Microbiologia General

Identificacin de levaduras
Instructor M.C. Miguel ngel Daz Alday
RESUMEN: Para la identificacin de levaduras se requiere realizar una serie de pruebas, de manera
que se evidencie las caractersticas distintivas de la especie de levadura. La prueba del tubo
germinativo o filamentaccin se usa para observar el desarrollo o formacin de hifas, blastoconidias,
clamidosesporas y artrosporas y constituye una caracterstica morfolgica de gran importancia para la
identificacin de algunas especies de levaduras. La presencia de pseudohifas y blastoconidias, fue til
para identificar si la levadura pertenece a alguna especie del gnero Candida. El cultivo de levaduras en
agar harina de maz favorece la formacin de pseudohifas y blastoconidios, de modo que puede hacerse
la identificacin presuntiva de especies de Candida. Las especies de Candida sp, dan negativa la prueba
de la urea. Otra prueba til fue la prueba de Asimilacin de carbohidratos, los patrones de asimilacin
de azcares (glucosa, lactosa, sacarosa, maltosa, galactosa, dextrosa y rafinosa) permiten identificar las
diferentes especies de Candida spp. Mediante el anlisis de los resultados de las pruebas realizadas se
logr la identificacin presuntiva de la levadura Candida parapsilosis.


INTRODUCCIN

Las levaduras forman colonias de organismos unicelulares. Algunas especies de levaduras forman
yemas que no logran separarse y dan lugar a una corta cadena de clulas llamada Pseudohifa.
Se requiere una combinacin de pruebas bioqumicas y morfolgicas para identificar las
levaduras. En las caractersticas morfolgicas debe incluirse el color de las colonias, la medida y
la forma de las clulas, la presencia de cpsula, la produccin de hifas o pseudohifas, y la
produccin de clamidiosporas. Las pruebas bioqumicas incluyen la asimilacin y fermentacin de
azcares, prueva de la urea y la asimilacin de nitrato.
El cultivo de levaduras en agar harina de maz favorece la formacin de pseudohifas y
blastoconidios, de modo que puede hacerse en la identificacin presuntiva de especies de
Candida. En la prueba de Asimilacin de carbohidratos los patrones de asimilacin de azcares
(glucosa, lactosa, sacarosa, maltosa, galactosa, dextrosa y rafinosa) permiten identificar las
diferentes especies de Candida spp. Interpretacin: Positivo: viraje del color del medio de cultivo
hacia el amarillo. Negativo: no se produce viraje de color, permaneciendo el color del medio de
cultivo.

La Produccin de ureasa se basa en la capacidad de producir la enzima ureasa, la cual desdobla
la urea en dixido de carbono y amonio, incrementando el pH del medio y produciendo un cambio
de color rojo prpura en el indicador. Las especies de Candida sp, dan negativa la prueba de la
urea.

Candida parapsilosis

Macroscpicamente cuando se cultiva en agar dextrosa Sabouraud, las colonias de C. parapsilosis
son de color blanco, cremoso, brillante y lisa o arrugada. Microscpicamente la clula tiene
forma aracniforme, aspecto de un arbusto. C. parapsilosis no forma hifas verdaderas y existe ya
sea en una fase de la levadura o una forma pseudohifa. Las pseudohifa se han observado en agar
harina de maz.

El objetivo de la presente prctica de laboratorio es identificar una levadura problema, mediante
las siguientes pruebas: Filamentacin de levaduras, morfologa en agar harina de maz, prueba de
asimilacin de carbohidratos y prueba de la ureasa.

MATERIALES Y MTODOS

Filamentacin de levaduras.
En un tubo de 12 x 75 mm se colocaron 0.5 mL de suero humano y en el mismo se inoculo
ligeramente de la colonia de levaduras (9
2
). Se incubo el tubo a 37 C por 2-3 horas. Trascurridas
las tres horas, se coloc una gota de la suspensin en un portaobjeto y se cubri con un
cubreobjetos, para finalmente observarse al microscopio con un objetivo seco.

Morfologa de las levaduras en agar harina de maz.

En una placa con agar harina de maz se inoculo por estra la levadura del tubo marcado como
(9
2
). Sobre la mitad de la estra se coloc un cubreobjetos, esterilizado por explosin a la llama
del mechero. Se incubo la placa por tres das a temperatura ambiente. Para observar el
crecimiento de la colonia, se destapo la placa y se coloc sobre platina del microscopio, se
observ colocando el lente sobre el cubreobjetos a 40x.

Prueba de asimilacin de carbohidratos.

En esta prueba se evalu la asimilacin de los siguientes carbohidratos: dextrosa, galactosa,
maltosa, sacarosa, lactosa, rafinosa y dextrosa-control negativo.

Se preparo una suspensin de la levadura (9
2
), inoculando en un tubo 15 x150 mm con 9 mL de
agua destilada estril (aproximadamente un punto en la escala de MaFarland). A cada tubo de los
carbohidratos se le agreg dos gotas de la suspensin de la levadura, se incubo por tres das a
temperatura ambiente. Se uso el carbohidrato dextrosa como control negativo el cual no fue
inoculado con la suspensin de la levadura.

Prueba de la ureasa
Se inoculo en un medio slido de agar urea, por estra la levadura (9
2
) e incubo por tres das a
temperatura ambiente.

OBSERVACIONES Y RESULTADOS

Caracterstica de la levadura del tubo (9
2
). Levadura de color blanco de aspecto cremoso,
crecimiento de la colonia en todo el tubo.
Asimilacin de carbohidratos: Se observ el cambio de color de verde claro (sin inocular) a
amarillo (positivo a la asimilacin del carbohidrato respectivo. En la tabla 1 se muestran los
resultados.

Carbohidrato

Resultado


Galactosa

(+)
Maltosa (+)
Sacarosa (+)
Lactosa (-)
Rafinosa (-)
Dextrosa (+)
Dextrosa (-) (-)
Tabla 1. Asimilacin de carbohidratos. Dextrosa (-): control negativo, Resultado pasivito (+) y Resultado negativo (-).
Prueba de la urea: No se observ cambio en el color del medio, por lo que se tom como una
prueba negativa
Urea (-)
Filamentacin de levaduras: se observ la presencia de pseudohifas
Pseudohifas,
blastoconidias,
(+)
Filamentacin (-)
Morfologa de las levaduras en agar harina de maz.
Caractersticas macroscpicas: Colonias blancas, redondas de contorno irregular, de tamao
pequeo.

Figura 1. Agar harina de maiz. Observacion macroscpica de la colonia
Caractersticas microscpicas: Colonias aracniformes de aspecto arbolecerte.

DISCUSIONES

Los resultados de las pruebas realizadas hacen suponer que la levadura es Candida parapsilosis.
La caracterstica microscpica que ms favoreci esta suposicin es la observacin de las clulas
de forma aracniforme, adems de los resultados observados en la prueba de asimilacin de
carbohidratos y la observacin de pseudohifas en la prueba del tubo germinativo. Estos resultados
son comparables positivamente con los datos bibliogrficos o de referencia asociados con la
levadura Candida parapsilosis. Por lo que se realiz la identificacin presuntiva de Candida
parapsilosis.

CONCLUSIONES
Mediante el anlisis de los resultados de las pruebas relazadas (pruebas filamentacin de
levaduras, morfologa en agar harina de maz, prueba de asimilacin de carbohidratos y prueba
de la ureasa) se logr la identificacin presuntiva de la levadura Candida parapsilosis.

REFERENCIAS
Murray, P. R., Rosenthal, K. S., & Pfaller, M. A. (2006). Microbiologia medica. Madrid: Elsevier
Mosby.
Forbes, B. A., Bailey, W. R., Scott, E. G., Sahm, D. F., Weissfeld, A. S., & Trevino, E. A. (2009).
stico gico. Buenos Aires: Panamericana.
Vilata, C. J. J. (2006). neas. adrid etc. ditorial edica Panamericana.
Ash, L. R., & Orihel, T. C. (2010).