ESCUELA POLITCNICA DEL EJRCITO

CARRERA INGENIERA EN BIOTECNOLOGA

INFORME FINAL DEL PROYECTO INTEGRADOR II-B Nivel: 6to Determinacin de los efectos del aceite vegetal de higuerilla (Ricinuscomunis) sobre cocos gram positivos y bacilos gram negativos GRUPO DEL PROYECTO ANDRANGO CARLA ONOFRE EMILY
QUITO- 2012-07-11

Ttulo del proyecto

Determinacin de los efectos del aceite vegetal de higuerilla (Ricinuscomunis) sobre cocos gram positivos y bacilos gram negativos.

JUSTIFICACIN

La alelopata se define como la influencia directa de un compuesto qumico (metabolito secundario) liberado por una especie, sobre el crecimiento y desarrollo de otra. Paulatinamente la alelopata ha ido adquiriendo importancia en el campo de la investigacin, agraria, especialmente, para poder eliminar pestes como plagas, enfermedades y malas hierbas de forma natural sin afectar el medio ambiente ni al ser humano. Debido a ello queremos enfocar nuestro estudio en determinar mediante un protocolo adecuado los efectos de una sustancia de carcter anti fngico elaborada por la planta de higuerilla sobre microorganismos patgenos de los cultivos en el suelo; tales como Fusarium oxysporum. Obteniendo as una forma alternativa y natural de proporcionar a las especies vegetales mecanismos de defensa no sintticos que les ayuden a luchar contra agentes nocivos para s mismas. 3 Objeto de estudio Estudiar a la planta de higuerilla, y al hongo para poder realizar la extraccin del aceite de ricino y observar su actividad sobre el hongo mencionado. 4 Campo de actuacin El aceite extrado se puede aplicar a nivel industrial para mejorar los cultivos erradicando el hongo fcilmente 5

Objetivos General
Determinar el efecto que producen los metabolitos secundarios de higuerilla (Ricinus comunis) cuyo compuesto principal es el casbeno del ricino, sustancia con caractersticas anti fngicas, sobre gram positivos y bacilos gram negativos Especficos Aislar u obtener la cepa del hongo en el laboratorio de Microbiologa. Preparar cultivos de gram positivos y bacilos gram negativos

Obtener aceite de ricino de la higuerilla (Ricinus comunis) mediante extraccin por solventes. Aplicar el aceite de ricino sobre los hongos a diferentes concentraciones. Monitorear la reaccin de los hongos, principalmente el porcentaje de mortalidad.

Hiptesis

HO: Las propiedades anti fngicas del aceite de ricino promueven la inhibicin del crecimiento del cocos gram positivos y bacilos gram negativos Variable independiente: propiedades anti fngicas del aceite de ricino.

Variable dependiente: inhibicin del crecimiento del cocos gram positivos y bacilos gram negativos Variable interviniente: Contaminacin.

7 Metodologa Extraccin de aceite de ricino Extraccin por solventes Metodologa segn Valdez, 2003. Materiales: Semillas de higuerilla Hielo Hexano o ter de petrleo Matraz Dedal Lixiviador Soxlet Vaso de precipitacin Procedimiento: a) Introducir la muestra de almendra pura o con cscara. Para evitar que se derramare la muestra, sellar el dedal con grapas y se colocarlo en el lixiviador. b) Introducir el solvente, hexano o ter de petrleo, en el matraz y en el lixiviador manteniendo una relacin de 2:1 aproximadamente, 200 ml en el matraz y 100 ml en el lixiviador. c) Al momento de terminar de armar el Soxhlet se hace recircular agua helada (para esto se utiliza el hielo) debido a que la temperatura que alcanza el solvente al momento de evaporarse es mayor a 60 C y el agua a temperatura ambiente no alcanza a condensar todo el solvente por lo que habran prdidas considerables de solvente. d) Dejar recircular hasta que se extrajera el mximo aceite posible en la mnima cantidad de tiempo posible. e) Retirar el dedal con la muestra y obtener la mayor cantidad de solvente para reutilizarlo. f) Una vez el solvente evaporado de los matraces se procede a juntarlo en un vaso de precipitado. Aislamiento del hongo 8

Marco terico

Generalidades de la higuerilla Clasificacin Taxonmica: Segn Cronquist (1981), la clasificacin taxonmica de la higuerilla es la siguiente: Reino:Plantae Divisin:Magnoliophyta Clase:Magnoliopsida Orden:Euphorbiales Familia:Euphorbiaceae Gnero:Ricinus L. Especie:Ricinuscommunis L.

Una de las especies vegetales ms conocidas pero quizs no tan aprovechada en el Ecuador es la higuerilla (Ricinuscommunis), miembro de la familia de las Euphorbiaceae y originaria de la India y Etiopa; sus semillas son la fuente de la cual se extrae el famoso aceite de ricino. En forma silvestre se la encuentra como un rbol de varios metros de altura siempre y cuando se halle en condiciones favorables como alto grado de humedad y calor adecuado, en cultivo se la observa como un arbusto de hasta 4m de altura. (N.H Csar) Tambin conocida como palma cristi, castor, higuera infernal, tertago, higuereta, o ricino, la higuerilla tiene gran capacidad de adaptacin y hoy en da es cultivada prcticamente en todas las regiones tropicales y subtropicales, aunque sea tpica de regiones semiridas. (Arango, M)

Descripcin Botnica Segn Garcs se describe a la planta de la siguiente manera: Tallo: Engrosado, ramificado, segmentado y con nectarios extra florales. Hojas: Dimetro de 10 a 60 cm, peltada, profundamente palmatilobada, con 5 a 9 lbulos, borde irregularmente dentado-glanduloso; pecolo largo. Flores: Las flores estn dispuestas en grandes inflorescencias, erguidas, que rematan los tallos; en la parte inferior de las mismas estn las flores masculinas, con un cliz, con cinco piezas de 6 a 12 mm de largo, lanceoladas y mltiples estambres soldados, con forma de columna, ramificadas en forma de coliflor. Las flores femeninas de 4 a 8 mm de largo, se encuentran en la parte superior de la pancula, formado por tres hojas carpelares. Florece casi todo el ao Frutos y semillas: El fruto es una cpsula trilocular que contiene una semilla por lbulo de 1.5 a 2.5 cm de largo, exteriormente est recubierto por espinas o pas no punzantes, cortas y gruesas; tiene tendencia a la dehiscencia. La semilla es oval, de tamao variable entre 5 y 20 mm segn variedades. El tegumento es coriceo, liso, lustroso, marmoreado, txico por la presencia de ricina y ricinina. Porcentaje de aceite: 46%. Raz: pivotante que puede alcanzar hasta 3 m de profundidad constituyndose el anclaje principal de la planta. Presenta races secundarias numerosas y oblicuas, situadas a poca profundidad. Composicin de la semilla de higuerilla El producto activo es la ricenina que es altamente txica para el hombre y los animales, debiendo tener cuidado con los residuos de este compuesto en la extraccin del aceite. (Ramirez M.A)

Toxicidad La semilla contiene una fitotoxina proteica (la ricina) que acta previniendo la sntesis proteica en los ribosomas. Esta es considerada una de las toxinas vegetales ms potentes, pudiendo causar la

muerte a dosis muy bajas. De hecho, la dosis mnima letal para muchos mamferos por va intravenosa es de 0.0001 mg/kg; sin embargo, por va oral es menos txica, ya que no se absorbe bien. Por tanto, la toxicidad depender en gran medida de que la semilla haya sido masticada o simplemente tragada. (Villar, 2006) Adems de presentar esta toxina contiene alcaloides dainos para nuestro organismo como son la ricidina y la ricinina, con alto efecto txico que puede desencadenar desde potentes reacciones alrgicas hasta la muerte. Posee adems un potente efecto bloqueador de la sntesis de protenas en nuestro cuerpo, sobretodo a nivel intestinal, resultando un poderoso veneno. (Talamoni, 2004)

Descripcin y caracterizacin del aceite de ricino El aceite de ricino es un aceite espeso obtenido de la planta del ricino o higuerilla, de coloracin desde transparente hasta amarillo o tostado. Es inodoro y presenta un sabor desagradable. Insoluble en agua y soluble en los disolventes orgnicos. El aceite de uso medicinal se prepara a partir de las semillas peladas. El aceite de uso industrial se obtiene de las semillas sin pelar, que rinden del 45% al 55% en peso. Las semillas se prensan, y el compuesto oleaginoso que resulta se purifica decolora. Como medicina, el aceite de ricino es un laxante, pero hoy en da est en desuso porque produce una gran irritacin de la mucosa intestinal. En la industria se utiliza como lubricante en determinadas circunstancias (algunos motores de competicin), como aditivo para los compuestos de nitrocelulosa, en cosmticos, en productos para aislamiento y en la manufactura de lacas y pinturas resistentes a la humedad. (Palacio, 2001) Debido a sus propiedades antimicticas es beneficioso para combatir hongos, puesto que el cido ricinoleico encontrado en el aceite de ricino tiene un alto nivel de propiedades anti-hongos. (Garden, 2008) Caractersticas Es un lquido amarillento plido o casi incoloro, transparente y viscoso, de olor dulce y sabor generalmente nauseabundo; es un aceite no secante; soluble en alcohol, ter, benceno, cloroformo y sulfuro de carbono. La viscosidad del aceite de ricino es de 6,8 cSt a 20C. La versin oxidada y esterificada se usa como lubricante en la industria de la aviacin. (Albarraci, 2008) Composicin: El aceite de ricino est compuesto por triglicridos, especficamente cido ricinoleico en niveles superiores al 90%, y cantidades inferiores de otros cidos grasos, como el linoleico (5%), que es poliinsaturado, y los cidos grasos saturados palmtico y esterico con valores de un mximo del 2%. Tiene un contenido aceptable de vitamina E, en forma de alfa-tocoferol y una enzima llamada lipasa. (AA. VV, 2000) AcidoRicinoleico AcidoRicinico Acido Oleico Indice De Saponificacin Indice De Refraccin (25C) Densidad (15C) 70% 12% 12% 181% 1,47 0.964

Usos A nivel industrial: Se utiliza en la fabricacin de plsticos, pinturas, lubricantes y principalmente se est empezando a usarlo como biocombustible. (Osorno, 1992) A nivel farmacutico Existen algunos frmacos que son elaborados a base de aceite de ricino y que son aptos para el consumo oral como los destinados a tratar el estreimiento. No es apto para el consumo

alimentario pues si ingerimos las semillas u otras partes de la planta la toxicidad alta puede ser letal. (Garden, 2008) 9 Resultados esperados Se espera obtener un aceite de ricino viscoso y semi transparente con excelentes propiedades anti micticas, con la expectativa de un alto porcentaje de mortalidad para el hongo luego de la aplicacin del aceite de ricino. 10

Viabilidad ITEM PRESUPUESTARIO Recursos Humanos

CANTIDADES Tiempo 1 ao 1 ao 1 ao

COSTO Costo/hora ---voluntad

Ingenieros (Dra. Alma Koch) Tutores (Ing. Marco Taipe) Estudiantes (Integrantes de grupo)

Materiales Higuerilla Asa Cajas petri Medio de cultivo Fundas Plsticas Incubadora Equipo Soxhlet Vasos de precipitacin Matraz Erlenmeyer Tubos de ensayo

Cantidad

Costo

4unidades 30 unidades $ 0,50

50 unidades

$ 1,00

10 unidades 5 unidades

$ 2,00 $ 1,00

SUBTOTAL

59,00

Bibliogrficas Internet Viajes

Cantidad 15 (visitas) Numero de das

Costo $ 7,50 Costo

Alimentacin

$ 15,00

Total de gastos previstos

11 12

$ 115,50

Cronograma Bibliografa

AA. VV. 2000 Gran Enciclopedia de las plantas comestibles y venenosas. Madrid. Servilibro Acurio. R. 2010. Tcnicas de prevencin y control de Fusarium oxysporumf.sp. dianthi en clavel Dianthuscaryophyllus y su incidencia en la productividad.[En lnea] Universidad Tcnica De Ambato. Facultad De Ingeniera Agronmica. <http://repo.uta.edu.ec/bitstream/handle/123456789/1868/tesis010%20Gestin%20de%20la%20prod.%20de%20flores%20y%20Frut.....pdf?sequence=1> [Consulta: 10/01/13] AlbarraciAguillon Pedro. 2008. Lubricantes ecologicos , biodegradables y <http://www.ingenierosdelubricacion.com/articulos/lubricantes_ecologicos2.htmh>[Consultado: 03/01/2013] no toxicos.

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