AVALIAO TOXICOLGICA

Toda substncia pode ser considerada um agente txico, dependendo das condies de exposio, como dose administrada, ou absorvida, exposio (dose nica, ou mltiplas) e via de administrao. Por outro lado, todas as substncias, podem ser usadas de maneira segura, desde que as condies de exposio sejam mantidas abaixo dos nveis de tolerncia. A toxicidade de uma substncia a um organismo vivo pode ser considerada como a capacidade de lhe causar dano grave ou morte. Para que esse dano ocorra indispensvel interao do agente qumico com o organismo. Uma substncia altamente txica promover um efeito txico quando empregada em pequenas quantidades, enquanto que substncias de baixa toxicidade necessitam de altas doses para promoverem esse mesmo efeito. Os efeitos txicos produzidos por substncias qumicas em sistemas biolgicos s se manifestam se o agente txico ou um produto de sua biotranformao alcanar locais especficos do organismo em concentrao e tempo suficientes para produzir o efeito. Muitas substncias qumicas so relativamente pouco txicas em sua forma nativa, enquanto outras pela ao de enzimas do organismo so convertidas a formas intermedirias que interferem na fisiologia celular. A ocorrncia do efeito txico depende das propriedades qumicas e fsicas da substncia, da condio de exposio d suscetibilidade do sistema biolgico ou indivduo. A exposio funo da dose do agente qumico envolvido e do tempo de interao com o organismo. Os organismos vivos apresentam a capacidade de responder a variaes externas, de modo a mantes sua funo normal. Este processo, conhecidos como homeostasia, permite que organismos vivos por meio de modificaes bioqumicas, morfolgicas e de seus mecanismos fisiolgicos, se adaptem s condies adversas de exposio sem manifestao de toxicidade. Entretanti, essa capacidade limitada e quando os mecanismos de adaptao so sobre passados o efeito txico se manifesta. RELAO DOSE-RESPOSTA E CONCENTRAO-RESPOSTA O termo dose empregado para especificar a quantidade de substncia administrada a um organismo vivo, geralmente expressa por unidade de peso corpreo. Dependendo da via de adm, a dose absorvida nem sempre igual a dose administrada. A concentrao de um gradiente qumico indica as quantidades a que os organismos vivos esto expostos. A relao dose-resposta descreve a relao entre as caractersticas de exposio e o espectro de efeitos txicos. A relao dose-resposta ou concentrao-resposta representada por uma curva Gaussiana terica, raramente encontrada na prtica. Esta curva calculada estatisticamente a partir de observaes de mortalidade aps a exposio a doses/concentraes testadas, essa curva altamente utilizada para calcular a DL 50 e a CL50. Outro valor importante que pode ser derivado dessa relao a dose ou concentrao limite, ou seja, dose mnima necessria para produzir uma resposta detectvel numa populao teste. Os valores de DL50 devem ser referidos com relao a via de exposio e excipiente. Os valores obtidos referem-se sempre espcie animal que deve obrigatoriamente ser mencionada. Para o estabelecimento de uma curva dose/resposta devem ser assumidas as seguintes afirmativas:

A resposta inequivocamente devida administrao da substncia. A resposta deve de fato est relacionada com a dose A avaliao da resposta deve ser feita por mtodos quantificveis e expressar exatamente a toxicidade.

Os valores DL50/CL50 no informam sobre o tipo de curva dose/concentrao-resposta na qual se baseiam, alm disso, h necessidade de um grande nmero de animais para haver dados estatsticos precisos. Os dados obtidos na curva dose-resposta so extremamente uteis para o desenvolvimento dos testes de exposio a mdio e longo prazo. A partir da curva dose/concentrao-resposta possvel avaliar a dose mnima necessria para produzir uma resposta detectvel numa populao teste. A menor dose que produz um efeito observvel ou a dose em que no so observados efeitos txicos (NOEL) so usadas para estabelecer os padres de regulamentao. A tendncia atual substituir os experimentos de calculo da DL50/CL50 pelo teste de dose fixa. Nesse teste a substncia a ser testada adm em um animal numa dose especfica, essa dose selecionada a partir de doses previamente fixadas (tradicionalmente 500, 50 e 5 mg/kg de peso corpreo). Aps a administrao, segue-se m perodo 14 dias de observao. A dose na qual se observam sinais de toxicidade utilizada para graduar ou classificar o material testado. Recomenda-se que um grupo de 10 animais (5 machos e 5 fmeas) seja tratado com uma dose oral de 500 mg/kg. Se no houver sinais de toxicidade a substncia no ser classificada em nenhuma categoria de toxicidade, porm deve ser feito um teste com a dose de 2000mg/kg para avaliao total dos riscos. Se houver toxicidade sem morte a substncia ser classificada como nociva, se houver morte procede-se um novo teste agora com 50 mg/kg, a substncia ser classificada como txica se mesmo com sinais de toxicidade no tenha mortalidade entre os animais. Se houver morte, a substncia deve ser novamente avaliada, agora na concentrao de 5mg/Kg, agora se no houver mortalidade a substncia dever ser classificada como muito txica. TIPOS DE TESTES TOXICOLGICOS No Brasil a resoluo 1/78 do conselho nacional de sade estabelece cinco tipos de ensaios de toxicidade: aguda, subaguda, crnica, teratognia, embriotoxicidade e estudos especiais. Assim esse conjunto de testes deve ser realizado para cada nova substncia a ser utilizada ou produzida em larga escala. 2 princpios devem ser observados na realizao dos testes toxicolgicos em animais: a) O efeito ocorrido em animais deve tambm ocorrer no homem b) A exposio de animais em experimentao a altas doses de um agente txico um mtodo vlido e necessrio para a descoberta dos efeitos danosos ao homem. Os testes toxicolgicos so planejados no para mostrar que um agente qumico seguro e sim para caracterizar que tipo de efeito txico uma substncia qumica produz. Informaes preliminares

Como a toxicidade est ligada a sua estrutura qumica fundamental que a substncia em estudo seja quimicamente caracterizada. As impurezas, quando presentes devem ser conhecidas quali e quantitativamente. As propriedades fsico-qumicas devem ser determinadas, uma vez que delas vai depender o tratamento a ser dado substancia para a aplicao dos testes toxicolgicos. Devem ser includos, sempre que existirem, dentro das informaes preliminares, dados relativos aos possveis nveis de exposio a populao substncia. Estudos de toxicidade aguda Toxicidade aguda: Efeitos adversos que ocorrem dentro de um perodo curto aps a administrao de uma dose nica ou doses mltiplas dentro de 24 hs. Os estudos de toxicidade aguda tem por objetivo caracterizar a relao dose-resposta que conduz o clculo da DL50. Os resultados obtidos a partir dos estudos de toxicidade aguda servem tambm para conhecer se o mec. de ao da substncia, identificar possveis rgos ou sistemas sensveis e determinar se os efeitos so reversveis. importante avaliar no apenas a quantidade de animais mortos, mas tambm o incio, a natureza e a durao da intoxicao associada a morte. Esses estudos devem incluir, alm das observaes clnicas, exames anatomo-patolgicos, que auxiliam na caracterizao de tecidos e rgos-alvos. As substncias devem ser testadas em diferentes espcies/linhagens de animais e em ambos os sexos, pois as diferenas de resposta indicam que o efeito txico no universal. Os resultados obtidos a partir dos estudos de toxicidade aguda so empregados para o delineamento dos estudos de toxicidade subcrnica, particularmente no que refere a escolha de dose. Estudos de toxicidade subcrnica Estes estudos devem ter a durao de pelo menos 21 dias, mas o tempo mais comum do teste de 90 dias. o primeiro e muitas vezes o nico teste com doses repetidas a ser realizado para determinadas substncias qumicas. Os principais objetivos desses testes de toxicidade so: Estabelecer os nveis nos quais no se observam os efeitos txicos. Identificar e caracterizar os rgos afetados e a severidade aps exposies repetidas. Examinar os efeitos aps o perodo de tratamento e determinar se o efeito devido ao acmulo da substncia ou no. Determinar se um efeito particular necessita de testes especficos.

O teste deve ser realizado em pelo menos duas espcies animais, sendo uma no-roedora, utilizando pelo menos 3 doses. Os animais devem ser avaliados pelo menos uma vez por dia durante todo o experimento. Os parmetros mais comuns referem-se a modificaes no consumo de rao, do peso, na cor e textura dos pelos, alteraes circulatrias e respiratrias, anormalidades motoras e de comportamento e aumentos macroscpicos de massa de tecidos. Dever ser feita avaliao anatomo-patolgica. Avaliaes hematolgicas e bioqumicas no sangue, exames de urina. Os testes de toxicidade sub-crnicos geralmente no avaliam o potencial carcinognico. Estudos de toxicidade crnica

Os estudos de toxicidade crnica so realizados para se determinada o efeito txico aps exposio prolongada a doses cumulativas da substncia em teste. Observar o potencial carcinognico da substncia desde que a dose escolhida seja correta. A durao do teste deve ser superior a 3 meses, esses estudos so geralmente realizados em 2 espcies de animais (ratos e camundongos). Nos testes de toxicidade crnica os exames clnicos devem ser realizados cuidadosamente, 2 vezes por dia. Parmetros hematolgicos como hematcrito hemoglobina e contagem total e diferencial de leuccitos devem ser medidos no incio do estudo e aps 6 meses. Analise de urina e parmetros bioqumicos de sangue devem ser semelhantes aos hematolgicos. Estudos de mutagnese e carcinogenese Mutagenese refere-se a propriedade que as substncias qumicas apresentam de provocar modificaes no material genttico das clulas, de modo que estas sejam transmitidas as novas clulas durante a diviso. A principal finalidade da identificao destas propriedades reside na necessidade de se quantificar o perigo de leso do material gentico e consequentemente transmisso hereditria destas mutaes. Teste in vitro: O principal o teste desenvolvido por Ames. Os testes in vivo realizados em animais, incluem a observao de danos a cromossomas de clulas de medula ssea em metfase, o aparecimento de microncleos em linfcitos de sangue perifrico e o teste do dominante letal. Porem difcil extrapolar o resultado desses testes para o homem. Os testes de mutagenicidade so na maioria das vezes, empregados para prever o desenvolvimento de cncer, entretanto eles apenas avaliam as substancias que produzem cncer por mecanismos genotxicos. E o cncer pode ser desenvolvido tambm por citotoxidade com regenerao, acompanhada do aumento na sntese de DNA, desbalanos hormonais imunossupressores e promotores de expresso de oncogenes. Desse modo os testes de mutagnese no so suficientes pra identificar o potencial carcinognico de uma substncia. Estudos de efeitos sobre a pele e os olhos O animal de escolha geralmente o coelho (pele e olhos) e cobaia (pele) por serem mais sensveis. Draize props o teste que at hoje utilizado. So avaliados os seguintes parmetros: Pele Eritrema, escara, endema e corroso. Olhos alteraes na conjuntiva, crnea ris e cristalino.

Existem 3 tipos de teste de irritao: a) Irritao local ou aguda (resposta reversvel e local) resulta da respost de uma aplicao nica ou exposio de um agente txico. b) Irritao cumulativa resposta drmica a uma exposio repetida substncia. c) Irritao induzida fotoqupimicamente Irritao primria resultante da luz induzindo modificaes moleculares na pele exposta.