BRBARA APARECIDA FERNANDES PRASERES

RELATRIO AULA PRTICA MICROBIOLOGIA CLNICA ESTGIO III

J- Paran 2014

BRBARA APARECIDA FERNANDES PRASERES

RELATRIO AULA PRTICA MICROBIOLOGIA CLNICA ESTGIO III

Relatrio da aula prtica microbiologia clnica apresentado ao curso de Biomedicina do Centro Universitrio Luterano do Campus de Ji-Paran CEUJI, para obteno de nota parcial, na disciplina de Estgio III,

monitorada pelo Me. Professora Natlia Farias Romo.

J- Paran 2014

LISTA DE TABELA

Tabela 1 Resultado da anlise microbiolgica.......................................................................11

SUMRIO

1 INTRODUO ....................................................................................................................... 6 2 UROCULTURA ...................................................................................................................... 6 3 BACTERIOSCOPIA ............................................................................................................... 7 4 HEMOCULTURA .................................................................................................................. 7 5 CULTURA DE FUNGOS ....................................................................................................... 8 6 COPROCULTURA ................................................................................................................. 8 7 MTODOS .............................................................................................................................. 8 7.1 Urocultura ......................................................................................................................... 8 7.1.1 Material ...................................................................................................................... 8 7.1.2 Procedimento ........................................................................................................ 9

7.2 BACTERIOSCOPIA ........................................................................................................ 9 7.2.1 MATERIAL .............................................................................................................. 9 7.2.2 PROCEDIMENTO .................................................................................................... 9 7.3 HEMOCULTURA ......................................................................................................... 10 7.3.1 MATERIAL ............................................................................................................ 10 7.3.2 PROCEDIMENTO .................................................................................................. 10 7.4 CULTURA DE FUNGOS .............................................................................................. 10 7.4.1 MATERIAL ............................................................................................................ 10 7.4.2 PROCEDIMENTO .................................................................................................. 11 7.5 COPROCULTURA ........................................................................................................ 11 7.5.1 MATERIAL ............................................................................................................ 11 7.5.2 PROCEDIMENTO .................................................................................................. 11 8 ANLISE E RESULTADOS................................................................................................ 12 REFERNCIAS ....................................................................................................................... 13 ANEXO A ............................................................................................................................. 15 ANEXO - B .............................................................................................................................. 17

1 INTRODUO

O estgio em microbiologia clnica tem como finalidade proporcionar conhecimento geral e explorar a metodologia e tcnicas a serem utilizadas no procedimento das amostras biolgicas originadas dos acadmicos da ULBRA. A importncia de informao clnica vlida aliada a uma amostra corretamente colhida e transportada, e devidamente processada significa o sucesso de toda uma equipe multidisciplinar (OLIVEIRA, 2010, p. 6). O objetivo do laboratrio de microbiologia no apenas apontar o responsvel por um determinado estado infeccioso, mas sim, indicar, atravs do monitoramento de populaes microbianas, qual o perfil dos microrganismos que esto interagindo com o homem (ANVISA, 2004, p. 5). As amostras biolgicas sero semeadas em alguns meios de cultura e incubadas em temperatura adequada ao crescimento do microrganismo, no caso da urina se analisou a fresco e em colorao de GRAM. Posteriormente ao crescimento bacteriano se identificou e contou as colnias, se realizou a identificao do agente. Os resultados foram transcritos para uma tabela e seguidamente passado para o laudo laboratorial. Portanto as anlises realizadas foram: urocultura, bacterioscopia, hemocultura, cultura de fungos e coprocultura.

2 UROCULTURA

A infeco urinria pode comprometer somente o trato urinrio baixo, o que especifica o diagnstico de cistite, ou afetar simultaneamente o trato urinrio inferior e o superior; neste caso, utiliza-se a terminologia infeco urinria alta, tambm pielonefrite (MENEZES, 2008, p. 132). A ITU (infeco do trato urinrio) baixa (cistite) apresenta-se habitualmente com disria, urgncia miccional, polaciria, nictria e dor suprapbica [...]. A ITU alta (pielonefrite) se inicia habitualmente com quadro de cistite, sendo frequentemente acompanhada de febre elevada, associada a calafrios e dor lombar [...] (FILHO, 2010, p. 1191). Comentando Carvalhal (2006), na maioria das infeces do trato urinrio revelam que microrganismo presentes na urina podem estar limitado aos tecidos no sendo demonstrado na anlise da urina.

Uma urocultura positiva considerada o padro-ureo do diagnstico de um quadro de infeco urinria. Para minimizar as chances de contaminao da amostra de urina coletada, a mesma deve ser processada no menor tempo possvel (idealmente em at 20 minutos); caso contrrio, a mesma deve ser refrigerada logo aps a coleta e semeada nos meios de cultura no mximo em 24 horas do momento da refrigerao. Classicamente, considera-se que uma urocultura nitidamente positiva (bacteriria significativa) caso se obtenha uma contagem bacteriana superior a 100.000 (105) unidades formadoras de colnia (UFC) por ml de urina no exame cultura [...] (CARVALHAL, 2006, p. 61).

3 BACTERIOSCOPIA

O exame bacterioscpico ao Gram permite um estudo acurado das caractersticas morfotintoriais das bactrias e outros elementos (fungos, leuccitos, outros tipos celulares, etc). Presta informaes importantes e rpidas para o incio da terapia, fornecendo informao semiquantitativa em algumas infeces e estabelecendo o diagnstico em muitos casos (APOLO, 2012).

4 HEMOCULTURA

Hemocultura o exame realizado com o objetivo de isolar e identificar microrganismos patognicos no sangue de um paciente que se supe ter uma infeco. um exame auxiliar relevante, pois seu resultado reflete diretamente na teraputica (JNIOR, 2009). Interpretando Silva (2006), o sangue circulante estril, porm encontra-se em alguns casos de infeces por microrganismos na corrente sangunea, este procedimento se da pelo nome bacteriemia. Tambm agentes infecciosos promove invaso da corrente circulatria e se multiplicam denominando a septicemia, causa calafrio, febre, taquicardia e choque. O seu diagnstico se d por meio da hemocultura a partir da amostra de sangue, onde utilizado tcnicas e metodologia que concede deteco precisa.

5 CULTURA DE FUNGOS

Onicomicose definida como qualquer infeco das unhas causada por diferentes tipos de fungos. A infeco pode vir de dentro de uma ou outra infeco fngica em outros locais (DOCTORALIA, 2007). Onicomicose uma infeco ungueal causada por dermatfitos, leveduras e fungos filamentosos no dermatfitos. So classificadas clinicamente em onicomicose subungueal distal, onicomise superficial branca, onicomise proximal subungueal e onicomise distrfica total (RUIZ, s.d., p. 192).

6 COPROCULTURA

Conforme a Anvisa (2014, apud ROMO, 2014) o exame isola microrganismos que ocasionam disenteria e outros fatores que podem ocasionar a perda da flora intestinal. O meio de cultura feito por meio do caldo de enriquecimento atravs do caldo selenito, caldo tetrationato ou caldo GN, ou em meios seletivos (SS, Hektoen, XLD [xilose lisina desoxicolato], gar sulfito-bismuto, gar MacConckey, EMB ou ENDO). Estes pylori,

microrganismos so classificados por espcies como so: Campylobacter Camppylobacter jejuni, Salmonella, spp; Shiguella, spp; E. coli

(enterotoxinognica e

enteropatognica), Vibrio cholerae, Vibrio, spp; Yersinia enterocolitica, Clostridium difficile e Staphylococcus aureus.

7 MTODOS

7.1 Urocultura

7.1.1 Material

Frasco contendo a urina do paciente identificado; 2 placas contendo gar-MacConkey; 2 placas contendo gar-CLED; 2 tubos de ensaio contendo 9 ml gua peptonada 0,1%; Pipetas automticas de 1 ml e ponteiras esterilizadas; Ala de platina;

Caneta; Papel absorvente; Estufa bacteriolgica; Bico de Bunsen.

7.1.2 Procedimento

O frasco com a urina colocado atrs do bico de Bunsen se pipeta 1 ml da amostra e passa para o tubo com 9 ml gua peptonada, fecha o tubo e efetua uma agitao, isto 1:10, transfere 1 ml desta diluio para outro tubo contendo 9 ml gua peptonada e agita. Com uma placa de petri com repartio se plaquea com meio CLED e meio MacConkey, com isto utilizado 2 placas, j solidificado transferido 100l de cada diluio para cada meio e espalhado com ala de drigalky. Se incuba em estufa de 37C 1C por 48h, se defini a diluio quando tem 30 a 300 colnias.

7.2 BACTERIOSCOPIA

7.2.1 MATERIAL

Frasco contendo a urina do paciente identificado; Lmina; Pipetas automticas de 10 l e ponteiras esterilizadas; Microscpio ptico.

7.2.2 PROCEDIMENTO

Colocar 10 L da urina sobre a lmina e deixar secar, corar pelo mtodo de Gram e analisar no microscpio em objetivas de 1.000x com leo de imerso para verificar presena de bactrias.

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7.3 HEMOCULTURA

7.3.1 MATERIAL

Caldo BHI ou Caseina digerida de soja = aerbicos, facultativos e leveduras; Caldo Columbia = anaerbicos (se tiver); Placas contendo gar-MacConkey; Placas contendo gar sangue; Pipetas automticas de 1 ml e ponteiras esterilizadas; Ala de platina; Bico de Bunsen; Estufa bacteriolgica; Mscara de proteo, luvas; Laminas; Microscpio ptico.

7.3.2 PROCEDIMENTO

O tubo contendo amostra de sangue com anticoagulante Heparina, se homogeneza e pipeta 1 mL em tubo com BHI, coloca na estufa a 37C 1C por 24 72h., depois de 24h se cultiva no meio gar McK e gar sangue por esgotamento descontnuo leva a estufa a 35C 1C por 18 24h e realizar leitura das placas, se houver crescimento nas placas refazer a semeadura para confirmao dos microrganismos.

7.4 CULTURA DE FUNGOS

7.4.1 MATERIAL

Lmina de bisturi; Lmina; KOH; Placa de Petri estril.

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7.4.2 PROCEDIMENTO

Lavar a unha com gua corrente e secar para retirar raspado da unha por baixo com a lmina de bisturi e colocar na placa de Petri estril. Alm disso colocar um pouco do material em uma lmina com duas gotas de KOH e cobrir com a lamnula, esperar 30 minutos para visualizao.

7.5 COPROCULTURA

7.5.1 MATERIAL

Frasco contendo a fezes; Placas contendo gar-MacConkey; Placas contendo gar-SS; Tubos contendo caldo de Enriquecimento (Tetrationato); Pipetas automticas de 1 ml e ponteiras esterilizadas; Ala de platina; Bico de Bunsen; Estufa bacteriolgica; Mscara de proteo, luvas; Laminas; Microscpio ptico.

7.5.2 PROCEDIMENTO

O frasco com a amostra biolgica foi coletado com a ala de platina e semeado por esgotamento descontnuo nas placas contendo gar Mc e SS. Tambm transferiu 3 aladas de locais diferentes das fezes para um tubo de ensaio com 10mL de caldo Tetrationato, levou para estufa a 37C 1C por 18 24h, aps este tempo colheu com uma ala o caldo e semeou por esgotamento descontnuo na placa gar SS.

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8 ANLISE E RESULTADOS

Foram realizado 34 exames, sendo que somente alguns que foram laudados, conforme mostra no anexo A, motivo por no ter informao suficiente para o resultado ou perca de dados, foi apropriado uma tabela com os resultado obtidos que esto em Anexo B. Tabela 1 Resultado da anlise microbiolgica. N0 UROCULTURA 01 119 x 10-2 N0 COPROCULTURA N0 17 HEMOCULTURA 0 N0 UNHA 32 Sugestivo Hifas septadas 02 92 x 10-1 05 192 x 10-1 06 63 x 10-2 15 5 lev. Salm. 20 1 bol. 21 22 Lev. 22 10 Lev. 23 Contaminao* Fonte: O autor do trabalho. a 18 33 Sugestivo Salmonella 34 Sugestivo a Shigella 19 30 31 32 Contaminao* 0 0 a

Conforme as anlises acima apresentadas possibilitou o conhecimento na diferenciao de fungos para bactrias, com anlise em diferenciao de colnias em formato e cor, possibilitando a anlise microscpica dispondo da visualizao correta do mtodo gran.

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REFERNCIAS

Links:

ANVISA. MANUAL DE MICROBIOLOGIA CLNICA PARA O CONTROLE DE INFECO EM SERVIOS DE SADE. Editora Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria, 2004. Disponvel em: Acesso

<http://bvsms.saude.gov.br/bvs/publicacoes/manual_microbiologia_completo.pdf> em: 10/04/2014.

OLIVEIRA, H. M. M. R.; ALBUQUERQUE, L. M. L.; SANTOS, M. R.; CARDOSO, S. MANUAL DE PROCEDIMENTOS PARA MICROBIOLOGIA CLNICA. 2010. Disponvel em: <http://chcAcesso

patologiaclinica.netai.net/web_documents/manualprocedimentosmicrobiologia.pdf> em: 14/04/2014.

CARVALHAL, G. F.; ROCHA, L. C. A.; MONTI, P. R. UROCULTURA E EXAME COMUM DE URINA CONSIDERAES AMRIGS, Porto SOBRE Alegre, SUA 2006. COLETA Disponvel E em:

INTERPRETAO.

Revista

<http://www.amrigs.com.br/revista/50-01/proc02.pdf> Acesso em 14/04/2014.

MENEZES, C. H P. PROTOCOLOS DE MICROBIOLOGIA CLNICA. edio 88, 2008. Disponvel

NewsLab, em:

<http://www.medcorp.com.br/medcorp/upload/downloads/NEWSLAB_Especial%20Protocol os%20de%20Microbiologia%20parte3_200872411239.pdf> Acesso em 14/04/2014.

FILHO, J. S. R.; VILAR, F. C.; MOTA, L M.; LEAL, C. L.; PISI, P. C. B. INFECO DO TRATO URINRIO. Medicina Ribeiro Preto, 2010. Disponvel em:

<http://revista.fmrp.usp.br/2010/vol43n2/Simp3_Infec%E7%E3o%20do%20trato%20urin%E 1rio.pdf> Acesso em: 14/04/2014.

APOLO, Laboratrio de Anlises. EXAMES BACTERIOSCOPIA (GRAM). 2012. Disponvel em: <http://www.laboratorioapolo.com.br/2012/03/07/bacterioscopia-gram/>

Acesso em: 15/04/2014.

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JNIOR, C. A. G. F. PROTOCOLO DE ATENDIMENTO ROTINA DE HEMOCULTURAS. 2009. Disponvel em:

<http://www.saudedireta.com.br/docsupload/1340447084ccih.pdf> Acesso em 15/04/2014.

SILVA, C. M. L.; SENA, K. X. F. R.; CHIAPPETA, A. A.; QUEIROZ, M. M. O.; VILLAR, M. C. M.; COUTINHO, H. M. INCIDNCIA BACTERIANA EM HEMOCULTURAS. Revista NewsLab, edio 77, 2006. Disponvel em:

<www.newslab.com.br/ed_anteriores/77/art09/art09.pdf> Acesso em: 15/04/2014.

RUIZM, L. R.; CHIACCHIO, N. D. MANUAL DE CONDUTA NAS ONICOMISES DIAGNSTICO E TRATAMENTO. S.d., Sociedade Brasileira de Dermatologia. Disponvel em: <http://www.saudedireta.com.br/docsupload/1365643182manual-

onicomicoses.pdf> Acesso em 15/04/2014.

DOCTORALIA. INFECO DE FUNGOS NAS UNHAS (ONICOMICOSE). 2007. Disponvel em:

<http://www.doctoralia.com.br/enfermidade/infeccoes+de+fungos+nas+unhas+onicomicose40991> Acesso em: 16/04/2014.

ROMO, N. F. COPROCULTURA. Manual de Estgio CEULJI/ULBRA, 2014.

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ANEXO A

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RELATRIO DE ENSAIO n 0001/2014

Nome: Data de Nascimento:__/__/____ Contato: Endereo: Solicitao: Cdigo da coleta: Gestante: RG: CPF: Sexo: Data do exame:__/__/____ Data de entrega:__/__/____

Fez uso de antibiticos? ( ) sim ( ) no

___________________________________________________________________ _____________________ UROCULTURA

Pesquisa de microorganismos viveis Referncia negativo infeco > Resultado Valores <
4 3

de
4

10

10 a 10 = suspeita de = infeco _________________________________________________________________________________ ______BACTERIOSCOPIA Resultado Valor de Referncia Leuccitos At 10.000 Hemcias At 8.000 Clulas epiteliais At 50 Leveduras Bactrias 0= ausente += escasso ++= raro +++=moderados ++++= numerosos Morfologia Arranjo Afinidade das bactrias com cristal violeta 10
5

_____________________ ________________________ Analista Responsvel Metodologia:

Tc.

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ANEXO - B