FACULTAD DE QUIMICA. UNAM LAB.

ORGANICA IV LUNA ANGELES MARIA DEL CARMEN CLAVE: 9 INFORME PRCTICA #7 26/Marzo/14 REACCIN DE IDENTIFICACIN DE CARBOHIDRATOS RESUMEN Se clasificaron distintos tipos de azucares en reductores y no reductores mediante prueba de Benedict, mediante la prueba de Molisch se identifico si eran carbohidratos y por medio formacin de osazonas se identifico que azcar forma osazonas y se vieron sus estructuras en microscopio. Tambin se realizo la hidrlisis del almidn y se le efectuaron pruebas de Benedict y yodo pasa determinar si contena almidn y glucosa respectivamente. Los grupos funcionales que forman parte de las llamadas biomoleculas orgnicas (hidrocarburos, cidos aldehdos, cetonas, aminas, etc.), que se definen como las organizaciones moleculares que integran los seres u organismos vivos. Las biomoleculas orgnicas que involucran estos grupos funcionales son: Carbohidratos Protenas Lpidos cidos nucledos Los carbohidratos actan en los organismos vivos como fuente de energa, como material de reserva de energa y como material estructural extracelular. Los carbohidratos constituyen una clase muy importante de compuestos de origen natural, algunos miembros representativos de esta familia son: Azucares Almidones Celulosa Los carbohidratos, o las azcares, son parte de nuestra dieta. Son las fuentes principales de la energa para los seres humanos. Los carbohidratos estn presentes en nuestro pan, granos, fruta, y la mayora de los otros alimentos que comemos. Son polmeros y compuesto de monmeros. Los glcidos, azcares, carbohidratos o sacridos, son aldehdos o cetonas polihidroxilados (osas) o productos derivados de ellos por polimerizacin (xidos), reduccin (alcoholes polihdricos y ciclitoles), oxidacin (sulfatos y fosfatos). Para clasificar los carbohidratos pueden seguirse dos criterios: El comportamiento al hidrolizar La estructura qumica I. II. III. Un carbohidrato que no se hidroliza a otro compuesto ms simple se denomina monosacridos. Un carbohidrato que por hidrlisis produce de dos a das unidades de monosacridos se llama oligosacarido. Un carbohidrato que genera ms de diez unidades de monosacridos se clasifica en polisacrido.

ESQUEMA 1. Clasificacin de los carbohidratos

Azcar reductor: monosacridos o disacrido que puede ceder electrones a otras molculas y puede, por tanto, actuar como agente reductor. La presencia de un grupo cetona (-CO-) o aldehdo (-CHO) libre permite a la mayora de los monosacridos y polisacridos actuar como azucares reductores. los azucares reductores se pueden detectar por la prueba de Benedict. Comparar con azucares no reductores. Azucares no reductores: azucares que no son capaces de ceder electrones a otras molculas y por tanto, no pueden actuar como agentes reductores. La sacarosa es el azcar no reductor mas comn; la unin entre las unidades glucosa y fructuosa, en la que estn involucrados grupos aldehdo y cetona, es responsable de la incapacidad de la sacarosa para actuar como azcar reductor

Los glcidos, tambin llamados azcares o sacridos, son un grupo de biomolculas orgnicas muy abundante en la naturaleza. Concretamente la celulosa, el principal componente de la madera, que es de naturaleza glucdica, quizs sea la biomolcula ms abundante en la biosfera. Los glcidos se definen sencillamente desde el punto de vista qumico como polihidroxialdehdos o polihidroxicetonas, o bien sustancias que por hidrlisis dan lugar a este tipo de compuestos. Los polihidroxialdehdos son compuestos orgnicos en los que todos los tomos de carbono estn unidos a un grupo hidroxilo excepto uno de ellos que forma parte de un grupo aldehdo, mientras que las polihidroxicetonas son compuestos orgnicos en los que todos los tomos de carbono estn unidos a un grupo hidroxilo excepto uno que forma parte de un grupo cetona. Muchos glcidos responden a frmulas empricas que se pueden escribir como (C H 2O)n, por lo que antiguamente se pens que eran algn tipo de combinacin de carbono y agua y se les llam hidratos de carbono. Hoy sabemos que esta denominacin es qumicamente engaosa, pero quizs est demasiado arraigada como para que sea abandonada definitivamente; de todos modos no se recomienda su uso. La glucosa es el azcar reductor ms abundante en el organismo. Su concentracin en la sangre est sometida a un cuidadoso mecanismo de regulacin en individuos sanos y, en personas que padecen diabetes, aumenta sustancialmente. Esto lleva a que ste sea el azcar reductor generalmente considerado en las reacciones de glucosilacin no enzimtica de inters biolgico. Sin embargo, cualquier azcar que posea un grupo carbonilo libre puede reaccionar con los grupos amino primarios de las protenas para formar bases de Schiff. La reactividad de los distintos azcares est dada por la disponibilidad de su grupo carbonilo. Se sabe que la forma abierta o extendida de los azcares no es muy estable, a tal punto que, por ejemplo, en la glucosa representa slo el 0,002 %. Las molculas de azcar consiguen estabilizarse a travs de un equilibrio entre dicha forma abierta y por lo menos dos formas cerradas (anmeros cclicos) en las que el grupo carbonilo ha desaparecido. Los disacridos y los polisacridos deben ser hidrolizados hasta monosacridos para poder pasar la pared intestinal para llegar al torrente sanguneo y poder ingresar al interior de las clulas para su utilizacin.

ESQUEMA 2. Representacin de la hidrlisis de un polisacrido, en este caso, un disacrido. La hidrlisis de un enlace glucosdico se lleva a cabo mediante la disociacin de una molcula de agua del medio. El hidrgeno del agua se une al oxigeno del extremo de una de las molculas de azcar; el OH se une al carbono libre del otro residuo de azcar. El resultado de esta reaccin, es la liberacin de un monosacrido y el resto de la molcula que puede ser un monosacrido si se trataba de un disacrido o bien del polisacrido restante si se trataba de un polisacrido ms complejo. Tanto el almidn como el glucgeno son hidrolizados por las enzimas a-amilasa y glucosidasas

Actividad ptica, rotacin especfica y polarmetro La rotacin ptica o actividad ptica es la rotacin de la polarizacin lineal de la luz cuando viaja a travs de ciertos materiales. Suele ser un fenmeno que ocurre en soluciones que presentan molculas quirales tales como la sacarosa (azcar), slidos con planos cristalinos rotados, tales como el cuarzo, y la polarizacin circular de gases atmicos o moleculares. Se emplea en la industria de elaboracin de azcar para medir en los siropes la concentracin de azcares, en ptica para manipular la polarizacin, en qumica para caracterizar sustancias en solucin acuosa, y en medicina est siendo evaluado en la actualidad como un mtodo de determinacin de la concentracin de azcar en sangre en casos de personas que sufren la diabetes. El nmero de grados que el plano de polarizacin gira a medida que pasa a travs de una solucin del enantimero depende del nmero de molculas que encuentra a su paso. Por supuesto, esto depende de la longitud del tubo y de la concentracin del enantimero. Para comparar las rotaciones con una base uniforme, los qumicos calculan una cantidad llamada la rotacin especfica. Un polarmetro es el instrumento de medicin utilizado para realizar la medicin de la suma algebraica de las rotaciones angulares de las sustancias pticamente activas. Importancia de los azucares Constituyen la mayor parte de la materia orgnica y desempean numerosas funciones de importancia vital para todas las formas de vida: 1. Sirven como sistemas de aporte y almacenamiento de energa y como precursores de las otras biomolculas. 2. La ribosa y la deoxirribosa forman parte de la estructura funcional del RNA y del DNA respectivamente. 3. Los polisacridos son elementos estructurales de la pared celular de bacterias y plantas. 4. Los carbohidratos se encuentran unidos a muchas protenas y forman parte de la estructura de muchos lpidos, desempeando funciones de la mayor importancia en la mediacin de la interaccin entre las clulas y entre las clulas y el resto de los elementos presentes en el ambiente extracelular. 5. Una de sus propiedades ms importante es la tremenda diversidad estructural en este tipo de biomolculas. Debido a ella tienen funciones de reconocimiento, como determinantes inmunolgicos y en la transduccin de seales. RESULTADOS AZCAR GLUCOSA FRUCTUOSA SACAROSA ARABINOSA MALTOSA Prueba de Benedict Positiva Positiva Negativa Positiva Positiva Prueba de Molisch Positiva Positiva Positiva Positiva Positiva Formacin de Osazonas Positiva Positiva Negativa Positiva Negativa

Hidrlisis de almidn Benedict Yodo Azul azul Azul rey morado Verde fuerte caf Caf ambar Caf fuerte amarillo

 DISCUSIN Prueba de Benedict Una de las reacciones ms comunes en la identificacin de carbohidratos es la reaccin de Benedict. Esta reaccin es especfica para azcares con grupo reductores libres (C=O). Todos los monosacridos poseen un grupo reductor libre. Los disacridos maltosa y lactosa tienen grupos reductores libres, pero la sacarosa no los posee, ya que se pierden los grupos reductores de sus componentes cuando sta es formada. Esta prueba se basa en la capacidad del carbohidrato de reducir el Cu2+ en un medio alcalino. Este Cu1+ se oxida y precipita en forma de Cu2O, lo que proporciona la coloracin positiva de la reaccin. La coloracin depender de la concentracin de xido de cobre y sta a su vez de la reduccin del cobre; va desde verde, amarillo, anaranjado o rojizo, dependiendo de la coloracin. Algunos azcares tienen la propiedad de oxidarse en presencia de agentes oxidantes suaves como el ion Fe3+ o Cu2+. Esta caracterstica radica en la presencia de un grupo carbonilo libre, el cual es oxidado y genera un grupo carboxilo. Por lo tanto, aquellos azcares con un grupo carbonilo libre son llamados azcares reductores y aquellos en los que el grupo carbonilo se encuentra combinado en unin glicosdica se conocen como azcares no reductores. Esta reaccin qumica que permite determinar si se est en presencia de un azcar reductor o no. En la prueba el Na2CO3 confiere a la solucin un pH alcalino necesario para que la reaccin pueda llevarse a cabo. El citrato de sodio mantiene al ion Cu 2+ en solucin ya que tiene la propiedad de formar complejos coloreados poco ionizados con algunos de los metales pesados. Con el cobre produce un complejo de color azul. Si se le agrega al reactivo una solucin de azcar reductor y se calienta hasta llevar la mezcla a ebullicin, el azcar en solucin alcalina a elevadas temperaturas se convertir en D-gluconato y su ene-diol, rompindose luego en dos fragmentos altamente reductores, los cuales con sus electrones expuestos, reaccionarn con el Cu++. Se obtiene entonces un azcar oxidado y dos iones Cu+. Posteriormente el Cu+ producido reacciona con los iones OH- presentes en la solucin para formar el hidrxido de cobre: Cu + + OH - Cu(OH) (precipitado amarillo) El hidrxido pierde agua 2Cu(OH) Cu2O (precipitado rojo ladrillo) + H2O La aparicin de un precipitado amarillo, anaranjado, o rojo ladrillo evidencia la presencia de un azcar reductor AZCAR GLUCOSA FRUCTUOSA SACAROSA ARABINOSA MALTOSA Prueba de Benedict Azcar reductor Azcar reductor Azcar NO reductor Azcar reductor Azcar reductor

Prueba de Molisch La presencia de carbohidratos en una muestra se pone de manifiesto por la reaccin de Molisch, que a cierto punto es la reaccin universal para cualquier carbohidrato. Se basa en la accin hidrolizante y deshidratante del cido sulfrico sobre los hidratos de carbono. En dicha reaccin el cido sulfrico cataliza la hidrlisis de los enlaces glucosdicos de la muestra y la deshidratacin a furfural (en las pentosas) o hidroximetilfurfural (en las hexosas). Estos furfurales se condensan con el alfa naftol del reactivo de Molisch (reaccin de Molisch) dando un producto coloreado.

AZCAR GLUCOSA FRUCTUOSA SACAROSA ARABINOSA MALTOSA

Prueba de Molisch Carbohidrato Carbohidrato Carbohidrato Carbohidrato Carbohidrato

Formacin de osazonas: Las osazonas de los monos y disacridos son compuestos amarillos, que cristalizan en formas caractersticas de la solucin en que se produce. Tienen puntos de fusin caractersticos. Todos los azcares epmeros, que difieren en la configuracin del C-2, forman la misma osazona. Los monosacridos forman precipitado en caliente y los disacridos no. La glucosazona precipita en 2-3 minutos. En una suspensin del producto de reaccin se observan con el microscopio haces de cristales amarillos. El campo de la xilosazona se ve como cristales largos amontonados. La arabinosazona se presenta como cristales amarillos agrupados en roseta. AZCAR GLUCOSA FRUCTUOSA SACAROSA ARABINOSA MALTOSA Formacin de Osazonas Glucosazona Xilosazona No forma osazonas Arabinosazona No forma osazonas

Hidrlisis de almidn: La hidrolisis del almidn implica la ruptura de un enlace mediante la adicin en medio del mismo de los elementos del agua. Los polisacaridos de la dieta se metabolizan mediante hidrolisis a los monosacridos. La mayora de los pasos de la degradacin de almidn a glucosa pueden ser catalizados por tres enzimas distintas, si bien hay otras ms que se necesitan para completar el proceso. Las propiedades del almidn son diferentes a las de la glucosa como se evidenciar mediante la hidrlisis del almidn para generar glucosa. Todos los polisacridos son hidrolizados en sus constituyentes monosacridos, por la accin de cidos diluidos. Esta es una reaccin gradual que puede observarse durante el paso de un determinado tiempo. La hidrlisis del almidn se puede evidenciar con dos pruebas: a. Desaparicin del color azul caracterstico de la prueba del yodo. b. Aparicin de glucosa, un azcar reductor. La aparicin de glucosa se evidenciar mediante la prueba de Benedict. Prueba de Benedict Una forma rpida para probar la presencia de glucosa en una muestra es agregar solucin de Benedict, la glucosa es capaz de reducir al cobre en la solucin al ser un azcar reductor. La glucosa que contiene el almidn va oxidando al cobre con forme al paso del tiempo requerido hasta el cambio de color mar fuerte o negro en este caso cuando se presento con el color caf fuerte y esto nos indica la presencia de glucosa en el almidn. Hidrlisis de almidn Benedict Azul Azul rey Verde fuerte Caf Caf fuerte

 Prueba de yodo El almidn es la molcula de reserva energtica en las plantas por excelencia. Debido a que muchos organismos superiores poseen las enzimas necesarias para su degradacin, este polmero puede ser convertido durante el proceso de digestin en diferentes intermediarios metablicos que generan energa. El glucgeno a su vez es la contraparte del almidn en el reino animal, con la diferencia de que esta molcula posee una mayor cantidad de ramificaciones que el almidn y es ms compacta. La conformacin de los enlaces alfa 1,4 presentes en estas molculas causa que estos polmeros asuman una estructura helicoidal muy estrecha. La prueba del almidn es una prueba muy sencilla pero que todava se utiliza para determinar la presencia de almidn en algunos alimentos. La prueba se basa en una reaccin fsica y no qumica, en la cual el almidn reacciona con el yodo para formar un complejo de color azul intenso. La prueba del yodo es una reaccin qumica usada para determinar la presencia o alteracin de almidn u otros polisacridos. Una solucin de yodo - diyodo disuelto en una solucin acuosa de yoduro de potasio - reacciona con almidn produciendo un color prpura profundo. Esta reaccin es el resultado de la formacin de cadenas de poliyoduro a partir de la reaccin del almidn con el yodo presente en la solucin de un reactivo llamado Lugol. La amilosa, el componente del almidn de cadena lineal, forma hlices donde se juntan las molculas de yodo, formando un color azul oscuro a negro. La amilopectina, el componente del almidn de cadena ramificada, forma hlices mucho ms cortas, y las molculas de yodo son incapaces de juntarse, obtenindose un color entre naranja y amarillo. Al romperse o hidrolizarse el almidn en unidades ms pequeas de carbohidrato, el color azul-negro desaparece. En consecuencia, esta prueba puede determinar el final de una hidrlisis, cuando ya no hay cambio de color constituyendo una evidencia experimental ampliamente utilizada. Hidrlisis de almidn Yodo Azul - amilosa morado Caf - amilopectina ambar amarillo CONCLUSIONES Se logro identificar de 5 diferentes azucares el tipo de azucares que eran por medio de distintas pruebas, pudimos saber si eran reductores o no reductores as como saber si eran o no carbohidratos, se realiza la obtencin de las osazonas de algunos azucares as mismo se pudo saber que azucares forman osazonas y de que tipo y cuales no, se observaron las estructuras de los cristales de las osazonas formadas, tambin se realizo la hidrolisis de almidn y se le realizaron la prueba del benedict para saber si contena glucosa y la prueba de yodo para saber si estaba completada la hidrolisis y saber si en realidad tenamos almidon. Las pruebas se realizaron satisfactoriamente aun que no se realizaron todas las que marcaba el manual y los resultados concuerdan con lo reportado en la literatura. REFERENCIAS NORMAN L. ALLINGER, QUMICA ORGNICA, EDITORIAL REVERTE, S.A. 1984. Pp 230 T. A. GEISSMAN, PRINCIPIOS DE QUMICA ORGNICA, EDITORIAL REVERTE, S.A.1974. pp 150 http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/0403/hidrolisis%20polisacaridos.html http://www.aulavirtualexactas.dyndns.org/ http://www.bionova.org.es/biocast/tema07.htm