiares de las vctimas de un atentado, tampoco hay dudas de su identificacin. As, el rastreo de la huella de ADN, hoy es una herramienta que solo puede estar limitada a la imaginacin, abrindose incluso la posibilidad de comparar ADN fosilizado con organismos presentes en la actualidad.

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