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Alejandro Camacho Cruz Rosalba Esquivel Cote Adriana G Meja Chvez Rosa Mara Ramrez Gama Mara del Carmen Urza Hernndez
MATEMTICAS: Conversin de unidades del Sistema Internacional (SI): longitud, peso y volumen Clculo de reas Clculo de promedios Qumica General: Reacciones de oxido-reduccin (donadores y aceptores de electrones) Propiedades de slidos, lquidos y geles
UNIDAD II. TCNICAS BSICAS DE MICROBIOLOGA PRCTICA 2.1 Uso y cuidado del microscopio ptico de campo claro
1. Describe la diferencia entre el microscopio ptico y el microscopio electrnico, respecto a su fundamento y su utilidad. 2. De qu tipo es el microscopio que utilizars en el laboratorio de microbiologa? Esquematiza las partes que lo componen y menciona la funcin de cada una de ellas. 3. Describe los tipos de iluminacin que se emplean con el microscopio ptico y su aplicacin. 4. Qu es poder de resolucin y de qu depende? 5. Investiga y explica con tus propias palabras los siguientes trminos:
- Apertura numrica - Propiedad parafocal - Aumento total - Distancia focal 6. Ilustra de manera comparativa el dimetro de las lentes de los objetivos 10X, 40X y 100X 7. Cul es la repercusin del diferente dimetro de las lentes de los objetivos en la observacin de especmenes al microscopio? 8. Qu microorganismos se pueden observar con cada uno de las lentes de los objetivos? 9. Qu es el aumento vaco? 10. Cmo se calcula el aumento total de un microscopio? 11. Con base en la longitud de onda de la luz, cmo se puede mejorar el poder de resolucin de un microscopio? 12. Qu es, de donde proviene, cual es su funcin y en qu objetivos se usa el aceite de inmersin? 13. Enlista los pasos a realizar para un adecuado enfoque al microscopio. 14. Cmo se calibra el microscopio para realizar la medicin de microorganismos?
Tinciones diferenciales 1. Qu es una tincin diferencial? 2. Indica las diferencias que existen entre una tincin simple y una diferencial. 3. Describe el fundamento de la tincin de Gram y la de Ziehl Neelsen. 4. Cul es la importancia de las tinciones anteriores? 5. Describe los reactivos empleados en la tincin de Gram y la funcin de cada uno de ellos. 6. En la tincin de Gram cmo se denomina a las bacterias que retienen el primer colorante y de qu color se observan?, cmo se denomina a las bacterias que pierden el primer colorante y de qu color se observan? Explica la causa de ambos resultados. 7. En la tincin de Ziehl Neelsen, para que se emplean: - la anilina y el fenol? - el calentamiento? - los detergentes? 8. Cul es la diferencia de los decolorantes empleados en la tincin de Gram y en la de Ziehl Neelsen? 9. De qu color se observan las bacterias cido alcohol resistentes? Indica la causa. 10. De qu color se observan las bacterias no cido alcohol resistentes? Indica la causa. Tinciones selectivas 1. Qu es una tincin selectiva? 2. Por qu es necesario efectuar el calentamiento durante la tincin de las endosporas bacterianas? 3. Qu tipo de tincin se emplea para observar los flagelos de: - bacterias - algas - protozoarios 4. Para qu se usa el cido tnico en la tincin de flagelos bacterianos? 5. Por qu no deben fijarse a la flama las preparaciones que sern empleadas para la tincin y observacin de: - Ncleo - Cpsula 6. Por qu se emplea la tincin negativa para la observacin de la cpsula? Integracin 1. Indica qu tipo de estructura celular presentan: a) Las bacterias b) Los hongos c) Los protozoarios d) Las algas 2. Cmo se clasifican las algas? Esquematiza un ejemplo de cada categora. 3. Qu tipos de locomocin presentan los protozoarios? Esquematiza cada grupo 4. Cul es la diferencia entre la funcin de las endosporas bacterianas y de las esporas de hongos? 5. Al concluir las prcticas acerca de preparaciones y tinciones, completa los siguientes cuadros con los resultados obtenidos.
5.1 Bacterias Caracterstica microscpica Morfologa Movilidad (+ o -) Tamao (m) Tipo de agrupacin Gram (+ o -) Acido alcohol resistencia (+ o -) Presencia de endospora (+ o -) Posicin de endospora en la clula Presencia de cpsula (+ o -) Grosor de cpsula con respecto al dimetro de la bacteria 5.2 Hongos levaduriformes Caracterstica microscpica Morfologa Observacin del ncleo Tamao (m) Presencia de blastosporas 5.3 Hongos filamentosos Caracterstica microscpica Tipo de hifas Dimetro de las hifas (m) Tipo de cuerpo fructfero Nombre cientfico o clave de muestra o tipo de muestra (al menos dos) Nombre cientfico o clave de muestra o tipo de muestra (al menos dos) Nombre cientfico o clave de muestra o tipo de muestra (al menos tres)
9. Qu es una espora bacteriana? 10. Qu es un indicador de pH? 11. Menciona 5 ejemplos de indicadores de pH, indicando su intervalo de pH. Medios de cultivo 1. A que se le llama medio de cultivo? 2. Qu es el agar? 3. De dnde se obtiene el agar? 4. Indica la clasificacin de los medios de cultivo de acuerdo a su estado fsico y la utilidad de cada uno de ellos. 5. Qu en un medio de cultivo natural o complejo? 6. Qu en un medio de cultivo sinttico? 7. Define los medios de cultivo de acuerdo a su utilidad: enriquecido, enriquecimiento, selectivo, diferencial, prueba bioqumica, de transporte y de conservacin. Menciona un ejemplo de cada uno de ellos. 8. Qu es un factor de crecimiento? 9. Indica los cuidados que se deben tener al preparar los medios de cultivo. 10. Escribe el nombre y frmula de 3 ejemplos de sustancias que son utilizadas en los medios de cultivo como fuente de: Carbono, Nitrgeno, Fsforo y Azufre. 11. Qu factores fsicos y qumicos afectan la estabilidad de los medios de cultivo? 12. Investiga la frmula de los medios de cultivo indicados en el siguiente cuadro. 13. Completa la informacin que se pide en el siguiente cuadro. Compuesto que lo hace selectivo y/o diferencial Tipo de microorganismos que crecen en el medio de cultivo Caractersticas coloniales de los microorganismos que crecen en el medio de cultivo
Medio de cultivo Tripticasa soya agar Agar Sabouraud Agar eosina azul metileno (EMB) Manitol Sal Agar (MSA) Agar Vogel Johnson Agar cetrimida Gelosa nutritiva Agar sangre
UNIDAD III ESTUDIO DE CULTIVOS BACTERIANOS PUROS UNIDAD IV ESTUDIO MICROSCPICO Y CULTIVO DE HONGOS PRCTICA 3.1 Tcnicas de siembra para el cultivo de bacterias
Qu es un cultivo microbiolgico? Qu es una colonia bacteriana? Qu es un cultivo axnico? En microbiologa A que se le denomina cepa? Investiga el nombre de tres instituciones nacionales o internacionales que se encarguen de vender cepas. 6. Para cultivar un microorganismo, cules son los cuidados que debes tener en el medio de cultivo y durante la incubacin? 7. Mencione los cuidados para eliminar los riesgos de contaminacin al trabajar con un cultivo puro. 8. De acuerdo a la informacin del siguiente cuadro, indique el(los) dispositivo(s) y tcnica(s) de siembra o inoculacin que se emplea en cada caso. Presentacin del medio de cultivo Caldo en tubo Caldo en matraz Medio slido (fundido) Medio slido en tubo inclinado Medio slido en tubo vertical Placas de agar nutritivo Dispositivo(s) Tcnica de siembra (inoculacin) 1. 2. 3. 4. 5.
9. Qu informacin te proporciona el desarrollo de bacterias en medios lquidos? 10. Qu informacin te proporciona el desarrollo de bacterias en medios semislidos? 11. Qu caractersticas culturales se observan en: - Agar inclinado? - Agar vertical? - Placas de Agar? 12. Esquematiza 5 tipos de formas coloniales bacterianas
7. Qu ventajas presenta el microcultivo con respecto al cultivo en placa? 8. Qu son las hifas? 9. Cuntos tipos de tipos de hifas se conocen? 10. Qu es el micelio? 11. Como se denomina al micelio de acuerdo a su posicin y funcin? 12. Cules son las caractersticas culturales de hongos levaduriformes que se observan en un cultivo en placa? 13. Qu caractersticas culturales de hongos filamentosos se observan en un cultivo en placa? 14. Qu tipo de reproduccin presentan los hongos micromicetos? 15. Esquematiza las diferentes estructuras de reproduccin asexual de los hongos filamentosos. ESTUDIO DE PROTOZOARIOS Y ALGAS Cultivo y estudio de protozoarios de vida libre. 1. Describe la importancia ecolgica de los protozoarios. 2. Qu se requiere para cultivar protozoarios parsitos? 3. Cules son los cuidados que se deben tener para obtener cultivos mixtos de protozoarios de vida libre? 4. Describe el procedimiento para obtener un cultivo puro de protozoarios. 5. Qu se utiliza para inhibir el movimiento de los protozoarios y facilitar su observacin en preparaciones en fresco? 6. Cuntos tipos de rganos de locomocin presentan los protozoarios? 7. Cules son las estructuras que se observan con los siguientes colorantes: a) Rojo neutro diluido b) Lugol c) Verde de metilo d) Solucin de Noland 8. Esquematiza 3 protozoarios (un sarcodario, un flagelado y un ciliado) e indica en cada uno de ellos las estructuras que se observan. Cultivo y estudio de algas microscpicas. 1. 2. 3. 4. Describe las caractersticas de las algas microscpicas o microalgas. Cul es la diferencia fundamental de las algas con los hongos y los protozoarios? Describe la importancia ecolgica e industrial de las algas. Cules son los componentes principales que se utilizan en los medios para el cultivo de algas? 5. Qu cuidados se deben tener durante la incubacin en el cultivo de algas? 6. Escribe el nombre cientfico de 5 algas y esquematzalas.
UNIDAD VI NUTRICIN MICROBIANA Y CARACTERIZACIN FISIOLGICA DE BACTERIAS PRCTICA 6.1 Nutricin microbiana y requerimientos de oxgeno
1. Cmo se clasifican los microorganismos de acuerdo a la fuente de carbono que utilizan? 1. Cmo se clasifican los microorganismos de acuerdo a la fuente de energa que utilizan? 2. Define microorganismo auxtrofo y menciona el nombre cientfico de algn ejemplo. 3. Define microorganismo prottrofo y menciona algunos ejemplos 4. Indica cmo son utilizados los siguientes compuestos qumicos por los microorganismos: a) Peptona de carne, b) Extracto de levadura, c) NaCl, FeSO4, d) MgSO4, e) (NH4)2SO4,
f) K2HPO4, g) KH2PO4, h) glucosa, i) sacarosa j) almidn. 5. Disea la formulacin de un medio de cultivo para propagar bacterias quimiolittrofas. 6. Disea la formulacin de un medio de cultivo para propagar bacterias fotoauttrofas. 7. Describe las condiciones de incubacin para los dos casos anteriores. 8. La glucosa puede ser utilizada tanto como fuente de carbono y como de energa por los microorganismos? Indica el por qu. 9. Investiga los tipos nutricionales de los siguientes microorganismos: - Escherichia coli - Micrococcus luteus - Azotobacter sp - Rhodotorula - Aspergillus Nger - Spirulina sp 10. Esquematiza el ciclo del nitrgeno, indicando el nombre de las reacciones qumicas que se llevan a cabo. 11. Explica la reduccin asimilatoria de nitratos. En este caso, los nitratos son utilizados como fuente de nitrgeno o como fuente de energa? 12. Explica el proceso de desnitrificacin, y analiza si en este caso los nitratos son utilizados como fuente de nitrgeno, o como fuente de energa.
PRCTICA 6.2 Uso de pruebas bioqumicas y tcnicas rpidas para la caracterizacin fisiolgica de bacterias
Qu es una enzima? Qu diferencia existe entre una exoenzima y una endoenzima? Cmo actan las enzimas en las reacciones qumicas? Define los trminos: anabolismo y catabolismo. Menciona las caractersticas del sistema api (Biomeriux) para la identificacin de enterobacterias. 6. Investiga cul es el fundamento del sistema Vitek para la identificacin de bacterias. 7. Completa el siguiente cuadro:
Prueba bioqumica Agar sangre Agar almidn Agar casena Agar gelatina Agar DNA Oxidasa Catalasa Indicador o revelador Prueba positiva Prueba negativa Bacteria con reaccin positiva
1. 2. 3. 4. 5.
Sustrato
Enzima
Producto
10
Caldo Rojo Fenol O/F glucosa Kligler Citrato Caldo urea MIO Rojo de Metilo Voges Proskawer Caldo Nitratos SIM
UNIDAD VII TCNICAS PARA LA ENUMERACIN DE MICROORGANISMOS. ANLISIS MICROBIOLGICO DEL AGUA Y OTRAS MUESTRAS PRCTICA 7.1 Tcnica de cuenta directa: Mtodo de Breed y Mtodo Redox PRCTICA 7.2 Mtodo turbidimtrico PRCTICA 7.3 Mtodo de dilucin y vertido en placa PRCTICA 7.4 Mtodo de filtracin PRCTICA 7.5 Anlisis microbiolgico del agua por el mtodo del nmero ms probable (NMP)
1. Para qu se aplica la cuantificacin de microorganismos? 2. Qu tipo de mtodos se emplean para cuantificar los microorganismos totales? Menciona dos ejemplos. 3. Qu tipo de mtodos se emplean para cuantificar los microorganismos viables en una muestra? Menciona dos ejemplos. 4. Qu tipo de muestras deben ser diluidas antes de proceder a la cuantificacin? 5. Qu tipo de muestras deben ser concentradas antes de proceder a la cuantificacin? 6. Qu mtodos emplea para concentrar los microorganismos de una muestra? 7. En las tcnicas de cuantificacin cules son los errores ms frecuentes? 8. Cules son las ventajas y desventajas de los mtodos de cuantificacin directos? 9. Para cuantificar hongos utilizaras el mtodo turbidimtrico? Explique el por qu. 10. Explica cmo se emplea el mtodo turbidimtrico para realizar curvas de crecimiento microbiano. 11. Cmo se determina la superficie que ocupa un campo microscpico? 12. Qu importancia tiene la determinacin anterior en el mtodo de Breed? 13. Cmo lograras cuantificar las clulas viables de todos los grupos microbianos existentes en una muestra dada? 14. En el mtodo de dilucin y vertido en placa por qu se recomienda agitar cada una de las diluciones un nmero constante de veces? 15. En la preparacin de diluciones emplearas agua destilada? Indique el por qu. 16. Qu temperatura debe tener el medio de cultivo antes de vaciarlo a las cajas que contienen la muestra? 17. Qu entiendes por efecto de dilucin aparente? 18. Qu es una Unidad Formadora de Colonia (UFC)? 19. Cul es el fundamento del mtodo del Nmero Ms Probable (NMP)? 20. Para qu tipo de muestras se emplea el recuento por filtro de membrana?
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21. Investiga la composicin y utilidad de los siguientes medios de cultivo: Caldo lauril sulfato de sodio y caldo lactosado bilis verde brillante. 22. Qu es un microorganismo bioindicador de contaminacin? Menciona un ejemplo. 23. Qu caractersticas presenta una bacteria coliforme? 24. Qu son las pruebas IMViC? 25. Resuelve los siguientes problemas: Mtodo de Breed Comparar la calidad de dos muestras de leche. Con tal fin entregaste una muestra de cada leche a dos de tus tcnicos, y les indicaste aplicar el mtodo de Breed. Los reportes a partir de los cuales hars la interpretacin se especifican a continuacin: Tcnico 1 Dimetro de campo microscpico rea en la que se coloc la muestra Volumen de la muestra
Nmero de campo Nmero de microorganismos 1 14 2 3 3 25 4 12 5 1
Tcnico 2 Dimetro de campo microscpico rea en la que se coloc la muestra Volumen de la muestra Campos observados Promedio de microorganismos/ campo microscpico Mtodo Turbidimtrico
Los alumnos de Microbiologa Experimental fueron asignados para preparar un inoculante bacteriano. Para ello, a partir de un cultivo en caldo nutritivo se deba construir una curva de crecimiento. Los datos obtenidos fueron los siguientes: Tiempo (horas) 4 8 12 16 20 24 Densidad ptica 10 15 33 45 50 56
Con la ayuda de la curva de McFarland, extrapola los datos obtenidos y grafica los resultados. A partir de la curva de crecimiento obtenida contesta lo siguiente: Cunto tiempo dura la fase logartmica? Cundo se alcanza la fase estacionaria y cuanto dura? Qu tiempo es el indicado para emplear las clulas bacterianas para el inoculante?
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Mtodo de dilucin y vertido en placa En una planta de aguas residuales se est probando la eficiencia de dos productos para disminuir la cantidad de microorganismos presentes. Con tal motivo, se procedi a analizar 3 lotes de muestras en las que determin: a) La cantidad de microorganismos totales/ 100 mL de agua Los lotes y resultados obtenidos se especifican a continuacin: Unidades Formadoras de Colonias desarrolladas en placa por el mtodo de dilucin y siembra por placa vertida Lotes I Agua sin tratar II Agua tratada con cloro III Agua tratada con plata coloidal Repeticiones 1 2 3 1 2 3 1 2 3 Diluciones 10 Incontables Incontables Incontables 920 880 950 300 400 350
-4 -5
10-7 45 32 35 1 70 3 0 50 1
Analiza los resultados e indica: a) Se observa el efecto de dilucin en todas las series de los 3 lotes? b) En caso de que la respuesta sea negativa indica en cules no se observa este efecto c) De cada lote cules resultados elegiste para efectuar sus clculos? E indica el criterio en que basaste tu eleccin d) Cul es la cantidad de UFC/ 100 mL de agua en cada uno de los lotes? e) Cul de los productos tiene mayor capacidad de desinfeccin?
UNIDAD VIII CONDICIONES AMBIENTALES PARA EL DESARROLLO, INHIBICIN Y DESTRUCCIN DE LOS MICROORGANISMOS PRCTICA 8.1 Determinacin del efecto de pH, temperatura y concentracin de solutos PRCTICA 8.2 Determinacin del efecto letal y mutagnico de las radaciones UV PRCTICA 8.3 Efecto biocida y biosttico de diferentes agentes qumicos en el desarrollo microbiano
1. De acuerdo a su temperatura ptima de crecimiento y necesidades de oxgeno, Cmo se clasifican las bacterias? 2. Define los siguientes trminos: a) Periodo trmico mortal
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b) Punto trmico mortal c) Psicrfilo d) Mesfilo e) Termfilo f) Hipertermfilo g) Halfilo h) Xerfilo i) Osmfilo 3. Qu efecto tiene el pH sobre el crecimiento de los microorganismos? 4. Cmo afecta la presin osmtica a los microorganismos? 5. Cmo pueden regular la presin osmtica algunos microorganismos?. 6. Qu dao causa la luz ultravioleta a los microorganismos? Esquematiza. 7. Qu mecanismos utiliza la bacteria para revertir el efecto de la luz UV? 8. Define los siguientes trminos y da un ejemplo de cada uno de ellos a) Antibitico b) Biocida c) Bioesttico d) Desinfectante e) Antisptico f) Agente qumioteraputico 9. Investiga cuatro microorganismos productores de antibiticos, mencionando el antibitico que producen y como acta 10. Qu es la resistencia a antibiticos? y cmo se transmite? 11. Qu es la concentracin mnima inhibitoria? 12. En qu consiste la tcnica de difusin en placa? 13. De acuerdo con su mecanismo de accin, cmo se clasifican los antibiticos?
UNIDAD X ESTUDIO DE LA DIVERSIDAD MICROBIANA EN UN MICROAMBIENTE PRCTICA 10 Estudio de la diversidad microbiana de un microambiente
1. Elabora una presentacin donde expongas los cambios morfolgicos y fisiolgicos obtenidos de la columna de Winogradsky, a travs de una lnea de tiempo.
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