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Universidade de Aveiro Departamento de Biologia 2008

JOSIANA ADELAIDE VAZ

Metodologias de deteco de vestgios biologicos forenses

Universidade de Aveiro Departamento de Biologia 2008

JOSIANA ADELAIDE VAZ

Metodologias de deteco de vestgios biologicos forenses

dissertao apresentada Universidade de Aveiro para cumprimento dos requisitos necessrios obteno do grau de Mestre em Biologia Molecular e Celular, realizada sob a Orientao cientfica do Doutor Lus Souto Miranda, Assessor do Departamento de Biologia da Universidade de Aveiro e Co-orientao de Doutor Antnio Carlos Matias Correia, Professor Associado com Agregao do Departamento de Biologia da Universidade de Aveiro.

o jri
presidente Doutora Maria de Lourdes Gomes Pereira,
Professora Associada com Agregao, Departamento de Biologia, Universidade de Aveiro

Doutor Francisco Manuel Andrade Corte Real Gonalves


(arguente principal), Professor Associado, Faculdade de Medicina, Universidade de Coimbra, Largo da S Nova, 3000-213 Coimbra

Doutor Antnio Carlos Matias Correia


Professor Associado com Agregao, (co-orientador), Departamento de Biologia da Universidade de Aveiro

Doutor Lus Manuel Souto de Miranda,


Assessor (orientador), Departamento de Biologia, Universidade de Aveiro

agradecimentos

Este espao dedicado queles que deram a sua contribuio para que esta dissertao fosse realizada. A todos eles deixo aqui o meu agradecimento sincero. Em primeiro lugar agradeo ao Prof. Doutor Lus Souto a forma como orientou o meu trabalho. As notas dominantes da sua orientao foram a utilidade das suas recomendaes, a cordialidade com que sempre me recebeu e a pacincia, por tudo estou muito grata. Em segundo lugar, agradeo s minhas colegas e companheiras de Mestrado, de Licenciatura, de Amizade, enfim da Vida: Maria Joo Guedes e Amlia Rodrigues, sem elas no teria conseguido e no seria quem sou. Gostaria ainda de agradecer ao Bruno Queirs e sua famlia. O Bruno que sempre me acompanhou e esteve disponvel para ouvir os meus desabafos de tristeza e desespero bem como as minhas exploses de alegria, sem ele, eu era uma estrangeira em Chaves. Sou muito grata a todos os meus familiares pelo incentivo recebido. Aos meus pais, Maria e Manuel, ao meu irmo Ivo e ao Jhony, obrigada pelo amor, alegria e ateno sem reservas. Este trabalho por eles e para eles. Finalmente, gostaria de deixar trs agradecimentos muito especiais, Elisa, Ana Sofia e Sofia. s minhas trs meninas que no desistiram de colocar um sorriso no meu rosto, e conseguiram. Obrigada pela noite de sono perdida. O meu profundo e sentido agradecimento a todas as pessoas que contriburam para a concretizao desta dissertao, estimulando-me intelectual e emocionalmente.

palavras-chave

Cincia Forense, Criminalistica, vestgios forenses, evidncia, indicio, prova, metodologia de deteco, fluorescncia, fosforescncia,sangue,smen, plos, dentes, saliva, ossos, urina, fezes.

resumo

O presente trabalho prope-se rever as mais significativas tcnicas e mtodos de deteco de vestgios biolgicos forenses. A Dissertao composta por uma apresentao geral da Cincia Forense (conceito, breve resenha histrica, objectivos, princpios e reas), uma exposio do Protocolo de Investigao de uma Cena do Crime e, por fim, uma compilao dos mtodos de deteco gerais e especficos dos vrios tipos de vestgios forenses presentes num cenrio de crime. A Metodologia usada para desenvolvimento da Dissertao baseia-se na reviso terica de uma vasta bibliografia de referncia na rea forense. A escolha do tema Metodologias de deteco de vestgios biolgicos forenses como corpus desta Dissertao deve-se, principalmente, constatao da importncia e protagonismo da Cincia Forense na actualidade, bem como a inexistncia de uniformizao de procedimentos nas vrias Polcias Cientficas no mundo. Contemporaneamente, a Cincia Forense vem recebendo valiosa ateno tanto por acadmicos, cientistas, especialistas nas mais diversas reas, como por simples curiosos que em nada esto associados Criminalstica. A popularidade da cincia forense est no auge, assim como a discusso dos seus mtodos e potencialidades. Existem inmeros mtodos e tcnicas associadas deteco de amostras biolgicas na cena de um crime, embora os seus princpios de aplicao estejam baseados sobretudo em fenmenos de Fluorescncia, Fosforescncia, Imunocromatografia e Precipitao. Estes so mtodos fundamentados na Biologia e Bioqumica podem ser vistos como uma triagem inicial dos vestgios com a vista identificao especfica por anlise de DNA na Gentica Forense, embora forneam muitos mais resultados fundamentais investigao. Independentemente dos mtodos utilizados pelos especialistas forenses, o grande objectivo da investigao a identificao positiva do perpetrador e a resoluo do crime.

keywords

Forensic Science, Criminalistic, trace, evidence, methods of detection, fluorescence, phosphorescence, blood, semen, hair, teeth, saliva, bone, urine, feces.

abstract

This paper proposes to revise the most significant techniques and methods of detection of biological forensic traces. The Dissertation is composed of an overview of Forensic Science (concept, historical summary, objectives, principles and areas), an exhibition of the Protocol for the Investigation of a crime scene and, finally, a compilation of methods to detect general and specific the various types of forensic traces in a crime scene. The methodology used for development of Dissertation based on the theoretical review of a vast bibliography of reference in the forensic field. The choice of theme - Methodologies for detecting traces of biological forensic corpus as this Dissertation is due, mainly, the finding of the importance and role of Forensic Science at present, as well as the lack of uniformity of procedures in several Forensic Science. Contemporaneously, the Forensic Science has received valuable attention both by scholars, scientists, specialists in several areas, such as by simply curious that in no way are associated with the Criminalistics. The popularity of forensic science is at its height, as well as the discussion of its methods and potential. There are numerous methods and techniques associated with the detection of biological samples at the scene of a crime, although the application of its principles are based mainly on phenomena of fluorescence, phosphorescence, immunochromatographic and precipitation. These methods are based on the biology and biochemistry are nothing more than a trace of initial screening with a view to identifying specifically for analysis of DNA in Forensic Genetics. Regardless of the methods used by forensic experts, the major focus of research is the positive identification of the perpetrator and the resolution of crime.

ndice

NDICE DE FIGURAS .................................................................................................................... 10 NOTA INTRODUTRIA ................................................................................................................. 12 1. CINCIA FORENSE .......................................................................................................... 15 2. CENA DO CRIME .............................................................................................................. 35 3. VESTGIOS BIOLGICOS FORENSES .................................................................................. 43 CONSIDERAES FINAIS........................................................................................................... 133

Sumrio
NDICE DE FIGURAS .................................................................................................................... 10

NOTA INTRODUTRIA ................................................................................................................. 12

1.

CINCIA FORENSE .............................................................................................................. 15

1.1. 1.2. 1.3. 1.4. 1.5. 1.6. 1.7.

Cincia Forense, conceito ......................................................................................... 15 Cincia Forense, histria .......................................................................................... 15 Cincia Forense: objectivos, princpios e caractersticas ......................................... 20 Cincia Forense, vestgio, evidncia, indcio e prova .............................................. 23 Idoneidade do vestgio .............................................................................................. 25 reas da Cincia Forense ......................................................................................... 27 Referncias bibliogrficas ......................................................................................... 30

2.

CENA DO CRIME .................................................................................................................. 35

2.1. 2.2. 2.3.

Cena do crime, Protocolo da investigao forense .................................................. 35 Cadeia de custdia ................................................................................................... 39 Referncias bibliogrficas ......................................................................................... 40

3.

VESTGIOS BIOLGICOS FORENSES ..................................................................................... 43

3.1.

Mtodos gerais de deteco de vestgios biolgicos na cena do crime ................... 43

3.1.1. UTILIZAO DE FONTES DE LUZ .................................................................................. 43 3.1.1.1. Alguns exemplos de aparelhos de deteco ................................................. 46 3.1.2. FOTOGRAFIA DIGITAL ................................................................................................ 50 3.1.3. TECNOLOGIA LASER .................................................................................................. 51

3.2.

Vestgios biolgicos forenses: o Sangue .................................................................. 54

3.2.1. SANGUE, CONSTITUIO E FUNES ......................................................................... 54 3.2.2. ESTUDO FORENSE DO SANGUE .................................................................................. 55 3.2.2.1. Anlise macroscpica e colheita .................................................................... 55 3.2.2.2. Testes presuntivos ......................................................................................... 56 3.2.2.2.1. Reaces de cor: Reagente de Kastle-Meyer .......................................... 57 8

3.2.2.2.1. Reaces de cor: Reagente de Adler-Ascarelli ou Benzidina .................. 59 3.2.2.2.1. Reaces de luminescncia: Reagente de Luminol ................................. 60 3.2.2.2.1. Reaces das Oxidades ........................................................................... 70 3.2.2.3. Testes confirmatrios ..................................................................................... 70 3.2.2.4. Testes especficos ou de origem ................................................................... 72 3.2.2.5. Testes de identificao individual .................................................................. 75

3.3.

Vestgios biolgicos forenses: os Plos .................................................................... 77

3.3.1. ESTUDO FORENSE DO PLO ....................................................................................... 78 3.3.1.1. Biologia do plo .............................................................................................. 79 3.3.1.2. Formao e crescimento do plo ................................................................... 80 3.3.1.3. Caractersticas morfolgicas .......................................................................... 81 3.3.1.4. Plos: colheita e armazenamento .................................................................. 89 3.3.1.5. Exame do Plo ............................................................................................... 92 3.3.2. CONCLUSO ............................................................................................................. 96

3.4.

Vestgios biolgicos forenses: o Smen ................................................................... 97

3.4.1. BIOLOGIA DO SMEN ................................................................................................. 98 3.4.2. ANLISE FORENSE DO SMEN .................................................................................. 100

3.5.

Vestgios biolgicos forenses: os Dentes ............................................................... 106

3.5.1. DETERMINAO DO SEXO ........................................................................................ 107 3.5.2. DETERMINAO DA ORIGEM TNICA ......................................................................... 108 3.5.3. DETERMINAO DA IDADE ....................................................................................... 109 3.5.4. MARCAS DE MORDIDA ............................................................................................. 110 3.5.4.1. Estudo das Marcas de mordida ................................................................... 110

3.6.

Vestgios biolgicos forenses: a Saliva ................................................................... 113

3.7.

Vestgios biolgicos forenses: os Ossos ................................................................ 117

3.8.

Outros vestgios biolgicos forenses ...................................................................... 121

3.9.

Referncias bibliogrficas ....................................................................................... 123

CONSIDERAES FINAIS........................................................................................................... 133

ndice de figuras

Figura 1-1 Retrato de Zacharias Jansen. ............................................................................................................... 16 Figura 2-1 Processo de evidncia fsica. ................................................................................................................ 35 Figura 3-1 - Representao esquematica do fenmeno de Fluorescncia. ............................................................... 44 Figura 3-2 - Cabea de luz azul BMT e os culos mbar .......................................................................................... 46 Figura 3-3 - Fotografia de fragmentos de ossos humanos e dentes .......................................................................... 47 Figura 3-4 - Deteco de Fluidos corporais, saliva sobre ganga. .............................................................................. 47 Figura 3-5 - Deteco de Fluidos corporais, smen num lenol de cama.. ................................................................ 48 Figura 3-6 - Deteco de Fluidos corporais, urina num lenol de cama. ................................................................... 48 Figura 3-7 HandScope e Mini-CrimeScope ............................................................................................................ 49 Figura 3-8 Lanternas BLUEMAXX . .................................................................................................................... 50 Figura 3-9 Fotografias com uso de fontes de luz alternativas. ............................................................................... 51 Figura 3-10 Exemplo de um aparelho que usa a tecnologia laser .......................................................................... 52 Figura 3-11 Exemplo de um aparelho que usa a tecnologia laser. ......................................................................... 53 Figura 3-12 - Constituintes do sangue ...................................................................................................................... 54 Figura 3-13 Reaces referentes ao reagente de Kastle-Meyer. ............................................................................ 58 Figura 3-14 Representao da hemoglobina e do complexo heme da hemoglobina. ........................................... 59 Figura 3-15 - Reagente de Benzidina e o produto de colorao azul. ....................................................................... 60 Figura 3-16 Sntese do Luminol. ............................................................................................................................ 61 Figura 3-17 - Exemplo de um ambiente sem e com luminol ...................................................................................... 62 Figura 3-18 - Mecanismo esquemtico da oxidao de luminol ................................................................................ 63 Figura 3-19 O Espectro Electromagntico.............................................................................................................. 64 Figura 3-20 Kit de reagente BlueStar ................................................................................................................. 65 Figura 3-21 Procedimento de utilizao do reagente BlueStar ........................................................................... 66 Figura 3-22 Um exemplo prtico do uso do reagente BlueStar . .......................................................................... 66 Figura 3-23 Superfcie de cermica pulverizada com BlueStar . .......................................................................... 67 Figura 3-24 Superfcie de cermica pulverizada com Luminol................................................................................ 67 Figura 3-25 Camisa de algodo pulverizada com BlueStar aps lavagem. ......................................................... 68 Figura 3-26 Camisa de algodo pulverizada com Luminol aps lavagem. ............................................................. 68 Figura 3-27 Carpete pulverizada com BlueStar .................................................................................................. 69 Figura 3-28 Carpete pulverizada com Luminol ....................................................................................................... 69 Figura 3-29 Cristais de Teichmann. ....................................................................................................................... 71 Figura 3-30 - Cristais de Takayama .......................................................................................................................... 71 Figura 3-31 Teste imunocromatografico Hexgono OBTI. ................................................................................... 74 Figura 3-32 - Corte transversal de pele onde visvel a estrutura do plo ................................................................ 79 Figura 3-33 Folculo piloso ..................................................................................................................................... 80 Figura 3-34 Seco transversal de um plo ........................................................................................................... 81 Figura 3-35 Bulbo do plo. ..................................................................................................................................... 82 Figura 3-36 Microfotografia de plo com Medula contnua e clara.......................................................................... 84 Figura 3-37 Microfotografia de plo com Medula contnua e opaca........................................................................ 84 Figura 3-38 Microfotografia de plo com Medula interrompida. .............................................................................. 84 Figura 3-39 Microfotografia de plo com Medula vacuolarizada. ............................................................................ 85 Figura 3-40 - Microfotografia de um plo onde visvel a distribuio dos grnulos de pigmentos ........................... 86 Figura 3-41 Microfotografia de plo humano .......................................................................................................... 86 Figura 3-42 Padro da cutcula de plo humano e plo animal. ............................................................................. 87

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Figura 3-43 - Ilustrao da preparao da lmina. .................................................................................................... 93 Figura 3-44 - Espermatozide ................................................................................................................................... 99 Figura 3-45 - Esquematizao do estudo do smen ............................................................................................. 100 Figura 3-46 - Esquema ilustrativo do mtodo de ELISA .......................................................................................... 104 Figura 3-47 - Exemplo de espectofotmetro de fluorescncia ................................................................................. 114 Figura 3-48 - Clula do epitlio bucal. .................................................................................................................... 114 Figura 3-49 - RSID resultados possveis. ................................................................................................................ 115 Figura 3-50 - Canais de Havers. ............................................................................................................................. 118

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Nota Introdutria

Esta Dissertao insere no campo da pesquisa actual em Cincia Forense, mais propriamente na rea da Criminalstica Forense abordando especificamente as metodologias de deteco de vestgios biolgicos Programa de Mestrado em Biologia Molecular e Celular da Universidade de Aveiro Departamento de Biologia, e foi realizada entre os anos 2007 e 2008. Actualmente, a Cincia Forense recebe valiosa ateno tanto por acadmicos, cientistas, especialistas nas mais diversas reas como por simples curiosos que em nada esto associados Criminalstica, a sua popularidade est no auge. Esta cincia tem se tornado, cada vez mais, uma parte vital da Justia Criminal. Como parte integrante desta cincia, a Medicina Legal ocupa um lugar de valor inestimvel e as suas percias de laboratrio so indispensveis na identificao do corpo de delito, principalmente quando os vestgios biolgicos forem sangue, esperma, plos, saliva, entre outros. Essas percias abrangem uma grande diversidade de anlises. Para isso, valem-se de princpios da Bioqumica, Serologia e principalmente da Qumica e Imunologia. Alm do reconhecido protagonismo e importncia da Cincia Forense no presente foi a constatao da escassez de material bibliogrfico, que reunisse informaes e tcnicas relativas a essas investigaes, bem como da inexistncia de uniformizao de procedimentos nas vrias Policias Cientificas do mundo que foram os principais motivos para a escolha do tema Metodologias de deteco de vestgios biolgicos forenses como corpus desta Dissertao. Esta Dissertao destina-se a estudantes e profissionais da Justia, da Medicina Legal, da Criminalstica, Especialistas e Peritos de Laboratrio e at aos simplesmente interessados em saber mais sobre esta cincia. Alm de poder ser considerado como uma espcie de manual de percias laboratoriais tm como objectivo orientar e familiarizar os leitores quanto s vrias tcnicas existentes, bem como os seus resultados e limitaes. Para isso foi realizada uma profunda e completa reviso bibliogrfica de revistas, publicaes da rea e manuais e recomendaes tcnicas de laboratrios forenses de referncia.

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CAPTULO 1 CINCIA FORENSE

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1. Cincia Forense

1.1. Cincia Forense, conceito

A palavra vem do latim forense (legal - que significa "antes do frum") e refere-se a algo "relativo a, ou utilizado num tribunal de direito." Nos dias de hoje, refere-se quase sempre a um mtodo de obteno de provas criminais para fins de utilizao de um juiz de direito. Segundo a Policia Judiciria Portuguesa (Disponvel em: www.policiajudiciaria.pt, acesso a: 12 de Maro de 2008), a Cincia Forense um conjunto de componentes ou reas, entre as quais a medicina legal, antropologia e a entomologia, que em conjunto, actuam de modo a resolver casos de carcter legal. H ento que referir que a Cincia Forense no uma cincia nica. Esta est dependente de todas reas que sejam necessrias em casos especficos. Assim, a Cincia Forense resulta da interaco entre vrias cincias aproveitando os seus campos de aco e conhecimentos com o objectivo de resolver determinado delito.

1.2. Cincia Forense, histria

A Cincia Forense apresenta-se com uma histria de caminhos que se cruzam, afirma
Lombroso Cesare (1924). Nos ltimos anos, o interesse do pblico pela Polcia Cientfica e tudo o que lhe est associado cresceu de forma espantosa. O facto de saber como se conduz um inqurito criminal para determinar os motivos e os autores de um crime desperta a curiosidade de muitos. Esta cincia, tal como a entendemos hoje, nasceu na China antiga. surpreendente que existam documentos do Sc. XVII que comprovam que um milhar de anos antes, Ti Chieh Yen ficou conhecido por usar a lgica e as evidncias forenses para resolver uma srie de crimes ocorridos no Sc. VII. O que Ti e os seus colaboradores fizeram foi estudar a cena do crime, analisar as pistas e falar com testemunhas e suspeitos. Obviamente, os 15

mtodos e instrumentos que tinham no podem ser comparados com os de hoje, no entanto, a atitude e o cuidado que colocava em cada um dos seus trabalhos de investigao um exemplo a seguir tantos sculos depois. No sculo XIII, na China, foi publicado um livro que explicava como reconhecer sinais de afogamento, estrangulamento, ou como as feridas podiam revelar qual o tipo, tamanho e qual a arma utilizada no crime. A Cincia Forense deve grande parte do arsenal de instrumentos e mtodos cincia ocidental dos sculos XVI a XVIII. Em meados do sculo XVII j se ministrava medicina forense em vrias universidades da Europa. O instrumental que foi surgindo progressivamente da revoluo cientfica foi aplicado rapidamente na luta contra o crime. O microscpio, inventado por Zacharias Jansen em 1590, permitiu obter imagens de objectos impossveis de observar vista desarmada, a Cincia Forense utilizou-se praticamente desde o seu aparecimento.

Figura 1-1 . Retrato de Zacharias Jansen.

Alguns dos pressupostos da investigao criminal baseiam-se na identificao dos agentes do crime, dos instrumentos por eles usados e dos sinais apresentados na vtima, permitindo assim reconstituir o acto criminal. Henry Goddar foi o pioneiro a associar uma bala com a arma utilizada. Desde os finais do sculo XVIII que a fabricao em srie das armas de fogo implicou algumas alteraes na produo das almas das armas (a parte oca do interior do cano da arma, que vai desde a culatra at a boca do cano). A partir da as almas passaram a possuir linhas ou sulcos que diferiam entre as diversas armas produzidas, assim cada arma tinha uma alma com sulcos diferentes, estes sulcos ficam gravados na bala quando a arma disparada permitindo atravs da bala a identificao da arma, foi o incio da Balstica. Em 1796, o Dr. Franz Josef Gall, desenvolveu a Frenologia. Esta cincia estudava as formas estruturais do crnio associadas s aptides e capacidades intelectuais dos indivduos. A Frenologia foi reformulada quando, em 1876, Cesare Lombroso, director do

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Asilo de Pesaro, situado ao norte de Itlia, publicou " L'uomo delinquente". Aps ter estudado mais de 6.000 casos de delinquentes, Lombroso fez um exaustivo estudo (com mais de 6000 delinquentes) e concluiu que existia uma correlao entre as caractersticas fsicas do indivduo e as suas tendncias criminosas (por exemplo: os pirmanos tinham a cabea pequena, os salteadores de caminhos eram muitos cabeludos e os burles costumavam ser fortes). Estas correlaes foram levadas muito a srio pelos tribunais da poca e os frenlogos eram considerados como peritos em Tribunal. Felizmente a Frenologia, comentada hoje em dia como exemplo de pseudo-cincia, foi perdendo adeptos, at desaparecer definitivamente. A partir destas ideias um pouco mirabolantes, Alphonse Bertillon extraiu uma premissa interessante: as medidas corporais podiam ter alguma utilidade podendo ser usadas para identificar com preciso um delinquente. Por uns actos histricos infelizes as ideias de Bertillon tiveram um escasso momento de glria e rapidamente caram no esquecimento. Os seus fundamentos no foram retomados at inveno do retrato falado, em que se descrevia a cara do delinquente segundo as suas pores: frente, nariz, queixo, orelhas e olhos. Nos anos 50 do sculo passado a tcnica tornou-se obsoleta com o Identikit, o Photofit e os arquivos computorizados, os herdeiros modernos de Bertillon. Em 1815 Mathieu Orfila converteu-se no pai da toxicologia ao publicar o livro intitulado "Trait des Poisons", uma classificao dos venenos mais comuns usados por peritos criminais. A partir de esse momento muito se evoluiu. Por exemplo, o qumico ingls James Marsh desenvolveu uma tcnica infalvel para detectar vestgios de arsnio. O arsnio especialmente fcil de detectar porque permanece nas unhas e no cabelo depois da morte. A lista de venenos manuseados pelos cientistas forenses muito extensa, por exemplo: cicuta (Conium maculatum), aconitina (acetilbenzoilaconina), atropina, estricnina, tlio, antimnio, arsnio, cianeto, Amanita phalloides so alguns venenos conhecidos popularmente. O acto de fotografar a cena do crime, fundamental na reconstituio do delito, permite ainda a documentao dos vestgios ai existentes no local do crime e nas prprias vtimas. A importancia da fotografia s foi reconhecida por Thomas Byrnes, em 1886. Este recolheu vrias fotografias de delinquentes e publicou-as de "fotos de rufies". Esta coleco de fotografias revelou-se de crucial importancia no reconhecimento e identificao dos criminosos, sendo um auxiliar actuao da polcia. Actualmente a pratica de reconstruo facial de restos sseos da responsabilidade da Antropologia forense. O anatomista Wilhelm His e o escultor Carl Ludwig Seffnerem em 1894 foram os primeiros a desenvolver a tcnica, ao reconstruir os restos mortais do crnio do compositor Johann Sebastian Bach (1685-1750). A sua tarefa foi bem sucedida uma vez que quando comparada a reconstruo com retratos do msico pintados em vida, foi possvel demonstrar a sua autenticidade. 17

O sculo XIX foi sem dvida revolucionrio no que se refere s cincias forenses. Patrizi, contemporneo de Lombroso, desenhou o primeiro detector de mentiras: a luva volumtrica. O aparelho consistia numa luva de ltex, selada ao nvel do punho, que registava as alteraes da presso sangunea, supostamente associados tenso emocional. Mais tarde veio a confirmar-se a pouca fiabilidade deste mtodo, mas sem dvida que foi um instrumento pioneiro dos actuais detectores e dos diversos sistemas criados para comprovar a veracidade de declaraes de interrogados.

Problemas-mito da Cincia Forense A exactido, no sentido lato da palavra difcil de atingir em qualquer cincia, originando problemas-mito. Por exemplo em Biologia existem vrias teorias em relao origem da vida em biologia, a prpria matemtica, a fsica, todas as cincias apresentam mitos e teorias defendidas por uns e contestadas por outros. A Cincia Forense no excepo, tambm tem questo mal-resolvidas. Ainda hoje existem crimes por resolver, pode-se destacar o exemplo de Jack o estripador. Na dcada de 1880, este assassino em srie cometeu inmeros crimes em Londres e actualmente so defendidas vrias hipteses sobres as aspiraes que o levaram a cometer tais crimes (OWEN, 2000).

Tempos modernos A Cincia Forense acompanha a evoluo da tecnologia. Actualmente a deteco de drogas e txicos utiliza mtodos extremamente aprimorados, entre eles: cromatografia gasosa, cromatografia lquida de alta presso ou de filtrao no gel, espectrmetros de massa. A dificuldade da escassa quantidade da amostra tambm foi ultrapassada pelo uso tcnicas de ensaio imunolgico, baseadas no desenvolvimento de anticorpos que reagem com as substncias pesquisadas. No que diz respeito aos vestgios biolgicos forenses propriamente ditos, o exame forense deste tipo de amostras teve o seu incio no princpio do sculo XX com a aplicao dos grupos sanguneos ABO em evidncias relacionadas a crimes ou identificao de pessoas. Hoje, os grupos sanguneos eritrocitrios, como os sistemas ABO, Rh (CcDEe) e MNSs, foram substitudos na maioria dos centros, sendo pouco utilizados (BONACCORSO, 2004). Marcando uma segunda fase na evoluo desta cincia, em 1954, foi demonstrada a ocorrncia de um sistema de histocompatibilidade mediado por antgenos na superfcie dos leuccitos, conhecido por complexo HLA (histocompatibility leucocyte antigen), determinado por genes allicos muito prximos localizados no brao curto do cromossoma 6, com 18

acentuado poder de discriminao individual ou determinao da individualidade gentica (BAR et. al., 1999). A terceira fase do desenvolvimento das cincias forenses voltadas identificao humana veio com a publicao de um artigo na Revista Nature, por Jeffreys e seus colaboradores (1985b), sobre certas regies de minissatlites do genoma humano que produziam uma espcie de impresses digitais de DNA. A tipagem molecular de material gentico foi utilizada oficialmente pela primeira vez, em 1985, por Jeffreys, na Inglaterra para a resoluo de um problema de imigrao (JEFFREYS et. al., 1985a). Um ano aps, o mesmo autor empregou esta tcnica para identificar o verdadeiro violador e assassino de duas vtimas. A partir deste caso, que ficou conhecido como Enderby (Queen v. Pitchfork), a Criminalstica e a Medicina Legal ganharam novo flego e tm usado a tcnica de tipagem molecular de DNA como potente arma no esclarecimento de diversos delitos e na identificao humana (MOURA-NETO, 1998).

Uma vez que o "crime" , infelizmente, quase to antigo como a humanidade, a histria desta cincia no poderia ser curta. Sem dvida, os grandes avanos na tecnologia, software, anlise de evidncias biolgicas (identificao do DNA algo que significou uma verdadeira revoluo) permitiram polcia cientfica melhores meios para levar a cabo o seu trabalho, de tal modo que afecta directamente o sucesso da sua investigao. Assim, novos tempos, novos criminosos, novas tcnicas forenses.

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1.3. Cincia Forense: objectivos, princpios e caractersticas

A Cincia Forense centra-se na reconstruo de eventos nicos respondendo s questes Como aconteceu? O que aconteceu? Onde e quando aconteceu e quem esteve envolvido? Segundo Monter (2008) reconhecem-se cinco objectivos gerais da Cincia Forense: 1. Investigar tecnicamente e comprovar cientificamente a existncia de um facto em particular. 2. Determinar os fenmenos ocorridos e reconstruir a mecnica do acto, identificando os objectos e instrumentos de execuo, bem como as manobras de execuo do acto. 3. Detectar evidncias, coordenar tcnicas e sistemas para a identificao da vtima e dos presumveis autores. 5. Detectar e identificar evidncias para comprovar o grau de participao dos envolvidos no delito, tanto vitimas como suspeitos.

Princpios bsicos

No h unidade na Cincia Forense (GAUDETTE, 2000). Esta uma viso ampla, os prprios cientistas forenses vem esta cincia meramente como uma aplicao de conhecimentos generalizados de outras cincias, ignorando qualquer princpio ou teoria a ela subjacente. Este facto comprovado pelos vrios cientistas forenses como bioqumicos e ou qumicos. Assim, quando a Acusao apela a um cientista forense a Defesa opta pela opinio de um qumico, bioqumico ou geneticista considerada como mais qualificada. Os prprios cientistas forenses em tribunal deveriam pensar que auto-qualificar-se como cientistas forenses a melhor opo e questionar activamente as qualificaes de outros cientistas para aprontar provas ou detectar evidncias (ROBERTSON e VIGNEAUX, 1995). Cada crime ocorre em diferentes circunstncias e so afectadas por uma enormidade de variveis no replicveis. Acresce o facto da Cincia Forense usar amostras muito limitadas, tanto em quantidade como em qualidade e com uma histria desconhecida ou mesmo irreconhecvel. Adicionalmente, os processos legais impem constrangimentos e caractersticas nicas Cincia Forense, portanto a Cincia Forense necessita de 20

descrever os seus prprios princpios. Reconhecidas as dificuldades da Cincia Forense no que se refere sua unidade, Monter (2008) definiu 4 princpios bsicos da Cincia Forense: 1. Princpio da troca. Em 1910 o francs Edmund Locard observou que todo o criminoso deixa uma parte si na cena do crime e leva algo consigo, deliberadamente ou inadvertidamente. Em termos gerais, sempre que dois objectos entram em contacto um com o outro haver sempre uma transferncia de material entre eles. Assim, a anlise destes indcios pode levar sua identidade. 2. Princpio da correspondncia. Estabelece a relao entre os indcios e o autor dos factos. Por exemplo, se duas impresses digitais da mesma pessoa so detectadas numa arma quando foram disparadas dois projcteis pela mesma arma. 3. Princpio da reconstruo dos factos. Para deduzir a partir dos elementos encontrados na cena do crime, como ocorreu o acto. 4. Princpio de probabilidade. Deduz a possibilidade ou impossibilidade de ocorrncia de um fenmeno com base no nmero de caractersticas observadas. Outros cientistas forenses identificam apenas trs princpios fundamentais, a sua definio frequentemente confundida com o acima exposto: Princpio de uso; Princpio de produo; Princpio da segurana/certeza (ENCYCLOPEDIA OF FORENSIC SCIENCES, 2000).

Ser a Cincia Forense uma cincia subjectiva?

Ser a Cincia Forense uma cincia objectiva? O dicionrio define objectivo como isento ou independente de sentimentos pessoais, opinio, preconceito, etc.. Para que formar um Parecer ou uma opinio necessrio o total conhecimento das circunstncias do caso, esta a chave para uma correcta interpretao dos factos, etapa considerada a base da Cincia Forense. Tambm deve ser levado em conta que todas as amostras forenses so de certa forma imprevisveis aos protocolos analticos padronizados Finalmente, como j foi referido a Cincia Forense preocupa-se essencialmente com a reconstruo de eventos nicos. O uso da estatstica permite alguma objectividade Cincia Forense. A subjectividade desenvolveu uma conotao negativa no mundo moderno, mas necessrio relembrar que o valor da objectividade, tal como da beleza, est na mente de quem o realiza. Alm disso, a fronteira entre objectividade e subjectividade , em si mesmo subjectiva. Para ser verdadeiramente objectivo, necessrio ignorar a experincia passada e o contexto (ENCYCLOPEDIA OF FORENSIC SCIENCES, 2000). 21

A experincia passada e as circunstncias do caso so factores que os cientistas forenses usam como grande vantagem na formao de uma opinio perita. Os cientistas forenses devem ser objectivos, no sentido da imparcialidade, e dando a devida importncia s hipteses alternativas. No entanto, deve ser lembrado que o objectivo da Cincia Forense s pode existir num quadro de julgamento subjectivo.

Criminalstica Forense

A cincia e a tecnologia tm um papel fundamental na investigao, deteco e identificao da prova material, com vista identificao dos agentes do crime. O conjunto dos princpios cientficos e mtodos tcnicos aplicados na investigao criminal, para provar a existncia de crime e o "modus operandi", afinal o cerne de uma rea de conhecimento designada por Polcia Cientfica, ou melhor, Criminalstica Forense. No entanto, h uma necessidade premente no sentido de uma abordagem introdutria Criminalstica num contexto global, interdisciplinar e transdisciplinar (ANES, 1991). Assim Criminalstica Geral vista como a cincia que se ocupa dos princpios metodolgicos de explicao e interpretao da evidncia fsica, apoiados pela estatstica e probabilidade . O'Brien e Sullivan, (1978) vo mesmo ao ponto de identificar a Criminalstica Geral com a designao de Cincia Forense. De acordo com a definio de Villanueva Caadas (1996), Criminalstica a cincia que estuda os indcios deixados no local do delito, graas aos quais se pode estabelecer, nos casos mais favorveis, a identidade do criminoso e as circunstncias que concorreram para o referido delito. Segundo Pinheiro (2008), o interesse mdico-legal da criminalstica reside no facto de se procurar vestgios anatmicos, biolgicos ou humorais que permitam estabelecer a identidade do autor do crime. Todavia, os referidos vestgios encontrados na cena do crime so de natureza muito diversa e, por isso, para a sua recolha deveriam participar indivduos especializados, designadamente, polcias, mdicos, peritos em balstica e impresses digitais e tcnicos do laboratrio onde so efectuados os exames, ou indivduos com informao suficiente de forma a fazerem a colheita e o acondicionamento dos vestgios nas melhores condies.

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1.4. Cincia Forense, vestgio, evidncia, indcio e prova


Os conceitos de evidncia, vestgio, indcio e prova so vulgarmente usados no nosso quotidiano, sem que se faa uma correcta distino entre estes vocbulos, assim torna-se importante esclarecer o significado de cada um deles. Numa investigao criminal, aquando do exame do local do crime, so detectados objectos, marcas, ou sinais que puderam estar ou no associados ao delito em questo, estes so designados de vestgios. No entanto somente quando os peritos procederem a todas as anlises e exames complementares estaro habilitados a determinar quais os vestgios que verdadeiramente estaro relacionados com o crime em questo. Para que um destes elementos seja considerado um vestgio necessrio: o agente provocador, o suporte e o vestgio em si. Assim sendo, o vestgio produzido pelo agente provocador da aco num determinado objecto ou local (suporte) (ESPNDULA, 2006). Desta forma conclui-se que o vestgio tudo o que esta presente na cena do crime. Apesar da ampla compreenso tcnica da palavra vestgio para a criminalstica, o seu significado pelo Dicionrio da Lngua Portuguesa impresso que o homem ou o animal faz com os ps no local por onde passa; pisada; marca; rasto; pegada; sinal de coisa que sucedeu. O vestgio passa a denominar-se evidncia quando provado atravs de exames complementares que de facto est associado com o crime. A evidncia, segundo definio do Dicionrio da Lngua Portuguesa, : qualidade ou carcter do que evidente, que incontestvel, que todos podem ver ou verificar, certeza manifesta. Por sua vez, na criminalstica, evidncia significa qualquer material, objecto ou informao que est relacionado com a ocorrncia do delito. medida que a investigao progride para a fase processual, estas duas nomenclaturas (vestgio e evidncia) passam a denominar-se no meio judicial, de indcios. Segundo Espndula (2006): Vestgio todo objecto ou material bruto detectado e/ou recolhido no

local do crime para anlise posterior. Evidncia o vestgio depois de feitas as anlises, onde se constata

tcnica e cientificamente a sua relao com o crime. Indcio uma expresso, utilizada no meio jurdico, que significa cada

uma das informaes (periciais ou no) relacionadas com o crime.

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Apesar destas diferenciaes conceituais entre as trs expresses, comum observarmos a utilizao indistinta das trs palavras como se fossem sinnimos. O conceito de prova esclarecido no Decreto-Lei n. 48/2007 do Cdigo de Processo Penal, que define objecto da prova como: todos os factos juridicamente relevantes para a existncia ou inexistncia do crime, a punibilidade ou no punibilidade do arguido e a determinao da pena ou da medida de segurana aplicveis. Se tiver lugar pedido civil, constituem igualmente objecto da prova os factos relevantes para a determinao da responsabilidade civil.
1

Decreto-Lei n. 48/2007, de 29 de Agosto 15. alterao ao Cdigo de Processo Penal, aprovado pelo Decreto -Lei

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1.5. Idoneidade do vestgio

A Idoneidade no mais do que a garantia de o vestgio mantm as caractersticas necessrias para que possa tornar-se prova em Tribunal. Estas garantias so da responsabilidade de todos os intervenientes no processo (policias, especialistas forenses, entre outros). A importncia da idoneidade justifica a necessidade de seguir um protocolo rigoroso na abordagem ao vestgio. Este protocolo engloba a constatao, o registo, a identificao, exames e anlises necessrias para obteno de prova. Uma vez que pode comprometer todo o trabalho e, com isso, prejudicar o conjunto da investigao criminal e do processo judicial posterior. Muitos investigadores falham no modo como abordam a investigao de um crime, pelo simples facto de no capitalizarem o enorme potencial da evidncia (prova material). O investigador, para atingir os seus intentos de modo pleno, deve reflectir sobre: 1 - que tipo de evidncia se trata; 2 - como a obter e preservar; 3 - como obter a informao que ela encerra (elaborao dos quesitos); 4 - como interpretar a informao obtida (relatrios de peritagens). A evidncia pode ter forma e dimenses muito variveis. Pode ser constituda por armas, alavancas de ferro, fragmentos de engenhos explosivos, mas tambm, e o mais frequente, ser constituda apenas por vestgios de impresses digitais, pegadas, cabelos, pelos, vidros partidos, marcas de ferramentas, fragmentos de tinta, sangue, esperma, saliva, solo, fibras, etc., que o criminoso deixa ou com ele transporta, tornando-se tudo isto em testemunhas silenciosas. A evidncia factual, no se perjura a si prpria e que nunca est completamente ausente. S na sua interpretao pode haver erro, ou a incapacidade humana em encontrla e estud-la nos seus contornos mais volteis, lhe pode diminuir o seu valor. Muito se fala sobre a importncia do exame pericial, considerado no seu sentido amplo. Todavia, devemos levar em considerao que essa importncia est relacionada ao somatrio de pequenas partes de todo o conjunto dos exames periciais. O exame pericial num local de crime divide-se numa srie de rotinas e procedimentos, em que a relevncia representada por cada uma das fases deste exame pericial, no contexto da valorao da idoneidade do vestgio, que a matria-prima. Neste sentido importante que o perito tenha em ateno a possibilidade de existncia de vestgios verdadeiros, ilusrios e ou forjados e a capacidade de os 25

distinguir eficazmente, a sua anlise do local do crime de fundamental importncia para o sucesso da percia.

Vestgios verdadeiros

O vestgio verdadeiro uma depurao total dos elementos encontrados no local do crime, pois somente o so aqueles produzidos directamente pelos autores da infraco e, ainda, que resultem directamente das aces do delito em si (ESPNDULA, 2006). Para entendermos o que seriam esses vestgios da aco directa do delito, pode dizer-se que, p. ex., se o agressor coloca uma arma de fogo na mo da vtima para simular situao de suicdio, este um vestgio forjado e, portanto, no se trata de elemento produto da aco directa do delito em si.

Vestgios ilusrios

Alberi Espndula (2006) define vestgio ilusrio como todo elemento encontrado no local do crime que no esteja relacionado com as aces dos actores da infraco e desde que a sua produo tenha ocorrido de maneira no intencional. A produo de vestgio ilusrio no local de crime muito grande, tendo em vista a problemtica da falta de isolamento e preservao do local. Este o maior factor da sua produo, pois contribuem para isso desde os populares que transitam pela rea de produo dos vestgios, at os prprios elementos das polcias pela sua falta de conhecimento das tcnicas de preservao do local do crime.

Vestgios forjados

Por vestgio forjado entende-se todo elemento encontrado no local do crime, cujo autor teve a inteno de produzi-lo, com o objectivo de modificar o conjunto dos elementos originais produzidos pelos autores da infraco (ESPNDULA, 2006) tentando ludibriar os peritos e assim alterar o normal decurso da percia criminal podendo por at em causa toda a investigao e a identificao dos responsveis pela infraco. 26

1.6. reas da Cincia Forense

Dependendo do tipo de casos e das caractersticas do meio em que so cometidos, a equipa de investigadores varia, sendo constituda por especialistas nas mais diversas reas como as que aqui esto referidas. Por exemplo: - Antropologia
- Entomologia - Ondotologia - Patologia - Psicologia

Apesar destas serem as reas que mais vezes so requeridas em investigao, h que referir que por exemplo reas como a Meteorologia ou Engenharias podem ser necessrias.

Antropologia Forense

A Antropologia Forense a aplicao da Antropologia e da Osteologia (Estudo do Esqueleto humano) em situaes em que o corpo j est bastante decomposto . Os antropologistas forenses ajudam na identificao de cadveres que se encontrem ou decompostos, ou mutilados, ou queimados ou que sejam impossveis de reconhecer por diversas outras razes podendo desvendar a idade que tinham quando morreram, a sua altura, sexo, tempo decorrido desde a morte, doenas e leses traumticas para determinar a causa da morte do indivduo quer seja suicdio ou homicdio.

Entomologia Forense

A Entomologia Forense consiste no estudo de insectos, aracndeos, crustceos e muitos outros tipos de animais com propsitos forenses. Esse estudo ir permitir descobrir a data e local da morte ao serem analisados os animais encontrados na vtima bem como os ovos que podem ter depositado nesta. Alm disso como certos insectos so especficos a

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uma determinada estao do ano ou clima ser uma prova bastante conclusiva em tribunal em relao data e local da morte bem como para desmentir diversos falsos libis.

Odontologia Forense

A Odontologia Forense consiste na anlise e avaliao de provas com carcter dentrio podendo desvendar a idade das pessoas (caso sejam crianas devido dentio de leite) e a identidade da pessoa a que pertencem os dentes. Outro tipo de provas dentrias pode ser as marcas de mordeduras deixadas na vtima ou no assassino (devido a uma luta) ou num objecto deixado na cena do crime. Essas 38 marcas so tambm frequentemente encontradas em crianas que tenham sido vtimas de abusos sexuais. A Odontologia Forense tem no entanto sofrido as crticas de diversos especialistas que acreditam que esta no merece o carcter infalvel com que vista pois a comparao de marcas de mordeduras sempre subjectiva no havendo bases para comparao que tenham sido aceites no campo dessa medicina. No se procedeu tambm a nenhuma experincia rigorosa como forma de calcular as percentagens de erro dessa mesma comparao, uma parte chave do mtodo cientfico. Esta rea da Cincia Forense compreende diversos ramos de interveno que vo desde a avaliao do dano orofacial ps-traumtico (no mbito da clnica mdico-legal do direito penal, civil ou do trabalho), at identificao de indivduos mortos ou identificao de agressores, atravs das marcas de mordida (MAGALHES, 2003).

Patologia Forense

A Patologia Forense que se confunde com a Tanatologia Forense a rea da Cincia Forense mais preocupada em determinar a causa da morte de uma vtima. O mdico patologista, partindo do exame do local, da informao acerca das circunstncias da morte, e atendendo aos dados do exame necrpsico ou autopsia mdico-legal vitima, procura determinar: a identificao do cadver, o mecanismo da morte, a causa da morte, o diagnstico diferencial mdico-legal (acidente, suicdio, homicdio ou morte de causa natural). Santos (2003) afirma que Tanatologia Forense interessa desde logo o exame do local, as circunstncias que rodearam a morte, interessa tambm uma informao clnica o mais detalhada possvel com referncia ao resultado de exames complementares, interessa o estudo minucioso do cadver e os exames complementares que se entendam realizar no decurso da autpsia, por forma a poder-se elaborar um relatrio que ser enviado 28

autoridade judicial que requisitou a autpsia.

Psicologia Forense

A Psicologia Forense, apesar de no ter grande importncia na descoberta do assassino vai ser extremamente importante para determinar o motivo por trs do comportamento de um criminoso e em certos casos descobrir uma sequncia nos dos seus actos. Ser tambm extremamente importante em tribunal de forma a determinar a culpa ou inocncia de um suspeito sendo algumas vezes decisiva. Muitos advogados de defesa tentam salvar os seus clientes alegando que estes possuem problemas mentais ou que so insanos e psicologia que cabe o papel de verificar se isso verdade ou mentira.

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1.7. Referncias bibliogrficas

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30

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CAPTULO 2 CENA DO CRIME

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2. Cena do crime

Segundo Villanueva Caadas (1996) A cena do crime o lugar relacionado com a aco do crime a determinada altura e que deve ter deixado algum vestgio ou sinal do agressor ou algumas das caractersticas do acto.

2.1. Cena do crime, Protocolo da investigao forense


A mecnica de investigao do local do crime parece simples, mas na verdade um processo intrincado que relaciona mltiplas tarefas. Segundo Rudram (1996), cada cenrio de crime diferente e pode exigir uma abordagem diferente, contudo existe um protocolo de base que deve ser respeitado em todas as cenas crime.

O trabalho de um cientista forense pode ser visto atravs de cinco etapas do processo de evidncia fsica:

Figura 2-1 Processo de evidncia fsica (adaptado ENCYCLOPEDIA OF FORENSIC SCIENCES, 2000).

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O referido protocolo apresenta cinco etapas na investigao da cena do crime, em que existe uma grande interligao entre os vrios passos. Se a "teoria" do caso dita que o intruso fora a entrada na residncia atravs de uma janela, em seguida, o tcnico forense ter de analisar/examinar a rea da janela de forma obter os padres de calado, as evidncias das ferramentas usadas, evidncias biolgicas e impresses digitais latentes. Aps a concluso destes elementos de prova o tcnico ter de fotografar a sua localizao e possivelmente elaborar um esboo mostrando a localizao exacta das provas ou, talvez, um esboo do padro do calado. Esta combinao de todos os passos do protocolo continuar durante todo a investigao da cena do crime. Este protocolo dever ser utilizado em todas as cenas crime. Se a cena do crime um veculo roubado ou um mltiplo homicdio onde vrias cenas crime esto envolvidas o protocolo bsico o mesmo. O manuseamento posterior dos vestgios e objectos que constituem a prova material, deve ter em conta a manuteno da cadeia de custodia, a preservao em espcie e quantidade, e evitar qualquer contaminao com material estranho que possam confundir os elementos previamente recolhidos. No caso de acidentes com viaturas, comboios, avies, navios ou em destroos de indstrias sinistradas, o local da poro de material a recolher para anlise pericial nos laboratrios, deve ser fotografado antes e depois da colheita da amostra tendo como referncia os materiais circundantes, para se registar a sua posio exacta no contexto geral. Esta prtica impede o perjrio do local do crime em data posterior, quando novas recolhas se mostrem convenientes, face aos resultados analticos preliminares realizados pelos laboratrios forenses.

Ocorrncia da evidncia

O cientista forense est envolvido em todo o processo passando por cada uma destas etapas apresentados. A fundamentao pericial s estabelecida quando produzida a evidncia: - quando uma assinatura falsificada; - quando partculas de vidro so transferidas de uma janela partida para um par de luvas descartveis usadas por um ladro; - quando o sangue de uma vitima encontrado numa faca usada como arma de crime e persiste a uma lavagem imperfeita, entre outros exemplos. O conhecimento da ocorrncia de uma evidncia crucial para o desenvolvimento do processo, e assim passar fase seguinte.

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Anlise do local do crime

A anlise do local do crime engloba a entrevista, o exame, a fotografia e esboo.

Entrevista

A Entrevista o primeiro passo para a anlise do local do crime. O tcnico responsvel deve entrevistar o primeiro oficial que chegou ao local ou a vtima para verificar a "teoria" do caso. Basicamente o que teria acontecido, que crime ocorreu, e como o crime foi cometido. Esta informao pode no ser a informao factual, mas dar ao tcnico uma base a partir da qual se pode comear.

Exame O Exame da cena de crime a segunda etapa do protocolo. O objectivo verificar se a "teoria" do caso apoiada por aquilo que tcnico observa. O exame da cena permite identificar possveis pontos de entrada e de sada, ficando, assim, com o layout geral da cena do crime.

Fotografia

Fotografar a cena do crime o terceiro passo do protocolo. Fotografando o crime para gravar uma vista pictrica daquilo que se parece com a cena e para gravar itens de eventuais provas. Desenho da cena do crime a quarta etapa no protocolo. Um esboo spero completado pelo tcnico forense para demonstrar a disposio da cena do crime ou para identificar a posio exacta de vtimas ou de provas. O esboo da cena de crime no pode ser preenchido em todos os casos, no entanto ocorre na maioria dos casos.

Colheita

A colheita de evidncias constri-se nesta base. Por vezes, a recolha de evidncias simples e directa. Por exemplo pedaos de plstico partido de um automvel envolvido num acidente e posto em fuga; noutros tempos fazia parte da rotina prtica ()

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No local do crime, a localizao e posio relativa das evidncias tem um papel fundamental na reconstituio do evento/crime, portanto fundamental a gravao e documentao destas informaes.

Anlise

As evidncias recolhidas tm que ser analisadas. nesta fase do processo que a Cincia Forense entra no campo de outras cincias como a Qumica Analtica, Biologia Molecular, entre outras. Contudo, problemas nicos podem suceder porque os cientistas forenses lidam com amostras ou vestgios com histria desconhecida e muitas vezes degradadas, contaminadas ou outros desafios ambientais. Adicionalmente, as quantidades recolhidas no so as ideais que permitam mtodos analticos ou clnicos estandardizados, portanto, os cientistas forenses vem-se obrigados a criar protocolos analticos que vo de encontro s suas

necessidades/circunstncias especiais.

Interpretao

A interpretao a quarta fase deste processo, a base da Cincia Forense. Baseado nos resultados do exame ao local o cientista forense desenha as concluses da sua interpretao emitindo um Parecer tcnico. Para permitir uma correcta interpretao da evidncia, o cientista forense sente a necessidade de possuir um completo conhecimento do caso e de todas as circunstncias envolventes. Antes considerava-se que o cientista forense deveria trabalhar isolado do resto da investigao, defendia-se que com conhecimento de todos os detalhes do crime o cientista iria perder a objectividade. Actualmente, j reconhecido que a interpretao s poder ser valorizada quando devidamente contextualizada (ENCYCLOPEDIA OF FORENSIC SCIENCES, 2000).

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Apresentao

A etapa final de Apresentao sumariza todo o processo de evidncia fsica. A Apresentao, na maioria das vezes assume a forma de um relatrio

laboratorial e tambm pode envolver, em tribunal, depoimentos de especialistas no assunto em causa.

2.2. Cadeia de custdia

As possibilidades tcnicas de realizao de uma prova pericial esto sujeitas qualidade das amostras, o que, em muitos casos, inerente prpria amostra. Porm, muitas vezes, a qualidade depende dos processos de colheita e de armazenamento destas amostras at a chegada ao laboratrio para anlises. Acrescente-se que a admissibilidade e a robustez das provas nos tribunais dependem sobretudo de como foram realizados os ditos processos e do cumprimento da cadeia de custdia (SHIRO, 1998).

A cadeia de custdia o processo que conduz a uma inspeco, cuidado e responsabilizao da qualidade dos indcios para que fiquem salvaguardadas a sua autenticidade e a integridade em todo o processo (BONACCORSO, 2004). Tendo sempre em conta a cadeia de custdia na prtica forense fica garantido que o indcio encontrado na cena do crime o mesmo que se apresenta como prova em julgamento perante uma autoridade judicial (MONTER, 2008)

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2.3. Referncias bibliogrficas

BONACCORSO, N. - Anlise Forense de DNA. So Paulo: Editora Fittipaldi, 2. Edio, 2004.

Collection and preservation of evidence. Shiro, G. Louisiana: State Police Crime Laboratory, [1998].

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MONTER, P. Introduccin a la Criminalstica de campo y de Laboratorio. Ciencia forense.cl rev on line de criminalstica (2008).

VILLANUEVA CAADAS, E. ACOSTA, M. ACOSTA J.- La tecnologa del ADN en Medicina Forense: Importancia del indicio y del lugar de los hechos. Cuadernos de Medicina Forense. [S. l.: s. n.]: 3 (1996).

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CAPTULO 3 VESTGIOS BIOLGICOS FORENSES

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3. Vestgios biolgicos forenses

A anlise de vestgios (alguns definem por "traciologia ") inclui manchas de sangue, cabelos, plos e outros que possam levar descoberta de criminosos, como smen, saliva, urina, fezes, ossos, peas dentrias (COSTA, 2008).

3.1. Mtodos gerais de deteco de vestgios biolgicos na cena do crime

3.1.1. Utilizao de fontes de luz

A Espectroscopia a designao para toda a tcnica de levantamento de dados fsico-qumicos atravs da transmisso, absoro ou reflexo da energia radiante ou luz incidente numa amostra. Fontes de luz especiais so usadas na rea forense com a inteno de revelar indcios que no so visveis a olho nu sob a luz ambiente. A mesma fonte de luz pode ser usada para fotografar os vestgios, ou simplesmente para indicar a sua localizao fsica permitindo assim a sua colheita. Essas provas podem ser "invisveis" por vrias razes. Por exemplo, pode haver apenas um rasto, como uma pequena gota de sangue ou um nico cabelo. O material pode ser incolor, como uma mancha de smen. As fontes de luz podem ser usado para revelar essas evidncias, quer por fluorescncia quer por contraste. A ideia, em ambos os casos melhorar a visibilidade do prprio vestgio e/ou tornar o fundo mais escuro quando a cena varrida com a fonte luminosa. A fluorescncia um fenmeno em que um determinado objecto absorve a luz de um determinado comprimento de onda emitindo em seguida e praticamente em simultneo uma cor diferente. A cor emitida sempre o vermelho. Assim, a luz reflectida e espalhada na ausncia de material fluorescente, quase completamente obstruda, permitindo uma maior visibilidade de objectos fluorescentes. (Figura 3-1)

COSTA, 2008

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Filtro Fluorescncia

Luz incidente

Luz difundida
Figura 3-1 - Quando uma impresso digital ou outro vestgio fluorescente so iluminados por uma luz verde (ou azul), a fluorescncia facilmente distinguvel pela luz difundida usando um filtro laranja (Guffey, 2008).

A primeira fonte de luz usada na rea forense foi a chamada "luz negra". O formato de uma lmpada de luz negra parecido com o de uma lmpada fluorescente, com algumas modificaes importantes. As lmpadas fluorescentes geram luz passando electricidade atravs de um tubo cheio de gs inerte e uma pequena quantidade de mercrio. Quando so electrizados, os tomos de mercrio emitem energia na forma de fotes de luz. Eles emitem alguns fotes de luz visvel, mas emitem principalmente fotes na faixa de onda ultravioleta (UV). As ondas de luz UV so curtas demais para que possamos v-las, sendo completamente invisveis. Desse modo, as lmpadas fluorescentes precisam converter essa energia em luz visvel. Elas fazem isso com um revestimento de fsforo ao redor do exterior do tubo. O fsforo uma substncia fosforescente. Quando um foto atinge um tomo de fsforo, um dos electres do fsforo salta para um nvel de energia mais alto, fazendo com que o tomo vibre e gere calor. Quando o electro retorna para seu nvel normal, liberta energia na forma de outro foto. Esse foto tem menos energia do que o foto original porque parte da energia foi perdida na forma de calor. Numa lmpada fosforescente, a luz emitida est no espectro visvel o fsforo emite a luz branca que podemos ver. A luz negra funciona por esse mesmo princpio. H, na verdade, dois tipos diferentes de luz negra, mas funcionam do mesmo modo: Uma luz negra de tubo uma lmpada fluorescente com um tipo diferente de revestimento de fsforo. Esse revestimento absorve as ondas nocivas de luz UV-B e UV-C e emite luz UV-A, do mesmo modo que o fsforo numa lmpada fluorescente absorve a luz 44

UV e emite luz visvel. O prprio tubo de vidro "negro" bloqueia a maior parte de luz visvel, de modo que somente a luz UV-A de onda longa, que benigna e alguma luz visvel azul e violeta passam por ele. Uma lmpada de luz negra incandescente similar a uma lmpada domstica normal, mas usa filtros de luz para absorver a luz do filamento aquecido. Estes absorvem tudo excepto a luz infravermelha (IV) e UV-A, alm de um pouco da luz visvel. Nesses dois modelos de luz, a luz UV emitida reage com o fsforo externo exactamente do mesmo modo que a luz UV dentro de uma lmpada fosforescente reage com o revestimento de fsforo. O fsforo externo brilha enquanto a luz UV incide sobre ele. Assim, a lanterna de luz negra revela, basicamente, tudo o que contm fsforo, ou seja, os fluidos corporais, cabelos, fibras, entre outros vestgios. Para os fluidos corporais, como o smen, a saliva e fluidos vaginais, este tipo de luz o nico mtodo de revelao. Usando um contraste com radiao visvel, como por exemplo os culos cor-de-laranja, a deteco dos vestgios ainda mais fcil. Para cabelos e fibras, os investigadores utilizam dois tipos de iluminao: uma luz branca muito forte oblqua e paralela superfcie para revelar pequenos vestgios e permitir a colheita. Mas alguns fios de cabelo e fibras s aparecero sob radiao UV, sendo mais segura a colheita. Depois de amplamente utilizada a luz negra veio a fonte de luz alternativa (ALS), que era basicamente uma fonte de luz branca que emitia prximo da gama do visvel e ultravioleta, adicionando alguns filtros de luz. Mais recentemente, estes sistemas baseados na lmpada foram substitudos pelos sistemas de segunda gerao de ALS baseada em LEDs (Light-Emitting Diode). Cada LED nestes sistemas pode ser activada ou desactivada, dependendo da necessidade, assim, permite emitir mais de uma cor de diferentes comprimentos de onda.

Actualmente existem vrios produtos qumicos com a funo de auxiliar os peritos forenses na investigao do local do crime. Estes qumicos reagem com os vestgios de forma a torna-los visveis facilitando a sua deteco, identificao, colheita e documentao.

45

3.1.1.1.

Alguns exemplos de aparelhos de deteco

Existem

inmeros

aparelhos

utilizadores

de

fontes

de

luz

alternativas

comercializados actualmente. Alguns exemplos dos mais utilizados na rea forense: UltraLite-ALS de CAO Group INC., uma fonte de luz alternativa usada para encontrar, processar, documentar e preparar a evidncia forense para o processamento criminal. Permite seleccionar cabeas de luz com intensidades e filtros de luz diferentes dependendo do tipo de local de crime a investigar e quais os vestgios a detectar. Um exemplo a Blue-Merge Technology (BMT), uma cabea de luz que possibilita uma combinao de vrios comprimentos de onda para optimizar a investigao forense.

Figura 3-2 - Cabea de luz azul BMT e os culos mbar (http://www.ultralite-als.com/)

Alm da cabea de luz Azul BMT existem outras com diferentes comprimentos de onda, a cabea de 405 nanmetros UV produz luz prxima do ultravioleta (UV) com filtros mbar, a cabea de 525 nanmetros VERDE, produz uma luz que est na poro do verde no espectro visvel, mais usada para impresses digitais, a cabea de 590 nanmetros AMARELA, esta cabea com filtro mbar usada para detectar fibras e plos, e a cabea de 630 nanmetros VERMELHA. Em cincias forenses os comprimentos de onda mais curtos, como 450 nanmetros (nm), so os mais teis na deteco de fluidos corporais, fragmentos de ossos e dentes, marcas mordedura e hematomas. Embora os comprimentos de onda mais longos, como 480 nanmetros (nm), sejam mais teis para detectar rastos e impresses digitais. Para proceder deteco dos vestgios no local de crime necessrio seleccionar um sistema de filtros de luz em vidro.

46

Figura 3-3 - Fragmentos de ossos humanos e dentes, na imagem da esquerda no usada nenhuma fonte de luz nem filtro, assim os vestgios em causa misturam-se com a areia e a gravilha; na figura da direita a mesma imagem com a cabea BMT mbar (http://www.ultralite-als.com/).
TM

com filtro de

Figura 3-4 - Deteco de Fluidos corporais, saliva sobre ganga, na imagem da esquerda a mancha imperceptvel (imagem sem fonte de luz alternativa nem filtro), o vestgio visvel na imagem direita quando usada a cabea BMT TM com filtro de mbar (http://www.ultralite-als.com/).

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Figura 3-5 - Deteco de Fluidos corporais, smen num lenol de cama, na imagem da esquerda a mancha demasiado tnue para ser visvel a olho nu (imagem sem fonte de luz alternativa nem filtro), o vestgio visvel na imagem direita quando usada a cabea BMT TM com filtro de mbar (http://www.ultralite-als.com/).

Figura 3-6 - Deteco de Fluidos corporais, urina num lenol de cama, na imagem da esquerda a mancha demasiado tnue para ser visvel a olho nu (imagem sem fonte de luz alternativa nem filtro), o vestgio visvel na imagem direita quando usada a cabea BMT TM com filtro de mbar (http://www.ultralite-als.com/).

Sistema Crimescope O crimescope, ou fonte de luz de uso forense, um instrumento precioso na busca de vestgios como plos, fibras, impresses digitais, amostras biolgicas. A j conhecida "luz azul" usada numa cena de crime apenas uma das muitas funcionalidades deste aparelho. Atravs do uso de luzes com diferentes comprimentos de onda (UV, infravermelhos, visvel), 48

o vestgio pode ser encontrado, mesmo aqueles que o olho humano no pode ver sem o auxlio de tecnologia. Esta fonte luminosa tambm porttil e pode ser levado cena do crime, sem ter que remover provas do local original; que pode ser extremamente importante. (FACT - http://www.abqcrimelab.com/) CrimeScope, Mini-CrimeScope e HandScope so fabricados em Edison, NJ, E.U.A. por JY Inc. SPEX Diviso Forense. Aplicaes: detecta impresses digitais, fluidos corporais, danos da pele humana (marcas de mordida e hematomas), pegadas, resduos humanos, fragmentos sseos, drogas, fibras, plos, entre outras (http://www.crimescope.com/).

Figura 3-7 Do lado esquerdo est representado um HandScope; do lado esquerdo um MiniCrimeScope. (www.evidentcrimescene.com/cata/spex/spex.html).

Outros exemplos de sistemas utilizadores de fontes de luz alternativa so as lanternas BLUEMAXX da SIRCHIE. Estas lanternas portteis so capazes de tornar fluorescentes, ou fazer com que emitam luz, certos materiais de interesse forense - incluindo fluidos fisiolgicos (tais como urina, smen e saliva), certas drogas e materiais tratados com certos ps e corantes fluorescentes. Eles so especialmente teis como instrumentos para localizar evidncias para subsequente colheita e anlise atravs de buscas na rea do crime.

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Figura 3-8 Lanternas BLUEMAXX (http://www.conecta190.com. Acesso a 18 Setembro 2008).

3.1.2. Fotografia Digital

A recente utilizao de fotografia digital com o uso de luz Ultravioleta e Infravermelha (UV/IR) aparece como grande ajuda aos peritos forenses. Desde a era digital por volta de 2000, cientistas e tcnicos forenses na comunidade, mdicos e professores universitrios comearam a procurar formas criativas de adaptar esta nova tecnologia s suas reas de investigao. Inevitavelmente, uma srie de talentosos investigadores forenses virou a sua ateno para o problema da projeco digital de imagem UV/IR. Em princpio, no tanto do ponto da velocidade e da melhoria da qualidade, mas simplesmente por se tratar de um mtodo moderno e acessvel.

50

Figura 3-9 Do lado esquerdo est representado uma foto da amostra no modificada; no lado direito est a foto da mesma amostra mas com filtros UV/IR (Disponvel em: www.Fujifilm.com Acesso a : 12 de Dezembro 2007).

Na fotografia do lado direito ficam bem perceptveis as manchas de sangue enquanto que na fotografia do lado esquerdo so praticamente invisveis. E tudo isto observado em tempo real, sendo assim trata-se de uma mais-valia para os peritos, permitindo-lhes a deteco e identificao de evidncias fsicas, incluindo pele lesionada, resduos qumicos e fibras, e manchas de vestgios biolgicos. A capacidade de observar e identificar os detalhes no escuro em contraste tambm de grande ajuda em diferentes cenrios de crime.

3.1.3. Tecnologia laser

A Tecnologia Laser tambm utilizada na rea forense. Esta tecnologia permite varrer o local do crime procura de diferentes tipos de evidncias forense, num curto espao de tempo, fundamental para o sucesso de uma percia, especialmente porque a maioria dos cenrios de crime degradam-se com o tempo. Guffey (2008) afirma que num nico exame com este laser pode capturar todos os tipos possveis de vestgios (biolgicos, fibras, plos, etc), com maior sensibilidade e eficcia que as mltiplas buscas com filtros convencionais com alteraes tpicas da fonte de luz alternativa (ALS), como o caso das cmaras digitais. Juntamente com o facto de este novo 51

tipo de laser ser de manuseamento fcil sem exigir grande experincia, isto significa que o local do crime pode ser processado muito rapidamente, com o mnimo de pessoal e baixo oramento. A principal vantagem do laser sobre as ALS e outras fontes que as outras fontes de luz emitem uma grande gama de cores, j o laser emite toda a intensidade da sua luz numa nica cor. Alm disso, com apenas alguns watts de potncia, o laser pode dar resultados muito melhores do que uma lmpada com um quilowatt de energia. Igualmente importante, que se ultrapassa a necessidade de seleccionar qual a cor e filtros e filtro a usar. Antigamente esta tecnologia de raios laser era muito grande, pesada, cara e complexa demais para o amplo uso em medicina forense. Alm disso, era necessria uma linha de energia, e muitas vezes uma fonte de gua para arrefecimento. Actualmente existe laser verde e compacto, que usa tecnologia OPS (semicondutor de bombeamento ptico/ estabilizao ptica de Imagem). Eles produzem uma intensa luz verde, mos livres, baterias, ferramentas, e so to fceis de usar como uma lanterna. Em alguns modelos, a bateria pode ser carregada novamente a partir do isqueiro do veculo e no caminho para o local do evento.
TM

Exemplos deste tipo de tecnologia so: o laser de rgon de SceneSweeper Leica ScanStation 2 scanner laser.

e o

Figura 3-10 Exemplo de um aparelho que usa a tecnologia laser (GUFFEY, 2008)

52

Figura 3-11 Exemplo de um aparelho que usa a tecnologia laser, Leica ScanStation 2 scanner laser (Disponvel em: www.leica-geosystems.com, acesso a: 23 Setembro 2008).

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3.2. Vestgios biolgicos forenses: o Sangue

O sangue um dos vestgios biolgicos mais comuns em qualquer cena de crime. Assim sendo o perito forense est bastante familiarizado com este tipo de vestgio, sendo um dos seus objectivos na anlise da cena do crime a deteco de evidncia de sangue. Existem situaes em que a mancha de sangue evidente. Quando se localiza, por exemplo, prximo ao corpo alvejado por um disparo de arma de fogo. Contudo, h casos em que a mancha no explcita. Existe a possibilidade, tambm, de que o criminoso limpe a cena do crime.

3.2.1. Sangue, Constituio e funes

Sendo responsvel por cerca de 8 % (em mdia) da massa corporal humana, o sangue pode ser descrito como uma mistura de vrios componentes, de entre eles destacam-se as clulas, protenas, substncias inorgnicas (sais) e gua. Cerca de 55 % (em volume) do sangue o que denominamos de plasma constitudo principalmente por gua e sais dissolvidos. Os componentes slidos so: eritrcitos, leuccitos e plaquetas com funes especficas no nosso organismo.

Figura 3-12 - Constituintes do sangue (Disponvel em: http://www.cienciasbiologicas.org/sangue2.jpg acesso a 22 de Outubro de 2008).

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O sangue tem inmeras funes. De destacar o transporte dos gases, oxignio e dixido de carbono pelo nosso corpo. Ele medeia a troca de substncias entre rgos e transporta os produtos metablicos. O sangue tambm distribui hormonas por todo o organismo. A homeostasia tambm funo do sangue. A manuteno da temperatura corporal realizada com sua ajuda, pois o calor transportado pelo sangue. Alm disto, o equilbrio cido-base regulado por ele em combinao com os pulmes, fgado e rins. Tambm a defesa contra agentes patognicos e auto-proteco, fenmeno conhecido como coagulao e que evita a perda excessiva do fluido vital, so da sua responsabilidade.

3.2.2. Estudo forense do sangue


O estudo deste vestgio biolgico forense crucial na investigao de um crime. O resultado deste estudo muitas vezes o principal responsvel pela resoluo de inmeros crimes.

3.2.2.1.

Anlise macroscpica e colheita

As caractersticas do suporte da amostra devem ser relatadas atravs da sua descrio, como, por exemplo, o material em que confeccionado, cor e estado de conservao. As manchas devem ser localizadas e descritas quanto ao aspecto e tamanho. Deve ser verificado se apresenta quantidade suficiente ao exame, a possibilidade de ter sido lavada, se est livre de contaminaes, bem como as possveis dificuldades quanto a sua extraco para anlises de Biologia molecular. No local do crime, deve ser colhida e guardada de forma a evitar contaminao e/ou deteriorao (SCHULLER et. al., 2001).

Colheita dos vestgios

Se o sangue se encontra em estado lquido deve colhido com auxlio de tiras

de papel absorvente ou zaragatoa estril. As tiras devem estar completamente secas (a temperatura ambiente) antes de serem guardadas em envelopes de papel; a zaragatoa 55

deve colocar-se no seu suporte de transporte; Se o sangue estiver seco, pode ser solubilizado em soro fisiolgico,

colhido e guardado como a tcnica descrita no item anterior. Outra alternativa realizar a raspagem do suporte removendo a crosta (SCHULLER et. al., 2001).

Anlises macroscpicas

Fazer a triagem das manchas, localizando-as no suporte, no caso das

manchas terem sido lavadas, utilizar, reaces de luminescncia como descrito anteriormente; Descrever o suporte e a mancha; Observar se a mancha encontrada em quantidade suficiente para as

anlises ou se apresenta contaminao; Escolher o teste a ser utilizado de acordo com as anlises macroscpicas; As solues devem ser testadas com controlos negativos e positivos

(SCHULLER, 2001).

3.2.2.2.

Testes presuntivos

Esses testes so reaces de oxidao que podem detectar a presena de sangue atravs de cor ou luminescncia. Eles no so especficos para sangue, podendo dar falso-positivo com outras substncias (extractos vegetais, pus, saliva e outros fluidos orgnicos nas reaces de cor e compostos de ferro e cobre nas reaces de luminescncia). Porm, a reaco negativa excludente. Quanto sensibilidade, depende do tipo de teste e outros factores. Por exemplo, o tipo de tecido pode influenciar a sensibilidade, tecidos mais absorventes, devido a sua reteno, apresentam melhores resultados (SCHULLER et. al., 2001).

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Reaces de cor

Nestes testes so usados perxido de hidrognio e um reagente que funciona como indicador, pois o grupo heme actua sobre o perxido liberando oxignio que oxida o indicador formando um composto corado.

Reaces de luminescncia

As molculas do sangue podem ser excitadas quimicamente atravs de fluorocromos produzindo luminescncia por reaco de oxidao com o grupo heme.

Reaco das Oxidases

gua oxigenada sobre a mancha suspeita (produz "efervescncia" quando positivo).

3.2.2.2.1. Reaces de cor: Reagente de Kastle-Meyer

O reagente de Kastle-Meyer constitudo por uma mistura de substncias. Um exemplo de proporo seria: 0,1 g de fenolftalena, 2,0 g de hidrxido de sdio (sob a forma de pellet), 2,0 g de p de zinco metlico e 10 mL de gua destilada. Na Figura 3-13 temos as reaces que ocorrem tanto no processo de produo do reagente como nas que ocorrem quando ele aplicado na suposta mancha de sangue. Para realizar o procedimento de deteco, macera-se a mancha ou a crosta com 1 mL de gua destilada ou hidrxido de amnio concentrado. Em seguida, selecciona-se duas gotas do macerado e, aps coloc-las num tubo de ensaio, misturam-se duas gotas do reagente. Por fim, adicionam-se soluo duas gotas de perxido de hidrognio a 5%.

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Figura 3-13 Reaces referentes ao reagente de Kastle-Meyer (KOOLMAN e ROEHM, 2005).

Na figura anterior [Figura 3-13], em [1], temos a reaco entre o p de zinco e o hidrxido de sdio. O produto de interesse o hidrognio formado, que garantir a forma incolor da fenolfatelna [2]. Se a amostra for de sangue, esta ter, necessariamente, hemoglobina, a qual possui a caracterstica de decompor o perxido de hidrognio (comportamento de peroxidase) em gua e oxignio [3]. Ento, este oxignio promover a forma colorida da fenolftalena, evidenciando ao perito que a amostra pode conter sangue. A molcula de hemoglobina est presente nos eritrcitos e carrega consigo complexos inorgnicos, tendo como tomo central um io de ferro, complexo este denominado "Heme" (ver Figura 3-14).

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Figura 3-14 Representao da (esquerda) hemoglobina e (direita) complexo heme. (KOOLMAN e ROEHM, 2005).

Diferentemente da mioglobina, que tambm exerce papel no transporte de oxignio e possui apenas um grupo heme, a hemoglobina possui quatro grupos. Este complexo ir ser responsvel pela fixao e transporte do oxignio, uma vez ligado estrutura protica da hemoglobina e esta, por sua vez, promove a movimentao de toda a estrutura. Cada hemoglobina carrega quatro molculas de gs oxignio por vez, visto que existem quatro complexos heme ligadas a ela. A ligao do complexo com o oxignio fraca e instvel, dependendo de uma srie de factores, como pH, temperatura e presso parcial dos gases dissolvidos no sangue. neste stio activo com io ferro que ocorre e decomposio do perxido de hidrognio. Causas de erro no mtodo incluem a presena de sais de ferro, cobre, suco gstrico ou qualquer outra substncia capaz de decompor a molcula de H2O2 em gua e oxignio. A sensibilidade deste reagente de 1/1.000.000.

3.2.2.2.1. Reaces de cor: Reagente de Adler-Ascarelli ou Benzidina

O reagente de benzidina, tambm conhecido como Adler-Ascarelli, tambm uma mistura de substncias. Uma proporo possvel seria: 0,16 g de benzidina cristalizada, 4 mL

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de cido actico glacial e 4 mL de perxido de hidrognio de 3 a 5 %. O procedimento consiste em macerar a mancha de sangue em 1 mL de gua destilada ou em cido actico glacial. Em seguida, separam-se duas gotas do macerado e adicionam-se a estas, em tubo de ensaio, duas gotas do reagente recentemente preparado. Da mesma forma que o reagente de Kastle-Meyer, o reagente de benzidina baseiase na catlise da decomposio do perxido de hidrognio em gua e oxignio pela hemoglobina presente no sangue. O oxignio formado ir oxidar a benzidina, alterandolhe sua estrutura, fenmeno que perceptvel, sob o ponto de vista experimental, com o aparecimento da colorao azul da soluo (Figura 3-15).

Figura 3-15 - Reagente de Benzidina e o produto de colorao azul (KOOLMAN e ROEHM, 2005).

Por se tratar de um reagente que se decompe rapidamente em soluo, recomenda-se que a preparao do mesmo seja feita no momento em que ele ser usado . Sugere-se o teste com sangue diludo (controlo positivo) e gua destilada (controlo negativo). A sensibilidade deste reagente de 1/2.000.000 (ESPNDULA, 2006).

3.2.2.2.1. Reaces de luminescncia: Reagente de Luminol

O Luminol clssico dos exames presuntivos. O 5-amino-2,3-di-hidro-1,4ftalazinadiona, mais conhecido por luminol, um composto que, sob determinadas condies, pode fazer parte de uma reaco quimioluminescente, desenvolvido pela Proescher & Moody, cujo kit fabricado pela Microchemical Specialties Co., de Berkeley, CA, USA. Uma das formas de obt-lo a partir do cido 3-nitroftlico, conforme mostra a Figura 3-16. 60

Figura 3-16 Sntese do Luminol (KOOLMAN e ROEHM, 2005).

O luminol foi sintetizado pela primeira vez em 1853. Embora a sua capacidade para produzir uma reaco quimioluminescente, em soluo bsica na presena de um agente oxidante e em contacto com o sangue s tenha sido observada por Albrecht em 1928 (KOOLMAN e ROEHM, 2005). As primeiras experincias com vista utilizao do luminol como ferramenta em Cincia Forense foram realizadas em 1937 por Spech't, que testou este reagente numa variedade de bases, como a erva, tijolos, pedras e num pano com sangue. Em 1939, a Moody e Proesher testaram a hiptese de Spech't no sangue humano e animal (KOOLMAN e ROEHM, 2005; WATKINS et. al., 2008). Em 1951, Grodsky prope uma mistura de p feito de luminol, carbonato de sdio e perborato de sdio misturado com gua destilada (WATKINS et. al., 2008). Esta mistura tornou-se a frmula, que actualmente, vulgarmente utilizada por peritos forenses para detectar vestgios de sangue na cena de um crime. Na cena do crime nem sempre h evidncias visveis de sangue. Algum poderia, por exemplo, limpar o local, a fim de encobrir o acontecido. Porm, o luminol reage com quantidades muito diminutas de sangue. A sua sensibilidade pode chegar aos impressionantes 1/1.000.000.000, mesmo em locais com azulejos, pisos cermicos ou de madeira, os quais tenham sido lavados. A eficcia do produto to grande que possvel a deteco de sangue mesmo que j se tenha passado algum tempo da ocorrncia do crime. A reaco qumica produzida no afecta a cadeia de DNA, permitindo o reconhecimento dos criminosos ou das vtimas. Por isto, ele recomendado para locais onde h suspeita de homicdio e superfcies que, aparentemente, no exibam traos de sangue (Figura 3-17).

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Figura 3-17 - Exemplo de um ambiente sem e com luminol (esquerda) e as marcas de um calado realadas pela quimioluminescncia do luminol (ESPNDULA, 2006).

A reaco do luminol com perxido de hidrognio em gua necessita de um catalisador redox. Uma grande variedade de metais de transio pode ser usada para este fim. No caso do teste para a presena de sangue, este catalisador o io do elemento ferro que est presente nos grupos heme da hemoglobina. O ferro oxida o luminol [1] (veja Figura 3-18) em diazoquinona [2], a qual sofre a aco do anio de perxido de hidrognio, formando o endoperxido [3]. Este ltimo perde azoto (uma molcula muito estvel) e forma o di-anio cido 3-aminoftlico no estado excitado [4], o qual decai para o estado fundamental [5], processo acompanhado pela emisso de radiao por fluorescncia do 3-aminoftalato com comprimento de onda de aproximadamente 431 nm.

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Figura 3-18 - Mecanismo esquemtico da oxidao de luminol por perxido de hidrognio em meio aquoso, catalisado por metais de transio (Mn+) (KOOLMAN e ROEHM, 2005).

Os humanos percebem as cores da radiao electromagnticas pela viso, se esta estiver na estrita faixa de comprimento de onda que vai de 400 a 700 nm, aproximadamente (Figura 3-19). Uma rpida observao no espectro electromagntico mostra que a cor da luz emitida pelo processo de quimioluminescncia do luminol atravs da oxidao com perxido de hidrognio azul. Esta cor pode variar dependendo de qual agente oxidante se utiliza. Por exemplo, usando-se dimetilsulfxido ao invs de perxido de hidrognio, o comprimento de onda da luz emitida ser de 502 nm, o qual est associado cor verde. 63

Figura 3-19 O Espectro Electromagntico (NAIRNE, 2004).

Este reagente apresenta alguns inconvenientes, entre eles o uso de carbonato de sdio que produz uma reaco lenta no processo de oxidao da hemoglobina. Por isso, a reaco no muito brilhante e de curta durao . Alm disso, uma vez que os agentes reactivos se dissolvem na gua, a vida da soluo resultante muito curta. Esta frmula muito instvel e txica devido presena de perborato de sdio.

Sistema Luminol da BlueStar Forensic

Em 2000, Jean-Marc Despeaux, presidente da BlueStar, encarregou o Professor de bioqumica na Universidade Claude Bernard Lyon, Dr. Loic Blum, de encontrar um nova frmula baseada no luminol mas sem as suas muitas desvantagens. Como resultado, Blum descobriu esta nova frmula que mais tarde foi chamado Bluestar Forensic (LEFEBVRE-DESPEAUX, 2005). O BlueStar usado para a deteco de sangue humano. Esta nova formula no danifica o DNA, no apresenta qualquer perigo para o operador, j que no cancergeno e 64

biodegradvel. (GROSS et. al., 1999; BUDOWLE, 2000; LAUX, 1991). As manchas invisveis de sangue reagem imediatamente com o Bluestar Forensic provocando uma intensa reaco azulada luminescente, visvel na escurido directamente a olho nu, a 430nm de comprimento de onda. Alm de isto, pode ser usado em muitas superfcies, apresentando bons resultados mesmo quando tratadas com detergentes (DILBECK, 2006). O procedimento muito simples porm primeiro necessrio preparar as reas suspeitas, seguindo os passos abaixo: 1 - necessrio escurecer a rea. 2 - O tcnico deve usar uma roupa especial para evitar a contaminao. 3 - Preparao do reagente: adicionar trs pastilhas no frasco de soluo lquida fornecida no kit.

Figura 3-20 Kit de reagente BlueStar (Bluestar Forensic Users Manual. ROC Import Group, MonteCarlo. Disponvel em www.bluestar-forensic.com, acesso a 23 de Outubro 2008)

4 - Alguns minutos mais tarde, o tcnico tem de verificar a eficcia do produto produzido por uma amostra de sangue como controle positivo. 5 - A partir deste momento, o tcnico pode usar o reagente sobre qualquer superfcie. O tcnico deve usar o pulverizador a aproximadamente 50 cm da superfcie. A cor azul luminescente indica a presena de sangue. Esta luminescncia comea a perder intensidade depois de um minuto e recupera a intensidade aps uma nova pulverizao.

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Figura 3-21 A imagem representa o procedimento correcto de utilizao do reagente BlueStar (Bluestar Forensic Users Manual. ROC Import Group, Monte-Carlo. Disponvel em www.bluestar-forensic.com, acesso a 23 de Outubro 2008)

Deve seguir-se o mesmo procedimento numa rea sem sangue, que servir como controle negativo.

Figura 3-22 Um exemplo prtico do uso do reagente BlueStar em que houve um disparo de um tiro a partir da janela do condutor de um veculo sobre um peo. As anlises foram feitas 75 dias aps o assassinato. O carro foi meticulosamente limpo pelo suspeito, estacionado na rua, sob condies climticas adversas. Atravs da pulverizao com este reagente foi possvel detectar vestgios luminescentes. Os testes confirmatrios atestaram que a amostra de sangue detectada no veculo pertencia vtima (Bluestar Forensic Users Manual. ROC Import Group, Monte-Carlo. Disponvel em www.bluestar-forensic.com, acesso a 23 de Outubro 2008).

As vantagens deste reagente sobre o Luminol so bvias e foram feitos vrios estudos que provam a maior eficcia do BlueStar em detrimento do Luminol. Concluindo, o reagente BlueStar foi inventado para ser excepcionalmente melhor 66

que o luminol, uma vez que permite maior facilidade na mistura do reagente, no necessita de total escurido e apresenta uma boa intensidade aps a pulverizao inicial (Dilbeck, 2006).

Figura 3-23 Superfcie de cermica pulverizada com BlueStar . O lado esquerdo: o sangue foi limpo com gua. Na direita: o sangue foi limpo com lixvia (DILBECK, 2006).

Figura 3-24 Superfcie de cermica pulverizada com Luminol. O lado esquerdo: o sangue foi limpo com gua. Na direita: o sangue foi limpo com lixvia (Dilbeck, 2006).

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Figura 3-25 Camisa de algodo pulverizada com BlueStar aps lavagem (Dilbeck, 2006).

Figura 3-26 Camisa de algodo pulverizada com Luminol aps lavagem (Dilbeck, 2006).

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Figura 3-27 Carpete pulverizada com BlueStar . O lado esquerdo: o sangue foi limpo com gua. Na direita: o sangue foi limpo com lixvia (Dilbeck, 2006).

Figura 3-28 Carpete pulverizada com Luminol. O lado esquerdo: o sangue foi limpo com gua. Na direita: o sangue foi limpo com lixvia (Dilbeck, 2006).

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3.2.2.2.1. Reaces das Oxidades

O exames presuntivos de sangue podem ser catalticos, envolvendo o uso de agentes oxidantes, como o perxido de hidrognio [H 2O2(aq)] e um indicador que muda de cor (ou luminescente) e que sinaliza a oxidao catalisada pela hemoglobina como se fosse uma enzima peroxidase. Este comportamento de peroxidao da hemoglobina foi descoberto em 1863 pelo cientista alemo Schnbein.

3.2.2.3.

Testes confirmatrios

Os testes confirmatrios so testes que confirmam a presena de sangue atravs da formao de cristais de derivados do grupo heme ou de reaces imunolgicas com a hemoglobina. O segundo tipo especfico para hemoglobina humana, podendo ser utilizado tambm para determinao da origem, alm de apresentar sensibilidade maior que o teste de cristais. Pode ocorrer falso-positivo no caso de contaminao por ferrugem ou alta temperatura na reaco dos cristais e com uso de certos detergentes e exposio prolongada ao luminol na imunocromatografia.

Cristais de Teichmann

Jungreis (1997) recomenda a confirmao pelo teste de grande selectividade, baseado na formao de cristais em lmina, com identificao das respectivas cores dos cristais resultantes: - Teste de Teichman: hidrlise cida seguida da oxidao do Fe
2+ 3+

a Fe

na hemina:

hematina mais anticorpos anti-H com adio de Cloro do origem a cristais rombodricos de hemina (cloreto ferriprotoporfirina). Os cristais de Teichmann so a forma qumica particular do heme cujo tomo de ferro est oxidado. So cristais rmbicos ou prismticos, isolados ou agrupados de cor castanho-escuros. Podem formar-se no sangue quando adicionado um reagente de Bertrand, assim confirmam que a amostra sangue. Para observar cristais de Teichmann necessrio preparar uma lmina contendo o macerado da mancha, cobrir com uma lamela, adicionar o reagente Bertrand pela borda evitando bolhas de ar, aquecer a lmina at o lquido borbulhar e observar ao microscpico.

70

Figura 3-29 Cristais de Teichmann (ESPNDULA, 2006).

Cristas de Takayama

Tal como o Teste de Teichman, Jungreis (1997) tambm considera o Teste de Takayama muito selectivo e baseado no mesmo princpio. O Teste de Takayama traduz-se em: hematina mais NaOH, glicose e piridina formam-se agulhas ou cristais rombodricos (a reaco dura aproximadamente 30 segundos). Esses cristais originam-se pela ligao do Fe
2+

ao tomo de azoto (N) da molcula

da piridina, gerando um complexo hemocromognico, por exemplo, como agulhas cor-derosa da protoporfirina de piridina, ou na forma rombodrica. Este mtodo usado para confirmar a presena de sangue atravs da produo de cristais caractersticos. Para isso deve-se preparar uma lmina contendo o macerado do material suspeito, adicionar uma gota do reagente pela borda evitando bolhas de ar, aquecer a lmina por 30 segundos. Ao microscopio observam-se cristais em forma de basto em forma de pena de cor rsea avermelhada. Recomendado para fibras de tecido ou raspado de crosta.

Figura 3-30 - Cristais de Takayama (VILLANUEVA CAADAS, 2006)

71

3.2.2.4.

Testes especficos ou de origem

A determinao da origem humana baseada em reaces antignio-anticorpo (reconhecimento imunolgico das protenas do sangue) atravs da precipitao/mtodos electroforticos ou inibio. As reaces de precipitao dependem do anti-soro, da sua especificidade, coeficiente de difuso e da concentrao dos reagentes. Os resultados sofrem a influncia da idade da mancha, putrefaco, lavagem e aquecimento, podendo provocar falso-negativo.

Reaco de precipitao

- Anticorpo e antignio interagem em meio lquido ou gel formando um complexo antignio/anticorpo insolvel. O uso do gel vantajoso porque no h ocorrncia de turbidez, alm de possibilitar a anlise de mais de um sistema de antignio/anticorpo. Porm necessrio um longo tempo para a reaco: a) Mtodo do anel (lquido) um mtodo rpido e sensvel que forma uma linha interfacial de precipitado entre o anti-soro e o extracto com o antignio; b) Difuso dupla em duas dimenses O gel colocado numa placa onde antignio e anticorpo so colocados em anis circulares separados, difundindo-se e formando um precipitado em forma de arco. superior ao mtodo anterior porque permite a identificao de antignios e anticorpos correspondentes em diferentes misturas; c) Mtodos electroforticos - A tcnica combina a separao de fraces de protenas por mobilidade electrofortica com a precipitao das protenas em gel devido especificidade antignica. usado para comparaes qualitativas em amostras diferentes. O nmero de bandas de precipitados formados corresponde ao nmero de protenas presentes (imunoelectroforese em duas dimenses, electroimunodifuso e eletroforese cruzada);

Teste da inibio da antiglobulina humana

- tambm conhecido como teste de Coombs e demonstra a presena de globulina. Neste mtodo a globulina ir inibir a actividade do soro antiglobulina, o qual perder a 72

capacidade de aglutinar eritrcitos sensibilizados por anticorpos incompletos. Se uma mancha de sangue contm globulinas humanas e incubada com anti-soro globulina humano, essas globulinas iro neutralizar o anti-soro e nenhuma aglutinao ocorrer, indicando que a mancha de origem humana;

Imunocromatografia

A Imunocromatografia uma tecnologia inovadora que concentra a reaco antignio-anticorpo numa nica fase slida, sendo esta mantida e utilizada a temperatura ambiente. um teste que combina e determinao do sangue com a determinao da espcie que apresenta grande sensibilidade. realizado em membrana cromatogrfica que contm anticorpos imobilizados e anticorpos mveis, que se movimentam por aco capilar. A hemoglobina reage com o conjugado formando uma linha azul. A concentrao de hemoglobina pode ser problemtica, em excesso pode dar falsonegativo (efeito hook a hemoglobina livre chega zona de reaco antes do conjugado ligando-se ao anticorpo imobilizado sem corante). Existem vrios kits comercias que usam esta metodologia para deteco de amostras de sangue entre eles: Hexagon OBTI, RSID-Blood, SERATECHemDirect. O principio do teste o mesmo em ambos os testes: as hemoglobinas humanas (HHB) reagem com um conjugado composto de partculas coloridas e anticorpos monoclonais para hemoglobina humana, aparecendo duas linhas coloridas na janela de teste. No caso do SERATECHemDirect um teste sensvel a 40 ng / mL de hemoglobina e pode ser realizado em aproximadamente 5 min. No entanto, tm sido relatados casos de reaces cruzadas com primatas e elevados falsos negativos devido a um elevado efeito de hook (HOCHMEISTER, 1999). O tese RSID-Blood tem um limite de deteco de 100 nL de sangue e exposto para eliminar os problemas de falsos negativos bem como falsos positivos a partir de certos tipos de alimentos (SCHWEERS, 2008).

73

Figura 3-31 Teste imunocromatografico Hexgono OBTI (Bluestar Forensic Users Manual. ROC Import Group, Monte-Carlo. Disponvel em: www.bluestar-forensic.com, acesso a: Outubro 2008).

Imunoflorescncia

Thorogate e seus colaboradores (2008) desenvolveram uma nova tcnica baseada no mtodo de imunofluorescncia para a deteco de vestgios de sangue humano in situ. Esta tcnica permite ainda identificar eritrcitos e leuccitos individualmente e o seu contedo em DNA, no caso dos leuccitos. O mtodo no s fcil de usar como especfico para humanos e apresenta resultados em aproximadamente 45 min. O procedimento passa pela pulverizao da rea de interesse com dois anticorpos marcados com diferentes fluoroforos ( Alexa Fluor 488 e 568), em seguida so feitas a lavagem para a remoo dos anticorpos fluorescentes no ligados. Fazendo incidir uma fonte de luz possvel localizar espacialmente a mancha de sangue humana, bem como os leuccitos nucleados, de onde se pode obter o material gentico permitindo a determinao do perfil, assim maximiza-se a recuperao do DNA. Alm disso, Thorogate e seus colaboradores (2008) demonstraram que a tcnica pode ser usada para detectar manchas de sangue mesmo em tecido escuro (fibras de algodo preto) e manchas antigas (teste sensvel em manchas com 4 meses).

74

3.2.2.5.

Testes de identificao individual

A identificao individual atravs de amostras de sangue possvel, actualmente pela determinao do perfil de DNA. Embora j em desuso a determinao dos antignios do sistema ABO, Rh e MN em manchas de sangue outra tcnica que favorece a identificao.

Testes de identificao individual

- Os grupos sanguneos foram descobertos por Karl Landsteiner em 1900 e so caracterizados pela presena de substncia antignica nos eritrcitos que aglutina na presena do anticorpo especfico. Em relao ao sistema ABO, pesquisada a presena dos antignios A e B e anticorpos a e b. Os antignios so determinados em lminas e em tubos pelos soros anti-A e anti-B (humanos/anticorpos naturais, monoclonais e lecitinas), enquanto os anticorpos so identificados atravs de classificao reversa, por suspenso de eritrcitos (A e B). Em relao ao sistema MN e Rh, so pesquisados os antgenos M, N e o factor De, existem ainda outros antignios associados a outros sistemas de Tipagem sangunea, tais como: Kell, Duffy, Kid e Lewis (HENRY, 2001).

- So utilizados mtodos indirectos, visto que a maioria dos eritrcitos esto hemolisados: a) Teste de Lattes O extracto da mancha colocado directamente com o indicador de clulas, verificando a aglutinao. til apenas nas duas primeiras semanas e no pode ser usado isoladamente devido contaminao; b) Absoro-Eluio O antignio da mancha colocado com o anticorpo que absorvido, o excesso de anticorpo lavado e os anticorpos absorvidos so eludos e identificados por indicadores. Mtodo mais sensvel que pode utilizar pequenas quantidades de sangue; c) Aglutinao Mista Teste utilizado quando a quantidade de material nfima. O anti-soro adicionado mancha, depois da absoro o excesso lavado, o anticorpo que reagiu permanece, os indicadores so adicionados e se unem a extremidade livre (o anticorpo reage com o antignio e com o indicador).

Como j foi referido esta tcnica foi uma mais-valia no passado actualmente com o desenvolvimento da Biologia molecular caiu completamente em desuso. 75

- Biologia molecular perfil de DNA. Embora no seja objecto da presente tese importante clarificar resumidamente este mtodo. O Perfil do DNA ou Perfil gentico tem sido considerado um mtodo importante na identificao individual, pois a informao contida no DNA nica e individualizante. No perfil de DNA, somente algumas regies so analisadas. As regies escolhidas so aquelas que apresentam maior variao individual e facilidade de estudo (LEE, et. al., 1990). Essas regies so denominadas de marcadores genticos ou moleculares. Em criminalstica as regies estudadas so no mnimo 13 regies de STR: D3S1358, VWA, FGA, D8S1179, D21S11, D18S51, D5S818, D13S317, D7S820, CSF1PO, TPOX, THO1 e D16S39 (BAR, et. al., 1997).

76

3.3.

Vestgios biolgicos forenses: os Plos

O plo provavelmente um dos tipos mais comuns de vestgios forense (NICKELL e FISCHER, 1999). Este vestgio extremamente varivel entre indivduos e populaes tnicas (CROCKER, 1999) (SAFERSTEIN, 2004) (GREENSHIELDS e SCHEURMAN, 2001). A incapacidade da comunidade cientfica de distinguir plos animais de humanos elevou o interesse na sua anlise. O que levou os investigadores a recolher informaes sobre a estrutura do plo humano e animal (BLOCK, 1979). Este tipo de evidncia nunca deve ser utilizado como nico indicador de culpa. A comparao visual por si s subjectiva e depende da interpretao de cada cientista. No entanto, quando este vestgio biolgico usado em conjunto com anlises ao DNA e outros elementos de prova pode ser uma ferramenta poderosa para um investigador (STECKFLYNN, 2006). Este tipo de evidncia pode ser encontrado em variados crimes, especialmente em homicdios violentos. Exemplos so: violaes, raptos, crimes com uso de armas, sequestros, entre outros. Neste tipo de crimes geralmente h ocorrncia de luta entre a vtima e o delinquente, assim possvel detectar plos debaixo das unhas e no vesturio. Os plos tambm podem ser encontrado em escovas de cabelo, camas, no cho, almofadas, e mveis, e em casos de crime sexual o perito mdico responsvel pelo exame de corpo de delito deve prestar especial ateno na pesquisa e deteco de plos de todos os indivduos envolvidos (PINHEIRO, 2003). O plo pode ser proveniente do couro cabeludo, ou de diferentes partes do corpo, em casos de homicdios e assaltos onde haja vtimas agredidas com objectos slidos e pesados mais provvel detectar cabelos, j que este adere ao objecto atravs do sangue. Este tipo de evidncia determinar qual o objecto que efectivou o crime. Esta evidncia biolgica permite-nos ainda recolher pistas que nos possibilitem concluir sobre da presena de determinado indivduo num local especfico ou se esse indivduo tm alguma relao com um objecto particular. De qualquer forma, a identificao do plo no to imediata ou especfica como se possa acreditar. Dever sempre ser procurado no local de crime, e no deve ser sobrestimada o valor deste elemento de prova. A manipulao deste tipo de amostras exige muitos cuidados. Plos, em alguns casos, podem excluir determinadas populaes ou ajudar a identificar uma vtima desconhecida (BLOCK, 1979). A transferncia cruzada de plos de uma vtima a um 77

suspeito ou vice-versa pode elevar substancialmente a probabilidade de que a vtima e o autor terem estado em contacto (COCKER, 1999). Tal como acontece com a maioria das provas forenses, as informaes obtidas a partir do estudo dos plos so expressas em termos de probabilidades em vez de uma absoluta correspondncia (CROCKER, 1999).

3.3.1. Estudo forense do plo

As questes periciais que se apresentam com os plos so as seguintes: 1. Diagnstico Especifico. 2. Lugar do corpo do qual procedem. 3. Se o plo foi cortado, arrancado ou caiu. 4. Idade do sujeito. 5. Sexo. 6. Se procede de um ser vivo ou cadver. 7. Determinar se esto pintados ou descolorados. 8. Origem tnica. 9. Se o plo corresponde a um indivduo de determinada profisso. 10. Traumatologia do fio. 11. A distncia desde a qual o tiro fatal foi disparado, em casos de morte por arma de fogo. 12. A possvel existncia de txicos no sujeito do qual procedem. 13. O ndice escamoso do plo em estudo. 14. O grupo sanguneo do individuo do qual provem o vestgio. 15. Se o fio saudvel ou padece de alguma patologia que permita a sua tipificao. 16. Contedo em elementos metlicos inorgnicos.

78

17. Realizar

ensaios

serolgicos

que

permitam

fenotipar

izoenzimas

para

individualizar o fio em estudo. O objectivo do laboratrio responder a cada uma destas questes e assim auxiliar na investigao do crime.

3.3.1.1.

Biologia do plo

A histria evolutiva dos plos um verdadeiro enigma. Qualquer que haja sido a sua origem, fica claro que os mamferos devem muito do seu xito evolutivo s propriedades desta cobertura pilosa. O crescimento do plo controlado por hormonas como esterides ou a tiroxina, cuja sua secreo , por sua vez, controlada pelo hipotlamo e a hipfise.

Figura 3-32- Corte transversal de pele onde visvel a estrutura do plo (Disponvel em:www.wikipedia.org, acesso a : 12 Fevereiro 2008).

79

3.3.1.2.

Formao e crescimento do plo

A formao do plo inicia-se por uma invaginao tubular da pele, no folculo piloso cujas paredes so formadas por epiderme e derme, como j foi referido. No interior do folculo piloso existe um tecido conjuntivo saliente que constitui a papila pilosa. A raiz continua como haste do plo cujo dimetro maior e atravessa a pele. Adjacente a cada pelo, existem as glndulas sebceas, esto situadas num ngulo obtuso e abrem na poro superior do folculo. Os folculos pilosos desenvolvem-se numa posio no vertical mas sim inclinados na derme e os mais compridos prolongam-se at camada de gordura subcutnea. Um msculo oblquo parte da zona mdia da parede do folculo e desenvolve-se at unio entre a derme e a epiderme. Em cima do msculo, encontram-se uma ou mais glndulas sebceas. Esta zona considerada o local de gerao de novos plos e onde se inicia cada novo ciclo de crescimento. O ncleo dos folculos pilosos aparece primeiro na regio das sobrancelhas e do lbio superior, a partir das nove semanas de desenvolvimento embrionrio e, noutras zonas do corpo, na quarta semana. s 22 semanas, todos os folculos pilosos j esto completamente estabelecidos. medida que o corpo aumenta de tamanho, decresce a densidade dos folculos.

Figura 3-33 Folculo piloso (http://picasaweb.google.com/simon.missirian/Pele).

Existem trs fases de crescimento de plos. A primeira fase a Anagnese fase em 80

que o plo apresenta um crescimento activo. Se um cabelo puxado durante esta etapa a raiz aparecer com forma de uma chama, alm disso, ter tecido folicular aderido ao plo. Esta a mais rica fonte de DNA. O DNA proveniente de um plo em fase de Anagnese pode fornecer DNA nuclear, este pode ser analisado de forma a permitir a criao de um perfil do doador. O perfil de DNA pode auxiliar na constituio da correspondncia de uma amostra de plo do suspeito ou da vtima com uma amostra j conhecida. A fase de crescimento Anagnese tem a durao de at seis anos (SAFERSTEIN, 2004). A segunda fase de crescimento denominada de Catagnese. Nesta fase a raiz alonga-se. Esta a fase final do crescimento (SAFERSTIEN, 2004). A Catagnese dura vrias semanas. A ltima etapa a Telognese que pode durar at 6 meses. Nesta fase o cabelo cai naturalmente. (SAFERSTEIN, 2004) (CROCKER, 1999) (KUBRIC e PETRICO, 2003).

3.3.1.3.

Caractersticas morfolgicas

Uma amostra de plo analisada de duas formas, o plo como um todo e uma seco transversal. Quando visto na sua totalidade, o plo composto por trs partes, a raiz (bulbo), o eixo/haste e a ponta. O comprimento e a forma de um plo pode ser usado para identificar o local de origem do plo no corpo (INNES, 2000).

Figura 3-34 Seco transversal de um plo (http://picasaweb.google.com/simon.missirian/Pele).

A seco transversal de um plo pode ser visualizada como sendo um lpis. A medula o carvo. O crtex a madeira. A cutcula a tinta cobrindo a madeira (BISBING, 2002).

81

Raiz Os peritos analisam a forma da raiz para indicar qual a fase de crescimento do plo e detectar se o cabelo foi arrancado ou caiu naturalmente (INNES, 2000) (CROCKER, 1999) (SAFERSTEIN, 2004). A falta da raiz poderia indicar que o cabelo tenha sido cortado. Agresses ao cabelo, tais como esmagamento, queimadura e outros tratamentos qumicos podem ser observadas a partir do eixo do cabelo. Dada uma taxa mdia de crescimento de 1 milmetro por dia o investigador pode estimar a durao do tempo que decorreu desde que o dano ocorreu (CROCKER, 1999). A raiz tambm pode conter tecido folicular que usado para testes de DNA.

Figura 3-35 Bulbo do plo (http://picasaweb.google.com/simon.missirian/Pele).

Eixo ou haste O eixo ou haste pode ser examinado, usando um microscpio ptico, uma vez que esta poro do plo possui de caractersticas nicas no seu interior. Estas caractersticas incluem a forma e tipo da medula, a presena e disperso dos padres de grnulos de pigmento e da forma e do padro externo. De uma forma geral, as condies estruturais apresentadas pelo plo, mais especificamente o eixo, possibilitam ao perito detectar danos no plo, por exemplo, que indiquem uma mordida de um insecto, isto permite-lhe concluir que o plo no foi recentemente perdido. A queima ou esmagamento far com que o eixo do plo se enrole sobre si e fique com uma consistncia plstica (CHAYCO e PATRECO, 2003). 82

O cabelo cresce a uma taxa relativamente constante de 1 mm por dia. Com este conhecimento um investigador pode estimar o tempo decorrido desde a exposio a produtos qumicos ou trmicos, por exemplo pinturas, permanentes, entre outros (CROCKER, 1999).

Ponta A ponta de um cabelo pode revelar tratamentos qumicos ou trmicos que o cabelo tenha sofrido. Tambm pode ser importante para distinguir se os plos da barba foram raspados ou aparados.

Medula

A medula um canal central situado no interior do plo, em vrias espcies animais este canal predominante, ocupando a maioria do dimetro do plo. As clulas da medula esto separadas por uma rede area de aspecto varivel, dependendo da espcie animal. A medula pode ser visualizada microscopicamente atravs de montagem do plo seco ou embebendo o plo em parafina e posteriormente cortando em finas seces. A medula oferece uma srie de dados muito interessantes, devem-se considerar a medida do dimetro total e o dimetro medular. O ndice Medular usado para distinguir os plos humanos dos animais. expresso como um rcio entre o dimetro do eixo e o dimetro da medula (SAFERSTEIN, 2004). Nos animais a medula ir tornar-se mais de /2 do total dimetro do plo. Nos seres humanos a razo geralmente inferior a /3 (SAFERSTEIN, 2004), nos homens o ndice medular varia entre 0,25 a 0,35 e nas mulheres, normalmente inferior a 0,20. Nem todos os plos tm medula, e quando a tm, esta pode variar. A medula pode ser classificada como ausente, fragmentada, interrompida ou contnua (LANE, 1992) (SAFERSTEIN, 2004). Pode ser opaca, translcida, vacuolarizada, ou totalmente amorfa na aparncia (figuras 3-7). Quando a medula fragmentrio, as clulas apresentam uma estrutura fusiformes, ou espiralada. A maioria dos cabelos humanos com excepo do cabelo dos Mongolides no tem medula ou possui apenas a medula fragmentada (Lane, 1992). A maioria dos animais tem uma medula contnua ou interrompida. Plos de origem animal podem apresentar padres especficos (SAFERSTEIN, 2004) (LANE, 1992). A forma da medula, por se tratar de um padro pode ser utilizado para determinar espcies, e 83
1 1

quando se trata de humanos, permite identificar a origem tnica (SAFERSTEIN, 2004) (LANE, 1992).

Figura 3-36 Microfotografia de plo com Medula contnua e clara (KRISTEN, 2004).

Figura 3-37 Microfotografia de plo com Medula contnua e opaca (KRISTEN, 2004).

Figura 3-38 Microfotografia de plo com Medula interrompida (KRISTEN, 2004).

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Figura 3-39 Microfotografia de plo com Medula vacuolarizada (KRISTEN, 2004).

Assim sendo, nos seres humanos a Medula pode ser ausente ou presente. Quando presente mostra um desenvolvimento rudimentar, clulas invisveis ou quase, o dimetro muito reduzido, cheias de bolhas de ar, clulas interrompidas. Nos plos animais a medula geralmente presente, clulas visveis e aparentes, dimetro bastante amplo, cheia de bolhas de ar como sacos grandes e pequenos, clulas contnuas.

Crtex O crtex circunda a medula, sustentado por uma camada protectora, a cutcula, constitudo por clulas corticais em forma de agulha, as quais se alinham numa formao regular em paralelo ao comprimento do cabelo. Distinguem-se no crtex duas estruturas principais: uma semi-cristalina, formada por cadeias polippticas, na direco do folculo piloso. Estas cadeias so denominadas de microfibrilhas, rodeando estas fibrilhas encontrase uma estrutura com elevado contedo de enxofre e prolina chamada matriz. Vista ao microscpico so observadas estruturas no interior do crtex semelhantes a grnulos pigmentados que originam as diferentes coloraes do plo, a cor, associada densidade, e a distribuio destes grnulos ao longo do eixo de proximal para distal permitem criminalista importantes pontos de comparao entre plos humanos. Os plos de cor cinza no tm grnulos de pigmento. Quando o plo apresenta grnulos de pigmento de forma densa provocam o escurecimento nas suas estruturas interiores. O tamanho dos grnulos varia de muito fina a grossa (Figura 3-9) (SAFERSTEIN, 2004) (KUBIC e PATRACO, 2003).

85

Assim sendo, o crtex de plos humanos apresenta clulas conificadas e espessas, com pigmento em forma de gro finssimo e homogneo, mais larga que no animal, j nos plos animais o crtex tem forma de cilindro oco e delgado, com pigmentos em forma de gros irregulares maiores que nos plos humanos; muito reduzido.

Figura 3-40 - Microfotografia de um plo onde visvel a distribuio dos grnulos de pigmentos (Kristen, 2004)

Figura 3-41 Microfotografia de plo humano, onde so visveis as clulas do crtex apresentando grande espessura (Kristen, 2004).

Cutcula A cutcula a membrana exterior do lpis, lhe atribuda a capacidade de resistncia e estabilidade, formada por escamas sobrepostas na direco da terminao ou da ponta do plo. As escamas so formadas por clulas especializadas, as quais se acumulam em pilha desde o folculo e o nascimento do plo, formando 6 a 8 camadas. Os mtodos usados para o estudo da cutcula podem passar pela sua observao

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microscpica em preparao adicionando uma gota de gua; uma outra modalidade , aps o branqueamento corar a preparao com azul-de-metileno e em seguida observar, ainda um outro mtodo o de fazer um molde da sua superfcie. Ogle e Mitosinka (1973) conceberam um mtodo rpido e fcil de fazer um molde do plo com o uso de verniz de unhas transparente. Isto pode ser feito rapidamente revestindo uma lmina de vidro com meio flexvel como esmalte ou verniz claro de unhas, soluo vinlica ou folha de acrlico (plexiglas) em soluo de clorofrmio, em seguida o plo colocado sobre a lmina. Quando o meio endurece, o plo removido, e permanecem uma clara e distinta impresso da cutcula do plo, ideal para a observao em microscpio (CROCKER, 1999). O estudo da cutcula bastante usado uma vez que permite a observao de um padro especfico de cada espcie (Saferstein, 2004) (Lane, 1992) (Crocker, 1999) (KUBIC e PETRACO, 2003). No ser humano, a cutcula suave e pouco saliente, com sobreposio de escamas, nos animais espessa e ligeiramente sobreposta.

Figura 3-42 Padro da cutcula de plo humano (A) e (B) Padro da cutcula de plo animal (co) (KRISTEN, 2004).

Em geral, todos os plos de um indivduo, apresentam ttulos de ndice escamoso ou padres muito semelhantes, embora no haja uma grande variedade destes ndices para diferentes indivduos. til, em alguns casos, para excluir um plo de outra fonte que est em estudo. Os padres podem ser coronal, ptala, ou imbricado. No padro imbricado, as escamas esto sobrepostas e no apresentam modelo aparente. Este padro encontrado em seres humanos, as escamas so delgadas e transparentes sem salincias dispostas na superfcie como telhas de um telhado (SAFERSTEIN, 2004). O padro ptala lembra as escamas de um rptil e no so encontradas em seres 87

humanos. Por fim, o padro coronal apresenta escamas da cutcula simtricas e sobrepostas. Estas no so normalmente encontradas em humanos (CHEYKO e PETRECO, 2003). No caso de plos animais, a cutcula apresenta-se sob a forma de escamas grossas e salientes, imbricamento com serrilhado bem visvel e aspecto de um conjunto de espinhos. A sua determinao efectuada pela observao microscpica utilizando ocular de 10x e objectiva de 25 x.

88

3.3.1.4.

Plos: colheita e armazenamento

Colheita

A colheita de plos deve ser realizada cuidadosamente visando a extraco do fio ntegro, utilizando material/equipamento adequado ao suporte (cabea e/ou demais regies do corpo). Infelizmente, muitas vezes as amostras de plos no so cuidadosamente ou correctamente colhidas, especialmente se a amostra no foi colhida sob a superviso de pessoal qualificado. Mtodos de recolha de plos variam de acordo com o mbito de aplicao e as circunstncias do inqurito ou investigao (GREENSHIELDS e SCHEURMAN, 2001). Em algumas circunstncias ser utilizado mais do que um mtodo de recolha. Em geral, os mtodos de colheita de plos como potenciais provas no foram alterados desde o ltimo quarto do sculo XIX (BISBING, 2001). O indivduo a quem a amostra for colhida deve ser identificado, alm dos dados pessoais do indivduo tambm devem ser registadas e documentadas as caractersticas da amostra (como peso, comprimento, comprimento do plo residual, cor). Recomenda-se que se recolha uma mecha de cabelo com um dimetro de 3-4 mm. O local preferencial para recolha da amostra sobre o couro cabeludo a zona mais prxima do folculo. Existem seis mtodos principais de colheita deste tipo de vestgio forense. A primeira a colecta de fios detectados visualmente. O investigador poder recolher estes fios observveis com a prpria mo ou com pina. O uso de pinas no recomendado na maioria dos casos, uma vez que podem causar danos estrutura do plo. A Pina tambm pode destruir a delicada estrutura da raiz e seus tecidos circundantes, que so utilizados na biologia forense para anlise de DNA (GREENSHIELDS e SCHEURMAN, 2001) (BISBING, 2001). Fontes de luz como infravermelho ou laser podem ser utilizadas para aumentar a capacidade do investigador de identificar visualmente os plos (GREENSHIELDS e SCHEURMAN, 2001) (CROCKER, 1999). A fita adesiva pode ser utilizada tanto para recolher plos visveis e no-visveis de diferentes superfcies. No Canad este o mtodo mais utilizado (CROCKER, 1999). A fita adesiva pode ser usada em forma de rolo ou como folhas. Fita adesiva em folha usada em superfcies lisas ou em vesturio, cada seco ser marcada como a parte da pea de vesturio de onde as amostras foram obtidas (BISBING, 2001). importante que a fita no seja demasiado pegajosa para que aps a colheita no fique um amontoado de 89

fibras (CROCKER, 1999). O mtodo de recolha por aspirao usado para grandes cenas crime ou onde h maior nmero de pontos de transferncia ou quando a cena completamente desconhecida. Este mtodo tambm pode ser utilizado em objectos imveis que no possam ser transportados (GREENSHIELDS e SCHEURMAN, 2001). Os aparelhos aspiradores utilizados pelos investigadores so equipados com um filtro especial que pode ser removido e rotulado adequadamente (CROCKER, 1999). Um exemplo de aparelho com estas funes e o Conecta 190. Outro mtodo de recolha deste tipo de evidncia escovagem, raspagem ou agitao de vesturio ou de outros objectos que permitam este tipo de aplicao. O material a ser analisado depositado numa folha de papel branco, a fim de aderir folha (BISBING, 2001). As evidncias encontradas sobre o papel branco so ento separadas em classes como cabelo, fibras de vidro, entre outras e analisadas em conformidade. (CROCKER, 1999). Algumas peas de vesturio e de outros tipos de tecidos podem ser colocados em sacos prprios e agitado. Este mtodo permite ao investigador a recolha de elementos de prova no fundo do saco sem que se dispersem no ar (BISBING, 2001). Por fim, outro dos mtodos que possvel usar para recolher este tipo de evidncias so o corte e o pentear do plo. A transferncia cruzada de plo (geralmente pubiana) entre um suspeito e a vtima muito frequente, assim a tcnica de pentear usada para extrair fios soltos que possam ter sido transferidos (GREENSHIELDS e SCHEURMAN, 2001) (BISBING, 2001) (SAFERSTEIN, 2004). A qualquer indivduo que possa ter deixado plos no local do crime devem ser colhidas amostras de fios para efeitos de comparao. Devem ser colhidos cerca de 100 cabelos provenientes de diferentes regies da cabea, penteados e arrancados. No que se refere aos plos pbicos podem ser arrancados, penteados e cortados. Cerca de 30-50 cabelos devem ser recolhidos e rotulados com a rea do organismo de origem e o mtodo de recolha (GREENSHIELDS e SCHEURMAN, 2001) (BISBING, 2001) (SAFERSTEIN, 2004).

Armazenamento

As amostras de plos devem ser armazenadas sob condies especficas: devem permanecer secas e escuras (protegidas da luz), temperatura ambiente,

individualizadas e acondicionadas em envelope de papel lacrado. Em casos forenses, geralmente aconselhvel para colecta duas amostras separadas, cada uma suficiente para o conjunto das anlises. A segunda amostra armazenada separadamente, devem ser deixadas intactas e utilizado apenas no caso de uma necessidade.

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As amostras embebidas ou impregnadas com substncias orgnicas (sangue, urina, esperma, saliva e/ou outras) devem secar a temperatura ambiente antes de serem acondicionadas. O material deve ser devidamente etiquetado e encaminhado com brevidade para o laboratrio. No caso de os plos se encontrarem aderidos a um suporte deve-se encaminhar os fios juntamente com o suporte. O material deve ser acondicionado em embalagem de papel e em seguida se necessrio em saco plstico, devidamente etiquetado e encaminhado com brevidade ao laboratrio. Se a amostra se encontrar aderida em suporte no removvel, a colheita deve ser realizada cuidadosamente, utilizando material/equipamento adequado ao suporte, visando-se manter o fio ntegro, as amostras devem ser individualizadas e acondicionadas em envelope de papel.

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3.3.1.5.

Exame do Plo

O estudo do plo passa pelo exame macro e microscpico do fio, no seu todo e numa seco transversal.

Exame Macroscpico

O exame macroscpico inicia-se com a anlise visual do local, do fio ou do suporte, visando verificar o seu estado geral, preservao, alm de identificar e seleccionar os vestgios; posteriormente faz-se a caracterizao das condies em que os vestgios foram recebidos; observa-se, ainda, a quantidade de fios e a sua integridade (BARBER, et. al., 1991). Em seguida as amostras devem ser etiquetadas com todos os dados da ocorrncia (histrico) e por fim procede-se anlise do material atravs da lupa microestereoscopica. Para proceder a esta percia, so necessrios vrios equipamentos e recursos. Para exames de colheita de evidncias macroscpicas so necessrias: luvas descartveis, pina estril, lupa, invlucros de papel, tesoura, etiquetas, lpis. Macroscopicamente, os plos animais so, em geral, curtos e fusiformes, de colorido uniforme ou variado e de diversas espessuras. Os plos humanos so flexveis e de colorido homogneo.

Exame Microscpico

Para o exame microscpico e fsico-qumico da evidncia essencial: lupa estereoscpica, Microscpio binocular, escala micromtrica, rgua milimtrica transparente, vareta de vidro, lmina e lamela, tubos de ensaio, placa de Petri, gua destilada, ter sulfrico P.A., cido ntrico P.A., lcool etlico P.A., Xilol comercial, -naftol, cido sulfrico P.A., Blsamo do Canad ou Entellan. O exame microscpico deste tipo de evidncia implica alguma preparao e depende do fio a ser examinado. A preparao para exame microscpico envolve Limpeza, Desidratao, Descolorao e Montagem lmina-lamela, com uso de blsamo do Canad ou Entellan. Este espcime deve ser colocado sobre uma lmina limpa, adiciona-se uma gota de gua destilada, em seguida procede-se montagem assentando a lamela e por fim analisado ao microscpio binocular com uso de escala micromtrica a fim de visualizar as 92

caractersticas microscpicas internas. Pode ser necessrio aplicar algum peso sobre a lamela, a fim de garantir uma montagem fina, quanto mais fina, mais fcil ser a anlise.

Figura 3-43 - Ilustrao da preparao da lmina.

Como facilmente se pode verificar este mtodo no pressupe a limpeza do plo antes da sua visualizao microscpica. Este procedimento permite frequentemente descobrir manchas de sangue, esperma, pus entre outros. Finalizada esta observao preliminar, procede-se limpeza do plo. Podem fazer-se duas preparaes, uma em que o plo foi sujeito a limpeza e outra no. Quanto limpeza, para lavar e eliminar as partculas estranhas dos plos usa-se uma soluo de sabo ou carbonato de potssio a 10 % indistintamente, seguidamente desidrata-se com lcool etlico, por fim passa-se por xilol e observa-se ao microscpio em meio aquoso ou glicerado, pode usar-se blsamo de Canad. No caso de o plo ser muito escuro, pode descolorar, para isso podem utilizar-se uma das seguintes solues perxido de hidrognio, perhidrol a quente, cido actico, soluo de hipoclorito de sdio, soluo alcolica de cloro ou cido ntrico. So obtidos bons resultados com perxido de hidrognio de 100 vol. e com hidrxido de sdio de aco combinada. Geralmente a descolorao do plo apresenta uma delonga de

aproximadamente 15 minutos, no alterando a estrutura dos exemplares. Da observao microscpica dos fios so obtidos dados caractersticos dos mesmos que permitem a sua distino. Microscopicamente tambm se pode distinguir as diferentes origens tnicas, brancos e caucasianos, pretos, amarelos ou castanhos, assim como a dos ndios americanos, chineses e outros asiticos. Os plos do couro cabeludo proporcionam a abordagem mais segura para identificar a etnia do indivduo detentor do plo, tambm extremamente importante a presena de medula no plo, uma vez que este desempenha um papel fundamental nesta determinao. Assim, fazendo uma utilizao adequada dos valores obtidos a partir do ndice 93

medular e da rea da seco transversal do plo, juntamente com os dados que mostram estudos morfolgicos, possvel distinguir num nmero considervel de casos, a origem racial do indivduo a quem pertence o fio em estudo. Origem tnica pode ser determinada, como referido, embora em pases onde muitos indivduos tm ascendncia mista pode tornar-se uma tarefa difcil. Se o plo mantm tecido folicular (no caso de ser arrancado) a anlise de DNA possvel. A partir desta anlise o sexo e o perfil gentico podem ser determinados. Se no estiver presente o tecido folicular possvel apenas a anlise ao DNA mitocondrial, assim determina-se o perfil do material gentico da me do individuo. O DNA mitocondrial no pode ser usado para distinguir irmos. A determinao da idade tambm possvel atravs do exame microscpico do plo. Os plos fetais apresentam as caractersticas do cabelo, ausncia de canal medular e de pigmentos. A sua espessura varia de 20 a 50 m, no feto a termo. Os recm-nascidos possuem plos com canal medular, este facto resultado da maturao dos recm-nascidos. O desenvolvimento do canal medular, tem incio em primeiro lugar nas pestanas (BARBER et. al., 1991). Nos idosos, os plos tendem a diminuir em nmero, espessura e o dimetro mdio do plo cai de 80 para 60 a 65 m.

Determinao do grupo sanguneo teste de identificao

As tcnicas que evidenciam resultados fiveis na busca de aglutinognios responsveis pelos grupos sanguneos so as seguintes:

Absoro e eluio:

Consiste em cortar 6 cm do plo em estudo em trs pores iguais, aps ter sido lavado com sabo e ter, em seguida coloca-se cada poro em contacto com um anti-soro correspondente (anti-A, anti-B e anti-H), de ttulos 128, 64 e 32 respectivamente em constante agitao durante 3 horas, etapa de absoro. Logo em seguida, lavam-se as pores de plo com uma soluo salina. Adicionam-se as suspenses de eritrcitos a 0,2 % correspondentes ao anti-soro colocado inicialmente. Submetem-se as pores de plo ao contacto com os eritrcitos a uma temperatura de 50 C durante 10 minutos, assim est completa a etapa de eluio com a ajuda de vibraes ultrasnicas. Finalmente centrifuga-se a 120 G durante 2 minutos e observa-se a aglutinao formada.

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Anticorpo marcado radioactivamente:

O mtodo utilizado para determinar anticorpos marcados radioactivamente, descrito por BAETLHER e KAY, em 1973, baseia-se na reaco antgeno-anticorpo e pode ser resumido da seguinte forma: os anticorpos anti-A, anti-B e anti-H, marcados com iodo-131, so colocados em contacto com os trs pedaos de plo previamente esmagados com uma prensa. Incubam durante um determinado tempo, em seguida cada pedao exposta a um exame radiogrfico. Quando revelada a radiografia, o pedao de plo que aparece identificado indica que o antignio reagiu com o correspondente anticorpo, assim se conclui o tipo sanguneo do fio em estudo.

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3.3.2. Concluso

O estudo do plo pode proporcionar uma infinidade de informaes. Nenhuma destas informaes pode ser usadas como prova irrefutvel por si s. O plo usado para fazer um backup de outras formas de prov a, como confirmao ou adjuvante. Como foi referido anteriormente, tudo uma questo de probabilidades. O Cabelo deve ser utilizado como um apoio a outras provas. Num estudo realizado pela FBI (Federal Bereau of Investigation) conclui-se que apenas em 11% dos casos de identificao positiva de indivduos atravs do exame macro e microscpica de plos no correspondia nos testes DNA (SAFERSTEIN, 2004). H situaes em que cabelo no particularmente til como elementos de prova. Em disputas domsticas, assassinatos e outros crimes em que a vtima e o suspeito vivem ou viveram juntos o estudo do plo cabelo de pouca utilidade.

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3.4. Vestgios biolgicos forenses: o Smen


O estudo dos fluidos seminais na cena do crime est directamente ligado a crimes de ndole sexual. Sendo este de importncia vital aquando da reconstruo do acto do crime e na identificao do agressor. Alm de caracterizar o contacto sexual, a pesquisa de esperma tem por objectivo a individualizao da evidncia biolgica para confronto com possveis suspeitos (SOUZA, 2000). O smen segregado pelos rgos reprodutores masculinos, sendo o suporte lquido dos espermatozides. Segundo Pinheiro (2008) este vestgio pode ser encontrado em manchas no vesturio, lenis, almofadas, mveis, no cho, veculos, tapetes, entre outros. O smen, ante de secar, possui um odor alcalino muito caracterstico e contem milhes de espermatozides (aproximadamente 200 a 500) (ESPNDULA, 2006). Depois de secar, a mancha perde o seu odor, os espermatozides morrem, adquire uma colorao branco acinzentada e por vezes amarelada e dando aos tecidos um efeito engomado. Anlises forenses a que o smen pode ser sujeito: - deteco de smen (se de facto se trata de smen ou no); - identificao da sua origem (humana ou no); - determinao do grupo sanguneo; - identificao do tipo de ejaculao (interna ou externa); - determinaes toxicolgicas (deteco de drogas); - exames genticos (DNA).

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3.4.1. Biologia do smen


O smen um lquido de aspecto leitoso, opalescente, ligeiramente amarelo, sendo resultado de uma mistura de secrees originadas nos testculos (onde se produzem os espermatozides), na prstata, glndula seminal e glndulas bulbouretrais. Os componentes do smen derivam de duas fontes: esperma e liquido seminal. O lquido seminal, por sua vez, produzido pela contribuio da vescula seminal, prstata e glndulas bulbouretrais. Possui um pH de 7,2-7,3, na sua composio esto presentes essencialmente lquido seminal e espermatozides, estes podem ser separados por centrifugao. (SALADIN, 2002). O lquido seminal dos humanos contm um complexo de componentes orgnicos e inorgnicos, fornecendo um meio nutritivo e protegido para os espermatozides no tracto reprodutivo feminino. O ambiente normal da vagina hostil para as clulas do esperma, j que ele muito cido (devido produo de cido lctico da microflora), viscoso, e controlado por clulas imunes. Os componentes do plasma seminal tentam compensar este ambiente hostil. O lquido seminal composto por protenas e enzimas. Pequenas quantidades de globulinas, albumina, nucleoprotenas, proteases e uma amilase de pH 6-7, uma tromboquinase, coagulase, fosfatase cida (de grande valor pericial), fosfatase alcalina, fibrinolisina, fibrinogenese e colina (SALADIN, 2002). A colina est presente em todas as clulas, trata-se de uma base orgnica constituda por lecitina. Intervm no transporte de lipidos e no seu metabolismo formando os fosfolpidos. Aminas bsicas como a putrescina, espermina, espermidina e cadaverina so responsveis pelo cheiro e sabor do smen. Essas bases alcalinas neutralizam o ambiente cido do canal vaginal (que muito nocivo ao esperma), e protegem o DNA dentro do esperma da desnaturao cida. Entre as substncias ricas em fsforo encontra-se o difosfato de espermina que possui a frmula qumica geral seguinte: C10-H26-N4-H3 2 PO4H3 6 H20 O smen humano contm 112-268 mg% de fosfato de espermina, uma das bases do smen, a outra a espermidina, que o produto parcial da hidrlise da espermina. NH2-CH2-CH2-CH2-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-NH A frutose responsvel pela mobilidade dos espermatozides, uma vez que sem ela permaneceriam imveis. Esta forma-se a partir de glicose sangunea na presena de testosterona (hormona masculina). Como refere o Tratado de Criminalstica Tomo II de la Polica Federal Argentina a prova o facto de que a frutose desaparece aquando da

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castrao de animais, e reaparece se administrada esta hormona, a testosterona, acrescenta ainda que: existe uma relao entre a hipfise e as glndulas sexuais (produtoras de testosterona), sendo a formao da frutose dependente da testosterona, a concentrao deste glcido no smen depende, portanto, do funcionamento hipofisrio . O smen ainda composto por substncias no proteicas: Cloreto de Sdio, Dixido de carbono, Fsforo inorgnico, Fsforo cido solvel, Fsforo de espermina, Clcio, Glicose, Ureia, cido Lctico e Colesterol (VANDER, 2002). A ejaculao normal liberta entre 1.5 a 6 ml de fluido.

Espermatozides

Os espermatozides so clulas mveis constitudas por: cabea e cauda ou flagelo com aproximadamente 50 a 70 m. Calcula-se que no produto normal de uma ejaculao se encontrem cerca de 200 a 500 milhes de espermatozides.

Figura 3-44 Espermatozide (Disponvel em: http://www.kalipedia.com. Acesso a 22 de Setembro de 2008).

A cabea do espermatozide apresenta uma forma ovide e representa aproximadamente 10% do total do comprimento do espermatozide. Na zona da cabea podem distinguir-se uma parte anterior (acrossoma) e outra posterior (ncleo), ambas cobertas por uma fina membrana.

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3.4.2. Anlise forense do smen


Existe para a investigao de manchas seminais alguma variedade de exames. O estudo deste tipo de vestgio pode ser esquematizado desta forma:

RELATRIO

RELATRIO

Figura 3-45- Esquematizao do estudo do smen (adaptado de SOUZA, 2000).

Diferentes materiais podem ser submetidos a anlise, tais como: Swab (Zaragatoa) vaginal, Swab (Zaragatoa) anal, Swab (Zaragatoa) bucal, roupas a vrios tipos de objectos (SCHULLER et. al., 2001). .

Transporte e Cuidados a ter com este tipo de evidncia

Dado que os exames que se realizam ao smen se baseiam principalmente na presena de espermatozides, de cabal importncia a proteco das amostras que os contenham. Muitos peritos na rea consideram que a presena de um espermatozide completo a nica prova irrefutvel da presena de smen . Por esta razo, estes vestgios devem manipular-se com extremo cuidado, no caso de manchas em vesturio, no se deve dobrar nem enrolar a zona manchada e sobretudo no submete-la a frico (SCHULLER et. al., 2001; BOBADILLA, 1998).

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Testes preliminares

- Mtodos Fsicos: Exame UV

Os mtodos fsicos consistem na exposio da mancha radiao ultravioleta, a qual induzir uma fluorescncia caracterstica com uma intensidade mxima de cerca de 4200mu. De qualquer forma, a maior dificuldade que apresenta este mtodo que esta reaco no exclusiva do smen, uma vez que produzir resultados semelhantes com outros fluidos biolgicos, como j foi explicado no ponto 3.1 que se refere aos mtodos gerais de deteco de vestgios biolgicos forense. Esta tcnica oferece grande utilidade prtica principalmente para a anlise de grandes superfcies onde se suspeita que houve um delito de ndole sexual e no possvel determinar o local onde presumivelmente se encontrariam as manchas. Estas ltimas emitiram fluorescncia sobre fundos no fluorescentes, por este facto que em alguns casos onde os artigos de vesturio contm fibras brancas pticas, obtido o efeito inverso, ou seja, as manchas emitem uma fluorescncia com intensidade menor em relao ao resto do artigo (AUVDEL, 1985).

- Mtodos Enzimticos (Fosfatase cida)

A Fosfatase cida uma enzima, presente em grande quantidade no smen, capaz de hidrolizar fosfatos orgnicos em meio cido. A sua utilizao forense baseia-se no facto que sua actividade no smen cerca de 500-1000 vezes maior que em qualquer outro fluido corporal. A deteco de sua atividade pode ser feita a partir de vrios substratos (fenilfosfato de sdio, p-nitrofenil-fosfato, L(+)-tartarato como inibidor, -naftil-fosfato, timolftalena monofosfato de sdio). O ltimo substrato mais especfico e elimina a necessidade de utilizar outras substncias para diferenciar a fosfatase prosttica de outras fosfatases, sendo o mais aconselhado. As fosfatases seminal e vaginal no podem ser discriminadas, pois vrios fatores podem elevar o nvel de fosfatase endgena nas mulheres, desta forma, a presena de grande quantidade de fosfatase apenas indicativa da presena de esperma e no conclusivo (KIND, 1957).

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- Mtodos Cristalogrficos: A Reaco de Florence

Este mtodo baseia-se na formao de cristais de iodeto de colina, que se encontra presente no esperma sob a forma de fosforil-colina e lecitina (ESPNDULA, 2006). O reagente de Florence constitudo por 2.54 gramas de Iodo metlico, 1.56 gramas de Iodeto de potssio e 30 mililitros de gua destilada. Os cristais de Iodeto de Colina apresentam-se sob a forma de lminas rombides de cor pardo. Embora a colina no seja exclusiva do smen, esta anlise manifesta-se de grande importncia em amostras de esperma asprmicas, principalmente porque no se conhecem outros fluidos que registem simultaneamente uma alta presena de colina e de fosfatase cida como no esperma.

- Mtodos Cristalogrficos: Cristais de Barberio

Tambm um teste apenas de preliminar ou presuntivo baseado na reaco frente ao cido pcrico. Nesse teste cristais com aspecto de agulhas grossas de cor amarelada resultam de uma reao aquecida do extrato da mancha com o cido pcrico.

- Outros mtodos de anlise preliminar

O mtodo de cromatografia em camada fina utilizado principalmente quando no possvel visualizar um espermatozide completo. Trata-se de uma tcnica de separao de componentes de uma amostra. Os componentes das amostras so distribudos entre duas fases, uma das quais permanece estacionria, enquanto a outra elui entre os interstcios ou sobre a superfcie da fase estacionria. O movimento da fase mvel resulta numa migrao diferencial dos componentes da amostra (POOLE, 1995). A eletroforese tambm pode ser usada na deteco de smen. Este um mtodo bidimensional que se realiza sobre papel combinando mtodos electroforticos com cromatogrficos que permite a separao de protenas com diferente peso molecular, no caso do smen permite a separao da espermina dos outros aminocidos presentes.

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Testes Confirmatrios

- Exame a fresco e coloraes

As

amostras

de

smen

so

examinadas

microscopicamente

fresco

posteriormente fixadas e coradas para a identificao de espermatozides. Este exame pode ser considerado de confirmatrio uma vez que, a identificao de um espermatozide ntegro suficiente para determinar a presena de smen . Existem vrias tcnicas de colorao que podem ser usadas para facilitar a visualizao e identificao dos espermatozides na amostra: May-Grnwald, MayGrnwald - Giemsa, azul de Loeffler, Hematoxilina-eosina - Christmas Tree (TEIXEIRA, 1998). No entanto, deve ser tipo em conta o facto de que h um grande nmero de indivduos azoosprmicos por patologias diversas ou por terem sido submetidos vasectomia. muito comum detectar em amostras de smen apenas pores de

espermatozides, s com cabea ou cauda, mas devido contaminao, muito comum neste tipo de vestgios, muitas vezes estas clulas so facilmente confundidas com esporos de fungos e bactrias (ESPNDULA, 2006).

- Mtodo imunolgico PSA ou teste p30

A PSA (Prostatic Specific Antigen) uma glicoprotena de cadeia simples, com PM=33-34 kDa e expressa em altos nveis no epitlio da prstata humana (WANG, 1979) sob o controle de andrgenos e progestinas (DIAMANDIS, 1994). O nome PSA reflecte a ideia inicial de que a expresso da protena era restrita prstata. Pensava-se, at recentemente, que a PSA era produzida exclusivamente pelas clulas epiteliais da prstata, mas, a partir do emprego de metodologias mais sensveis e da realizao de estudos imunohistoqumicos, ficou evidente a presena desta protena em uma variedade de tipos de tumores, tecidos sadios e fluidos biolgicos femininos e masculinos, (DIAMANDIS; YU, 1997), sugerindo que ela possa ser funcional tambm fora da prstata. Os mtodos para sua determinao so baseados em reaces antignio/anticorpo que se estendem desde reaces de precipitao at mtodos mais sensveis como, por 103

exemplo, ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) e imunocromatografia. O ELISA um teste imunoenzimtico para deteco de anticorpos especficos baseado na interaco anticorpo-antignio. O mtodo utilizado para realizar o teste emprega um anticorpo conjugado com uma enzima para deteco do antignio. Numa placa de superfcie inerte com poos so adsorvidas as protenas de interesse a investigar ou detectar. Em seguida faz-se uma lavagem com uma protena inespecfica para que ocupe os poos livres. Adiciona-se uma soluo de anticorpos primrios especfico para a protena de interesse que se ligam a ela. Posteriormente necessrio retirar os anticorpos primrios que no foram incorporados em nenhuma protena, para isso faz-se uma nova lavagem. Seguidamente o produto tratado com anticorpos secundrios com enzimas acopladas responsveis por produzir uma substncia corada que permite a visualizao da reaco. Procede-se a mais uma lavagem com o objectivo de eliminar os anticorpos secundrios que no se ligaram aos anticorpos primrios j existentes nos poos. Finalmente, adiciona-se o substrato de ligao para a enzima produzir a substncia corada e, assim, atravs da avaliao da intensidade da cor de cada poo pode-se quantificar e verificar a presena de alguma substncia de interesse (LEQUIN, 2005; PARIDA, 2001).

+ Substrato

Figura 3-46 - Esquema ilustrativo do mtodo de ELISA (Disponvel em: http://microvet.arizona.edu/Courses/MIC419/ToolBox/elisa.html, acesso a: 25 de Setembro).

Os testes imunocromatogrficos utilizam uma membrana cromatogrfica onde os anticorpos e as amostras se movem por capilaridade. O excesso de PSA em relao ao conjugado pode dar falso-negativo (efeito hook - o PSA livre chega zona de reaco

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antes do conjugado e liga-se ao anticorpo imobilizado sem corante). (HOCHMEISTER, 1999; SATO, et. al., 2002; KHALDI, et. al., 2004). Existem ainda testes rpidos de deteco de smen em diversos tipos de amostras que tem como princpio a Imunocromatografia enzimtica um exemplo desses kits o RSIDSEMEN comercializado pela Galantos Genetics GmbH e Independent Forensics.

Testes de identificao ou individualizao

Para a identificao do indivduo que deu origem amostra biolgica, seja smen, sangue, saliva ou plo, impe-se a sistemtica adopo dos testes que demonstrem a presena de marcadores genticos, desde h muito empregados, como, por exemplo, os do sistema ABO e a enzima fosfoglucomutase, mas praticamente abandonados nesta dcada em favor das anlises de DNA, de inexcedveis vantagens e que foram introduzidas rotineiramente na rea criminal (TEIXEIRA, 1998a; 1998b).

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3.5. Vestgios biolgicos forenses: os Dentes

Os dentes so das evidncias forenses mais importantes na identificao mdicolegal, uma vez que so estruturas que resistem ao processo natural de putrefaco, ao calor, aos traumatismos e aco de certos agentes qumicos. Assim, os dentes so os vestgios mais usados em caso de incndio, catstrofes com vrios mortos, acidentes areos, afogamentos, corpos em elevado estado de putrefaco, entre outros (PINHEIRO, 2008) (MAGALHES, 2003). Os dentes ou a polpa dentria so dos restos postmortem que mais se preservam no organismo ao longo do tempo. Alm disso estas estruturas so especficas e nicas a cada indivduo, mais uma vantagem que permite a identificao do corpo (MAGALHES, 2003) tal como a possibilidade de obteno de material gentico que permite a determinao do perfil gentico de DNA (POTSCH et. al., 1992). Isto possvel devido a capacidade do dente em agir como uma cpsula protectora das clulas nucleadas da polpa dentria, de onde se extrai o material gentico para esta anlise. Como j foi referido anteriormente, a Antropologia forense rea da Cincia Forense que se dedica ao estudo dos dentes, com o objectivo principal de identificao do cadver, para isso usam tcnicas ou mtodos de reconstruo e comparao. Magalhes (2003) afirma que entre as caractersticas individualizantes a analisar contam-se: o nmero de dentes, as alteraes morfolgicas congnitas ou adquiridas (hbitos, profisso, entre outras), alteraes da posio ou rotao, alteraes patolgicas (cries) ou traumticas, existncia de tratamentos ortodnticos (almgamas, coroas, pontes, prteses fixas ou amovveis) assim a anlise destas estruturas possibilita, para alm destas caractersticas, a determinao do sexo, da origem tnica e idade do cadver. O uso da radiologia demonstra-se bastante til para obteno das caractersticas da dentio, um mtodo muito usado pelos antroplogos comparando as radiografias da dentio do cadver com Rx da possvel vtima tiradas quando viva.

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3.5.1. Determinao do sexo

O estudo dos dentes tambm permite determinar o sexo do indivduo, uma vez que apresentam caractersticas especficas e compatveis com as diversas fases de desenvolvimento da idade humana. Um dos mtodos usados tem como princpio a quantidade de cido necessrio para neutralizar a dentina alcalinizada em p, atravs de uma simples titulao, uma vez que a quantidade de dentina diferente no sexo feminino e masculino (MOURA NETO, 1998). A anlise do grau de mineralizao dos dentes atravs da Radiografia panormica outro mtodo que permite distinguir o sexo, Saliba (1997) e seus colaboradores desenvolveram um estudo em que concluem que os dentes de indivduos do sexo feminino apresentaram um grau de mineralizao mais precoce do que os do sexo masculino, em quase todos os dentes analisados. Atravs da biologia molecular possvel a determinao do sexo de forma inequvoca. A amelogenina um dos loci utilizados que permite, atravs da tcnica da PCR (Polimerase Chain Reaction), identificar o sexo de um indivduo que tenha deixado determinado vestgio biolgico, uma vez que, o locus da amelogenina apresenta um alelo de 106 pares de bases nas mulheres e um de 106 e outro de 112 pares de bases nos homens (AKANE et. al., 1992; JOBIM et. al., 2006). Foram descritos alguns loci de STRs do cromossoma Y que tm sido usados para o esclarecimento de crimes sexuais em que existam secrees misturadas. possvel, atravs da anlise dos loci deste cromossoma, presentes nos espermatozides da secreo vaginal da vtima, identificar o violador de forma inequvoca, pois o material feminino da mistura em nada interferir. De acordo com Jobim e seus colaboradores (2006), os principais loci deste sistema so: DYS19; DYS389 I e II; DY390, DYS391; DYS392 E DYS393.

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3.5.2. Determinao da origem tnica

A anlise das estruturas dentrias serve de base determinao do fentipo (cor da pele) assim distinguem a origem tnica do indivduo. Favero (1991) relata a existncia de cinco tipos tnicos fundamentais: caucasiano, negro, monglico, indiano e australide. Carvalho (1982) estudou a estrutura dos dentes associada com as diferentes origens tnicas e concluiu que praticamente toda a populao europeia tem a superfcie dos dentes incisivos lisa, enquanto os japoneses, e certos grupos mongolides, essa superfcie tem arestas. O primeiro molar inferior dos caucasianos mais comprido e tem forma mais cnica do que o molar dos negros, o qual mais rectangular do que o dos mongolides, que mais redondo (GALVO, 2000),

108

3.5.3. Determinao da idade

A estimativa da idade do indivduo tambm determinvel pela anlise do desenvolvimento dentrio. Estudos tm demonstrado que, em relao aos ossos, os elementos dentrios so as estruturas orgnicas que fornecem os melhores contributos para a estimativa da idade. Isto explicado porque os dentes sofrem menos a aco de factores sistmicos e de desnutrio, que afectam extremamente o desenvolvimento e maturao dos ossos. O desenvolvimento dentrio vai da vida fetal at por volta dos 21 anos de idade (SILVA, 1997).

109

3.5.4. Marcas de mordida

As marcas de mordida so outra forma de determinao das caractersticas individualizantes dos dentes. O seu estudo permite a revelao da arcada dentria . Entende-se como marca de mordida a impresso causada unicamente pelos dentes ou outros elementos duros da boca (por exemplo: prteses dentrias moveis, aparelhos dentrios entre outros), na pele de pessoas vivas, de cadveres ou sobre objectos inanimados relativamente moles. A forma tpica da leso provocada pela mordida oval ou circular, como uma equimose, embora, h casos em que a marca se limita a uma pequena equimose difusa, dificultando a identificao de caractersticas dentrias especficas (MAGALHES, 2003). Quando detectadas na pele, estas evidncias significam que existiu um contacto violento entre agressor e vtima, so muito comuns em crimes contra a liberdade sexual, maus tratos em crianas, entre outros. Neste tipo de crimes os dentes so usados como arma de defesa (BOWERS et. al.,. 1997). Aps ser detectada a leso provocada pela mordida esta vai ser analisada. Uma vez que as marcas de mordidas esto completamente associadas aos dentes, os pressupostos da sua anlise so: os dentes humanos so nicos e existe detalhe suficiente dessa singularidade na marca de mordida (MAGALHES, 2003).

3.5.4.1.

Estudo das Marcas de mordida

Existem vrias metodologias para anlises destes vestgios, por exemplo: anlise mtrica, a sobreposio de imagens digitais ou transparncias, mas qualquer mtodo usado se baseia em trs passos: obteno de evidncia a partir da vtima; obteno de evidncia a partir do suspeito; comparao da evidncia.

Obteno de evidncia a partir da vtima

Aps a deteco da leso, o primeiro passo o exame visual. O exame visual tem como objectivo a descrio exaustiva das caractersticas da marca da mordida. Esta

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descrio deve incluir as seguintes caractersticas: localizao, tamanho, forma (circular ou elptica resultado das arcadas dentrias superior e inferior; os dentes incisivos marca em rectngulo alongado; os dentes caninos - forma triangular ou estrelada), orientao, cor, tipo de leso (Equimose provocada pela presso dos lbios; Escoriaes - marcas deixadas pelos dentes incisivos e caninos ou pelo palato; ou Equimoses de suco -provocadas pela lngua ou pelo vcuo). Com o objectivo de documentar a anlise das marcas de mordidas fundamental o registo fotogrfico da leso. Este registo obedece a determinadas tcnicas e metodologias especiais captura deste tipo de evidncia (incluir escala milimtrica, tirar fotografias em dias sucessivos, com objectivas e luzes diferentes, entre outras). Para alm da possibilidade de identificao da arcada dentaria do autor da mordida, anlise cuidada deste tipo de evidncia permite a obteno de vestgios biolgicos. Sempre que h uma mordida depositada saliva no local da leso (GALANTE, 2003) (MAGALHES, 2003). Portanto a sua colheita fundamental e deve ser realizada logo numa fase iniciar de forma a garantir a presena de clulas nucleadas oriundas da cavidade oral. Este vestgio biolgico forense ser descrito frente. Revela-se importante a obteno de um molde da marca da mordida sempre que as leses na pele da vtima o permitam. A moldagem destas leses pode ser feita com o auxlio de materiais como o silicone ou o vinilpolisiloxano assim possvel preservar a marca em trs dimenses. Dependendo da situao pode ser necessrio dissecar a rea da mordida ou at fazer a exciso total da do tecido. O objectivo preservar a evidncia e assim facilitar as investigaes (PEREIRA, 1994).

Obteno de evidncia a partir do suspeito

Feitas as colheitas e moldes das evidncias detectadas na vtima prossegue-se colheita das evidncias dos possveis suspeitos e assim obter dados de comparao que permitam a identificao do perpetrador. Magalhes (2003) afirma que antes da colheita propriamente dita o(s) suspeito(s) deve ser sujeito a um exame visual s suas estruturas extra e intra-orais, em especial sade dentria geral, ocluso e articulao temporo-mandibular, fazendo referncia existncia de mobilidade dentria, de bolsas periodontais, de restauraes dentrias, diastemas, fracturas, cries, tratamentos dentrios realizados em datas prximas, antes ou depois da agresso, e funo e tonicidade dos msculos da face e da mastigao. A fotografia fundamental tal como na obteno de evidncia a partir da vtima. 111

Assim, devem ser capturadas fotografias de diversos ngulos, da face completa e de perfil, o interior da cavidade bucal tambm deve ser documentado fotograficamente, fotografias intraorais das arcadas superior e inferior, vistas laterais e frontal dos dentes em ocluso so muito importantes para permitir a comparao. A saliva e as clulas da mucosa oral tm tambm aqui um papel muito importante, a sua colheita fundamental para comparao com as obtidas anteriormente. A colheita de sangue tambm feita embora com menos frequncia (BOWERS, 1997). Deve ser feito tambm o molde de ambas as arcadas dentrias dos suspeitos em gesso. Estes modelos possibilitam as sobreposies fotogrficas transparentes, mesma escala das fotografias da marca de mordida original (MAGALHES, 2003). Podem ainda ser executadas marcas de mordida experimental, em que os suspeitos mordem lminas em cera, silicone, plasticina ou em qualquer num outro material em que os moldes dos bordos incisais dos dentes fiquem evidentes.

Comparao da evidncia

Por fim, e obtidas todas as evidncias tanto da vtima como dos possveis agentes do crime s resta a sua comparao e assim concluir em relao correlao entre as amostras, ou seja, assegurar um elevado grau de correspondncia entre o tamanho e a posio dos dentes do possvel perpetrador e as caractersticas identificadas na marca de mordida. Feitas as anlises mtricas (forma, tamanho, posio dos dentes, individual e colectivamente) de ambas as evidncias comparam-se os padres dos dentes com traos similares e caractersticas apresentadas em fotografias de tamanho real. Fazem-se sobreposies transparentes de vrias formas, actualmente a informtica possibilita e facilita este mtodo. Outros mtodos consistem em comparaes directas dos modelos do suspeito com fotografias da marca de mordida, comparao das marcas de mordida experimentais ou a utilizao de imagens radiogrficas (MAGALHES, 2003) (VANRELL, 2002). Concluindo, a anlise das marcas de mordidas um trabalho para especialistas periciais. Contudo, necessrio ter presente que, a observao morfolgica cuidada destas leses de fundamental importncia pois possui a capacidade de orientar o resto da investigao. De nada adianta ir para os detalhes, quando a simples morfologia geral j exclui o suspeito. As caractersticas individuais que aparecem nos dentes, e o seu exame combinado e simultneo, permitem determinar o carcter pessoal de cada mordida quando comparada com outras.

112

3.6. Vestgios biolgicos forense: a Saliva

As glndulas salivares presentes na cavidade oral tm como funo a produo de saliva. A saliva um importante fluido orgnico que desempenha inmeras funes, intervm na digesto dos alimentos, protege a cavidade bucal, gastrointestinal e orofaringe, diminui a acidez bucal, tem um papel fundamental na manuteno da hidratao do organismo, entre outras. O principal constituinte da saliva gua, mas contm componentes orgnicos, como enzimas, e minerais. No que diz respeito Cincia Forense, este fluido desempenha um papel fundamental na investigao de vrios crimes, principalmente em crimes de homicdio, agresses ou crimes contra a liberdade sexual (abuso sexual e abuso de menores). Este vestgio detectase sobretudo em marcas de mordida, em que a saliva fica depositada sobre a superfcie cutnea, como j foi referido (ANZAI-KANTO et. al., 2005). A saliva pode ainda ser detectada em cigarros, sobre selos postais envelopes que se colaram com saliva, entre outros (VILLANUEVA CAADAS, 2004; GITLITZ, 1974; SWEET, 1999).

Testes preliminares ou de orientao

Como j foi explicado anteriormente, a deteco das manchas de saliva pode fazer-se empregando uma simples tcnica de screening, induzir a fluorescncia atravs da incidncia de luz de espectros diferentes (luz branca, luz ultravioleta e laser), este mtodo d um feedback imediato ao especialista forense no acto da investigao do crime (AUVDEL, 1987). Quimicamente tambm possvel a deteco de saliva, pela pesquisa de sulfocianeto de potssio (outros lquidos orgnicos tambm contm a substncia) e de ptialina (ESPNDULA, 2006).

Testes de identificao ou individualizao

A presena de saliva pode ser confirmada por espectroscopia de fluorescncia, analisando a amilase. A amilase uma glicoprotena com funes de enzima digestiva presente na saliva. As bandas obtidas a partir de amostras de saliva, quando analisadas com 113

espectroscopia de fluorescncia so semelhantes s bandas obtidas da amilase em estado puro (EDGAR, 1992; YOUNG, 1997). A Espectroscopia de fluorescncia a tcnica que detecta o espectro da radiao emitida por um tomo ou molcula, quando esta relaxa do estado excitado para o estado fundamental, ou seja o resultado da absoro de energia radiante e consequente emisso de parte desta energia sob a forma de luz. A forma de luz emitida tem, quase sempre, um comprimento de onda superior ao da luz absorvida (GUIMARES, 2006; YU, 2006).

Figura 3-47 - Exemplo de espectofotmetro de fluorescncia (Disponvel em: www.labinstcol.com/pdtos_espctro_fluor.htm, acesso a 27 de Outubro de 2008).

A deteco de saliva pode ser feita por imunocromatografia enzimtica. Este tipo de testes detecta a presena da amilase usando anticorpos monoclonais especficos para a amilase salivar humana. So testes rpidos, de utilizao simples e que detectam amostras escassas de saliva humana. Exemplos deste tipo de testes so o SALIgAE Test, produzido pela Abacus Diagnostics ou o Rapid Stain Identification of Human Saliva (RSID), comercializado pela Galantos Genetics GMBH. O RSID um ensaio imunocromatogrfico que utiliza a combinao de anticorpos monoclonais conjugados e anticorpos policlonais anti--amilase salivar humana de fase slida, com elevada especificidade e sensibilidade. A -amilase presente na saliva liga-se ao anticorpo monoclonal, formando um complexo estvel, o qual flui pela rea adsorvente do kit e se liga aos anticorpos policlonais na rea de reaco positiva, surgindo uma banda com colorao vermelha. Na ausncia da -amilase, no haver o desenvolvimento de banda na rea de reaco, indicando resultado negativo (BENJAMIN, 2008).

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Figura 3-48 - RSID resultados possveis. A primeira figura esquerda representa um teste negativo, ou seja no h deteco de saliva humana na amostra uma vez que visvel apenas a linha vermelha na posio C Controlo. Na segunda figura so visveis duas linhas vermelhas, uma na posio de Controlo - C e outra na posio do Teste T, isto indica a presena de saliva humana na amostra, teste positivo. Por fim na figura mais direita est representado um teste invlido, uma vez que surgiu apenas uma linha vermelha na posio T.

Testes de Identificao individual

Depois de detectada a mancha de saliva e feita a recolha possvel a anlise ao DNA genmico, uma vez que na saliva existem clulas do epitlio bucal estas clulas permitem a identificao, por PCR, dos marcadores de DNA do individuo de quem procede a amostra (VILLANUEVA CAADAS, 2004; Sweet et. al., 1996; Anzai-Kanto et. al., 2005).

Figura 3-49 - Clula do epitlio bucal (Disponvel em: www.papquick.com acesso a 16 de Novembro).

115

A determinao do grupo sanguneo ABO tambm exequvel em amostras de saliva. uma tcnica directa de observao da reaco antignio-anticorpo, mediante a titulao dos anticorpos no fixados amostra de saliva (ESPNDULA, 2006).

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3.7. Vestgios biolgicos forenses: os Ossos


Os esqueletos falam, tem que se saber descodificar o que l est (CUNHA, 2008). Dentro do ramo das Cincias Forenses, a Antropologia Forense tem sido cada vez mais utilizada de forma sistemtica como instrumento eficaz na resoluo de investigaes criminais (GRISBAUM UBELAKER, 2001). O estudo dos ossos em Cincia Forense muito importante na identificao de cadveres ou restos cadavricos provenientes de desastres em massa
3

(exploses,

naufrgios, acidentes de viao, actos de terrorismo, guerras ou catstrofes naturais em que se verifica carbonizao ou destruio macia do corpo como vulces, sismos, avalanches, tsunamis) (PRINZ, 2007) cadveres abandonados em avanado estado de decomposio ou mutilados/desfigurados em que a identificao visual impossvel, corpos mumificados ou cujas marcas dactilares tenham sido destrudas (BYERS, 2002; UBELAKER, 2000; MANN, 1990). Este estudo permite distinguir o sexo, idade, altura, lateralidade, ancestralidade e raa do cadver, alm de doenas ou alteraes biolgicas ocorridas ao longo da vida do indivduo e marcas de stress ocupacional, tudo com o objectivo final da identificao morfolgica. A data, causa e circunstncias de morte so outros dos objectivos do estudo dos ossos (MAGALHES, 2003; KEMKES-GROTTENTHALER, 2005; CHINAPPENHORSLEY, 2007). Cunha (2008) afirma conseguir determinar o perfil biolgico, dizer se era um homem ou uma mulher; se era uma criana, um adolescente ou um adulto; se era um caucasiano, africano ou asitico; se era alto ou baixo; se teve alguma doena que deixou vestgios nos ossos; se tinha algum problema na locomoo ou se tem alguma marca de interveno cirrgica. Com todos esses dados consigo identificar. No h dois esqueletos iguais. Embora a principal tarefa da Antropologia Forense consista na determinao da identidade do falecido, actualmente os Antroplogos forenses so solicitados para dar pareceres tcnicos sobre o tipo e tamanho da arma utilizado em determinados crimes violentos. O estudo gentico tambm possvel e permite a identificao positiva de ossos. Este estudo depende do estado de preservao da amostra, o qual depende de vrios factores: do tempo decorrido desde a morte, factores ambientais (humidade e a temperatura), patologias (como por exemplo osteoporose ou simples fracturas), tamanho,

Situao que, resultante da mesma ocorrncia, provoca um nmero de vtimas superior capacidade de resposta

das instituies locais.

117

densidade e fragilidade dos ossos, factores geolgicos (acidez, composio qumica, expanso ou presso do solo), a idade dos indivduos (WALKER, 1995; NAWROCKI, 1995; PINHEIRO, 2008). Determinar identidade do indivduo Origem dos restos (espcie - humana, animal, vegetal, outra) A primeira etapa do processo de anlise deste tipo de vestgio a determinao da espcie dos restos cadavricos. Magalhes (2003) considera que, geralmente uma observao atenta do(s) osso(s) permite fazer o diagnstico, existindo contudo certas tcnicas a que pode ser feito recurso como sejam a determinao do seu peso, da sua densidade ou ndice medular, ou a anlise das suas caractersticas histolgicas, radiolgicas ou imunolgicas . A avaliao dos Canais de Havers um dos cristrios usados para auxiliar a identificao da origem do vestgio. Os Canais de Havers so estruturas encontradas no interior dos ossos e componentes estruturais dos mesmos.

Microscpicamente, constata-se que os ossos humanos tm forma elptica ou circular, dimetro superior a 3mm e densidade de 8 a 10 por mm (ENCYCLOPEDIA OF FORENSIC SCIENCES, 2000). Os ossos animais tm forma circular, dimetro inferior a 25mm e densidade superior a mencionada.
2

Figura 3-50 - Canais de Havers (Disponvel em: acd.ufrj.br/labhac/figura35.htm; acesso a 13 de Julho de 2008).

Caractersticas gerais de identificao: - Sexo Estudos macroscpicos e morfomtricos dos ossos permitem distinguir os sexos em virtude do dimorfismo sexual. Por exemplo os ossos da bacia possuem caractersticas morfolgicas que permitem distinguir os

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sexos (os ossos dos homens so mais robustos com

maior

predominncia do volume epifisrio relativamente ao volume da difise e com mais marcas das inseres musculares do que no caso das mulheres). Outros critrios que permitem esta distino so a capacidade craniana (1.400cm ou mais para os homens e 1.300cm
3 3

para as mulheres); o ngulo dos arcos superciliares (salientes para os homens e suaves para as mulheres); o ngulo subpubiano (em formato de v para os homens e em formato de u para as mulheres) e o corpo do pbis (triangular para os homens e quadrangular para as mulheres) entre outros (BUIKSTRA, et. al., 1994).

- Origem tnica O estudo da forma do crnio, dos ndices ceflicos, tbio-femural, rdioumeral e do ngulo facial (prognatismo facial inferior, conformao do malar ou do palato, proporo das superfcies orbitrias e nasal, caractersticas da abertura do nariz e do bordo nasal inferior e certos estigmas dentrios) permite determinar a origem tnica, embora se trate de uma determinao UBELAKER, 2000). - Idade e altura O mtodo mais seguro para averiguar a idade a radiografia dos ossos, vez que identifica com grau de aproximao significativo. Existem tabelas que indicam a idade aproximada pela morfologia e densidade dos ossos. A radiografia da mo indicada para verificar idades prximas dos 18 anos e a partir do 25 a do crnio, devido a fuso dos ossos (SAUKKO, 2003). bastante complexa (MAGALHES, 2003;

Caractersticas individualizantes (sinais particulares) Considera-se como caractersticas individualizantes mal-formaes, calos, deformaes sseas de natureza congenita ou adquirida por meio de acidente ou patologia que quando analisadas permitem a identificam o sujeito (MAGALHES, 2003).

Determinar data da morte;

A determinao da data da morte pode ser uma tarefa bastante complexa, uma vez que, a decomposio cadavrica e at a esqueletizao dificultam este objectivo. 119

Entre as metodologias orientadoras que permitem determinar a data de morte esto a avaliao da fase de decomposio cadavrica, o estudo e quantificao de compostos qumicos dos ossos e suas modificaes (relao entre matria orgnica e inorgnica, por anlise trmica diferencial ou por anlise termo-gravimtrica, mas esta tambm dependente do local onde os ossos se encontravam) (BURNS, K. 1999; MAGALHES, 2003).

Determinar causa da morte;

A Antropologia Forense contribui para o conhecimento da causa da morte (CUNHA, 2008). Traumatismos com fracturas ou ferimentos por armas de fogo ou, ainda, intoxicaes crnicas por arsnio deixam marcas fsicas nos ossos que quando estudados permitem obter dados para o esclarecimento da causa da morte (BYTHEWAY, 2007).

Interpretar as circunstncias da morte.

A interpretao relativa s circunstncias da morte uma tarefa de crucial importncia na reconstituio do acto do crime. Geralmente um processo complicado e que nem sempre se obtm as respostas conclusivas. Esta tarefa normalmente limitada anlise e observao da existncia, ou no, de sinais de violncia e da interpretao da vitalidade de certas leses (diagnstico diferencial com leses ps-mortem provocadas por animais ou outros elementos da natureza tafonomia) (MAGALHES, 2003).

120

3.8. Outros vestgios biolgicos forenses

Outros vestgios biolgicos como urina, mecnio, fezes, leite, colostro, restos fetais, entre outros, tambm possuem interesse mdico-legal e criminalstico. Embora com interesse inferior aos vestgios desenvolvidos atrs, justifica-se uma breve referncia a alguns deles. As manchas de urina revelam-se bem sobre os tecidos por fluorescncia de cor branco celeste luz de Wood (luz negra). A anlise macroscpica da ma ncha de urina auxilia na sua identificao, uma vez que possui um odor caracterstico e cor amarela esverdeada. A natureza da mancha pode ser confirmada atravs dos seus compostos maioritrios: a ureia, pela aco da urease, creatinina, mediante a aco do reagente de Jaff (ESPNDULA, 2006). Na urina tambm so secretados aglutinognios AB, portanto permite testes de identificao especficos por reaces antignio-anticorpo (VILLANUEVA CAADAS, 1996). No que diz respeito biologia molecular forense, os principais materiais submetidos a anlise de DNA so: sangue, smen, fios de cabelo (com raiz), tecidos, ossos e rgos; embora, outras fontes como urina, saliva e fezes tambm podem ser analisadas mas devese ressaltar que somente clulas nucleadas servem para genotipagens de DNA nuclear (LEE et. al., 1991; PINHEIRO, 2003). No caso da urina, esta no contm clulas na sua constituio, mas transporta clulas epiteliais das vias urinrias que possuem DNA; por outro lado a urina possui bactrias e outros agentes contaminantes que dificultam a obteno de resultados. Em relao s fezes, o estudo do DNA ainda mais difcil uma vez que na grande maioria das vezes, no possuem material gentico passvel de ser analisado, alm disso a sua composio tem um efeito contaminante (PINHEIRO, 2003). As fezes podem ser detectadas por um exame macroscpico uma vez que possuem um odor caracterstico, que se deve a produo de indis, escatis e tiis (compostos ricos em enxofre) pela aco bacteriana. O estudo das fezes permite obter informaes acerca dos hbitos alimentares e dieta do individuo. O mecnio definido como: matria mole, pastosa, com colorao castanhoesverdeada, composta por gorduras, muco e blis, contida no intestino do feto e que o recm-nascido expulsa pelo nus nas primeiras 6 a 12 horas que se seguem ao nascimento mas por vezes eliminado logo durante o parto, em especial se h sofrimento fetal. A investigao do mecnio pode surgir em casos de aborto, partos clandestinos e infanticdio 121

(CLARK, 2006; PICHINI et. al., 2005). Macroscopicamente, as manchas de mecnio apresentam um aspecto oleoso ou viscoso, cor amarelo-esverdeado, normalmente surgem contaminadas com sangue, lquido amnitico ou restos placentrios. A luz negra tambm permite a sua identificao, produzindo fluorescncias diversas, dependendo dos contaminantes (VILLANUEVA CAADAS, 1996). As tcnicas analticas de identificao do mecnio baseiam-se na identificao dos seus constituintes (gastrointestinais, hepticos, biliares e amniticos). Uma prova elementar e muitas vezes decisiva o exame microscpico de um macerado da mancha, permitindo a deteco de corpsculos mecnicos, de cor amarelo-esverdeado, assim como cristais de colesterina, clulas de diversas procedncias e alguns plos transparentes. Os componentes bioqumicos do mecnio (cidos biliares e colesterina) podem ser identificados tanto na visualizao microscpica por adio de cido ntrico ou sulfrico ou mediante reaces mais especficas, por espectrofotomtricas, tanto no espectro visvel como infravermelho (VILLANUEVA CAADAS, 1996). Segundo Pinheiro (2003), o material fetal um vestgio forense usado, principalmente em casos de investigao biolgica de maternidade em que h suspeita do feto ter sido abandonado pela me ou quando a gravidez tiver resultado de violao, se tiver sido feita a interrupo da mesma . Exames de biologia molecular tambm so possveis de realizar com estas amostras, visto conterem quantidades considerveis de DNA. Para isso, as amostras devem ser devidamente armazenadas a baixas temperaturas (congelao) no sentido de evitar a sua degradao. No recomendado o uso de conservantes (lcool ou formol), pois estes produtos alteram de uma forma irreversvel os componentes celulares (PINHEIRO, 2008). O Leite e Colostro so outros vestgios que podem ser detectados e analisados na investigao de um crime. Nas anlises macroscpicas, a mancha de leite bem definida e de cor amarelada j o colostro tem uma colorao amarela acinzentada sendo ntida nos bordos. Este tipo de manchas pode ainda ser identificado atravs de exame microscpico, em que se verifica a presena de clulas ricas em glbulos de gordura e granulaes proteicas ou atravs do exame qumico com guaiacol, hidroquinona, pirocatequina e iodo (ESPNDULA, 2006).
4

Artigo 42 do Cdigo Penal Portugus.

122

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Consideraes finais

Nesta Dissertao foi feito um apanhado geral de conceitos tericos formulados por investigadores e especialistas a respeito das metodologias de deteco de vestgios biolgicos forenses, respondendo ao objectivo inicial apresentado na Introduo.

A apresentao sobre a Cincia Forense (Captulo1) abrangeu uma viso geral do seu conceito, princpios e reas de actuao bem como uma breve resenha histrica. Assim, pode-se dizer que a Cincia Forense tem uma vasta histria, que foi evoluindo ao longo dos tempos com o desenvolvimento das outras cincias, uma vez que se trata de uma cincia algo subjectiva, que se move pelas reas de aco da Biologia, da Qumica, da Bioqumica, entre outras.

O papel do cientista forense fundamental desde as percias no local do crime at emisso do Relatrio Pericial. Depende do seu desempenho a valorizao do vestgio encontrado na cena do crime como prova em Tribunal. Assim, este profissional deve ter sempre em mente a manuteno da Cadeia de Custodia, bem como os procedimentos correctos de colheita, armazenamento e preservao dos vestgios. Os seja, deve seguir o Protocolo de procedimentos de exame da cena do crime (Captulo 2).

O Captulo 3 desenvolve todo o objectivo desta Dissertao, onde se descrevem os vrios mtodos ou tcnicas usados nas percias forenses. Assim, pode-se dizer que as anlises forenses se baseiam sobretudo nas tcnicas e mtodos da Imunologia, Qumica, Bioqumica, bem como na Microscopia, Cristalografia, Cromatografia, Fluorescncia, Fosforescncia entre outros. Uma amlgama de princpios de tcnicas que so adaptadas das outras cincias para ser possvel a sua utilizao na rea forense, uma vez que a amostragem bastante diferente da das outras cincias. As amostras forenses so normalmente escassas, degradadas e com origem desconhecida, estas condies dificultam o seu manuseamento, obrigando a outro tipo de cuidados.

De uma forma geral, independente do vestgio em causa, as tcnicas referidas so utilizadas em exames presuntivos ou de orientao, confirmatrios e finalmente, teste de identificao ou origem. Genericamente este o percurso que as amostras seguem para a sua deteco e identificao, com o objectivo maior que a reconstituio e resoluo do acto criminoso.

O sangue, o smen, os plos e a saliva so dos vestgios biolgicos forenses 133

detectados com maior frequncia numa cena de crime. Por este facto aparecem com maior destaque. O seu processamento laboratorial implica anlises complexas, que demoram o seu tempo mas que normalmente permitem a obteno de resultados conclusivos.

Existem ainda outros vestgios biolgicos igualmente importantes na resoluo de crimes. So exemplos os dentes e ossos, vestgios que mais resistem deteriorao normal no processo post mortem. A urina, fezes, mecnio, material fetal, fludo vaginal, leito e colostro so outros vestgios detectados em vrios tipos de crimes, e embora em menor frequncia podem ser de crucial importncia no mbito da investigao criminal.

Actualmente, alguns destes testes vo caindo em desuso, muito por causa da mais recente tecnologia de Biologia Molecular, em que possvel a determinao precisa e especifica do perfil gentico da amostra e assim compara-la com os perfis dos suspeitos e vtimas possibilitando a identificao de forma inequvoca do agente causador do crime. Mas a importncia destes testes imensa na prtica forense e justifica a sua utilizao pelas suas inmeras vantagens. So testes mais simples, rpidos, econmicos, que permitem a obteno de resultados por vezes imediatos facilitando o desenvolvimento das tcnicas de biologia molecular, ou seja podem at ser vistos como testes iniciais de triagem com o objectivo final da identificao gentica. Assim, faz todo o sentido a sua utilizao na prtica forense. A sua explorao uma enorme mais-valia para a resoluo de crimes.

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