Vacunas

La vacunacin se encuentra entre las metodologas que ms han impactado

en la salud del ser humano. El desarrollo de vacunas ha supuesto una de las
mayores contribuciones de la inmunologa a la medicina. La primera vacuna contra
una enfermedad infecciosa, la viruela humana, fue desarrollada por J enner en 1796.
Sin embargo, fue Pasteur quien a finales del siglo XIX estableci la relacin entre
grmenes y enfermedades, y realiz grandes avances en inmunoterapia tras realizar
numerosos experimentos en vacunas animales. El mecanismo inmunitario de la
vacunacin fue finalmente aclarado en 1957 por Frank Burnet mediante la teora de
la seleccin clonal y con el posterior descubrimiento del papel de los linfocitos en
1965.
Una vacuna, segn la definicin tradicional, es una sustancia formada por un
microorganismo completo atenuado o muerto, o bien fracciones del mismo, capaces
de inducir una respuesta inmune protectora y duradera frente a dicho
microorganismo virulento, y cuya finalidad es la de prevenir y controlar futuras
infecciones.
Las dos grandes propiedades que deben reunir las vacunas son la eficacia y
la inocuidad. La eficacia depende de que la vacuna posea capacidad antignica, es
decir, que desencadene una respuesta inmune protectora en el paciente vacunado,
mientras que la inocuidad supone que la vacuna debe estar desprovista de
capacidad patognica capaz de desencadenar reacciones adversas, pero sin
modificar sustancialmente los elementos que le confieren la proteccin.



Caractersticas de la vacuna ideal

Debe reproducir una respuesta inmunolgica similar a la de la infeccin
natural.
Su efectividad debe ser mayor al 90 %
Sus efectos secundarios deben ser mnimos.
La inmunidad que confiere debe ser persistente a largo plazo.
De dosis nica y compatible con otras vacunas.
Su administracin debe ser no invasiva.
Permitir la administracin precoz en los primeros meses de la vida.
Ser estable a temperatura ambiente.
Debe ser de fcil produccin y econmicamente accesible.

Teniendo en cuenta las tecnologas empleadas en el diseo y produccin de
vacunas, se pueden clasificar en vacunas clsicas, es decir, aquellas cuya
tecnologa se conoce desde hace tiempo, y nuevas vacunas, desarrolladas por
medio de nuevas tcnicas de biotecnologa e ingeniera gentica.


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VACUNAS CLSICAS

El desarrollo sistemtico de las primeras vacunas fue favorecido en sus inicios
por los avances en la microbiologa y el desarrollo de tcnicas de cultivo de clulas
in vitro. Ello permiti la creacin de las primeras vacunas basadas en
microorganismos patgenos inactivados o atenuados que se emplearon de manera
exitosa para lograr algunos de los mayores avances del siglo XX en materia de
salud: la erradicacin de la viruela a nivel mundial y la eliminacin casi total de la
poliomielitis gracias a los esfuerzos de la Organizacin Mundial de la Salud.
Se denominan vacunas clsicas a las vacunas inactivadas, compuestas por
bacterias, virus o partes de ellos, vacunas vivas atenuadas, formadas por bacterias o
virus cuya virulencia ha sido reducida, y vacunas de subunidades naturales que
consisten en fragmentos de protenas antignicas pertenecientes a microorganismos
patgenos.

VACUNAS VIVAS ATENUADAS

La principal caracterstica de las vacunas vivas consiste en que los agentes
inmunizantes pueden replicarse en el organismo sin causar la enfermedad. Estas
vacunas proporcionan en teora una vacunacin ideal de larga duracin y muy
intensa, ya que dan lugar a una infeccin similar a la natural. Sin embargo, plantean
un riesgo al estar formadas por microorganismos vivos, ya que es posible que stos
mantengan su actividad patgena y desencadenen la enfermedad. La atenuacin de
los microorganismos debe ser por tanto lo suficientemente fuerte para que no se
produzca la enfermedad, pero sin llegar a destruir los componentes inmunognicos
desencadenantes de la respuesta inmune.
A pesar del alto grado de atenuacin que se consigue en las vacunas de este
tipo, su aplicacin se encuentra contraindicada en pacientes con inmunodeficiencias
primarias o secundarias o bien que tengan un estado de inmunosupresin
provocado por frmacos o enfermedades oportunistas, asimismo, estas vacunas
estn contraindicadas en mujeres embarazadas.


VACUNAS INACTIVADAS

Las vacunas inactivadas son aquellas que contienen microorganismos
enteros o toxinas, inactivados (muertos) mediante diversos mtodos fsicos (calor) y
qumicos (formol, b-propiolactona).
En comparacin con las vacunas atenuadas, la principal ventaja de las
vacunas inactivadas es que no existe el riesgo de desencadenar la enfermedad tras
la vacunacin. Esto es debido a que los microorganismos que forman parte de la
vacuna estn muertos, y tan slo se mantienen intactas las subunidades proteicas
responsables de la inmunidad.
A diferencia de las vacunas vivas atenuadas, la respuesta inmunitaria
provocada por las vacunas inactivadas suele ser menos intensa y duradera,
prevaleciendo la respuesta de tipo humoral, es decir, la produccin de anticuerpos.
Otra desventaja de estas vacunas consiste en la necesidad de administrar varias
dosis de recuerdo para conseguir una inmunizacin completa. Por otra parte, es
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frecuente la adicin de adyuvantes en las vacunas inactivadas, que actan a modo
de potenciadores.
En el caso de las vacunas bacterianas inactivadas, dado que no son
sometidas a ningn tipo de purificacin, contienen todos los componentes
bioqumicos de las bacterias, lo que hace que por lo general sean ms reactgenas
que las vacunas de subunidades, es decir, provocan ms efectos secundarios. Las
vacunas virales inacti vadas son menos sensibles a cambios de temperatura que
las vacunas vricas atenuadas, sin embargo, son ms caras que las vacunas virales
vivas atenuadas, ya que al no replicarse el virus en el paciente se requiere ms
cantidad de antgeno y dosis de refuerzo para conseguir una respuesta inmune
duradera.


VACUNAS DE SUBUNIDADES

Con el correr del tiempo y de las investigaciones se comprendi que no es
necesaria la presencia de los microorganismos enteros para la inmunizacin y que
alcanza con introducir alguno de sus componentes que desencadene la respuesta
inmune. Esto dio origen a las vacunas de subunidades, que consisten en el uso de
slo una fraccin del microorganismo, en lugar del microorganismo completo. Estas
vacunas fueron introducidas en 1920, siendo las primeras la del ttano y la difteria.
Las vacunas de subunidades son aquellas que contienen un preparado de
subunidades antignicas que pueden ser de distinta naturaleza, lipopolisacridos,
extractos ribosmicos, o protenas purificadas o sintetizadas qumicamente.
Estas vacunas se suelen emplear cuando han sido aislados los componentes
responsables de la patogenicidad de agente infeccioso, ya que de esta forma se
evita el riesgo de desencadenar la enfermedad tras la vacunacin.

VACUNAS VIVAS ATENUADAS
Virus patgenos en animales que no lo son para el hombre
Viruela, rotavirus
Pases sucesivos en medios de cultivo (bacterias) o cultivos celulares
(virus), hasta la obtencin de la atenuacin
BCG, sarampin, rubola, parotiditis, varicela
VACUNAS INACTIVADAS
Inactivacin por calor, formaldehdo b-propiolactona o timerosal de
bacterias o virus enteros
Tifoidea, clera, polio tipo Salk, gripe inactivada
Inactivacin por calor y formaldehdo de antgenos secretados (toxinas)
Difteria, ttanos, toxina pertsica
VACUNAS DE SUBUNIDADES VIRALES O BACTERIANAS NATURALES
AgHBs (hepatitis B plasmtica)
Subunidades virales (gripe)
Polisacridos capsulares (H. influenzae b, meningococo A-C, neumococo)
Fracciones antignicas de bacterias (tos ferina)

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Las principales limitaciones de este tipo de vacunas son:
aparicin de efectos secundarios y complicaciones posteriores a la
vacunacin sobre todo inmunosuprimidos o inmunocomprometidos;
presencia del patgeno activo en la vacuna debido a un proceso de
inactivacin o atenuacin defectuoso o insuficiente;
reversin por mutacin del agente infectivo atenuado a la forma virulenta;
existen patgenos para los que no es posible la obtencin de vacunas por
las rutas clsicas de inactivacin y/o atenuacin.

Adems es importante considerar que la eficacia de la vacunacin no
depende exclusivamente de la calidad de la vacuna, sino, adems de que su
conservacin y transporte se produzcan en condiciones adecuadas y se administren
durante el perodo de validez, como as tambin de la facilidad de obtencin. Estos
aspectos son responsables, en gran medida de la inversin que supone el
cumplimiento de un plan de vacunacin como medida de prevencin.

El desarrollo de la Biotecnologa ha permitido la creacin de una nueva
generacin de vacunas ms seguras y eficaces que reducen o eliminan los
inconvenientes que presentan las vacunas clsicas.


NUEVAS VACUNAS


En las dcadas pasadas se ha logrado un gran avance en el conocimiento a
nivel molecular tanto de microorganismos y los diferentes eventos que los llevan a
causar enfermedades, como del sistema inmune que permite evitarlas. La
generacin de tal cantidad de informacin y su combinacin con las herramientas
moleculares disponibles en la actualidad, ha creado un campo frtil para el desarrollo
de nuevas y mejores vacunas basadas en un diseo racional en el que se tomen en
cuenta una mayor cantidad de factores que intervienen en el desarrollo de una
respuesta inmune protectora.
Las investigaciones que se llevan a cabo actualmente apuestan por vacunas
ms seguras y capaces de desencadenar una respuesta inmune eficaz y duradera.
Los avances en biologa molecular y en concreto el desarrollo de la tecnologa del
ADN recombinante, han permitido el diseo de nuevas vacunas capaces de ofrecer
estas caractersticas. Hasta hace pocos aos, la sntesis qumica del antgeno y el
aislamiento de la protena antignica a partir de su fuente natural eran los nicos
mtodos disponibles para la obtencin de componentes inmunizantes en las
vacunas.
La sntesis qumica slo es aplicable cuando la protena de inters es muy
pequea o poco compleja, ya que este mtodo supone un elevado costo de
produccin. Las metodologas de purificacin de protena a partir de su fuente
natural se encuentran a menudo con el problema de que el rendimiento de la
extraccin es muy bajo.
La tecnologa del ADN recombinante permite el aislamiento de un gen de
un organismo para introducirlo en otro. Esta tecnologa se emplea como herramienta
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para la introduccin de ADN procedente de patgenos en el interior de bacterias,
virus, o plantas, en las vacunas de nueva generacin. Estos organismos pueden
utilizarse como fbricas de produccin de grandes cantidades de protena antignica
para su uso como vacuna.
Actualmente estn en desarrollo vacunas basadas en agentes infectivos
atenuados mediante la eliminacin por ingeniera gentica de genes implicados en
virulencia. Tambin es posible generar inmunidad frente a un patgeno utilizando un
virus o una bacteria no virulentos en cuyo genoma se introduce el gen o genes que
codifican antgenos del patgeno frente al cual se quiere obtener inmunidad. Se
estn desarrollando vacunas formadas por partculas virales vacas, sin capacidad
replicativa (no contienen ADN o ARN) y obtenidas por Ingeniera Gentica, vacunas
constituidas exclusivamente por una sola protena, o pptidos de la misma, del
patgeno, vacunas basadas en cidos nucleicos (plsmidos de ADN) y ms
recientemente vacunas producidas en plantas transgnicas.


VACUNAS DE SUBUNIDAD DE MICROORGANISMOS RECOMBINANTES

La hepatitis B es una enfermedad vrica que mata cada ao a dos millones de
personas. En 1976 fue demostrada la viabilidad de una vacuna contra el virus de esa
forma de hepatitis (VHB); en efecto, la inyeccin de antgeno particulado purificado,
procedente del plasma de personas infectadas, protega a los animales de la
infeccin por el VHB. La vacuna era eficaz, pero no poda producirse en grandes
cantidades dada la limitacin de donantes. La solucin vino de la mano de la
clonacin del genoma del VHB y la expresin de las partculas del VHB en la
levadura logrndose asimismo la expresin en la levadura del gen que cifraba la
protena de superficie del virus. La manipulacin gentica de la levadura permiti
producir elevadas cantidades del antgeno de superficie con la misma conformacin
que las partculas derivadas de los donantes de plasma.
Por lo tanto, mediante tcnicas de ingeniera gentica, es posible clonar
genes que codifican para las protenas que provocan la respuesta inmune y permitir
su expresin en clulas como bacterias, levaduras o lneas celulares e mamferos.
Estas clulas husped logran producir grandes cantidades de protenas, las cuales
luego de un proceso de purificacin pueden ser utilizadas como vacunas.
Los sistemas biolgicos como las bacterias, levaduras o plantas, que se
emplean para expresar los antgenos, se denominan vectores de expresin. Los
microorganismos empleados con mayor frecuencia en la produccin de antgenos
recombinantes son las bacterias, especialmente E. coli, aunque tambin es posible
la produccin de protenas recombinantes en levaduras y plantas. Aunque las
primeras presentan menor complejidad ya que su genoma es muy sencillo y crecen
rpidamente, no son capaces de llevar a cabo algunas de las modificaciones
necesarias para que las protenas sean activas, transformaciones que, por el
contrario, s realizan las clulas eucariotas. En el caso de las levaduras, si bien son
capaces de realizar dichas modificaciones, no crecen tan rpido y presentan
mayores complicaciones de manejo, elevando los costos de produccin de las
protenas recombinantes. Las plantas son sistemas de produccin de muy bajo
costo, y con una alta capacidad de mejoramiento, adems de permitir ciertas
modificaciones en las protenas. Las vacunas recombinantes que se estn
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desarrollando en estos momentos emplean plantas y bacterias como sistemas
biolgicos de produccin.

Representacin esquemtica de la partcula del virus de la hepatitis B y las partculas
recombinantes del antgeno de superficie sintetizadas en levadura.

La produccin de protenas recombinantes en plantas ofrece muchas ventajas
potenciales para generar compuestos farmacuticos de importancia en medicina
clnica, frente a los mtodos empleados hasta la fecha, que consistan en la
produccin microbiana mediante biorreactores. Las principales ventajas de la
produccin de antgenos recombinantes en plantas son una mayor eficacia frente a
los sistemas clsicos de produccin mediante microorganismos, la facilidad de
cultivo de las plantas como sistemas de expresin de protenas, y la posibilidad de
dirigir la expresin del antgeno en ciertas partes de la planta, facilitando la
purificacin del mismo.
Las estrategias de introduccin del material gentico forneo en el genoma de
la planta son dos:
Transgnesis en plantas: integracin de forma estable en el genoma
de la planta, en el que queda establecido de forma permanente y es heredado por la
siguiente generacin de plantas.
Transferencia de genes por virus que infectan a las plantas: el gen
se introduce en la planta mediante uno de los virus que infectan a las plantas, y es
expresado en su interior de forma transitoria sin integrar su material gentico en el
genoma. La expresin de la protena inmunizante slo ocurre mientras dure la
infeccin y no es heredada por la generacin siguiente.


VACUNAS ATENUADAS MEDIANTE MODIFICACIN GENTICA

La tecnologa de la gentica reversa (empleo de herramientas de gentica
para identificar genes y sus funciones a partir de la seleccin de mutaciones) ha
permitido el desarrollo de vacunas recombinantes mediante la identificacin en el
genoma de zonas relacionadas con fenotipos virulentos y mutantes. De esta forma
se han desarrollado virus y bacterias modificados genticamente de manera que sus
genes relacionados con la patogenia se encuentren delecionados o modificados.
Aunque las tcnicas de ingeniera gentica son las mismas para la modificacin de
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virus y de bacterias, la modificacin de estas ltimas es ms compleja debido al gran
tamao de su genoma. Las vacunas atenuadas mediante modificacin gentica se
encuentran actualmente en fase experimental.


VACUNAS GNICAS

La principal caracterstica de las vacunas gnicas es que el antgeno
inmunizante no se administra directamente en el paciente a vacunar, sino el gen que
lo codifica, el cual dirige la sntesis de este antgeno por parte de las clulas del
husped. El antgeno sintetizado desencadena, a su vez, la correspondiente
respuesta inmunitaria, que es de tipo humoral y celular igual que en las vacunas
vivas atenuadas. Los primeros estudios relativos a la transferencia de material
gentico como mtodo teraputico tuvieron lugar a comienzos de los aos 90. Pocos
aos despus, comenzaron los estudios con vacunas gnicas contra el virus del
SIDA y hepatitis B en ratones.
Una de las principales ventajas de las vacunas de tipo gnico es la posibilidad
de administrar varios antgenos a la vez, por medio de secuencias que determinan
ms de un gen antignico. Las vacunas gnicas sin embargo no poseen por el
momento la capacidad de generar respuestas humorales tan intensas como las de
las vacunas clsicas inactivadas y nuevas vacunas a partir de protenas
inmunizantes obtenidas por recombinacin gentica. Otro de los problemas por
resolver se centra en la posibilidad de inducir respuestas inmunitarias frente al ADN
y la aparicin de autoinmunidad debido a la expresin continuada del antgeno. Por
otra parte, la transfeccin in vivo de clulas es todava un proceso ineficiente, ya que
las clulas que capturan y expresan la protena codificada en el plsmido con mayor
eficiencia son las clulas musculares, que son un tipo celular que en condiciones
normales no participa en la generacin de respuesta inmune. Sin embargo, las
ltimas investigaciones en vacunas gnicas sealan que las clulas musculares son
capaces de transferir de alguna forma el antgeno a clulas responsables de la
estimulacin de la respuesta inmune. Para conseguir la expresin de un gen en otro
organismo es necesario recurrir a vectores. El desarrollo de nuevas vacunas
basadas en los avances en la tecnologa del ADN recombinante est directamente
relacionado con el descubrimiento y perfeccionamiento de estos vectores.


Tipos de vacunas gnicas

Insercin o clonaje de genes de inters en vectores vi vos
Bacterias o virus atenuados portadores de los genes que codifican para los
antgenos inmunizantes de los microorganismos frente a los que se quiere proteger
al sujeto vacunado. Los genes en cuestin se insertan en el genoma del virus o
bacteria portadora mediante tcnicas de recombinacin gentica.
Entre las estrategias que se estn estudiando con vistas al desarrollo de
nuevas vacunas, el uso de vectores vivos es una de las ms destacadas. Un vector
vivo se puede definir como un microorganismo atenuado que puede ser portador de
la informacin gentica de un agente infeccioso. Dicha informacin se transcribe, se
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traduce y se presenta al sistema inmunolgico como una protena. Aunque
numerosos microorganismos han sido propuestos como posibles vectores vivos en
vacunas, tales como virus y bacterias de prcticamente todas las familias, las
investigaciones actuales se centran en ciertas familias que renen las caractersticas
adecuadas para portar la informacin gentica e inducir la respuesta inmune de
forma adecuada. La eleccin del tipo de vector vivo empleado en vacunas gnicas
depender en gran medida del tamao de su genoma, de la capacidad replicativa,
estabilidad gentica y la patogenicidad del vector recombinante.

Vacunas de vectores virales
Los virus son organismos especializados en insertar su material gentico en
clulas, utilizando la maquinaria de stas para multiplicarse. Los virus vacunales
permiten la insercin de varios genes en su propio genoma, por lo que seran
instrumentos ideales para la vacunacin de amplio rango de microorganismos
infecciosos en una sola vacuna.
El principal inconveniente de las vacunas formadas a partir de virus
vacunales, y en general vectores vivos, es que la inmunogenidad del vector
recombinante est relacionada con su capacidad de replicarse dentro del organismo,
y por esta razn los vectores ms inmunizantes son aquellos que poseen un mayor
potencial patognico. Un segundo inconveniente es que la respuesta inmune
generada frente al vector puede neutralizarlo, con lo que disminuye su capacidad de
generacin de protenas recombinantes. Esta situacin se produce especialmente
cuando se utiliza como vector el virus Vaccinia, ya que aquellos sujetos vacunados
contra la viruela mantienen una memoria inmune tan potente frente a este virus que
frenan su replicacin e impiden una correcta expresin de las protenas del patgeno
que constituyen la base de la inmunizacin frente al mismo. Un problema similar
puede plantearse cuando se utilizan como vectores virus con una alta incidencia de
infeccin como son los Adenovirus. Por todo ello ninguna vacuna de este tipo se ha
comercializado hasta el momento para uso en humanos, aunque existen numerosas
vacunas de vectores virales en desarrollo que actualmente se encuentran en
distintas fases clnicas. Uno de los virus vacunales ms estudiados en la actualidad
es un virus propio de aves llamado poxvirus canario. Este virus es incapaz de
multiplicarse completamente en las clulas de los mamferos, pero tiene capacidad
de iniciar una respuesta inmunitaria protectora frente a los antgenos inmunizantes
expresados. Este virus se ha utilizado con xito como vector de vacunas
experimentales frente al VIH-1, la rabia, la encefalitis japonesa, el sarampin y el
citomegalovirus. Adems, este tipo de vacuna incluye la restriccin por especie, por
lo que en ciertos casos no es posible realizar ensayos de vacunas humanas
mediante la experimentacin con modelos animales. Otra desventaja de este tipo de
vacuna es el desconocimiento actual acerca de su poder inmunognico a largo
plazo.
Este tipo de vacunas se est estudiando en la actualidad como terapia
preventiva en enfermedades provocadas por calcivirus, rotavirus, y cncer cervical
por virus del papiloma humano (HPV).

Vacunas de vectores bacterianos
Uno de los principales atractivos de los vectores bacterianos es su potencial
para ser administrados oralmente, adems de permitir la induccin de respuesta
inmune mucosa, esencial en aquellas enfermedades producidas por patgenos cuya
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va de entrada al organismo son las mucosas. Sin embargo, la posible reversin
hacia la patogenicidad, junto con la inmunidad preexistente, son unos de los
principales inconvenientes. Entre los vectores bacterianos cabe mencionar el Bacilo
Calmette-Gurin (BCG), el cual se ha empleado con xito como vector en vacunas
contra el VIH y Listeria monocytogenes. Vectores basados en la bacteria Salmonella
se emplean en vacunas que actualmente se encuentran en distintas etapas de
ensayos clnicos, en concreto como vacunas contra tuberculosis, sarampin y
ttanos entre otras.
Por otro lado, algunas bacterias intestinales atenuadas como S. typhi, V.
cholerae, S. flexneri, se han utilizado tambin como vectores de genes de las
protenas inmunizantes de patgenos intestinales, entre ellos E. coli enteropatgeno.
La principal limitacin del uso de vectores bacterianos radica en que resulta difcil
mantener la estabilidad del fragmento de ADN insertado.

Vacunas de ADN desnudo
Los plsmidos que forman parte de las vacunas de ADN consisten en
molculas de ADN circular que se encuentran en muchas bacterias y levaduras, y
que se caracterizan porque pueden replicarse independientemente del genoma de la
clula. Contienen genes de resistencia a antibiticos, lo que permite distinguir las
clulas que han incorporado el plsmido, y que por consiguiente son capaces de
crecer en un medio con el antibitico. Los plsmidos que forman parte de las
vacunas de ADN contienen un gen codificante para una protena, un promotor
generalmente viral, un terminador que permite la expresin del gen en clulas de
mamferos, y un gen de resistencia a antibitico que permite la seleccin del
plsmido durante su produccin en bacterias. Se suelen aadir genes adicionales
que aumentan la potencia de las vacunas de ADN, como son genes codificantes de
citoquinas o molculas co-estimulatorias, o genes codificantes de replicasas virales,
y otras variaciones del plsmido.

Representacin de la estructura de un
vector plasmdico empleado como vacuna
de ADN. El vector posee una unidad
transcripcional compuesta por un promotor,
intrn, cADN que codifica para el antgeno y
una secuencia de terminacin de la
transcripcin. El esqueleto plasmdico posee
un gen de resistencia a antibiticos, origen
de replicacin, sitios de clonacin mltiple y
secuencias CpG inmunoestimulatorias (ISS)
que funcionan como adyuvantes internos de
la vacuna.

Elementos bsicos que forman parte de los plsmidos de vacunas de ADN:
Origen de replicacin bacteriano.
Promotor/potenciador de clulas de mamferos: la mayora
provienen del gen del citomegalovirus humano o de otros virus. Otro promotor
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empleado puede ser el promotor especfico de clulas musculares (miocitos), que
permite dirigir la expresin del antgeno hacia los miocitos cardiacos.
Sitio de insercin multiclnico para la insercin de antgenos
extraos.
Seal de terminacin de mamferos (poliadenilacin): generalmente
procedente de la hormona del crecimiento bovina o de ciertos virus.
Gen de resistencia a antibiticos para la seleccin del cultivo
bacteriano: ampicilina, neomicina o kanamicina se emplean generalmente en la
seleccin de plsmidos.
Nucletidos GPC: nucletidos no metilados especficos de bacterias,
que no estn presentes en clulas eucariotas. Son potentes estimuladores de
clulas B y activan las clulas killer y clulas T. Actan como adyuvantes.


Por otra parte, es posible la utilizacin de plsmidos bicistrnicos, es decir,
aquellos que contienen dos genes bajo la regulacin de un nico promotor, e incluso
vectores de expresin mltiple, que contienen mltiples genes con promotores y
seales de terminacin individuales para cada uno de ellos.
Las vacunas de ADN estimulan una buena memoria inmunolgica. Se ha
probado, adems, incluir el gen de la IL-12 en las vacunas con el ADN de los
antgenos de ciertos microorganismos, de modo que simultneamente con la
inmunizacin la vacuna inicie una produccin local de la interleucina y la
consiguiente estimulacin de los linfocitos Th1.
En la actualidad se estn realizando ensayos clnicos de vacunas gnicas con
humanos para enfermedades como el VIH, Virus de la influenza, Tuberculosis,
Herpes Simplex Virus tipo 2, Malaria, Leishmaniosis, Dengue, Hepatitis A, B, C y E,
Virus del papiloma humano, Melanoma, Enfermedad de Lyme, Leucemia linfoctica
crnica, Citomegalovirus, Hantavirus, Tuberculosis, Paracoccidioidomicosis,
Rotavirus, y Enfermedad neumoccica. Estos ensayos emplean como estrategia
para introducir el ADN tanto vectores vivos como vectores plasmdicos. Pese a que
los ensayos previos con animales demostraron que las vacunas gnicas eran
capaces de inducir respuestas humorales y sobre todo celulares, en los humanos la
inmunogenicidad de estas vacunas es bastante menor. Para mejorar la
inmunogenicidad se estn perfeccionando una serie de tecnologas tales como el
uso de adyuvantes clsicos o genticos, la combinacin con otras vacunas, o la
modificacin del plsmido en el caso de vacunas de ADN desnudo.
Por otro lado, la ruta de aplicacin, dosis, y la posible reinmunizacin, son
factores que influyen en la potencia y naturaleza de la respuesta inmune resultante
de la administracin de la vacuna gnica. Aunque la mayora de las vacunas de ADN
que se encuentran actualmente en ensayos clnicos se administran mediante
inyeccin intramuscular o intradrmica, la tendencia actual apunta hacia mtodos de
administracin de vacunas alternativos, como el gene-gun o bombardeo de
partculas de oro cubiertas de ADN, que permite la incorporacin del ADN en un
mayor nmero de clulas de distinto tipo. Sin embargo, debido a la capacidad de
adsorcin limitada de estas partculas, la cantidad de plsmido que se introduce en
las clulas es muy limitada.


Vacunas 10

La inmunizacin con ADN representa una forma ms potente y eficaz de desencadenar una
respuesta inmune. Las clulas absorben el ADN plasmdico y expresan el gen codificador de
inters. El antgeno puede ser secretado y por lo tanto inducir la produccin de anticuerpos o
puede ser procesado intracelularmente y los fragmentos antignicos presentados en la
superficie de la clula estimulando la respuesta de los linfocitos T citotxicos.


Por lo tanto, las vacunas de ADN ofrecen una serie de ventajas sobre las
tecnologas ya existentes para la produccin de vacunas. Ellas estimulan tanto la
respuesta inmune humoral como la celular y a diferencia de las vacunas con
microorganismos recombinantes no hay respuesta inmune hacia el vector lo cual
permite su utilizacin de manera repetida. La vacunacin gentica puede
considerarse segura, y debido a que no se administran microorganismos vivos
puede emplearse en individuos inmunocomprometidos y mujeres embarazadas. Los
vectores plasmdicos utilizados para vacunacin con ADN son fabricados con
facilidad.



Las principales caractersticas de las vacunas de ADN, as como sus ventajas
y desventajas en comparacin con otros tipos de vacunas empleados en la
actualidad se resumen en la siguiente tabla.




Vacunas
de
ADN
Vacunas
recombinantes
con
microorganismos
vivos
Vacunas con
microorganismos
atenuados
(vivos)
Vacunas con
microorganismos
inactivados
(muertos) o de
subunidades
Presentacin de
antgeno
a travs del MHC clase I
Si Si Si No
Vacunas 11
Presentacin de
antgeno a travs del
MHC clase II
Si Si Si Si
Inclusin de todo el
espectro de antgenos
Potencialmente Potencialmente Si
Si
(excepto en vacunas
de subunidades)
Respuesta anti-vector
(permitiendo una
utilizacin repetida)
No Si No aplicable No aplicable
Competencia entre
vector y antgeno
No Si No No
Seguridad al utilizar
en pacientes
inmunocomprometidos
Si No No Si
Riesgo de reversin del
microorganismo
a su forma virulenta
No Si Si No
Riesgo de
contaminacin por
otros agentes
No Si Si No
Facilidad en la
preparacin
Si No No No
Termoestabilidad Si No No Si
Costo de produccin Bajo Alto Alto Alto



VACUNAS COMESTIBLES
La mayora de las vacunas necesitan refrigeracin, y deben ser inyectadas en
condiciones estriles. Para solucionar estos problemas, la biotecnologa est
desarrollando vacunas sintetizadas en plantas comestibles. La produccin de estas
vacunas es econmica, y no debe suministrarse en condiciones estriles por
personal mdico.
Las vacunas comestibles consisten en plantas (gramneas o verduras) a las
cuales se les ha introducido, por medio de tcnicas de ingeniera gentica, un gen
que conlleva la informacin necesaria para producir en su interior una protena
antignica. Estas plantas transgnicas se pueden por tanto cultivar de manera
natural y ms adelante usar el tejido vegetal como vacunas comestibles en seres
humanos o en animales. Las principales ventajas de las vacunas comestibles
radican en que al ser administradas de forma oral, desencadenan una respuesta
inmunitaria mucosa.
El principal problema tcnico que poseen estas vacunas orales es la
degradacin que sufren los antgenos en el estmago e intestino antes de que
puedan inducir una respuesta inmune. Este es el principal motivo por el cual las
vacunas comestibles tan slo podran emplearse en alimentos que puedan ser
consumidos en su forma fresca, como la patata, el tabaco, tomate, lechuga o maz.
Por otra parte, estos alimentos deben contener gran cantidad del antgeno en su
forma soluble para que la vacunacin sea efectiva, y no sea necesario consumir
grandes cantidades de alimento.
Vacunas 12

Para hacer una vacuna comestible, se transfiere un gen de un patgeno a un
vector, y entonces a un husped bacteriano que infecte clulas vegetales. La
infeccin de hojas de la patatera transfiere el vector y el gen del patgeno al
ncleo de las clulas de la hoja. Se hace que fragmentos de la hoja se desarrollen
en patateras maduras que expresen el gen patognico. La ingestin de la patata
cruda dispara una respuesta inmunitaria contra la protena codificada por el gen
del patgeno, confiriendo inmunidad a la infeccin de este patgeno.

En la actualidad, se estn realizando estudios relativos al uso de cultivos de
frutas como el pltano y los cereales. Las estrategias de mejora de las vacunas
comestibles se centran en la tecnologa de expresin de antgenos en la planta, as
como en la proteccin de antgenos frente a la degradacin gastrointestinal. La
principal limitacin de estas vacunas radica en los problemas derivados del empleo
de plantas transgnicas, que aun no poseen una aceptacin completa entre los
consumidores, por lo que su uso como vacunas todava no se ha contemplado.
Por el momento, la mayora de las vacunas comestibles se encuentran en
proceso de desarrollo y evaluacin, por lo que se deber esperar un tiempo para que
estos productos se encuentren disponibles en el mercado. Se espera que dentro de
un tiempo las papas, los tomates, las bananas, la lechuga y la espinaca puedan
prevenir enfermedades como la diarrea infantil, la hepatitis B y E, el SIDA, la rabia y
la fiebre aftosa, entre otras.

PROBLEMAS ACTUALES Y POSIBLES SOLUCIONES

Actualmente, la vacunacin en gran escala enfrenta una serie de dificultades:
por un lado los altos costos de las vacunas y por el otro el riesgo de que la
distribucin en lugares remotos y de difcil acceso no sea adecuada, adems la
mayora de las vacunas disponibles se aplican por va parenteral (inyecciones).
La Organizacin Mundial de la Salud ha recomendado en diversas ocasiones
buscar alternativas para sustituir a las inyecciones, debido a que se ha encontrado
en algunos pases que hasta un 30% de las inyecciones se realizan con jeringas no
estriles. Considerando el grave problema del SIDA, este hecho es de gran
relevancia. La aplicacin de vacunas va oral es una muy buena alternativa para las
vacunas va parenteral, en gran parte por razones de bajo costo y fcil
administracin. Asimismo, con las vacunas orales se incrementa la probabilidad de
Vacunas 13
adquirir inmunidad en mucosas contra los agentes infecciosos que entran al cuerpo
a travs de una superficie mucosal.
Una preocupacin importante con las vacunas orales es la degradacin de los
antgenos en el estmago e intestino antes de que puedan inducir una respuesta
inmune. Para protegerlos de la degradacin se han desarrollado varios mtodos.
Entre stos se encuentran el uso de cepas recombinantes de microorganismos
atenuados (v. gr. Salmonella), de vehculos de bioencapsulacin, tales como
liposomas, y finalmente las plantas transgnicas.


INMUNIZACIN EN MUCOSAS
El desarrollo de vacunas administradas a travs de las mucosas no slo
supondr una mayor comodidad en su aplicacin, sino que, adems, estimular una
respuesta inmunolgica en lugares de las mucosas que no suelen intervenir en la
inmunidad desencadenada por las vacunas sistmicas. La superficie de las mucosas
est expuesta al ambiente y suelen ser la primera barrera que encuentran los
microorganismos patgenos durante la infeccin.
Con la administracin de vacunas a travs de las mucosas, el agente
patgeno se podr combatir desde la puerta de entrada y no slo a partir de su
localizacin en el interior del organismo. Este tipo de vacunas requiere del uso de
coadyuvantes especiales que faciliten su identificacin.


USO DE VACUNAS COMBINADAS

Actualmente la investigacin en el campo de la vacunacin est orientado a la
creacin de las vacunas combinadas del futuro que incluyan mltiples antgenos.
Las principales ventajas de las vacunas combinadas son, en primer lugar, que
la combinacin de mltiples antgenos permite disminuir el nmero de inyecciones
con la mxima eficacia. De esta forma se podra lograr una mejor inmunizacin y
simplificacin en los programas de vacunacin, ya que el individuo se inmuniza
simultneamente contra varias enfermedades.
Otra ventaja importante es que permitiran una reduccin de los costos de los
programas de vacunacin al disminuir el material de inyeccin, el nmero de
consultas mdicas, el gasto de conservacin y el almacenamiento del material.
Como ejemplos destacados estn las vacunas de siete antgenos (DTPa-Hib-VPI-
VHBVHA), y la vacuna tetravrica que asocia sarampin-rubola-parotiditis con la
vacuna de la varicela (S-R-P-V). Tambin estn en distintas fases de desarrollo la
combinacin de distintas vacunas conjugadas Sin embargo, existen numerosos
problemas que dificultan el desarrollo de las futuras vacunas combinadas. Cada
nuevo antgeno por separado y aquellos asociados en la vacuna combinada deben
ser considerados como nuevas vacunas y superar las fases de investigacin y
desarrollo, comprobando su eficacia, seguridad y estabilidad, lo que exige tiempo y
grandes inversiones econmicas. Por otra parte, hay que considerar los problemas
derivados del volumen total que se debe administrar. A la hora de disear las futuras
vacunas combinadas se deben tener en cuenta las necesidades de los pases
individualmente considerados, ya que existen diferencias epidemiolgicas de unos a
Vacunas 14
otros y adems, los esquemas de vacunacin y las logsticas empleadas difieren
igualmente entre s.



CARACTERSTICAS DE LAS VACUNAS OBTENIDAS
POR TECNOLOGA CLSICA Y MODERNA





TECNOLOGA
DE
FABRICACIN
VENTAJAS DESVENTAJAS
EJEMPLO DE
ENFERMEDADES
QUE PREVIENEN



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c
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v
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s

a
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e
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u
a
d
a
s

El agente
patgeno es
cultivado en
condiciones
anormales hasta
obtener cepas no
virulentas.
Alta efectividad.
Inmunidad intensa
y duradera.
Respuesta humoral
y celular.
No necesitan dosis
de refuerzo
No necesitan
adyuvantes.
No requieren
administracin de gran
cantidad de patgeno.
Bajo costo de
produccin.
Respuesta inmune
en mucosa intestinal.
Posible reversin
a la virulencia del
patgeno.
Variaciones
genticas en el caso
de los virus.
Baja estabilidad.
Difcil
produccin.
Interferencia con
otros virus.
Fcil inactivacin
a altas temperaturas.
Contraindicada
en embarazadas e
inmunodepresivos
Sarampin
Paperas
Poliovirus
Rubeola
Tuberculosis
Parotiditis
Gripe
Fiebre tifoidea
Tuberculosis
V
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n
a
c
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i
v
a
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a
s

El agente
patgeno virulento
es inactivado con
productos
qumicos o calor.
Mayor estabilidad.
Mayor seguridad.
Bajo costo de
produccin.
Intensa respuesta
humoral.
Fcil conservacin.
Inmunidad
menos intensa y
duradera.
Escasa
respuesta celular.
Requieren dosis
de refuerzo.
Requieren
adyuvantes.
Altas dosis para
conseguir
efectividad.
Posibles efectos
secundarios.
No da inmunidad
en mucosas.
Causadas por
Adenovirus
Tos convulsa
Hepatitis B
Gripe
Poliovirus
Rabia
Varicela
Ttanos
Clera
Difteria





TECNOLOGA
DE
FABRICACIN
VENTAJAS DESVENTAJAS
EJEMPLOS DE
ENFERMEDADES
QUE PREVIENEN



Vacunas 15
T
E
C
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O
L
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C
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S
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a
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s

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r
a
l
e
s

Se utilizan
fragmentos o
sustancias
antignicas
capaces de
desencadenar una
respuesta
inmunolgica.
Estas vacunas se
suelen emplear
cuando han sido
aislados los
componentes
responsables de
la patogenicidad
del agente
infeccioso.
Menos efectos
secundarios que las
vacunas con
microorganismos
enteros.
Bajo costo de
produccin.
Posible reversin
a la toxicidad del
agente patgeno
Polisacridos: sin
respuesta humoral.
Tos convulsa
Meningitis
(Haemophilus
influenza)
Gripe
Meningitis
(Meningococo A y B)
Ttanos
Hepatitis B
Tos ferina



T
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C
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G

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O
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Se manipula el
agente patgeno
para eliminar su
virulencia
manteniendo su
capacidad
antgena.
Buena respuesta
humoral y celular.
No requieren
adyuvantes.
No requieren
administracin de gran
cantidad de patgeno.
No hay riesgo de
reversin de la
virulencia.
Riesgos de
seguridad.
Variaciones
genticas en el caso
de los virus.
Salmonelosis
Clera
V
a
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(
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a
n
t
e
s
)

El gen en cuestin
se introduce en
bacterias,
levaduras, u otras
clulas, donde se
producen grandes
cantidades de la
protena
antignica la cual
se purifica para
ser utilizada.
Efectiva respuesta
humoral.
Mayor efectividad.
Mayor seguridad.
Mayor eficacia de
produccin
Escasa
respuesta celular.
Necesidad de
dosis de refuerzo.
Baja estabilidad.
Requieren de
adyuvantes.
Herpes simple
Fiebre aftosa
V
a
c
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n
a
s

c
o
m
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t
i
b
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e
s

El gen que
codifica para un
antgeno se
transfiere a un
vector, el cual se
incorpora a un
husped
bacteriano para
que infecte clulas
vegetales.
Seguridad. No
requiere de
condiciones estriles
por personal mdico
Fuerte inmunidad
en mucosas.
Fcil
administracin.
Ms econmicas.
Administracin oral.
Requiere de altos
niveles de expresin
del antgeno en el
tejido vegetal.
Resistencia de
consumo de
alimentos
transgnicos.
Degradacin de
antgenos antes de
provocar respuesta
inmune.
Escasa variante
en formas de
consumicin y
preparacin de los
alimentos.
Hepatitis B y E
Diarrea
Rabia





TECNOLOGA
DE
FABRICACIN
VENTAJAS DESVENTAJAS
EJEMPLOS
DE
ENFERMEDADES
QUE PREVIENEN



Vacunas 16
T
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C
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O
L
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G

A

M
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N
A

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s

e
n

v
e
c
t
o
r
e
s

v
i
v
o
s

Los genes que
codifican los
antgenos
inmunizantes se
insertan en el
genoma de
bacterias o virus
atenuados.
Respuesta humoral
y celular efectiva
Posible reversin
a la virulencia del
vector.
Resistencia a
anticuerpos
preexistentes.
Requieren dosis
de refuerzo.
Costo de
produccin muy
elevado.
Ensayos en
enfermedades por
calcivirus, rotavirus y
HPV
Tuberculosis
Sarampin
Ttanos
V
a
c
u
n
a
s

d
e

A
D
N

Los genes que
codifican el
antgeno
inmunizante son
insertados en un
plsmido que
acta de vector.
Respuesta humoral
y celular.
Estabilidad relativa
a los cambios de
temperatura
Mayor seguridad.
Posible
administracin
neonatal
Prevencin
mltiples en una
misma vacuna
Formacin de
antgenos de protenas
transmembrana.
Fcil produccin y
menor costo
Menor control de
calidad.
Respuesta
celular insuficiente.
Posible
necesidad de dosis
de refuerzo.
Baja eficiencia en
la transfeccin in
vivo.
Respuestas
inmunitarias frente al
ADN,
inmunotolerancia y
autoinmunidad.
Expresin
inapropiada de
antgenos.
Escasa
respuesta inmune en
las mucosas.
Ensayos en:

VIH, Virus de la
influenza,
Tuberculosis, Herpes
Simplex Virus tipo 2
Malaria,
Leishmaniosis,
Dengue, Hepatitis A,
B, C y E, HPV,
Melanoma,
Enfermedad de
Lyme, Leucemia
linfoctica crnica
Citomegalovirus,
Hantavirus,
Rotavirus, y
Enfermedad
neumoccica


Vacunas 17