Unidade 4: Catlise

Catlise enzimtica

Catlise Enzimtica
As enzimas so catalisadores biolgicos homogneos, so protenas especiais, ou cidos nuclicos. A Enzima fornece uma superfcie cataltica.

Esta superfcie estabiliza o estado de transio.

E transforma o estado de transio em produto.

Catlise Enzimtica
As caractersticas principais de muitas reaes catalisadas por enzimas: Para uma dada concentrao inicial de substrato [S]0, a velocidade inicial da formao do produto proporcional a concentrao total de enzima, [E]0. Para um dado valor de [E]0 e baixos valores de [S]0, a velocidade de formao do produto proporcional a [S]0. Para um dado valor de [E]0 e altos valores de [S]0, a velocidade de formao do produto independente de [S]0, atingindo um valor mximo denominado velocidade mxima, vmx.

Catlise Enzimtica
O mecanismo de Michaelis-Menten explica essas caractersticas.

A converso aos produtos relativamente lenta, onde a enzima e seu substrato esto em equilbrio com o complexo ES.

Catlise Enzimtica
A produo e consumo do estado de transio ocorrem na mesma velocidade. Portanto, a concentrao do estado de transio constante.

Catlise Enzimtica
1) Use quantidade conhecida de Enzima E 2) Adicione vrias concentraes de substrato S (x) 3) [produto] em funo do tempo reao (P/t) v0 (y) 4) (x, y) pelo grfico, estime o valor vmax 5) Quando y = 1/2 vmax calcule no x ([S]) KM

Catlise Enzimtica
De acordo com observaes experimentais:
Quando [S]0 << KM, a velocidade proporcional a [S]0:

Quando [S]0 >> KM, a velocidade atinge o valor mximo e independente de [S]0:

Catlise Enzimtica
Podemos ainda substituir a definio de vmx na equao:

Rearranjando temos:

Que nada mais do que uma equao de reta, podemos construir o grfico de LineweaverBurk.

Catlise Enzimtica
A eficincia cataltica das enzimas

A velocidade especfica mxima ou constante cataltica de uma enzima, kcat, o nmero de ciclos catalticos (nmero de turnover) realizados pelo stio ativo num dado tempo dividido por esse intervalo de tempo.
Tem unidades de uma constante de 1 ordem e numericamente equivalente a kb para o mecanismo de Michaelis-Menten, ento:

Catlise Enzimtica
A eficincia cataltica das enzimas A eficincia cataltica, , de uma enzima a razo kcat/KM.

Quanto maior o valor de , mais eficiente a enzima.

A eficincia atinge o valor mximo, ka, quando kb >> ka.

Inibio Enzimtica
Um inibidor, I, diminui a velocidade de formao do produto ligandose a enzima, ao complexo ES ou a ambos simultaneamente.
Ocorre dois tipos de inibio: Irreversvel e Reversvel Irreversveis: chamados de inativadores, ligam-se a enzima de maneira to forte que bloqueiam permanentemente a atividade enzimtica.

Reversveis: diminuem a atividade enzimtica por meio de interaes reversveis. Competitivas No-competitivas Mistas

Inibio Enzimtica
Competitivas: as molculas estruturalmente semelhantes ao substrato competem com o substrato pelo stio ativo da enzima.

Inibio Enzimtica
No-competitivos: o inibidor liga-se diretamente ao complexo enzimasubstrato, mas no enzima livre. Tal inibidor no precisa-se assemelhar ao substrato, mas provoca uma distoro do stio ativo da enzima, fazendo com que a mesma seja cataliticamente inativa.

Inibio Enzimtica
Mistos: o inibidor liga-se tanto a enzima como no complexo enzima-substrato.

Exerccio
Dados experimentais Temperatura 25C
Cubeta 1 2 [catecol]0 (molL-1) 0,0083 0,0125

Tempo (s) 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180

Cubeta 1 0,362 0,566 0,654 0,737 0,786 0,840 0,884 0,924 0,976 1,002 1,047

Cubeta 2 0,414 0,528 0,618 0,696 0,759 0,804 0,839 0,863 0,881 0,894 0,942

Cubeta 3 0,414 0,580 0,700 0,791 0,863 0,915 0,948 0,973 0,990 1,001 1,04

Cubeta 4 0,304 0,493 0,634 0,738 0,808 0,858 0,891 0,914 0,928 0,936 0,994

Cubeta 5 0,291 0,480 0,613 0,706 0,770 0,801 0,836 0,853 0,861 0,866 0,950

3
4 5

0,0167
0,0208 0,0250

infinito

M = concentrao da o-benzoquinona At = Absorbncia lida no tempo A0 = Absorbncia lida no tempo 0 s A = Absorbncia lida no tempo infinito Mi = concentrao inicial de catecol na cubeta

Exerccio
0.025 Corrida 1 Corrida 2 Corrida 3 Corrida 4 Corrida 5 0.025 Corrida 1 Corrida 2 Corrida 3 Corrida 4 Corrida 5 0.020 0.020

[ Produto] (molL )

0.015

[ Produto] (molL )

0.015

-1

0.010

-1

0.010

0.005

0.005

0.000 -20 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200

0.000 -20 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200

tempo (s)

tempo (s)

Cubeta 1 v0 (molL-1s-1) 1/v0(molL-1s-1) 2,4010-3 416,67

Cubeta 2 3,5010-3 285,71

Cubeta 3 4,4310-3 225,81

Cubeta 4 5,7010-3 175,52

Cubeta 5 7,1710-3 139,47

1/[catecol]
(molL-1) 120,48 80,00 59,88 48,08 40,00

Exerccio
Coef. Linear = 13,02 1/vmax = 13,02 (molL-1s-1)-1
450 400 350 300

vmax = 76,8 mmolL-1s-1 Coef. Angular = 3,38 s KM/ vmax = 3,38 s KM = 0,26 molL-1

1/v0(molL s )

-1 -1

250 200 150 100 50 0 0 20 40 60 80

-1

100

120

1/[catecol](molL )

Exerccio
Dados experimentais Temperatura 35C
Cubeta 1 2 [catecol]0 (molL-1) 0,0083 0,0125

Coef. Linear = 10,2 1/vmax = 10,2 (molL-1s-1)-1 vmax = 98,0 mmolL-1s-1 Coef. Angular = 2,91 s KM/ vmax = 2,91 s KM = 0,28 molL-1
Cubeta 2 5,7510-3 173,81 Cubeta 3 8,6710-3 115,32 Cubeta 4 11,710-3 85,14 Cubeta 5 16,0010-3 62,54

3
4 5

0,0167
0,0208 0,0250

Cubeta 1 v0 (molL-1s-1) 1/v0(molL-1s-1) 3,3710-3 296,71

1/[catecol]
(molL-1) 120,48 80,00 59,88 48,08 40,00

Exerccio

Dados T = 25C 298K

vmax = 76,8 mmolL-1s-1

Dados T = 35C 308K vmax = 98,0 mmolL-1s-1 KM = 0,28 molL-1

KM = 0,26 molL-1

Ea = ?