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RESPOSTA IMUNE: UM SUMRIO (Marcela F.

Lopes)

ndice Abreviaturas...

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Mini-captulos: 1- Fisiologia do sistema imune: rgos e clulas, padres de circulao, homeostase 2- Deteco e reconhecimento do exgeno: imunidade inata x adquirida... 3- Desenvolvimento de linfcitos B 4- Estrutura e funo das molculas do MHC 5- Desenvolvimento de linfcitos T 6- Ativao de linfcitos T 7- Ativao de linfcitos B 8- Mecanismos efetores da resposta imune 9- Sistema Complemento (anexo I) * l O-Inflamao (anexo E) 11-Resposta imune infeco 12- Imunodeficincia 13-Regulao da resposta imune , 14 - Mecanismos imunopatolgicos

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15- Leitura complementar (deve ser lido antes da apostila) Cap.l Propriedades gerais da resposta imune do Imunologia Celular e Molecular (A. Abbas) ou Cap.l Conceitos bsicos em Imunologia do Imunobiologia (Janeway-Travers)

16- Leitura suplementar (regulao neuro-imuno-endcrina) Reviso naNature Immunology 2004, v.5, p. 575-581 "Molecules of Emotion" 1999 (livro de Candace B. Pert)

l- Fisiologia do sistema imune: rgos e clulas, padres de circulao, homeostase O sistema imune formado por rgos, clulas e molculas, cuja funo monitorar o organismo, reagindo, atravs da resposta imune, quando este invadido por agentes infecciosos, ou quando ocorrem modificaes das condies internas (p.e., surgimento de tumores). A resposta imune pode ser considerada como um conjunto de interaes celulares e moleculares complexas entre componentes do sistema imune, outros componentes do organismo e agentes externos a estes, como os microrganismos e seus produtos (antgenos). A resposta imune pode resultar em defesa contra o agente invasor e proteo do hospedeiro ou em alguns casos, em agresso ao prprio organismo (imunopatologias e doenas auto-imunes). O sistema imune dos mamferos o mais estudado, principalmente nos homens e camundongos, sendo dotado de clulas, os linfcitos, que apresentam molculas capazes de interagir com antgenos (Ags) de natureza qumica diversa. Os linfcitos, atravs de estratgias genticas nicas,, expressam receptores de antgeno que apresentam diversidade na sua estrutura e capacidade de interagir com o Ag. Devido recombinao somtica aleatria de genes e a outros mecanismos de gerao de diversidade, cada clone de linfcito expressa um receptor de Ag nico, diferente dos receptores de outros linfcitos. Ao serem estimulados pelos Ags, os linfcitos so ativados, se dividem, proliferam e se diferenciam em clulas efetoras da resposta imune. Alm da propriedade de expanso, o sistema imune dispe de mecanismos de regulao de suas atividades que proporcionam a diminuio do nmero de clulas e retomo a homeostase, ao final da resposta imune. Finalmente, para monitorar o organismo, o sistema imune dispe de padres organizados de circulao de clulas e promoo das interaes celulares em ambiente propcio, resultando na resposta imune. rgos e clulas - Nos rgos linfides primrios ou centrais, ocorre a gerao e diferenciao dos componentes celulares do sistema imune Nos rgos linfides secundrios ou perifricos ocorrem interaes celulares que geram a resposta imune. A fase efetora da resposta imune pode ocorrer nos tecidos do organismo, nos stios de contato com o Ag. Durante a resposta imune, estes tecidos podem ser considerados como rgos linfides tercirios, que em geral se formam transitoriamente com o afluxo de clulas do sistema imune. Os precursores celulares que do origem aos diversos componentes do sitema imune se originam de uma clula-tronco na medula ssea. Linfcitos B e clulas Natural Killer (NK) se diferenciam ao interagirem com clulas do estroma na medula ssea. Linfcitos T tambm se originam a partir de um precursor linfide, que, no entanto completa sua diferenciao no timo, outro rgo linfide central. Neutrfilos e moncitos derivam de um precursor mieloide comum e se diferenciam na medula ssea, junto com outros precursores da linhagem mieloide que do origem aos eosinfilos, mastcitos e basfilos. Todas estas clulas apresentam molculas de superfcie que as diferenciam (CDs) e do caractersticas funcionais, tais como receptores de antgenos, molculas do complexo principal de histocompatibilidade (MHC), e molculas de adeso. Algumas destas clulas secretam fatores solveis como as citocinas e mediadores de inflamao, que por sua vez agem sobre receptores nas clulas-alvo. Os mecanismos da resposta imune so classicamente divididos em imunidade inata ou adquirida. A imunidade adquirida representada pelos linfcitos T e B, cuja ao efetora depende da expanso clonal de linfcitos Ag-especficos, provocada pela interao de seus receptores TCR (receptor da clula T) e BCR (receptor da clula B) com o Ag. Ao serem ativados, os linfcitos B produzem rmunoglobulinas (Igs), ou seja secretam o seu receptor de Ag e os linfcitos T secretam citocinas e ciotoxinas. Por causa da necessidade de expanso clonal, este processo mais lento que a resposta mediada por clulas e molculas da imunidade inata, como os fagcitos (neutrflos e macrfagos), clulas NK e o sistema complemento. A imunidade adquirida pode ser subdividida em imunidade humoral e celular em relao fase efetora da resposta imune. As Igs esto presentes no sangue e so funcionais nestas condies.

So portanto, mecanismos de imunidade humoral, que podem ser transferidos atravs do soro de um indivduo imune para outro no imune, gerando proteo em determinados casos. Citocinas, citotoxinas e molculas de superfcie de linfcitos T dependem de contato celular para agir na clula-alvo, pois, em geral, no so ativas a distncia. Estes agentes podem induzir morte celular diretamente (citotoxinas) ou ativarem clulas efetoras, como os macrfagos, p.e. Quando os mecanismos de proteo de um indivduo imune s podem ser transferidos atravs de clulas, estes so considerados como mecanismos de imunidade celular. Uma das propriedades bsicas do sistema imune gerar resposta imune aos antgenos externos, ignorando os componentes do prprio organismo. Mecanismos de induo de tolerncia ao prprio promovem a eliminao ou inativao de linfcitos B e T autorreativos durante o processo de diferenciao de linfcitos imaturos nos rgos linfides primrios. Ao interagir com clulas do estroma na medula ssea, o precursor linfide obtm fatores e faz contatos necessrios para sua maturao. Ao se diferenciar, o linfcito B adquire a expresso do receptor de Ag (BCR) ou Ig de membrana que o diferencia de outros tipos celulares. Linfcitos B imaturos com receptores capazes de interagir com um auto-antgeno podem ser deletados por apoptose ou tornarem-se anrgicos (inativados), dependendo das caractersticas do Ag e da intensidade da sinalizao intracelular gerada por este. J os linfcitos T, ao se diferenciarem no timo, so testados quanto a sua capacidade de interagir atravs do seu receptor (TCR) com estruturas moleculares (produtos do MHC) presentes na superfcie de clulas epiteliais do timo. Este processo denominado seleo positiva promove a sobrevivncia dos linfcitos T e restringe o repertrio de linfcitos T capazes de participar da resposta imune. A deleo de linfcitos T autorreativos ou seleo negativa tambm ocorre no timo, quando peptdeos antignicos associados a molculas de MHC interagem com o TCR do linfcito T imaturo, gerando sinais intracelulares de maior intensidade que levam apoptose. Durante sua diferenciao no timo, os linfcitos T adquirem as molculas CD4 e CD8 que caracterizam duas subpopulaes distintas, quanto s caractersticas funcionais. Em geral, clulas T CD4 secretam citocinas, enquanto clulas T CD8 so citotxicas. Quanto ao receptor de Ag, estas duas subpopulaes expressam TCRccp, enquanto uma subpopulao minoritria expressa TCRy e pode secretar citocinas ou exercer funes citotxicas, mas no expressam CD4 ou CD8. As clulas T CD4 ou auxiliadoras podem expressar diferentes padres de citocinas: clulas THLexpressam citocinas do,tipp_l, como EFN-y e IL-2, enquanto clulas TH2 secretam citocinas do tipo 2, como IL-4 e IL-10. A IL-2 e a IL-4 so citocinas que induzem proliferao e diferenciao de linfcitos T e B, enquanto IFN-y e IL-10 agem sobre macrfagos e possuem aes antagnicas. O IFN ativa a ao microbicida dos macrfagos, enquanto a IL-10 desativadora. Clulas TH l promovem a imunidade celular, enquanto as clulas TH2 participam na ativao de linfcitos B, na sua diferenciao em plamcitos secretores de Ig, promovendo a imunidade humoral. Estas subpopulaes regulam suas atividades reciprocamente, pois citocinas tipo 2 inibem a ao efetora de macrfagos e o IFN inibe a proliferao de clulas TH2. A diferenciao em clulas TH1 e TH2 influenciada por citocinas, respectivamente, a IL-12 (produzida por macrfagos e clulas dendrticas) e a IL-4. Quando a clula T deixa o timo, ela considerada como um linfcito virgem que ainda no foi estimulado pelo Ag. A ativao do linfcito T e sua diferenciao em clula efetora pode ocorrer no rgo linfide secundrio. Clulas especializadas em captao e apresentao de Ag, como as clulas dendrticas, podem levar o Ag captado nos tecidos ao rgo linfide secundrio, atravs da circulao linftica. Clulas dendrticas, assim como os macrfagos, so derivadas dos moncitos do sangue, e ao se diferenciarem em clulas dendrticas maduras, adquirem a capacidade de processar protenas em peptdeos, que se associam a molculas de MHC classe II e estimulam clulas T CD4. Alm disso, elas apresentam molculas co-estimuladoras (como B7) e, em contato com produtos microbianos, podem produzir IL-12.

Nos rgos linfides secundrios, clulas T e B esto segregadas nas regies T e B (folculos) respectivamente. Clulas T interagem com clulas apresentadoras de Ag (APCs, como a clula dendrtica), na regio T e iniciam o processo de proliferao dependente de IL-2. A diferenciao em clulas TH2 ou TH l depende de re-estimulao pelo Ag, alm da presena de citocinas, como a IL-4 e a IL-12, respectivamente. Clulas T ativadas produzem citocinas e expressam em sua superfcie o CD40-L, outra molcula importante na ativao de linfcitos B e macro fagos, estes por sua vez, tambm apresentam caractersticas de APCs profissionais (expresso de MHC classe II e de molculas co-estimuladoras). Clulas B captam o Ag pela Ig de superfcie, processando-o e apresentando os peptdeos derivados do Ag em molculas de MHC-II para clulas T CD4. Clulas TH2 produzem IL-4 e CD40-L que promovem a ativao e diferenciao de linfcitos B. Estas interaes se do nas reas limtrofes do folculo primrio com a rea T e gera um foco inicial de proliferao de clulas B, que migram para o folculo e ao proliferarem intensamente, formam o centro germinativo. Clulas foliculares dendrticas presentes no folculo (a,gora folculo secundrio, pois contem o centro germinativo) podem apresentar Ag para as clulas B e promoverem sua ativao e diferenciao em plasmcitos. Alguns plamcitos podem retomar medula ssea, de onde secretam grandes quantidades de Ig na circulao sangunea. Algumas clulas B e T se diferenciam em clulas de memria nos rgos linfides secundrios. rgos linfides secundrios podem estar associados s mucosas (MALT) do trato digestivo e respiratrio. Esta localizao estratgica para a secreo de IgA nas mucosas. O bao tambm um rgo linfide secundrio, que concentra Ags derivados do sangue. Durante o estgio fetal, bao e fgado so rgos hematopoieticos suportando a diferenciao de clulas B e outros leuccitos. Padres de circulao - Clulas T efetoras tambm deixam os rgos linfides secundrios e atravs do sistema circulatrio atingem os tecidos. Clulas T CD4 TH l podem ativar macrofagos, clulas T CD8 podem agir diretamente sobre clulas infectadas expressando o Ag associado a molculas de MHC classe I. Uma das consequncias da ativao de clulas T o aumento da expresso de molculas de adeso, como IAM-1 e LFA-1, que facilitam as interaes intercelulares . Estas molculas que interagem entre si, pertencem respectivamente superfamlia das Igs e famlia das integrinas, como a maior parte das molculas que participam destas interaes. Estas molculas tambm influenciam no processo de migrao e circulao de linfcitos T, junto com as selectinas, molculas que apresentam afinidade pelos acares presentes em outras molculas. Ao se diferenciarem em clulas efetoras ou de memria, os linfcitos T sofrem modificaes nas suas molculas de superfcie. Deixam de expressar CD45RA e adquirem CD45RO, outra isoforma do CD45. Enquanto clulas virgens, elas expressam CD62-L ou L-selectina, que promove a entrada destes linfcitos nos rgos linfides atravs de interao com as clulas endoteliais altas dos capilares sanguneos. Os linfcitos que no encontram o Ag no rgo linfide podem recircular e entrar em outros rgos linfides. Os ligantes do CD62-L no endotlio so o CD34, a adressina dos linfonodos perifricos e o MadCAJVI ou adressina dos MALT. A interao do LFA-1 com o IAM-1 no endotlio tambm importante para a diapedese, ou passagem atravs da parede do endotlio. Quando a clula T se diferencia em clula T efetora ou de memria, ela aumenta a expresso de LFA-1, mas diminui a expresso de CD62-L. Por outro lado, outros "homing receptors" esto aumentados, como CD44 que se liga ao hialuronato de adressinas de mucosas e tecidos. O VLA-4 promove a entrada nos stios inflamados atravs da interao com VCAM-1. Finalmente, clulas jTtll, mas no TH2, apresentam capacidade aumentada de migrar para o epitlio, graas expresso do Ag linfocitrio cutneo ou CL, que se liga s selectinas E e P do endotlio em capilares que irrigam a pele. Citocinas inflamatrias produzidas por macrfagos, como TNF-a e IL-1 so capazes de aumentar a expresso de IAM-1 e VCAM-1 e selectinas no endotlio durante o processo inflamatrio, aumentando o recrutamento de linfcitos, rnoncitos e neutrfilos ao stio inflamado.

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Outras citocinas, as quimiocinas ativam e atraem os leuccitos para os tecidos. A IL-8 particularmente importante para a migrao de neutrfllos, aumentando a afinidade do LFA-1 pelo ICAM-1. Nos animais deficientes de IL-8 e pacientes deficientes de LFA-1, os neutrfllos no chegam ao tecido inflamado. Homeostase - A gerao de memria imunolgica uma das propriedades inerentes resposta imune adquirida e garante a proteo em caso de re-exposio a um determinado agente infeccioso. Esta proteo especfica para este agente infeccioso e gerada durante a resposta imune primria. A memria pode ser atribuda ao aumento de molculas protetoras como as Igs durante a resposta primria. A presena de focos de Ags (p.e. nas clulas foliculares dendrticas) deve ser importante para a manunteno dos nveis de anticorpos. O aumento do nmero de precursores de linfcitos Ag-especficos ou clulas de memria pode tambm contribuir para a rapidez da expanso clonal durante a resposta secundria e maior eficincia da resposta imune. No caso das clulas B, ocorre ainda a maturao da afinidade, ou seja, seleo das clulas B que produzem Ig de maior afinidade pelo Ag, graas ao processo de hipermutao somtica. No caso das clulas T, os linfcitos de memria apresentam mais molculas de adeso e menos requisitos para sua ativao, sendo assim, mais eficientes. Quando o Ag eliminado, ao final da resposta imune, ocorre, no entanto, um excesso de clulas efetoras e de memria. Parte destas clulas eliminada para que o organismo retorne homeostase. Este processo ocorre como consequncia da diferenciao terminal dos linfcitos, que aumenta sua suscetibilidade a morte por apoptose. Clulas T ativadas expressam Fas, um receptor da famlia do receptor de TNF e seu ligante, o Fas-L e podem se matar por apoptose, num processo de fratricdio. Linfcitos B ativados expressam Fas e podem ser eliminados por linfcitos T. Camundongos deficientes de Fas e Fas-L apresentam hipertrofia dos rgos linfides e fenmenos de autorreatividade, mostrando que este mecanismo tambm importante para a manunteno da tolerncia perifrica aos antgenos prprios. Outros rgos imunoprivilegiados como olhos e testculos tm clulas que expressam Fas-L e eliminam linfcitos T ativados que poderiam induzir inflamao e leso nestes tecidos. Melanomas tambm so capazes de escapar resposta imune atravs da expresso de Fas-L. Em concluso, mecanismos de induo de apoptose em linfcitos so importantes para controlar sua expanso e sua potencial ao destrutiva sobre o prprio organismo.

2- Deteco e reconhecimento do exgeno: imunidade inata x adquirida. O sistema imune reconhece a presena de substancias exgenas ao organismo atravs de receptores presentes nas clulas que participam da resposta imune. Clulas da imunidade inata, responsveis pela defesa imediata do organismo aos patgenos invasores, expressam receptores capazes de se ligar (PRRs, receptores para o reconhecimento de padres) a padres moleculares associados a patgenos (PAMPs). Alguns desses receptores (lectinas) se ligam a acares caractersticos de fungos, outros (TLRs, receptores tipo Toll) reconhecem estruturas presentes em parasitas, na parede de bactrias gram-positivas, gram-negativas, no DNA de bactrias, no PJ^TA virai. Cada TLR (10 j descritos) codificado por um gene diferente e reconhece estrutura caracterstica de um grupo de patgenos: fungo, bactria, parasita ou vrus. Tal sistema de reconhecimento garante que os patgenos sero notados pelo sistema imune e vo provocar uma reao imediata que leva a sua destruio ou alerta as clulas da imunidade adquirida. Alguns desses receptores partilham um via de sinalizao intracelular em comum que resulta na ativao de macrfagos, neutrfilos e maturao de clulas dendrticas. Outras vias de sinalizao podem ser detonadas por receptores diferentes, levando a respostas celulares apropriadas ao combate de cada tipo de patgeno. Clulas dendrticas podem reagir diferentemente (qualitativa e/ou quantitativamente) quando interagem com fungos, vrus ou bactrias. Clulas dendrticas maduras

participam da ativao de linfcitos T, transmitindo informaes sobre a presena e o tipo de patgeno, atravs de fatores solveis (citocinas) e ligantes na membrana (antgeno e molculas coestimulatrias). As clulas da imunidade adquirida, linfcitos B e T expressam na membrana receptores (BCR e TCR, respectivamente), que fazem o reconhecimento fino de partes do material exgeno (antgeno). Estes receptores so produtos de mltiplos genes, que se recombinam entre si, de maneira que cada linfcito expressa um tipo de receptor nico, capaz de interagir com um determinado antgeno e no outro (especfico: p.e. so capazes de distinguir um vrus de outro). Quando interage com o antgeno, o linfcito entra em diviso celular e prolifera, produzindo um exrcito de clones, todos com o mesmo receptor (expanso clonal). O linfcito B expressa na superfcie, o BCR (receptor da clula B) constitudo por uma molcula de anticorpo (ou Imunoglobulina, Ig) capaz de interagir com um determinado Ag e de molculas acessrias que transmitem informao clula por sinalizao intracelular. Este processo pode levar ativao do linfcito B e, em condies apropriadas (interao com linfcitos T), induzir a diferenciao em plasmcitos, clulas que secretam anticorpos capazes de interagir com o mesmo Ag. A interao entre anticopos e Ags depende de caractersticas prprias do Ag e do anticorpo que vo determinar a especificidade e a afinidade (qumica) pelo Ag. Os anticorpos so compostos de 4 cadeias proteicas: 2 leves (L) idnticas e 2 pesadas (H) tambm idnticas: l 1 1 1 associadas por pontes dissulfetos entre as duas cadeias pesadas e entre cada cadeia pesada e uma das cadeias leves. A parte do anticorpo que interage com o Ag formada por parte da cadeia pesada e parte da cadeia leve e denominada de stio de ligao ao Ag. Cada molcula de anticorpo possui 2 stios de ligao ao Ag: bivalente. As cadeias pesadas podem ser parcialmente processadas por enzimas proteolticas, gerando 2 fragmentos que contm parte da cadeia pesada e a cadeia leve ainda unidas (Fab, de fragmento que liga o Ag) e um fragmento que contm parte das 2 cadeias pesadas unidas (Fe, de fragmento cristalizvel). A parte Fe das Igs ntegras pode se fixar a receptores de Fe na superfcie de clulas, esta propriedade (opsonizao) direciona o Ag, reconhecido pela Ig, para clulas capazes de processa-lo e destru-lo, como os macrfagos. Existem vrios tipos de Igs com propriedades diferentes. A IgG se fixa a receptores de Fe em macrfagos e clulas NK, atravessa a placenta e fixa complemento. A IgM secretada formada por 5 molculas de Igs unidas, formando um pentmero decavalente, com alta avidez pelo Ag e capacidade de fixar complemento. IgM e IgD formam o BCR de clulas B maduras. A IgE se fixa a receptores de Fe de mastcitos na defesa a parasitas e respostas alrgicas. A IgA dimrica e importante na resposta imune de mucosas. A parte Fab das Igs interage com o Ag. Nesta interao, o formato do Ag e do sitio de ligao ao Ag das Igs influencia no encaixe, mas a afinidade tambm depende in interaes qumicas entre grupamentos hidrofbicos, polares, etc. Um anticorpo pode se ligar a Ags diferentes, desde que apresente caractersticas apropriadas para estabelecer tais interaes (a especificidade no absoluta). Os anticorpos podem se ligar a acares, protenas, cidos nuclicos, pequenos grupamentos qumicos (haptenos) etc.... Interessante, pequenas diferenas na estrutura qumica de Ags, por exemplo em ismeros com grupamentos qumicos em posio orto e para, podem ser suficientes para determinar a ligao ou no a determinado anticorpo. Os receptores de clulas T (TCR) tm um padro mais restrito de reconhecimento antignico, interagindo apenas com antgenos proteicos processados em pequenos peptdeos (< 20 a) por razes que sero discutidas em outro captulo. 3- Desenvolvimento de linfcitos B O linfcito B gerado na medula ssea (rgo linfide primrio) a partir de um precursor linfide comum aos linfcitos T e clulas NK. Outros leuccitos gerados na medula ssea (moncitos, neutrfilos, eosinfilos) e mesmo as hemcias e plaquetas derivam de um precursor

mielide. No entanto, os precursores linfide e mielide vm de uma clula tronco hematopoitica, com potencial de auto-renovao. A escolha para a diferenciao em diferentes linhagens depende de fatores de membrana ou solveis de clulas do estroma dos rgos linfides primrios (medula ssea e timo). A IL-7 necessria para a proliferao e sobrevivncia dos linfcitos durante o desenvolvimento, possivelmente por induzir MCL-1, protena anti-apopttica da famlia do BCL-2. Clulas do estroma tmico expressam na membrana ligantes de Notch (receptor presente em linfcitos) e instruem o precursor linfide a se diferenciar em linfcitos T. Na medula ssea, o precursor linfide instrudo a se diferenciar em linfcitos B, na ausncia de sinalizao via Notch. Clulas pr-B podem expressar marcadores como B220 e CD 19 que caracterizam os linfcitos B, mas no expressam BCR. Clulas pr-B expressam as enzimas recombinases RAG (l e 2) e fazem a recombinao do gene da cadeia pesada da IgM (u) e a expressam junto com uma pseudocadeia leve, formanto o pr-BCR. A seguir, ocorre recombinao dos genes da cadeia leve (K ou ) e expresso da IgM de membrana (BCR), mas a clula B ainda considerada imatura. O linfcito B s est maduro quando expressa IgM e IgD na sua membrana. A caracterstica mais especial dos linfcitos a expresso das enzimas recombinases que permite a recombinao dos genes dando origem ao receptor de Ag, sem o receptor (BCR ou TCR) os linfcitos no prosseguem seu desenvolvimento. As cadeias leves e pesadas das Igs possuem domnios constantes e domnios variveis (cada domnio consiste de urna sequncia pouco maior que 100 aminocidos com uma ponte dissulfeto intracadeia). O stio de combinao com o Ag formado pelos domnios variveis das cadeias leves e pesadas. Enquanto as partes constantes das Igs esto condificadas em genes sequenciais no genoma, os domnios variveis so codificados por genes recombinados, produtos de mltiplos genes que aleatoriamente combinaram entre si. O gene que codifica o domnio varivel da cadeia leve da Ig (K ou A,) formado pela recombinao de um entre aproximadamente 50 genes V e alguns poucos genes J. Para cada cadeia pesada, genes V, D e J so recombinados para formar o gene que codifica o domnio varivel. As RAGs reconhecem sequncias de recombinao (sequncias palindrmicas de cidos nucleicos) que flanqueiam os genes V, D e J, unindo-as. Todo material gentico entre essas sequncias eliminado como DNA circular (o cromossoma dos linfcitos fica menor que o de outras clulas!) e mecanismos de reparo garantem a sequncia do gene. No entanto, cidos nucleicos podem ser perdidos nesse processo e h uma enzima capaz de adicionar outros, aumentando o potencial de diversidade dos mecanismos de recombinao. Juntos, esses processos geram uma grande diversidade, produzindo uma populao de linfcitos B, cada um com um gene recombinado diferente para cada cadeia (leve e pesada). Portanto, cada linfcito B gerado possui um receptor de Ag (IgM/BCR) nico, diferente dos outros. A populao de linfcitos gerados pode virtualmente reconhecer qualquer Ag introduzido no organismo. Alguns podem reconhecer antgenos prprios (auto-antgenos), tornando-se potencialmente perigosos para o organismo. Durante o desenvolvimento, ocorre seleo negativa de linfcitos B autorreativos, ou seja, aqueles que interagem com auto-antigenos so eliminados. 4- Estrutura e funo das molculas do MHC O MHC (de Major Histocompatibility complex) ou Complexo Principal de Histocompatibilidade um conjunto de genes localizados no mesmo cromossoma, que codificam molculas diretamente ou indiretamente envolvidas na apresentao de antgenos para clulas T. Como ser discutido mais adiante, o tipo de molcula de MHC envolvida na apresentao de Ag, depende da compartimentalizao do Ag na clula apresentadora (vesicular, de origem exgena, ou citoplasmtico, de origem endgena) e influencia na ativao de diferentes subpopulaes de linfcitos T. O complexo gnico MHC composto de vrias regies de classe I, classe II e classe III. Na regio de classe III so codificados produtos no relacionados apresentao de Ags, como componentes do sistema complemento e citocinas, como TNF, que no entanto, tambm contribuem

9 para a resposta imune. Nas regies de classe I e II, o MHC humano ou HLA (de Human Leucocyte Antigen) codifica 3 molculas de classe I: A, B e C e 3 tipos de molculas de classe II: DP, DQ e DR. O MHC murino (H-2) codifica 2 tipos de molculas de classe II: I-A e I-E e duas ou trs de classe I: K, D e (L). As cadeias a e (3 das molculas de classe II so associadas por pontes dissulfeto, e codificadas pelos genes a e b dentro do MHC. As molculas de classe I so compostas de uma cadeia pesada a, codificada dentro do MHC, associada no covalentemente molcula de p2 microglobulina, que no codificada dentro do MHC, mas em outro cromossoma. As cadeias que compem as molculas de MHC apresentam estrutura terciria, representada por domnios. As cadeias a e p da molcula de classe II so compostas, cada uma de 2 domnios, respectivamente ai e a2, pi e P2. A cadeia a das molculas de classe I composta de 3 domnios: ai, a2 e a3, sendo a molcula P2 microglobulina correspondente ao quarto domnio da molcula de classe II. Os domnios a2 e P2, ancorados membrana e a3 da molcula de classe I, assim como a p2 microglobulina, apresentam estrutura similar aos domnios das imunoglobulinas, apresentando uma ponte dissulfeto interna. Por causa disso, as molculas de MHC so consideradas membros da superfamlia das imunoglobulinas. No entanto, os domnios ai e P l da molcula de classe II e os domnios ai e a2 da molcula de classe I apresentam estruturas diversas, que em certos aspectos se assemelham a outras molculas, como as protenas de choque trmico (algumas codificadas na regio de classe III) e o FcRn, molcula especializada em transportar IgG atravs da placenta. Esses domnios localizados na poro da molcula mais distai membrana, formam a fenda ligante de antgeno, composta de um assoalho de fitas p-pregueadas e paredes em forma de a-hlice. Entretanto, na molcula de classe I as paredes de a-hlice esto mais prximas em suas extremidades, limitando o tamanho do Ag (peptdeo) a ela associado, enquanto na molcula de classe 2, o peptideo pode protuberar para fora da fenda. Peptdeos de 8 a 9 aminocidos se associam a molculas de classe I, enquanto molculas de classe II comportam peptdeos de 12 a 20 aminocidos. Estudos clssicos demonstraram que a eficincia da resposta imune a determinado Ag estava associada a componentes genticos que mapeavam no MHC. Outros estudos realizados em diferentes modelos ajudaram a esclarecer o papel das molculas do MHC na resposta imune, principalmente na ativao de clulas T. Clulas T reconhecem e so ativadas por peptdeos gerados por processamento do Ag por clulas apresentadoras de Ag (APCs) que apresentam o peptdeo associado a molculas de MHC. Doerty e Zinkernagel ganharam o prmio Nobel de Medicina em 1996, por uma descoberta feita a mais de 20 anos antes e que desde ento um paradigma da Imunologia. Clulas T citotxicas derivadas de camundongos infectados com o LCMV eram ativadas e exerciam atividade efetora apenas sobre APCs derivadas de camundongos que partilhavam as mesmas molculas de MHC classe I e estavam infectadas pelo mesmo vrus. APCs com MHC diferente ou infectadas por outros vrus no eram mortas pelas clulas T citotxicas. Na mesma poca, Shevach e Rosenthal demonstraram que a proliferao de clulas T dependia da expresso do Ag e de molculas de MHC, neste caso classe E em APCs. Katz e Benacerraf mostraram que a colaborao T-B na produo de anticorpos dependia do Ag e de molculas de MHC classe II nas clulas B. Hoje se sabe, que o receptor da clula T (TCR) interage tanto com o peptdeo na fenda ligante do MHC, como com as a-hlices que compem a fenda ligante da molcula de MHC. O TCR formado pelas cadeia a e p (em alguns casos y e ) um produto de 2 genes recombinados que apresentam variabilidade gentica, devido aos diversos mecanismos de gerao de diversidade e que se concentra mais na regio hipervarivel (CDR) do domnio varivel, enquanto o outro domnio proximal membrana constante. Alguns modelos sustentam que a interao do TCR com aminocidos do peptdeo (ou eptopo do Ag) ocorre atravs do CDR3 das cadeias a e p, ao passo que as regies CDR1 e 2 interagem com as a-helices das molculas de MHC (histotopo). Modelos experimentais recentes sugerem, no entanto, que o TCR pode apresentar outros padres de interao com o complexo MHC-Ag.

10 As molculas de MHC, por outro lado, tambm apresentam certo grau de especificidade ao interagir com os peptdeos. A variabilidade das molculas de MHC ocorre devido poligenia (vrios genes que codificam molculas do mesmo tipo, classe I ou classe II) e ao polimorfismo dentro do MHC, ou seja, indivduos dentro da mesma espcie expressam diferentes alelos que codificam diferentes molculas do mesmo tipo, p.e. Kd e Kb para classe I murina. Os aminocidos polimrficos das molculas de MHC classe II se concentram na fenda ligante; assoalho, onde se liga o peptdeo e paredes de a-hlice reconhecidos pelo TCR. Para se associarem a um determinado tipo de molcula de MHC, o peptdeo deve apresentar determinados tipos de aminocidos em determinadas posies, por exemplo, o segundo e o nono aminocidos se associam a cavidades na molcula de MHC. No entanto, existem algumas caractersticas gerais no peptdeo, alm do tamanho, como a presena de aminocido hidrofbico na poro carboxiterminal que favorece a ligao molcula de classe I. Consideraes semelhantes podem ser discutidas para as molculas de classe II. Origem do Ag e compartimentalizao - Molculas de classe I e classe II apresentam Ags derivados de diferentes compartimentos celulares. Os Ags exgenos, endocitados pela APC, so processados em vesculas cidas por proteases e os peptdeos derivados se associam a molculas de classe II no compartimento de classe II, uma vescula especializada (MIIC). Molculas de classe II so montadas no retculo endoplasmtico com a ajuda de chaperonas e se associam cadeia invariante li, que dirige sua passagem para o compartimento vesicular MIIC. Alm disso, a li bloqueia sua fenda de ligao ao Ag, impedindo a associao com peptdeos endgenos no retculo endoplasmtico. Nas vesculas, a cadeia li clivada por proteases, deixando o peptdeo CLIP associado fenda ligante de peptdeo da molcula de classe II. Tambm neste compartimento, a molcula HLA-DM (codificada na regio de classe II) parece catalisar o desbloqueio da molcula de classe II (feito pelo peptdeo CLIP da cadeia li) e favorecer a ligao de determinados peptdeos molculas de classe E. As molculas de HLA-DM podem influenciar o repertrio de peptdeos apresentados. Ags derivados de molculas endgenas so processados no citoplasma da clula pela ao do complexo proteoltico proteassoma e so transportados para a luz do retculo endoplasmtico, onde se associam a molculas de classe I. Outros produtos derivados do MHC contribuem para este processo, como as subunidades catalticas do proteassoma LMP-2 e 7, que so induzidas pelo IFN-y e modificam as caractersticas do proteassoma, favorecendo a formao de peptdeos com aminocidos hidrofbicos na regio carboxi-terminal, e que se associam preferencialmente s molculas de classe I. Protenas de classe III, como HSA, podem funcionar como transportadoras de peptdeos dentro do citoplasma. No entanto, o transporte de peptdeos do citoplasma para o retculo endoplasmtico depende das molculas TAP-1 e TAP-2 (codificadas na regio de classe II), que fazem o transporte ativo, dependente de ATP. TAP-1 se associa a molculas de MHC classe I montadas com a ajuda da chaperona calnexina. As molculas de classe I s se estabilizam quando associadas P2 microglobulina e ao peptdeo. Molculas montadas so ento exportadas via Golgi para a superfcie da APC. Apresentao de Ag - Diferentes subpopulaes de linfcitos T reconhecem o peptdeo associado a molculas de MHC classe I e II. Clulas T CD4 so ativadas por peptdeos exgenos associados a molculas de MHC classe II e auxiliam mecanismos efetores especializados no combate a antgenos extracelulares, (p.e., anticorpos produzidos por linfcitos B) ou a microrganismos resistentes em vesculas de macrfagos. Ao ser expressa na superfcie da APC, a molcula de classe II em associao com o Ag ativa as clulas T CD4 induzindo produo de citocinas que ativam as APCs, que podem ser clulas efeoras, corno macrfagos e clulas B. A molcula CD4 capaz de interagir com o domnio P2 da molcula de classe II e facilita a interao T-APC, alm de promover, como co-receptor, a ativao de clulas T CD4. Clulas T CD8 reconhecem peptdeos endgenos (gerados no citoplasma) associados a molculas de MHC classe I e exercem atividade citotxica, eliminando clulas infectadas com

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patogenos intracitoplasmticos, como vrus e protozorios. A molcula CD8 se associa ao domnio a.3 da molcula de MHC classe I. As molculas de classe I e II so expressas em clulas do timo envolvidas na seleo positiva e negativa de clulas T CD8 e CD4, respectivamente. Camundongos deficientes de $2 microglobulina e TAP no possuem clulas T CD8 e os deficientes de MHC classe II no desenvolvem clulas T CD4. Molculas de MHC classe I esto presentes em todas as clulas nucleadas, para garantir a eliminao de clulas infectadas com vrus. Entretanto, molculas de MHC classe II ocorrem apenas no timo, em APCs profissionais (macrfagos, clulas B e clulas dendrticas) e em clulas T humanas ativadas. Citocinas como IFN-y e IL-4 regulam a expresso de molculas de MHC. Existem ainda dentro do MHC algumas molculas menos polimrfcas e menos distribudas, que so as molculas de MHC no clssicas ou MHC classe Ib, p.e., HLA-G e H2-Q. Nos camundongos, h evidencias de apresentao de Ags e ativao de clulas T atravs do reconhecimento destes complexos. Peptdeos formilados derivados da L. monocytogenes podem se associar a estas molculas e ativarem clulas T. Clulas T y reconhecem molculas de MHC no clssicas. Por outro lado, clulas NK so inibidas quando seus receptores inibitrios reconhecem molculas de MHC classe I e classe Ib. Outras molculas apresentadoras, como CD l ativam clulas T ao se associarem a produtos de micobactrias, como lipdeos e glicolipideos, mas no so codificadas no MHC. Molculas CD l associadas ao Ag so tambm reconhecidas por clulas T CD4 NK, uma subpopulao de clulas T CD4 presentes, principalmente no fgado, e que expressam marcadores de clulas NK.

5- Desenvolvimento de linfcitos T

O precursor de clulas T se origina na medula ssea, a partir de um precursor linfide comum a linfcitos B e clulas NK. O precursor linfide pode ser atrado ao timo por fatores quimiotticos . A importncia do timo na maturao de clulas T evidente nos camundongos nude e nos pacientes com sndrome de DiGeorge que no tm timo, nem clulas T. O transplante de timo para o camundongo nude suficiente para permitir o aparecimento de clulas T. no timo que o linfcito adquire a expresso do receptor de Ag (TCR, cadeias a e P), as cadeias que compem o CD3 (parte do complexo TCR:CD3 responsvel por iniciar a sinalizao intracelular) e os coreceptores CD4 e CD8, que definem as duas maiores subpopulaces de linfcitos T, os auxiliares e citotxicos, respectivamente. No caso dos camundongos, os linfcitos formados no perodo embrionrio, s conseguem deixar o timo depois do nascimento. O timo continua muito ativo at a puberdade e involui depois, sendo substitudo por tecido adiposo. As principais subpopulaces de timcitos so os duplo negativos (DN, CD4"CD8") que adquirem o TCR:CD3, CD4 e CD8, se transformando nos duplo positivos (DP, CD4+CD8+). Os DP perdem um dos co-receptores e se transformam nos linfcitos T maduros CD4 ou CD8. Entre os DN esto as clulas T y, que rearranjam os genes que codificam para as cadeias y e e no expressam nem CD4, nem CD8. A outra subpopulao de clulas T majoritria e rearranja os genes que codificam as cadeias a e p, e submetida aos processos de seleo de repertrio ainda no timo. A maturao se inicia na parte mais externa, ou crtex, enquanto os timcitos mais maduros deixam o timo pela medula. O crtex contem clulas epiteliais, macrfagos e densamente povoado de timcitos. Na medula se encontram clulas epiteliais, clulas dendrticas e macrfagos derivados da medula ssea e poucos linfcitos. Apesar de existirem muitos timcitos imaturos, poucos conseguem completar o processo de maturao, mais de 98% morrem por apoptose. As clulas apoptticas so rapidamente removidas pelos macrfagos. As clulas DN expressam as enzimas RAG1 e 2 que permitem os rearranjos, inicialmente do gene que codifica a cadeia P, que expressa com uma cadeia a substituta, formando o pr-TCR

12 com as cadeias do CD3. Esse receptor de membrana permite a gerao de sinalizao intracelular que leva a proliferao intensa desses timcitos. A seguir ocorre rearranjo do gene da cadeia a e expresso do TCR:CD3. Neste estgio, as clulas expressam CD4 e CD8 (DP). As clulas DP que expressam TCR capaz de interagir com molculas de MHC do epitlio tmico so selecionadas positivamente, recebendo sinais que levam a um aumento na expresso do TCR e promovem a sobrevivncia destas clulas. As clulas que no conseguem interagir morrem de apoptose por negligncia. A seleo positiva permite a maturao da clula T e ocorrem novas modificaes nas molculas de superfcie. A expresso de CD69 ,p.e., indica que o processo provoca pelo menos uma ativao parcial. No entanto, a alterao mais notvel a perda de um dos co-receptores CD4 ou CD8, que caracteriza o linfcito T maduro. Seleo Positiva - Entre os diversos modelos de seleo positiva, um particularmente interessante o modelo de camundongo transgnico, cujas clulas T expressam um TCR que reconhece um antgeno em associao com uma determinada molcula MHC x. Estas clulas T s so capazes de amadurecer se o animal expressa esta molcula de MHC, mas esto completamente ausentes em animais que expressam um outro MHC. Uma sofisticao deste procedimento gentico permitiu a expresso da molcula de MHC x sob controle de promotores tecido-especifcos, apenas nas clulas epiteliais do crtex ou em clulas derivadas da medula ssea, macrfagos e clulas dendrticas. Os linfcitos T s amadureceram quando reconheceram o MHC x nas clulas epiteliais do crtex, mostrando que este o principal stio de seleo positiva. O papel dos co-receptores: os co-receptores CD4 e CD8 tm capacidade diferencial de se ligar a molculas de MHC. O CD4 se liga ao domnio 2 de MHC classe II, enquanto o CD8 se liga ao domnio, o,3 de MHC classe I. A presena do co-receptor apropriado parece ser importante para a seleo positiva dos linfcitos T. Clulas T CD4 no amadurecem em camundongos deficientes de MHC classe II e clulas T CD8 no amadurecem em camundongos deficientes de MHC classe I. H bastante controvrsia, mas dois modelos tentam explicar o papel dos co-receptores. No modelo de instruo, o TCR reconhece a molcula de MHC-I, p.e. durante o estgio DP. Nesse caso, a molcula CD8 se liga tambm e sinaliza o desaparecimento do CD4 e vice-versa no caso do MHC classe H. O outro modelo prediz a perda randmica de um dos co-receptores e a seleo das clulas que retiveram o co-receptor correio. Primeiro ocorre a diminuio da expresso de um dos receptores, a clula que ainda possui o co-receptor em concerto com o reconhecimento do TCR, usa este para interagir e selecionado positivamente. Seleo negativa. Um outro processo de seleo ocorre no timo e garante a tolerncia imunolgica a alguns antgenos prprios. O processo de seleo negativa consiste na eliminao ou inativao de clones de Linfcitos T capazes de reagir intensamente com o Ag apresentado em molculas de MHC no timo. Existem muitos modelos convincentes de seleo negativa, como a deleo de clulas T com determinadas cadeias Vf3 capazes de reconhecer superantgenos expressos no timo. Os superantgenos se associam poro no polimrfca do MHC classe II e s cadeias P de determinados TCRs, induzindo aivao policlonal. Um modelo mais simples o animal transgnico que expressa um TCR capaz de reconhecer uma molcula de MHC x associada a um peptdeo antignico, que normalmente no expresso no timo. Nesse caso, as clulas T reconhecem o MHC contendo peptdeos endgenos e so selecionadas positivamente. No entanto, se o peptdeo antignico for injetado no timo, os linfcitos so eliminados por apoptose. Outro modelo interessante demonstra a seleo negativa a um antgeno prprio (HY) expresso no timo de camundongos machos. Clulas T transgnicas capazes de reconhecer este Ag desenvolvem normalmente nas fmeas, mas so prontamente eliminadas do timo do macho. A seleo negativa ocorre durante o estgio DP atravs da interao com clulas dendrticas e epiteliais na regio crtico-medular. Estas descobertas levaram a uma questo importante, que , por qu o reconhecimento do MHC-peptdeo prprio na seleo positiva no causa a morte das clulas T? Um dos modelos que

13 tenta explicar o modelo da avidez. A avidez de uma interao influenciada pela afinidade e pela quantidade dos ligantes, no caso, MHC-peptdeo e TCR. Quando o TCR reconhece o seu ligante, o auo-antgeno, com alta afinidade, o sinal gerado forte o suficiente para induzir morte celular. Quanto quantidade, em alguns modelos, ficou demonstrado que pequenas quantidades do peptdeo induziram seleo positiva, enquanto maiores quantidades levaram seleo negativa. Recentemente, foi descoberto que a protena AIRE (reguladora auto-imune) controla a expresso de antgenos tecido-especfcos nas clulas epteliais medulares e a tolerncia central aos antgenos prprios particulares dos tecidos. Pacientes e camundongos deficientes de AIRE apresentam a sndrome auto-imune poiendcrina que afeta tecidos de vrios rgos, inclusive glndulas. 6 - Ativao de linfcitos T A principal molcula de superfcie que controla a ativao do linfcito T o seu receptor de antgeno: TCR. O TCR formado pelas cadeias a e (3 ou y e , produtos de genes rearranjados. O rearranjo de genes que codificam a poro varivel das cadeias a e P aleatrio, por issso, cada clone de linfcito T apresenta um receptor de Ag diferente. O TCR capaz de interagir com peptdeos (Ag) associados a molculas de MHC. Outros componentes do receptor, como as cadeias do complexo CD3 y, e L, so capazes de veicular sinais intracelulares que culminam com a ativao de linfcitos T. O processo de ativao ocorre nas zonas T dos rgos linfides secundrios, quando clulas apresentadoras de Ag provenientes dos tecidos, chegam ao rgo linfide atravs da circulao linftica. Quando ativados, os linfcitos T proliferam, e ocorre a expanso dos clones Ag-especficos. Ainda nos rgos linfides, os linfcitos T participam da ativao de Linfcitos B. Outros linfcitos T se diferenciam em clulas efetoras e atravs do sistema circulatrio se dirigem aos tecidos onde vo exercer suas funes efetoras. Existem duas subpopulaes maiores de linfcitos T, os linfcitos T CD8, citotxicos e os linfcitos T CD4, produtores de citocinas. Os JirJQcilas-T, CQ4. auxiliadQres se suhdjyjdem em cjulas^ T help_er _1 (TH1) e T helper 2 (TH2) de acordo com as citocinas que produzem. Citocinas da tipo l citocinas do,tipo_2, aiy_am clulasJB. Os linfcitos T CD8 reconhecem o Ag associado a molculas de MHC-I, enquanto os linfcitos T CD4 reconhecem o Ag em molculas de MHC-II. Linfcitos que apresentam TCR y reconhecem molculas de MHC clssicas, em geral classe I, e no clssicas (classe Ib), associadas ou no a peptdeos, e at mesmo Ags no associados ao MHC. Eles podem apresentar funo citotxica ou produzir citocinas. Linfcitos T ap reconhecem peptdeos gerados em diferentes compartimentos celulares. Protenas endocitadas so processadas nas vesculas da APC e se associam ao MHC-11, sendo reconhecidas por clulas T CD4. Protenas de localizao intracitoplasmtica so processadas por proteassomas e se associam ao MHC-I no retculo endoplasmtico. Na superfcie das APCs elas ativam linfcitos T CD8. Conhecidas como coreceptores, as molculas CD4 e CD8 tambm so capazes de interagir com o MHC, s que atravs da poro no polimrfica. J o TCR, estabelece ligao tanto com o peptdeo presente na fenda do MHC como com as molculas de MHC. Alguns Ag especiais, os superantgenos, no se associam fenda ligante de Ag do MHC. Ao contrrio, eles se ligam s pores no polimrficas do MHC-II e a determinadas cadeias Vp do TCR, ativando as clulas T. Lectinas, anticorpos anti-TCR e antiCD3 tambm so capazes de iniciar o processo de ativao do linfcito T. Eventos intracelulares - A fosforilao de resduos de tirosina nas cadeias e CD3 um dos primeiros eventos na ativao do linfcito T. Protena tirosina quinases (PTKs) da famlia src, como p56lck, esto envolvidas nestes eventos. A p561ck est presa s pores citoplasmticas do CD4 e CD8 e devido isso, esses co-receptores apresentam dupla funo: adeso e sinalizao. Quando o TCR engajado pelo complexo MHC-Ag, o CD4 tambm se liga e as pores intracitop Iam ticas da p56lck e as cadeias CD3 e se aproximam. Ocorre fosforilao dos ITAMs

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(motivos de ativao baseados em tirosinas dos imunorreceptores) e recrutamento de enzimas que apresentam o domnio SH2 capaz de interagir com tirosinas fosforiladas. PTKs comofyn e ZAP-70 (associada cadeia C ) so recrutadas do citoplasma. A ZAP-70 ento fosforilada (stio regulatrio positivo) e se torna ativa, agindo sobre uma srie de substratos, entre eles a fosfolipase Cyl (PLCyl ). A ativdade da PLCyl em fosfolipdeos de membrana gera mensageiros secundrios, ativao de enzimas e de fatores de transcrio. Estes eventos, no entanto, so insuficientes para a ativao da clula T, e isolados podem induzir anergia. A ativao da clula T depende da transcrio do gene da IL-2, sua secreo e ao sobre o receptor de IL-2 de alta afinidade. Uma das cadeias do receptor de IL-2 (a) tambm induzida pela ativao. A ao da IL-2 sobre seu receptor leva sntese de DNA, diviso celular e proliferao da clula T. A IL-2, no entanto, s induzida quando, alm do l sinal, veiculado via TCR, o linfcito recebe o 2 sinal, veiculado pelo CD28. Para isso, o CD28 deve interagir com o B7 na APC. S ento, so ativados todos os fatores de transcrio da IL-2: NFAT, AP-1, NFicB, etc... Da membrana para o citoplasma, ocorre uma sequncia de eventos que ativam estes fatores. A PLCyl ativada pelas PTKs age sobre o PIP2, clivando-o em IP3 e DAG (mensageiros secundrios). O IP3 mobiliza Ca^ de estoques intracelulares, o DAG ativa a PKC na presena de Ca""". O Ca""' ativa ainda a calmodulina, que ativa a calcineurina, uma fosfatase. A calcineurina desfosforila o NFAT e permite sua translocao para o ncleo, onde vai se ligar ao elemento regulador da IL-2. A calcineurina o alvo de drogas como a ciclosporina e FK506 que inativando-a impedem a sntese de IL-2 e a ativao da clula T. A PKC ativada pelo DAG, transloca-se para a membrana e fosforila vrias protenas, inclusive outras quinases nos resduos serina e treonina. Quinases ativadas podem fosforilar e desativar o IicB, inibidor do NFidB. O NFicB, quando livre do seu inibidor, transloca para o ncleo e ajuda a induzir a sntese de IL-2. PMA que mimetiza o DAG e ionomicina que promove o aumento de Ca""" so capazes de induzir vrios eventos bioqumicos, de maneira anloga ativao via TCR. Outros fatores de transcrio como ofos ejun, no entanto, dependem de vias bioqumicas derivadas do TCR e do CD28 para serem transcritos e ativados por fosforilao. Uma destas vias a ativao da GTPase p21 rs, provavelmente iniciada pela ao das PTKs. O p21 rs ativa uma srie de quinases, algumas conhecidas como MAPquinases ou quinases ativadas por mitgenos. As MAPquinases induzem transcrio e fosforilao de/os ejun que se combinam para formar o AP-1. Clulas anrgicas podem apresentar defeitos desde a fosforilao deficiente da cadeia , diminuio da atividade de p21 rs e de MAPquinases. O resultado a formao deficiente de AP-1. Alm da importncia do CD28 na induo da IL-2, ele exerce outras funes como a estabilizao de mRNA para IL-2 e outras citocinas e induo de molculas que protegem da apoptose como Bcl-xL e Bcl-2. Regulao - A expresso e funo do ligante do CD28, o B7 bastante regulada. Clulas T s so ativadas por APCs profissionais que expressam B7: a clula dendrtica madura, o macrfago ativado e o linfcito B ativado. A interao das APCs com o Ag, citocinas e molculas de superfcie podem induzir B7 e ativarem estas clulas. Uma das principais vias de induo do B7 resultado da interao entre a molcula CD40 da APC e o CD40-L de linfcitos T ativados. Os linfcitos T so ativados por APCs como as clulas dendrticas, que expressam B7 ao amadurecerem. Em poucas horas o linfcito T expressa o CD4O-L. O CD40-L em conjunto com citocinas tambm derivadas da clula T ativa vrios tipos celulares. Linfcitos B se diferenciam e produzem Igs. Macrfagos produzem NO. Clulas endoteliais expressam molculas de adeso que promovem inflamao. Nas clulas dendrticas, o CD40-L aumenta os nveis de B7, enquanto esta molcula induzida em macrfagos e clulas B. Camundongos deficientes de CD4O-L no respondem inoculao de protena bsica da mielina (MBP) e no desenvolvem encefalomielite auto-imune experimental (EAE) , mesmo sendo transgnicos para o TCR anti-mielina. parte dos efeitos efetores do CD40L sobre macrfagos, clulas em geral responsveis pela demielinizao dos nervos, os autores argumentam que o principal defeito na ativao da clula T, que no ocorre se no houver induo do B 7 pelo CD4O-L. De fato, APCs contendo B7-1 levam o camundongo deficiente de CD40-L a

15 desenvolver EAE. Em outro modelo, de rejeio de transplantes de pele, a ativao do macrfago e da clula T s era bloqueada, no entanto, quando os animais eram tratados simultaneamente com reagentes que bloqueavam a via do CD40-L e a via do CD28. Duas molculas B7, B7-1 e B7-2, diferem na cintica de induo. B7-2 mais precoce, B7-1 aparece nas APCs estimuladas por 48 horas. Por outro lado, elas se ligam tambm no CTLA-4 de clulas T, at com mais afinidade que ao CD28. Ao contrrio do CD28 que constitutivo, o CTLA4 mximo com 48 horas de ativao da clula T e depois diminui. Surpreendentemente., no entanto, o CTLA-4 no induz, mas sim bloqueia a proliferao e a sntese de IL-2. Um modelo de ativao - A APC expressa B7-2 que interage com o CD28 na clula T. 1 e 2 sinais ativam clula T, induzem proliferao, ao efetora e expresso de CTLA-4. A APC passa a expressar B7-1 que interage com CTLA-4 e gera um sinal negativo que controla a ao efetora da clula T. De acordo com este modelo, camundongos deficientes de CTLA-4 apresentam linfoproliferao espontnea, morrem de cardite e pancreatite, por destruio tissular mediada por infiltrados inflamatrios de linfcitos. As PTKs dos linfcitos T esto hiper-ativados nestes animais. Foi descoberto que o CTLA-4 est associado a uma protena-tirosina-fosfatase capaz de desfosforilar PTKs associadas ao TCR, diminuindo sua ao. Curiosamente, a prpria associao do CTLA-4 com a fosfatase depende de fosforilao de resduos tirosina do CTLA-4 por PTKs. E portanto, s ocorre durante o processo de ativao. Aproveitando-se deste conceito, foram feitos experimentos com tumores em animais. Quando os animais eram inoculados com anti-CTLA-4 e tumores, ocorria a rejeio destes tumores. Acredita-se que o CTLA-4 ao ser bloqueado deixa de exercer suas funes regulatrias negativas, aumentando a resposta imune ao tumor, em geral fraca. Outra atividade fosfatase, que est associada ao CD45, tambm exerce atividade regulatria sobre a ativao de linfcitos T, mas, neste caso, a regulao positiva. A fosfatase desfosforila o stio regulatrio negativo das PTKs src, aumentando sua atividade quinase nos primeiros eventos de ativao.

7 - Ativao de linfcitos B O processo de ativao de clulas B consiste em uma srie de eventos moleculares e bioqumicos que induzem expresso de molculas, proliferao, diferenciao (em clulas de memria ou em plasmcitos) e secreo de imunoglobulinas. Molculas na superfcie do linfcito B, como o receptor de Ag (BCR), receptores de citocinas, CD40 e CD 19, ao interagirem com seus ligantes desencadeiam mecanismos de sinalizao intracelular que levam ativao da clula B. O processo de ativao do linfcito B se inicia com a captao do Ag atravs do BCR, que uma molcula de Ig ancorada membrana e associado com 2 cadeias denominadas Igoc e Igp. Estas cadeias associadas so capazes de gerar sinalizao intracelular, pois apresentam o motivo ITAM, que contem tirosinas e interagem com protena-tirosina quinases. Existem basicamente 3 tipos de antgenos que ativam as clulas B. Antgenos T dependentes so proteicos, incapazes de causar a agregao suficiente dos receptores de Ag para ativar per se a clula B. No entanto, estes antgenos so internalizados, processados e apresentados em molculas de MHC classe II para as clulas T. Clulas T ativadas expressam CD40L e citocinas que promovem a ativao da clula B. Outros antgenos, entretanto, ativam diretamente a clula B. Antgenos T independentes - Alguns antgenos, no entanto, so capazes de ativar as clulas B e so considerados como T independentes. Os Ag T independentes do tipo l, como o LPS apresentam uma atividade mitognica intrnseca para linfcitos B murinos, agindo em receptores de LPS. O LPS portanto, um ativador policlonal, e induz a produo de IgM. Os antgenos T independentes do tipo 2 so polimricos e apresentam eptopos repetidos, como a cpsula polissacardica do pneumococo. Este tipo de Ag capaz de induzir a agregao das Igs de superfcie e ativarem os linfcitos B. Nas respostas aos Ags tipo 2, predominam clulas BI ou

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CD5+, cujos receptores reconhecem carboidratos. Estas clulas B predominam na cavidade peritoneal, produzem IL-10 e secretam IgM preferencialmente. Camundongos deficientes de clulas BI no respondem a antgenos do tipo 2. Os antgenos T independentes induzem um tipo de resposta intermediria entre a imunidade inata e a adquirida, sendo importante na defesa contra patgenos que apresentam estes Ags, antes que se estabelea a imunidade adquirida. No entanto, no deixam memria imunolgica. No laboratrio, este modelo pode ser mimetizado por anticorpos anti-IgM presos a uma superfcie plstica. Nestas condies, anticorpos anti-IgM so capazes de induzir uma serie de eventos intracelulares atravs do receptor de Ag das clulas B. PTKs da famlia src: Ick, fyn, lyn, blk so ativadas e fosforilam vrias protenas, inclusive Iga e Igp. H dois modelos que explicam a ativao das tirosina-quinases: 1 - A agregao de receptores na membrana aproxima as PTKs presas a eles e elas se ativam atravs da fosforilao de uma tirosina que funciona como um regulador positivo, aumentando sua atividade enzimtica. 2 - Fosfolipases associadas ao CD45 agem sobre as PTKs desfosforilando a tirosina de um stio regulatrio negativo e portanto, ativando as PTKs. Quando as molculas Iga e p esto fosforiladas elas recrutam do citoplasma a PTK72, capaz de agir sobre outros substratos. Fosfolipases Cyl e 2 so fosforiladas e agem sobre fosfolipdeos de membrana gerando mensageiros secundrios como inositol trifosfato (IP3) e diacilglicerol (DAG). O IP3 aumenta os nveis de clcio agindo nos estoques intracelulares e o DAG ativa a protena-quinase C (PKC), uma serino-treonina quinase que inicia uma cascata de fosforilaes intracelulares. O clcio ativa a calmodulina e fosfatases dependentes de calmodulina. A ao de fosfatases e quinases regula a ativao de fatores de transcrio e portanto a sntese de protenas. Estas e outras vias de sinalizao induzem proliferao celular. Outras molculas na superfcie do linfcito B podem regular os sinais derivados do BCR. O co-receptor da clula B composto das molculas CD19, CD21 e CD81. Em alguns casos o Ag pode estar associado a molculas de complemento e Igs. A clula B pode estabelecer ligao com o Ag atravs do BCR e com derivados do C3 atravs do receptor CR2 ou CD21, gerando um estmulo positivo. Ao contrrio, a ligao simultnea do BCR com o Ag e de Igs associadas ao Ag com o receptor de Fe na clula B pode gerar um sinal negativo, sendo um mecanismo de controle da produo de anticorpos. O receptor de Fe da clula B esta associado a tirosina-fosfatases que antagonizam as fosforilaes iniciadas pelo BCR. Antgenos T dependentes - No caso dos Ags proteicos, sua capacidade de induzir sinalizao atravs do BCR limitada. No entanto, ao apresentar peptdeos derivados do processamento da protena s clulas T, fatores de membrana e citocinas destas contribuem para a ativao das clulas B. Membranas de linfcitos T ativados, na presena de citocinas induzem proliferao, diferenciao e secreo de anticorpos. O fator presente nas membranas o CD40-L, o ligante do CD40. Na clula B, a interao do CD40 com seu ligante induz sinalizao intracelular. Ocorre fosforilao de substratos por tirosina-quinases, como Lyn, atividade de fosfolipase C e inositois fosfato e atividade de fatores de transcrio, como NF-KB e c-fos. O CD40 importante na induo da expresso de B7, molcula co-estimuladora que se liga ao CD28 de clulas T, A interao com o CD28, alm de potencializar a ativao da clula T, evita a induo de anergia e apoptose destas clulas. De maneira semelhante, o CD40 tambm induz molculas como Bcl-xL e Bcl-2 que protegem a prpria clula B da morte por apoptose. Alm disso, os sinais derivados do CD40 so necessrios para a mudana de isotipo de Igs (switch). Pacientes deficientes na expresso de CD40-L apresentam a Sndrome de Hiper-IgM, pois no fazem outros isotipos de Ig, como IgG e IgA. A anatomia dos rgos linfides tambm esta alterada, pois no h formao de centros germinativos. Entretanto, as linfocinas tambm participam na ativao do linfcito B, como fatores de crescimento e diferenciao, enquanto algumas delas promovem o switch preferencial para determinados isotipos. IL-2, IL-4, IL-5 e IL-6 so fatores de crescimento e diferenciao de linfcitos B. A IL-10 aumenta a secreo de IgM. Com exceo da IL-2, estas citocinas so

17 produzidas por linfcitos T CD4 TH2, que controlam a imunidade humoral. A IL-4 importante para a produo de IgE e IgGl (camundongos) ou IgG4 (humanos). Clulas T CD4 TH1, alm de IL-2, produzem tambm o IFN-y, que induz a produo de IgG2a e IgG3. Clulas CD4 TH3 ou regulatrias produzem TGF-P, com atividade inibitria na proliferao celular, mas que induz a produo de IgA. As citocinas atuam induzindo fatores de transcrio que se ligam aos segmentos gnicos que codificam as cadeias pesadas das Igs, induzindo sua transcrio e facilitando a ao de recombinases que atuam na recombinao e deleo de peas de DNA, promovendo a mudana de isotipo. Ativao da clula B in situ. Os gngiios linfticos so rgos que filtram Ags derivados dos tecidos que circulam na linfa atravs dos vasos linfticos. As clulas B so ativadas na proximidade das reas T dos gngiios linfticos onde elas interagem com os linfcitos T antgenoespecificos j ativados por outras clulas apresentadoras de antgeno, e.g., clulas dendriticas. Sob a influncia do Ag, dos contatos celulares e dos fatores solveis da clula T, as clulas B iniciam o processo de expanso clonal e algumas se diferenciam em clulas produtoras de anticorpos, inicialmente produzindo IgM. As clulas B migram para os folculos primrios (regio B) e proliferam extensivamente formando os centros germinativos. Durante o processo de proliferao, ocorrem os fenmenos de mudana de isotipo e de hipermutao somtica que geram linfcitos B expressando Igs com afinidades diferentes pelo Ag. Aqueles que pn0011?^ Igs s rnaior. ^afinidade iro interagir preferencia1mentLe cpjri o Ag pregp na suj>erf]cje d^e jjj[ foJjcuiare|! dendrl^nas ^jue fjxflregfiflrn receptores dje Ec,e, capturam gpmplexjps Ag-antir.nrpns Estas interaes com as clulas foliculares dendriticas e com clulas T so importantes para a induo de Bcl-2, que protege os linfcitos B da apoptose. Algumas destas clulas B vo se transformar em clulas de memria, outras se diferenciam em plasmcitos. Os plasmcitos podem permanecer no rgo linfide secundrio ou migrar para a medula ssea onde secretam grandes quantidades de anticorpos. Diferente das clulas B de memria, eles deixam de expressar Ig em sua superfcie. Clulas B de memria so rapidamente reativadas durante a resposta secundria (re-exposio ao Ag), pois os precursores Ag-especficos de clulas B e T esto aumentados. O processo se repete de forma semelhante, mas os anticorpos de maior afinidade produzidos durante a resposta primaria competem pelos depsitos de Ag nas clulas foliculares dendriticas, com clulas B que recm sofreram mutaes. Sendo assim, apenas clulas B que expressarem Ig com afinidade pelo Ag ainda mais aumentada sero selecionadas. Em consequncia, os anticorpos apresentam uma maior afinidade pelo Ag e este fenmeno denominado de maturao de afinidade da resposta imune. 8 -Mecanismos efetores da resposta imune Os mecanismos que participam da resposta imune so classificados em imunidade humoral e imunidade celular. Imunoglobulinas presentes no plasma conferem imunidade humoral, pois o soro de um indivduo imunizado pode transferir proteo contra um determinado patgeno para um indivduo no imunizado. Por outro lado, muitas vezes a imunidade s pode ser transferida com as clulas do sistema imune, da o termo imunidade celular. Os mecanismos de defesa podem tambm ser classificados em imunidade inata e imunidade adquirida.^ imunidade adquirida aquela relacionada com os linfcitos T e B que apresentam receptores Ag-especficos, e ao serem ativados pelos Ags, sofrem expanso clonal e se diferenciarem em clulas efetoras da resposta imune. Este processo relativamente lento comparado a ao efetora de molculas e clulas da imunidade inata, como o sistema complemento, fagcitos (neutrfilos e macrfagos) e clulas NK. Os linfcitos T orquestram os mecanismos de imunidade celular e humoral. Linfcitos T CD8 tm ao citotxica direta sobre clulas-alvo, enquanto os linfcitos T CD4 produzem citocinas que ativam outras clulas efetoras, como os linfcitos B e os macrfagos, dependendo do padro de citocinas produzidas. Linfcitos TH l produzem IL-2 e IFN-y. O IFN induz a atividade microbicida em

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macrfagos, como a produo de xido ntrico (NO) necessrio a destruio de microganismos intracelulares. A IL-2 promove proliferao de linfcitos e diferenciao de linfcitos T citotxicos. Linfcitos TH2 produzem IL-4, IL-5, IL-6, IL-10 e fatores de membrana que induzem a ativao, proliferao e diferenciao de linfcitos B, promovendo a sntese de Igs. As gs podem neutralizar produtos txicos microbianos, impedindo sua ao nas clulas, ou impedir a interao de vrus com receptores em clulas, bloqueando o processo de invaso (neutralizao). A imunidade adquirida potencializa os mecanismos de defesa da imunidade inata, pois as Igs ativam o sistema complemento (via clssica) e ativam a fagocitose ao se ligarem ao Ag e aos receptores de Fe nos fagcitos (opsonizao). Podem ainda mediar citotoxicidade celular dependente de anticorpo por clulas NK (ADCC). Quanto aos linfcitos T, as citocinas do tipo l induzem atividade efetora do macrofago, enquanto IL-10 e IL-4 (tipo 2) inibem a imunidade mediada pelos macrfagos. A imunidade inata tambm influencia no desenvolvimento da imunidade adquirida, pois os macrfagos e clulas dendrticas produzem IL-12 que induz a produo de IFN por clulas TH l e NK. O IFN produzido por clulas NK tambm influencia na diferenciao de clulas TH1 e inibe a proliferao de clulas TH2, influenciando negativamente a imunidade humoral. Por sua vez, o prprio microrganismo induzindo ou inibindo a produo de IL12 pode influenciar no padro da resposta imune. Fagcitos: destruio de microrganismos e dano tecidual. Macrfagos so clulas com atividade fagoctica, que tambm produzem vrias citocinas inflamatrias corno IL-12, TNF e EL-1. Ao interagirem com produtos bacterianos, como LPS, atravs de receptores de membrana, os macrfagos so ativados e produzem TNF-oc e substncias microbicidas como o xido ntrico (NO). A presena de IFN e TNF potencializa a produo de oxido ntrico devido induo de NOsintase induzida, uma enzima capaz de produzir NO a partir de L-arginina. O TNF tambm apresenta atividade citotxica sobre algumas linhagens tumorais, da a designao de fator de necrose tumoral. O IFN aumenta a capacidade de produzir intermedirios reativos de oxignio (ROIs), como o superxido, pela atividade da NADPH oxidase. Estes agentes causam dano em macromolculas dos microrganismos. O xido ntrico particularmente importante para a destruio de microrganismos que se localizam em vesculas nos macrfagos, como Mycobacterium tuberculosis e leprae e protozorios como Leishmania e Toxoplasma. Algumas vezes, no entanto, este mecanismo induz leso tissular, como na infeco pelo Mycobacterium leprae e em doenas auto-imunes como a encefalomielite experimental auto-imune, onde clulas TH l ativam macrfagos que promovem demielinizacao de neurnios, resultando em paralisia. O receptor de Fe, ao interagir com complexos Ag-anticorpos induz fagocitose e produo de NO e ROIs. A fagocitose mediada por receptores de Fe particularmente importante para microganismos encapsulados que dependem de IgG para serem fagocitados, como os pneumococos. Os neutrfilos tambm apresentam mecanismos microbicidas similares aos dos macrfagos e produzem ainda o cido hipocloroso. Citotoxicidade celular dependente de anticorpos (ADCC). Alm de mediar a fagocitose, os receptores de Fe podem promover a exocitose de grnulos citotxicos. o caso da ADCC, que pode ser mediada por clulas NK atravs do receptor de Fe de IgG ao se ligar a anticorpos que se ligam a clulas recobertas com antgenos. Os grnulos de clulas NK contm perforina, uma molcula que se polimeriza na membrana da clula-alvo, na presena de clcio, formando um poro e alterando as propriedades da membrana. Macrfagos e eosinfils tambm podem mediar ADCC. No caso dos eosinofilos, receptores de Fe de alta afinidade para IgE tambm podem causar exocitose de grnulos contendo protena bsica, capaz de induzir leses nas membranas de larvas de helmintos. Clulas citotxicas. A citotoxicidade de clulas NK pode tambm ser induzida pelo receptor das clulas NK: NKR.P1 e ativada por citocinas como IL-12 e IL-15 de macrfagos e IL2 de clulas T. No entanto, clulas NK apresentam receptores inibidores (KIR) que so ligantes de molculas de MHC classe L Este mecanismo protege clulas normais do organismo da ao de

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19 clulas NK. Nas infeces virais e em alguns casos de tumores ocorre diminuio da expresso de MHC-I e estas clulas escapam da ao de clulas T CD8 citotxicas que reconhecem o Ag associado ao MHC-I. Neste caso, no entanto, elas se tornam suscetveis ao citotxicas de clulas NK. Clulas NK tambm produzem citocinas como o IFN-y que ativa macrfagos. Linfcitos T CD8 citotxicos tambm so importantes em infeces virais e por outros microrganismos que tm acesso ao citoplasma das clulas, como Listeria monocytogenes e Trypanosoma cruzi. Antgenos endgenos se associam a molculas de classe I e ativam clulas T CD8. Clulas T CD4 podem exercer citotoxicidade em alguns casos, mas reconhecem Ags exgenos associados a molculas de MHC classe II. A importncia das clulas T CD8 como mecanismos de imunidade foi demonstrado nos modelos de infeco pelo T. cruzi, LCMV e L. monocytogenes em animais deficientes de P2 microglobulina e que em consequncia no apresentam clulas T CD 8. Estes animais no so capazes de controlar as infeces provocadas por estes agentes infecciosos e sucumbem a infeco. No caso do LCMV, a perforina contida nos grnulos citotxicos fundamental para a imunidade, tendo sido demonstrada a maior suscetibilidade de camundongos deficientes em perforina a esta infeco virai. A citotoxicidade de clulas T CD8 pode participar de processos auto-imunes, como no diabetes dependente de insulina causado pela destruio de clulas p do pncreas. Os linfcitos T dependem de 2 sinais para serem ativados: o reconhecimento do Ag pelo TCR e a presena de molculas co-estimuladoras, como B7 na APC, que interage com o receptor do segundo sinal (CD28) na clula T. Nestas condies, os linfcitos T CD8 so capazes de produzir a IL-2 necessria a sua proliferao e diferenciao. Em certos casos, a IL-2 derivada de clulas T CD4 pode compensar pelo segundo sinal necessrio ativao. Entretanto, uma vez diferenciadas, as CTLs dependem apenas do primeiro sinal para degranular no espao intercelular entre a CTL e a clula-alvo. Trabalhos clssicos de Doerty & Zinkernagel, que lhes renderam o prmio Nobel em 1996, mostraram que clulas T CD8 exercem citotoxicidade apenas na presena de antgeno apropriado e de molculas de MHC classe L A adeso intercelular tambm importante para a atividade citotxica, LFA-1 e IAM-1 ao se ligarem promovem e estabilizam a interao celular. A afinidade destes ligantes controlada por sinais ativadores veiculados pelo reconhecimento do Ag. A presena de magnsio importante para a adeso que ocorre mesmo temperatura ambiente. A atividade de perforina, entretanto, depende de clcio e ocorre a 37C. A molcula CD8 tambm interage com o MHC classe I, promove adeso e sinalizao intracelular, pela tirosina-quinase p56/cfc, associada poro intracitoplasmtica do CD8. O CD8 considerado como co-receptor. A ativao da CTL leva reorganizao do citoesqueleto e polarizao das vesculas e do centro organizador de microtbulos em relao ao stio de interao intercelular. Desta forma, clulas inocentes (que no expressam o Ag) so poupadas da ao das CTLs. As prprias CTLs so resistentes ao dos grnulos. Nestes grnulos, esto presentes perforina e granzimas, serinoproteases indutoras de apoptose. Clulas que morrem de apoptose apresentam a cromatina condensada, fragmentao de DNA e alteraes de membrana que promovem sua fagocitose por macrfagos. CTLs apresentam outro mecanismo indutor de apoptose. Quando ativadas elas expressam Fas-L que interage com um receptor de morte, o Fas em determinadas clulas-alvo, como os hepatcitos. Linfcitos B e T ativados expressam Fas e podem ser alvos deste mecanismo, que participa da regulao da resposta imune. Clulas T CD4 ativadas tambm expressam Fas-L e podem matar clulas-alvo que expressem Fas. O TNF produzido por linfcitos T apresenta atividade citotxica para determinadas clulas-alvo. 9 - O Sistema Complemento (anexo I) O sistema complemento um conjunto de protenas sintetizadas principalmente no fgado, cujas funes biolgicas so importantes na imunidade inata e que tambm "complementam" a imunidade adquirida, da o nome complemento. Na imunidade adquirida, o sistema complemento

20 ativado por complexos Ag-anticorpos (IgM ou IgG), que a via clssica de ativao do complemento. O sistema complemento pode ser ativado na ausncia de anticorpos, na via alternativa, ou ainda auxiliado por lectinas, ambos processos esto associados imunidade inata. Em qualquer caso, so ativadas importantes funes biolgicas, como a induo de inflamao, opsonizao de microrganismos, eliminao de patgenos atravs de fagocitose ou pela ao dos complexos lticos do complemento. Via clssica - A via clssica se inicia com a ativao de molculas do complemento por complexos Ag-Ac e se completa com a formao de complexos lticos na superfcie de um patgeno. Seus componentes so designados pela letra C e nmeros, sendo o primeiro denominado Cl e o ltimo C9. O componente Cl na verdade um complexo de 3 protenas: C l q, que se liga ao complexo Ag-Ac atravs de estruturas que se associam poro Fe das Igs, C Ir e Cls que apresentam funes enzimticas. Ao se associar a Ags na superfcie de patgenos, as molculas de IgM sofrem uma mudana de conformao que propicia a ligao do Clq aos domnios CHS da IgM pentamrica. Duas ou mais molculas de de IgG devem se ligar a Ags prximos para propiciarem a ligao do Clq aos domnios CH2 destas molculas. Nesses casos, ocorre ativao do Clr (autocatlise), que cliva Cls, ativando sua funo enzimtica de serino-protease.... Cls cliva o componente C4 em um componente maior, que se associa superfcie do patgeno, o C4b e um componente menor C4a, que apresenta alguma atividade inflamatria. Em seguida, o componente C2 tambm clivado por Cls, liberando C2a, enquanto C2b (associado ao C4b) apresenta atividade de serino-protease, sendo denominado C3 convertase. A C3 convertase cliva C3 em C3a, que inicia uma resposta inflamatria local, e C3b, que se liga superfcie celular. Muitas molculas de C3b so produzidas e favorecem a opsonizao por fagcitos (neutrfilos, macrfagos que apresentam receptores CRI e CR3 para complemento), que so capazes de destruir os microrganismos fagocitados. Algumas molculas de C3b se associam ao complexo C4bC2b, formando C4b,2b,3b, uma C5 convertase. Molculas de C5 se ligam ao C3b e so clivados por C2b, liberando C5a, o mais potente dos componentes inflamatrios e C5b, que inicia a polimerizao dos componentes lticos. Complexo de ataque membrana - C6 se liga ao C5b, formando um aceptor para C7, que se insere na membrana, atravs de sua poro hidrofbica. C8 se liga ao complexo e tambm se insere na membrana e permite a polimerizao de 10 a 15 molculas de C9, formando um poro na membrana, com um interior hidroflico (similar a perforina). Estes poros destroem o equilbrio no transporte de ons na membrana, causando a entrada de gua e enzimas (lisozima), levando destruio do microrganismo. Este mecanismo particularmente importante na imunidade s bactrias do gnero Neisseria, e pessoas deficientes dos componentes C5-C8 (que independente de C9 apresentam atividade ltica) so mais suscetveis a estes microrganismos. J os primeiros componentes so importantes na imunidade a uma srie de bactrias, particularmente porque favorecem fagocitose e inflamao. C3a e C5a so anafilotoxinas, que agem diretamente sobre os vasos sanguneos, aumentando sua permeabilidade e o extravasamento de lquidos nos tecidos, aumentando o afluxo de anticorpos, complemento e fagcitos (atividade quimiottica). C5a tambm induz a degranulao de mastcitos, que por sua vez libera substncias vasoativas como a histamina e inflamatrias, como TNF-a. Via alternativa - A via alternativa de fixao do complemento apresenta duas funes bsicas: uma resposta inata imediata na ausncia de anticorpos, e a amplificao da via clssica, na presena de anticorpos. O componente C3 pode iniciar a cascata da via alternativa, pois instvel e apresenta clivagem espontnea em C3a e C3b. Esta clivagem expe uma ponte tio-ster interna, permitindo sua ligao covalente a superfcie de microrganismos ou clulas. Na superfcie da clula o C3b, gerado espontaneamente ou pela via clssica, se liga ao fator B e clivado pela protease fator D, gerando C3bBb, a C3 convertase da via alternativa. O Fator P estabiliza a C3 convertase, que produz muitas molculas de C3b e leva s mesmas consequncias da via clssica: opsonizao,

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liberao de C3a (inflamao), associao ao C3b, formando a C5 convertase (C3b2Bb). A partir deste ponto, as duas vias convergem com a formao de C5a, C5b e polimerizao dos componentes C6-C9. Via da lectina - Protenas de fase aguda so produzidas pelos hepatcios sob a ao de IL1, TNF-a e IL-6 e fazem parte da imunidade inata. Duas destas substncias, embora invariveis, imitam os anticorpos na sua capacidade de ativar o sistema complemento. A protena C reativa e a protena que se liga a manose agem como lectinas, pois so capazes de se ligarem a carboidratos comuns na superfcie de microganismos. Alm de agirem como opsoninas, elas ativam MASP, uma serina protease que cliva C4, exaamente como Cls da via clssica e portanto compartilham as mesmas consequncias. Regulao - Os efeitos do sistema complemento nas prprias clulas do organismo seriam desastrosos, e portanto, rigorosos mecanismos de controle so necessrios para evitar tais efeitos. Vrias protenas regulatrias tm sido descritas e elas atuam nas diferentes fases de ativao do sistema complemento. Uma das etapas mais reguladas a formao da C3 convertase da via alternativa, uma vez que o C3 inicia sua ativao espontaneamente. O C3b pode ser hidrolizado, se no se ligar a nenhuma superfcie, e se ligar a uma clula pode se ligar ao fator B e induzir sua clivagem por D. Superfcies microbianas favorecem a ligao do fator P que ativa e estabiliza a C3 convertase C3b,Bb. Nas clulas, na ausncia do fator P, varias protenas podem se ligar e deslocar C3b de Bb, como o receptor de complemento CRI, o DAF, MCP e uma protena srica, o fator H. Nestas condies, o fator I pode inativar o C3b em C3bi.Alguns microrganismos podem apresentar resistncia ao sistema complemento como, p.e., as formas infectivas do T. cruzi, que tem uma molcula semelhante ao DAF. A via clssica tambm pode ser regulada pela protena plasmtica C1INH que desloca ClnCls de Clq. Na C3 convertase da via clssica, C2b,C4b, o C4b pode ser deslocado pela C4bp ou pelo DAF, que se ligam e competem pelo C4b, que ento inativado pelo fator I. Finalmente, o CD59 impede a formao do complexo de ataque a membrana. A falta de DAF e CD59 gera a doena hemoglobinria paroxstica noturna, caracterizada pela destruio de hemcias. Por outro lado, a deficincia dos fatores iniciais da via clssica de ativao do complemento (Cl, C2 e C4) causa doenas relacionadas a deposio de complexos Ag-Ac nos glomrulos, como Lpus eritematoso sistmico. O complemento importante para solubilizao e remoo de complexos Ag-anticorpos e de clulas apoptticas que so fagocitados por macrfagos atravs dos seus receptores de complemento. 10- Inflamao (anexo II) A inflamao um fenmeno que resulta do aumento no afluxo de componentes moleculares e celulares do sangue para os tecidos e caracterizada por 4 sinais caractersticos: rubor, calor, edema e dor. A inflamao um componente importante tanto na imunidade inata como na imunidade adquirida para focalizar os mecanismos de imunidade e reparo ao local da infeco ou leso. Por outro lado, a inflamao pode levar destruio tecidual, principalmente se cronificar nos tecidos. Funes dos mediadores da inflamao. So inmeros os mediadores da inflamao. Eles agem basicamente atravs dos seguintes mecanismos: l- A.CJO vasoativa - Induzem vasodilatao, aumentando a capacidade volumtrica dos vasos (mais sangue circula em menor velocidade, e os componentes celulares se aproximam da parede do vaso ). Aumentam a permeabilidade, permitindo o extravasamento de plasma (afluxo de complemento, imunoglobulinas). 2 - Induo de mfilgcjilas dg adeso no endoilk e nos -leuccitos -Permite a adeso e a passagem dos componentes celulares do sangue atravs da parede do vaso ( entre as clulas endoteliais ).

22 3- AP quimioffiiqa - Focalizam os leuccitos nos stios afetados. Agem no endotlio e nos tecidos. 4- AHiaQ doj leuccitos e outras clulas -Induz fagocitose e liberao de substncias capazes de destruir os microrganismos e causar dano e regenerao dos tecidos. 5- Aumgnto da produo ds-Jeuccitos na_,medula ssea - Muitos mediadores da inflamao apresentam vrias destas funes combinadas. E as clulas inflamatrias so capazes de produzir diversas substncias com atividade inflamatria. Ao inflamatria do sistema complemento- O sistema complemento pode ser ativado de 3 maneiras diferentes: Na via clssica, atravs de complexos Ag-Ac, na via alternativa pela interao com superfcie de patgenos, ou atravs de lectinas produzidas pelo fgado, em situaes onde j ocorre inflamao. Em qualquer caso, so produzidas substncias que causam o recrutamento de clulas inflamatrias. Principalmente C3a e C5a podem agir diretamente no endotlio, aumentando a permeabilidade vascular. C5a pode se ligar ao receptor C5aR de macrfagos e neutrfilos e tem funo quimiottica e ativadora. Basfilos e mastcitos tambm apresentam receptores para C3a e C5a e so ativados por estes componentes, liberando substncias vasoativas e inflamatrias. A deposio de complexos Ag-Ac nos tecidos pode causar ativao de complemento e atividade inflamatria deletria nestes tecidos. O papel de mastcitos e basflos na inflamao - Como dito anteriormente, os mastcitos e basflos podem ser ativados por componentes do sistema complemento. Na imunidade adquirida estas clulas so ativadas por molculas de IgE que se ligam ao FcsRI ( de alta afinidade) e so agregadas pela ligao com antgenos multivalentes. Nestas condies so liberados os constituintes dos grnulos, entre estes a histamina, um poderoso agente vasoativo e que tambm induz contrao de msculos lisos. A histamina age atravs do receptor Hl no endotlio vascular e nos msculos lisos e apresenta, em geral, um efeito local dramtico na permeabilidade vascular e induo de inflamao. Os mastcitos tambm produzem mediadores lipdicos como prostaglandinas e leucotrienos que apresentam atividade vasoativa e quimiottica para granulcitos. Alm disso, IL-4 e TNF-ct, so liberados e contribuem para o aumento de molculas de adeso no endotlio, entre outras aes que sero discutidas mais adiante. Neutrfilos na inflamao aguda - Os neutrfilos so as primeiras clulas recrutadas na inflamao e apresentam importantes atividades fagoctica e bactericida ativadas atravs de complexos Ag-Ac que se ligam aos seus receptores de Fe ou Ag-Ac-C (C3R) e permitem a intemalizao de partculas. No interior das vesculas formadas, as bactrias so destrudas por mecanismos oxidativos que geram radicais superxido, cido hipocloroso, perxido de hidrognio, xido ntrico, alm de enzimas, como proteases. Dano tecidual tambm pode resultar dos produtos dos neutrfilos. Moncitos/macrfagos e citocinas - Nos tecidos, os moncitos se diferenciam em macrfagos que como os neutrfilos, so fagcitos que fazem parte da imunidade inata. Os macrfagos interagem com produtos microbianos diretamente atravs de receptores, como o receptor de LPS e o receptor de manose, ou indiretamente, com auxlio de anticorpo e C, atravs dos receptores de Fe e C. Alm de exercerem atividade fagoctica e bactericida, os macrfagos so ativados atravs dos mesmos receptores a secretarem citocinas. Estas citocinas, principalmente ILl, IL-6 e TNF-a apresentam grande potencial inflamatrio e agem como pirgenos endgenos ao nvel do hipotlamo, causando febre e, mobilizam reservas energticas nos tecidos adiposo e muscular. Tambm induzem a resposta de fase aguda no fgado, levando produo das protenas de fase aguda, entre elas a protena C reativa e a protena que liga manose (MBP), que agem como opsoninas, facilitando a fagocitose e ativam o sistema complemento, causando mais inflamao. Ao nvel local o TNF-a induz um aumento da permeabilidade vascular. TNF-a e IL-1 induzem a expresso da ICAM-1, VCAM-1 e E-selectina no endotlio, favorecendo a aderncia de leuccitos, mediada por glicoprotenas contendo sialil-Lewis que se ligam E-selectina no endotlto e a

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interao de integrinas como LFA-1 que ao interagir com ICAM-1 no endotlio promove adeso e diapedese atravs das clulas endoteliais. O TNF-a tambm pode provocar coagulao intravascular limitando o stio da infeco. A ativao disseminada de macrfagos pode provocar choque e morte, justamente pelos efeitos do TNF nos vasos sanguneos (meningite meningoccica, dengue). A IL-12 produzida por macrfagos e clulas dendrticas, importante na ativao de clulas NK e clulas T CD4 inflamatrias, ambas produtoras de IFN-y, um potente ativador de macrfagos, potencializando a inflamao. Quimiocinas - A IL-8, induzida por TNF e IL-1, faz parte do grupo das quimiocinas que podem ser considerados como importantes fatores quimiotticos. H 2 grupos de quimiocinas, CC e CXC, dependendo se estes pptides possuem as primeiras 2 cistenas vizinhas ou separadas por l aminocido. A IL-8 (CXC) quimiottica para neutrfilos e clulas T, ativa as integrinas LFA-1 e CR3 que aumentam a afinidade pelo ICAM-1, favorecendo a adeso, e produzida por macrfagos e moncitos, fibroblastos e queratincitos. MCAF , fator quimiottico e ativador de macrfago (CC) responsvel pela migrao dos moncitos para os tecidos, onde eles se diferenciam em macrfagos. MCAF tambm exerce efeito quimiottico para clulas T. Clulas T produzem a quimiocina RANTES (CC), quimiottica para macrfagos e clulas T de memria, aumentando a expresso de molculas adesivas como VLA-4, que interage com VCAM-1 no endotlio inflamado, facilitando sua entrada no tecido afetado. Linfcitos inflamatrios e regulatrios - Clulas T CD4 TH l, quando ativada pelo Ag, apresentado por APCs como os macrfagos, tambm liberam outras citocinas, como TNF-a, TNF~p e IFN-y que por sua vez ativam os macrfagos, aumentando sua capacidade microbicida e seu potencial inflamatrio. Clulas T CD4 TH l participam do processo de formao dos granulomas, que ocorre quando uni microrganismo resiste no interior dos macrfagos e a infeco se toma crnica. O granuloma limita o espalhamento do patgeno e formado por clulas T e macrfagos ativados. Linfcitos T CD8 e clulas NK, alm da capacidade citotxica, tambm produzem IFN-y. Os dois subtipos de clulas T CD4 (TH1 e TH2) produzem IL-3 e GM-CSF, que induzem a produo de granulcitos e moncitos na medula ssea, que so mobilizados durante o processo inflamatrio. Por outro lado, clulas T CD4 do tipo 2 (TH2) produzem IL-4 e IL-1O, que exercem atividade desativadora sobre macrfagos e so portanto anti-inflamatrias. A IL-10 tambm produzida por macrfagos, que possuem, portanto, atividade auto-regulatria. Um terceiro subtipo TH3 produz TGF-(3, outro fator anti-inflamatrio. Finalmente, uma quarta subpopulao, gerada no timo, composta das clulas T CD4 regulatrias (reg), que produzem IL-10 e TGF-(3, protegem contra doenas auto-imunes. 11- Resposta imune infeco A interao do sistema imune do hospedeiro com os agentes infecciosos um dos assuntos mais fascinantes e complexos de biologia e medicina, e demanda conhecimentos nas reas de imunologia e microbiologia. A eficincia da estratgia de defesa do organismo tambm depende do comportamento biolgico do microrganismo e de suas prprias estratgias de invaso, patognese e evaso ao sistema imune do hospedeiro. Microrganismos extracelulares como muitas bactrias e vrus citopticos que liberam suas partculas no meio extracelular, so mais eficientemente combatidos pelo sistema imune, podendo ser eliminados totalmente em muitos casos. Bactrias intracelulares, vrus no citopticos e protozorios patognicos em geral, s so eliminados parcialmente ou apenas controlados pelo sistema imune, gerando enfermidades crnicas, nas quais um dos componentes geradores de patologia o prprio sistema imune destruindo clulas infectadas. A fagocitose de microrganismos por fagcitos, os anticorpos e suas inmeras aes efetoras e o sistema complemento com seu potencial lrico e inflamatrio constituem as principais armas do

24 sistema imune no combate s infeces provocadas por agentes infecciosos extracelulares, ou de substncias txicas liberadas por estes. A atividade anti-viral mediada por citocinas que interferem com a replicao virai, denominadas interferons, enquanto no meio extracelular, anticorpos neutralizantes bloqueiam o processo de adeso do vrus e sua intemalizao pelas clulas. A destruio de vrus no citopticos depende da expresso de antgenos virais na superfcie da clula em associao com molculas do complexo principal de histocompatibilidade (MHC) classe I, cuja presena detectada por receptores Ag-especficos dos linfcitos T CD8 citotxicos. Quando a infeco virai inibe a expresso de MHC I, as clulas infectadas se tomam alvo de clulas Natural Killer (NK). Bactrias e protozorios intracelulares de localizao intracitoplasmtica tambm so combatidos por clulas T CD8 (CTLs). Alguns agentes infecciosos, no entanto, se alojam preferencialmente no interior de vesculas de fagcitos e sua eliminao ou controle depende de clulas T CD4 capazes de liberar linfocinas que ativam os mecanismos microbicidas dos fagcitos, particularmente a produo de xido ntrico e de intermedirios reativos do oxignio. Portanto, dizemos que estas categorias de patgenos intracelulares dependem de imunidade celular, enquanto a atividade imune mediada por anticorpos denominada de imunidade humoral. Apesar de permitir algumas generalizaes, o estudo dos mecanismos de imunidade aos agentes infecciosos exige uma anlise cuidadosa das particurlaridades inerentes a cada microrganismo, assim como daquelas relacionados com caractersticas genticas, individuais, espcie-especficas de cada hospedeiro. Por razes bvias, modelos animais so utilizados, quando possvel, no estudo da imunidade aos patgenos humanos. Neste caso, os conhecimentos obtidos podem ou no ser utilizados no entendimento da patologia humana, mas certamente contribuem para a compreenso do papel do sistema imune nas interaes com os agentes infecciosos. Microrganismos no meio extracelular - O contato com microrganismo ocorre atravs das superfcies do organismo voltadas para o meio exterior: pele e mucosas. A integridade da pele e a presena de uma flora microbiana competitiva so importantes barreiras invaso microbiana. A produo e exportao de anticorpos IgA para as mucosas previne o estabelecimento de infeces nos tratos respiratrio, gastro-intestinal e genito-urinrio. Estas infeces ocorrem em indivduos seletivamente deficientes de IgA, uma das sndromes de imunodeficincia mais frequentes na populao humana. O potencial patognico de algumas bactrias como Clostridium tetani e Corynebacterium diphteriae est relacionado secreo de substncias txicas para as clulas do hospedeiro, as exotoxinas, que so impedidas de interagir com os receptores celulares ao se ligarem a anticorpos neutralizantes. A produo de anticorpos depende de uma srie de interaes celulares e portanto no imediata. Os antgenos microbianos so intemalizados por clulas dendrticas que migram para os rgos linfdes, onde ativam clulas T CD4. As clulas T CD4 auxiliadoras ativadas expressam molculas de superfcie e secretam citocinas tipo 2 (IL-4,-5,-6,-10) que interagem com receptores nas clulas B antgeno-especficas e promovem sua diferenciao em clulas secretoras de anticorpos, os plasmcitos. A vacinao prvia com toxides (toxinas inativadas) ou com microrganismos atenuados ou inativados promove a sntese de anticorpos, dando uma vantagem temporal aos indivduos imunizados em relao ao patgeno. Fagcitos profissionais, os neutro fils e macrfagos constituem um importante mecanismo de defesa s infeces bacterianas. Ativados por produtos microbianos, eles so capazes de fagocitar e destruir os microrganismos atravs da produo de enzimas e intermedirios reativos de oxignio e nitrognio, como o perxido de hidrognio e o xido ntrico, respectivamente. A atividade fagoctica e microbicida pode ser potencializada pela opsonizao com anticorpos e complemento (ligados aos antgenos microbianos) que so captados pelos receptores de Fe (FcR) de IgG e receptores de complemento (CRI, CR3) dos fagcitos. Quando ativados, os macrfagos so tambm capazes de liberar citocinas inflamatrias como TNF e IL-1 que, atravs da induo de molculas de adeso e outras alteraes no endotlio, aumentam o recrutamento de vrios

25 componentes celulares do sistema imune para os tecidos. Alguns produtos de bactrias gramnegativas, como o LPS ou endotoxina apresentam grande potencial de ativar diretamente os macrfagos atravs do CD 14, um receptor associado a uma molcula iniciadora de sinalizao intracelular do tipo Toll. Os receptores tipo Toll pertencem a um grupo de receptores especializados no reconhecimento de padres caractersticos de determinados grupos de patgenos. Quando uma bactria gram-negativa atinge a circulao causando septicemia (p.e. a Neisseria meningitidis), a maior parte dos efeitos deletrios podem ser provocados pela ativao de macrfagos pela endotoxina liberada de bactrias lisadas, e liberao de TNF que induz choque e coagulao intravascular disseminada. Quando localizados, estes efeitos ajudam a limitar o processo de invaso do microrganismo, impedindo-o de atingir a corrente sangunea. O sistema complemento multifuncional e pode ser ativado diretamente pelo microrganismo, no caso da via alternativa ou atravs de complexos antgeno-anticorpo pela via clssica. Ou ainda, protenas de fase aguda (as lectinas protena C reativa e MBP) produzidas pelo fgado sob a ao de TNF, IL-1 e IL-6 podem reagir com carboidratos na superfcie dos microrganismos e ativar o sistema complemento (via das lectinas), alm de agirem como opsoninas, mediadoras de fagocitose. Em qualquer caso, so produzidas molculas como o C3b e seu produto metablico iC3b que agem como opsoninas ao se ligarem aos receptores de complemento nos fagcitos e promovem a remoo de complexos Ag-Ac. C3a e C5a, produtos de clivagem do complemento, so anafilotoxinas e aumentam o processo inflamatrio. Finalmente, a polimerizao dos componentes finais, comuns s 3 vias de ativao do complemento, leva formao de complexos de ataque membrana, formando um poro com atividade ltica na superfcie dos microrganismos. As bactrias do gnero Neisseria so particularmente suscetveis a este mecanismo de destruio pelo complemento. Deficincias genticas nos componentes especficos da via alternativa e nos componentes finais do sistema complemento resultam no aumento da sucetibilidade s infeces por Neisseria meningitidis e Neisseria gonorrheae. Outros microrganismos como o Streptococcus peneumoniae no ativam eficientemente a via alternativa do complemento e apresentam cpsulas que interferem com a fagocitose. No entanto, na presena de anticorpos especficos para carboidratos capsulares, eles podem ser ativamente fagocitados e destrudos, e a deposio de complemento facilita a opsonizao. Em consequncia, a deficincia de C3b ou de componentes especficos da via clssica (ativada por Ac) ou ainda na produo de Ac, leva suscetibilidade a uma gama de microrganismos piognicos, incluindo Staphlococcus aureus. Deficincias nos mecanismos microbicidas de fagcitos podem causar a cronificao de doenas infecciosas normalmente combatidas pelos fagcitos, como no caso da doena granulomatosa crnica. Deficincias na expresso de molculas de adeso como LFA-1 e integrinas relacionadas, dificultam a chegada e ao dos fagcitos nos stios inflamados. Alguns produtos microbianos como carboidratos polivalentes so capazes de interagir com clulas B e em determinadas situaes induzir a produo de anticorpos de uma maneira independente de clulas T. Estes mecanismos representam um curto-circuito do processo mais demorado mediado por clulas T auxiliadoras e devem ser importantes na proteo durante a fase inicial das infeces. Alm disso, existe uma subpopulao de clulas B, as clulas B CD5+ ou B-1 que se localizam na cavidade peritoneal e produzem anticorpos que reagem preferencialmente com carboidratos. Estes mecanismos, no entanto, no induzem memria imunolgica e sua atuao permanece idntica a cada nova estimulao ou re-infeco. Ao contrrio, antgenos proteicos se associam a molculas de MHC classe II e so apresentados por clulas B s clulas T CD4. Atravs da influncia da clulas T, as clulas B sero capazes de proliferar e mudar o isotipo de imunoglobulina secretado. Inicialmente elas produzem IgM (mais eficiente na fixao de complemento), depois produzem IgG (ativa complemento, funciona como opsonina e atravessa a placenta). Durante o processo de proliferao, o gene das Igs sofre o processo de hipermutao somtica e as clulas B que expressarem Igs com maior afinidade captam o Ag com maior eficincia e interagem com clulas T e clulas foliculares dendrticas nos centros germinativos.

26 Estas interaes protegem da morte por apoptose e garantem a sobrevivncia da clula B, que se transforma em clula B de memria. A memria imunolgica o aumento do potencial de reaao do sistema imune re-estimulao, seja pelo aumento dos precursores Ag-especfcos (B e T), gerao de anticorpos de maior afinidade e aumento da capacidade efetora representada pelas clulas de memria. Alguns microrganismos escapam da memria imunolgica atravs da variabilidade gentica. Diversos tipos de Streptococcus pneumoniae apresentam diferentes poissacardeos capsulares. Em consequncia, os anticorpos que efetivamente opsonizam uma cepa, no imunizam contra uma nova infeco com outra cepa. A cada infeco, o processo se inicia e depende de um sistema imune funcional. Recm nascidos, cuja imunidade depende basicamente dos anticorpos recebidos da me, via placenta e do leite materno, pois apresentam o sistema imune imaturo, e idosos com sistema imune deficiente, so especialmente sensveis s pneumonias pneumoccicas. Outros microrganismos extracelulares como Treponema pallidum, escapam do sistema imune cobrindo sua superfcie com molculas do hospedeiro, e escondendo assim seus prprios antgenos. Outra estratgia de eliminao da memria ocorre quando o S. aureus produz exotoxinas que agem como superantgenos e estimulam exaustivamente uma grande proporo de clulas T (at 20%), que proliferam e morrem de apoptose. Clulas T que possuem receptores contendo uma determinada cadeia Vp so eliminadas e portanto no h gerao de memria. Em outros casos, os prprios anticorpos produzidos durante a infeco podem mediar patologia. Na infeco pelo Streptococcus pyogenes, a deposio de complexos antgeno-anticorpos e fixao de complemento nos glomrulos renais, provoca inflamao e destruio tissular. O mimetismo molecular entre antgenos cardacos e estreptoccicos tambm apresenta potencial patognico. Alm disso, infeces por Klebsiella e Yersinia tm sido frequentemente associadas induo de espondilite anquilosante em indivduos que expressam determinada molcula de MHC ou outros componentes genticos de suscetibilidade. Microrganismos intracelulares nas vesculas - Algumas bactrias no so inicialmente destrudas por fagcitos e se multiplicam no interior de vesculas, no compartimento celular. o caso das micobactrias, Mycobacterium tuberculosis e M. leprae, que persistem no interior de macrfagos. Nestes casos, a eliminao do microrganismo depende da ativao efetiva do macrfago, mediada pelas citocinas IFN-y e TNF-ct, que ativam os mecanismos microbicidas como a produo de xido ntrico. A presena da micobactria induz a produo de IL-12 pelo macrfago. A IL-12 o principal mecanismo de induo da produo de IFN-y por clulas T CD4 do tipo l (Thl) ou inflamatria. A IL-12 tambm ativa os mecanismos citotxicos de clulas NK e T CD8, que por sua vez tambm produzem IFN-y. As clulas NK so componentes da imunidade inata e sua atuao importante no incio da infeco, antes do estabelecimento da imunidade adquirida, antgeno-especfica. Por outro lado, o IFN-y produzido por estas clulas tambm favorece a diferenciao de clulas T CD4 TH1, influenciando o perfil da imunidade adquirida. Linfcitos e macrfagos ativados liberam suas citocinas inflamatrias, incluindo quimiocinas que recrutam mais clulas ao stio inflamatrio, e mais uma vez, os mecanismos de imunidade tambm podem provocar dano tecidual. Um delicado equilbrio se estabelece entre a proteo que limita a disseminao do microrganismo, e o efeito deletrio dos mecanismos protetores. Nos casos em que o microrganismo resiste, ocorre formao de granulomas, contendo macrfagos e linfcitos, mas na ausncia destes mecanismos, como ocorre na SIDA, frequentemente as infeces por micobactrias se tornam disseminadas. Clulas T CD4 Th2 responsveis pela colaborao T-B na produo de anticorpos tambm apresentam atividade regulatria. Clulas TH2 secretam a citocina IL-10 (tambm produzida por macrfagos e clulas B CD5) e a IL-4, ambas com efeitos inibidores das funes macrofgicas. IL10, IL-4 e TGF-P tambm inibem a produo de IL-12 e desta maneira diminuem a resposta TH1. O IFN-y, por sua vez inibe clulas TH2. Em consequncia dessa regulao recproca, frequentemente um tipo de resposta diminui, cedendo o predomnio ao outro tipo, o que chamamos

27 de polarizao. Enquanto a presena de IL-12 e IFN favorecem respostas TH1 e induz resistncia a determinados microrganismos, as citocinas IL-4 e IL-10 favorecem a resposta TH2 e a susceptibilidade a infeces. Mastcitos e clulas T CD4 NK podem ser responsveis pelo aporte inicial de IL-4 na induo da resposta Th2. No caso de pacientes com hansenase, ocorre polarizao da doena nos poios tuberculide e lepromatosa (ou disseminada) associados presena de citocinas do tipo l e 2, respectivamente. Ainda por motivos no esclarecidos, alguns pacientes desenvolvem uma resposta do tipo 2 que regula negativamente a resposta tipo l que limita a infeco. Em modelos animais, a depleo de citocinas atravs de anticorpos nos ajuda a entender os mecanimos de imunidade. Por exemplo, a depleo de citocinas anti-inflamatrias, como TL-4, IL-10 ou TGF-p\m animais suscetveis e a depleo de IL-12, IFN-y e TNF-oc em animais resistentes, inverte o padro de suscetibilidade infeco por protozorios, como Leishmania e T. cruzi. Microrganismos no citoplasma - A Listeria monocytogenes uma bactria que escapa ao compartimento vesicular dos macrfagos, atravs da produo de uma hemolisina, a Listeriolisina O, que forma poros na membrana do vacolo. No citoplasma, a Listeria capaz de se multiplicar e polimerizar os filamentos de actina da clula hospedeira formando um pseudpodo que envolvido e fagocitado por outro macrofago. Desta forma, ela escapa dos efeitos de anticorpos e complemento. No entanto, a presena da Listeria e seus antgenos no citoplasma, permite a apresentao de Ags em molculas de MHC classe I para linfcitos T CD8. A atividade citotxica de linfcitos T CD8 mediada por 2 mecanismos diferentes. A perforina, citolisina formadora de poros age na membrana celular, alterando sua fisiologia enquanto outras substncias tambm presentes nos grnulos citotxicos (granzimas) induzem apoptose da clula infectada. O linfcito T CD8 tambm expressa Fas-L, que capaz de induzir apoptose de clulas-alvo expressando Fas, um dos receptores de morte da famlia do receptor de TNF. Experincias feitas em camundongos deficientes de clulas T CD 8 ou de perforina revelam que este mecanismo mais importante no combate infeco por Listeria monocytogenes. A destruio do microrganismo atravs da ativao de macrfagos por IFN-y tambm importante. Clulas NK e y tambm so protetoras nas infeces por Listeria. Em concluso, o sistema imune lana mo de diversas estratgias para conter os patgenos, a eficcia de cada mecanismo depende da biologia do microrganismo e de seu poder de evadir-se s defesas do organismo. Os vrus e alguns protozorios patognicos so parasitas intracelulares obrigatrios. Baseado no seu efeito sobre as clulas do hospedeiro, os vrus so classificados como citopticos ou no citopticos. Os vrus citopticos lisam a clula ao final do ciclo ltico e invadem novas clulas a partir de receptores de membrana. Muitos destes receptores so molculas que participam da resposta imune: CD4 (HIV), IAM-1 (rinovirus), CD21 (EBV), CD46 (vrus do sarampo). Anticorpos neutralizantes (em geral IgG e IgA) so geralmente eficientes no combate dos vrus citopticos, e as vacinas anti-virais geralmente induzem este tipo de resposta, gerada normalmente durante as infeces virais. No caso dos vrus no citopticos, as clulas infectadas so destrudas pelo sistema imune, que o maior responsvel pela patologia, por exemplo, na hepatite B. Um modelo de vrus no citoptico bastante estudado a infeco pelo LCMV (vrus da coriomeningite linfocitria) em camundongos. A injeo do vrus intracerebral provoca uma resposta imune mediada por clulas T que destroem clulas no sistema nervoso. Em camundongos deficientes de clulas T, a infeco benigna e no h meningite. As infeces com vrus no citopticos raramente induzem imunidade estril, mas h controle dos nveis virais pela ao combinada de clulas T CD8 citotxicas e IFN tipo I. No caso do LCMV, a imunidade depende da produo de perforina pelas clulas T CD8 e independente da presena de clulas T CD4. Outros aspectos da infeco pelo LCMV nos ensinam sobre imunorregulao. Animais transgnicos com linfcitos T contendo TCR reativo com um peptdeo virai apresentado por molculas de MHC classe I, ao serem infectados com doses crescentes de vrus revelam diferentes situaes. Doses intermedirias de vrus geram imunidade

efetiva e memria mediadas por clulas T CD8. Em altas doses de vrus ou de peptdeo virai, no entanto, as clulas T vrus especficas sofrem um processo de exausto clonal (proliferao, seguida de diferenciao terminal em clulas efetoras), sendo eliminadas por apoptose. Este mecanismo se assemelha aos fenmenos de tolerncia de alta dose e podem de fato ocorrer em doenas infecciosas.
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12 - Imunodeficncia Algumas deficincias imunolgicas so adquiridas, resultantes da desnutrio ou da administrao de drogas imunossupressoras como a ciclosporina, usada para evitar a rejeio de transplantes. Outras so causadas por agentes infecciosos como o H IV, Vrus da Imunodeficincia Humana. Discutiremos a seguir, os mecanismos imunolgicos deficientes em algumas imunodeficincias primrias (de origem gentica) e na infeco pelo H IV. 1. XLA ou Agamaglobulinemia ligada ao cromossoma X. Esta imunodeficincia causada por um defeito na maturao do linfcito B, clula produtora de anticorpos. A ausncia de clula B resulta em deficincia na produo de imunoglobulinas que na eletroforese se concentram na frao y do soro, da o nome agamaglobulinemia. As imunoglobulinas so importantes na neutralizao de produtos microbianos, como as exotoxinas e na inibio da penetrao nas clulas, de microrganismos que interagem com seus receptores. Alm disso, as Igs fixam complemento que leva formao de complexos lticos lesivos ao patgeno, ou ainda Ig e complemento facilitam a fagocitose de microrganismos. A ausncia de Igs est frequentemente associada a infeces bacterianas persistentes. O defeito na maturao da clula B originada da falta de BTK, uma enzima que provavelmente participa da sinalizao gerada pelo receptor BCR da clula pr-B, formado pela cadeia pesada ^ e a pseudo-cadeia leve. Camundongos XID tm clulas B, pois o defeito da BTK no no stio cataltico. No entanto, eles no tm clulas B CD5+ ou BI. 2. Outra imunodeficincia ligada ao cromossoma X a falta da cadeia y do receptor da IL-2, que leva deficincia de maturao de linfcitos T e B, alm de defeitos de ativao, causando uma imunodeficincia severa combinada (SCHD). A cadeia y compartilhada por vrios receptores de citocinas, como IL-15, IL- 7, IL-4, IL-9 e IL-2. O defeito na maturao parece ser causado pela falta de sinalizao via IL-7, que importante no desenvolvimento de linfcitos T e B. Sua ausncia, no entanto, causa mais impacto na maturao de linfcitos T. Camundongos deficientes de IL-7 ou de JAK l e 3, molculas sinalizadoras ativadas pelo receptor da IL-7, apresentam fentipo similar. Alm de deficincias associadas falta de Igs, ocorrem deficincias de imunidade celular, devido falta de linfcitos T produtores de citocinas (CD4+) e de linfcitos T citotxicos CD8+ , resultando em infeces oportunistas. 3. Na sndrome da Hiper-IgM, linfcitos B e T esto presentes, mas no colaboram entre si. A diferenciao de linfcitos B em clulas produtoras de anticorpos depende de fatores solveis, como as citocinas e fatores de membrana da clula T. O principal fator de membrana presente na clula T ativada o CD40-L ou ligante de CD40. Ao interagir com o CD40 na clula B, este ligante induz proliferao e mudana dos isotipos de Ig, de IgM para outros isotipos (IgA, IgE, IgG) dependendo das citocinas presentes. Os isotipos esto associados a diferentes funes efetoras, p.e., IgM e IgG fixam complemento, mas s a IgG se fixa aos receptores de Fe dos fagcitos. Na sndrome de hper-IgM, os outros isotipos esto deficientes, pois as clulas T no expressam CD40L (defeito associado ao cromossoma X). Alm das imunodeficincias resultantes da deficincia de Igs, nos pacientes e camundongos deficientes de CD40-L, ocorre deficincia de imunidade celular e infeces oportunistas. Foi descoberto, que o CD40-L das clulas T tambm importante para a ativao de macrfagos, induo de atividade microbicida, associada produo de xido ntrico e de citocinas inflamatrias. O CD40-L tambm induz molculas co-estimuladoras como B7 e citocinas importantes para a ativao de clula T , como a IL-12 em clulas dentrticas e

29 macrfagos. O B7 tambm induzido em linfcito B. Portanto, a colaborao entre clulas T e APCs bidirecional e est limitada na falta de CD40-L. 4. Outra sndrome associada ao cromossoma X a Sndrome de Wiskott-Aldrich, devido deficincia da protena WASP. Esta protena parece ser importante na movimentao de vesculas secretrias (p.e., aquelas que contm citocinas) e ajuda a localizar estas vesculas na regio de contato entre as clulas, provavelmente interagindo com o citoesqueleto da clula. Muitas atividades efetoras linfocitrias dependem destas interaes, p.e. clulas citotxicas que secretam citotoxinas em clulas-alvo. Alm de ocorrer deficincias de resposta imune, as plaquetas tambm apresentam problemas funcionais nestes pacientes. 5. A doena granulomatosa crnica ligada ao cromossoma X causada pela deficincia de componentes da NADPH Oxidase, enzima responsvel pela produo de intermedirios reativos de oxignio (ROIs) por neutrfilos e macrfagos. Nestes pacientes, os fagcitos falham em eliminar os microrganismos fagocitados. Os microrganismos resistem no seu interior, levando formao de granulomas, uma tentativa de limitar a infeco, da o nome da doena. 6. Outros defeitos associado funo de macrfagos e neutrflos levam s imunodeficincias LAD l e 2 ou deficincia na adeso de leuccitos. Os leuccitos, durante a inflamao, migram para os tecidos e devem, para isto, atravessar as paredes do endotlio capilar. A adeso ao endotlio mediada por LFA-1 nos leuccitos e IAM-1 e 2 no endotlio inflamado. Esta interao importante para a diapedese, ou transmigrao atravs dos vasos. Estas molculas tambm participam na adeso entre leuccitos, como linfcitos T e APCs ou clulas-alvo e so importantes na ativao de linfcitos T. Na LAD-1 ocorre deficincia da cadeia p2 componente do LFA-1 e de outras integrinas, como MAC-1 ou CR3 e CR4. Estes receptores podem tambm favorecer a opsonizao de antgenos ligados ao complemento e tambm esto relacionados com a funo dos fagcitos. A deficincia de $2 influencia principalmente na capacidade destes fagcitos de atingirem o stio de inflamao. Na LAD-2, o componente deficiente o resduo sialil-x-lewis, que ocorre, por exemplo, no linfcito T, na molcula CL, antgeno cutneo linfocitrio que promove a adeso E-selectina do endotlio, e portanto, importante na migrao de linfcitos T . 7. Deficincia nos componentes da via alternativa do complemento, ou nos componentes C5, C6, C7 e C8 do complexo ltico afetam principalmente a resistncia ao gnero Neisseria. Estes microrganismos so susceptveis ao ltica do complemento. A deficincia de C9 no afeta tanto, pois C5-8 apresentam atividade ltica. A deficincia de C3 afeta tambm a opsonizao de bactrias capsuladas ocasionando suscetibilidade a algumas infeces piognicas. 8. Vrias imunodeficincias esto associadas a defeitos de maturao de linfcitos T no timo. Na sndrome de DiGeorge e nos camundongos nude ocorre aplasia tmica e ausncia de linfcitos T. No entanto, deficincia de enzimas que participam da recombinao dos genes do TCR e das Igs afetam linfcitos T e B, causando SCID. H pacientes com'defeitos de RAG-1 e RAG-2. Camundongos deficientes de RAG-1 e 2 e quinase dependente de DNA tambm apresentam fentipo SCID. Pacientes deficientes da expresso de MHC classe II (defeito no transativador de classe II) ou de MHC classe I (defeito dos transportadores de peptdeo TAP) apresentam defeitos de maturao de linfcitos T no timo. No primeiro caso, h deficincia de clulas T CD4, no segundo, de clulas T CD8. Nos camundongos, estas imunodeficincias causam aumento na suscetibilidade s infeces, p.e., infeco pelo T. cruzi. 9. Sndrome da hmmodeficincia Humana. A SIDA provocada pela infeco pelos vrus, H IV-1 ou 2, sendo o H IV-1 mais prevalente. Este vrus infecta clulas T CD4 agindo atravs da gp!20 que se liga ao CD4 e promove a penetrao do vrus. O vrus tem seu genoma transcrito pela transcriptase reversa (RNA-DNA) e se integra ao ncleo da clula T. Ocorre uma fase aguda da doena, com viremia, acompanhada de resposta imune, que controla a viremia, principalmente pela ao de anticorpos e de CTLs. Clulas T CD4 so progressivamente eliminadas ou pela ao de clulas NK e CTLs ou pela prpria interao do vrus atravs da gp 120 ao CD4 ou por efeito citoptico virai. Quando o nvel de clulas T CD4 diminui, ocorre inverso da relao CD4 e CD8.

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Finalmente a deficincia de T CD4 leva manifestao de infeces oportunistas, inicia-se a fase sintomtica, aps a fase assintomtica. Ocorrem infeces por bactrias (micobactrias, BCG), protozorios (Criptosporidium, Toxoplasma) vrus (citomegalovrus, vancea-zoster) e fungos {Histoplasma, Criptococcus, Cndida). Um interessante aspecto desta infeco que o HIV depende da ativao das clulas T CD4 para produzir uma infeco produtiva. Clulas T CD4 expressam NFicB quando ativadas, um fator necessrio transcrio da IL-2. O NFicB ativa a transcrio das molculas virais e inicia a infeco ativa. Por outro lado, o transativador TAT do vrus capaz de potencializar a produo de IL-2 pela clula T CD4. Esta IL-2 talvez seja importante para ativar outras clulas T infectadas, causando infeco produtiva. Sem dvida este pode ser um mecanismo de virulncia do HIV. Mais recentemente, foi descoberto outro mecanismo de subverso do sistema imune pelo HIV. A penetrao do vrus nas clulas T e macrfagos depende da interao com o CD4 e com receptores de quimiocinas. O uso de receptores de quimiocinas diferentes em macrfagos e linfcitos T pode explicar o tropismo celular de isolados de HIV. 13 - Regulao da resposta imune A imunorregulao pode ser entendida de uma maneira mais restrita como um conjunto de mecanismos de controle que contribuem para a finalizao de uma resposta imune. De uma maneira mais ampla, devem tambm ser considerados os mecanismos que favorecem o estabelecimento de uma resposta imune apropriada e inibem respostas indesejadas ou desnecessrias. Neste contexto, devem ser consideradas as estratgias prprias do sistema imune e as estratgias de manipulao do sistema imune pelo homem, com finalidade teraputica ou de pesquisa. O Ag o estmulo que induz a resposta imune. Quando o Ag eliminado, a resposta imune cessa. O Ag recolhido e destrudo pelas APCs. As APCs contendo Ag devem ser inativadas ou eliminadas ao final da resposta imune. As clulas efetoras ativadas por estas APCs, os linfcitos B e T efetores, tm vida curta e so inativados ou eliminados ao final da resposta imune. Vamos considerar vrios mecanismos de controle da resposta imune desde seu incio at o fim: 1. Mecanismos que controlam a ativao dos linfcitos T e B; 2. Mecanismos que influenciam a diferenciao dos linfcitos: direcionamento da resposta imune pelas citocinas. 3. Finalizao da resposta imune: apoptose de linfcitos. Controle da ativao celular - A clula T ativada atravs do TCR que interage com o Ag associado a molculas de MHC da APC. Outras molculas de adeso e sinalizao participam da ativao da clula T, entre elas o CD4, co-receptor das clulas T CD4 e o CD8, co-receptor das clulas T CD8. No mnimo 2 sinais so necessrios ativao da clula T. O 1 sinal (cascata de eventos bioqumicos) derivado da ligao do complexo MHC-Ag ao receptor TCR e co-receptor (tambm se liga ao MHC) e o 2 sinal iniciado pela ligao da molcula B7 da APC ao CD28 na clula T. Na ausncia do 2 sinal a clula se torna anrgica, ou seja, refratria estimulao pelo Ag. No entanto, ao serem ativadas devidamente, as clulas T CD4 produzem citocinas como a IL-2 que age autocrinamente no seu receptor e inicia um processo de diviso celular e expanso clonal das clulas T. A IL-2 age paracrinamente em outras clulas, como as T CD8, levando sua proliferao e diferenciao em clulas T efetoras citotxicas. Na ausncia de IL-2 derivada de clulas T CD4P ou alternativamente ao serem ativadas por APCs na ausncia de B7, as clulas T CD8 tambm se tornam anrgicas. Este mecanismo evita a ativao das clulas T por clulas que no so APCs profissionais e que no apresentam B7. Desta forma respostas desnecessrias e a ao efetora perigosa das clulas T controlada. A anergia tambm incide sobre linfcitos B que so ativados pelo Ag (1 sinal), na ausncia das citocinas e CD40-L da clula T (2 Sinal).

31 Clulas T CD4, no incio da resposta imune, so ativadas por clulas dendrticas maduras, que expressam B7. A ao efetora das clulas T CD4 est ligada secreo de citocinas e expresso de CD40-L quando o linfcito est ativado. O CD40-L age sobre clulas que expressam CD40 causando vrias atividades. Clulas B, ativadas pelo Ag, sob a ao de CD40-L e citocinas derivadas de clulas T CD4, proliferam, se diferenciam e secretam Igs. Macrfagos produzem citocinas e xido ntrico, aumentando sua atividade microbicida e inflamatria. Clulas endoteliais expressam molculas de adeso (ICAM-I, VCAM-I e E-selectina) favorecendo a migrao dos leuccitos para os tecidos e a inflamao. Clulas B e macrfagos so induzidos a expressar B7 e clulas dendrticas aumentam seus nveis de expresso de B7. Todos esses processos levam amplificao da resposta imune, pois APCs com altos nveis de B7 so capazes de ativar clulas T com menor afinidade pelo Ag e favorecem a quebra de tolerncia ao prprio. Tanto esta situao quanto a inflamao exacerbada devem ser evitadas. Como controlar a ao de clulas T efetoras? Existem duas molculas B7, B7-2 que induzida nas primeiras 24hs de ativao do linfcito B (e outras APCs) e que provavelmente contribui para a co-estimulao da clula T via CD28. E B7-1 induzido aps 48hs. As molculas B7 so tambm capazes de se ligar a outra molcula da clula T, CTLA-4, que induzido aps 48hs de estimulao da clula T. Seu ligante natural provavelmente B7-1, baseando-se nas cinticas de induo. Ao contrrio do que se imaginou no incio, CTLA-4 no co-estimulador, mas ao contrrio, freia a resposta da clula T. O mecanismo do CTLA-4 permanece em estudo. Alguns autores verificaram a produo de citocinas anti-inflamatrias. Outros verificaram a ao de uma fosfatase que talvez pudesse desfosforilar as cadeias do TCR:CD3, impedindo os primeiros eventos bioqumicos da ativao. Em qualquer caso, o animal deficiente de CTLA-4 perde a capacidade de controlar clones T autorreativos e desenvolve fentipos de auto-imunidade e linfoproliferao. Por outro lado, o bloqueio limitado da ao do CTLA-4 com anti-CTLA-4 resultou em rejeio a tumores de camundongos, provavelmente atravs do desbloqueio da resposta imune. Mais recentemente, foram implicadas clulas T CD4 regulatrias, que expressam CTLA-4 e produzem citocinas supressoras. A clula B tambm parece apresentar um mecanismo regulador. O FcRylIb ao interagir com complexos Ag-anticorpo ativa uma fosfatase capaz de inibir os sinais do BCR, composto da IgM e de molculas sinalizadoras Iga e Igp. Ou seja, na presena de uma resposta imune com produo de Ig j estabelecida, a ativao de linfcitos B virgens inibida. Provavelmente este um mecanismo que evita o excesso de complexos Ag-anticorpos e doenas causadas por imunocomplexos. Anticorpos anti-idiotpicos (formados contra a poro varivel das Igs) tambm podem contribuir para a regulao da resposta imune. Algumas vezes eles estimulam os linfcitos B produtores de Ig, outras vezes inibem. No caso do linfcito T, tambm existem exemplos de regulao idiotpica. Na EAE (Encefalomielite auto-imune experimental), a imunizao com o TCR do linfcito T autorreativo leva formao de uma resposta reguladora que protege contra a doena. Controle da diferenciao celular - Clulas T CD4 TH2 produzem IL- 4, IL-5, IL-6 e IL10 que favorecem a ativao das clulas B. Uma outra subpopulao de clulas T CD4, TH l, produzem IL-2, TNF-p e EFN-y, citocinas que favorecem a imunidade celular. Esta resposta particularmente desejvel quando o microrganismo sobrevive nas vesculas do macrofago e escapa ao dos anticorpos. Neste caso, clulas TH1 produzem IFN-y, que sinergiza com o TNF-oc dos macrfagos e induz nestes, a produo de xido ntrico, aumentando sua capacidade microbicida (alm dos efeitos do CD40-L). Os prprios macrfagos infectados favorecem o desenvolvimento das respostas TH l, pois produzem IL-12 que induz produo de IFN-y, por clulas TH1, NK e junto com o INF-y, favorece a diferenciao de clulas T precursoras em clulas TH1. A diferenciao de clulas TH2, ao contrrio, inibida pelo IFN-y, e facilitada pela IL-4. No modelo de Leishmania major, camundongos C3H desenvolvem resposta TH1 e limitam a disseminao do microrganismo, pela produo de NO. Camundongos BALB/c desenvolvem resposta TH2 e so suscetveis infeco. Anticorpos anti-IL-4 inibem a resposta TH2 e favorecem a resposta TH1, levando o

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camundongo a controlar o microrganismo. Nem sempre, no entanto, a resposta TH1 desejada. Na EAE, a resposta TH1 protena bsica da mielina (MBP) leva ativaco dos macrfagos e destruio da mielina dos nervos. Neste caso, uma forma de imunorregulao por desvio imunolgico favoreceu a resposta TH2 e impediu a doena. O Ag foi administrado via oral e levou formao de citocinas do tipo 2, como TGF-(3 e IL-10, ambas capazes de desativar o macrofago. O TGF-p tambm inibe os linfcitos T produtores de IFN-y, enquanto a IL-10 age sobre os macrfagos diminuindo sua atividade, inclusive a produo de IL-12 e expresso de B7. Desta forma, indiretamente, a IL-10 inibe a ativaco de clulas TH1. Controle da raorte celular - Finalmente, vamos considerar os mecanismos que levam finalizao da resposta imune. A tolerncia de alta dose um fenmeno observado in vivo e in vitro. A administrao de altas doses de Ag leva paralisao do sistema imune. In vitro, se observou que com altas doses de Ag ocorre diminuio da proliferao e viabilidade de linfcitos T. Clulas T constantemente re-estimuladas morrem de apoptose. Na EAE, a administrao de altas doses do peptdeo relevante da MBP tambm causou apoptose e eliminao dos clones T autorreativos in vivo, inpedindo a doena. Neste trabalho, os autores verificaram que a ativaco de linfcitos T com altas doses de Ag, na presena de IL-2 leva diferenciao terminal das clulas T, ou seja, elas se tornam suscetveis a morrer. Em outro trabalho, se observou que clulas T CD4 virgens (CD45RA) ao serem re-estimuladas continuamente por mitgenos, se diferenciam em clulas T CD45RO, fentipo de memria/efetor. A expresso de CD45RO se correlaciona com o aumento da expresso de Fas (molcula que induz apoptose) e diminuio de Bcl-2 (molcula que protege da apoptose). Um dos mecanismos que pode levar estas clulas morte a interao com a molcula Fas-L, presente em linfcitos T CD4 e CD8 ativados. Como estes linfcitos expressam Fas tambm quando ativados, eles podem se matar uns aos outros induzindo sua prpria eliminao no final da resposta imune. Linfcitos B expressando Fas tambm podem ser eliminados. Camundongos mutantes que no expressam Fas, deixam de eliminar linfcitos T e B autorreativos ou no, e desenvolvem uma doena linfoproliferativa, incluindo a produo de auto-anticorpos. Outras clulas podem expressar Fas-L e controlar as clulas T. Este o segredo de alguns stios tidos como imunoprevilegiados, como a cmara anterior do olho e os testculos. Experimentalmente, a inoculao de HSV (Vrus herpes simples) no olho no causa doena grave, embora o vrus esteja presente. Camundongos deficientes de Fas-L, no expressam Fas-L nas clulas da cmara anterior do olho. Linfcitos T ativados penetram no olho e no podem ser eliminados por este mecanismo. Ocorre resposta inflamatria e o animal fica cego. 14- Mecanismos imunopatogicos Os mecanismos efetores do sistema imune podem causar danos ao prprio organismo, no curso da resposta imune ou em reaes anmalas e exacerbadas como alergia e auto-imunidade. Os mecanismos imunopatogicos podem envolver anticorpos ou clulas efetoras e so classificados como reaes de hipersensibilidade dos tipos I ao IV. Reao do tipo I ou hipersensibilidade imediata. Este tipo de problema relacionado atividade dos sitema imune , em geral, uma reao exacerbada a uma molcula exgena (alrgeno) e se parece com a resposta a parasitas multicelulares (helmintos), mediada por anticorpos IgE, mastcitos e eosinfilos. Na primeira vez que o indivduo exposto ao antgeno (alrgeno), ocorre uma resposta imunolgica tipo 2, envolvendo clulas Th2, produtoras de IL-4, que auxiliam clulas B a produzirem anticorpos IgE capazes de interagir com o Ag. A IgE se fixa por receptores de Fe superfcie de mastcitos localizados prximos ao endotlio dos vasos sanguneos. Quando o individo re-exposto ao Ag, este se liga IgE e ativa os mastcitos, provocando sua degranulao e produo de citocinas. Nos grnulos dos mastcitos esto presentes substncias vasoativas, como a histamina e tambm so liberados derivados do cido aracdnico como prostaglandinas e leucotrienos. A ao combinada destes fatores afeta o endotlio dos vasos sanguneos., provocando