AISLAMIENTO SELECTIVO Y DIFERENCIAL DE MICROORGANISMOS ngela lvarez Coral; diego Jimnez

Universidad De Nario - Facultad De Ciencias Exactas Y Naturales diegofer1414@hotmail.com, angevanne02@gmail.com

INTRODUCCION El estudio de las caractersticas que permiten identificar los microorganismos requiere tenerlos en cultivo puro; eso significa aislar la bacteria que interesa, separndola de los otros organismos que podran coexistir en una muestra. Esta podra ser una tarea prcticamente imposible si se utiliza un medio Rico, por ejemplo el agar sangre, que permite el crecimiento de un gran nmero de especies bacterianas. Sin embargo el aislamiento de determinada especie se facilita al aplicar los conocimientos de nutricin microbiana, y emplear un medio de cultivo que favorezca el crecimiento del microorganismo deseado e inhiba a los otros. Este tipo de medio se denomina Selectivo, pues selecciona a determinados microorganismos. (1) Actualmente, la identificacin bacteriana se realiza por medio de mtodos convencionales, basados en las caractersticas fenotpicas, puesto que su realizacin y coste los hace ms asequibles. Los mtodos genotpicos suelen reservarse para las bacterias que no se pueden identificar con mtodos convencionales. Los esquemas tradicionales de identificacin fenotpica bacteriana se basan en las caractersticas observables de las bacterias, como su morfologa, desarrollo, y propiedades bioqumicas y metablicas. El cultivo, cuando es factible, continua siendo el mtodo diagnstico de eleccin; permite el aislamiento del microorganismo implicado, su identificacin, el estudio de sensibilidad a los antimicrobianos y facilita la aplicacin de marcadores epidemiolgicos. En el cultivo es esencial la correcta eleccin del medio de crecimiento y las condiciones de incubacin. En el proceso de identificacin bacteriana tradicional, la experiencia del microbilogo es fundamental para la eleccin de una prueba o una batera de pruebas de forma secuencial, en funcin de la fiabilidad de las mismas, del gnero o de la especie bacteriana que se pretende identificar, del origen del aislado bacteriano, as como del coste de las mismas. Los laboratorios deben elaborar y realizar un proceso de identificacin normalizado en su actividad diaria, que utilice de forma secuencial o simultnea un conjunto de pruebas cuyo propsito final sea la identificacin del microorganismo a nivel de gnero y especie y que incluya la mayora de las bacterias desde el punto de vista infeccioso. Objetivos. - realizar las tcnicas adecuadas para la seleccin de bacterias Gram positivas. identificar mediante pruebas bioqumicas los organismos Gram positivos y Gram negativos.

- determinar el genero y la especie, para bacterias Gram negativas a partir de una cepa problema. MATERIALES Y MTODOS Para bacterias Gram positivas. - prueba de la catalasa. Se utilizo cepas de Staphylococcus aureus y de Streptococcus sp; a una muestra de estas colonias se le agreg una gota de agua oxigenada y se observaron las reacciones que dio a lugar. - Identificacin por tincin de Gram Se tomo una muestra de Staphylococcus aureus y Klebsiella y se procedi a realizar tincin de Gram: 1. Se realizo un extendido de la muestra sobre el portaobjetos 2. Se sec la muestra, utilizando un mechero. 3. Se fijo la muestra con metanol, durante 1 minuto 4. Se agreg cristal violeta y se espero durante 1 minuto para que se fijara. 5. Se procedi a enjuagar con abundante agua destilada. 6. Se agreg lugol y se dej reposar por 1 minuto 7. Nuevamente se enjuag con abundante agua. 8. Se agreg alcohol acetona y se esper durante 30 segundos. 9. Se enjuag con agua 10. Se utiliz tincin de contraste agregando fucsina y se dejo reposar durante 1 minuto. Se procedi a observar en el microscopio en objetivo de 100x y utilizando aceite de inmersin. Cabe destacar que a partir de esta prueba se escogi las muestras que resultaron Gram negativos, para realizar las

pruebas bioqumicas Gram negativas.

para

bacterias

Para bacterias Gram negativas. Cepas bacterianas: se utilizo cepas de Klebsiella; tambin se dispuso de medios de cultivo, para realizar la correspondiente siembra. 1. Agar TSI: se realiz una siembra, tomando la muestra problema de una colonia de bacterias, con el asa recta previamente esterilizada, se destap el tubo, se flameo la boca de este y se hizo una puncin central hasta el fondo del tubo y seguidamente se sac el asa deslizndola por la superficie en zig-zag. 2. AGAR CITRATO DE SIMMONS: se realiz una siembra con asa recta, previamente esterilizada, se destap el tubo se flameo la boca de este y se hizo la siembra solamente en la superficie deslizndola suavemente en zigzag. 3. AGAR UREA: se realiz una siembra con asa recta, previamente esterilizada, se destap el tubo se flameo la boca de este y se hizo la siembra solamente en superficie, igual que el anterior procedimiento. 4. AGAR SIM: se realiz una siembra con asa recta, previamente esterilizada, con la cual se tomo la muestra del cultivo de bacterias, se flameo la boca del tubo; el medio qued inoculado cuando se introdujo el asa en profundidad hasta el fondo del tubo, retirndola posteriormente por la misma trayectoria utilizada anteriormente.

5. CALDOS MR-VP: se realiz una siembra con asa en argolla, previamente esterilizada, se destap el tubo se flameo la boca de este y se hizo la siembra. Resultados y discusin. Para bacterias Gram positivas. - Prueba de la catalasa: la reaccin que dio a lugar una vez que se le aplic una gota de agua oxigenada fue el desprendimiento de burbujas, La catalasa es una enzima que descompone al perxido de hidrgeno en oxgeno y agua, esta enzima es similar a la estructura de la hemoglobina. Excluyendo al gnero Streptococcus y algunos otros la mayora de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas tienen catalasa.

Una vez que se realizo la tincin, se estableci la presencia de cocos Gram positivos pertenecientes a staphylococcus y bacilos Gram negativos pertenecientes a la muestra problema asignado.

En la imagen se muestra cocos Gram positivos teidos de color purpura. A continuacin se muestran los resultados para tincin con bacilos Gram negativos, teidos de color rosa.

Algunas pruebas para la catalasa que resultan tanto positivas como negativas son las siguientes: Catalasa Positivo:(Staphylococ cus) Coagulasa Tolerancia a la sal Sensibilidad al SXT - identificacin por tincin de Gram. Catalasa Negativo: ( Streptococcus) Bilis esculina CAMP

Los fundamentos de la tcnica se basan en las diferencias entre las paredes celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglicano, adems de dos clases de cidos teicoicos: Anclado en la cara interna de la pared celular y unido a la membrana plasmtica, se encuentra el cido lipoteicoico, y ms en la superficie, el cido teicoico que est anclado solamente en el peptidoglicano (tambin conocido como murena) Por el contrario, la capa de peptidoglucano de las Gram negativas es delgada, y se encuentra unida a una segunda membrana plasmtica exterior (de composicin distinta a la interna) por medio de lipoprotenas. Tiene una capa delgada de peptidoglicano unida a una membrana exterior por lipoprotenas. La membrana exterior est hecha de protena, fosfolpido y lipopolisacrido. Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tien diferencialmente debido a estas diferencias constitutivas de su pared. La clave es el peptidoglicano, ya que es el material que confiere su rigidez a la pared celular bacteriana, y las Gram positivas lo poseen en mucha mayor proporcin que las Gram negativas. La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloracin, se debe a

que la membrana externa de las Gram negativas es soluble en solventes orgnicos, como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de peptidoglucano que posee es demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que se form previamente, y por lo tanto este complejo se escapa, perdindose la coloracin azul-violcea. Pero por el contrario, las Gram positivas, al poseer una pared celular ms resistente y con mayor proporcin de peptidoglicanos, no son susceptibles a la accin del solvente orgnico, sino que este acta deshidratando los poros cerrndolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo la coloracin azul-violeta. Para bacterias Gram negativas. A continuacin se muestra una foto indicando como eran los medios de cultivo en un principio y como cambiaron estos cuando se realizaron las siembras.

De izquierda a de recha encontramos: caldo MR-VP, TSI, SIM, UREA y CITRATO SIMMONS. 1. Agar TSI: El Agar-hierro-triple azcar es un medio de cultivo. Gracias a su composicin es uno de los medios de cultivo ms empleados para la diferenciacin de entero bacterias segn:

-Fermenten o no glucosa. -Fermenten o no lactosa o sacarosa. -Produzcan o no cido sulfhdrico. -Produzcan o no gas.

En nuestro caso correspondientemente las reacciones sobre agar TSI son: - Bacteria problema ferment la glucosa, acidific el medio haciendo virar a amarillo el indicador en el fondo del tubo, mientras que en la superficie present un color rojo, esto indica que en la superficie no se presento fermentacin. Se utiliza los valores de K (alcalinidad) y A (acidez) para su clasificacin, dndonos como resultado un K/A -La bacteria produjo cido sulfhdrico (debido a la reduccin de las sales de hierro), se presenta un ennegrecimiento del tubo, como se puede observar en la mancha negra de la imagen.

En los resultados obtenidos se observa un cambio de coloracin; de color verde cambia a un color azul rey. El indicador de PH es el AZUL DE BROMOTIMOL el cual en presencia de alcalinidad vira al color azul indicando que la prueba es POSITIVA. Cuando no hay cambio de color ni crecimiento se dice que la prueba es negativa. 3. AGAR UREA: Es un medio utilizado para diferenciar microorganismos en base a la actividad uresica. Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea, tales como Proteus spp., otras enterobacterias y estafilococos.

2. AGAR CITRATO DE SIMMONS: este medio Sirve para determinar si un microorganismo puede crecer utilizando citrato como nica fuente de carbono debido a la sntesis de la enzima citrato permeasa la cual permite la introduccin del citrato al interior de la clula, una vez dentro, el citrato es incorporado al ciclo de los cidos tricarboxilicos o ciclo de Krebs.

En el Medio de Cultivo, la triptena y la glucosa, aportan los Nutrientes Para El Desarrollo de microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el equilibrio osmtico, y el rojo de fenol es el Indicador de pH. ALGUNAS bacterias hidrolizan la urea Por Medio de la enzima

ureasa liberando amonaco y Dixido de Carbono. Estos Productos alcalinizan El Medio Haciendo virar el rojo de fenol del amarillo al rojo; para nuestros resultados dio positivo. En este medio, la fermentacin de la glucosa activa la enzima ureasa, Acelerando la velocidad del metabolismo en Aquellos Organismos que hidrolizan Lentamente la urea. 4. AGAR SIM: Es un medio semislido destinado a verificar la movilidad, produccin de indol y de sulfuro de hidrgeno en un mismo tubo. Es til para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae. Antes de realizarse la prueba del indol se observo la movilidad, el cual no presento ya que, no hubo desplazamiento de la colonia en el lugar en donde se inoculo.

alrededor de la puncin de siembra, aunque tambin existen aquellas cepas productoras de acido sulfhdrico que se distinguen por la formacin de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un pH mayor a 7.2. Por tanto en estos resultados se llega a la conclusin de que es positiva para el indol y dudosa para el H2S 5. CALDOS MR-VP: En el caldo MRVP se determina por qu va metablica fermenta la glucosa la bacteria. En el medio de cultivo, la pluripeptona aporta los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano y la glucosa es el hidrato de carbono fermentable. La glucosa puede ser metabolizada por los microorganismos, a travs de distintas vas metablicas. Segn la va utilizada, se originarn productos finales cidos (cido lctico, cido actico, cido frmico), o productos finales neutros (acetil metil carbinol). M.R: tubo con rojo de metilo A este tubo se le agreg 10 gotas de rojo de metilo, y al instante se observo la aparicin de un color rojo

Prueba de indol: El triptfano es un aminocido constituyente de muchas peptonas, y particularmente de la triptena, que puede ser oxidado por algunas bacterias para formar indol. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. El indol producido se combina con el aldehdo del reactivo de Kovacs o de Erlich, para originar un compuesto de color rojo, como en el que se ve en la imagen. Las cepas mviles pueden apreciarse en este medio, por la turbidez que producen

Esta coloracin se debe a que La bacteria puede fermentar la glucosa por la VIA ACIDA MIXTA con produccin de metabolitos como cido lctico, frmico y succnico, los cuales van a hacer

descender el pH inicial del medio de 6.9 a 4.2, lo cual se visualiza al agregar el indicador de pH ROJO DE METILO, el cual a pH cido vira a un color rojo. V.P: Tubo con alfa naftol. A este tubo se le agrego 5 gotas de alfa naftol al 5%, observndose una coloracin amarilla en la parte superior del medio. Esto indica una prueba negativa.

Gram negativas, de tal manera que se logro dilucidar de cierta manera su genero y su especie - es necesario ser riguroso, en la identificacin mediante las pruebas bioqumicas, ya que una mala interpretacin de resultados, nos llevara a dilucidar errneamente una especie de bacteria. - la tincin de Gram es de gran ayuda para diferenciar entre bacterias Gram + y Gram - la diversidad de medios de cultivos nos permiten acercar a la clasificacin de una bacteria con una alta fiabilidad en el resultado. - Las bacterias Gram positivas son los principales agente para la degradacin de materia orgnica en el suelo y solamente unas pocas son patgenas. Las bacterias con bajo contenido en CG son importantes en la industria alimenticia por su importancia en la elaboracin de productos de gran demanda comercial. Cuestionario. 1. Que bacterias Gram Positivas provocan con mayor frecuencia intoxicaciones alimentarias? Clostridium botulinum. El botulismo es una intoxicacin alimentaria poco frecuente pero de consecuencias graves. Esta causada por la ingestin de toxinas botulnica (NTBo), uno de los txicos naturales mas potentes, formada previamente en el alimento. El brote de botulismo se ha asociado al consumo de conservas caseras, hay alimentos causantes de botulismo como la carne cruda, pescado con una leve conservacin.

La bacteria puede fermentar la glucosa por la VIA BUTILENGLICOLICA con produccin de productos neutros como el ACETIL METIL CARBINOL (ACETOINA), el 2,3 BUTILENGLICOL y el DIACETIL. El producto final ms frecuente es el 2,3 BUTILENGLICOL, que es fcilmente oxidado a acetil metil carbinol y luego a di-acetil. Una vez obtenidos todos los resultados se prosigui a hacer un anlisis en la tabla anexa en las guas para identificar el gnero y la especie a la cual corresponda la muestra problema; esta corresponde a Klebsiella Arizona de todas las 9 pruebas bioqumicas realizadas 7 correspondan a esta especie; esto dndonos un 80% de fiabilidad en las pruebas. Conclusiones. mediante diferentes pruebas bioqumicas, se logro identificar bacterias

Tambin sean descrito el botulismo infantil a la consumo de miel, en el cul la multiplicacin del germen y la produccin de toxina se produce en el intestino. Las especies del genero Clostridium son anaerbicas, son productoras de esporas termo resistentes. Se encuentran ampliamente distribuas en la naturaleza y normalmente pueden ser halladas en la tierra, vegetacin, agua dulce y sedimentos marinos y en las heces de animales. Por todo ello, su alimentacin y control se consigue por medio de tratamientos trmicos a altas temperaturas y mediante la formulacin de los productos, aadiendo cidos o reduciendo el agua disponible. -Clostridium perfringens. Es el germen esporulado que produce enterotoxinas en la luz intestinal. Los brotes se han asociado a comidas ricas en protenas como la carne y las aves, preparadas en grandes cantidades con antelacin. Es ubicuitario en el medio y por tanto pueden encontrarse en la mayor parte delos alimentos crudos, incluidos los vegetales y productos crnicos. A temperaturas elevadas como 50 pueden crecer con facilidad. Este microbio se multiplica con facilidad en el alimento y produce sus toxinas, una vez consumido, durante la formacin de esporas en el intestino, produce diarreas y nuseas, pero no es fatal. Los controles necesarios pasan por un tratamiento trmico eficaz, un enfriado rpido, separacin de los productos terminados y de las materias primas, y almacenamiento frigorfico de la carne previa al consumo. -Bacillus cereus. Es una causa importante de enfermedades de transmisin alimentaria en las personas.

Los brotes de intoxicacin son carnes y vegetales estofados, cremas, sopas y brotes vegetales crudos, especialmente el arroz hervido o frito y la pasta. Producen dos tipos de toxinas, una emtica de rpida accin que provoca vmitos y una toxina que produce diarreas. La primera es muy termo estable sobrevive al cocinado y la segunda se inactiva fcilmente por el calor. Este microorganismo es comn en el suelo, vegetales y leche cruda. - Staphylococcus aureus. Es un agente bacteriano causante frecuente de brotes de toxinfecciones alimentaras en muchos pases. Los brotes estn causados por la ingestin de alimentos que contienen las enterotoxinas estafiloccicas termoestables y se asocian a productos crnicos, productos con huevo, pasteles, cremas, bollera rellena, bocadillos y en general a productos sometidos a varias manipulaciones que despus se han mantenido relativamente a altas temperaturas. A diferencia de otras bacterias Grampositivas, su fuente principal es humana, a partir de la piel, nariz, garganta, cortes y heridas de los manipuladores; Por lo tanto si la manipulacin y prcticas de higiene son deficientes, pueden transmitirse fcilmente a los alimentos. - Listeria monocytogenes. Es un agente bacteriano que puede causar una enfermedad transmitida por los alimentos, la listeriosis, enfermedad relativamente poco notificada pero grave, con tasas de letalidad altas en personas inmunodeprimidos. La listeriosis en mujeres embarazadas tiene como complicacin habitual la aparicin de abortos espontneos. La importancia de los alimentos como va primaria de transmisin de la Listeria

monocytogenes a las persona no fue conocida hasta la dcada de los ochenta. Los alimentos mas implicados son brotes y casos espordicos de listeriosis son le grupo de comida preparada, los productos lcteos, en especial los quesos de pasta blanda, los pates y los productos de la pesca crudos o ahumados en frio, la carne de pollo y los embutidos cocidos y crudos curados. Se encuentra ampliamente distribuida en el suelo, vegetales y heces animales, siendo por lo tanto un contaminante habitual en las materias primas. Capaz de multiplicarse en ambientes refrigeraos y hmedos. Son necesarios controles, durante la produccin encaminada a evitar la contaminaciones de los productos elaborados durante la manipulacin y el envasado. 2. Que bacterias Gram positivas presentan Endosporas y cual es la importancia en la industria alimentaria. -Bacterias Gram Positivas esporuladas a este grupo pertenecen los siguientes gneros: Bacillus Clostridium, Sporosarcina, Heliobacterium - Bacillus Crecen bien en medios definidos utilizando una variedad de fuentes de carbono. Pueden producir enzimas extracelulares como las hidrolasas, que rompen polisacridos complejos. Muchos producen antibiticos como: la bacitricina, polimixina, tirocidina, gramicidina y circulina. Algunas especies de Bacillus: B. popilliae, y B. thuringiensis producen toxinas larvicidas de insectos; el B. popilliae causa una enfermedad fatal en las larvas de Sccarabeidae; el B. thuringiensis produce enfermedades mortales para las larvas del gusano de seda, dpteros (moscas y mosquitos)

- Clostridium Carecen de sistema citocrmico y de los mecanismos de fosforilacin por transporte de electrones y viven en zona anxicas. Son fermentadores. Algunos pueden producir cido butrico como producto final; otros acetona y butanol. Pueden fijar nitrgeno en el suelo por anaerobiosis. Otro grupo puede fermentar la celulosa y producir cidos y alcohol. El grupo que fermenta aminocidos por si mismo puede degradar: la alanina, cistena, glutamato, glicina, histidina, cerina o treonina , obtenindose acetato, butirato, CO2 y H2.. 3. Bacterias Gram positivas

Bacterias mviles (con forma de bacilo)

Bacterias no mviles (con forma de coco)

-Bacillus -Clostridium -corynebacterium -lactobacillus - listeria

-staphylococcus -Streptococcus

4. Cul es la prueba bsica que nos permite diferenciar los bacilos Gram Negativos fermentadores de lactosa de los que no lo son? - La prueba bsica que nos permite diferenciar bacilos fermentadores de lactosa de los que no es la prueba para TSI, ya que: Gracias a su composicin es uno de los medios de cultivo ms empleados para la diferenciacin de enterobacterias segn:

Fermenten o no glucosa, fermenten o no lactosa o sacarosa, produzcan o no cido sulfhdrico, produzcan o no gas. 5. Consulte los gneros y especies Gram negativos ms importantes en la industria alimentaria y en salud pblica. - Bacterias Entricas Gram Negativas Salmonella Salmonella es una bacteria patgena para el hombre y muchos animales y produce una en edad de origen alimentario conocida como salmonelosis, que se presenta en forma espordica y en forma de brotes. Salmonella es la causa ms comn de ETA (enfermedad transmitida por alimentos) en diversos pases, en Cuba es el primer agente causal de brotes de origen alimentario. El gnero Salmonella es uno de los ms extensamente estudiados entre los patgenos que pueden ser aislados de los alimentos. El primer brote de salmonelosis se describi en Alemania en 1888, entre 50 personas que haban ingerido carne cruda molida proveniente de una vaca moribunda. Los integrantes de este gnero son bacilos gramnegativos no esporulados oxidasa negativa, pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae. La mayora no fermentan la lactosa y son mviles, son aerobios o anaerobios facultativos, contienen endotoxinas, generalmente son termolbiles resisten la congelacin y algunos agentes qumicos poseen una rica composicin antignica que se emplea como base para la identificacin de sus miembros en serotipos, ms recientemente designados como serovares.

Shigella Es uno de los microorganismos patgenos que con mayor frecuencia causa infecciones intestinales en los nios. Son comunes los brotes en condiciones de hacinamiento y en caso de deficiencia de la higiene personal y se distingue por poseer una dosis infectiva baja con respecto a otros patgenos. Los integrantes de este gnero poseen una manifiesta adaptacin al hombre y algunas bibliografas refieren que tambin a los primates superiores, por lo que se considera el hombre su reservorio principal; producen una enfermedad de origen alimentario conocida como shigelosis; la especie Shigella dysenteriae produce generalmente la enfermedad ms grave que es la tpica disentera bacilar. Estas bacterias pertenecen a la familia de las Enterobacteriaceae, son bacilos gramnegativos, anaerobios facultativos que fermentan la glucosa sin produccin de gas (anaerognicos), excepto algunos biotipos de S. flexneri. Reaccionan negativamente a las pruebas de ureasa, gelatinasa, Voges Proskauer, H2S, fenilalanina deaminasa, lisina descarboxilasa, citrato en medio de Simmon, cianuro y utilizacin del malonato. El gnero comprende cuatro especies, todas patgenas al hombre: Grupo A: Shigella dysenteriae. Grupo B: Shigella flexneri. Grupo C: Shigella boydii. Grupo D: Shigella sonnei 5. Escherichia coli patgenas Escherichia coli forma parte importante de la microbiota intestinal del hombre y de los animales de sangre caliente, sin embargo algunas cepas han desarrollado capacidad para provocar enfermedad en

el hombre, como son las infecciones gastrointestinales. Estas cepas patgenas representan la principal causa de diarrea infantil en el mundo. La capacidad de Escherichia coli patgena para producir enfermedad est determinada por factores de virulencia que le permiten infectar a sus huspedes y sobreponerse a los mecanismos de defensa, como la produccin de adhesinas, enterotoxinas, citotoxinas y otras protenas que le permiten sobrevivir en condiciones ambientales adversas. Actualmente se reconocen seis grupos de Escherichia coli patgenas que dan lugar a diversos padecimientos. Entre estos existen diferencias clnicas y epidemiolgicas, as como en la estructura antignica y mecanismos de patogenicidad de los diferentes grupos. Cepas patgenas de Escherichia coli: -Enteropatgena (ECEP). -Enterotoxignica (ECET). -Enteroinvasiva (ECEI). -Enterohemorrgica (ECEH). -Enteroadherente (ECEA). -Enteroagregativa (ECEG). Escherichia coli, "la" bacteria tipo, habitante normal del intestino humano, es utilizada como indicador de contaminacin fecal de aguas y alimentos. 6. Para la identificacin temprana de la E. coli que pruebas se realizan (no es necesario hacer toda la batera). - Al momento de tener una muestra en donde se desee identificar la presencia de E. coli hay que definir que medios de cultivo son selectivos para enterobacterias. Los medios selectivos

son muy utilizados cuando se trabaja con muestras que provienen de reas que poseen una flora abundante. Los medios selectivos incorporan sustancias inhibidoras de la propagacin de un grupo bacteriano que no sea de inters pero en cambio permite el crecimiento de otros grupos. Para microorganismos entricos, los medios usados de modo habitual contienen ciertos colorantes e ingredientes que inhiben los organismos Gram positivos y permite la propagacin de los bacilos entricos Gram negativos. Otra tipos de medio que es una gran herramienta a la hora de la identificacin de microorganismos entricos como la E. coli son los medios diferenciales que poseen componentes qumicos e indicadores que permiten identificar con cierta facilidad algunos gneros o especies bacterianas por el aspecto caracterstico que toman sus colonias. El medio ms utilizado para reconocer las colonias de E. coli es el agar-eosinaazul de metileno (EAM), que contiene peptona, lactosa y los colorantes eosina y azul de metileno. En dicho medio se inhibe el crecimiento de otras bacterias, pero no el de las coliformes (stas desarrollan colonias tpicas). E. coli: colonias grandes, oscuras, negro-azuladas, centro casi negro, con brillo metlico verdoso causado por la luz reflejada. -Seguidamente las pruebas bioqumicas son la forma ms convincente del diagnstico de las enfermedades infecciosas, mediante este proceso se determinan el gnero y las especies bacterianas de inters. Cada tipo bacteriano tiene un cuadro de reacciones especficas donde se comprueba el resultado de las reacciones y son la base

de la identificacin de los diferentes agentes bacterianos. En general para la identificacin de enterobacterias se sugiere realizar las siguientes pruebas: Agar TSI, prueba de orto-nitrofenil- galactopiranosidico (ONPG), prueba de movilidad, prueba de gelatinasa, prueba de rojo de metilo, prueba de medio MRVP. Prueba de fenilalanina desaminasa, produccin de descarboxilasas y de hidrolasas de aminocidos, prueba de ureasa, produccin de indol, entre otros. 7. Qu enterobacterias se utilizan como indicadores de calidad del agua, por qu? -El examen rutinario del agua para detectar patgenos intestinales puede ser difcil, sino es que hasta imposible, es mucho mas fcil demostrar la presencia de bacterias intestinales no patgenas como lo son E. coli y el Sstreptococcus faecalis. Estos organismos siempre estn presentes en los intestinos y normalmente no se encuentran presentes ni en el suelo ni en el agua; por lo tanto su presencia indica contaminacin fecal. Todas las pruebas bacteriolgicas cualitativas del agua estn basadas en la identificacin de indicadores de drenaje como lo son estos dos organismos. Una serie de pruebas son utilizadas para demostrar la presencia de coliformes o indicadores de drenaje en las fuentes de agua potable. Un coliforme es una bacteria anaerobia facultativa, bacilo Gram negativo, fermentador de lactosa con produccin de gas, y que no produce esporas. E coli y Enterobacter aerogenes entran dentro de esta categora. La determinacin de coliformes se basa en tres tipos diferentes de pruebas: presuntiva, confirmativa y complementaria.

Bibliografa. Rodriguez E. Bacteriologa General: Principios Y Prcticas de Laboratorio, UNAM 2004 Alarcon R. Olivas E. Manual de practicas de microbiologa bsica y microbiologa de alimentos programa de nutricin, Universidad autnoma de Jurez https://www.seimc.org/contenidos/docu mentoscientificos/procedimientosmicrob iologia/seimcprocedimientomicrobiologia37.pdf Manual prctico de microbiologa Carlos Gamazo Ignacio Lpez-Goi Ramn Daz, Elsevier Espaa, 2005 http://microbitos.files.wordpress.com/ 2010/06/atlasmicrobiologia1.pdf