Revtox 23 2-3 2006

VoIumen 23 Nmero 2-3 (2006) CUATRIMESTRAL
ORGANO OFICIAL DE LA ASOCIACION ESPAOLA DE TOXICOLOGIA

Revista de
1oxicologia
ASOCACN ESPAOLA DE TOXCOLOGA
Rev. Toxicol. 23 (2-3) 95-160 2006
SSN 0212-7113
IncIuido en IBECS, ICYT, IME, EMBASE/ Excerta Med/ca y Chem/ca/ Abstracts
Indexed in IBECS, ICYT, IME, EMBASE/Excerpta Medica and ChemicaI Abstracts
|||p.//ae|os.es
95 95
101 101
108 108
113 113
118 118
125 125
130 130
138
138
146
146
151
151
154
156
158
154
156
158
lNDEX
Gimeno Sieres E. Study of pervivence, diffusion and productivity of the
Pevista de Toxicologia.
Gimeno Sieres E. Evaluation of the Pevista de Toxicologia in base of the
criteria of quality of LATlNDEX.
Aquino R, Barrios C, Lobos C, AIvarez A. Measurement of nicotine,
cotinine and caffeine by GC-NPD-MS in human breast milk samples of
puerperals hospitalized inLas Higueras", Talcahuano, Chile.
Romero D, Martnez-Lpez E, Hernndez-Garca A, Garca-Fernndez
AJ. Peal-time monitoring of alterations in Dap|n|a Vagna induced by
different toxic agents
Mnif W, PiIIon A, Duchesne MJ, HeIaI AN, NicoIas JC, BaIaguer P,
Bartegi A. Water and sediment waste rejected in Hamdoun`s river are major
endocrine disruptingsystem.
Navarro AR, Arrueta RG, MaIdonado MC. Use of lettuce, endive and
chicory seeds in the determination of the effect of different compounds
throughphytotoxicity assays.
Snchez-GonzIez PD, Vicente-Snchez C, ArvaIo MA, Prez-
BarriocanaI F, Lpez-Novoa JM, MoraIes AI. Pole of Pas signalling
pathway in a model of cadmium-induced nephrotoxicity. Protective effect of
the antioxidant quercetin.
Hermoso de Mendoza M, SoIer F, Hernndez-Moreno D, GaIIego ME,
Lpez-Beceiro A, Prez-Lpez M. Comparative study of heavy metal and
metalloid hepatic levels indiurnal raptors fromGalicia and Extremadura.
Andreotti C, Gagneten AM. Ecotoxicological effects of sediments of low
Salado river (Argentina) on survival and reproduction of Vo|na m|c|0|a
(Crustacea, Cladocera).
Cardona M, Montori E, Nogu S. Cocaine body-packer: A false negative
abominal radiography.
Gutirrez-Ca I, Obn B, ViIIanueva B, Montoiro R, Moragrega B.
Phabdomyolysis due to multifactorial causes inwater intoxicationpatient.
Garriga S, MonteroM, NoguS. Spider bite by /ososce|es |0/escens.
Resumen deI Congreso InternacionaI de ToxicoIoga y Seguridad
Qumica y XII Congreso de Ia Asociacin Latinoamericana de
ToxicoIoga ALATOX
lNDlCE
Gimeno Sieres E. Anlisis de la pervivencia, difusin y productividad de la
Pevista de Toxicologia
Gimeno Sieres E. Evaluacin de la Pevista de Toxicologia segn los
criterios de calidad de LATlNDEX
Aquino R, Barrios C, Lobos C y AIvarez A. Determinacin de nicotina,
cotinina y cafeina por CG-NPD-EM en leche materna de purperas
atendidas enel hospital Las Higueras", Talcahuano, Chile.
Romero D, Martnez-Lpez E, Hernndez-Garca A y Garca-Fernndez
AJ. valoracin de las alteraciones provocadas por diferentes agentes
txicos sobre Dap|n|a magna a travs de unensayo online".
Mnif W, PiIIon A, Duchesne MJ, HeIaI AN, NicoIas JC, BaIaguer P y
Bartegi A. Las aguas y sedimentos del rio tunecino Hamdoun presentan
riesgo de disrupcinendocrina.
Navarro AR, Arrueta RG y MaIdonado MC. Determinacion del efecto de
diferentes compuestos a travs de ensayos de fitotoxicidad usando semillas
de lechuga, escarola y achicoria.
BarriocanaI F, Lpez-Novoa JM y MoraIes AI. Papel de la via de Pas en un
modelo de nefrotoxicidad inducida por cadmio. Efecto protector del
antioxidante quercetina.
Lpez-Beceiro Ay Prez-Lpez M. Estudio comparativo del nivel heptico
de metales pesados y metaloides en aves rapaces diurnas de Galicia y
Extremadura.
Andreotti C y Gagneten AM. Efectos ecotoxicolgicos del sedimento del
rio Salado inferior (Argentina) en la supervivencia y reproduccin de Vo|na
m|c|0|a (Crustacea, Cladocera).
Cardona M, Montori E y Nogu S. Body-packer de cocaina: falso negativo
de una exploracinradiolgica
Gutirrez-Ca I, Obn B, ViIIanueva B, Montoiro R y Moragrega B.
Pabdomiolisis de origenmultifactorial enpaciente conintoxicacinacuosa
Garriga S, MonteroM y NoguS. Picadura por /ososce|es P0/escens
ToxicoIoga ALATOX
Pevista de
1oxicologia
RGANO OFICIAL DE LA ASOCIACIN ESPAOLA DE TOXICOLOGA
La Revista de ToxicoIoga pretende ofrecer a sus

lectores (cientificos, docentes, profesionales y estudiosos)
informacin actualizada sobre los avances ms recientes en
Toxicologia. Dedica especial atencin a los estudios
relacionados con los efectos de las sustancias quimicas y los
mecanismos de toxicidad, mediante ensayos en animales de
experimentacin, mtodos alternativos in vitro y estudios en
humanos. Tambin incluye estudios sobre nuevas sustancias
y tcnicas analiticas. Otro aspecto importante de la revista son
los articulos de revisin, especialmente en temas de
Toxi col ogi a Fundament al , Toxi col ogi a Cl i ni ca
Genotoxicologia, Toxicologia Ambiental, etc.
ASOClAClN ESPANOLA DETOXlCOLOGlA
ResumenactuaI decaractersticas y normativas
El objetivo fundamental de la Asociacin Espaola de
Toxicologia es el de propiciar la relacin y cooperacin entre
sus miembros, y coordinar sus esfuerzos a fin de contribuir al
desarrollo y difusin de los conocimientos en las diferentes
reas de la toxicologia. Su Estatuto fundacional fue aprobado
oficialmente el 15 de enero de 1980.
Toda persona interesada en pertenecer a esta
Asociacin deber cumplimentar una ficha de inscripcin,
refrendada por la Junta Directiva. La cuota anual (56 6) se
abona por domiciliacin bancaria, Esta cuota da derecho a la
recepcin de la Pevista de Toxicologia". Una vez admitidos
los nuevos asociados recibirn un titulo y, peridicamente, las
actas de las reuniones y comunicacin de actividades con
carcter nacional e internacional que puedenser de inters.
La asociacin promueve la celebracin, cada dos
aos, del Congreso Espaol de Toxicologia, cuya
organizacin puede delegar. Adems se ha establecido la
celebracin peridica de seminarios o mesas redondas
organizados por grupos de trabajo. Cada reunin de este tipo
ser monotemtica y abierta a personas no pertenecientes a la
Asociacin, y se desarrollar en diferentes ciudades
espaolas.
La Asociacin organiza tambin programas de
control de calidad enToxicologia Analitica.
AsociacinEspaoIa deToxicoIoga
Secretaria de la AET
Universidad Miguel Hernndez
Edificio vinalop
Avda. Ferrocarril, s/n.
03202 Elche (Alicante)
e-mail: aetox@umh.es
Copyright
El envio de un manuscrito implica: que no ha sido
publicado anteriormente (excepto como abstract, o como
parte de una conferencia, revisin tesis); que no est
considerndose su publicacin en otra revista, libro, etc.; que
su publicacin ha sido aprobada por todos los coautores, si
los hay; que, cuando y si el manuscrito es aceptado para su
publicacin, los autores estn de acuerdo en la cesin
automtica del Copyright a la editorial y que el manuscrito no
ser publicado en ninguna otra parte ni en ningn otro idioma
sinpermiso de la editorial.
Todos los articulos publicados en esta revista estn
protegidos por Copyright, que cubre los derechos exclusivos
de reproduccin y distribucin del articulo (p. ej. como
separatas) y tambin los derechos de traduccin, Ningn
contenido de la revista puede ser reproducido. fotocopiado,
microfilmado o almacenado en bases de datos electrnicas,
videodiscos, etc., sin el permiso escrito de los titulares del
Copyright.
El uso de nombres descriptivos, de marcas, marcas
registradas, etc., incluso si no se identifican especialmente, no
implica que estos nombres no estn protegidos por las leyes y
regulaciones correspondientes.
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esac|a j te|dade|a en |a /ec|a de p0o||cac|on, n| |a ed||o||a|, n|
e| d||ec|o| de |a |et|s|a, n| |os a0|o|es p0eden acep|a| n|ng0na
|esponsao|||dad |ega| po| e||o|es 0 om|s|ones q0e p0edan
acaece|.
Los trabajos se enviarn por e-mail a la editora de la
Pevista de Toxicologia:
Dra. M del Prado Miguez Santiyn
Universidad de Extremadura.
Avda. de la Universidad, s/n.
10071 CCEPES (ESPANA)
E-mail: revtoxicol@unex.es
Fax: (+34) 927 257 110
InformacinSuscripcin
Para los miembros de la Asociacin Espaola de
Toxicologia la suscripcin est incluida en la cuota de socio de
56 6.
Suscripcinanual:
Espaa: 54 6. ms 1,50 6. gastos de envio.
Extranjero: 54 6. ms 8,26 6. gastos de envio.
D.L.: CO-723-83.
S.V.: 91051R.
ISSN: 0212-7113
INCLUIDA EN IBECS, ICYT, IME, EMBASE/ Excerta Med/ca y Chem/ca/ Abstracts
Revista de
1oxicologia
|||p.//ae|os.es

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SSN 0212-7113
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IncIuido en IBECS, ICYT, IME, EMBASE/ Excerta Med/ca y Chem/ca/ Abstracts
Indexed in IBECS, ICYT, IME, EMBASE/Excerpta Medica and ChemicaI Abstracts
95 95
101 101
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lNDEX
Gimeno Sieres E. Study of pervivence, diffusion and productivity of the
Pevista de Toxicologia.
Gimeno Sieres E. Evaluation of the Pevista de Toxicologia in base of the
criteria of quality of LATlNDEX.
Aquino R, Barrios C, Lobos C, AIvarez A. Measurement of nicotine,
cotinine and caffeine by GC-NPD-MS in human breast milk samples of
puerperals hospitalized inLas Higueras", Talcahuano, Chile.
Romero D, Martnez-Lpez E, Hernndez-Garca A, Garca-Fernndez
AJ. Peal-time monitoring of alterations in Dap|n|a Vagna induced by
different toxic agents
Mnif W, PiIIon A, Duchesne MJ, HeIaI AN, NicoIas JC, BaIaguer P,
Bartegi A. Water and sediment waste rejected in Hamdoun`s river are major
endocrine disruptingsystem.
Navarro AR, Arrueta RG, MaIdonado MC. Use of lettuce, endive and
chicory seeds in the determination of the effect of different compounds
throughphytotoxicity assays.
BarriocanaI F, Lpez-Novoa JM, MoraIes AI. Pole of Pas signalling
pathway in a model of cadmium-induced nephrotoxicity. Protective effect of
the antioxidant quercetin.
Lpez-Beceiro A, Prez-Lpez M. Comparative study of heavy metal and
metalloid hepatic levels indiurnal raptors fromGalicia and Extremadura.
Andreotti C, Gagneten AM. Ecotoxicological effects of sediments of low
Salado river (Argentina) on survival and reproduction of Vo|na m|c|0|a
(Crustacea, Cladocera).
Cardona M, Montori E, Nogu S. Cocaine body-packer: A false negative
abominal radiography.
Gutirrez-Ca I, Obn B, ViIIanueva B, Montoiro R, Moragrega B.
Phabdomyolysis due to multifactorial causes inwater intoxicationpatient.
Garriga S, MonteroM, NoguS. Spider bite by /ososce|es |0/escens.
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Gimeno Sieres E. Anlisis de la pervivencia, difusin y productividad de la
Pevista de Toxicologia
Gimeno Sieres E. Evaluacin de la Pevista de Toxicologia segn los
criterios de calidad de LATlNDEX
Aquino R, Barrios C, Lobos C y AIvarez A. Determinacin de nicotina,
cotinina y cafeina por CG-NPD-EM en leche materna de purperas
atendidas enel hospital Las Higueras", Talcahuano, Chile.
Romero D, Martnez-Lpez E, Hernndez-Garca A y Garca-Fernndez
AJ. valoracin de las alteraciones provocadas por diferentes agentes
txicos sobre Dap|n|a magna a travs de unensayo online".
Mnif W, PiIIon A, Duchesne MJ, HeIaI AN, NicoIas JC, BaIaguer P y
Bartegi A. Las aguas y sedimentos del rio tunecino Hamdoun presentan
riesgo de disrupcinendocrina.
Navarro AR, Arrueta RG y MaIdonado MC. Determinacion del efecto de
diferentes compuestos a travs de ensayos de fitotoxicidad usando semillas
de lechuga, escarola y achicoria.
BarriocanaI F, Lpez-Novoa JM y MoraIes AI. Papel de la via de Pas en un
modelo de nefrotoxicidad inducida por cadmio. Efecto protector del
antioxidante quercetina.
Lpez-Beceiro Ay Prez-Lpez M. Estudio comparativo del nivel heptico
de metales pesados y metaloides en aves rapaces diurnas de Galicia y
Extremadura.
Andreotti C y Gagneten AM. Efectos ecotoxicolgicos del sedimento del
rio Salado inferior (Argentina) en la supervivencia y reproduccin de Vo|na
m|c|0|a (Crustacea, Cladocera).
Cardona M, Montori E y Nogu S. Body-packer de cocaina: falso negativo
de una exploracinradiolgica
Gutirrez-Ca I, Obn B, ViIIanueva B, Montoiro R y Moragrega B.
Pabdomiolisis de origenmultifactorial enpaciente conintoxicacinacuosa
Garriga S, MonteroM y NoguS. Picadura por /ososce|es P0/escens
ToxicoIoga ALATOX
Revista de
1oxicologia
COMIT DE REDACCIN
Editora
Dra. M DEL PPADO MlGUEZ SANTlYN
Universidad de Extremadura. CCEPES
E-mail: mpmiguez@unex.es
Editora Adjunta
Dra. ADELA LPEZ DE CEPAlN SALSAMENDl
Universidad de Navarra. PAMPLONA
E-mail: acerain@unav.es
Comit EditoriaI
Dr CAPLOS BAPPlOS GUEPPA
Universidad de Concepcin. CONCEPClN (CHlLE)
Dra. vlCTOPlA CAPPEPA GONZLEZ
Universidad Miguel Hernndez. ELCHE
E-mail: v,carrera@umh.es y aetox@umh.es
Dra. M TEPESA CONTPEPAS MONTEPO
lnstituto Nacional de Toxicologia. BAPCELONA
E-mail: teresa.contreras@mju.es
Dr. DAPlO CPDOBA PALAClO
MEDELLlN (COLOMBlA)
Dr. EDUAPDO DE LA PENA DE TOPPES
Consejo Superior de lnvestigaciones Cientificas. MADPlD
E-mail: epena@ccma.csic.es
Dr. ANTONlO DUENAS LAlTA
Universidad de valladolid. vALLADOLlD
E-mail: aduenas.laita@fcu.es
Dra. GUlLLEPMlNA FONT PPEZ
Universidad de valencia. vALENClA
E-mail: font@uv.es
Dr. ANTONlO JUAN GAPClA FEPNNDEZ
Universidad de Murcia. MUPClA
E-mail: ajgf@fcu.um.es
Dr. DlEGO GONZLEZ MACHlN
CEPlS/OPS
LlMA (PEP)
Dra. M JOS GONZLEZ MUNOZ
Universidad de Alcal. MADPlD
E-mail: mariajose.gonzalez@uah.es
Dr. CAPLOS GOTELLl
Centro de lnvestigaciones Toxicolgicas
BUENOS AlPES (APGENTlNA)
Dr. ANTONlO HEPNNDEZ JEPEZ
Universidad de Granada. GPANADA
E-mail: ajerez@ugr.es
Dr. GUlLLEPMO PEPETTO KUHN
lnstituto Nacional de Toxicologia. SEvlLLA
E-mail: repetto@us.es
Dr. JOS PUEFF
Universidad Libre de Lisboa. LlSBOA
Dr MlGUEL ANGEL SOGOPB
Universidad Miguel Hernndez. ELCHE
E-mail: msogorb@umh.es
Dr. FPANClSCO SOLEP PODPlGUEZ
Universidad de Extremadura. CACEPES
E-mail: solertox@unex.es
Dr. ALBEPT vlNGUT LPEZ
lnstituto Nacional de Toxicologia. BAPCELONA
E-mail: albertvingut@mju.es
Rev. Toxicol. (2006) 23: 95-100
95
strategy search Ior the recovery oI the inIormation in each one oI the
data bases were used. According to the obtained results, it is possible
to consider that the Revista de Toxicologia, with 20 years oI use and
one remarkable diIIusion in the analyzed data bases, occupies a
preIerred place between the scientiIic journals oI its same discipline.
Key words: Bibliometry, Bibliometric indicators, Toxicology,
Pharmacology, Revista de Toxicologia, Spanish journals,
Documental analyse.
Introduccin
El gran tamao de la ciencia actual y su rapido y progresivo
crecimiento ha traido, como consecuencia, una transIormacion en el
proceso de la comunicacion, debido al gran aumento de inIormacion
que, a la par, es generada por aquella |1|.
Debido al gran numero de revistas que nacen en el campo de las
Ciencias de la Salud, y como medio de evitar la dispersion que
muchas veces se produce, se hace necesaria una canalizacion de toda
esta inIormacion a traves de su almacenamiento en revistas
cientiIicas, dando lugar a catalogos colectivos, repertorios y, desde
mas recientemente, en bases de datos especializadas |2|. Toda la
inIormacion recogida no seria util sin una ordenacion de la misma; asi
nacio el analisis bibliometrico, que estudia el tamao, crecimiento y
distribucion de los documentos cientiIicos, mediante unos
parametros llamados indicadores bibliometricos, tales como la
pervivencia, circulacion, productividad, numero de citas, Iactor de
impacto, indice de inmediatez, obsolescencia y semiperiodo |3|.
Partiendo de la inIormacion recogida para la elaboracion de la tesis
doctoral, arriba mencionada, se han extraido los datos de este trabajo,
cuyo objetivo es el estudio de algunos de los indicadores
bibliometricos de la Revista de Toxicologia, asi como el estudio
comparativo de la misma con un grupo de revistas encontradas como
resultado de la busqueda bibliograIica. Para ello se han estudiado tres
de los parametros o indicadores bibliometricos arriba indicados
como:
-Pervivencia
-Circulacion de la revista en bases de datos nacionales e
internacionales
-Productividad o distribucion del numero de articulos/ao, en cada
base de datos analizada
La realizacion de este trabajo se hace necesaria, ya que la inIormacion
cientiIica, y en especial en el campo Iarmaceutico y toxicologico, esta
Resumen: El objetivo principal de este trabajo es el estudio de
algunos de los indicadores bibliometricos de la revista Revista de
Toxicologia hasta el ao 2003, tales como la pervivencia, circulacion
y productividad; para ello se han eIectuado revisiones en los
directorios de publicaciones periodicas ISSN(International Standard
Serial Number / Numero Internacional Normalizado de
Publicaciones Seriadas), el ULRICH'S (Periodicals Directory), y la
CDU (ClasiIicacion Decimal Universal), asi como en bases de datos
especializadas, nacionales e internacionales; como nacionales, el
IME ( Indice Medico Espaol) e ICYT (Indice Espaol de Ciencia y
Tecnologia) y como internacionales el IPA (International
Pharmaceutical Abstracts), SCI Expanded (Science Citation Index
Expanded), MEDLINE (Index Medicus), EMBASE (Excerpta
Medica), BIOSIS PREVIEWS, ANALYTICAL ABSTRACTS,
FSTA (Food Science and Technology Abstracts), SCIFINDER
SCHOLAR y CHEMISTRY CITATION INDEX, empleandose la
adecuada estrategia de busqueda para recuperar la inIormacion en
cada una de las bases de datos utilizada. Segun los resultados
obtenidos, se puede considerar que la Revista de Toxicologia, con 20
aos de vigencia y una notable diIusion en las bases de datos
analizadas, ocupa un lugar preIerente entre las revistas cientiIicas de
su misma disciplina.
Palabras clave: Bibliometria, Indicadores bibliometricos,
Toxicologia, Farmacologia, Revista de Toxicologia, Publicaciones
espaolas, Analisis documental.
Abstract: Study of pervivence, diffusion and productivity of the
Revista de Toxicologa. The primary objective oI this work was the
study oI some oI the bibliometric indicators oI the Revista de
Toxicologia until year 2003, such as the pervivence, diIIusion and the
productivity; Ior it revisions in the Iollowing periodic publication
directories were carried out; the ISSN (International Standard Serial
Number / Numero Internacional Normalizado de Publicaciones
Seriadas) and ULRICH'S (Periodicals Directory), were reviewed;
also the CDU(ClassiIication Universal Decimal), as well as national
and international data bases; as national data bases, IME (Indice
Medico Espaol) and ICYT (Indice Espaol de Ciencia y
Tecnologia), and as international data bases, IPA (International
Pharmaceutical Abstracts), SCI Expanded (Science Citation Index
Expanded), MEDLINE (Index Medicus), EMBASE (Excerpta
Medica), BIOSIS PREVIEWS, ANALYTICAL ABSTRACTS,
FSTA (Food Science and Technology Abstracts), SCIFINDER
SCHOLAR and CHEMISTRY CITATION INDEX. The suitable
Gimeno Sieres E*
Instituto de Historia de la Ciencia y Documentacion Lopez Piero (UNIV-CSIC). Unidad de Bibliometria.
Avda Blasco Ibaez, 15. 46010-Valencia.
Recibido 10 de Mayo de 2006 / Aceptado 4 de Julio de 2006
Anlisis de la pervivencia, difusin y
productividad de la Revista de Toxicologa
*e-mail: Elvira.Gimenouv.es
intimamente relacionada con la industria, la cual se nutre de aquella,
consolidandose como elemento indispensable en la gestion
empresarial y cientiIica.
Material y mtodos
Para la realizacion de este trabajo, se ha tomando como periodo de
tiempo, desde el ao que aparecio la primera revista de Farmacia, es
decir el ao 1821, hasta el ao 2003, y se ha partido del estudio de las
Iuentes de InIormacion siguientes :
-Comodirectorios de publicaciones periodicas: ISSNy ULRICH'S
-Comobases de datos nacionales: IME, ICYT
-Como bases de datos internacionales: IPA, SCI EXPANDED,
MEDLINE, EMBASE, BIOSIS PREVIEWS, ANALYTICAL
ABSTRACTS, SCIFINDER SCHOLAR, FSTA y CHEMISTRY
CITATIONINDEX.
-Como sistema de clasiIicacion por materia, el de la CDU,
ClasiIicacionDecimal Universal.
Se tomo como criterio prioritario el de la base de datos ISSN, por ser
un directorio exclusivamente de revistas seriadas, y donde se
encontrola mayor inIormacion requerida para este trabajo.
Para el posterior estudio documental y bibliometrico de la revista, se
consultaron las diIerentes bases de datos arriba mencionadas. El
analisis bibliometrico de la revista consistio en el estudio exhaustivo
y aplicacion de los indicadores bibliometricos, tales como la
pervivencia, circulacion y productividad, en relacion, siempre con las
demas revistas encontradas.
La pervivencia es el resultado de calcular la diIerencia entre el ao de
cese, si hubiera cesado, o el ao actual de vigencia y el de su
Iundacion. Se hizo un estudio de este indicador comparandolo con el
de 704 revistas encontradas en este trabajo, para lo que se hizo una
distribucion entre los aos de pervivencia, desde 1 ao hasta 108
aos, que son los encontrados para estas revistas y el numero de
revistas desde 77 hasta 1, respectivamente, en ese orden; se vio la
relacion existente entre los aos de pervivencia (n) de las revistas y el
numerode revistas con (n) aos de pervivencia.
La circulacion de la revista Revista de Toxicologia se ha estudiado a
traves de las bases de datos arriba mencionadas.
La productividad o distribucion de articulos por ao, es otro de los
importantes indicadores estudiados en este trabajo; se calcularon los
articulos aparecidos en la revista por cada ao de circulacion de la
misma en cada una de las bases de datos mencionadas, pero se daran
los datos globales del periodo analizado.
Base de datos ISSN
El ISSN (International Standard Serial Number / Numero
Internacional Normalizado de Publicaciones Seriadas), es el codigo
internacional de identiIicacion de las publicaciones seriadas
(revistas, periodicos, boletines, anuarios, monograIias). El numero
ISSN identiIica, sin errores, la publicacion seriada a la que va
asociado. El numero ISSN esta asociado, indisolublemente, al titulo
de la publicacion, de manera que un cambio en el titulo o en el soporte
del contenido (papel, CD, electronico, traducciones), implica la
asignacion de un nuevo numero de ISSN, muriendo, asi una revista y
naciendo otra nueva, simultaneamente. En Espaa, la base de datos
ISSN, es producida por el Centro Nacional Espaol ISDS, Iundado en
1978; la sede principal esta en Paris.
Rev. Toxicol. (2006) 23: 95-100
96
Perfil de busqueda en los repertorios de publicaciones periodicas
ISSNy ULRICHS
La recuperacion de Revista de Toxicologia, entre las demas revistas
encontradas, 704 en total, se debio a los descriptores siguientes:
Descriptores principales: ESP, *FARM *, *PHARM* y TOXICOL*
Se empleo un segundo perIil de busqueda empleando el codigo del
pais de edicion y el numero de la ClasiIicacion Decimal Universal,
que para Farmacia, Farmacologia y Toxicologia es 615, con los
descriptores: ESPy *615*
Bases de datos nacionales anali:adas, IME. Indice Medico Espaol,
e ICYT. Indice Espaol de Ciencia y Tecnologia
a) IME. Indice Medico Espaol
La base de datos IME, Indice Medico Espaol, es un repertorio
bibliograIico que recoge y analiza actualmente alrededor de 450
revistas cientiIicas espaolas en materia medica, tanto de medicina
clinica como experimental, entre las que se encuentra Revista de
Toxicologia. El IME es una de las bases de datos distribuidas por el
CINDOC, del Consejo Superior de Investigaciones CientiIicas.
Fundado por Jose Maria Lopez Piero en 1965, suIrio varios cambios
de nombre pasando a llamarse Centro de InIormacion y
Documentacion en Biomedicina en 1975, al Iormar parte de los tres
Institutos del CENIDOC, del Consejo Superior de Investigaciones
CientiIicas. En 1971 se creo la base de datos IME, que analizo,
durante aquel ao, alrededor de 4.000 articulos; incluye articulos de
todas las areas de las Ciencias de la Salud (medicina, enIermeria,
salud publica, administracion sanitaria, Iarmacia clinica y
hospitalaria, drogodependencias, etc), siendo su area de cobertura,
desde 1969 hasta 2006, de alrededor de 246.000 articulos.
b) ICYT. Indice Espaol de Ciencia y Tecnologia
La base de datos ICYT, cuya version impresa Iue el Indice Espaol de
Ciencia y Tecnologia, constituye, junto con el IME y el ISOC
(Instituto de Ciencias Sociales y Humanidades), una de las tres bases
de datos del CINDOC (Centro de InIormacion y Documentacion
CientiIica), organismos del Consejo Superior de Investigaciones
CientiIicas, encargado de analizar, recopilar, diIundir y potenciar la
inIormacion cientiIica en todas las areas del conocimiento. El ICYT
inicia en 1979 el Indice Espaol de Ciencia y Tecnologia; el area de
cobertura es de alrededor de 750 revistas espaolas y de 164.000
articulos, en materia de agronomia, astronomia, ciencias de la vida,
ciencias de la tierra y el espacio, Iarmacologia, Iisica y matematicas.
Bases de datos internacionales anali:adas
a) EMBASE. Excerpta Medica data BASE
La base de datos Excerpta Medica, version impresa del EMBASE,
esta producida por Elsevier Science Publishers, en Holanda; es la
mayor base de datos biomedica y Iarmaceutica; se creo en 1947;
existe en versiones CD-ROM y on-line. La base de datos EMBASE
esta Iormada por cerca de 20 secciones que comprenden materias de
investigacion de medicamentos, medicina clinica, salud publica,
drogodependencias, Iarmacologia, Iisioterapia, rehabilitacion,
pediatria, psiquiatria, virologia, toxicologia, y otras ciencias
biomedicas. EMBASE on-line tiene una cobertura de 4.600 revistas,
de mas de 70 paises, y 16.000.000 articulos recogidos desde 1979.
Para este trabajo se empleo la seccion EMBASE: Drugs &
Pharmacology, cuya cobertura es, exclusivamente, materias de
Iarmacia, Iarmacologia y aIines, con 3.710.000registros desde 1980.
b) SCIFINDERSCHOLAR
La base de datos SCIFINDER SCHOLAR es la version on-line de la
Gimeno Sieres E
Resultados
La pervivencia de Revista de Toxicologia, Iundada en 1983, es de 20
aos hasta 2003, ao que se ha acotado como tope para realizar este
trabajo. Se presenta una curva en la que aparece esta revista, junto a
otras revistas cientiIicas de Farmacia y Farmacologia y Toxicologia y
se ha hecho una distribucion del numero de revistas totales
encontradas, con n aos de pervivencia, por n aos de pervivencia de
las mismas.
En la tabla 1 se ven reIlejados estos dos parametros para cada revista;
si se divide el numero de revistas de la tabla 1 en cuatro grupos, se
puede observar que las que tienen mayor numero de aos de
pervivencia (~59 aos), se encuentran en menor numero; las de
pervivencia entre 59 a 21 aos, estan por el orden de entre 1 a 5
revistas; en el tercer grupo, revistas con pervivencia entre 20 a 14
aos, entre las que se encuentra Revista de Toxicologia, con un
incremento en su numero entre 6 y 17 revistas, y, Iinalmente, el cuarto
grupo, Iormado por revistas con aos de pervivencia de 13 a 1, en
mayor numero, entre 21 y 77 revistas. Ello es indicativo de que las
revistas, a lo largo del tiempo, cumplen una Iuncion exponencial del
crecimiento; las revistas con un numero de pervivencia elevado, se
encuentran en menor numero, mientras que se incrementan las de
pervivencia menor |15|.
Queda reIlejada esta distribucion en el graIico 1 en la que se ha
sealado con un * la zona de abscisas con pervivencia 20,
correspondiente a Revista de Toxicologia; hay un numero de revistas
de pervivencia intermedia, con tendencia a ir creciendo, debido al
nacimiento de nuevas revistas, por un lado, y al cese de otras, que van
quedando obsoletas, de otro.
impresa Chemical Abstracts. Su productor es la American Chemical
Society (CAS), en Columbus, Ohio, Estados Unidos; Iue creada en
1907. SCIFINDERSCHOLARincluye 8.000 revistas de 150 paises y
alrededor de 16.000.000 de registros. La base de datos SCIFINDER
SCHOLAR, esta Iormada por la combinacion del Chemical Abstracts
(desde 1967) y la base MEDLINE (desde 1958), de la National
Library oI Medicine, en materia relativa a quimica, basicamente.
Analisis de la Revista de Toxicologia en las demas bases de datos
estudiadas
No se encontro circulante en el resto de las bases de datos, a saber IPA,
Science Citation Index Expanded, BIOSIS PREVIEWS,
ANALYTICAL ABSTRACTS, FSTA, MEDLINE y CHEMISTRY
CITATIONINDEX|4-8|.
CDU. ClasificacionDecimal Universal.
Es un sistema de clasiIicacion de materias por jerarquias que goza de
las caracteristicas de ser universal, por abarcar todas las ramas del
conocimiento; ser una clasiIicacion por aspectos, pues relaciona
aspectos secundarios con uno principal; y ser jerarquica, porque se
puede subdividir sucesivas veces. En la CDU se constituyen tablas
por bloques de materias y se da una enumeracion que es del 0 al 9 en
las tablas principales, correspondiendo el 6 a Ciencias Aplicadas.
Medicina. Tecnica, siendo 615 el que corresponde a Farmacologia,
Terapeutica yToxicologia |9|.
Recuperacion de la informacion en bases de datos nacionales, IME e
ICYT. Metodos empleados
Se obtuvieron los datos mediante la conexion a la web del CINDOC,
del Consejo Superior de Investigaciones CientiIicas, en la URL:
http://cindoc.csic.es. , y pinchando en bases de datos, se selecciono la
opcion Revistas de Biomedicina, del Directorio de Revistas,
visualizando, una a una, todas las revistas alli vaciadas; para
recuperar los articulos publicados en cada revista, por ao, se accedio
a la opcion base de datos IME , seleccionando la revista en un campo
para ello y el ao de publicacion, en otro campo ex proIeso para ello.
Se opero de la misma manera para encontrar los datos en ICYT |10-
12|.
Recuperacion de la informacion en bases internacionales. EMBASE
y SCIFINDER SCHOLAR
De las 9 bases de datos internacionales consultadas, la revista Revista
de Toxicologia aparecio circulante en EMBASE y en SCIFINDER
SCHOLAR; se puede acceder de manera gratuita a las dos bases de
datos desde la Universidad de Valencia; EMBASE desde la URL:
http://gateway.ovid.com/autologin.html, Para eIectuar la busqueda
de revistas en EMBASE, con el boton fournal, se escribe el titulo
completo o las primeras palabras del titulo; con el boton perform
search, se encuentra el titulo buscado; con el campo search fields y
year of publication/ao de publicacion se elige, uno a uno los aos
deseados, y, mediante combine se encuentran los articulos
correspondientes a cada ao |13|.
La busqueda en SCI FI NDER SCHOLAR, desde l a
URL:http://www.uv.es/7EinIobib/sib/basesc.html, se hizo con el
boton de browse fournal, apareciendo un listado de revistas; en esta
base de datos, solamente aparecen las revistas que la American
Chemical Society (CAS) considera relevantes, no visualizandose
Revista de Toxicologia en este listado. Sin embargo, al hacer la
busqueda en locate y buscar por titulo de revista, si son encontradas
las publicaciones en esta base de datos |14|.
Rev. Toxicol. (2006) 23: 95-100
97
Analisis de la pervivencia, difusion y productividad de la Revista de Toxicologia
TabIa 1. Distribucin deI nmero de revistas anaIizadas por aos
de pervivencia. Fuente: lSSN
Rev. Toxicol. (2006) 23: 95-100
98
Circulacion de Revista de Toxicologia en las bases de datos
anali:adas
Despues de analizar todas las revistas encontradas en la busqueda, se
estudio el numero de bases de datos por las que circulan o han
circulado, encontrandose que Revista de Toxicologia circula en 3 de
las bases de datos analizadas. Hay que aadir una 4 base de datos por
la que circula, SCIFINDER SCHOLAR, no siendo objeto de estudio
para las otras revistas. Ello supone un aceptable proporcion de bases
de datos por las que circula la revista, y por lo tanto, una gran diIusion
por las mismas. Esto queda reIlejado en la tabla 2, en la que se han
ordenado solamente las revistas activas encontradas, por orden
decreciente del numero de bases de datos analizadas. Se puede
observar la evolucion en la circulacion que tiene actualmente Revista
deToxicologia Irente a las demas revistas analizadas.
Gimeno Sieres E
vigencia, dado su ao de Iundacion, y al ser comparada con otros
grupos de revistas, en menor numero, pero de vigencia mayor,
generalmente cesadas, tal es el caso de El Porvenir Farmaceutico,
Iundada en 1885, que alcanzo la mayor pervivencia, con 101 aos de
vigencia; ocurre lo mismo en El Monitor de la Farmacia y de la
Terapeutica, Iundada en 1895, con una pervivencia de 98 aos;
igualmente se pone de maniIiesto, al comparar la Revista de
Toxicologia con otro grupo de revistas, de mucha menor pervivencia,
pero en mayor numero de ellas, tal es el caso de Atencion
Farmaceutica, con 4 aos de pervivencia, Anales de la Real Academia
Nacional de Farmacia, con 1 ao, Revista de Fitoterapia, con 3 aos, y
algunas revistas mas. Ello es indicativo de que Revista de
Toxicologia, es una revista en constante renovacion, muy
actualizada, por el resultado satisIactorio del estudio de los
indicadores bibliometricos, dando lugar a la conveniencia de que
permanezca vigente.
En cuanto a su diIusion en bases de datos, es una revista que circula en
4 de las bases de datos analizadas, lo que la convierte en una revista de
considerable diIusion. Por lo que se puede decir de Revista de
Toxicologia en cuanto a la productividad se observa que el numero de
trabajos publicados en las bases de datos nacionales, es superior al
publicado en las bases internacionales analizadas, lo que indica, de un
lado, una mayor diIusion nacional Irente a la internacional, y de otro,
su grado de especializacion, segun la mayor o menor cobertura de las
bases de datos internacionales. El numero de trabajos publicados en
las bases de datos nacionales, es bastante pareja, siendo un poco
mayor en ICYT que en IME. En el IME, se recogen articulos de
contenido medico-clinico, mientras que en el ICYT los articulos que
se incluyen estan enIocados a tecnologia, Iarmacia hospitalaria, y
atencion Iarmaceutica en mayor proporcion.
Tal circunstancia es indicativa de una mayor especializacion del
ICYT Irente al IME en la materia que se esta tratando, mientras el
IME es mas selectiva enlos mismos temas.
Al comparar las bases internacionales EMBASE y SCIFINDER
SCHOLAR, se observa que Revista de Toxicologia, es en
SCIFINDER SCHOLAR donde mas produce al compararla con
EMBASE. Esto se explica porque SCIFINDER SCHOLAR es una
Productividad
Se estudio la productividad o distribucion de numero de trabajos por
revista y ao de publicacion en las distintas bases de datos analizadas;
en la tabla 3 se presenta un esquema en el que Iiguran las 4 bases de
datos por las que circula la Revista de Toxicologia, con el total de
articulos de la revista, reIeridos al total de articulos encontrados en
cada una de las bases de datos, segun el correspondiente periodo
analizado, dandose el porcentaje de participacion en cada base de
datos. Los datos encontrados en SCIFINDER SCHOLAR se han
calculado solamente para la Revista de Toxicologia, por lo que no hay
datos de porcentajes comparativos con las demas revistas analizadas.
Distribucion de numeros de trabafos por revista y ao de publicacion
en IME, ICYTy EMBASE
En la base de datos IME, Indice Medico Espaol, se encontraron 34
revistas, entre activas y cesadas, en un numero de 15 y 19
respectivamente. El numero de articulos de la Revista de Toxicologia
Iue de 557, lo que representa un 4,25 respecto del total. Se siguio el
mismo sistema de busqueda en ICYT, ya que es, al igual que el IME,
una base de datos del Consejo Superior de Investigaciones CientiIicas
con la misma estructura y se encontraron 34 revistas ;en EMBASE
Iiguran 22 revistas de la materia que nos ocupa. La productividad de
Revista de Toxicologia, en SCIFINDERSCHOLARse presenta en la
tabla 4.
Revision y actuali:acion de la distribucion de trabafos durante los
aos 2004 y 2005 de la Revista de Toxicologia en las bases de datos
anali:adas
Para completar el estudio de la circulacion de la Revista de
Toxicologia, se ha eIectuado una revision en cada una de las bases de
datos analizadas, en los aos 2004 y 2005, viendose reIlejado el
resultadoenla tabla 5.
Discusin
Tras el estudio de los indicadores bibliometricos de la pervivencia,
circulacion y productividad, asi como la exposicion de los resultados
obtenidos en este trabajo, se pueden exponer las siguientes
consideraciones. Al estudiar la Revista de Toxicologia, con 20 aos
de pervivencia hasta 2003 y activa en el momento actual, tres aos
despues, se observa que pertenece a un grupo de revistas de mediana
Rev. Toxicol. (2006) 23: 95-100
99
Analisis de la pervivencia, difusion y productividad de la Revista de Toxicologia
base de datos especializada en la materia que nos ocupa, mientras que
EMBASE, esta mas especializada en el area biomedica.
Asi pues la Revista de Toxicologia, queda situada en un lugar
preIerente dentro del campo de la Medicina y Ciencias Aplicadas, lo
que hace que pueda ser conocida y consultada por un elevado numero
de investigadores y entidades cientiIicas.
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Gimeno Sieres E
Rev. Toxicol. (2006) 23: 101-107
101
Introduccin
Una de las tareas obligadas a eIectuar en documentacion cientiIica en
la actualidad es la de llevar a cabo un control de calidad de las revistas
cientiIicas. Para ello se han creado y se estan aplicando unos criterios
de evaluacion constituidos por LATINDEX que es un Sistema
Regional de InIormacion en Linea para Revistas CientiIicas en
America Latina, el Caribe, Espaa y Portugal. Es el producto de la
cooperacion de una red de instituciones que Iuncionan de manera
coordinada, para reunir y divulgar la inIormacion sobre las revistas
cientiIicas producidas en la region |1|. El objetivo del Sistema es la
diIusion, hacer accesible y controlar la calidad de las publicaciones
cientiIicas seriadas, por medio de los recursos compartidos, para lo
cual desarrolla un sistema de inIormacion con criterios de calidad
standard |2| para la edicion de publicaciones cientiIicas seriadas,
estableciendo vinculos con otros sistemas de inIormacion, bases de
datos, y editores de las publicaciones. LATINDEX pone a la
disposicion de los usuarios un Directorio, que, desde 1997, oIrece la
inIormacion de datos normalizados de una gran variedad de revistas
de interes academico, resultado de un trabajo realizado por un grupo
de especialistas, todos participantes |3| del Sistema LATINDEX, y
responsables de importantes bases de datos nacionales; realizaron
clasiIicaciones, analisis y evaluaciones, en Iberoamerica y a nivel
mundial, y se elaboro una lista de criterios que Iue aplicada a diversas
muestras inicialmente, estando aceptados y consolidados, hoy dia,
aplicandose a las revistas para su evaluacion.
El objetivo de este trabajo trata de realizar la evaluacion de la calidad
de la Revista de Toxicologia, tomando como ao tope del estudio
hasta el 2005.
Material y mtodos
Se partio de un grupo de revistas cientiIicas, activas hasta el ao 2003,
de entre las encontradas en los perIiles de busqueda empleados para la
elaboracion de la tesis doctoral |4|, y de la que se han extraido los
datos para la redaccion de este articulo |5-8|. Entre estas revistas,
Iigura la Revista de Toxicologia, objeto de este estudio, que reune la
condicion de estar activa en el momento de realizar este trabajo,
ampliado hasta el ao 2005. Para eIectuar la aplicacion de los criterios
de evaluacion de LATINDEX, se partio de una hoja-modelo, en el que
estan condensados, en cinco apartados, A, B, C, D y E, todos estos
criterios de calidad que vienen representados en el modelo de
Iormulariorepresentado en la tabla 1.
Apartado A en el que constan los criterios de presentacion de la
revista, que evaluan el contenido de la portada y cubierta, reIerentes a
Resumen: Ante la gran inIormacion que se genera en todos los
campos de la Ciencia, se hace necesario llevar a cabo un control de
calidad de las publicaciones cientiIicas seriadas por metodos
compartidos. El objetivo de este trabajo es pues, la realizacion de la
evaluacion de calidad de la revista Revista de Toxicologia, acotando
el estudio hasta el ao 2005. Para ello se han aplicado los criterios de
calidad de LATINDEXo Sistema Regional de InIormacion en Linea
para Revistas CientiIicas en America Latina, el Caribe, Espaa y
Portugal, sobre una serie de 32 revistas cientiIicas en materia de
Farmacia, Farmacologia y Toxicologia, entre las que se encuentra
Revista de Toxicologia. Segun los datos obtenidos del grupo de
revistas analizadas, estas se ordenaron por orden creciente de puntos,
obteniendose para Revista de Toxicologia una puntuacion de 64
puntos, lo que hace que la revista quede evaluada muy
Iavorablemente, dadas las caracteristicas documentales y cientiIicas
de la misma.
Palabras clave: Evaluacion cientiIica, Indicadores bibliometricos,
Toxicologia, Farmacologia, Revista de Toxicologia, Publicaciones
espaolas, Analisis documental, Control de calidad.
Abstract: Evaluation of the Revista de Toxicologa in base of the
criteria of quality of LATINDEX. In view oI the great inIormation
that is generated in all the Iields oI Science, its demanded to carry out
a control oI quality oI periodic scientiIic publications by shared
methods. The objective oI this work is the study oI the evaluation oI
quality oI the Revista de Toxicologia, Iron its beginning in 1983 to
2005. For it the criteria oI quality oI LATINDEXor Regional System
oI InIormation in Line Ior ScientiIic Journals in Latin America, the
Caribbean, Spain and Portugal, have been applied, on a series oI
scientiIic journals in the matter oI Pharmacy, Farmacology and
Toxicology, among which is the Revista de Toxicologia. According to
the collected data oI the group oI analyzed journals, these were
ordered by increasing order oI points, resulting a score oI 64 points
Ior Revista de Toxicologia, which means that the journal is evaluated
very Iavorably, by its documentary and scientiIic characteristics.
Key words: ScientiIic evaluation, Bibliometric indicators,
Toxicology, Pharmacology, Revista de Toxicologia, Spanish
journals, Documental analyse, Control oI quality.
Gimeno Sieres E*
Instituto de Historia de la Ciencia y Documentacion Lopez Piero (UNIV-CSIC). Unidad de Bibliometria.
Avda Blasco Ibaez, 15. 46010-Valencia.
Recibido 17 de Mayo de 2006 / Aceptado 4 de Julio de 2006
Evaluacin de la Revista de Toxicologa
segn los criterios de calidad de LATINDEX
*e-mail: Elvira.Gimenouv.es
Rev. Toxicol. (2006) 23: 101-107
102
Gimeno Sieres E
la existencia, en las mismas, del titulo de la revista, ISSN, volumen,
numero, pervivencia |9-11|, mencion de periodicidad, Iecha de
publicacion, membrete bibliograIico, al inicio del articulo. Se valora,
tambien, la inclusion, de manera visible, del nombre, lugar, direccion
postal y correo electronico de la editorial. Si consta la web de la
editorial, o de la revista. Si el sumario esta escrito en uno o en varios
idiomas.
Apartado B en el que constan los criterios de la presentacion de los
articulos. Consiste en analizar el Iormato de los articulos y valorar si
siguen las normas internacionales de los trabajos cientiIicos. Si en
cada articulo consta la Iecha de recepcion y aceptacion para su
publicacion. Si consta uno o todos los autores. Si tiene resumen en
uno o mas idiomas. Si tiene palabras clave en uno o en otros idiomas.
Si tiene normas de publicacion, en parte o en todos los numeros del
ao. Si son escuetas o detalladas. Si consta expresamente el sistema
de seleccionutilizado.
Apartado Cen el que se evaluan los criterios editoriales, tales como la
mencion del director o persona responsable. Si tiene comite editorial,
con una o varias ciudades. Si en el comite editorial hay 1/3 de
miembros extranjeros y si constan las instituciones a las que
pertenecen. Si tiene comite cientiIico, con una o varias ciudades. Si en
el comite cientiIico hay 1/3 de miembros extranjeros y si constan las
instituciones a las que pertenecen.
Apartado D en el que evalua el contenido de los articulos, segun el
numero de articulos por ao y el tipo de publicacion que incluya; asi,
se tiene en cuenta si incluye notas clinicas, o revisiones, o articulo
editorial. Si el total de articulos son originales, o lo son en proporcion
menor, se evaluan de mayor a menor puntuacion, respectivamente. Si
parte de los articulos tienen como Iirmantes autores extranjeros, se
evaluan mas positivamente, ya que, ello, supone un mejor criterio de
calidad de la revista. Si cumplen las normas de Vancouver parcial o
totalmente.
Apartado, E, por ultimo, en el que se evaluan los criterios de diIusion,
dando una puntuacion u otra, segun el numero de bases de datos por
las que circula la revista, siendo de 0 si no consta en ninguna base de
datos. Si consta en el Journal Citation Reports, se le da 2 puntos. Se
evalua si tienen pagina web y si se puede obtener, al consultarla,
solamente el sumario, o el sumario y los resumenes, o las dos
inIormaciones, y, ademas, el texto completo de los articulos.
Resultados
Segun el Iormulario de la tabla 1, los puntos se asignan al aplicar unas
puntuaciones maximas, previamente establecidas por los expertos
que constituyen LATINDEX, en cada uno de los apartadosA,B,C,Dy
E; si bien en algunos apartados es Iacil adjudicar la puntuacion
adecuada, por tener una baremacion bien deIinida, no ocurre lo
mismo en otros apartados en los que, por las caracteristicas de las
revistas, es mas compleja esta adjudicacion de puntos, al estar
sometida a la interpretacion y ajuste subjetivo del especialista
evaluador.
En la tabla 2 se muestra el analisis de la Revista de Toxicologia en
Iuncionde estos criterios.
Los apartados Ay Bno oIrecen diIicultad, ya que se trata de anotar la
presencia o ausencia de los datos alli requeridos. En el caso de la
pervivencia o numero de aos en los que la revista permanece
vigente, el resultado se obtiene de multiplicar el numero de aos de
pervivencia por 0,5; si el resultado es igual o superior a 5, se le
asignara 5 puntos como maxima puntuacion.
En el caso de Revista de Toxicologia, con 20 aos de pervivencia, se
le asigno el maximo numero de puntos.
En cuanto a la periodicidad, si es mencionada en los Iasciculos, se
obtiene 1 punto, siendo de 0 puntos, si no lo es.
La regularidad en el cumplimiento de la periodicidad atiende, por un
lado, aque esta se haga eIectiva con la misma Irecuencia que la
periodicidad anunciada; por otro lado, atiende tambien a la celeridad
o Ialta de ella en la recepcion de los Iasciculos de la revista en el centro
de documentacion, estableciendose un margen de tiempo de espera
segun la Irecuencia de la revista; asi para revistas mensuales y
bimensuales, la espera sera de un mes; para trimestrales y
cuatrimestrales, de dos meses; para semestrales y anuales se establece
en tres meses. Aplicando lo expuesto anteriormente, la Revista de
Toxicologia, obtiene 1 punto por la mencion de periodicidad
cuatrimestral y 2 puntos por cumplir la periodicidad explicita en los
numeros anuales.
En relacion al apartado C, de los comites editoriales y cientiIicos, la
mayoria de las revistas oIrecen alguna que otra diIicultad para evaluar
este dato, pues no todas las revistas dan toda la inIormacion; asi, unas
revistas carecen de consejo de redaccion, o si lo expresan, no
inIormansobre la procedencia institucional o del pais.
En el caso de la Revista de Toxicologia se le asignaron 2 puntos por
ser los miembros del comite editorial de mas de una ciudad; no se
asigno la maxima puntuacion, 3 puntos, porque el total de miembros
del comite no da el 1/3 requerido para ello, aunque se acerca mucho.
En cuanto a las instituciones de los miembros del comite Iiguran
todas ellas, por lo que se evaluo con la puntuacion maxima de 2
puntos. Al carecer de comite cientiIico, este dato se puntuo con 0
puntos.
En el apartado D, el contenido de los Iasciculos por ao no suelen
tener igual numero de articulos, por lo que ello obliga a eIectuar un
recuento de cada ao para determinar la proporcion del tipo de
articulos, entre originales, revisiones, notas clinicas, y editoriales, y
la proporcion de autores extranjeros que publicanen ellos.
En el caso de la Revista de Toxicologia se le asigno 6 puntos por
incluir articulos originales en su totalidad; 1 punto por ser de
procedencia extranjera entre el ~25 y 50.
En cuanto a los criterios de diIusion, en el apartado E, se aplica 1
punto por cada base de datos por la que circula una revista;
igualmente, se aplican 2 puntos si la revista esta contenida en el
listado de revistas del Journal Citation Reports, que es un producto
del ISI Web oI Knowledge, que oIrece las medidas cuantitativas de
algunos indicadores bibliometricos, tales como el Iactor de impacto,
numero de citas, e indice de inmediatez, lugar ocupado en JCR,
cuartil |12-14|.
La Revista de Toxicologia en este apartado ha obtenido un total de 9
puntos repartidos entre 5, por cada base de datos por las que circula y
1 punto por cada incidencia debida a tener pagina web en internet y
poderse consultar en ella, no solo el sumario, sino tambien los
resumenes y el texto completo.
De igual Iorma, empleando como soporte estas hojas-Iormulario, se
procedio a evaluar cada una de las 32 revistas vigentes viendose que
el numero de puntos asignados a cada una de ellas oscila entre 64 y 33.
Segun el Iormulario de evaluacion de las revistas cientiIicas, una
revista que cumpliera todos los requisitos alli expuestos, alcanzaria la
maxima puntuacion, es decir, 82 puntos. En la tabla 2, se expone el
Evaluacion de la Revista de Toxicologia segun los criterios de calidad de LATINDEX
Rev. Toxicol. (2006) 23: 101-107
103
Rev. Toxicol. (2006) 23: 101-107
104
Gimeno Sieres E
Rev. Toxicol. (2006) 23: 101-107
105
totalmente, de ahi la escasa puntuacion en su evaluacion. Sin
embargo, Atencion Farmaceutica, con solamente 4 aos de
pervivencia, obtuvo una puntuacion de 53 puntos, al igual que
Revista de Fitoterapia, tambien con pervivencia de 4 aos, y 49,50
puntos; pero estas revistas, en cambio, si cumplen con determinados
requisitos de los criterios de evaluacion, tales como incluir en sus
ejemplares las normas de publicacion, o la posibilidad de poderse
consultar por Internet porque posean pagina web, o de la propia
revista, o de la entidad que las edita; tales revistas, como se observa, a
pesar de su, aun, corta vida, tienen una evaluacion elevada, lo que
signiIica su notable calidad |18|.
En cuanto a Revista de Toxicologia, cumple con la mayoria de los
criterios de LATINDEX, lo que se hace evidente en la tabla 3, en
donde ocupa un lugar preIerente, alcanzando la puntuacion maxima
para el grupo de revistas analizadas.
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los criterios expuestos, y los resultados se presentan en la tabla 3,
junto a las demas revistas evaluadas atendiendo al orden de
puntuacionobtenidopara cada una de ellas.
Las revistas de la tabla 3 se agruparon en bloques, observandose que 7
revistas obtuvieron entre 64 y 59 puntos, lo que signiIica que un
21,87 de revistas ocupan los primeros puestos en calidad
documental. 13 revistas obtuvieron entre 57 y 49,50 puntos,
signiIicando un 40,62, y 12 revistas obtuvieron entre 47 a 33
puntos, implicando un37,50.
Discusin
Segun los datos obtenidos, vemos que un un primer grupo de revistas,
con un menor porcentaje de ellas, ha obtenido una mayor puntuacion
al cumplir con una mayoria de requisitos de las normas de evaluacion,
tal es el caso de Revista de Toxicologia, en letra negrilla, siendo
revistas de una calidaddocumental excelente.
Un segundo grupo, con un porcentaje intermedio del 40,62, esta
Iormado por el mayor numero de las revistas que cumplen con un
numero menor de requisitos que las del grupo anterior, a saber, menor
numero de aos de pervivencia, menor numero de bases de datos por
las que circulan, o por otras causas de menor consistencia
documental, no siendo obstaculo para ser consideradas revistas de
calidad y de gran interes cientiIico |15|. El tercer grupo de revistas,
con un 37,50, esta Iormado por revistas cientiIicas cuyo contenido
incluye, en muchas de ellas, publicidad tecnologica, por estar
enIocadas a la industria Iarmaceutica, con un menor espacio para la
publicacionde articulos cientiIicos.
En otras ocasiones se trata de boletines oIiciales de algun ministerio,
careciendo de algunos requisitos importantes, como son las normas
de publicacion. Otras veces se trata de revistas circulares de los
distintos colegios oIiciales de Iarmaceuticos de las distintas
provincias, cuyo contenido, igualmente, es mixto entre articulos
cientiIicos, noticias inIormativas de la proIesion, de congresos,
articulos de divulgacion, lo que hace que su calidad documental no
sea elevada. En otras ocasiones son revistas de sociedades
academicas, intercalando articulos cientiIicos con novedades,
Iestividades corporativas, nombramientos, etc., lo que hace que el
numero de articulos por ao no sea elevado, o que no incluyan
articulos de revision, o notas clinicas.
En cuanto a la evaluacion de las 32 revistas, cabria suponer que, a
mayor numero de aos de pervivencia, correspondiera mayor calidad
e interes cientiIico, pero, segun los criterios de valoracion, esto no se
cumple exactamente; segun los criterios de evaluacion seguidos, de
LATINDEX, hay parametros que conceden mayor validez a las
revistas que la pervivencia, tal es el caso del cumplimiento de las
normas de publicacion, o que la procedencia de los autores sea
internacional, o que tal revista, haya circulado o circule por un
determinadonumerode bases de datos.
En consecuencia de lo dicho en el punto anterior, una revista vigente,
cuyo ao de Iundacion sea antiguo, por lo tanto con pervivencia
elevada, obtendra una puntuacion u otra, dependiendo de su
adaptabilidad a los criterios de valoracion de LATINDEX; tenemos el
caso de Circular Farmaceutica, con 60 aos de pervivencia y una
puntuacion de 34 puntos; o el caso de Boletin de la Sociedad Espaola
de Historia de la Farmacia, con 53 aos de pervivencia y 37 puntos
|16,17|. Los demas parametros no los cumplen, sea parcial o
Rev. Toxicol. (2006) 23: 101-107
106
Gimeno Sieres E
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107
Rev. Toxicol. (2006) 23: 108-112
Determinacin de nicotina, cotinina y cafena por CG-NPD-EMen leche materna
de purperas atendidas en el hospital ~Las Higueras, Talcahuano, Chile.
smoking habit, and intake oI caIIeine beverages during pregnancy.
The simultaneous determination oI nicotine, cotinine and caIIeine in
human milk samples was made by Gas Chromatography/Mass
Spectrometry, with a double detection system. The methodology was
2
exact, precise and lineal, with a determination coeIIicient (r ) greater
than 0,9990 Ior nicotine and cotinine, and 0,9970 Ior caIIeine. We
Iound nicotine in 19 oI the samples (14,7 to 55, 2 ng/mL), cotinine
in 4 (10,5 to 136,8 ng/mL) and caIIeine in 25 (9 to 250 ng/mL).
The application oI the analytical method allowed the determination oI
nicotine and cotinine as biomarkers oI the smoking behaviour during
lactogenesis, and gave us the possibility to determine the presence oI
Pethidine (n1), Methronidazole (n1), Methamizole (n19) and
Aminophenazone (n19) in the human milk samples analyzed, that
led us to visualize this methodology as an important tool to expand
Iuture toxicological studies.
Keywords: human breast milk, nicotine, cotinine, caIIeine, GC-MS.
Introduccin
De la misma Iorma en que las sustancias endogenas, los nutrientes de
los alimentos y algunos xenobioticos se transIieren al neonato por
medio de la placenta, la leche materna tambien posee la Iacultad de
permitir la transIerencia de estos compuestos durante la lactancia.
En Chile, a pesar de que la prevalencia en el uso de las denominadas
'drogas de uso recreacional (alcohol, nicotina, caIeina, marihuana)
es mas alta en los hombres, las mujeres que ocupan este tipo de
sustancias se encuentran en edad de procrear lo que nos indica la
probabilidad de que continuen con el consumo de estas antes, durante
y despues del embarazo. |1|
En relacion al tabaquismo durante la lactancia, el comite de
medicamentos de laAcademiaAmericana de Pediatria (AAP) coloco
a la nicotina (NIC) en el grupo de 'drogas de abuso para la que se
describen eIectos adversos sobre el lactante, utilizando como
reIerencia las investigaciones realizadas sobre la presencia de
nicotina y su metabolito, cotinina (COT), como biomarcadores de la
exposicion al tabaco en la leche humana y en el plasma del neonato.
|2|
El paso de los xenobioticos a traves de la membrana de la celula
alveolar mamaria primero requiere que la molecula correspondiente
se diIunda libremente dentro, y luego Iuera del lactocito. Para lograr
esto, la participacion de las propiedades Iisicoquimicas es
determinante al momento de la transIerencia. Factores como, el
coeIiciente de particion (log P), el peso molecular (PM), la constante
Resumen: La utilizacion de la leche materna como matriz biologica
alternativa para el analisis toxicologico, proporciona inIormacion
relevante al momento de evaluar el riesgo de exposicion del neonato a
diversas sustancias quimicas. La nicotina, su metabolito, cotinina, y
la caIeina, poseen propiedades Iisicoquimicas que Iacilitan el paso de
las mismas hacia la leche materna. Se determinaron las
concentraciones de nicotina, cotinina y caIeina en leche materna de
48 madres puerperas (M28 aos) elegidas a traves de un muestreo al
azar simple. Las muestras se recolectaron en envases esteriles por
extraccion manual. Se obtuvo consentimiento inIormado y se
completo un cuestionario con los datos demograIicos de la madre y
del neonato, el habito de Iumar e ingesta de bebidas caIeinadas
durante el embarazo. La determinacion simultanea de nicotina,
cotinina y caIeina se realizo por CromatograIia de Gases/
Espectrometria de Masas con doble sistema de deteccion. La
metodologia demostro ser exacta, precisa y lineal en el rango
2
estudiado con un coeIiciente de determinacion (r ) mayor a 0,9990
para nicotina y cotinina, y mayor a 0,9970 para la caIeina. Se encontro
nicotina en el 19 de los casos (14,7 a 55,2 ng/mL), cotinina en el 4
(10,5 y 136,8 ng/mL) y caIeina en el 25 (9 a 250 ng/mL). La
utilizacion del metodo analitico permitio demostrar que nicotina y
cotinina son biomarcadores que indican que las madres Iumaron
durante la lactogenesis. Tambien, el espectrometro de masas detecto
la presencia de Petidina (n1), Metronidazol (n1), Metamizol
(n19) y AminoIenazona (n19) en las muestras de leche materna
evaluadas lo que permite visualizar a esta metodologia como una
valiosa herramienta para ampliar el espectro de Iuturos estudios
toxicologicos.
Palabras clave: leche materna, nicotina, cotinina, caIeina, CG-NPD.
Abstract: Measurement of Nicotine, Cotinine and Caffeine by
GC-NPD-MS in human breast milk samples of puerperals
hospitalized in ~Las Higueras, Talcahuano, Chile. Human milk
used as an alternative matrix Ior toxicological analysis oIIers relevant
inIormation to evaluate the neonatal risk oI exposition to a variety oI
chemical substances. Nicotine, its metabolite, cotinine, and caIIeine,
have the necessaries physicochemical properties to be transIerred to
the human breast milk. We measured nicotine, cotinine and caIIeine
concentrations in human milk samples oI 48 puerperals mothers
(M28 years old) elected randomly. The samples were collected in
sterile containers by manual expression, and then transported to the
lab where they were kept at -30C until the analysis. The mothers,
with signed consent, Iilled a questioner with socio demographic data,
1 1 2 3
Aquino R `, Barrios C , Lobos C y lvarez A .
1
Laboratorio de Toxicologia, Dpto. de Farmacia. Facultad de Farmacia. Universidad de Concepcion. Casilla 237, Concepcion, Chile.
2
Laboratorio Toxicologico y Medico Legal Iquique. Region de Tarapaca, Chile.
3
Dpto. de Pediatria. Facultad de Medicina. Universidad de Concepcion. Chile.
Recibido 22 de Noviembre de 2005 / Aceptado 5 de Septiembre de 2006
*e-mail: raquinoudec.cl
108
de disociacion (pKa), y entre otros, el porcentaje de union a proteinas
plasmaticas y la vida media de eliminacion, aIectan
signiIicativamente la cantidad total de xenobioticos secretados
Iinalmente por la leche materna. |3-5|
Despues de cada inhalacion, la nicotina del tabaco es rapidamente
absorbida a traves de los pulmones de la madre hacia su circulacion
sistemica alcanzando concentraciones mayores en la leche materna
que enel plasma, con una razon leche/plasma igual a 2,9+ 1,09. |6|
Por su parte, la caIeina (CAF) se considera la sustancia psicoactiva
mas consumida en el mundo. Se encuentra en bebidas no alcoholicas,
caIe, te, cocoa, chocolate, y en gran cantidad de Iarmacos de
prescripcion y venta libre. La caIeina se secreta en la leche materna a
los 60 min. despues de su ingesta, con una razon leche/plasma entre
0,5 y 0,76. |7-9|
El enIoque analitico en los estudios realizados con leche materna se
basa en la realizacion de un protocolo estandarizado, que incluya la
inIormacion completa sobre la recoleccion de la muestra, la seleccion
de los participantes del estudio, el tratamiento de la muestra de leche
materna, y la tecnica de analisis instrumental utilizada en la deteccion
y cuantiIicacion de los analitos estudiados. |10-12|. La cromatograIia
de gases (CG) ha demostrado un alto poder resolutivo en el analisis
toxicologico de xenobioticos en la leche materna |13-14|.
Conjuntamente con la utilizacion de un detector de nitrogeno-IosIoro
(NPD), el cual posee mayor selectividad para compuestos que
contengan atomos de nitrogeno o IosIoro como algunas drogas de
abuso, medicamentos y contaminantes ambientales |15|. Por esta
razon se hace necesaria la cuantiIicacion por CG-NPDy subsiguiente
conIirmacion cualitativa por Espectrometria de Masas (EM) de
concentraciones de nicotina, cotinina y caIeina en leche materna de
una muestra de la poblacion de madres chilenas despues del
embarazo, permitiendo evaluar los posibles eIectos toxicos de estas
sustancias en relacion a los beneIicios que oIrece la lactancia
materna.
Material y Mtodos
Obtencion de las muestras. la recoleccion de las muestras de leche
materna utilizadas eneste estudio se realizo por medio de un muestreo
al azar simple de 48 madres puerperas ( 4 dias postparto) atendidas
en las salas del hospital 'Las Higueras (Talcahuano, Chile), durante
el periodoMayo-Junio del 2004.
El protocolo del estudio Iue aprobado por el comite de etica del
Hospital. Se obtuvo un consentimiento inIormado por parte de las
madres participantes incluyendose ademas un cuestionario donde se
indicaba los datos demograIicos de la madre y del recien nacido (RN),
la ingesta de caIeina, Iarmacos, y el habito de Iumar durante la
gestacion. Los criterios de exclusion se basaron en el muestreo solo
de madres sanas y que concibieron RN sanos. Las muestras Iueron
recolectadas por extraccion manual en envases esteriles durante
horario matutino. Tras ser etiquetadas, se transportaron reIrigeradas
al laboratorio donde posteriormente Iueron almacenadas en alicuotas
de 1,5 mLentubos EppendorI a -30Chasta su analisis.
Las muestras de leche materna blanco destinadas para el desarrollo y
validacion del metodo analitico Iueron donadas por madres no
Iumadoras, y sin consumo de bebidas caIeinadas.
Estandares y Reactivos. con los estandares primarios de (-) nicotina,
(-) cotinina y caIeina adquiridos a Sigma (St. Louis, MO, USA) se
prepararon soluciones en metanol para cada uno de ellos a una
concentracion de 10 ng/L, almacenandolas a 4C. De estas
soluciones se tomo la cantidad necesaria para los analisis realizados
en el desarrollodel estudio. 7
Se utilizo DiIenilamina (DFA) como estandar interno. Los demas
solventes y reactivos eran de grado analitico o grado HPLC.
Tratamiento de la muestra. el pretratamiento de la muestra consistio
en mezclar 1 mL de leche materna (a la que se le aadio 200 ng del
estandar interno, DFA) con 2 mLde buIIer acetato 100 mM (pH4). Se
realizo una primera extraccion con 6 mL de n-Hexano, con el Iin de
separar los acidos grasos de la leche. Se agito en el vortex durante 3
min., siguiendo con la centriIugacion de la misma a 4500 rpm (10
min.). Se descarta el sobrenadante, y se diluye el remanente con 8 mL
de buIIer IosIato 0,1 M (pH6). Se prosiguio con la extraccion en Iase
solida en columnas Bond Elut CertiIy LRC(Varian Inc.), instaladas
en un dispositivo colector de vacio, Vac Elut SPS 24,
preacondicionando las mismas con 2 mL de metanol, mas 2 mL de
buIIer IosIato 0,1 M (pH6). Posteriormente se introduce la muestra a
razon de un Ilujo de 1 mL/min. y se continua con el lavado de las
columnas con 2 mLde agua destilada, 1 mLde acido acetico 1M (sin
vacio), mas 4 mLde una mezcla de Acetona/CloroIormo (50:50). Por
ultimo, se eluyen los analitos de interes con dos Iracciones de 2 mLde
Diclorometano/Iso propanol/ Amoniaco (80:20:2). Al eluyente se le
aadieron 50L de metanol acidiIicado (1mL de HCL en 100mL de
Metanol) evitando de esta manera la posible evaporacion de los
analitos en el siguiente paso. Posteriormente, se evaporo a sequedad
bajo una corriente de nitrogeno a una temperatura 40C. El residuo
obtenido Iue reconstituido con 100Lde metanol.
Instrumentacion. la determinacion de NIC, COT y CAF en leche
materna se realizo en un cromatograIo de gases Agilent Technologies
6890Nprovisto de un inyector automatico de liquidos serie 7683, mas
un inyector de vaporizacion de temperatura programable (PTV). La
separacion cromatograIica se realizo simultaneamente por medio de
dos columnas J & WScientiIic DB-5ms (5 Ienil-95 metilsilicona;
0.20mm * 25m * 0.33m), unidas a una pre-columna inerte a traves
de un divisor de entrada Iijo para columnas capilares con Ierula de
doble oriIicio. La deteccion y cuantiIicacion de los analitos se realizo
con un detector nitrogeno-IosIoro (NPD), y simultaneamente, la
conIirmacion de los mismos con un detector selectivo de masas 5973
(MSD), cuadrupolar, acoplado directamente a la columna
cromatograIica del CG a traves de una linea de transIerencia. Los
datos Iueron procesados por el soItware computacional Security
Chemstation (FDA21 CRF part. 1126).
Condiciones cromatograficas. se inyectaron 40 L (5 L x 8 veces)
del extracto de la muestra en el modo 'solvent vent del PTV, a una
temperatura inicial de 30C (2,90 min), hasta una ultima rampa de
300C (30 min). El Ilujo correspondiente a la salida del solvente
('solvent vent) durante la inyeccion Iue de 200mL/min durante un
periodo de 2,80 min. El Ilujo del gas portador (He 6,0) de las
columnas capilares era de 2,0mL/min en la primera columna unida al
NPD, y la segunda (conectada al EM) con un Ilujo calculado a
2,2mL/min. El programa de temperatura del horno se mantuvo a una
temperatura inicial de 50C durante 4 min, luego, se aumento
gradualmente a 25C/min hasta alcanzar una primera rampa de 125C
(1 min), una segunda de 200C (1 min) y una ultima de 310C
completando los 34 min con la Iinalizacion del analisis. El NPD
permanecio a una temperatura de 330C, con un Ilujo de 3 mL/min y
60 mL/min para el hidrogeno y aire respectivamente. Se utilizo como
gas auxiliar Nitrogeno a 10 mL/min. Ahora bien, la conIirmacion de
los analitos por el EM se realizo en el modo full scan manteniendo la
linea de transIerencia que une al EM con el CG a 320C, el detector
Rev. Toxicol. (2006) 23: 108-112
109
Determinacion de nicotina, cotinina y cafeina por CG-NPD-EM en leche materna de puerperas
Resultados
El metodo analitico aplicado para la determinacion de NIC, COT y
CAF en leche materna Iue validado, resultando ser lineal dentro del
2 2
rango estudiado (r ~ 0,999 para NICy COT; r ~ 0,9970, para CAF) y
selectivo en relacion a los posibles interIerentes de la matriz, con
tiempos de retencion de 11,56, 14,00, 14,94 y 16,62 min para NIC,
DFA (EI) COT y CAF respectivamente. (Ver Fig. 1) Debido a la
diIerencia en la velocidad del Ilujo del gas portador a causa de las
condiciones de vacio con las que opera el EM, los tiempos de
retencion correspondientes a NIC, COT y el estandar interno, DFA
diIieren en 11 segundos (11,46, 14,81 y 13,89 min respectivamente)
comparados con el NPD, mientras que en el caso de la CAF, existe una
diIerencia de 14 segundos (Figura 1).
El porcentaje de recuperacion en la evaluacion de la exactitud para
NIC, se obtuvieron valores mayores que 96,96 (D.S.R. 3,58) en
las tres concentraciones estudiadas. La COTresulto en un porcentaje
de recuperacion mayor al 91,68, (D.S.R. 7,69) para la
concentracion mas baja. Ahora bien, la CAF obtuvo valores de
recuperacion mayores a 86,85, (D.S.R. 10,61), en 10 ng/mL, a
100 y 250 ng/mLvalores de D.S.R. 4,17 (Tabla 1).
cuadrupolar a 150C, yla Iuente de iones a 230Cy 70eV.
Jalidacion metodo analitico. los parametros de validacion realizados
para la evaluacion de la metodologia incluyeron la exactitud (a partir
del porcentaje de recuperacion) y precision a concentraciones de 10,
100 y 250 ng/mL; linealidad (relacion de areas de NIC, COT y CAF/
area estandar interno en un rango de 10 a 250 ng/mL), limite de
deteccion (LOD) y cuantiIicacion (LOQ), estabilidad de los analitos
en la matriz a corto(25C, 12 horas) y largo plazo (-30C, 12 meses).
Se inyectaron tres replicas de cada una, determinandose la desviacion
estandar relativa entre-ensayos ( D.S.R.) en los casos necesarios.
Un analisis de varianza (ANOVA, soItware estadistico SAS 8.2)
evaluo la linealidad de la curva de calibracion. Todos estos
parametros se determinaron en base a la respuesta obtenida con el
NPD.
Analisis de muestras de leche materna. se evaluaron las muestras de
leche materna provenientes de 48 madres puerperas atendidas en el
hospital 'Las Higueras. Las muestras se analizaron por CG-NPD-
EM obteniendo las concentraciones de NIC, COT y CAF por medio
de la ecuacion de la recta de regresion lineal (y mx b) obtenida en
la curva de calibracion.
Figura 1. Espectro de masas de NIC, COT y CAF en el EM (arriba) y cromatogramas de CG- NPD en leche materna (debafo).
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Aquino R, Barrios C, Lobos C, Alvarez A
Los limites de deteccion y cuantiIicacion del metodo en el NPDpara
cada uno de los alcaloides Iueron de 1,02 (NIC), 2,34 (COT) y 2,09
ng/mL(CAF). En cambio, se obtuvieron limites de cuantiIicacion de
3,10 ng/mL para NIC, 7,11 ng/mL para COT, y 6,34 ng/mL para la
CAF (Tabla 1).
Tabla 1. Jalores obtenidos en los ensayos de validacion.
Los analitos del estudio se mantuvieron estables en la matriz
biologica durante las condiciones de almacenamiento, con una
diIerencia menor al 5 de la concentracion inicial estudiada (100
ng/mL).
Finalmente, las concentraciones de NIC, COTy CAF encontradas en
las muestras de leche materna de madres puerperas atendidas en el
hospital 'Las Higueras se muestran en la tabla 2. Segun estos datos,
en 9 muestras se obtuvieron resultados positivos para NIC, en un
rango de concentraciones de 14,7 a 55,2 ng/mL. En solo 2 de la
totalidad de las madres se determino el metabolito, COT, en
concentraciones de 10,5 y 136,8 ng/mL. Para CAF, 12 muestras
resultaron positivas en concentraciones que abarcan desde 9 ng/mL
hasta 250 ng/mL (Tabla 2).
Discusin
El metodo implementado permitio la determinacion simultanea de
nicotina, cotinina y caIeina en leche materna, por medio de la
separacion cromatograIica en doble columna junto a la subsiguiente
deteccion y conIirmacion mediante un detector de nitrogeno-IosIoro
(NPD), y otro selectivo de masas (MSD). Los valores obtenidos en
cada uno de los parametros de validacion Iueron aceptables dentro del
rango permitido para el analisis de matrices biologicas, donde se
aceptan porcentajes de desviacion estandar relativa (D.S.R.)
menores al 15 .|16|
Al respecto, cabe destacar que la recoleccion de las muestras de leche
se realizo durante los primeros dias despues del alumbramiento (4
dias postparto), por lo que se estima que estas concentraciones
encontradas ademas de asegurar la transIerencia de estos alcaloides a
la leche materna, pueden oIrecer una orientacion del uso
concomitante de alguna de estas sustancias psicoactivas durante las
ultimas semanas de la gestacion.
En leche materna, la cinetica de eliminacion de la nicotina y cotinina
ha sido tema de estudio solo de pocos autores. Al respecto, Luck W.
|6| y col. realizaron un estudio donde analizaron la transIerencia de
estos alcaloides desde el plasma de 23 madres Iumadoras hacia la
leche, comparando la vida media de eliminacion de nicotina en leche
con la correspondiente al plasma.
Encontraron que existia una correlacion lineal entre las
concentraciones plasmaticas y aquellas adquiridas en la leche de las
madres participantes. Las concentraciones de nicotina Iueron
mayores en la leche (2,0-62 ng/mL) que en el plasma (1,0-28,0
ng/mL), mientras, la cotinina obtuvo menores concentraciones en la
leche (12-222 ng/mL), en relacion a sus niveles plasmaticos (16-330
ng/mL).
En nuestro estudio, el reporte sobre el habito de Iumar en el
cuestionario realizado a las madres participantes, solo cuatro
conIirmaron la continuacion del habito durante el embarazo,
resultando estas entre el grupo de las positivas para nicotina y una de
ellas positiva para cotinina (10,5 ng/mL).
No obstante, las concentraciones encontradas de nicotina no se
pueden correlacionar con la cantidad de cigarrillos que las madres
reportaron haber Iumado durante la recoleccion de las muestras, ya
que la mayoria de ellasnotiIicaron haber Iumado solo un cigarrillo
esporadicamente durante el transcurso de su embarazo.
Aunque la vida media de eliminacion mayor que posee la cotinina, las
propiedades Iisicoquimicas de este metabolito no beneIician su
Tabla 2. Concentraciones de NIC, COT Y CAF en muestras de
leche materna provenientes del hospital 'Las Higueras`.
Rev. Toxicol. (2006) 23: 108-112
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transIerencia a la leche materna, principalmente su polaridad, que
diIiculta el paso a traves de la membrana lipidica |6|.
Al parecer, la madre restante positiva para cotinina, oculto su
adiccion al tabaco durante el embarazo, ya que, siendo la
concentracion mas alta encontrada para cotinina (136,8 ng/mL), se
deduce que su consumo Iue prolongado en el transcurso del mismo,
basandonos en el valor de la vida media de eliminacion de la cotinina
en plasma (t 15-20 h) |17| .
Las concentraciones de caIeina (9-250 ng/mL) Iueron menores que
aquellas reportadas en determinaciones de esta metilxantina en leche
materna, donde el rango encontrado Iue de 2,9 a 7,17 g/mL en un
estudio donde las madres consumieron entre 36 y 335 mg de caIeina
|8|, pero la presencia de la caIeina en las muestras analizadas
conIirma el riesgo de la exposicion a este estimulante del SNC en los
neonatos. Aunque toxicologicamente estas concentraciones de
caIeina se consideran no signiIicativas, la prolongada vida media de
eliminacion de este alcaloide en los neonatos (aproximadamente 80
horas) la posiciona entre una de las sustancias quimicas psicoactivas
de las que se debe moderar su excesivo uso durante la lactancia,
evitandoposibles eIectos en el SNCdel lactante |18|.
Con los resultados proporcionados por la metodologia de analisis
implementada en esta investigacion, se realizo un estudio
epidemiologico para evaluar el eIecto de las concentraciones de
nicotina, cotinina y caIeina en leche materna de las madres atendidas
en el hospital, en relacion a los datos obtenidos de circunIerencia
craneana, talla y peso de los neonatos. Para dicho estudio los datos
Iueron procesados utilizando el programa EpinIo 6.0, comparando
los resultados con las curvas de normalidad proporcionadas por el
Institutode Nutriciony Tecnologia de losAlimentos (2004) |19|.
En los inIantes de madres positivas para nicotina, la circunIerencia
craneana de la mayoria Iue cercana al percentil 10, la talla, bajo el
percentil 25 en el 75 de los casos, y el peso, bajo el percentil 25 en el
60 de los RN. Para caIeina, la distribucion de los parametros
medidos estuvo dentro del rango normal de la media de los RN
chilenos.
Las concentraciones encontradas en las muestras provistas por el
muestreo realizado, reIlejan el riesgo actual de los recien nacidos a la
exposicion de estos alcaloides a traves de la leche materna de sus
madres.
Agradecimientos.
Este estudio se realizo como proyecto de tesis para la obtencion del
grado de magister en Ciencias Farmaceuticas en la Universidad de
Concepcion, Chile. La autora agradece la colaboracion del
LaboratorioToxicologico del Servicio Medico Legal (Iquique, Chile)
por la realizacion de la parte experimental del mismo en sus
instalaciones.
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112
Aquino R, Barrios C, Lobos C, Alvarez A
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moving, average altitude, medium size, Iractal dimension, middle
distance, recognition rate and toxicity index, representing the sum oI
all the previous parameters. At the same time, the response aIter
static exposure to the same compounds was analysed using the
conventional method with Daphnia magna. In the case oI lead,
cadmium and mercury, no alterations in the daphnia population were
observed in the real-time assay, while copper produced alterations in
all parameters. The other compounds produced substantial
quantitative alterations in the toxicity index. The results oI static
exposure were quantiIied in terms oI daphnia death aIter exposure to
copper, cyanide and the pesticides. The study demonstrates the real-
time response capacity oI daphnia to the action oI diIIerent toxic
compounds dissolved and in suspension in the water, although new
experiments are essential Ior standardising the assay conditions and
Ior evaluating the response oI other compounds.
Keywords: toximeter, daphnia, on line, heavy metals, pesticides
Introduccin
La evaluacion de la toxicidad de agentes quimicos es una necesidad
considerada a nivel internacional |1|. En numerosos contextos
legales y socio-politicos se contempla el Iomento de la investigacion
mediante el uso de alternativas a la experimentacion animal. El uso de
estos metodos esta ampliamente aceptado por la comunidad cientiIica
aunque es preciso la normalizacion y validacion de los metodos para
tener plena utilidadeninvestigacion basica y aplicada.
La investigacion en ecotoxicologia con diIerentes especies de
daphnias ocupa un importante lugar en la evaluacion de los
contaminantes del agua en ciertos ecosistemas. Sus caracteristicas
geneticas, Iisiologicas, nutricionales y Iuncionales han sido
evaluadas comparando los cambios que se producen en estos
organismos, Iundamentalmente en presencia de agentes toxicos. Ello
ha dado lugar a la existencia de protocolos normalizados con
daphnias para ensayos de toxicidad |2-7|.
Los estudios convencionales son eIectuados de manera 'estatica, es
decir, incorporando el agente toxico en el medio en el que viven estos
organismos, y comprobando posteriormente el porcentaje de
inmovilizacion en relacion al numero total de Daphnia magna
empleada. No obstante estos organismos poseen numerosos
parametros que pueden ser evaluados de Iorma directa, es decir
mientras que se produce la exposicion o inmediatamente despues de
la misma, siendo esta la base del diseo de los experimentos 'on line.
Parametros como la velocidad, altitud, movimiento, tamao,
Resumen: El presente estudio se realizo con el objetivo de
determinar la capacidad de deteccion de compuestos toxicos
presentes en agua a traves de un ensayo on line con el equipo
'Daphnia-Toximeter. Se analizo la respuesta de las daphnias tras la
exposicion durante 7 horas a plomo, cadmio, mercurio, cobre,
cianuro, cipermetrina, diazinon, clorpiriIos, y a una combinacion de
insecticidas (clorpiriIos diclorvos propoxur). Las
concentraciones de xenobioticos ensayadas Iueron las maximas
permitidas por la legislacion europea para aguas destinadas a
consumo humano. Los parametros a evaluar en la poblacion de
daphnias Iueron los siguientes: velocidad media, clases de velocidad,
indice de clases de velocidad, altitud media, dimension Iractal,
numero de individuos en movimiento, tamao medio, distancia
media, relacion de reconocimiento, e indice de toxicidad como
sumatorio de todos los parametros anteriormente citados.
Simultaneamente se analizo la respuesta tras la exposicion estatica a
los mismos compuestos. En el caso del plomo, cadmio y mercurio no
observamos alteraciones en la poblacion de daphnias. Con el cobre se
produjeron alteraciones en todos los parametros. Con el resto de
compuestos se produjeron alteraciones cuantiIicadas a traves del
indice de toxicidad. Los resultados de la exposicion estatica se
cuantiIicaron en terminos de muerte de las daphnias, ocurriendo esta
tras la exposicion a cobre, cianuro y plaguicidas. El estudio
demuestra la capacidad de respuesta on line de las daphnias ante la
accion de diIerentes compuestos disueltos en agua y en suspension,
aunque es completamente imprescindible la realizacion de nuevos
experimentos para estandarizar las condiciones de ensayo y la
valoracion de respuesta ante otros compuestos.
Palabras clave: toximetro, daphnia, on line, metales pesados,
plaguicidas.
Abstract: real-time monitoring of alterations in daphnia magna
induced by differents toxic agents . The present study was carried
out with the aim oI determining the capacity oI a "Daphnia-
Toximeter" equipment to detect toxic compounds in water in a real-
time assay. The response oI the daphnia was tested aIter a seven-hour
exposure to lead, cadmium, mercury, copper, cyanide, cypermetrin,
diazinon, chlorpyriIos and a combination oI insecticides
(chlorpyriIos dichlorvos propoxur). The xenobiotic
concentrations assayed were the maximum permitted by current
legislation Ior water destined Ior human consumption. The Iollowing
parameters were evaluated in the daphnia population: average speed,
division oI speed, speed class-index, number oI daphnia capable oI
Romero D, Martnez-Lpez E, Hernndez-Garca A y Garca-Fernndez A1*.
Area de Toxicologia. Facultad de Veterinaria. Universidad de Murcia. Campus de Espinardo, 30100 Murcia.
Recibido 30 de Enero de 2006/ Aceptado 21 de Junio de 2006
Valoracin de las alteraciones provocadas por diferentes agentes txicos
sobre Daphnia magna a travs de un ensayo ~on line
*e-mail: ajgIum.es
distancia entre los individuos, relacion de reconocimiento o
dimension Iractal pueden ser evaluados al ser capturada la actividad
de los animales con una camara de video, digitalizando dicha
inIormacion y procesandolos para dar lugar a datos matematicos |8|.
Asi se puede comprobar la existencia de compuestos toxicos en un
determinado ecosistema en tiempo real. La posibilidad de establecer
un valor maximo en el indice de toxicidad se traduce en la aparicion
de una alerta cuando se sobrepasa dicho valor. El soItware considera
dos tipos de alarma: una amarilla correspondiente a un indice
toxicidad tolerable, pero objeto de vigilancia, y una alerta roja para un
indice de toxicidadinadmisible.
Segun nuestra normativa vigente, en el control del agua de consumo
humano se aplican criterios de calidad, independientemente de su
origen y del tratamiento de potabilizacion que reciban |9-10|. Para
ello se Iijan parametros quimicos y sus correspondientes valores
parametricos, tipos de analisis, Irecuencia y puntos de muestreo,
aunque no se contempla la posibilidad de eIectuar valoracion de dicha
calidad en tiempo real. Tampoco se contempla esta posibilidad en la
normativa legal que regula las caracteristicas basicas de calidad que
deben ser mantenidas en las corrientes de agua superIiciales cuando
sean destinadas a la produccion de agua potable |11-12|. Bien es
cierto que pocos son los trabajos publicados reIerentes a estudios 'on
line en aguas |8, 13| y no existen protocolos normalizados, como si
ocurre con otros ensayos de ecotoxicidad. No obstante el uso de
biomonitores como las daphnias en equipos de evaluacion en tiempo
real es considerado como una 'tecnologia emergente en la deteccion
de contaminantes enagua |14|.
En el presente estudio hemos valorado la respuesta de una poblacion
de Daphnia magna ante la presencia de diIerentes agentes
contaminantes utilizando para ello un equipo 'on line. La dosis de
exposicion Iue la indicada como maxima permitida en la Orden de 11
de mayo de 1988|11|.
Material y mtodos
El equipo utilizado para la realizacion de este estudio Iue el toximetro
'on line DaphniaToximeter (bbe Moldaenke-Alemania). El equipo
consta de los siguientes elementos: entrada de agua con diIerentes
Iiltros (tangencial, lana de vidrio, lana metalica), una celda donde se
colocaban las daphnias, equipo de video conectado a dicha celda, y
sistema inIormatico de recogida de los datos (esquema 1).
Esquema 1. Diagrama de circulacion de agua
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114
La alimentacion de las daphnias se eIectuaba con algas del genero
Chlorella procedentes de un Iermentador incorporado al toximetro.
Los organismos utilizados para la realizacion de los ensayos
pertenecen a la clase Crustacea (Entomostracea), Subclase
Branchiopoda, Orden Diplostraca, Suborden Cladocera, especie
Daphnia magna Straus. Los compuestos evaluados Iueron nitrato de
plomo (Merck-Alemania), cloruro de mercurio I (Merck-
Alemania), sulIato de cobre (Sigma-USA), cloruro de cadmio
(Merck-Alemania), cianuro potasico (Merck-Alemania),
cipermetrina, diazinon, clorpiriIos, diclorvos y propoxur (Sigma-
USA).
La cria y mantenimiento de las daphnias utilizadas en los ensayos se
eIectuo en un acuario a 21C con Ilujo constante de aire y con el
mismo tipo de agua que la que entraba en el toximetro. La nutricion de
estos individuos se eIectuo con algas procedentes del aliviadero del
toximetro, las cuales eran Iiltradas al vacio a traves de Iiltros de lana
de vidrio (GF 52, de 47 mm de diametro).
Cada ensayo 'on line se realizo con 8 daphnias de 24-48 horas de
vida y de tamao medio-grande sin huevos, las cuales eran recogidas
del acuario e introducidas en la camara destinada a tal Iin en el
toximetro. En primer lugar se evaluaba el comportamiento de los
individuos control, registrando todos los parametros (velocidad,
altitud, movimiento, tamao, distancia entre los individuos, relacion
de reconocimiento y dimension Iractal). Para ello dejamos que
Iluyera el agua a traves del toximetro previamente Iiltrada,
registrando la actividad de las daphnias a traves de todos sus
parametros. Para la evaluacion toxicologica suministramos los
diIerentes compuestos disueltos en agua a partir de un bidon de 30
litros. Las concentraciones utilizadas Iueron las siguientes (mg/l):
plomo (0,05), mercurio (0,001), cobre (1), cadmio (0,005), cianuro
(0,05), plaguicidas (0,001). El tiempo de exposicion Iue de 7 horas, ya
que este es el tiempo medio calculado desde que el agua entra en una
estacion transIormadora de aguas potables hasta que sale de la misma
con destino a consumo humano. Los registros inIormaticos de todos
los parametros se eIectuaba desde la entrada de agua 'control y
permanecia hasta el momento en que Iinalizaba el ensayo
toxicologico. El programa utilizado Iue el Daphtox Viewer 1,31,
sobre Windows NT. En el indice de toxicidad se establecio el nivel de
alarma en 4 puntos para la alarma amarilla y 6 unidades para la roja
por ser los que presentaba el soItware por deIecto. Simultaneamente
se eIectuaron exposiciones 'estaticas en matraces, con las mismas
concentraciones de los compuestos a evaluar, pero con un tiempo de
exposicion de 24 horas.
Tabla 1. Indice de toxicidad para cada uno de los compuestos
utili:ados
Romero D, Martinez-Lopez E, Hernandez-Garcia A y Garcia-Fernandez AJ
Grfica 1. Exposicion a cobre. A. Indice de toxicidad. B. Jelocidad
media. C. Altitudmedia
maximo permitido por la legislacion esta por encima del umbral de
sensibilidad del toximetro y de la EC50 de las daphnias para ensayos
tradicionales estaticos. Este hecho conIiere seguridad en la
valoracion de estos compuestos en el medio acuatico a traves de este
equipo.
Otros plaguicidas presentan EC50 muy por encima de lo permitido
por la legislacion vigente. La EC50 tras 24 horas de exposicion
descrita para el lindano es de 1,64 mg/l, para el endosulIan de 0,62
mg/l, para el pentacloroIenol de 0,39 mg/l y para la 3,4-dicloroanilina
de 0,20 mg/l |19, 21|. Para el disulIoton, la EC50 tras 24 horas es de
Resultados y Discusin
El tiempo minimo necesario para el procesado de la inIormacion
recogida por el soItware y su representacion graIica Iue de 2 horas y
30 minutos.
Tras la utilizacion de plomo, cadmio y mercurio no se pudo constatar
eIecto alguno como consecuencia de la exposicion continua de las
daphnias a dichos compuestos. Tras la exposicion estatica, no se
produjo la muerte de ningun individuo. Aeste respecto solo comentar
que en la bibliograIia consultada se describe la EC50 de cadmio tras
24 horas de exposicion en 0,121 mg/l y tras 48 horas de exposicion en
0,038 mg/l |15|. La concentracion ensayada en nuestro estudio (0,005
mg/l) Iue bastante inIerior a la utilizada en los citados estudios de
toxicidad aguda, lo cual unido a un tiempo de exposicion menor (7
horas Irente a 24-48 horas), explican la ausencia de cambios en los
parametros evaluados con el toximetro.
Con sulIato de cobre se produjeron alteraciones al cabo de una hora y
dos minutos desde el inicio de la exposicion (GraIica 1), y se
maniIestaron en la velocidad media, altitud media, tamao medio,
numero de individuos, dimension Iractal en sus dos registros, indice
de clases de velocidades, distancia media, relacion de reconocimiento
y numero de individuos con velocidad inIerior a 0,2 cm/seg. Tras la
exposicion estatica murieron todos los individuos. Segun Baird et al.
|16| la EC50 del cobre en ensayos de toxicidad aguda tras una
exposicion estatica es de 0,0412 mg/l. La cantidad ensayada en
nuestros ensayos es casi 25 veces superior a la estudiada por dichos
autores, por lo que, aun siendo el tiempo de exposicion menor,
justiIica la aparicion de eIectos nocivos en la poblacion de daphnias.
Con cianuro potasico se produjeron dos picos de toxicidad, dando una
alarma amarilla tras 41 minutos de exposicion (5 puntos, por un
aumento en el indice de clases de velocidades) y una alarma roja tras 5
horas y 7 minutos (14 puntos). Tras la exposicion estatica murio un
individuo.
En la exposicion a cipermetrina y clorpiriIos se produjeron, en menos
de una hora, diIerentes alteraciones en la poblacion de daphnias, las
cuales se tradujeron en un aumento del indice de toxicidad que supero
en ambos casos el nivel establecido para la alarma roja (GraIicas 2 y
3).
En el caso del diazinon se constataron varios aumentos del indice de
toxicidad que superaron el nivel establecido para la alarma amarilla,
superando Iinalmente el nivel de alarma roja tras casi 7 horas de
exposicion(GraIica 4).
Tras la exposicion estatica a estos compuestos, se produjo la muerte
de todos los individuos. Con la combinacion clorpiriIos diclorvos
propoxur se produjo una respuesta similar a la evidenciada con los
anteriores compuestos. Los niveles de toxicidad (en terminos de
EC50) descritos para ciertos plaguicidas en ensayos de toxicidad
aguda eIectuados en exposicion estatica, nos da idea de la plausible
existencia de respuesta bajo nuestras condiciones de ensayo. Como
ejemplo se puede constatar la EC50 del diclorvos en 0,00006 mg/l,
del Ienitrotion en 0,0002 mg/l, del malation en 0,000074-0,00013
mg/l, del DDT en 0,0061-0,0064 mg/l |17-18|, valores que indican
que es posible dicha respuesta en nuestros ensayos en continuo (el
nivel maximo de plaguicidas permitido por la legislacion de aguas
superIiciales destinadas a la produccion de agua potable es de 0,005
mg/l). Otro ejemplo lo constituye el diazinon, que tras 24 horas de
exposicion mostro una EC50 de 0,0009 mg/l |19| y tras 48 horas de
0,0008 mg/l |20|, siendo tambien justiIicable la respuesta obtenida en
continuo en nuestros estudios. Para todos estos plaguicidas el nivel
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Jaloracion de las alteraciones provocadas por diferentes agentes toxicos sobre Daphnia magna a traves de un ensayo 'on line`
Grfica2. Indice de toxicidad tras la exposicion a cipermetrina
Grfica 3. Indice de toxicidad tras la exposicion a clorpirifos
Grfica4. Indice de toxicidad tras la exposicion a dia:inon
0,055 mg/l y para el tiometon 5,49 mg/l |18|. En el caso del gliIosato
la EC50 es de 95,96 mg/l y para el paraquat de 16,47 mg/l |22|. Dado
que para llegar a estos valores se ha de sobrepasar el valor maximo
permito por la legislacion, seria muy oportuno estudiar la respuesta de
las daphnias a traves de los parametros considerados 'on line, pues
una evidencia de alteraciones en los mismos seria de gran utilidad en
el control de la contaminacion del agua.
Por todo ello consideramos que el equipo 'on line
DaphniaToximeter es util en la deteccion de compuestos toxicos
presentes en el agua, aunque es completamente imprescindible la
Rev. Toxicol. (2006) 23: 113-117
116
realizacion de estudios toxicologicos completos que permitan valorar
la respuesta de las daphnias ante la presencia de compuestos
concretos con objeto de estandarizar y si es posible validar tales
ensayos, al igual que ya se ha hecho con otros ensayos de
ecotoxicidad con bioindicadores.
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Rev. Toxicol. (2006) 23: 113-117
117
Jaloracion de las alteraciones provocadas por diferentes agentes toxicos sobre Daphnia magna a traves de un ensayo 'on line`
Rev. Toxicol. (2006) 23: 118-124
were investigated in this study. The water and sediment samples were
obtained Irom upstream and downstream outIalls oI the Hamdoun
River located in proximity oI the industrial area in the centre region oI
Tunisia. Using an in vitro assay with bioluminescent cancer cells
expressing luciIerase gene under diIIerent hormonal responsive
element control, we detected a much lower level oI estrogenic activity
in water and sediment upstream, however, we Iound out a strong
estrogenic, aryl hydrocarbon receptor and pregnane X receptor
activities in water and sediment downstream this river. By using
competition experiments, we demonstrated that estrogenic activity
Iound contained mainly compounds with a strong and lower aIIinitiy
in water and sediment respectively with the recombinant ER. These
results suggest that the river water and sediments are a major sink and
could be a potential source oI endocrine-disrupting chemicals
contaminants.
Key words: Estrogen Receptors, Pregnane X Receptor, Aryl
hydrocarbonReceptor, bioluminescent cells.
Introduccin
Los compuestos disruptores endocrinos (EDCs) son una categoria
recientemente deIinida de contaminantes ambientales que interIieren
la Iuncion del sistema endocrino |1|. En 1996, la Comision Europea
deIinio esta clase de compuestos como "sustancias exogenas que
causan eIectos adversos en la salud de un organismo intacto, o de su
progenie, como consecuencia de cambios en la Iuncion endocrina".
No obstante, los EDCs han sido objeto de mayor atencion por parte de
las agencias reguladoras desde que se han sugerido posibles
relaciones entre la exposicion a EDCy trastornos reproductivos en el
ser humano y la Iauna silvestre |2|. La mayoria de los estudios sobre
dichos eIectos se han centrado en productos quimicos individuales a
concentraciones relativamente altas. Sin embargo, en el medio
ambiente estos productos quimicos se encuentran normalmente
Iormando mezclas complejas con otros compuestos y, a menudo, a
bajas concentraciones. Los eIectos de EDCs sobre animales
acuaticos, especialmente los que habitan en ecosistemas Iluviales,
estan bien documentados |3, 4|. En uno de los modos de
desorganizacion endocrina mas ampliamente demostrado, estas
sustancias quimicas pueden actuar como estradiol endogeno
(mimeticos de estrogeno) uniendose a los receptores de estrogenos y
activandolos |5|. La relacion de sustancias quimicas identiIicadas
como agonistas de estrogenos incluye un amplio espectro de
moleculas como insecticidas organoclorados, herbicidas, Iungicidas
y Italatos, asi como derivados quimicos industriales |6, 7|, hormonas
Resumen: Diversos estudios recientes sostienen que muchos
productos quimicos antropogenicos, presentes en el medio ambiente,
imitan la accion de hormonas endogenas. Estos disruptores
endocrinos pueden originar multiples eIectos adversos en la Iauna,
como la Ieminizacion de peces, la perdida de capacidad reproductiva,
deIectos congenitos y, a veces, pueden estar en el origen de algunos
tipos de cancer en el ser humano. La aparicion de intersexos en peces
de varios rios europeos se ha atribuido a la exposicion a sustancias
quimicas estrogenicas presentes en los eIluentes de estaciones de
tratamiento de aguas residuales. Para proIundizar en el eIecto
ambiental de estos contaminantes, hemos investigado la actividad
estrogenica, de receptor de hidrocarburo arilico y de receptor X de
pregnano, de muestras de agua y sedimentos del rio Hamdoun,
tomadas aguas arriba y aguas abajo de la zona de vertidos procedentes
del area industrial de la region central de Tunez. Mediante un ensayo
in vitro de celulas cancerosas bioluminiscentes que expresan el gen
de la luciIerasa bajo el control de ciertos elementos con accion
hormonal, hemos detectado escasa actividad estrogenica en agua y
sedimentos por encima de la zona de vertidos; sin embargo,
encontramos Iuerte actividad estrogenica, de receptor de
hidrocarburo arilico y de receptor X de pregnano en agua y
sedimentos rio abajo. Con experimentos de competicion
demostramos que, predominantemente, las muestras de agua y de
sedimentos con actividad estrogenica contienen compuestos con alta
y baja aIinidad con el ER recombinante, respectivamente. Estos
resultados indican que el agua del rio y los sedimentos constituyen un
importante sumidero y pueden ser Iuente potencial de contaminantes
disruptores endocrinos.
Palabras clave: receptores de estrogeno, receptor X de pregnano,
receptor de hidrocarburo arilico, celulas bioluminescentes.
Abstract: Water and sediment waste rejected in Hamdoun`sriver
are major endocrine disrupting system. In recent years, many
studies supported that anthropogenic chemicals occurring in the
environment have been shown to mimic the action oI endogenous
hormones. These endocrine-disrupting chemicals can potentially
lead to a host oI adverse eIIects on wildliIe, such as the Ieminization
oI Iish, the lack oI reproduction success, birth deIects and sometimes
they can be the origin oI some kind oI cancers in human. The
occurrence oI intersex Iish in a number oI European rivers has been
attributed to the exposure to estrogenic chemicals present in sewage
treatment work eIIluents. To Iurther understand the environmental
eIIect oI these contaminants, the estrogenic, aryl hydrocarbon
receptor and pregnane X receptor activities oI water and sediments
Mnif W, Pillon A#, Duchesne M1#, Helal AN, Nicolas 1C#, Balaguer P# y Bartegi A*.
Laboratoire de Biochimie Unite de Recherche 02/UR/09-01 Institut Superieur de Biotechnologie BP 74, 5019 Monastir - Tunisia.
# INSERM, U540, Endocrinologie Moleculaire et Cellulaire des Cancers, 60 rue de Navacelles, 34090 Montpellier- France.
Recibido 2 de Septiembre de 2006 / Aceptado 2 de Octubre de 2006
Las aguas y sedimentos del ro tunecino Hamdoun
presentan riesgo de disrupcin endocrina
*e-mail: a.bartegilaposte.net
118
naturales y Iarmacos |8|. Entre estos compuestos, los estrogenos
naturales y sinteticos han demostrado ser los mas potentes disruptores
endocrinos tantoinvitro |9, 10| como in vivo |3, 11|.
Los sedimentos acuaticos actuan como sumidero para muchos
contaminantes y, por lo tanto, se pueden usar como medida integral de
la exposicion del ecosistema acuatico a la contaminacion. Los
sedimentos pueden contener mezclas de compuestos biologicamente
activos con mecanismos de accion diIerentes. Un estudio reciente ha
demostrado que E2, androsterona (un metabolito esteroideo
estrogenico), y nonilIenol estan presentes en los eIluentes de plantas
de tratamiento de aguas residuales que vierten en dos estuarios del
Reino Unido, y si bien las muestras de sedimentos de estos estuarios
resultaron ser muy estrogenicas, la identidad de los compuestos
activos necesita aun mayor concrecion |12|. Debido a la diIicultad de
identiIicar todos estos EDCs, muchos autores han intentado detectar
y cuantiIicar la potencia estrogenica de muestras de agua centrando
su investigacion sobre moleculas especiIicas |13, 14|. Tanto nosotros
como otros autores preIerimos valorar las actividades estrogenicas
totales |5, 15| mediante sistemas de Iraccionamiento analitico
combinados con ensayos biologicos in vitro desarrollados para
detectar y aislar compuestos estrogenicos presentes en el agua.
El objetivo principal de esta investigacion ha sido determinar las
actividades estrogenica (ER), de receptor de hidrocarburo arilico
(AhR) y de receptor Xde pregnano (PXR) del agua y sedimentos rio
arriba y aguas abajo de la conIluencia en el rio Hamdoun de los
vertidos de industrias textiles asentadas en la zona central de Tunez.
Los experimentos de competicion han demostrado que la actividad
ER presente en el agua del rio y en el sedimento tiene una debil
aIinidad con el ER recombinante. En estas muestras, determinamos
la actividad total de EDCs mediante ensayos de gen recombinante
delator-receptor invitroen celulas establemente transIectadas |16|.
Material y mtodos
Materiales
El medio de cultivo celular y otros aditivos se obtuvieron de LiIe
Technologies (Cergy - Pontoise, Francia); la luciIerina de Promega
(Saint - Quentin - Fallavier, Francia). La dioxina, 17- estradiol (E2)
y riIampicina, de Sigma Chemical Co (St. Louis, MO, USA), se
-2
disolvieronendimetil sulIoxido (DMSO) a 10 M.
Obtencionde lineas celulares delatoras establemente transfectadas
Las lineas celulares delatoras establemente transIectadas se
obtuvieron siguiendo un metodo previamente descrito |17|. De Iorma
resumida, la linea celular MELN se obtuvo por transIeccion de la
linea celular MCF-7 de cancer de mama que expresa el receptor ER
de estrogenos endogenos con un elemento sensible a estrogenos
clonado del constructo ERE-Glob-Luc-SVNeo del gen delator de la
luciIerasa |16|. La seleccion de clones resistentes a geneticina se
llevo a cabo empleando una concentracion de 1 mg/mL. El clon mas
sensible se aisloyse denomino MELN4.1.
La linea celular HahLPse obtuvo transIectando celulas HeLa con los
plasmidos CYP1A1-Luc y pSG5-puro. La seleccion de clones
resistentes se llevo a cabo usando puromicina a una concentracion de
0,5 g/mL. El clon con mayor respuesta a dioxina se denomino
HAhLP1.15 |5|.
La linea celular delatora HGPXR la obtuvimos por transIeccion de
celulas HeLa con los plasmidos (Gal4RE) 5 - glob - Luc (HG5LN
cells) y Gal4 (DBD) - hPXR (LBD). Los clones resistentes a
puromicina y geneticina se obtuvieron a las concentraciones de 0,5
g / mLy 1 mg / mLrespectivamente. El clon mas receptivo se aislo e
identiIico como HGPXR4.3 |18|.
Condiciones del cultivo celular
Las lineas celulares MELN, HahLP y HGPXR se cultivaron en
DMEM que contenia rojo de Ienol, glucosa (1g / L), suplementado
con 5 de suero Ietal bovino (FCS) y antibiotico al 1 en atmosIera
humedecida, con 5 de CO y a 37 C. Debido a la actividad
2
estrogenica del rojo Ienol y del FCS, los experimentos in vitro se
llevaron a cabo en DMEM sin rojo Ienol, suplementado con 6 de
DCCy 1 de antibioticos (penicilina / estreptomicina) (medio test de
cultivo).
Procedencia de las muestras
Tanto las muestras de agua como de sedimentos se tomaron rio arriba
y aguas abajo de la zona de vertido en el rio Hamdoun, que desemboca
en el Mediterraneo, de residuos procedentes de industrias textiles
proximas al mismo, asentadas en el area central deTunez.
Preparacion de las muestras
Las muestras de agua se Iiltraron, en primer lugar, a traves de un Iiltro
Whatman GF/Cenjuagado con disolvente para eliminar las particulas
en suspension y se almacenaron a -20 Chasta una segunda Iiltracion
con Iiltro de celulosa de 0,45 m. Cantidades diIerentes de muestras
de agua se aadieron al medio de cultivo o se concentraron mediante
mini-columnas de extraccion de Iase solida 5g C (SPE) y la
18
activacion de las lineas celulares que contenian el gen delator se
midio como previamente se ha descrito |5|. En nuestro
procedimiento, los 40 mLdel eluyente methanol/hexano obtenidos de
las mini-columnas SPE se concentraron con 2 mL de metanol y
corresponden a 1,5 Lde muestra de agua.
Los sedimentos se homogeneizaron antes de lioIilizarlos. Los
lioIilizados (20 g) se extrajeron dos veces (durante 20 y 30 min) con
diclorometano/metanol (2:1 v/v). Los extractos se combinaron y
secaron mediante paso por sulIato sodico anhidro en microIibra de
vidrio. Los eluyentes diclorometano/metanol se sometieron a
evaporacion hasta secado y los residuos se recuperaron con 2 mL de
metanol correspondiendo a 20 g de sedimento seco. Los extractos de
metanol se almacenaron a -20 C. Los extractos metilicos de agua y
sedimentos se ensayaron entonces sobre lineas celulares delatoras
establemente transIectadas y se midio la transactivacion de la
luciIerasa.
Ensayos de luciferasa
Las celulas se siembran en placas de cultivos celulares blancas opacas
4
de 96 pocillos con 150 l de medio test de cultivo (5x10 celulas por
pocillo). Los compuestos a ensayar se concentraron 4x en el mismo
medio y se adicionaron 50 L a cada pocillo. Transcurridas 8 horas
desde la siembra, las celulas se incubaron durante 16 horas con las
muestras de agua y sedimentos. Los experimentos se realizaron por
cuadruplicado. Al Iinal de la incubacion el medio que contenia el
eIector se retiro y Iue reemplazado por medio test de cultivo que
-4
contenia 3x10 M de luciIerina. A esta concentracion la luciIerina
diIunde al interior celular y causa una seal luminiscente, que es
estable durante 5 minutos. La placa de 96 pocillos se introdujo en un
luminometro Microbeta Wallac y la luminiscencia de celulas intactas
vivas se midio durante 2 s.
Prueba de inhibicion de la activacionde MELN
Las celulas MELN se sembraron en placas de cultivo de tejidos
Rev. Toxicol. (2006) 23: 118-124
119
Las aguas y sedimentos del rio tunecino Hamdoun presentan riesgo de disrupcion endocrina
Resultados
Bioensayode estrogenicidad in vitro. bioensayo MELN
La actividad estrogenica de los extractos de metanol de agua y
sedimentos tomados rio arriba de la zona de vertidos se caracterizaron
por inducir la actividad luciIerasa en la linea celular delatora MELN.
Como se muestra en la Iigura 1, las muestras de agua analizadas sin
ningun paso previo de concentracion mostraron una actividad
estrogenica media. En nuestras condiciones, los valores EC50
correspondientes a agua y sedimentos oscilan entre 44 y 84 pmol E2
EQ/L, respectivamente (Tabla 1). Ademas, las muestras de
sedimentos aguas abajo aun exhiben actividad estrogenica con
valores de EC50 de 10 pmol E2 EQ/g , en contraposicion a las
muestras de aguas arriba en las que se detecta una debil actividad con
EC50proximos a los 2 pmol E2 EQ/g (Fig. 1; Tabla 1).
Usando una concentracion saturante de 10 nM de E2 sobre celulas
MELN como control, los extractos de las muestras de agua y
sedimentos mediaron una activacion adicional de la luciIerasa muy
opacas blancas de 96 pocillos como se ha descrito anteriormente. En
tubos separados se prepararon las muestras de extracto de metanol (a
concentraciones del 80 de la maxima actividad de celulas MELN)
4x concentradas y se incubaron con el mismo volumen de
recombinante puriIicado ER en medio test de cultivo a 4 Cdurante
16 horas. El medio de cultivo se reemplaza por 100 L del medio de
cultivo procedente de los diIerentes tubos adicionados al mismo
volumen de medio Iresco. Tras 6 horas de incubacion a 37 C se
procedio a la determinacion de la luciIerasa.
Estadistica
Las curvas concentracion de agonista-respuesta se ajustaron
mediante regresion no lineal empleando la Iuncion sigmoidal
concentracion-respuesta del soItware graIico y estadistico Graph-
Pad Prism (version 4.0, 2003, Graphpad Incorporated, San Diego.
CA). El analisis estadistico de las medias se realizo mediante la t de
Student, considerandose los valores de P0,05 como
estadisticamente signiIicativos.
Tabla 1: Actividades estrogenica, AhR y PXR presentes en agua de rio y sedimentos.
debil (datos no mostrados). Estos resultados sugieren que la actividad
estrogenica especiIica estaba presente en estas muestras.
Prueba de inhibicion de la activacionde MELN
Los estrogenos de alta aIinidad, como es el caso de E2, EE2, E3 y E1,
pueden ser responsables de la estrogenicidad de muestras
ambientales de origen urbano. Para identiIicar la presencia de estos
compuestos que tienen alta aIinidad por ER u, pero que suelen
encontrarse a bajas concentraciones y, como consecuencia, no
detectables mediante tecnicas analiticas clasicas, desarrollamos un
metodo que denominamos prueba de inhibicion de la activacion de
MELN, en el que la transactivacion de ERu celular es completamente
inhibida por cantidades limitadas de ERu recombinante, usando
diIerentes concentraciones (1-100 nM) de compuestos estrogenicos
de alta aIinidad|5|.
Para determinar la aIinidad estrogenica en muestras del rio,
preincubamos los extractos de metanol con ERu recombinante. En un
segundo paso, se adiciona al medio test de cultivo medio de
preincubacion ligando- ERu recombinante y se determina su
actividad de transactivacion de las celulas MELN. Los ligandos
secuestrados son de ese modo incapaces de incorporarse a las celulas
y desencadenar actividad luciIerasa mediada por estrogenos. Cuanto
mayor es la concentracion de ERu recombinante, mas eIicientes son
la captura de estrogenos y la inhibicion de la transactivacion. Los
resultados claramente indican que las muestras de sedimentos
contienen compuestos de mucha menor aIinidad por la union con el
receptor ERu . Por contra, el agua presentaba una aIinidad mas Iuerte
EC50: valores medios de las concentraciones requeridas para producir el 50 de la induccion maxima,
determinados a partir de las curvas concentracion-respuesta representadas en las Iiguras 1, 3 y 4 y expresados como
cociente de agonista control equivalente por litro de agua o por gramo de sedimento. ND: no determinado. * P 0,05
Figura 1: Induccion de la actividad luciferasa por extractos de las
muestras de agua y sedimentos en celulas MELN. Porcentafes de
transactivacion de luciferasa por extractos metilicos obtenidos a
partir de preconcentrados de agua y sedimentos por pocillo ( media
-8
S.E.M de cuadruplicados) con el valor 100 atribuido a 10 M de
agonista E2 expresado como una funcion del porcentafe de extractos
metilicos en el mediode cultivo. W. agua, S. sedimentos.
Rev. Toxicol. (2006) 23: 118-124
120
MniI W, Pillon A, Duchesne MJ, Helal AN, Nicolas JC, Balaguer P, Bartegi A
a xenoestrogenos (Fig. 2).
Figura 2: Inhibicion ER de la activacion de la luciferasa en celulas
MELN tratadas con extractos de muestras. Las concentraciones de
extractos de agua y sedimentos que ocasionan el 80 de la maxima
actividad inducida de luciferasa se evaluaron en celulas MELN en
presencia de cantidades variables de ER recombinante (1-100 nM).
Porcentafes de transactivacion de luciferasa por extractos metilicos
obtenidos a partir de preconcentrados de agua y sedimentos por
pocillo (media S.E.M de cuadruplicados) con el valor 100
-8
atribuido a 10 M de agonista E2 expresado en funcion de las
concentraciones de ER recombinante. W. agua, S. sedimentos.
BioensayodeAhR invitro. bioensayo HAhLP
Para caracterizar bien la actividad agonista de AhR, los extractos de
metanol de muestras concentradas de agua y sedimentos se aplicaron
directamente a las lineas celulares HAhLP. Los resultados se
expresan como porcentaje de actividad de la luciIerasa, asignandole
el valor 100 de transactivacion a 10 nM de dioxina. Nuestros
resultados no indican actividad alguna en muestras de agua tomadas
rio arriba, sugiriendo que no hay presencia de actividad agonistaAhR
en dichas muestras, pero en los sedimentos recogidos en la misma
zona se detecta muy escasa actividad AhR, con valores de 2,7 pmol
Dioxina EQ/g. Por el contrario, comprobamos como los extractos
tanto de agua como de sedimentos recogidos por debajo de los
vertidos industriales maniIiestan una intensa actividad tipo dioxina
(119 pM Dioxina EQ/g y 50 pM Dioxina EQ/g, respectivamente. Fig.
3; Tabla 1). Esta actividad AhR obtenida es especiIica puesto que las
celulas preincubadas con 10 nM de dioxina (control) no mostraron
incremento alguno en la activacion de la luciIerasa (datos no
mostrados).
Bioensayode PXR invitro. bioensayo HGPXR
La actividad agonistica de PXRpresente en muestras concentradas de
agua de rio y sedimentos tambien se determino, sin maniobras de
concentracion, sobre lineas celulares estables HGPXR. Los
resultados se expresaron como porcentaje de actividad luciIerasa,
asignando el valor 100 de transactivacion al obtenido con
riIampicina a una concentracion de 3 M. En estas condiciones
experimentales no Iue posible detectar actividad PXR alguna en
aguas arriba, pero si una debil actividad agonistica tipo riIampicina
con valores de EC50 del orden de 0,78 nmol RiI EQ/g en las muestras
de sedimentos. Por el contrario, comprobamos como aguas abajo de
los vertidos tanto los extractos de agua como los de sedimentos

poseen una Iuerte actividad agonistica PXR(115 nmol RiI EQ/Ly 68
nmol RIF EQ/g, respectivamente. Fig. 4; Tabla 1). Usando estas
muestras de rio en la linea celular con expresion de luciIerasa
inducida HG5LNno detectamos ninguna actividad ni en muestras de
agua ni de sedimentos. Puesto que esta linea celular solo contiene el
Figura 3: Induccion de la actividad de luciferasa por extractor de
muestras en celulas HAhlP. Porcentafes de transactivacion de
luciferasa por extractos metilicos obtenidos a partir de
preconcentrados de agua y sedimentos por pocillo (media S.E.M de
cuadruplicados) con el valor 100 atribuido a 100 nM de agonista
dioxina expresado como una funcion del porcentafe de extractos
metilicos en el medio de cultivo. W. agua, S. sedimentos.
Figura 4: Induccion de la actividad de luciferasa por extractos de
muestras en celulas HGPXR. Porcentafes de transactivacion de
lucifesara por extractos metilicos obtenidos a partir de
preconcentrados de agua y sedimentos por pocillo (media S.E.M de
cuadruplicados) con el valor 100 atribuido a 3 M de agonista RIF
expresado como una funcion del porcentafe de extractos metilicos en
el mediode cultivo. W. agua, S. sedimentos.
Rev. Toxicol. (2006) 23: 118-124
121
aromaticos policiclicos y compuestos organoclorados
principalmente en la recta Iinal del rio. Cuatro Iabricas de pulpa y
papel estaban ubicadas en la misma area del rio, y sus vertidos son
sospechosos de ser las principales causas de estres sobre los recursos
del rio. El uso de cloro elemental en el proceso de decoloracion
resulto ser el responsable de la descarga de dibenzo-p-dioxinas
policloradas y dibenzoIuranos en los eIluentes de molinos de pulpa
|34-36|.
Los contaminantes ambientales aIectan a una gran variedad de
eventos biologicos en muchas especies. Los xenobioticos son tipicos
contaminantes ambientales que pueden unirse a PXR |37, 38|.
Usando celulas HGPXR, demostramos que el agua y el sedimento de
este pequeo rio tunecino tienen una actividad PXR elevada. La
maxima induccion de la actividad luciIerasa se ha encontrado aguas
abajo tanto en muestras de agua como de sedimentos. Ademas,
nuestros experimentos de competicion muestran que esta actividad de
PXRera muy especiIica; esta actividad de PXRpodria ser atribuible a
algunos compuestos medioambientales como Italatos, nonilIenoles,
pesticidas organoclorados y biIenilos policlorados |18, 38-41|.
Habiendo sido el principal objetivo de este estudio determinar el
papel de industrias textiles en la contaminacion medioambiental del
area del rio Hamdoun por EDCs, nuestra investigacion demuestra la
presencia de actividades estrogenica, AhR y PXR en el agua y el
sedimento del rio mucho mas Iuerte aguas abajo que las presentes
contracorriente. Nuestros resultados indican tambien, que en nuestro
caso, el agua de rio y los sedimentos son el mayor sumidero y una
Iuente potencial de contaminantes EDCs, que tiene su origen en los
colorantes y otros compuestos quimicos usados en esta clase de
industria. Seran necesarios posteriores estudios para una completa
caracterizacion de estas sustancias.
Agradecimientos.
Esta investigacion ha sido parcialmente subvencionada por el
Ministerio Tunecino de Investigacion CientiIica, Tecnologia y
Desarrollo de Competencias a la Unidad de Investigacion 02/UR/09-
01 del Instituto Superior de Biotecnologia de Monastir. Los autores
agradecen tambien a los ProIesores Bernardo Santano y Gines M.
Salido la traduccion al espaol y la supervision del texto de este
articulo originariamente escrito eningles.
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Fenet H, RuII M, Moras D, Vignon F, Duchesne MJ, Casellas C,
constructo (Gal4RE) 5- glob-Luc, no se observo expresion de
luciIerasa inducida HG5LN por muestras de agua o sedimentos, lo
que sugiere que las muestras solo contienen actividad especiIica
(datos nomostrados).
Discusin
La actividad disruptora endocrina medioambiental esta mediada por
una gran variedad de compuestos que pueden estar distribuidos de
manera diIerente en agua o sedimentos. Estas sustancias quimicas
incluyen un amplio espectro de moleculas de origen natural, agricola,
Iarmaceutico o industrial. Dadas las diIicultades que se tienen para
detectar e identiIicar todos estos EDCs, se ha desarrollado un amplio
abanico de ensayos in vitro. Entre estas tecnicas podemos citar
ensayos con gen delator empleando lineas celulares transgenicas
humanas |19|, levaduras |20| o ensayos de induccion de crecimiento
|14|. En un intento por establecer los niveles de contaminacion por
EDCs en el rio tunecino Hamdoun, hemos recogido muestras de agua
y sedimentos del mismo y usado un ensayo in vitro con celulas
cancerosas bioluminiscentes que expresan el gen de la luciIerasa bajo
determinados elementos de control de respuesta hormonal. Estos
ensayos in vitro del gen recombinante delator-receptor son un metodo
sensible, selectivo, adecuados para ensayos de exploracion masiva y
de biomonitorizacionmedioambiental |15-17|.
Tomados en conjunto, nuestros resultados muestran como agua y
sedimentos inducen signiIicativamente la actividad del gen delator de
estrogeno. La maxima induccion de luciIerasa se obtuvo en las
muestras procedentes de aguas debajo de la zona de vertidos
industriales, muestras que contienen claramente compuestos
estrogenicos. Este hecho se ha observado previamente en estudios
llevados a cabo con eIluentes de plantas de tratamiento de aguas
residuales, aguas y sedimentos |5, 7, 21-24|. Para caracterizar la
aIinidad de compuestos estrogenicos desconocidos hemos
desarrollado una prueba de inhibicion de la activacion de celulas
MELNcon agua y sedimentos de la misma zona mediombiental. Los
extractos de metanol de agua y sedimentos se aadieron a las celulas
en presencia de cantidades variables de ER u recombinante. Las
curvas concentracion-respuesta permitieron identiIicar claramente la
existencia de la mayor aIinidad por ERen agua y la menor aIinidad en
sedimentos. En un trabajo previo, Fenet y cols. |23| mostraron que la
actividad estrogenica en sedimentos podia explicarse, en una gran
parte, por la concentracion de alquilIenol. Sin embargo, otros
estudios |13, 25-27| demostraban la presencia de estrogenos
naturales (E2, E1 y E3) o estrogeno sintetico (EE2) en aguas
residuales. Ambas hipotesis podrian explicar los resultados que
nosotros hemos obtenido.
En sedimentos de rio, varias sustancias son capaces de unirse a AhR
|28|. Demostramos aqui que, solamente despues de la zona de
vertidos industriales, el agua rio abajo y los extractos sedimentarios
tienen una actividad de AhR Iuerte. Ademas, nuestros experimentos
de competicion muestran que esta actividad de AhR es muy
especiIica, ya que este rio recibe desechos procedentes de la industria
textil principalmente. Sin embargo, Focardi y cols. |29| demostraron
la existencia de un gradiente de contaminacion de compuestos
organoclorados, como policlorobiIenilos (PCBs) y pesticidas (por
ejemplo lindano) en el rio que analizaron, que se extiende desde los
Andes (relativamente sin contaminar) a la desembocadura del mismo
(seriamente contaminado) en el Oceano PaciIico. Estos resultados
Iueron conIirmados posteriormente por otros autores |30-33| que
inIormaron de la presencia de altas concentraciones de hidrocarburos
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124
Resumen: El creciente desarrollo industrial y urbano ha traido
consigo la aparicion de una cantidad importante de problemas
originados por sustancias quimicas toxicas, lo cual aIecta tanto a la
salud humana como la de los ecosistemas. Un instrumento alternativo
para la determinacion de toxicidad de muestras ambientales es la
utilizacion de bioensayos. En este trabajo se investigo la posibilidad
de utilizar semillas de lechuga, achicoria y escarola para evaluar la
toxicidad de diIerentes compuestos toxicos en agua. Las semillas de
lechuga mostraron una sensibilidad ligeramente mayor a las
sustancias toxicas comparadas con las semillas de achicoria y
escarola, las dos ultimas usadas por primera vez en bioensayos. Se
evaluo ademas la eIectividad del uso de esas semillas para determinar
la toxicidad de dos eIluentes industriales, uno de la industria citricola
y el otrode una destileria de alcohol de melaza de caa de azucar.
Palabras clave: bioensayos, residuos industriales, citricola, vinaza.
Abstract: Use of lettuce, endive and chicory seeds in the
determination of the effect of different compounds through
phytotoxicity assays. The increasing urban and industrial
development has brought about numerous important problems that
aIIect both ecosystems and human health. An alternative instrument
Ior the determination oI toxicity in environmental samples is the use
oI bioassays. In this work we studied the possibility oI using lettuce,
chicory and endive to evaluate the toxicity oI diIIerent toxic
compounds. Lettuce seeds showed a higher sensitivity to toxic
substances than either chicory or endive seeds, these two being used
Ior the Iirst time in bioassays. We also evaluated the eIIiciency oI the
use oI the above seeds in the determination oI the toxicity oI two
industrial wastes, one Irom a citrus processing Iactory and the other
Irom a sugar molasses alcohol distillery.
Key words: bioassays, industrial wastes, citrus Iactory, vinasse
Introduccin
Los procesos de contaminacion que aquejan a la humanidad estan
ligados al crecimiento de la poblacion mundial y al aumento y
diversiIicacion de las actividades del hombre. De esta manera,
aIectan no solo a la salud humana, sino tambien a la integridad de los
ecosistemas, ocasionando daos a veces irreversibles, tal como la
perdida de biodiversidad.
El deterioro ambiental se hace mas preocupante en el agua, pues es un
insumo basico para la subsistencia de todo organismo vivo y para las
actividades productivas del hombre.
Los metales como el plomo, mercurio, cobalto, cadmio, niquel,
vanadio, cromo, cobre, arsenico o plata, son sustancias toxicas si
estan en concentraciones altas, especialmente sus iones y
compuestos. Muchos de estos elementos son micronutrientes
necesarios para los seres vivos y pueden ser absorbidos por las raices
de las plantas o Iorma parte de la dieta de los animales. Pero cuando
por motivos naturales o por la accion del hombre se acumulan en los
suelos, en las aguas o en los seres vivos, se convierten en toxicos
peligrosos |2-7|. Algunos compuestos de estos metales pueden suIrir
acumulacion en la cadena troIica. Otros elementos como el aluminio
y el hierro tambien pueden ser toxicos, pero aIortunadamente se
encuentran en Iormas quimicas no solubles y es muy diIicil que los
seres vivos los asimilen |3|.
Dejando de lado los organismos patogenos, las sustancias que pueden
aIectar la salud de la poblacion son miles, ademas las sustancias
potencialmente toxicas pueden encontrarse en concentraciones tan
bajas, que no son detectables con los metodos quimicos
convencionales.
Un instrumento alternativo y que complementa los tradicionales
analisis quimicos para la determinacion de toxicidad de muestras
ambientales es la utilizacion de bioensayos, ya que los organismos
vivos presentan algunas respuestas a niveles peligrosos de cualquier
sustancia quimica o mezcla compleja de toxicos presentes |2-10|. Los
bioensayos in vitro han ganado aceptacion en las estrategias de
biomonitorizacion, Iundamentalmente porque suministran
resultados conIiables, son economicos, simples y rapidos |10|.
En la practica estos metodos no pueden reemplazarse por los analisis
quimicos tradicionales |1|. Desde mediados del siglo pasado, se
intensiIico el uso de bioensayos para el control de la calidad de las
aguas, utilizandose una amplia variedad de organismos, desde
bacterias hasta animales yvegetales
El objetivo principal de este trabajo Iue desarrollar un metodo de
analisis sencillo, eIicaz y economico para evaluar la toxicidad de
diIerentes compuestos toxicos en agua, basandose en una tecnica
donde se usan semillas de vegetales y no se requiere personal ni
equipos especializados.
Se evaluo ademas la eIectividad del metodo realizando ensayos en los
cuales se usaron dos eIluentes industriales procedentes de una
industria citricola y de una destileria de alcohol de melaza de caa de
azucar.
Navarro AR, Arrueta RG y Maldonado MC`
Instituto de Biotecnologia, Facultad de Bioquimica, Quimica y Farmacia, Universidad Nacional de Tucuman,
Ayacucho 465 (4000) Tucuman, Argentina. 54-381-4107002.
Recibido 16 de Marzo de 2006 / Aceptado 1 de Diciembre de 2006
Determinacion del efecto de diferentes compuestos a travs de ensayos de
fitotoxicidad usando semillas de lechuga, escarola y achicoria
*e-mail: biotecIbqI.unt.edu.ar
Rev. Toxicol. (2006) 23: 125-129
125
inhibicion de la elongacion de las raices de lechuga y escarola a partir
de una concentracion de 2,2 mg/l, mientras que en las raices de
achicoria la concentracion Iue de 3,7 mg/l (p 0,05), resultados
similares se observaron cuando se estudio el eIecto del toxico en los
hipocotilos (Fig. 1).
Figura 1: Porcentafe de inhibicion del crecimiento de raices e
hipocotilos en lechuga, escarola y achicoria a diferentes
concentraciones de Na2HAsO4.7H2O.
En el tratamiento con CuCl , las semillas de achicoria resultaron las
2
mas sensibles, debido a que el crecimiento de sus raices se inhibio con
concentraciones de 2,2 mg/l, resultando la de lechuga y escarola

nhibidas a una concentracion de 3,8 mg/l. La elongacion de los
i
hipocotilos se inhibio a una concentracion de 1,8 mg/l en las semillas
de lechuga, mientras que para las de escarola y achicoria el eIecto se
mostro a concentraciones de 3,2 mg/l (p 0,05) (Fig. 2).
concentraciones de CuCl .
2
El KCNresulto mas toxico con las semillas de lechuga, cuya CIM Iue
de 2,5 mg/l mientras que para las semillas de achicoria y escarola las
CIM Iueron de 3 y 3,8 mg/l respectivamente. Cuando se estudio el
eIecto del KCNsobre la elongacion de los hipocotilos las semillas de
achicoria resultaron las mas sensibles con una CIM de 1 mg/l,
mientras que para lechuga Iue de 1,8 mg/l y escarola de 3,8 mg/l (p
0,05) (Fig. 3).
Material y mtodos
Material biologico. se trabajo con semillas de lechuga (Lactuca
sativa var. mantecosa), escarola (Sichorium endivia var. lisa) y
achicoria (Sichorium intybus var. Iina) de tamao homogeneo,
obtenidas de semillerias locales. Las semillas seleccionadas se
almacenaron en ambiente seco y a temperatura ambiente.
Preparacion de las soluciones de sustancias toxicas. Se prepararon
soluciones al 0,1 de las siguiente sales: KCN, CoCl ,
2
Na HAsO .7H2O, K Cr O y CuCl |4-5|.
2 4 2 2 4 2
Se trabajo con eIluentes de una industria citricola y con la vinaza de
una destileria de alcohol de melaza de caa de azucar. En ambos casos
se debio nuetralizar con NaOH 20 debido a que los mismos eran
acidos, lo que inIluye negativamente en la germinacion y el desarrollo
de las plantulas.
El eIluente de la citricola presenta las siguientes caracteristicas: DBO
de 3000 a 5000 mg O / l, IosIatos 0,074 g/l, conductividad 553 US/cm
2
y pH3,1a 3,7.
La vinaza es el residuo de la destilacion del alcohol obtenido por
Iermentacion de melaza de caa de azucar y tiene la siguiente
composicion aproximada: DBO de 40.000 a 60.000 mgO /l,
2
nitrogeno de 0,56 a 0,9 g/l, acido IosIorico de 0,25 a 1,30, potasio de
1,25 a 1,60y pH4,5.
Como medio de dilucion se uso agua mineral natural. El control
negativo se hizo con agua mineral y el control positivo con una
solucionde ZnSO al 1 como toxico de reIerencia |4-5|.
4
Protocolo de ensayo. se realizo una prueba presuntiva utilizando
diluciones logaritmicas del toxico, las cuales permitieron establecer
el intervalo de concentracion conveniente para obtener la
Concentracion Inhibitoria Minima (CIM), deIinida como la minima
concentracion a la cual se produce una inhibicion del crecimiento de
la elongacionde la raiz o del hipocotilo de las plantulas |6-9|.
-1 -2
El eIluente de la industria citricola se uso puro y diluido a 10 ; 10 y
-3
10 . Cuando se uso vinaza (residuo de destilacion del alcohol) se
-1 -2 -3 -4
probo pura y a las diluciones 10 , 10 , 10 y 10 . Una vez preparadas
las diluciones y siguiendo la tecnica descripta por Wang |11|, se
coloco en caja de Petri un disco de papel de Iiltro (Whatman N3) el

cual se saturo con 4ml de la dilucion. Con la ayuda de una pinza, se
colocaron cuidadosamente 20 semillas en cada caja teniendo en
cuenta de dejar espacio suIiciente entre las semillas para permitir la

elongacion de las raices. Como estas variedades de semillas requieren
oscuridad para germinar, las cajas de Petri se envolvieron con papel y
ademas se introdujeron en bolsas de plastico para evitar la perdida de

humedad. Posteriormente todas las cajas se incubaron 120h a 22C
|6,9-11|. Al cabo de este tiempo se midieron cuidadosamente la
longitud de la raiz y del hipocotilo de cada una de las plantulas,
correspondientes a cada concentracion de la sustancia ensayada y a
los controles. Para cada dilucion se calculo el promedio de elongacion
de la raiz y del hipocotilo y con estos valores se determino el
porcentaje de inhibicion del crecimiento de la radicula y del
hipocotilo, respectodel promedio de elongacion del control negativo.
Los datos obtenidos Iueron analizados estadisticamente usando los
tests de Student, Kruskal-Wallis y Dunn.
Resultados
Cuando se trataron las semillas con Na HAsO .7H O, se produjo
2 4 2
Rev. Toxicol. (2006) 23: 125-129
126
Navarro AR, Arrueta RG y Maldonado MC
concentraciones de KCN.
En la Iig.4 podemos observar el comportamiento del crecimiento de
raiz y la elongacion del hipocotilo en presencia de K CrO , este
2 4
compuesto suele ser usado como toxico de reIerencia. La CIM para
las semillas de achicoria y escarola Iue de 2,5 mg/l, mientras que para
lechuga Iue 3,8 mg/l.
El eIecto sobre el hipocotilo mostro un comportamiento diIerente ya
que la CIM para las semillas de lechuga Iue de 2,5 mg/l, es decir mas
sensible que escarola (3,8 mg/l) y achicoria (4 mg/l) (p 0,05).
concentraciones de K CrO .
2 4
Cuando se trataron las semillas con CoCl , la CIM para el crecimiento
2
de las raices en escarola Iue de 3,2 mg/l, siendo lechuga y achicoria un
poco mas resistentes (CIM 3,8 mg/l). Respecto a la inhibicion del

crecimiento del hipocotilo, como en los otros toxicos estudiados, el
eIecto se invierte resultando mas sensible las semillas de lechuga
(CIM 2,5 mg/l) en comparacion con las de achicoria y escarola que
mostraron una CIM de 3,7mg/l (p 0,05) (Fig. 5).

Cuando se evaluo el eIecto del eIluente de una industria citricola
sobre la inhibicion del crecimiento de las raices y los hipocotilos de
las semillas de achicoria, lechuga y escarola, la CIM obtenida
-3
correspondio a una dilucion 10 . A pesar que los valores de la CIM
coincidieron para las tres semillas estudiadas, las de achicoria
resultaron mas sensibles que las otras dos para diluciones menores.
concentraciones de CoCl .
2
concentraciones de efluente de citricola.
concentraciones de vina:a.
Rev. Toxicol. (2006) 23: 125-129
127
Determinacion del efecto de diferentes compuestos a traves de ensayos de fitotoxicidad usando semillas de lechuga, escarola y achicoria
Discusin
Las semillas de lechuga mostraron una sensibilidad ligeramente
mayor a las sustancias toxicas comparadas con las semillas de
achicoria y escarola. Valores de CIM semejantes a los nuestros Iueron
encontrados por Innacone y col. |8| cuando usaron semillas de
En el caso del eIluente de una destileria, los resultados Iueron
similares a los obtenidos con el eIluente de la citricola, pero la CIM se
-4
alcanzo con una dilucion de 10 (p 0,05).Cuando se trataron las tres
variedades de semilla con la vinaza pura se produjo un 100 de
inhibicion tanto en el crecimiento de la raiz como de los hipocotilos.
Esta Iue una diIerencia con el otro eIluente estudiado, debido a que
con ninguna de las semillas (lechuga, escarola y achicoria) se inhibio
un 100 el crecimiento (raices e hipocotilo) cuando se uso puro.
Los valores de las CIM obtenidas para cada toxico en raiz e hipocotilo
se encuentranresumidos en laTabla 1.
Tabla 1: Efecto de Na HAsO .7H O, CuCl , KCN, K CrO , CoCl y
2 4 2 2 2 4 2
efluentes de la industria citricola y destileria sobre la
concentracion inhibitoria minima del crecimiento de las raices y
los hipocotilos de las semillas de achicoria, lechuga y escarola.
De estos resultados podemos conIirmar la mayor toxicidad de la
vinaza respecto al eIluente de la citricola, ya que no solo inhibio el
100 del crecimiento de todas las semillas cuando se uso puro, sino
que la CIM para la vinaza Iue 10 veces menor (p 0,05).
Los porcentajes de germinacion de las semillas empleadas en este
estudio se muestran en la Tabla 2 donde se puede observar que las tres
semillas tienen un comportamiento similar respecto a los toxicos
empleados. En el caso de los eIluentes los porcentajes de germinacion
Iueron menores que usando los quimicos puros y este eIecto Iue
mayor cuando se ensayaron las distintas concentraciones de vinaza.
En la Tabla 3 se muestra la desviacion estandar y el promedio de
elongacion de hipocotilos y raices Irente a todos los toxicos
empleados, donde se observa un comportamiento similar para las tres
variedades de semillas ensayadas siendo mas sensible el eIecto en las
raices que en hipocotilo.
Tabla 3: Desviacion estandar y promedios de la elongacion de
hipocotilos y raices en semillas de lechuga, escarola y achicoria.
Tabla 2: Efecto de Na HAsO .7H O, CuCl , KCN, K CrO , CoCl y
2 4 2 2 2 4 2
efluentes de la industria citricola y destileria sobre el de
germinacion de semillas de lechuga, achicoria y escarola.
Na HAsO
2 4
K CrO
2 4
CuCl
2
CoCl
2
128
Rev. Toxicol. (2006) 23: 125-129
Navarro AR, Arrueta RG y Maldonado MC
lechuga para evaluar la toxicidad de lindano y clorpiriIos. Las
semillas de lechuga han sido recomendadas por la USEPA y por la
FDAencontrandose entre las mas sensibles en comparacion con otras
seis especies de semillas de plantas terrestres |12|. Las pruebas de
Iitotoxicidad que emplean plantas terrestres, no son usadas
Irecuentemente en ecotoxicologia, sin embargo estos ensayos
presentan caracteristicas importantes: se las puede usar con muestras
coloreadas o turbias, en ensayos estatico, semiestatico y de Ilujo
continuo y con un minimo costo de mantenimiento en el laboratorio
|8-12|.
Por todas estas ventajas nosotros probamos las semillas de escarola y
achicoria para evaluar la toxicidad de los elementos estudiados y
encontramos que la respuesta de ambas semillas es similar a las
obtenidas cuando se uso semillas de lechuga. La importancia de estos
resultados radica en que no hay datos en la bibliograIia sobre el uso de
semillas de achicoria y escarola, y por la respuesta de las mismas
Irente a los toxicos probados, como asi tambien a los eIluentes
industriales.
Despues de los estudios realizados en nuestro laboratorio podria ser
probable el uso de las semillas de lechuga, escarola y achicoria para
evaluar la toxicidad de compuestos puros y de aguas superIiciales
como lagos y rios, aguas subterraneas y aguas residuales domesticas e
industriales. Son necesarios estudios mas proIundos sobre este tema y
la comparacionconotras tecnicas analiticas ya establecidas.
Ademas estas semillas son Iaciles de conseguir, la metodologia
empleada es simple y puede ser realizada en cualquier lugar por
personal no especializado, sin necesidad de materiales costosos ni
equipos soIisticados.
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129
Determinacion del efecto de diferentes compuestos a traves de ensayos de fitotoxicidad usando semillas de lechuga, escarola y achicoria
Rev. Toxicol. (2006) 23: 125-129
Resumen: El cadmio(Cd) es un toxico presente en el medio ambiente
que aIecta a los sistemas biologicos por varias rutas. Los mecanismos
moleculares de su toxicidad no estan bien deIinidos. Nosotros hemos
demostrado recientemente en un modelo de administracion cronica
de Cd en ratas, que la quercetina, un potente 'scavenger de radicales
libres de oxigeno, tiene un eIecto protector sobre la neIrotoxicidad
inducida por Cd. La potente actividad antioxidante de la quercetina
pudiera ser la responsable de este eIecto protector. Sin embargo, el Cd
activa multiples rutas de sealizacion relacionadas con respuestas
celulares Irente al estres. Ras es un miembro de la Iamilia de las
pequeas GTPasas, con una gran variedad de Iunciones que incluyen
la regulacion de genes de expresion y proliIeracion celular. Nuestro
objetivo en este trabajo Iue estudiar el eIecto del cadmio y la
quercetina en el proceso proliIerativo relacionado con las vias de
sealizacion mediadas por Ras. El estudio se realizo durante nueve
semanas con ratas Wistar. Se dividieron en cuatro grupos: 1) Grupo
control, 2) Grupo cadmio: 1,2 mg/Kg/dia, s.c., 3) Grupo quercetina:
50 mg/Kg/dia, i.p., 4) Grupo cadmio-quercetina: animales tratados
con cadmio y quercetina a las dosis y vias de administracion
anteriormente descritas. Para valorar la toxicidad renal se determino
la excrecion urinaria de proteinas y enzimas marcadoras de necrosis
tubular, asi como las concentraciones plasmaticas de creatinina y
urea. La expresion y activacion renal de Ras se evaluo mediante
Western blot e inmunohistoquimica. La proliIeracion celular se
determino por deteccion del antigeno Ki-67. Los resultados
mostraron que la co-administracion de cadmio y quercetina mejoro la
Iuncion renal alterada por la exposicion a cadmio. Por otra parte, se
observo una mayor activacion de Ras y una mayor proliIeracion
celular en los riones de los animales tratados con cadmio. El
tratamiento con quercetina redujo la activacion renal de Ras y el
numero de celulas en proliIeracion. Nuestros resultados sugieren que
el eIecto protector de la quercetina sobre la neIrotoxicidad inducida
por cadmio pudiera deberse a la inhibicion de esta ruta de
sealizacion.
Palabras clave: Cadmio, quercetina, nefrotoxicidad, Ras,
proliferacion.
Abstract: Role of Ras signalling pathway in a model of cadmium-
induced nephrotoxicity. Protective effect of the antioxidant
quercetin. Cadmium (Cd) is an ubiquitous environmental toxicant
that aIIects biological systems in various ways. The molecular
mechanisms oI its toxicity are not yet well deIined. We have recently
reported in an experimental model oI chronic cadmium
administration in rats, that quercetin, a potent oxygen Iree radical
scavenger, has a protective eIIect on cadmium-induced
nephrotoxicity. Quercetins strong antioxidant activity could be
responsible Ior the protective eIIect. However, Cd activates multiple
signal transduction pathways related to cellular responses to stress.
Ras is a member oI a Iamily oI small GTPases with a great variety oI
Iunctions including regulation oI gene expression and cell
proliIeration. Our aim in this work was to study the eIIect oI Cd and
quercetin on the proliIeration related to Ras-mediated signal
transduction pathways. Experiments were carried out in male Wistar
rats during nine weeks. Rats were distributed in Iour experimental
groups: 1) control rats; 2) cadmium group (1,2 mg Cd/Kg/day s.c.);
3) quercetin group (50 mg/Kg/day, i.p.) and 4) cadmium-quercetin
group (Cd and quercetin at the same doses as in the groups 2 and 3
respectively). Renal toxicity was evaluated by measuring urinary
excretion oI proteins and enzyme markers oI tubular necrosis, as well
as plasma concentrations oI creatinine and urea. Renal expression oI
Ras and Ras activation was assessed by Western blot and
inmuhistochemistry. Assessment oI cell proliIeration was evaluated
by detection oI the Ki-67 antigen. Animals that received both Cd and
quercetin showed a better renal Iunction than those receiving Cd
alone. On the other hand, Cd increased renal Ras activation and cell
proliIeration. Quercetin treatment reduced Ras activation and the
number oI cells in proliIeration. Our results suggest that the
protective eIIect oI quercetin on cadmium-induced nephrotoxicity
could be associated with the inhibition oI Ras signal transduction
pathway.
Key words: Cadmium, quercetin, nephrotoxicity, Ras, proliferation
Introduccin
El cadmio es un toxico ambiental presente en el suelo, aire, agua y
alimentos, que aIecta a los sistemas biologicos provocando la
llamada enIermedad de Itai itai, caracterizada por problemas oseos
graves e insuIiciencia renal. Los eIectos de este metal en la poblacion
general, expuesta a bajas concentraciones, han ido aumentando por el
incremento en la produccion industrial y agricola y por su
contaminacion medioambiental |1|.
El cadmio, tras ser absorbido por via pulmonar o gastrointestinal, se
transporta en sangre unido a la albumina y a los globulos rojos. En el
higado se induce la sintesis de metalotioneinas (MTs) o proteinas de
bajo peso molecular con eIecto detoxiIicante sobre el metal. El
complejo Cd-MT, al tener un tamao molecular pequeo, se Iiltra a
traves de los glomerulos a la orina primaria, donde las celulas de los
Snchez-Gonzlez PD, Vicente-Snchez C, Arvalo MA, Prez-Barriocanal F, Lpez-Novoa 1M
y Morales AI`.
Instituto Reina SoIia de Investigacion NeIrologica. Departamento de Fisiologia y Farmacologia Area Toxicologia. EdiIicio Departamental.
Campus Miguel de Unamuno. 37007 Salamanca (Espaa).
Recibido 29 de Julio de 2006/ Aceptado 2 de Octubre de 2006
Papel de la va de Ras en un modelo de nefrotoxicidad inducida por cadmio.
Efecto protector del antioxidante quercetina
*e-mail: amoralesusal.es
130
Rev. Toxicol. (2006) 23: 130-137
A los tiempos basales (T0) y a las nueve semanas (T9), las ratas se
colocaron en jaulas metabolicas individuales, en las cuales tuvieron
libre acceso a la comida y a la bebida. Tras dos dias de
acostumbramiento a su nuevo entorno, se recogio orina de 24h,
muestras de sangre del extremo de la cola en capilares heparinizados
que se centriIugaron para obtener plasma y se observo la evolucion
del peso corporal en todos los grupos experimentales.
Aesos tiempos T0 y T9, 5 ratas de cada grupo se anestesiaron y los
riones se perIundieron con solucion salina heparinizada a 37C. Las
muestras renales destinadas al analisis por Western blot se
almacenaron a -80C, mientras que los estudios histologicos se
llevaron a cabo en piezas renales Iijadas durante 24h en Iormaldehido
4 tamponado a pH7e incluidas en paraIina.
En todos los procedimientos, los animales se trataron en
concordancia con los Principios para el Cuidado y Uso de los
Animales, y las recomendaciones establecidas por el Consejo de
Europa (Directiva del Consejo de Europa 86/609/CEE) y el Gobierno
Espaol (BOE N. 67, pp: 8509-8512, 18 de Marzo de 1988; y BOE N.
256 pp: 31349-31362, 25 de Octubre de 1990).
Estudios de funcion renal
Para valorar la Iuncion renal se evaluo la excrecion urinaria de
proteinas, microalbuminuria y las enzimas marcadoras de lesion
renal: lactato-deshidrogenasa (LDH), N-acetil--D-glucosaminidasa
(NAG), gammaglutamil-transpeptidasa (GGT) y IosIatasa alcalina
(FA) (Randox; Roche Diagnostics), asi como el Ilujo urinario. En
plasma, se determino nitrogeno ureico plasmatico (BUN) y creatinina
plasmatica para el calculo del aclaramiento de creatinina. Todas las
determinaciones bioquimicas se llevaron a cabo mediante un
analizador automatico (Roche/Hitachi 917) con kits comerciales de
Randox(Randox Laboratories LTD) y Roche (Roche Diagnostics).
Estudios inmunohistoquimicos
Las secciones renales de 3 m se desparaIinaron y Iinalmente se
rehidrataron para ser depositadas sobre un portaobjetos de vidrio.
Como anticuerpos primarios se utilizaron anti-Ras monoclonal de
raton (dilucion 1:50, Upstate Biotechnology) y anti-Ki-67
monoclonal de conejo (1:80, Master diagnostica). Las preparaciones
se contrastaron ligeramente sumergiendolas en hematoxilina, se
deshidrataron, para Iinalmente capturar las imagenes con una camara
de video de alta resolucion conectada al microscopio optico con un
objetivo de 20x, utilizando un Iiltro optico verde para aumentar el
contraste.
Extraccion de proteinas y analisis por Western blot
La extraccion de proteinas tisulares se eIectuo a 4C, utilizando
tampon de lisis MLB 5X (Magnesium-containing Lysis BuIIer 5X).
Posteriormente, se procedio a la homogenizacion y centriIugacion de
las muestras, recogiendose el sobrenadante. Una alicuota se utilizo
para la determinacion de la concentracion de proteinas totales
mediante el metodo de Lowry (Bio-Rad Laboratories). En los lisados
renales se separan previamente las moleculas de Ras-GTP mediante
precipitacion por aIinidad, empleando agarosa unida a RaI-1,
centriIugando a 4Cdurante 30 minutos a 14000g. El precipitado que
contiene Ras-GTP unido a RaI-agarosa se lava con tampon de lisis
MLB 5X, resuspendiendolo en tampon de carga Laemmli 2X(1 2-
mercaptoetanol, 2 SDS, 10 glicerol, 125mM Tris pH 6.8,
0,0005 p/v azul de bromoIenol). Un total de 60-2000 g de extracto
proteico por muestra se separo en geles de poliacrilamida al 15 y se
transIirio a una membrana de nitrocelulosa. La membrana se bloqueo
con 3 de leche desnatada en polvo disuelta en tampon de lavado o
tubulos proximales lo reabsorben, via pinocitosis |2|. Cuando la
exposicion es baja, la reabsorcion es casi completa, mientras que a
niveles altos se satura la entrada desde el Iluido tubular a las celulas
tubulares. En estas celulas, las enzimas digestivas degradan las
proteinas liberando los iones de cadmio libres que inician una nueva
sintesis de MTs. Sin embargo, cuando hay una elevada exposicion a
cadmio, la cantidad de complejo Cd-MT que llega al rion es
excesiva y los iones de cadmio libres superan la capacidad de
produccion de MTs en las celulas de los tubulos, produciendo el
cadmio libre daos a las membranas celulares renales, y Iinalmente
insuIiciencia renal |3|.
La entrada de cadmio en la celula implica una activacion de rutas de
sealizacion asociadas a las proteinas Ras, que desembocan en un
aumento de la proliIeracion celular asi como de los procesos de
necrosis y apoptosis, y Iinalmente en la aparicion de patologias
asociadas a este metal como es la neIrotoxicidad y en los casos mas
graves cancer |4, 5|.
Los Ilavonoides son compuestos naturales poliIenolicos
ampliamente distribuidos a lo largo del reino vegetal, en plantas,
Irutas, verduras y en diversas bebidas |6|. La quercetina, uno de los
Ilavonoides mas abundantes, presenta un elevado potencial
antioxidante del cual se derivan numerosos beneIicios terapeuticos.
El nuevo concepto de los Ilavonoides como potenciales moduladores
de las cascadas de sealizacion intracelular |7|, ha dado lugar a
diversos estudios in vitro donde se demuestra que la quercetina
exhibe diIerentes actividades tales como eIectos anti-proliIerativos
|8, 9|, eIectos anti-apoptoticos |10|, pro-apoptoticos en lineas
celulares de carcinoma de pulmon |11| y eIectos inhibidores de la
diIerenciacionosteoclastica |12|.
Asi, el objetivo de nuestro trabajo Iue, en primer lugar estudiar la
implicacion del proceso proliIerativo, mediante la ruta de
sealizacion de Ras, en el dao renal inducido por la exposicion
cronica a cadmio, en nuestro modelo experimental, y en segundo
lugar, evaluar el papel de la activacion renal de la proteina Ras en la
proteccionejercida por quercetina.
Material y mtodos
Protocoloexperimental
Este estudio se ha realizado con ratas Wistar macho de un peso
corporal inicial de aproximadamente 200 gramos procedentes del
Servicio de Experimentacion Animal de la Universidad de
Salamanca. Los animales se mantuvieron en condiciones ambientales
constantes de temperatura 22 + 1C, humedad 50 + 10 y ritmo
nictameral de 12hluz/12h oscuridad.
En el diseo del estudio se plantearon cuatro grupos experimentales
de 10 ratas cada uno. El periodo experimental Iue de 9 semanas. (1)
Grupo control: animales a los que se les administro suero Iisiologico
0.9 |s.c.|. (2) Grupo cadmio: animales a los que se les administro
una solucion salina de CdCl (1,2 mg Cd/Kg/dia, s.c.) 5 dosis/semana
2
durante 9 semanas. (3) Grupo quercetina: animales que recibieron
una solucion acuosa de quercetina (50 mg/Kg/dia, i.p.) 5
dosis/semana, comenzando a la cuarta semana. (4) Grupo cadmio-
quercetina: animales a los cuales se les administro cadmio y
quercetina a las dosis, periodos y vias de administracion
anteriormente descritas. Ambos productos, cloruro de cadmio
(CdCl ) C-2544 lote 49H369 y quercetina (C15H10O7) Q-0125 lote
2
21K1690 proceden de Sigma Chemical.
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131
Papel de la via de Ras en un modelo de nefrotoxicidad inducida por cadmio. Efecto protector del antioxidante quercetina
Rev. Toxicol. (2006) 23: 130-137
132
TTBS (0,1 v/v Tween-20, 150mM NaCl, 20mM Tris pH 7,5), y
seguidamente se incubo con el anticuerpo primario anti-Ras
monoclonal de raton (dilucion 1:500, Upstate Biotechnology)
durante toda la noche a 4C. Tras la incubacion con el anticuerpo
primario, la membrana se lavo tres veces con TTBS, para
posteriormente incubarla con el anticuerpo secundario Ig peroxidasa
de rabano picante anti-raton (dilucion 1:5000, Bio-Rad). Finalmente,
la membrana se lavo con TTBS, y el complejo antigeno-anticuerpo se
visualizo, tras la incubacion durante 1 minuto con reactivos estandar
ECL (Amersham Biosciences) a temperatura ambiente, por
exposicion de la membrana a una pelicula de autorradiograIia
(FujiIilm).
Analisis estadistico
Los datos obtenidos en los diIerentes experimentos se analizaron
mediante su exportacion a la aplicacion estadistica Number Cruncher
Statistical System, version 6.0.10 para Windows. Las diIerencias
estadisticas se llevaron a cabo mediante el analisis de la varianza de
una entrada (ANOVA 1; programa NCSS 2000). A continuacion se
aplico el test de ScheIIe cuando los datos presentaban una
distribucion normal, expresando los resultados como medias + error
estandar de la media (EEM). Se considero estadisticamente
signiIicativoun valor de p 0,05 o 0,001.
Resultados
Estudios de funcion renal
A lo largo del estudio se observo un incremento normal del peso
corporal tanto de los animales pertenecientes al grupo control como
de los tratados con quercetina. Sin embargo, al Iinalizar el tratamiento
(9 semanas) el aumento del peso corporal se redujo en un 15 en las
ratas tratadas con cadmio y en un 28 en las ratas tratadas con cadmio
y quercetina, comparadas con el grupo control. El peso de los riones
al Iinal del estudio no se modiIico por ninguno de los tratamientos
(datos no mostrados).
La administracion de cadmio durante nueve semanas indujo una
disminucion signiIicativa del aclaramiento de creatinina (Tabla 1).
Los valores de Ilujo urinario y de BUN se duplican al Iinal del
experimento (T9) Irente a sus valores basales (Tabla 1). En el grupo al
que se le administro cadmio junto con quercetina (Cd-Q), el valor del
aclaramiento de creatinina disminuyo signiIicativamente, pero en
menor proporcion que en el grupo del cadmio. En cuanto al Ilujo
urinario, el incremento es menor al Iinal del tratamiento que el
producido por el cadmio solo. Los valores de BUN a las nueve
semanas Iueron similares a los basales y signiIicativamente menores
que los del grupo de animales tratados concadmio (Tabla 1).
Sanchez-Gonzalez PD, Vicente-Sanchez C, Arevalo MA, Perez-Barriocanal F, Lopez-Novoa JM y Morales AI
Tabla 1: Flufo urinario (mL/dia/100g de peso corporal) (FU), concentracion de proteinas en orina (mg/dia), aclaramiento de creatinina
(mL/dia/100g de peso corporal) (Cl.cr) y nitrogeno ureico plasmatico (mg/dL) (BUN) de los 4 grupos experimentales durante el periodo de
estudio. Grupo control (C), Grupo cadmio (Cd), Grupo quercetina (Q) y Grupo cadmio-quercetina (Cd-Q). To tiempo basal, T9 final del
tratamiento (9 semanas). Los datos se expresan como medias EEM (n5 animales). Diferencias estadisticas significativas, p0,05, segun
el test de Scheffe. = vs Control en el mismo tiempo, vs Basal del mismo grupo, * vs Cadmio en el mismo tiempo.
Los resultados obtenidos de todos los marcadores de lesion renal en
ambos grupos Cd y Cd-Q siguieron una evolucion similar,
elevandose al Iinal del estudio. Sin embargo, las ratas tratadas con
cadmio aumentaron dichas enzimas, LDH, NAG, GGTy FA, 2, 3, 3.4
y 2 veces mas, respectivamente, Irente al grupo tratado con cadmio y
quercetina (Tabla 2).
En la excrecion urinaria de proteinas se observa, que en el grupo del
cadmio, hay un incremento signiIicativo al Iinal del estudio. Sin
embargo, en el grupo Cd-Q el incremento en la proteinuria de este
grupo, es menor conrespecto al grupo Cd (Tabla 1).
La medida de marcadores de lesion renal esta determinada por la
actividad de las enzimas LDH, NAG, GGT y FA las cuales son
indicativas de necrosis celular y, por consiguiente, disIuncion renal.
Rev. Toxicol. (2006) 23: 130-137
133
Tabla 2: Actividades de la lactato-deshidrogenasa (U/dia) (LDH), N-acetil--Dglucosaminidasa (mU/dia) (NAG), gamma-glutamil-
transpeptidasa (mU/dia) (GGT) y fosfatasa alcalina (mU/dia) (FA) en orina en los 4 grupos experimentales durante el periodo de estudio.
Grupo control (C), Grupo cadmio (Cd), Grupo quercetina (Q) y Grupo cadmio-quercetina (Cd-Q). To tiempo basal, T9 final del tratamiento
(9 semanas). Los datos se expresan como medias EEM (n5 animales). Diferencias estadisticas significativas, p0,05, = vs Control en el
mismo tiempo, vs Basal del mismo grupo, * vs Cadmio en el mismo tiempo.
observa una activacion de la proteina Ras al Iinal del estudio en los
riones de los animales tratados con cadmio. La administracion del
Ilavonoide quercetina junto con cadmio disminuye la activacion de
Ras a las nueve semanas de tratamiento (Figura 4).
Discusin
Dao renal inducido por cadmio y efectoprotector de la quercetina
A pesar de que los riones constituyen solo el 0,5 de la masa
corporal total, las caracteristicas anatomicas y Iisiologicas les
proporcionan una especial susceptibilidad Irente a los eIectos toxicos
de muchos xenobioticos, ya que son los organos que reciben mayor
irrigacion por gramo de tejido y son la principal via de eliminacion de
Iarmacos y de sus metabolitos.
Estudios inmunohistoquimicos
La proteina Ras se expresa en todas las celulas renales, por ser una
proteina ubicua. Sin embargo, se observa una mayor activacion en los
riones de los animales tratados con cadmio durante nueve semanas
respecto a los riones de las ratas a las cuales se les administro cadmio
y quercetina, principalmente a nivel del endotelio tubular de los vasos
sanguineos (Figura 1Ba y 1Ca). Por el contrario, la activacion de Ras
es similar en ambos grupos a nivel del glomerulo renal (Figura 1Bb y
1Cb).
En cuanto a la expresion renal del antigeno Ki-67, se observa que en
los riones de los animales tratados durante nueve semanas con
cadmio existe un mayor numero de nucleos en proliIeracion,
Iundamentalmente a nivel tubular, respecto al grupo de ratas que
recibieroncadmiojunto con quercetina (Figura 2B, 2Cy 3).
Activacionrenal de Ras
En nuestro modelo experimental de toxicidad cronica por cadmio, se
Figura 1: Imagenes representativas de la inmunohistoquimica de la
expresion de Ras en tubulo renal (a) y en glomerulo renal (b) de rata
al final del estudio (9 semanas). (A) Grupo Control, (B) grupo
Cadmio y (C) grupo Cadmio-Quercetina.
Figura 2: Imagenes representativas de la inmunohistoquimica de la
expresion de Ki-67 en rion de rata al final del estudio (9 semanas).
(A) Grupo control, (B) grupo del Cadmio y (C) grupo Cadmio-
Quercetina.
Rev. Toxicol. (2006) 23: 130-137
134
Figura 3: Cuantificacion de los nucleos en proliferacion en rion de
rata al final del estudio (9 semanas). Los datos se expresan como
medias EEM (n5 animales).
Figura 4: Efecto de la activacion de Ras (unidades arbitrarias) en
rion y en todos los grupos experimentales al final del estudio (9
semanas). La determinacion se reali:o mediante Western Blot
utili:ando un anticuerpo de raton anti-Ras. Los datos se expresan
como medias EEM (n5animales).
Figura 5: Esquema de los mecanismos propuestos del efecto de la
quercetina sobre la nefrotoxicidad inducida por cadmio. .
activacion, ---[. inhibicion. Abreviaturas. eNOS. oxido nitrico
sintasa endotelial, MT. metalotioneinas, RLO. especies reactivas de
oxigeno, iNOS. oxido nitrico sintasa inducible, COX-2.
ciclooxigenasa-2, Ras-GTP. Ras guanosintrifosfato, MEK.
proteinas quinasas activadas por mitogenos, ERK1/2. proteinas
quinasas reguladas por seales extracelulares (Modificado de
Morales y cols. (20))
y apoptosis |5, 23|.
Partiendo de la hipotesis de que la via de sealizacion de Ras pudiera
estar implicada en el proceso proliIerativo-apoptotico que tiene lugar
en la neIrotoxicidad inducida por cadmio, nuestro objetivo Iue
evaluar el papel de la expresion y activacion renal de Ras en la
proteccion ejercida por la quercetina, en animales expuestos a la
toxicidadcronica por cadmio.
Los resultados obtenidos muestran menor expresion de Ras en el
grupo Cd-Q, este hecho pudiera estar relacionado con la menor lesion
renal y consecuentemente pudiera traducirse en una menor
proliIeracion celular. Para comprobar esta hipotesis realizamos
estudios de inmunohistoquimica con el antigeno Ki-67 como
marcador de proliIeracion celular, cuya expresion se relaciona con la
supervivencia celular |24, 25|. Nuestros resultados reIlejan una
mayor proliIeracion en el grupo del cadmio al Iinal del experimento,
Iundamentalmente a nivel de los tubulos, respecto al grupo de
cadmio-quercetina.
Se ha demostrado que el cadmio incrementa la sintesis de DNAy la
proliIeracion celular a traves de la activacion de la proteina Ras. La
exposicion a este elemento es capaz de inducir la expresion de
numerosos genes como cjun, c-myc, c-Ios y erg-1. La expresion de c-
Ios es parte de la respuesta mitogenica, requerida para la proliIeracion
celular |5, 26|.
Moodie y WolIman |27| y Wilkinson y Millar |28| conIirmaron que la
activacion de esta pequea proteina G, media los eIectos sobre la
proliIeracion celular en parte por activacion de la cascada de las
proteinas kinasas. Los tres principales eIectores de Ras y miembros
dependientes de la Iamilia de las proteinas quinasas activadas por
mitogenos (MAPKs) son, quinasas reguladas por seales
extracelulares (ERK), quinasas c-Jun N-terminal (JNK) y p38, los
cuales son activados/IosIorilados por el cadmio |26|. El tipo y
duracion de la activacion de las MAPKs depende del tipo celular y de
la concentracion de cadmio |29, 30|.
En un estudio reciente, se ha demostrado el eIecto inhibidor de la
quercetina sobre la mitosis y apoptosis en celulas glomerulares a
traves de la ruta Ras-MAPKs |31|. Particularmente, los Ilavonoides
ejercen acciones selectivas sobre la tirosina quinasa, proteina quinasa
Cy Ras-MAPKs |32, 33|. Las acciones estimulantes o inhibidoras de
estas rutas aIectan proIundamente a la Iuncion celular por alteracion
del estado de IosIorilacion de las moleculas objetivo y/o a la
modulacion de la expresion de genes. Las acciones inhibidoras sobre
estas rutas pueden ser beneIiciosas en cancer, enIermedades
proliIerativas, inIlamacion y neurodegeneracion |34, 35|.
Se ha demostrado que los Ilavonoides tienen la capacidad de unirse al
ATPy a otros receptores, pudiendo ser un mecanismo que explicara la
disminucion ejercida por la quercetina sobre la activacion de Ras. El
ATP es el sitio de union de un gran numero de proteinas tales como
ATPasa mitocondrial, ATPasa de la membrana plasmatica, proteina
quinasaA, proteina quinasa Cy topoisomerasa |34|.
El resveratrol y Ilavanoides como hesperetina y naringenina, han
demostrado tener actividad inhibitoria sobre un gran numero de
proteinas quinasas. Esta inhibicion esta mediada por union de los
poliIenoles al sitio de union del ATP, presumiblemente causando
cambios en la estructura tridimensional de la quinasa, provocando su
inactivacion|36, 37|.
Ala vista de nuestros resultados, podemos plantear dos hipotesis para
entender el eIecto de la quercetina sobre Ras y la proliIeracion
celular: (a) que la quercetina por si misma inhibe esta ruta de
En nuestro modelo experimental de neIrotoxicidad, el cadmio indujo
un deterioro progresivo de la Iuncion renal. El aclaramiento de
creatinina disminuyo al Iinal del tratamiento. Los valores de Ilujo
urinario y de nitrogeno ureico plasmatico se duplican a las nueve
semanas Irente a sus valores basales. En cuanto al incremento en la
excrecion urinaria de proteinas, nuestros resultados concuerdan con
los realizados por Elinder y cols. |13| y por Hellstrom y cols. |14| en
los que observaron, como primer signo de dao renal, un aumento de
las proteinas sericas de bajo peso molecular en la orina. La exposicion
a cadmio tambien se acompao de un marcado incremento en la
excrecion urinaria de enzimas marcadoras de dao tubular, analogo al
obtenido en otros trabajos |15, 16|. Todos los valores de las enzimas
en orina nos indican que ha habido necrosis de las celulas tubulares y,
por consiguiente, daorenal |17|.
Nuestros resultados son similares a los reIerenciados previamente por
Liu y cols. |15|. En ellos se muestra como el tratamiento in vivo con
cadmio durante seis semanas (1,2 mg CdCl /Kg/dia, via subcutanea, 6
2
veces por semana) deteriora la Iuncion renal. Estas alteraciones de los
parametros renales pueden deberse al eIecto toxico que produce el
cadmio sobre los segmentos S1 y S2 de los tubulos renales, aIectando
a las celulas del tubulo proximal, donde se reabsorbe este metal |18|;
asi, el incremento en el Ilujo urinario y las proteinas sericas de bajo
peso molecular, se justiIica por la alteracion en los procesos de
reabsorcion.
En el grupo al que se administra cadmio junto con quercetina
observamos una reversion de todos los parametros al Iinal del estudio.
Disminuyen signiIicativamente las enzimas marcadoras de lesion
renal, el Ilujo urinario y las proteinas respecto al grupo del cadmio
solo, e inclusoel BUNrevierte a valores similares al grupo control.
Los mecanismos implicados en el posible eIecto protector de la
quercetina, ha sido estudio de trabajos anteriores en nuestro
laboratorio. Comprobamos que la capacidad antioxidante de la
quercetina revirtio el estres oxidativo generado por el cadmio |19|.
Respecto al proceso inIlamatorio asociado tambien con la toxicidad
ejercida por este metal, comprobamos que la quercetina era capaz de
inhibir la sobreexpresion de iNOS y COX-2 ejercida por el mismo,
concluyendo que esta propiedad pudiera tambien contribuir a la
mejora enla Iuncionrenal |20|.
Otro de los mecanismos que apuntamos como accion protectora de la
quercetina Iue el aumento en la sintesis y expresion de
metalotioneinas, proteinas de accion detoxiIicante. En lo reIerente a
la posible mejora del Ilujo renal y por tanto de la Iuncionalidad,
evidenciamos que la quercetina incremento la expresion de eNOS
|20|.
Este trabajo es la continuacion de este estudio, en el que ahora nos
propusimos conocer la posible implicacion de la quercetina en el
proceso proliIerativo y en la via de sealizacion de Ras en el dao
renal inducidopor exposicion a cadmio.
Papel modulador de la quercetina en la expresion y activacion renal
de Ras
La aparicion de patologias asociadas al cadmio como es la
neIrotoxicidad y en los casos mas graves cancer, implica una
activacion de rutas de sealizacion, como consecuencia de la entrada
de cadmio en la celula, que desembocan en un aumento de la
proliIeracion celular |4, 21, 22|.
La activacion de la proteina Ras es de importancia critica en la
transduccion de la seal inducida por el cadmio al nucleo, para el
inicio de la proliIeracion celular asi como de los procesos de necrosis
Rev. Toxicol. (2006) 23: 130-137
135
sealizacion, traduciendose en una menor proliIeracion o (b) que este
Ilavonoide a traves de otros mecanismos (antioxidante, inductor de
metalotioneinas, antiinIlamatorio) disminuye la lesion renal y con
ello la posible activacion de Ras y de su eIecto Iinal proliIerativo.
En conclusion, nuestro modelo experimental de neIrotoxicidad por
cadmio indujo una evidente lesion renal que, a nivel tubular, se vio
mejorada tras la administracion del antioxidante quercetina. El eIecto
protector del Ilavonoide pudiera estar relacionado con la inhibicion
de la ruta de sealizacion mediada por activacion de la proteina Ras.
Estos resultados suponen una nueva aportacion al estudio de los
mecanismos implicados en el eIecto protector de la quercetina en la
toxicidad producida por cadmio (Figura 5). Este eIecto beneIicioso
sugiere que una dieta rica en Ilavonoides naturales pudiera ser
conveniente para prevenir la neIrotoxicidad inducida por cadmio en
humanos expuestos a este metal.
Agradecimientos
Este trabajo ha sido Iinanciado por Fundacion de Investigacion
Medica Mutua Madrilea (Fundacion MMA).
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Rev. Toxicol. (2006) 23: 130-137
137
Resumen: Las aves rapaces son predadores situados en la cumbre de
las cadenas alimenticias, por lo cual podrian ser consideradas como
adecuados bioindicadores en los programas de biomonitorizacion del
medio, a Iin de evaluar la presencia y eIecto de diversos
contaminantes en los ecosistemas. En el presente trabajo se han
determinado las concentraciones de diversos metales pesados y
metaloides (As, Cd, Pb y Zn) en el tejido hepatico de distintas
especies de aves rapaces diurnas procedentes de Galicia y
Extremadura, empleando para ello animales que llegaron muertos o
se sacriIicaron a su llegada a los Centros de Recuperacion de Fauna
Salvaje de ambas comunidades. Tras la digestion de las muestras por
via humeda, el contenido de elementos inorganicos Iue determinado
por medio de Espectrometria de Masas con Iuente de plasma
acoplado por induccion (ICP-MS). Las concentraciones
cuantiIicadas de los cuatro elementos se situaron en general dentro de
los niveles considerados como normales para las aves, no causando
eIectos patologicos directos. Destaca el hecho de que de los cuatro
elementos considerados, las concentraciones de Cd y Zn
cuantiIicadas en Galicia Iueron siempre ligeramente superiores a las
obtenidas en Extremadura. Por otra parte, considerando la especie a
estudio, destaca el hecho de que los valores mas elevados de los
cuatro elementos analizados se correspondieran con ejemplares de
Busardoratoneroprocedentes de Galicia.
Palabras clave: metal, metaloide, ave rapaz, Galicia, Extremadura
Abstract: Comparative study of heavy metal and metalloid
hepatic levels in diurnal raptors from Galicia and Extremadura.
Raptors are predators located at the top oI Iood chains, which oIIers
the possibility oI use these species as adequate bioindicators within
the environmental biomonitoring programs, in order to assess the
presence and eIIect oI a broad spectrum oI contaminants on the
ecosystems. In the present work, heavy metal and metalloid (As, Cd,
Pb and Zn) contents in liver oI diIIerent raptor species Irom Galicia
and Extremadura have been determined, using animals that arrived
died or that were sacriIiced aIter their arrival to the WildliIe Recovery
Centres oI both communities. AIter wet digestion oI the sample,
inorganic element content was determined using inductively coupled
plasma- mass spectrometry (ICP-MS). The concentrations oI all the
analyzed elements were in general close to those considered as
normal in avian species, and thereIore do not produce direct
pathological eIIects. It must be emphasized that the hepatic
concentrations oI Cd and Zn quantiIied in Galicia were slightly
higher than those corresponding to Extremadura. Moreover, and
when considering the studied species, it must be signalled that the
highest values Ior the Iour analyzed elements were observed in
CommonbuzzardIrom Galicia.
Key words: metal, metalloid, raptor, Galicia, Extremadura
Introduccin
El medio ambiente debe ser entendido como un complejo sistema en
el que existen Ilujos de energia, materia e inIormacion, lo que implica
que la vida de todos los seres vivos este determinada por el medio en
que desarrollan su existencia, pues no es posible imaginarse la vida
sin estas dependencias |1|. Actualmente se considera que no existe en
todo nuestro planeta un ecosistema que pueda ser considerado exento
de trazas de actividad humana, e incluso los ecosistemas localizados
en zonas alejadas de toda colonizacion humana presentan al menos
niveles signiIicativos de diversos agentes potencialmente
contaminantes, que son aportados por los movimientos de las masas
de aire, las corrientes marinas u oceanicas o los mas diversos
Ienomenos atmosIericos |2|. Resulta de suma importancia poder
disponer de una metodologia que nos permita evaluar el estado
toxicologico de un ecosistema, pretendiendo asi evidenciar los
distintos problemas asociados a la presencia de las sustancias
quimicas en el medio ambiente, a Iin de poder disponer de datos
Iiables y contrastados sobre el comportamiento de estas y de los
eIectos globales causados en el conjunto del medio ambiente.
La corteza terrestre esta Iormada por elementos quimicos, de los
cuales aproximadamente un 75 son metales, entre los que se
encuentran varios esenciales e indispensables en nuestra dieta que,
tanto en exceso como en deIecto, puede comportar problemas de
salud |3|. Otros elementos metalicos, en cambio, no cumplen Iuncion
Iisiologica conocida en los seres vivos, y resultan toxicos a dosis muy
bajas |4|. La presencia de metales como potenciales contaminantes
en la totalidad de los ecosistemas del planeta, en mayor o menor
concentracion, es ya una realidad ineludible |5|, pues a las cantidades
generadas por los procesos naturales se aade, seguramente como
primer agente etiologico, la propia accion del ser humano |6|.
El proceso de biomonitorizacion surge en Ecotoxicologia para paliar
las limitaciones de las metodologias analiticas quimicas mas
tradicionales |2|. Este proceso de biomonitorizacion (denominado asi
por trabajar con organismos vivos) nos proporciona inIormacion
acerca de las relaciones entre las condiciones ambientales y los seres
vivos. Ademas recoge gran cantidad de inIormacion sobre los eIectos
de los agentes quimicos en los seres vivos a lo largo de su existencia.
1 1 1 1
Hermoso de Mendoza M , Soler Rodrguez F , Hernndez Moreno D , Gallego Rodrguez ME ,
2 1
Lpez Beceiro A y Prez Lpez M *
1
Unidad de Toxicologia, Fac. de Veterinaria (UEX). Avda de la Universidad s/n. 10071 Caceres.
2
Hospital Clinico 'RoI Codina, Fac. de Veterinaria (USC). Estrada da Granxa s/n. 27003 Lugo.
Recibido 29 de Junio de 2006 / Aceptado 25 de Octubre de 2006
Estudio comparativo del nivel heptico de metales pesados y
metaloides en aves rapaces diurnas de Galicia y Extremadura
*e-mail: marcosplunex.es
138
Rev. Toxicol. (2006) 23: 138-145
muertos Iueron conservados a congelacion (-20C) hasta su posterior
analisis. Como el estudio se centro en ejemplares muertos, no puede
considerarse que constituyan una muestra aleatoria y representativa
de las poblaciones naturales que habitan en la zona estudiada, pues no
pudieron realizarse estudios de evaluacion del sexo o la edad de los
animales.
Tabla 1. Efemplares de aves rapaces anali:ados en el presente
estudio, con indicacion de su lugar de procedencia y numero de
individuos obtenidos.
En los Centros de Recuperacion de Fauna Salvaje de origen Iue
aislado correctamente el higado, que debidamente conservado Iue
remitido al Laboratorio de Toxicologia de la Facultad de Veterinaria
de Caceres, donde se procedio a la obtencion de una alicuota de este
tejido, pesandose aproximadamente 500 mg. Para su posterior
procesado, a Iin de obtener el valor de peso seco correspondiente, la
alicuota se seco a una temperatura de 105 C durante 24 horas. Se
procedio a la mineralizacion por via humeda de las muestras
desecadas, recurriendose a 2 ml de una mezcla acida (perclorico,
nitrico y sulIurico, 8:8:1) por cada medio gramo de tejido a tratar. La
digestion se realizo en tubos de cuarzo (1'5 cm de diametro exterior,
10 cm de longitud, 1 mm de espesor) adecuados para el
procedimiento, y previamente lavados en una solucion de HNO al
3
10, empleando un digestor automatizado, aplicandose un programa
de temperaturas situado entre temperatura ambiente y 370 Cdurante
5 horas y media, siguiendo la metodologia propuesta por Garcia-
Fernandez |11|. Una vez completada la digestion, el residuo
resultante Iue resuspendido en 200 l de HCl de calidad Suprapur,
completando con agua milli-Qhasta alcanzar un volumen Iinal de 20
ml. Las concentraciones de los distintos elementos inorganicos se
determinaron por medio de Espectrometria de Masas con Iuente de
Plasma Acoplado por Induccion (ICP-MS). Los limites de deteccion
Iueron de 0'005 mg/kg (As), 0'010 mg/kg (Cd), 0'200 mg/kg (Pb) y
0'015 mg/kg (Zn). Las concentraciones Iinales en la muestra de
higado se expresaron reIeridas tanto a peso seco como a peso
humedo.
El analisis estadistico de los resultados se realizo por medio del
programa SPSS 13.0. Se obtuvieron los principales estadisticos
descriptivos (media, desviacion estandar...) y tras observar la gran
variabilidad que presentaban los resultados en cuanto a numero de
muestras se reIiere, se opto por realizar el test no parametrico de
KrustallWallis. Debido a la observacion de diIerencias signiIicativas
entre grupos para algunas de las variables, para determinar entre
cuales de estos grupos existian tales diIerencias se opto por la
aplicacion del analisis no parametricos de comparaciones multiples
de Dunn |12|. Por otra parte, el estudio de correlaciones permitio
Otra caracteristica que posee es que por hacerse a lo largo del tiempo
permite hacer comparaciones entre distintos estados, y los datos
obtenidos pueden servir para predecir Iuturos cambios
medioambientales que puedan ser importantes para el conjunto del
ecosistema |7|.
Como predadores situados en la cumbre de la cadena alimenticia, las
aves rapaces estan expuestas a un amplio abanico de contaminantes
persistentes, tanto organicos como inorganicos, que se biomagniIican
a lo largo de las cadenas alimenticias |8|. Si bien la acumulacion de
estos compuestos se ha documentado muy bien en numerosas
cadenas troIicas acuaticas, analizandose incluso los eIectos de los
metales pesados sobre aves de presa con habitos marinos |9|, hay
mucha menos inIormacion disponible sobre la presencia y los eIectos
que estos mismos agentes toxicos puedan poseer sobre ecosistemas
terrestres en general, y sobre aves rapaces residentes en estos
ecosistemas en particular |8|. Sin embargo, la Ialta de estudios en este
sentido no se debe a una ausencia de interes, pues debido a la alta
vulnerabilidad de las aves de presa a esta enorme variedad de
contaminantes, el empleo de estas especies de la aviIauna se ha
postulado como muy adecuado en estudios de biomonitorizacion de
la calidadambiental |10|.
Ademas de su alta posicion troIica, muchas de las especies de aves
rapaces son altamente territoriales, no migratorias, y de largo ciclo
vital (varios aos, al menos), lo que permite que los niveles de una
gran variedad de contaminantes ambientales (y entre ellos numerosos
metales pesados) en diversos de sus tejidos puedan ser un reIlejo Iiel
de la contaminacion quimica que los ha rodeado durante largos
periodos de su vida |8|. Este objetivo es el que persiguen los
programas de biomonitorizacion, que asumen Irecuentemente que las
variaciones espaciales o temporales de los niveles organicos de los
contaminantes se pueden correlacionar de una manera altamente
signiIicativa con las variaciones espaciales o temporales de esos
mismos contaminantes en el medio ambiente |10|.
Dada la precariedad y escasez de datos relativos a la
biomonitorizacion de ecosistemas terrestres a partir de aves rapaces,
todos los estudios que puedan ser realizados acerca de la
caracterizacion de los niveles de estos contaminantes en dichos
organismos cobran un interes enorme, de cara a poder establecer, una
vez conocidos estos datos, la idoneidad o no de estas especies para
Iuturos programas de monitorizacion ambiental |8|.
En deIinitiva, el objetivo del presente estudio ha sido establecer los
niveles de distintos metales pesados (Cd, Pb y Zn) y metaloides (As)
en higado de diIerentes especies de aves rapaces diurnas de Galicia y
Extremadura. En base a los resultados obtenidos se ha analizado la
existencia de patrones de acumulacion de los distintos metales en
Iuncionde la especie estudiada y la zona geograIica.
Material y Mtodos
Las muestras biologicas empleadas en el presente estudio
correspondieron a ejemplares de aves rapaces de diIerentes especies,
procedentes de las Comunidades Autonomas de Galicia y
Extremadura, recogidas entre los aos 1999 y 2005. En la tabla 1
adjunta se detallan pormenorizadamente los ejemplares analizados
en el presente estudio, indicando su procedencia geograIica. Dadas
las obvias limitaciones impuestas al uso de animales vivos, se ha
recurrido al empleo de especimenes Iallecidos, pues este hecho ha
dado la posibilidad de obtener y estudiar muestras de aves en un
numero suIicientemente representativo. Todos los especimenes
Estudio comparativo del nivel hepatico de metales pesados y metaloides en aves rapaces diurnas de Galicia y Extremadura
Rev. Toxicol. (2006) 23: 138-145
139
cuantiIicar la Iuerza de asociacion entre variables cuantitativas. La
medida de este test se realizo mediante el coeIiciente de correlacion
Rho de Spearman. Por ultimo, se aplico el test de la U de Mann-
Whitney para determinar la inIluencia de la procedencia geograIica
en el contenido metalico. Acada muestra situada por debajo del limite
de deteccion del equipo se le asigno un valor correspondiente a la
mitad de ese limite de deteccion, para el tratamiento estadistico de los
valores, para de esta Iorma minimizar el error nominal de tipo I |13|.
Resultados y Discusin
En las tablas 2 y 3 se presentan los principales estadisticos
descriptivos correspondientes respectivamente a la determinacion de
los distintos elementos inorganicos en las muestras hepaticas de aves
rapaces de Galicia y Extremadura y reIeridos a peso seco. De manera
similar, se muestran estos mismos resultados, expresados en peso
humedo, para el As yCd (Iigura 1) y Pb y Zn (Iigura 2).
Tabla 2. Concentracion de metales pesados y metaloides en higado
de las distintas especies de aves rapaces diurnas procedentes de
Extremadura anali:adas en el presente estudio. Los valores estan
expresados en ppm, referidos a peso seco.
De Iorma global, y considerando todos los elementos
simultaneamente, destacaron que las concentraciones mas elevadas
en todas las especies analizadas se correspondieron siempre con el
zinc, indistintamente de la zona geograIica considerada. En el otro
extremo el elemento presente en menor concentracion generalmente
es el cadmio, con valores medios que en muchos casos no superaron 1
ppm.
Arsenico
Los valores de arsenico no presentaron un modelo de distribucion
deIinido entre las diIerentes especies, siendo los valores de media
muy variables, oscilando entre 1'063 y 5'848 ppm en ambos casos
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140
para busardos ratoneros respectivamente de Extremadura y Galicia.
El valor absoluto mas elevado se correspondio con una muestra de
busardo ratonero muestreado en Galicia, situandose por encima de 70
ppm (peso seco), siendo la segunda concentracion mas elevada la de
otra ave de Galicia, concretamente un cernicalo vulgar (superior a 17
ppm, en peso seco).
El arsenico es un elemento que tiende a bioacumularse, si bien
aparentemente no se biomagniIica |14|. Este hecho, unido a su
elevada toxicidad, hace de el un elemento de gran interes
ecotoxicologico. Uno de los primeros estudios centrados en
cuantiIicar las concentraciones de arsenico en tejidos aviares de que
se tiene constancia Iue el desarrollado por Martin y Nickerson |15|,
que monitorizaron estorninos de cincuenta lugares de Estados Unidos
en 1971, encontrando que todos contenian niveles de arsenico
inIeriores a 0'04 ppm (reIeridos a peso humedo). Sin embargo, estos
valores poco tienen que ver con los obtenidos en el presente estudio,
donde se cuantiIicaron valores medios considerablemente mas altos,
situandose en el rango de 1`5 ppm para diurnas de Extremadura y
2`5 ppm para diurnas de Galicia, todos ellos reIeridos a peso
humedo. Estos valores resultan algo elevados, pero no deberian
suponer un compromiso para la supervivencia de las especies
analizadas, pues se ha comprobado que estos organismos parecen ser
capaces de tolerar exposiciones subletales a este metaloide |14|, sin
presentar alteraciones patologicas reseables.
Tabla 3. Concentracion de metales pesados y metaloides en higado
de las distintas especies de aves rapaces diurnas procedentes de
Galicia anali:adas en el presente estudio. Los valores estan
expresados en ppm, referidos a peso seco.
Hermoso de Mendoza M, Soler Rodriguez F, Hernandez Moreno D, Gallego Rodriguez ME, Lopez Beceiro A, Perez Lopez M
Cadmio
Si bien es indudable que el cadmio en sangre es buen indicador de una
exposicion reciente |16|, mientras que una exposicion cronica tiende
a maniIestarse por acumulacion en los tejidos, sobre todo rion,
conviene considerar que ciertos estudios han mostrado que en el caso
de las aves, la concentracion hepatica de cadmio puede ser tambien un
buen indicador de la exposicion total a este metal |17|. Asi, en este
organo puede llegar a acumularse hasta la mitad de todo el cadmio
existente en el organismo |18|, con lo cual la eleccion del tejido sobre
el cual determinar el contenido metalico de un determinado animal,
resulta de enorme importancia |19|.
Como se observa en las tablas 2 y 3, el valor medio maximo en aves
diurnas Iue el del azor (1'455 ppm, en peso seco), correspondiendo el
minimo al aguilucho cenizo (0'107 ppm, en peso seco), si bien el valor
absoluto mas elevado se cuantiIico en un ejemplar de busardo
ratonero de Galicia.
Kenntner y col. |20| establecieron que el rango Iisiologico (o al
menos el que no provoca eIectos negativos) de cadmio en higado de
aves estaria situado entre 0'004 0'663 ppm (reIerido a peso humedo).
Tambien se han estudiado las concentraciones de este metal presentes
en higado de aves acuaticas, concluyendo que en condiciones
'Iisiologicas se situarian por debajo de 2'7 ppm (reIerido a peso
humedo) |21|. Otros estudios, centrados especiIicamente en aves
rapaces (en concreto en mochuelo, Athene noctua), determinaron
concentraciones de cadmio en higado en torno a 0'170 + 0'008 ppm,
considerandolas como indicativas de una exposicion cronica |22|.
Este valor seria todavia mas bajo que el indicado en aos previos
como valor limite a partir del cual se podrian producir eIectos
neIastos en la supervivencia del animal, y que habria sido estimado en
0'382 ppm para esta misma especie de ave rapaz |23|. Conviene
resaltar que los valores indicados en estos estudios son ligeramente
inIeriores a los encontrados en el presente trabajo, con valores medios
0'20 ppm para las aves diurnas de Extremadura, y 0'50 ppm para
las de Galicia (reIerido a peso humedo). De acuerdo a los valores
propuestos por Kenntner y col. |20| y Cohen y col. |21| las aves de
nuestro estudio mostrarian valores hepaticos de cadmio que podrian
considerarse comoinocuos.
Furness |24| por su parte considero que las concentraciones de
cadmio en higado que pudieran resultar letales en aves (esto es, que
causaran claros sintomas de intoxicacion de tipo agudo) se situarian
en torno a 40 ppm (reIerido a peso humedo), valores muy superiores a
los obtenidos en el presente estudio.
Las concentraciones de cadmio en los tejidos de las aves dependen de
diIerentes Iactores como la especie, la zona, los habitos alimenticios y
migratorios, la edad, el sexo y la estacion del ao en que se haya
recogido la muestra |20|. Hay que resear que la vida media del
cadmio en el organismo animal es muy larga y por ello la
concentracion de este metal toxico se incrementa progresivamente
con la edad en las diIerentes especies. Muchos estudios han
examinado las diIerencias en la concentracion de metales pesados
relacionadas con la edad, demostrando que el contenido de cadmio es
superior, a menudo hasta 10 veces, en adultos que en individuos
inmaduros o juveniles |24-27|.
Plomo
Los valores de plomo reIeridos a peso seco cuantiIicados en el
presente estudio mostraron unas concentraciones medias que
oscilaron entre 2'535-5'572 ppm para las aves diurnas de
Extremadura y 3'029-6'643 ppm para la aves diurnas de Galicia. En el
Figura 1. Concentraciones de As y Cd (ppm) en muestras de higado
de aves rapaces diurnas muestreadas en Extremadura y Galicia,
referidas a peso humedo. Las cafas indican los percentiles al 10, 25,
50 (mediana), 75 y 90, los valores extremos (*) y los valores
atipicos (O).
Figura 2. Concentraciones de Pb y Zn (ppm) en muestras de higado
de aves rapaces diurnas muestreadas en Extremadura y Galicia,
referidas a peso humedo. Las cafas indican los percentiles al 10, 25,
50 (mediana), 75 y 90, los valores extremos (*) y los valores
atipicos (O).
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conjunto de todas las muestras, destaca de manera especial el valor
mas elevado obtenido, correspondiente a un ejemplar de busardo
ratonero, procedente de Galicia, donde se cuantiIicaron 18'080 ppm
de plomo, en peso seco. La especie que presento la concentracion mas
elevada de plomo dentro de los animales procedentes de Extremadura
Iue tambien otro ejemplar de busardo ratonero, mostrando ademas
tambien los valores mas elevados de media. Conocidos los habitos
alimenticios y etologicos de esta especie, que le llevan a aproximarse
a nucleos urbanos, podria considerarse que este peculiar
comportamiento pudiera haberlo situado, tal como parecen indicar
los resultados, en una situacion mas propicia para verse expuesto a
este metal toxico.
Pain y col. |28| establecieron unos rangos de interpretacion de los
niveles de plomo en higado de aves con Iines diagnosticos. Segun
estos autores concentraciones hepaticas menores de 2 ppm (incluso a
veces menores de 1 ppm), reIeridas a peso seco, serian indicativas de
una exposicion ambiental sin riesgo toxicologico para las aves,
considerandose por tanto estos valores como casi basales en la
actualidad, pues no aIectarian severamente a la integridad de la
especie. Sin embargo, valores situados entre 6 y 20 ppm (reIeridos a
peso seco) deberian ser ya considerados como una seal de
exposicion elevada, asociandose a signos externos de
envenenamiento. Las concentraciones en higado superiores a 20 ppm
(reIeridos a peso seco) resultarian de la ingestion de otras especies
expuestas al plomo.
Mas concretamente, hay abundante bibliograIia que hace reIerencia a
los valores de concentracion hepatica de plomo indicativos de
exposiciones agudas o cronicas en IalconiIormes. Asi pues, muchos
autores estiman que valores hepaticos de 2 a 4 ppm (reIerido a peso
Iresco) indicarian que el animal se encontraria expuesto a unos
niveles ambientales superiores a los 'normales aunque sin riesgo
para las aves |29,30|; de 3 a 5 ppm (reIerido a peso Iresco) podria
considerarse toxico |31| y superiores a 5 ppm (reIerido a peso Iresco)
serian indicativos de plumbismo, con una intoxicacion letal |32-35|.
En el presente estudio se han obtenido valores medios de
concentracion de plomo en higado (reIerido a peso Iresco) 4 ppm
para todas las aves rapaces. Conviene tener en cuenta que parece
comprobado el hecho de que los niveles de plomo en aves rapaces no
suelen ser muy elevados, a menos que algunas de ellas, al tener
habitos carroeros, ingieran perdigones de plomo al consumir presas
tiroteadas |36|.
Existen trabajos publicados acerca de aguilas (Heliaetus
leucocephalus) que murieron debido a intoxicacion por plomo,
mostrando unas concentraciones hepaticas de 5-61 ppm y 5-12 ppm
(ambas reIeridas a peso Iresco) en individuos adultos y pollos,
respectivamente |36-38|. Un estudio mas reciente |39| determino que
la cantidad de plomo que puede encontrarse en el higado de aves
rapaces puede variar entre 0'017 y 0'05 ppm (reIerido a peso humedo),
valores que indicarian un bajo nivel de exposicion a dicho
contaminante, sin riesgo toxicologico. Un trabajo mas reciente ha
establecido que niveles hepaticos de plomo situados en torno a 312
ppb (reIerido a peso Iresco) pudieran ser indicativos de una
exposicion cronica a este metal en aves rapaces |22|, pero resulta
complejo el poder establecer claramente este nivel por la diIicultad en
evaluar correctamente los eIectos que una exposicion cronica puede
poseer sobre un individuo aislado.
Zinc
Al tratarse de un elemento esencial, se presenta en cantidades
notablemente superiores al resto de los metales y metaloides
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142
estudiados: valores medios situados en el intervalo de 112'23-155'53
ppm en aves de Extremadura y entre 174'68 y 298'31 ppm en las de
Galicia, siempre reIerido a peso seco. La concentracion de zinc en
aves de Extremadura, reIerida a peso humedo, se encontro por debajo
de los 50 ppm; mientras que en Galicia las concentraciones se
situaron entre 50 y 100 ppm.
Existen estudios que hacen reIerencia a los niveles de zinc que
pudieramos considerar Iisiologicos en higado de aves: en el caso del
cuervo (Corvus corax) se considera que debe situarse entre 14 y 45
ppm, y alrededor de 38 ppm en el aguila pescadora (Pandion
haliaetus) en el pavo (Meleagris gallopavo) estaria en torno a 75
ppm, y en el anade real (Anas platyrhynchos) en 45 ppm, siempre
reIeridos los valores a peso Iresco |40,41|. En otro gran grupo
biologico como son las aves marinas, se ha llegado a considerar que
su especial dieta alimenticia Iavoreceria que sus niveles hepaticos
considerados Iisiologicos se situaran en torno a 200 ppm de peso seco
|42|, e incluso otros estudios en este mismo grupo biologico indica
que los polluelos de alca (Alca torda) pueden tolerar hasta 2000 ppm
de zinc en su tejido hepatico sin mostrar alteraciones patologicas |43|.
Comparando los resultados con la bibliograIia existente, se podria
concluir que los valores obtenidos para el zinc son ligeramente
superiores a los que se podrian considerar como habituales, aunque
por otra parte no es de extraar, pues la contaminacion ambiental se
ha incrementado en estos ultimos aos, y la bibliograIia con la que se
han comparado los datos no es muy reciente, al no existir estudios
similares realizados en los ultimos aos.
Influencia de laespecie y correlacion entre elementos
Sobre los resultados obtenidos se realizo un test de Krustall-Wallis,
para estudiar las diIerencias signiIicativas que pudieran existir entre
las diIerentes especies, para un mismo metal o metaloide, como
indica la tabla 4. Por otra parte, en la tabla 5 aparecen reIlejadas las
correlaciones estadisticas entre los distintos elementos inorganicos
en las muestras de aves rapaces de Extremadura y Galicia.
Tabla 4. Test de Krustall-Wallis y estudio pos-hoc con el test de
Dunn del contenido en elementos inorganicos (referido a peso
humedo) en el higado de las distintas especies de aves rapaces
muestreadas en Extremadura y Galicia consideradas en el presente
estudio.
Atendiendo a los resultados del primero de estos estudios, cabria
destacar que en el caso de las muestras de Extremadura se apreciaron
diIerencias moderadamente signiIicativas (p0'05) entre los niveles
hepaticos de plomo en busardo ratonero y milano real, apreciandose
ademas diIerencias altamente signiIicativas (p0'001) para el
cadmio, en este caso entre busardo ratonero y aguilucho. Dichas
Tan solo se observaron diIerencias signiIicativas en Iuncion de la
zona geograIica de estudio para el cadmio y el zinc, ambos con una
signiIicacion estadistica elevada (p0`001), mostrando una mayor
tendencia a la acumulacion de ambos metales en las aves rapaces
procedentes de Galicia Irente a las de Extremadura. Este resultado era
de esperar pues, por una parte, como se menciono anteriormente, uno
de los mayores reservorios de cadmio es el mar, desde donde, a traves
de la actividad pesquera humana y la cadena troIica, puede llegar a los
ecosistemas terrestres habitados por las aves estudiadas. Por ello, los
ecosistemas gallegos, mas proximos a la Iranja costera, serian
potencialmente susceptibles de poseer un mayor contenido de este
metal. Por otra parte, respecto al zinc, ademas de la posibilidad de
contaminacion a traves de su explotacion minera (existente, aunque
escasa en Galicia), existen otras actividades que si lo utilizan
masivamente, como la sidero-metalurgica en la que se hace necesario
el uso del zinc para el galvanizado |44|, asi como la industria del
aluminio, del material electrico y del transporte, actividades todas
ellas desarrolladas activamente enGalicia.
A partir de los resultados obtenidos en el presente trabajo se ha
establecido un primer acercamiento al contenido de metales pesados
y metaloides en aves rapaces diurnas procedentes de Extremadura y
de Galicia. Consideramos que constituye una importante primera
aproximacion a la caracterizacion metalica de estos organismos y de
los ecosistemas que representan, para que en Iuturos estudios se
pueda proIundizar mas en el conocimiento de la realidad
ecotoxicologica de estas importantes especies animales y sus
ecosistemas en el conjunto del Estado.
Agradecimientos
Al personal del Centro de Recuperacion de Fauna y Educacion
Ambiental 'Los Hornos (Caceres), por suministrar las muestras
biologicas empleadas, asi como al Laboratorio Agroalimentario de
Extremadura (Caceres), perteneciente a la Junta de Extremadura, que
contribuyoa las determinaciones analiticas.
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cazadores) de las especies, asi como el estado de madurez o el sexo
del animal |20|, si bien en el presente estudio no se pudo disponer de
estos datos. Es de destacar que al realizar este mismo estudio
estadistico en las muestras procedentes de Galicia, no se obtuvo
ninguna diIerencia signiIicativa con los elementos quimicos
analizados.
Tabla 5. Correlaciones estadisticas entre los elementos
inorganicos en muestras de higado (referido a peso humedo) de
aves rapaces muestreadas en Extremadura y Galicia.
En cuanto al estudio de las correlaciones, destaco sobre todo la
existencia de abundantes correlaciones estadisticas entre Cd y Pb en
aves de Extremadura y entre Cd y As en aves de Galicia.
Curiosamente en la unica especie de Extremadura en que no se
observo la correlacion Cd-Pb, el buitre negro, se presentaron otras
correlaciones con alto grado de signiIicacion: As-Cd, As-Zn y Cd-Zn.
Es de destacar tambien que dentro de las aves de Galicia, el gavilan no
mostro ninguna correlacion estadistica destacable, y entre las
restantes especies analizadas, destacaron las importantes
correlaciones As-Cd, As-Zn, Cd-Pb y Pb-Zn, siempre con altos
niveles de signiIicacion.
Influenciade laprocedencia en el contenido metalico
Como ya se indico, se realizo un estudio estadistico para analizar la
inIluencia que pudiera poseer la procedencia de los animales
(Extremadura o Galicia) sobre el contenido metalico. En este caso, a
las muestras se les asigno un valor de variable adecuado (1: animales
procedentes de Extremadura, 2: animales procedentes de Galicia),
presentandose los resultados en la tabla 6.
Tabla 6. Prueba no parametrica U de Mann-Whitney para
determinar la influencia de la procedencia geografica en el
contenido metalico referido a peso humedo.
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Efectos ecotoxicolgicos del sedimento del ro Salado inferior (Argentina) en
la supervivencia y reproduccin de Moina micrura (Crustacea, Cladocera)
Resumen: Los sedimentos son un componente ecologicamente
importante de los ambientes acuaticos; pueden actuar como
sumideros de diversos contaminantes y mediar el intercambio de
elementos quimicos entre las Iases particulada, disuelta y biologica.
Una gran diversidad de organismos esta expuesta a los contaminantes
de los sedimentos, ya sea de Iorma directa o indirecta. Asu vez, los
sedimentos tambien pueden modiIicar la concentracion de
contaminantes en la columna de agua, aIectando entre otros a los
organismos planctonicos. El rio Salado recibe aporte de Cromo,
Cobre, Plomo y Cadmio generados por distintas industrias. El
objetivo del trabajo Iue comparar el eIecto del sedimento de un sitio
contaminado y de otro no contaminado del rio Salado (Argentina),
sobre el ciclo de vida de Moina micrura (Crustacea, Cladocera) en
ensayos de laboratorio. Como indicadores del eIecto toxico de los
sedimentos se analizaron: sobreviviencia y Iecundidad. Se realizaron
ensayos cronicos durante 29 dias. Cada experiencia se inicio con una
cohorte (replicas) de 10 neonatos aislados en Irascos de vidrio de 40
mL de agua y sedimento de rio en una proporcion de 4:1 y
alimentados diariamente con un cultivo de Chlorella vulgaris. El
criteriode aceptacion del ensayo Iue mortalidad 10 .
El analisis de supervivencia de Kaplan-Meier no mostro diIerencias
signiIicativas (p 0,170) pero si el ANOVAde Iecundidad (p 0,05).
Al estar expuesta al sedimento del sitio no contaminado, M. micrura
produjo 113 neonatos en 11 camadas, mientras que al estar expuesta
al sedimento contaminado produjo 13 neonatos en 4 camadas. La
Iecundidad de M. micrura mostro ser un atributo mas sensible que la
sobrevivencia. El ensayo permitio incrementar el conocimiento de
los metales pesados sobre especies bien representadas en ecosistemas
de Sudamerica.
Palabras clave: Moina micrura - sedimentos - bioensayos - metales
pesados - Argentina
Abstract: Ecotoxicological effects of sediments of low Salado
river (Argentina) on survival and reproduction of Moina micrura
(Crustacea, Cladocera). Sediments are an ecologically important
component oI the aquatic habitat; they are a natural reservoir oI
contaminants and play an important role in mediating the exchange oI
chemicals between particulate, dissolved and biological phases. A
variety oI organisms are exposed to the contaminants in sediments,
either directly or indirectly. Sediments can also modiIy contaminant
concentrations in the water column, aIIecting other organisms,
including plankton. The Salado river receives contribution oI
Chromium, Copper, Lead and Cadmium generated by diIIerent
industries. The objective oI this work was to compare the eIIect oI
sediment Irom a polluted and a non polluted place oI the Salado river,
on the biological cycle oI Moina micrura (Crustacea, Cladocera) in
laboratory tests. Survival and reproduction were analyzed as
indicators oI toxic eIIect oI sediments. Chronic bioassays were
carried out during 29 days. Each experience began with a cohort
(replicates) oI 10 neonates isolated in 40 mL glass Ilasks, which
contained water and sediment in a proportion oI 4:1, and the
organisms were Ied daily with a Chlorella vulgaris culture. The
bioassay acceptance level was a mortality lower than 10 per cent. The
Kaplan-Meier survival tests showed no signiIicant diIIerences (p
0.170) but the ANOVA oI Iecundity did (p 0.05). M. micrura
produced 113 neonates in 11 broods when it was exposed to the non
polluted sediment, and 13 neonates in 4 broods when it was exposed
to the polluted sediments. Reproduction oI M. micrura showed to be a
more sensitive attribute than survival. The essay allowed to increase
the knowledge about the eIIect oI heavy metals on species Irequent in
South America ecosystems.
Key words: Moina micrura - sediments bioassays - heavy metals -
Argentina
Introduccin
Los sedimentos son reconocidos como Iuente de contaminantes en
los sistemas acuaticos que pueden ser introducidos en los mismos y
acumularse por diIerentes vias, incluyendo el vertido de eIluentes
conteniendo quimicos y otros productos provenientes de diversas
actividades urbanas, industriales y agricolas |1|. Los sedimentos de
aguas dulces desempean un importante rol ecologico al mediar el
intercambio de quimicos entre las Iases particulada, disuelta y
biologica |2-4|. El rio Salado inIerior (Santa Fe, Argentina) recibe el
aporte de distintas industrias (principalmente curtiembres y talleres
mecanicos) y productos de actividad horticola y agricola. Estudios
realizados en la cuenca del rio Salado inIerior mostraron que el
contenido de Cr, Cr VI y Cu Iue mayor a los niveles guia en
sedimentos y en agua |5, 6|.
Si bien los esIuerzos de investigacion primeramente se Iocalizaron en
la columna de agua, recientemente se incremento el conocimiento
sobre la toxicidad del sedimento, estando actualmente bien
documentada la utilidad de estos ensayos en la literatura
ecotoxicologica |7|. Por otro lado, la mayoria de los bioensayos con
sedimentos hasta el presente se han realizado con organismos
bentonicos |4,8-10|. El posible eIecto de sedimentos contaminados o
de agua intersticial sobre organismos planctonicos solo ha sido
Andreotti C y Gagneten AM`
(*) Departamento de Ciencias Naturales. Facultad de Humanidades y Ciencias. Universidad Nacional del Litoral.
Ciudad Universitaria. 3000. Santa Fe. Argentina.
Recibido 4 de Septiembre de 2006 / Aceptado 1 de Diciembre de 2006
*e-mail: csandreottiyahoo.com.ar; amgagnetIhuc.unl.du.ar
146
Rev. Toxicol. (2006) 23: 146-150
Bioensayos
Se establecio un cultivo clonal stock a partir de un unico neonato (
24 h) de Moina micrura obtenido del rio Salado, a partir del cual se
iniciaron los bioensayos cronicos y agudos. Se utilizo agua Iiltrada y
aireada del rio Salado de los mismas estaciones de muestreo del
sedimento |23|. Se eligio el agua del mismo rio como agua de
dilucion teniendo en cuenta la recomendacion de la APHA(1992) en
el sentido de establecer condiciones para las pruebas de toxicidad que
se acerquen cuanto sea posible a las condiciones ambientales
naturales |24|.
Los cultivos Iueron mantenidos en camara de incubacion bajo
condiciones controladas (temperatura, Iotoperiodo y alimentacion
constantes de 23 1C, 16 h luz: 8 h oscuridad), alimentadas con un
cultivo de Clorella vulgaris de 106-107 celulas/mL |25-31|. Las
microalgas Iueron concentradas por centriIugacion para eliminar el
medio de cultivo; el concentrado se diluyo con agua destilada hasta
obtener una absorbancia de 1,5 a una longitud de onda de 665 nm,
equivalente a la concentracion algal previamente mencionada. Se
utilizo unespectroIotometro marca Beckman modelo DU
Para los bioensayos cronicos, cada neonato se aislo en un Irasco de
vidrio de 40 mLde agua Iiltrada previamente oxigenada y sedimento
en una proporcion de 4:1 y se alimento diariamente con tres gotas del
concentrado de Chlorella vulgaris. Tres veces por semana se registro
el numero de individuos vivos y muertos (segun protocolo ASTM
1990 modiIicado) |32|. Los ensayos cronicos se mantuvieron hasta
que se produjo la muerte de todos los organismos en todas las
concentraciones, excepto el control. Como reIerencia, en el mismo no
se tolero mortalidadmayor al 10.
Se utilizaron dos indicadores para determinar el eIecto cronico del
sedimento sobre el ciclo de vida de M. micrura: 1) Curvas de
supervivencia; 2) Fecundidad (numero de camadas, de neonatos por
camada y edad de primera reproduccion). Las diIerencias entre las
curvas poblacionales Iueron evaluadas con la prueba F utilizando el
programa STATISTICA. El numero de neonatos se comparo con el
test no parametrico de Kolgomorov-Smirnov|33-35|.
Los bioensayos agudos de 24 h y 48 h con M. micrura se realizaron
con identica metodologia que los cronicos. La mortalidad al estar
expuesta al sedimento de Esperanza y San Justo se evaluo con el test
no parametrico de Kolgomorov-Smirnov y se graIico con diagramas
de caja (box-plots).
Resultados
El contenido de metales pesados en muestras de sedimento utilizados
para los bioensayos se muestra en la Tabla 1. La mayor diIerencia
observada correspondio al Cr, habiendose encontrado en una
proporcion apreciablemente mayor en el sedimento de Esperanza. En
segundo lugar el Cr VI, cuya concentracion a pesar de ser mayor en el
sitio contaminado, no alcanzo los niveles del anterior. En ultimo lugar
se situo el Cd, mostrando una diIerencia de proporcion levemente
mayor en Esperanza. Por otro lado, se registraron mayores
proporciones tanto de Pb como de Cu en el sedimento de San Justo
(sitio de reIerencia).
Supervivencia
En la Fig. 1 se muestra la Iuncion acumulada de sobrevivencia () de
M. micrura al estar expuesta al eIecto del sedimento de Esperanza y
de San Justo. La sobrevivencia hasta el dia 8 disminuyo de Iorma
similar en ambos ensayos, pero a partir de ese momento y hasta el
abordado mas recientemente |11,12| y no se registran trabajos con
especies bien representadas en ecosistemas acuaticos continentales
de Sudamerica. Sin embargo, dado que la concentracion de metales
pesados en aguas superIiciales pueden provenir de su aporte desde los
sedimentos, dependiendo, entre otros Iactores, de las caracteristicas
Iisico-quimicas del agua, una alta proporcion del metal que es
liberado al medio acuatico puede adsorberse o absorberse en la
materia organica particulada y en las microalgas |3,4,13,14|. Al ser
consumidas por el zooplancton, esta Iraccion no se deposita en los
sedimentos sino que se incorpora a las tramas troIicas, acelerando el
pasaje a organismos de niveles troIicos superiores. Asi, la
incorporacion de metales pesados que quedan biodisponibles
permiten pensar que los organismos planctonicos tambien se veran
aIectados |15|, entre ellos el zooplancton, que cumple un importante
rol en los ecosistemas acuaticos continentales como Iuente de
alimentacion para peces zooplanctoIagos en sus estadios juveniles
|16|. Se han documentado diversos eIectos toxicos de los metales
pesados sobre los cladoceros, que incluyen inhibicion del
crecimiento y del numero de mudas, disminucion de la supervivencia
y de la reproduccion, supresion del consumo de oxigeno y
alteraciones del comportamiento, |1,13,17|.
Existe una variedad de tests de toxicidad con sedimentos |2-4,18|. De
todos ellos, los bioensayos con el sedimento completo han resultado
ser los mas eIicaces para determinar el grado de contaminacion de un
sistema |11|, por lo que se lo selecciono para este estudio. El mismo
consiste en exponer a los organismos de la columna de agua a la
accion toxica del sedimento completo en vasos de prueba para
determinar el eIecto de los contaminantes que se resuspenden desde
los mismos. La inIormacion resultante puede ser usada con diversos
Iines: de comparacion, de regulacion o para la prediccion de posibles
consecuencias de los contaminantes sobre el ambiente |19|.
Como modelo biologico se selecciono a Moina micrura, un cladocero
bien representado en la cuenca inIerior del rio Salado (Argentina)
pero tambien en el hemisIerio norte |20-22|, por lo que su estudio
cobra importancia con Iines comparativos. Sin embargo aun no se ha
probado su potencial para ser utilizada en estudios exotoxicologicos.
El objetivo del estudio Iue determinar como aIecta al ciclo de vida de
Moina micrura el sedimento del rio Salado contaminado con metales
pesados enbioensayos cronicos y agudos con sedimento completo.
Material y mtodos
Extraccion de los sedimentos
Para evaluar el eIecto de los sedimentos del rio Salado sobre el ciclo
de vida de M. micrura se selecciono un sitio contaminado
(Esperanza) y uno considerado no contaminado, de reIerencia (San
Justo) distante 74 Km del primero. Las muestras de sedimento se
2
obtuvieron con draga mud-snupper de 100 cm de superIicie de
extraccion, tomando los primeros 5 cm mas superIiciales de
sedimento, hasta completar el volumen necesario para realizar los
3
ensayos (aproximadamente 1000 cm ). El traslado del sedimento al
laboratorio se realizo en conservadora con hielo y se mantuvo en
laboratorio a 4C hasta su empleo. Se determino el contenido de
metales pesados (Cr, Cu, Cd y Pb) por espectroIotometria de
absorcion atomica por llama modelo Perkin Elmer 5000. Para cada
sito de muestreo, se realizaron tres determinaciones de metales
pesados.
Efectos ecotoxicologicos del sedimento del rio Salado inferior (Argentina) en la sobrevivencia y reproduccion de Moina micrura (Crustacea, Cladocera)
Rev. Toxicol. (2006) 23: 146-150
147
Iinal de la experiencia (dia 29), Iue mayor con el sedimento de San
Justo que de Esperanza. Al realizar el analisis de supervivencia de
Kaplan-Meier con un nivel de signiIicacion del 95 no se detectaron
diIerencias signiIicativas entre la supervivencia de M. micrura
expuesta a ambos sedimentos (p 0,170).
Tabla 1: Contenido de metales pesados (Cr, Cr JI, Cu, Pb y Cd) en
muestras de sedimentos del rio Salado en Esperan:a y San Justo.
Tres muestras por sitio, se indica la media y entre parentesis, 1a
desviacion estandar.
Figura 1: Funcion acumulada de supervivencia () de M. micrura
en ensayos cronicos al estar expuesta al efecto del sedimento del rio
Salado en el sitio contaminado (Esperan:a) y el de referencia (San
Justo)
Fecundidad
En la Figura 2 se muestra el numero de neonatos por camada
producidos por M. micrura al estar expuesta a sedimentos
contaminados y no contaminados. En San Justo, produjo 11 camadas
y en Esperanza, solo 4. Esta diIerencia en el rendimiento reproductivo
muestra el eIecto toxico del sedimento de Esperanza respecto al sitio
de reIerencia. La produccion total de neonatos en San Justo Iue de 113
neonatos y en Esperanza solo de 13 neonatos. La primera
reproduccion ocurrio el dia 4 en San Justo y el dia 8 en Esperanza,
mostrando un retraso de 4 dias en el inicio de la actividad
reproductiva en el sitiocontaminado respecto al sitio de reIerencia.
El ANOVA de Iecundidad mostro diIerencias levemente
signiIicativas (p 0,055) (Tabla 2) entre el sedimento de ambos sitios
de estudio. El tiempo de exposicion no Iue signiIicativo (p 0,071)
pero si la interaccion entre sedimento y tiempo (p 0,001). Esto
indica que el eIecto de la toxicidad del sedimento Iue mas importante
que el tiempo de exposicion al mismo para M. micrura. El numero de
neonatos producidos al estar expuesta al sedimento de San Justo y
Esperanza, evaluado con el test no parametrico de Kolgomorov
Rev. Toxicol. (2006) 23: 146-150
148
Smirnov arrojo diIerencias signiIicativas (p0,05).
Fig. 2: Fecundidad (numero de neonatos por camada) de M. micrura
en ensayos cronicos al estar expuesta al efecto del sedimento del rio
Salado del sitio contaminado (Esperan:a) y el de referencia (San
Justo).
Tabla 2: Analisis de varian:a de medidas repetidas para el efecto
de la toxicidad cronica del sedimento y del tiempo sobre la
fecundidad de M. micrura. Die: replicas por tratamiento.
Para analizar si existieron diIerencias signiIicativas en la mortalidad
de M. micrura en los bioensayos agudos de 24 h (Figura 3) y 48 h
(Figura 4) se aplico el test no parametrico de Kolgomorov-Smirnov.
No se encontraron diIerencias signiIicativas en la mortalidad a las 24
h ni a las 48 h entre la mortalidad registrada con el sedimento de San
Justo y de Esperanza.
Fig 3: Mortalidad de M. micrura a las 24 h con sedimentos del rio
Justo).
A las 24 hs (Figura 3), se observo que en San Justo hubo una
concentracion de valores entre 1 y 2,3 con una media de 1,8
individuos muertos a las 24 h. Se registro una alta desviacion
Andreotti C y Gagneten AM
excelente especie de prueba para ser utilizada en ensayos cronicos
con sedimento completo. Por otro lado, si bien demandan mayor
tiempo, se destaca la ventaja relativa de los ensayos cronicos sobre los
agudos para mostrar eIectos biologicos que pueden ser de relevancia
ecologica. En condiciones naturales, el nivel de metales pesados en
los sedimentos de Esperanza podria incidir negativamente sobre la
abundancia de la especie, disminuyendo la cantidad de biomasa
disponible para los peces zooplantoIagos.
Se destaca la relevancia de reunir datos del eIecto de toxicidad de
metales pesados sobre diIerentes especies, a los eIectos de poder
utilizarlos para establecer lineas de base para Criterios de Calidad de
Sedimentos sensu Burton |36|. Por otro lado, se destaca la validez de
los bioensayos para determinar la toxicidad de ambientes en los que
de antemano se sospecha que estan contaminados, limitando los
estudios mas complejos (y costosos) a situaciones en los que se ha
demostrado la necesidad de estudios completos de riesgo
toxicologico de sedimentos. En este sentido, ensayos como el
presente, que evaluan la toxicidad del sedimento para una especie
poco estudiada pero muy Irecuente en el sistema de interes, son
altamente recomendables por el aporte de inIormacion que
representan para estudios mas complejos.
Agradecimientos
Los resultados presentados en este articulo corresponden al Proyecto
CAIDN 14/99 Iinanciado por la Universidad Nacional del Litoral,
Argentina.
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atribuible a 18 individuos que murieron al comienzo del tratamiento,
que seria una posible causa de la ausencia de diIerencias
signiIicativas en la sobrevivencia de M. micrura a las 24 hs. En
Esperanza se registro mayor concentracion de valores entre 2 y 3, con
media de mortalidad mayor.
Alas 48 hs (Figura 4) en San Justo se observo una concentracion de la
mortalidad en valores bajos (1,63 individuos). Contrariamente, para
Esperanza la mortalidad Iue mayor (5-6 individuos). Por lo tanto, a
pesar de no ser signiIicativas las diIerencias entre la mortalidad a las
24 h y 48 h entre ambos tratamientos, se evidencio que la mortalidad
de M. micrura Iue mayor al estar sometida al eIecto toxico del
sedimentode Esperanza que en el sito no contaminado de reIerencia.
Fig 4: Mortalidad de M. micrura a las 48 h con sedimentos del rio
Justo).
Discusin
La sobrevivencia en los ensayos agudos y cronicos mostro un patron
similar: Hubo diIerencias entre ambos sitios, aunque no Iueron lo
suIicientemente importantes como para ser consideradas
signiIicativas. Esto pudo haberse debido a que en el sedimento de
Esperanza se acumulo cierta cantidad de materia organica, que
permitiria el desarrollo y crecimiento de los cladoceros. Por otro lado
cabe considerar que a pesar de encontrarse elevados niveles de Cr y
Cr VI en el sedimento de Esperanza, las proporciones de Cu y Pb
Iueron mayores en el sedimento del sitio de reIerencia, lo que pudo
haber incidido en la sobrevivencia del grupo control. Segun Gagneten
et al (2006) otros ambientes ademas de Esperanza, pertenecientes a la
cuenca inIerior del rio Salado estan contaminados con Cr y Cr VI,
mientras que en algunos sitios hay ademas contaminacion por Cu, Pb
y Cd ensedimentos.
En cuanto a la Iecundidad en los ensayos cronicos se observo que la
misma Iue mayor en el sitio de reIerencia, registrandose diIerencias
signiIicativas con respecto al sitio contaminado: tanto el numero de
camadas como de neonatos por camada Iue signiIicativamente
diIerentes en el sitio de reIerencia (San Justo) respecto del sitio
contaminado, donde ademas se retraso la primera reproduccion. Por
lo tanto, si bien los contaminantes no aIectaron seriamente la
sobrevivencia de M. micrura, si alteraron su ciclo de vida, al alterar
parametros importantes de su reproduccion: disminucion del numero
de camadas y de neonatos, y retraso de la edad de la primera
reproduccion. Esto indica, ademas, que M. micrura seria una
Rev. Toxicol. (2006) 23: 146-150
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Andreotti C y Gagneten AM
Resumen: El transporte intracorporal de drogas de abuso (body-
packers) constituye una potencial emergencia medica, ya que la
salida del contenido de los paquetes puede producir una sobredosis
mortal. Para el diagnostico de esta entidad se recurre habitualmente a
la radiograIia de abdomen.
Se presenta el caso de un varon que Iue remitido al Servicio de
Urgencias con maniIestaciones compatibles con una sobredosis de
cocaina. Aunque se sospecho que se tratase de un body-packer, la
radiograIia del abdomen Iue negativa. El paciente evoluciono mal en
las horas siguientes, por lo que se realizo un TAC abdominal que
permitio el diagnostico de body-packer. Fue intervenido
quirurgicamente, extrayendose tres bolsas de la cavidad gastrica. La
evolucion posterior Iue Iavorable y el paciente Iue dado de alta sin
secuelas.
Palabras clave: Body-packer, cocaina, radiograIia abdominal, TAC
abdominal
Abstract: Cocaine body-packer: A false negative abominal
radiography. The intracorporal transport oI abusive substances by
body-packers constitutes a potential medical emergency, as a Iatal
overdose may occur iI the packages break inside the body. The
diagnosis is usually made by abdominal radiography.
We present the case oI a male who was sent to the emergency
department with maniIestations compatible with a cocaine overdose.
Although the patient was suspected to be a body-packer, the
abdominal radiography was negative. The patient's condition
worsened during the Iollowing hours and an abdominal CT scan was
carried out which allowed the patient to be identiIied as a body-
packer. Three packages were removed Irom the gastric cavity by
surgery. The patient evolved Iavourably and was discharged without
sequelae.
Key words: Body-packer, cocaine, abdominal radiography,
abdominal CTscan
Introduccin
El transporte intracorporal de drogas de abuso (body-packers), se ha
convertido en una nueva causa de urgencia medica relacionada con
las drogas |1|. La situacion mas habitual es la de un paciente que ha
ingerido pequeos paquetes de droga (con mayor Irecuencia de
cocaina o heroina), que debe transportar de Iorma oculta de un pais a
otro, en general mediante un vuelo transoceanico, y que es detenido a
su llegada al aeropuerto por traIico ilegal de droga y remitido al
Hospital para evaluacion. En ocasiones, acuden directamente a un
Servicio de Urgencias por dolor abdominal secundario a un ileo
mecanico, o por sobredosis de la droga que transporta al haberse roto
alguno de los paquetes. Estos pacientes pueden Iallecer de Iorma
subita en el contexto de una sobredosis por absorcion masiva de droga
en el tubo digestivo.
El metodo mas utilizado para el diagnostico de los body-packers es
una radiograIia simple de abdomen. Se presenta el caso de un
paciente remitido a Urgencias por un cuadro clinico compatible con
una sobredosis de cocaina, y en el que la radiograIia simple de
abdomen Iue negativa.
Caso clnico
Un varon de 26 aos, originario de la Republica Dominicana,
consumidor de cannabis y cocaina inhalada, Iue remitido al Servicio
de Urgencias tras ser encontrado en la via publica en estado de
agitacion, con intensa sudoracion y temblor generalizado. En el
momento del ingreso la presion arterial era de 180/118 mmHg, la
Irecuencia cardiaca de 104 pulsaciones/min, la Irecuencia
respiratoria de 18 respiraciones/min, la temperatura axilar de 36,3C
y la saturacion de la oxihemoglobina del 98 en condiciones basales.
A la exploracion presentaba un mal estado general, con sudoracion
proIusa, midriasis bilateral, temblores generalizados, diIicultad en la
Iijacion de la mirada, Iases de agitacion y estupor, con lenguaje
IarIullante que diIicultaba el interrogatorio. Los analisis mostraron
un hemograma con 5. 070. 000 hematies/mm3, 15. 800
leucocitos/mm3, 180.000 plaquetas/mm3, glicemia 130 mg/dL,
creatinina 1,1 mg/dL, CK 574 UI/L y protrombina del 93. Un
analisis de drogas de abuso solo detecto la presencia de
benzoilergonina en la orina del paciente mediante una tecnica de
enzimoinmunoanalisis cualitativo con reactivo DADE (Behring).
Se realizo una radiograIia de torax y una de abdomen (Figura 1) que
Iueron normales, sin observarse cuerpos extraos. Se administraron
10 mg de diazepam por via intravenoa para controlar la agitacion y
Irenar la respuesta simpatica, y se mantuvo al paciente en
observacion, persistiendo la agitacion por lo que recibio 3 dosis
adicionales de diazepam.
Seis horas mas tarde presento una crisis convulsiva generalizada, por
lo que se administro 1 mg de clonazepam por via intravenosa,
decidiendo practicar una TACcraneal que Iue normal. Se mantuvo en
observacion, precisando dosis adicionales de diazepam por agitacion.
Cardona M, Montori Ey Nogu S*
Seccion de Toxicologia. Servicio de Urgencias. Hospital Clinic. Calle Villarroel 170. 08036 Barcelona.
Recibido 20 de Enero de 2006 / Aceptado 22 de Septiembre de 2006
Body-packer de cocana: falso negativo de una exploracin radiolgica
*e-mail: SNOGUEclinic.ub.es
Rev. Toxicol. (2006) 23: 151-153
151
ponerse en evidencia que el ingenio humano no tiene limite, ni
siquiera cuando esa actividad es ilegal o puede comportar un serio
riesgo para la salud |2|.
Estos portadores corporales de drogas ilegales, son conocidos con el
termino anglosajon de body-packers o mules. La droga,
habitualmente heroina, cocaina o cannabis, es envuelta
cuidadosamente con varias capas de celoIan, goma, latex, papel de
aluminio o cinta aislante. Suele introducirse por via oral,
conjuntamente con antiemeticos y anticolinergicos, y segun el
tamao del paquete su cantidad puede oscilar entre 1 y 200. Con
menor Irecuencia se introducen por via rectal entre 1 y 6 bolsas. La
cantidad total de droga asi disimulada, habitualmente muy pura,
puede ser superior a 1 Kg. Este comercio ilegal suele partir de paises
productores (como Bolivia, Colombia, Turquia o Tailandia) y acaba
en paises consumidores, como los Estados Unidos de Norteamerica o
los de la Union Europea. En ocasiones son nios los utilizados con
esta Iinalidad |3|. Espaa es considerada una importante puerta de
entrada de drogas hacia Europa, en particular para el traIico
proveniente de Sudamerica. En 1998 Gomez et al |4| publicaron 215
observaciones realizadas en un mismo Hospital de Madrid,
reIlejando la importancia epidemiologica de esta nueva patologia en
nuestro medio.
En ocasiones la ocultacion intestinal de drogas ilegales no es Iruto de
un traIico organizado a gran escala, sino de un acto impulsivo por
parte de un pequeo traIicante o consumidor que, temiendo ser
descubierto en un control policial o judicial, decide ocultar la droga
ingiriendola o introduciendosela por via rectal o vaginal. Estas
personas son conocidas con el termino de body-stuIIers y estan
expuestas a complicaciones por absorcion de la droga ya que el
envoltorio no suele ser hermetico, aunque la pureza de la droga es
mucho menor que conlos body-packers.
El diagnostico de esta entidad suele hacerse mediante una radiograIia
simple de abdomen |5|. En el caso de los body-packers, esta tecnica
tiene una alta sensibilidad (85-90) y especiIicidad |6|, pero el caso
presentado demuestra que esta sensibilidad no alcanza al 100 de los
casos, ya que incluso a posteriori, la radiograIia simple Iue revisada
por dos especialistas en radiologia de nuestro Hospital que ratiIicaron
la ausencia de cuerpos extraos. Por ello, si la sospecha clinica es alta
y la radiologia convencional es negativa, debera optarse por una
radiologia con contraste (la sensibilidad aumenta al 96), la
ecograIia |7| o la TACabdominal, aunque ni siquiera esta ultima esta
exenta de Ialsos negativos en caso de body-stuIIers |8|. La
sensibilidad de la ecograIia o del TACabdominal, no esta establecida.
En relacion a la analitica toxicologica, su negatividad tampoco
excluye el diagnostico y su positividad puede indicar que los paquetes
se han contaminado externamente al prepararlos, que su envoltura es
semipermeable, que el envoltorio se esta deshaciendo o,
simplemente, que el paciente es un consumidor de drogas de abuso
|9|. Por todo ello el interes de esta analitica es limitado, aunque un
viraje de negativo a positivo podria acelerar la toma de algunas
decisiones terapeuticas.
Las complicaciones medicas que pueden presentar estos pacientes
que ocultan drogas en el tubo digestivo pueden ser de dos tipos:
mecanicas y toxicas. Las mecanicas se observan casi exclusivamente
con los body-packers y obedecen a que el tamao de los paquetes
puede diIicultar, o llegar a impedir, su transito gastrointestinal, sobre
todo en dos puntos clave, el piloro y la valvula ileocecal. En
consecuencia, los pacientes pueden aquejar epigastralgia, nauseas,
vomitos, dolor abdominal de tipo colico, hemorragia digestiva alta
Alas 10 horas del ingreso presento otra crisis convulsiva, seguida de
una parada cardiorespiratoria, procediendose a la intubacion
orotraqueal, ventilacion mecanica y masaje cardiaco durante 7
minutos, recuperando el ritmo sinusal. Se mantuvo bajo sedacion con
perIusion continua de midazolam, decidiendo practicar una TAC
abdominal que mostro la presencia de 2 cuerpos extraos en cavidad
gastrica, de unos 4 cm de largo por 2 cm de diametro (Figura 2).
Figura 1.- Radiografia postero-anterior de torax y radiografia
simple de abdomen, enlas que no se observan cuerpos extraos.
Figura 2.- Diversos cortes de una TAC abdominal, en los que se
observa la presencia (sealada con flechas) de dos cuerpos extraos
en la cavidadgastrica.
Se practico una laparotomia urgente con gastrotomia que permitio
extraer 2 bolsas rellenas de un polvo blanco y una tercera vaciada
parcialmente. Se reviso el resto del tubo digestivo sin hallazgos intra
ni extraluminales. Paso a la Unidad de Cuidados Intensivos, donde
realizo un curso postoperatorio normal, sin nuevos signos de
sobredosis de cocaina y sin precisar ninguna terapia especiIica,
extubandose sin complicaciones y siendo dado posteriormente de alta
sin secuelas.
Discusin
Cuando en 1973 se describio por primera vez la utilizacion del tubo
digestivo como un medio para ocultar drogas de abuso con la
Iinalidad de realizar un transporte encubierto de las mismas, volvio a
Rev. Toxicol. (2006) 23: 151-153
152
Cardona M, Montori E y Nogue S
(por decubitos en la pared gastrica), ileo mecanico y necrosis con
perIoracionde la paredintestinal, peritonitis y shock septico.
Las complicaciones toxicas son mucho mas Irecuentes con los body-
stuIIers y son consecuencia de la absorcion de la droga cuando el
paquete no es hermetico o pierde su integridad al ser atacado por el
contenido gastrico o intestinal. Aunque la droga puede ser
neutralizada quimicamente por el contenido gastrointestinal y la
mucosa digestiva es solo parcialmente permeable a la droga, el
contenido de los paquetes en los body packers es de alta pureza por lo
que puede producirse una sobredosis, a veces Iulminante, que podria
acabar con la vida del paciente, como casi ocurrio en el caso
presentado |10|.
El abordaje terapeutico de estos body-packer o body-stuIIer
gastrointestinales depende, Iundamentalmente, de que estos
individuos esten o no asintomaticos. En el primer caso, ademas de
una vigilancia con monitorizacion electrocardiograIica continua, se
impone una aceleracion del transito que puede realizarse con una
solucion de polietilenglicol y con un metodo analogo al que se realiza
cuando se preparan pacientes para cirugia digestiva o examenes
endoscopicos |11|. Se ha propuesto tambien la administracion de
carbon activado para limitar la absorcion de la droga en caso de
abertura de alguno de los paquetes y, en los casos de ingesta de
cocaina, la alcalinizacion gastrica ya que disminuye el riesgo de que
se libere dicha droga, aunque esta ultima medida reduce tambien la
capacidad adsorbente del carbon activado |12|. En los pacientes
sintomaticos por imposibilidad de transito gastrointestinal, la
indicacion es quirurgica para permitir la extraccion de los cuerpos
extraos mediante una laparotomia con gastrotomia y/o varias
enterotomias |13|. La endoscopia digestiva esta abandonada por el
riesgo de rotura de los paquetes al manipularlos con el endoscopio. En
caso de sobredosis, ademas del tratamiento sintomatico y antidotico
(naloxona para la heroina), la cirugia se convierte en una tecnica de
urgencia que permite extraer las bolsas que estan vertiendo su
contenido|14|.
Los pacientes transportadores de drogas de abuso llevan dentro de si
una o multiples 'bombas de relojeria que, entre otras
complicaciones, son capaces de liberar una sobredosis mortal sin
previo aviso. El conocimiento de esta entidad medica, aparecida en
este ultimo cuarto de siglo, supone un nuevo reto diagnostico y
terapeutico. La sensibilidad de la radiograIia simple de abdomen, que
es el metodo diagnostico mas utilizado, es solo del 85-90, por lo que
si resulta negativa, debera escogerse entre una ecograIia, una
radiologia de abdomencon contraste o un TACabdominal.
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153
Body-packer de cocaina. falso negativo de una exploracion radiologica
Rabdomiolisis de origen multifactorial en paciente con intoxicacin acuosa
Resmen: La rabdomiolisis es un sindrome caracterizado por
necrosis muscular y liberacion del contenido de las celulas
musculares al torrente sanguineo que presenta etiologias muy
diversas, algunas solo parcialmente explicadas. En la practica clinica
es preciso iniciar un rapido diagnostico en aras de prevenir
complicaciones tan severas como el Iallo renal agudo. Acontinuacion
presentamos un caso de rabdomiolisis relacionada con el tratamiento
con olanzapina.
Palabras clave: Rabdomiolisis, olanzapina, neurolepticos atipicos.
Abstract: Rhabdomyolysis due to multifactorial causes in water
intoxication patient. Rhabdomyolysis is a syndrome caused by
injury to skeletal muscle and involves leakage oI the intracellular
contents into plasma. Rhabdomyolysis has many causes, some oI
them are more easily understood than others. The physician must be
alert to the diagnosis oI rhabdomyolysis and to its subtle presentation
to prevent the most severe complication oI acute renal Iailure. We
report one case oI rhabdomyolysis induced by treatment with
olanzapine.
Key words: Rhabdomyolysis, olanzapine, atypical antipsychotic
drugs.
Introduccin
La rabdomiolisis es un sindrome caracterizado por necrosis muscular
y liberacion del contenido de las celulas musculares al torrente
sanguineo. La etiologia es muy diversa: lesion muscular directa,
isquemia, deIectos geneticos, enIermedades inmunologicas,
inIecciones, alteraciones de la termorregulacion, alteraciones
metabolicas e intoxicaciones |1|. En ocasiones, como ilustra el caso
que presentamos, la etiologia es multiIactorial.
Caso clnico
Mujer de 36 aos con antecedentes de esquizoIrenia cronica bajo
tratamiento con olanzapina. Encontrandose previamente bien, en la
maana del dia de su ingreso presento una crisis tonico clonica
generalizada, motivo por el que se traslado a nuestro centro
hospitalario. En la analitica de urgencia muestra niveles de sodio
serico de 107 mEq/L. La enIermera del centro psiquiatrico donde se
encontraba reIiere un importante incremento de la ingesta de agua en
los dias previos, por lo que se sospecha intoxicacion hidrica,
conIirmada por los niveles de sodio en orina de 5 mEq/L y por una
osmolaridad plasmatica de 214 mOsm/Ly osmolaridad urinaria de 77
mOsm/L. La paciente ingresa en UCI en situacion de estatus
convulsivo, por lo que se instaura tratamiento con Ienitoina,
controlandose la crisis epileptica, y se inicia simultaneamente la
correccion lenta de la hiponatremia. La analitica extraida 6 horas
despues, encontrandose la paciente totalmente asintomatica revelo
una correccion parcial de la hipovolemia, con niveles de sodio serico
de 117 mEq/L., y tras 12h de tratamiento dichos niveles se situaron en
123 mEq/L. A la maana siguiente los niveles de sodio se habian
normalizado.
Se solicito asi mismo nivel de creatin-kinasa (CK), conIirmandose
una importante rabdomiolisis, con ciIras de 46.600 U/L que se
incrementaron a lo largo de las siguientes 24h hasta alcanzar niveles
de 216.130 U/L, por lo que se instauro tratamiento con Iluidoterapia y
diureticos consiguiendo una diuresis de 200 ml/h. En los dias
posteriores los niveles de CKdescendieron progresivamente.
La paciente en ningun momento presento clinica extrapiramidal
sugestiva de sindrome neurolepitco maligno.
Discusin
La presencia de niveles tan elevados de CK como los de nuestra
paciente es muy inIrecuente. La rabdomiolisis en pacientes tratados
con neurolepticos hace sospechar la presencia de un sindrome
neuroleptico maligno (SNM), pero la presentacion clasica se asocia
con mas Irecuencia a neurolepticos tipicos, como el haloperidol y,
aunque hay casos descritos en pacientes tratados con neurolepticos
atipicos tipo olanzapina |2, 3|, se ha comunicado un creciente numero
de casos de SNM incompleto o atipico |4, 5|. En la revision
bibliograIica realizada se encuentran varios casos de rabdomiolisis,
sin otros sintomas de SNM, en pacientes tratados con neurolepticos
atipicos, que se caracterizan por elevadisimas ciIras de CK, mayores
que las que se encuentran habitualmente en el SNM tipico. Asi la FDA
recoge 12 casos de rabdomiolisis en pacientes en tratamiento con
olanzapina |6| e igualmente pueden encontrarse en otras bases de
datos de Iarmacovigilancia como la LABEL (Netherlads
Farmacovigilance Centre) o la del Uppsala Monitoring Centre. El
mecanismo Iisiopatologico no es del todo conocido. Algunos autores
apuntan que pueden existir sujetos especialmente proclives a la
rabdomiolisis por presentar un deIecto en los canales sodio-potasio
calcio dependientes, lo que provocaria un incremento de la
1 1 1 2
Gutirrez Ca I`, Obn B , Villanueva B , Montoiro R y Moragrega B
1 2 .
Servicio de Medicina Intensiva del Hospital Clinico de Zaragoza. Servicio de NeIrologia del Hospital Obispo Polanco de Teruel
Servicio de Medicina Intensiva. Hospital Clinico Universitario. 1 planta. Avda San Juan Bosco, 15. 50009 Zaragoza
Recibido 15 de Marzo de 2006 / Aceptado 21 de Noviembre de 2006
*e-mail: igutierrciahotmail.com
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permeabilidad de la membrana de la celula muscular. La olanzapina
por su parte incrementa la permeabilidad de la membrana,
Iavoreciendo la lisis de la celula muscular |7|. Otra hipotesis sugiere
que los antipsicoticos triciclicos como la olanzapina o la clozapina
incrementarian la diIusion pasiva de serotonina al musculo
esqueleticocausandola lesion muscular |8|.
En el presente caso, tanto la hiponatremia como la correccion de la
misma han potenciado la destruccion muscular. Existe un
componente de dao muscular directo provocado por las
convulsiones secundarias a la hiponatremia. El empleo de
antipsicoticos se ha asociado con Irecuencia a hiponatremia en el
contexto de SIADH|9|, si bien el mecanismo por el que la olanzapina
induce hiponatremia no esta claro: en estudios realizados sobre
animales, el eIecto inhibidor de la dopamina sobre la secrecion de
ADHes bloqueado por los antagonistas de los receptores D2 como el
haloperidol o la domperidona |10, 11|. La olanzapina tambien posee
actividad sobre estos receptores D2, por lo que es posible que
incremente la secrecion de ADH |12|. Sin embargo, otros estudios
sugieren que la dopamina podria estimular la secrecion de ADH |3|.
Tambien se ha apuntado que la clozapina y la olanzapina pueden
poseer un eIecto beneIicioso en el tratamiento de la polidispia de los
pacientes psiquiatricos |14,15|, incluso se ha comunicado un caso
que muestra la superioridad de la olanzapina sobre la clozapina |16|.
El mecanismo del dao muscular provocado por la correccion de la
hiponatremia parece estar relacionado con el Iallo de la regulacion del
volumen celular que depende del intercambio de sodio, potasio, cloro
y bicarbonato a traves de la membrana celular. Ente los casos
comunicados de rabdomiolisis asociada a la correccion de
hiponatremia, se han encontrado dos que no presentaron ademas
otros Iactores de lesion muscular, como la Iiebre elevada o las
convulsiones |17, 18|.
La rabdomiolisis posee una etiologia diversa y en muchas ocasiones
multiIactorial, y los sintomas iniciales pueden ser escasos y muy
diIerentes. La sospecha y el rapido diagnostico de la misma es capital
para iniciar el tratamiento que evite el desarrollo de insuIiciencia
renal aguda. El reconocimiento de los Iactores Iavorecedores de
lesion muscular en cada paciente es importante tanto para el
tratamiento inmediato, como para evitar a largo plazo la recurrencia
de episodios similares.
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Rabdomiolisis de origen multifactorial en paciente con intoxicacion acuosa
Rev. Toxicol. (2006) 23: 154-155
155
Resumen: Mujer de 33 aos que presento en su domicilio una
picadura de la araa Loxosceles rufescens, presentando una lesion
vasculitica en la cara interna del brazo derecho y una pequea
adenopatia axilar. Tras recibir tratamiento con antibioticos,
antihistaminicos y antiinIlamatorios se resolvio el cuadro sin
complicaciones.
Palabras clave: Picadura de araa. Loxosceles rufescens.
Abstract: Spider bite by Loxosceles rufescens. A 33 year-old
woman who was bitten at home by a Loxosceles rufescens spider,
suIIered a vasculithic lesion in the inside's side oI her right's arm and a
little axilar adenopathy. AIter being in therapy with antibiotic,
antihistamine and antiinIlamatory drugs, the lesion disappeared with
no complications.
Key words: Spider bite. Loxosceles rufescens.
Introduccin
Las araas son invertebrados de la Iamilia de los aracnidos, como las
garrapatas y los escorpiones (1). Se caracterizan por ser carnivoras
(incluso canibales) y de caracter cazador, ya que solo se alimentan de
presas vivas, es decir, de insectos que cazan, ya que no ingieren los
encontrados muertos. Todas las araas poseen pequeas glandulas
pozoosas, con mayor o menor cantidad de veneno para poder matar a
sus presas pero, aIortunadamente, de las 35.000 especies conocidas,
solo una decena son peligrosas para el hombre, entre las que se
encuentran las del genero Loxosceles (2). Para poder matar a sus
presas inyectan el veneno mediante sus queliceros, dos apendices con
una potente musculatura y una aIilada ua distal que clavan a la presa.
El veneno proviene de una glandula pozoosa situada en la zona
ceIalica, que drena directamente a los queliceros mediante unos
conductos (3).
Las araas reclusas mediterraneas pertenecen al genero Loxosceles.
Son pequeas, de 10 a 15 mm, de color marron y con un dibujo en
Iorma de violin sobre la parte dorsal del ceIalotorax (Fig.1). La araa
Loxosceles rufescens es la unica especie de Loxosceles que se
encuentra en la peninsula iberica, ya que es originaria de Sudamerica
en cuyo continente existen unas 70 especies de Loxosceles, siendo las
mas venenosas la L. Laeta y la L. Reclusa (4). Las Loxosceles se
caracterizan por ser poco agresivas, ya que solo muerden cuando se
las provoca. Son de habito nocturno y se esconden en sitios oscuros
donde esperan a la presa para saltarle encima, ya que hacen poco uso
de la tela de araa.
La Loxosceles rufescens no es una araa domestica. Es una especie
que se encuentra en zonas calidas de la peninsula iberica, porque
necesita una temperatura superior a los 15C para sobrevivir a la
intemperie. Sin embargo, en algunos ocasiones se ubican en los
hogares para encontrar reIugio durante los meses Irios de invierno,
pudiendo encontrarse en sitios estrechos, como detras de los cuadros
de pared o debajo de los armarios.
Se presenta uncaso de picadura humana por Loxosceles rufescens.
Fi g . 1 . - Lo x o s c e l e s r u f e s c e n s . Di s p o n i b l e e n .
http.//www.uark.edu/depts/entomolo/museum/browrec.html.
Accedido el 30/5/2006
Caso clnico
Una mujer de 32 aos residente en el municipio de Gava (Barcelona),
sin antecedentes patologicos ni alergicos, reIirio haber sentido un
pinchazo en el brazo al secarse con una toalla tras ducharse en su
domicilio y observo caer una araa, que posteriormente seria
identiIicada como Loxosceles rufescens. Tras notar dolor en la zona
de la picadura, consulto a un centro sanitario donde recibio
tratamiento con antihistaminicos orales, una inyeccion intramuscular
de corticoides y tratamiento antibiotico con amoxicilina-clavulanico.
Pasadas 48h de la picadura, la paciente acudio a nuestro hospital,
debido a la progresion de la lesion a pesar de realizar el tratamiento
correctamente. Presentaba una lesion de inoculacion en la cara
interna del brazo derecho con eritema perilesional no pruriginoso, de
Garriga S, Montero My Nogu S*
Seccion de Toxicologia. Servicio de Urgencias. Hospital Clinic. C/ Villarroel n170. 0803- Barcelona.
Recibido 29 de Julio de 2006 / Aceptado 21 de Septiembre de 2006
Picadura por Loxosceles Rufescens
*e-mail: SNOGUEclinic.ub.es
156
Rev. Toxicol. (2006) 23: 156-157
A pesar de no existir un tratamiento especiIico para el loxocelismo
cutaneo, se recomienda reposo con aplicacion de Irio local, asepsia
del punto de inoculacion, analgesia segun dolor, toxoide antitetanico
si no esta vacunado, antihistaminicos, antiinIlamatorios no
esteroideos y antibioticos en caso de sobreinIeccion (8). En ulceras
mayores de 2 cm de diametro se aaden corticoides y dapsona (9), que
limita la extension de la dermatonecrosis. En casos de muy mala
evolucion local (necrosis proIunda y extensa) se recomienda cirugia
precoz y en las Iormas graves es preciso el ingreso hospitalario con
controles periodicos de hemograma, coagulacion y Iuncion renal (6).
En nuestro medio no se recomienda el suero antiloxoscelico (9).
El caso presentado recuerda la posibilidad de envenenamiento por las
araas en nuestro medio, y la posible presentacion de complicaciones
locales o sistemicas.
Agradecimiento:
Al ProIesor Carles Ribera, del Departamento de Biologia Animal de
la Facultad de Biologia de la Universidad de Barcelona, por
identiIicar la especie de araa aportada por la paciente.
Bibliografa:
1. W i k i p e d i a . A r a c h n i d a . D i s p o n i b l e e n :
http://es.wikipedia.org/wiki/ArC3A1cnido. Accedido el
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Generalidades y tipos de aracnidos. Disponible en:
http://omega.ilce.edu.mx:3000/sites/ciencia/volumen3/ciencia
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4. Vetter RS (1998) Envenomation by a spider, Agelenopsis aperta
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Emerg Med 32: 739-741.
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MedicasATA. 19: 45-49.
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emergencias y cuidados criticos. Intoxicaciones y picaduras de
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http://tratado.uninet.edu/c101204.html. Accedido el 13/6/06.
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8. Farace F, Lissia M, Mele A, Masia DR, Rubino C (2006) Local
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management. J Plast Reconstr Aesthet Surg. 59: 197-201
9. Pastrana J, Blasco R, Erce R, Pinillos MA. (2003) Picaduras y
mordeduras de animales. Anales del Sistema Sanitario de
Na va r r a . 26 ( Supl e me nt o 1) . Di s poni bl e e n:
http://www.cInavarra.es/salud/anales/textos/vol26/sup1/suple1
4a.html. Accedido el 13/6/06.
caracter progresivo, que alcanzaba antebrazo y edema local hasta el
codo (Fig. 2), palpandose una pequea adenopatia axilar. No
presentaba Iiebre ni sintomatologia aadida. ReIeria dolor en dicha
extremidad, sinlimitacion a la movilizacion.
Fig.2.- Lesion cutanea de la paciente a los tres dias de la picadura
por Loxosceles rufescens.
Se decidio introducir tratamiento antiinIlamatorio con dicloIenaco
para paliar las molestias. Alas 72 horas de la picadura, se observo una
clara mejoria de la lesion con notable reduccion del eritema y
desaparicion parcial del edema. La lesion del punto de inoculacion no
evoluciono a necrosis y la reaccion inIlamatoria acabo resolviendose
por completo.
Discusin
El loxocelismo es un emponzoamiento accidental secundario a la
picadura por araas del genero Loxosceles (5), cuyo veneno actua
localmente desencadenando un proceso inIlamatorio intenso que
puede llevar a la necrosis. El veneno contiene enzimas como
hialuronidasa, IosIolipasa y IosIatasa alcalina, entre otros; la
dermatonecrosis parece estar relacionada con la esIingomielinasa-D,
que lisa las membranas celulares y puede llegar a producir hemolisis
(6). Existen dos cuadros clinicos de loxocelismo: el cutaneo y el
sistemico o cutaneo-viscero-hemolitico. El loxocelismo cutaneo se
caracteriza por la aparicion de una lesion local pruriginosa y
progresivamente dolorosa con edema loco-regional. En el sitio de la
picadura se Iorma una papula que puede evolucionar a una placa
eritematosa o adoptar las caracteristicas de placa marmorea, con areas
rojo violaceas alternando con otras palidas, que a los siete dias
oscurece Iormandose una escara que deja una ulcera de lenta
cicatrizacion. En las Iormas severas de loxocelismo hay Iiebre alta,
mialgias y anemia hemolitica con ictericia y hemoglobinuria, que
puede llevar al Iracaso renal agudo, CIDy, en ocasiones, al coma y a
la muerte. Estas Iormas severas de loxocelismo sistemico aparecen en
el 13 de los casos de picadura por L.reclusa, sobre todo en nios y
ancianos, siendo la mortalidad del 30 aun con tratamiento (7). En
Espaa, no se ha descrito hasta ahora ningun caso de loxocelismo
cutaneo-visceral.
Picadura por Loxosceles Rufescens
Rev. Toxicol. (2006) 23: 156-157
157
Resumen del Congreso Internacional de Toxicologa y Seguridad Qumica
y XII Congreso de la Asociacin Latinoamericana de Toxicologa ALATOX
El Congreso Internacional de Toxicologia y Seguridad Quimica y el
XII Congreso de la Asociacion Latinoamericana de Toxicologia
ALATOX, se celebro en la Escuela de Investigaciones Policiales de
Chile en Santiagode Chile, del 21 al 25 de agosto de 2006.
Los dos primeros dias se dedicaron a la realizacion de los cinco cursos
precongresoconun promedio de asistencia de 20 personas por curso.
La Inauguracion OIicial del Congreso se realizo el martes 22, se
inicio con el Himno Nacional de Chile y con posterioridad dedicaron
unas palabras los representantes de las siguientes entidades:
Ministerio de Salud por el Subsecretario de Investigaciones de
Chile Dr. RicardoNavarrete
OPS-OMS representado por el Dr. Juan Manuel Sotelo
Direccion General de Movilizacion Nacional. Autoridad Nacional
para la Convencion de Armas Quimicas: Teniente Coronel
MauricioSeguel Albornoz
Universidad de Chile por el Prorrector Dr. Jorge las Heras Benotto
Actuaron el grupo Iolklorico de la Escuela de Investigaciones de
Chile, y su cuadro Latino americano interpreto el Pie de Cueca y el
Coro de la Universidad de Chile interpretaron varios Iragmentos
musicales y el Gaudeamus.
Intervinieron los ponentes siguientes:
1. Dr. Peter di Marco de BenchMark Toxicology Services de la
Australia Occidental con la ponencia titulada : 'DesaIios de la
Toxicologia para el nuevo milenio
Dr. A. Wallace Hayes, Presidente de IUTOX, Harvard School oI
Public Health. USA con la ponencia titulada: 'Principios
precautorios.
MSc. Maritza Rojas de Venezuela con la ponencia: 'Toxicologia en el
marcodel desarrollo sustentable.
Finalizando con unas palabras de los organizadores Drs. Laura
Brgel y Manuel Ellahuee.
Al Iinalizar el acto inaugural se sirvio un vino de honor, amenizado
por un grupo Iolklorico de Chile y el coro del Colegio Aleman de
Santiagode Chile al que pertenece la Dra. Brgel.
Dado que la participacion al Congreso Iue de unas 200 personas
inscritas con una alta representacion de paises (Alemania, Argentina,
Australia, Bolivia, Brasil, Chile, Colombia, Costa Rica, Cuba,
Ecuador, Espaa, Estados Unidos de Norteamerica, Panama,
Paraguay, Peru, Mexico, Nicaragua, Suiza, Uruguay, Venezuela); se
realizaron a lo largo del congreso cuatro sesiones paralelas entre
Mesas redondas, 'Meeting y Plenarias, hizo que la distribucion en el
primer dia se realizaran las siguientes sesiones con la ConIerencia
previa siguientes:
1.'La comunicacion de riesgos, una estrategia de seguridad Dr.
Oscar Tarragodel CDC-Atlanta
2.'Rol de la OPAQen asistencia medica. Dr. Brian Davey
3.'Asistencia y proteccion Irente a agentes de guerra quimica en
especial a neurotoxicos. Dr. Thiermann- OPAQ- Alemania
4.'Genotoxicidad y desarrollo de metodos alternativos en la
seguridad quimica. Dr. Eduardode la Pea. CSIC. Espaa
5.'Bioensayos: Introduccion al uso de marcadores biologicos para
evaluar exposicion a sustancias quimicas. Dr. Javier Waksman.
Universidad de Colorado.USA
6.'La Geologia medica y Salud Publica. Dr. Jose Centeno
Department oI Environmental and InIectious Diseases Sciences.
Armed Forces Institute oI Pathology . Washington DC, USA
7.'Riesgos toxicologicos agudos de las nuevas drogas de abuso.
Dr. Carlos Mello da Silva. U. de Caxias do Sul. CIT/RS-SBTOX-
Brasil
8.'Neurotoxicidad asociada al consumo de cocaina y a otras
drogas. Dr. Carlos Mello da Silva. U. de Caxias do Sul. CIT/RS-
SBTOX- Brasil
9.'La Iarmacovigilancia como estrategia para la prevencion en
reacciones adversas e intoxicaciones por Iarmacos. QF Guillermo
Gonzalez PUC; y el 'meeting: Analisis de riesgo en plaguicidas y
toma de decisiones, que durotodo el dia.
En general cada una de las citadas conIerencias Iueron seguidas de
dos o tres comunicaciones orales.
En la Plenaria sobre 'Acreditacion y Reconocimiento de Toxicologos
en America Latina-IUTOX-OPS, tras la introduccion de la Dra.
Barros de IUTOX, el Dr. Gonzalez de la OPS, expuso los diIerentes
modelos existentes, no conIormados en la actualidad de una manera
clara y concisa para la obtencion de una acreditacion o certiIicacion, y
los dos tipos de certiIicacion que presento el Dr. Hayes de los
existentes en EEUU, de laAcademy oI Toxicological Sciences (ATS)
establecida desde 1981, y de la 'American Board oI Toxicology;
presente el 'Registro Espaol de Toxicologos en Espaa de la
AETOX, reconocido por EUROTOX, que representa un modelo
Iactible y que se viene realizando, lo que a la vista de los participantes
podria ser un modelo a instaurar y que responde acertadamente a las
necesidades de varios paises iberoamericanos.
El segundodia se realizaron las siguientes mesas redondas:
1.'Riesgos toxicologicos de los principios activos de las hierbas
medicinales Dr. Carlos Mello da Silva. U. de Caxias do Sul.
CIT/RS-SBTOX- Brasil
2.'Seguridad en el uso de productos cosmeticos Dr. Dermeval de
Carvalho Brasil
3.'Los desaIios de los tratados internacionales Director del
Medio Ambiente Ministerio de Relaciones Exteriores Chile
4.'Aspectos Medicos en la investigacion de agentes de guerra
quimica con enIasis en neurotoxicos Dr. Brian Davey. OPAQ
5.'Principios generales de evaluacion de riesgo Dr. Flavio
Zambrone Planitox Brasil
6.'Riesgos emergentes Dra. Ana Rosa Moreno. Departamento de
Salud Publica. Facultad de Medicina. Universidad Nacional
Resumen del Congreso Internacional de Toxicologia y Seguridad Quimica y XII Congreso de la Asociacion Latinoamericana de Toxicologia ALATOX
158
Autonoma de Mexico
7 'Inocuidad de los alimentos Arturo Correa. Servicio Agricola y
ganadero(SAG) Chile
8.'Limitaciones en la evaluacion del riesgo ambiental y humano,
incertidumbres y certezas MSC Maritz Rojas. Universidad de
Carabobo- Venezuela
9.'Avances recientes en el manejo del paciente intoxicado grave
Dr. Carlos Melloda Silva. - Brasil
Se realizo un meeting de todo el dia de duracion sobre Seguridad y
Riesgos Tecnologicos en la Industria Quimica , que Iue coordinado
por el Dr. Xavier Baraza de la Industria de Murcia y el Igro. Mariano
Galdames, que al plantearse un accidente en Santiago, tuvo que
abandonar la sesion por ser el responsable civil. (ver Anexo 1)
La Plenaria Iue dedicada a la propuesta de la creacion de la Red
Iberoamericana de Toxicologia y Seguridad Quimica, propuesta
realizada en colaboracion con la Dra. Silvia Barros de Brasil y
Director de IUTOX y el que suscribe, como Presidente del Comite
Espaol de Toxicologia- IUTOX-AETOX, a la que se invito a la Dra.
Liliana Saldivar de la UNAM, Secretaria de la Sociedad Mexicana de
Toxicologia, Dr. Roberto Lozano Presidente de la Sociedad
Colombiana de Toxicologia , Laura Borgel de la Corporacion RITA.
Chile y Dr. Diego Gonzalez Machin de la OPS y coordinador de la
Red Latinoamericana de Toxicologia; tambien estuvieron presentes
los Drs. Lilia A. Albert y Pedro Valle de Mexico, Carmen Gastaaga
de Peru; Maite San Miguel de Chile y Xavier Baraza de Espaa..
Deseo destacar la importancia de la puesta en marcha de una comision
promotora de una Red Iberoamericana de Toxicologia y Seguridad
Quimica, que Iinalmente sera una propuesta tanto desde Asociacion
Latinoamericana de Toxicologia (ALATOX), el Comite Espaol de
Toxicologia-IUTOX de Asociacion Espaola de Toxicologia, en el
marco de IUTOX avalada por la Dra. Barros, en la actualidad
miembroejecutivode IUTOX.
Esta propuesta se diIundira y se pedira el apoyo a las Sociedades que
existen en todos los paises de Iberoamerica, en los que algunos de
ellos ya cuentan con una Sociedad de Toxicologia (Argentina, Cuba,
Ecuador, Peru, Uruguay, Venezuela, Portugal, Espaa), Esta
propuesta queda abierta a cuantas Sociedades tengan la intencion de
incorporase a dicha iniciativa, donde la diIusion y comunicacion
tenga la peculiaridad de desarrollarse Iundamentalmente en
portugues yespaol |www.cetox.org|Just
El tercer dia conto conlas siguiente Mesas Redondas:
1.'Toxicologia Ambiental y aspectos relacionados con impactos
en salud Dr. PHD. Petre di Marco. Bencmark Toxicology
Services. Australi
2.'International Co-operation and assistance against chemical
weapons (An overview oI co-operation and assistance programs
implementedby the OPCW) Mr. C-PPolster OPAQ.
3.'Interrogantes en la Capacitacion en Toxicologia. que? para
que? por que? Dra. Laura Brgel . Corporacion RITA- Chile
4.'Las redes de Toxicologia: Avances y DesaIios Dr. Diego
Gonzalez - OPS
5.'Riesgo y cinetica de los citostaticos Dr. Ivan Saavedra.
Universidadde Chile
6. 'Present aci on de t rabaj os oral es, que concl uyo
simultaneamente con la sesion de clausura
donde deseo destacar Sesion la titulada Interrogantes en la
Capacitacion en Toxicologia. que? para que? por que?,
coordinada por el primer ponente Dr. Gonzalez que presento Cursos
de autoaprendizaje en Toxicologia y temas relacionados; Curso a
distancia desarrollado en Brasil por ANVISA que presento la Dra.
Heloisa Fainha; Master en Toxicologia a Distancia de Espaa que
presente en colaboracion con los Drs. M. Repetto y G. Repetto,
Director y Coordinador respectivamente (www.aetox.es); y
Iinalmente la Dra. Brgel presento la Cooperacion-RITA, de todos
ellos el unico con reconocimiento Universitario y con los
consiguientes creditos era el Master de la Universidad de Sevilla; en
el turno de debate uno de los asistentes D. Carlos Garcia Bustamante
puso de maniIiesto la excelencia del mismo y reconocio el rigor y
buena preparacion obtenida, lo que Iue el aldabonazo certero y de alta
consideracion para el Master de Toxicologia que el Dr. Repetto viene
desarrollando desde el 2001.
El exceso de oIerta de sesiones simultaneas mesas redondas, meeting
y plenarias, junto a una extremada dilatacion excesiva del horario,
creo una dispersion de los asistentes que siendo al inicio de la maana
de una veintena media de personas, que a lo largo de las sesiones y
dada la citada dilatacion en el tiempo de exposicion, provoco la
dispersion y no permitia un seguimiento ad hoc de acuerdo con el
horario establecido. Los organizadores indicaban a posteriori 'si no
dabamos espacio a todos, mas de un grupo se habria sentido excluido,
por lo cual tratamos de no dejar Iuera a nadie, esto por logica genera
que tengas sesiones paralelas que te gustaria estar clonado para poder
participar . Por esa razon se considero, y esta en estructuracion, pasar
la inIormacion de las conIerencias y temas libres a la web de modo
que permita que esta inIormacion sea accesible para todos los
congresistas (Ademas esto permitio evaluar el interes en las distintas
areas a Iin de generar nuevas actividades complementarias en
tematicas especiIicas)
(http://www.toxicologia.cl/congresoalatox.html).
Durante el Congreso se hicieron anuncios de los siguientes
Congresos a celebrar en Iberoamerica:
1.XVCongreso Brasileo de Toxicologia. 16 a 21 de septiembre de
2007. Riode Janeiro, Brasil.
2.Congreso Cubano de Toxicologia. 4 a 7 de diciembre 2007. La
Habana, Cuba.
3.Congreso Mexicano de Toxicologia. 4 de octubre de 2008.
Estado de Mexico, Mexico.
Los organizadores del Congreso Brasileo de Toxicologia a celebrar
en Rio de Janeiro en Septiembre del 2007, sortearon entre los
asistentes una inscripcion gratuita entre los que rellenamos la hoja de
peticion de inIormacion, siendo yo el aIortunado con la inscripcion
gratuita para asistir al mismo.
Deseo hacer patente la Ielicitacion a la Dra. Brgel por el exito del
Congreso, tanto por la calidad de los asistentes como por la amplia
representacion en conIerenciantes, ponentes y congresistas, y esta
Ielicitacion la hago extensiva a su excelente equipo por la atencion y
Iacilidades que en todo momento se brindaron a los asistentes al
Congreso Internacional de Toxicologia y Seguridad Quimica y XII
Congreso de la Asociacion Latinoamericana de Toxicologia
ALATOX.
Dr. Eduardo de la Pea de Torres
Madrid, septiembre de 2006
Rev. Toxicol. (2006) 23: 22-24
159
Asimismo, el Ing. Duane A. Habeck presento las herramientas
inIormaticas desarrolladas por la empresa AHM para la correcta
gestion de las emergencias al tiempo que presento la situacion legal
de Estados Unidos Irente al riesgo quimico.
Complementariamente, las aportaciones del Ing. Enrique Cuellar y
del Dr. Christian Sepulveda trataron aspectos relacionados con la
normativa internacional deArmas Quimicas y con la implantacion de
mapas de riesgo quimico en la region chilena de Maipu,
respectivamente.
La asistencia a dicho meeting Iue importante y culmino con un
periodo de reIlexion y propuestas por parte de los asistentes entre las
que destacan:
1.La necesidad de establecer sistematicas de actuacion en
situaciones de emergencia basadas en el conocimiento de las
situaciones de riesgo quimicoque pueden aIectar a la poblacion.
2.La prevision de las medidas de prevencion, control y mitigacion
que pueden ser necesarias para evitar un accidente o minimizar sus
consecuencias.
3.La deIinicion de unas sistematicas de actuacion en caso de
emergencia que garanticen una rapida y correcta reaccion, basadas
en la perIecta integracion entre el personal de la empresa, los
cuerpos llamados a intervenir (bomberos, proteccion civil, etc.) y
laAdministracion a nivel local, regional y nacional.
Para una mayor inIormacion en reIerencia con este Meeting pueden
ponerse en contacto con el Dr. Xavier Baraza. Derivados Quimicos,
S.A. a traves del correo barazaderivadosquimicossa.es.
Dr. Xavier Baraza
Murcia, septiembre de 2006
Anexo I
MEETING DE SEGURIDAD Y RIESGOS TECNOLOGICOS EN
LAINDUSTRIAQUIMICA
24/08/2006
El Jueves 24 de agosto en el marco del Congreso Internacional de
Toxicologia y Seguridad Quimica se llevo a cabo el Meeting
'Seguridad y Riesgos Tecnologicos en la Industria Quimica
coordinado por el Dr. Ing. Xavier Baraza, Director de Seguridad y
Medio Ambiente de la empresa espaola Derivados Quimicos, S.A.,
en colaboracioncon el Ing. Mariano Galdames de RITAChile.
El Ing. Mariano Galdames tuvo que ausentarse con motivo del
accidente acontecido ese mismo dia al volcar un camion en las
cercanias de la ciudad de Santiago transportando nitrato amonico y
que comportouna actuacion de emergencia de mas de 12 horas.
Junto con los coordinadores completaron el cuadro de ponentes el
Ing. Enrique Cuellar del Departamento de Control de Armas
Quimicas y Biologicas de Chile, el Presidente de la empresa
estadounidense AHM Ing. Duane A. Habeck y el Dr. Christian
Sepulveda de la Comunidad MAIPUde Chile.
En el transcurso del meeting se abordaron, por parte del Dr. Xavier
Baraza, aspectos relacionados con el marco legal europeo en materia
de accidentes graves en el sector quimico y la Iorma de proceder de
las empresas quimicas espaolas en cuanto a gestion del riesgo
tecnologico y la planiIicacion de emergencias. Aspectos que Iueron
complementados con el visionado de varios videos explicativos de
los accidentes de la plataIorma petroliIera Piper Alpha en el Mar del
Norte (1988) y del mayor accidente quimico de la historia acontecido
en la ciudad de Bophal (India) en el ao 1984.
Rev. Toxicol. (2006) 23: 1-6
160
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impresas o diez en las revisiones incluyendo tablas y figuras (una
pgina impresa equivale a unas tres pginas mecanografiadas). El
precio de cada pgina adicional es de 60 6. Las COMUNlCAClONES
cortas y los CASOS clinicos no deben superar las tres pginas
impresas incluyendo una o dos tablas o figuras y hasta 10 citas
bibliogrficas.
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cuyas observaciones se trasladarn al autor para la reescritura del
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PRESENTACIN DELMANUSCRITO
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cinco palabras clave, ambos en ingls y castellano. Nombre completo
del autor/es, institucin donde se ha realizado el trabajo y direccin
donde hay que enviar las pruebas. Para facilitar la comunicacin se
agradeceria la inclusinde unnmero de telfono, fax o e-mail.
PESUMEN: Ser lo ms informativo posible, y comprender una
pequea lntroduccin, un sucinto Material y Mtodos, los Pesultados
abreviados y las Conclusiones del trabajo. Su lectura dar una idea
clara del mismo, se acompaar de una versin en ingls (Abstract) y
palabras clave (Key words). No debe sobrepasar las 300 palabras
mecanografiadas y no debe incluir abreviaturas ni referencias.
La lNTPODUCClN describir los origenes y bases del estudio. Las
revisiones y las comunicaciones cortas no necesitanintroduccin.
En la seccin de MATEPlAL Y MTODOS se evitarn descripciones de
todo aquello que pueda encontrarse en la bibliografia citada. Deben
describirse de forma concisa los individuos y series estudiados,
criterios de seleccin, procedimientos, duracin y nmero de
repeticiones de los ensayos, equipo y materiales utilizados y cuantos
datos puedan precisarse para la repeticin del estudio. Los mtodos
estadisticos debern tambin describirse en esta seccin. Para
sustancias quimicas o frmacos se citar el nombre genrico
conforme a la lUPAC. Si se utiliza una marca registrada, se har
constar el nombre genrico y el nombre del fabricante.
La seccin de PESULTADOS presentar sin interpretarlas, las
observaciones realizadas, asi como el anlisis estadistico. Los datos
numricos se pueden presentar en tablas pero sin repetirlos entonces
enel texto.
En la DlSCUSlN se considerarn los resultados presentados
comparndolos con otros publicados, las razones que apoyan la
validez de los mismos, su aplicacin prctica y las directrices para
nuevas investigaciones.
BlBLlOGPAFlA: La exactitud de las referencias bibliogrficas es
responsabilidad del autor. Slo deberian incluirse referencias
relacionadas estrechamente con el trabajo y que el autor pueda
verificar personalmente. Todas las referencias listadas deben ir citadas
enel texto. Citas como observaciones no publicadas" o pendientes
de publicacin" deberian evitarse. Las referencias irn numeradas por
orden desaparicin en el texto y citadas numricamente y entre
corchetes. Por ejemplo: [1], [2-13]. Al final del texto la bibliografia ir
citada de la siguiente manera:
a) articulos de revistas: apellidos e iniciales de todos los autores, ao,
titulo completo, revista en su abreviatura normalizada, nmero de
volumen y primera y ltima pgina y utilizando los signos de
puntuacincomo enel ejemplo.
7. de la Pea E, Herrera A, Barrueco C, Canga C (1988) Sistemas de
activacinmetablica. Pev Toxicol 6: 33-38.
b) libros: apellidos e iniciales de los autores, ao de publicacin, titulo
completo del libro, editorial, lugar de publicacin y n de pginas o, si
se trata de un capitulo, apellidos e iniciales de los autores, ao de
publicacin, titulo del capitulo, en: editores del libro, titulo completo
del libro, editorial, lugar de publicaciny primera y ltima pgina:
21. de la Pea E, Burguete 1, Guadao A (1999) Evaluacin
Mutagnica y Genotxica. Direccin General de Enseanza Superior e
lnvestigacin Cientifica, Sociedad Espaola de Mutagnesis
Ambiental, MUPClA98. Madrid. pp. 398.
14. de la Pea E, Guadao A, Pepetto G(1999) Mtodos alternativos y
complementarios en experimentacin animal. En: Prez-Garcia CC,
Diez-Prieto L, Garcia Partida P (cols) lntroduccin a la
Experimentacin y Proteccin Animal. Len. Universidad de Len.
215-223.
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Fn |es0men |a FS7PUC7UP4 DF UN 4P7/CU/O se|a |a s|g0|en|e.
7||0|o, /||ma, |es0men, pa|ao|as c|ate, ||||e, aos||ac|, |ej wo|ds, |es|o,
ag|adec|m|en|os, o|o||og|a/|a.
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