UNIVERSIDAD DE CRDOBA

LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PRACTICA N 1
PRUEBAS CUALITATIVAS PARA CARBOHIDRATOS
OBJETIVOS.
Reconocer la presencia de carbohidratos en una muestra problema mediante la prueba de molish.
Diferenciar carbohidratos reductores de no reductores por su comportamiento frente al reactivo de
Benedict.
Realizar ensayos cualitativos para el reconocimiento de carbohidratos especficos.
FUNDAMENTOS TERICOS.
PRUEBA DE MOLISH: El cido sulfrico concentrado hidroliza los enlaces glicosdicos para dar
monosacridos que pueden ser luego deshidratados dando furfural y sus derivados. Estos productos se combinan
con !naftol sulfonato" originando un comple#o prpura. Esta reacci$n es general para los carbohidratos pero
algunos otros compuestos orgnicos dan tambi%n furfural con cido sulfrico concentrado.

PRUEBA DE BENEDICT: Es una modificaci$n de la prueba de felhing" introducida por Benedict. En ella se
usa nicamente una soluci$n" lo cual lo hace mucho ms simple con la venta#a adicional de que el reactivo es
ms estable que el de felhing. Esta prueba solo la dan los azucares reductores.
PRUEBA DE BARFOED: reactivo de Barfoed es d%bilmente cido y solamente puede ser reducido por
monosacridos. &i se de#a hervir por largo tiempo e'iste la posibilidad de hidrolizar los disacridos dando
as reacciones falsamente positivas. El precipitado de o'ido cuproso es menos denso que en los m%todos
previos y se recomienda de#ar el tubo en reposo hasta que el precipitado sedimente.
PRUEBA BIAL PARA PENTOSAS. (uando se calientan las pentosas en cido clorhdrico concentrado se
forma furfural que se condensa con orcinol en presencia de iones f)rricos para dar un color verde azuloso.
PRUEBA DE SELLIWANOFF. *as cetosas deshidratan ms rpidamente que las aldosas dando derivados del
furfural que se condensan con resorcinol para formar un comple#o rosado+ por lo tanto debe evitarse un
calentamiento prolongado de la muestra que se est estudiando.
PRUEBA PARA SACAROSA. *a sacarosa es el nico disacrido comn no reductor y por lo tanto no reduce
las soluciones alcalinas de cobre. Esta es hidrolizada en soluci$n cida y luego se ensayan la glucosa y la
fructosa resultante.
PRUEBA PARA POLISACRIDOS. *os polisacridos contienen s$lo un grupo reductor por varios cientos o
ms residuos" as que en la prctica" no son reductores. *a hidr$lisis cida libera los monosacridos
constituyentes que luego son ensayados.
MATERIALES Y RECTIVOS
Estufa o calentador Reactivo de ,olish
-ipetas de . y de /0ml. 1cido sulfrico concentrado
Bea2ers de /00 y 300ml. Reactivo de Benedict
/0 tubos de ensayo. Reactivo de Barfoed.
-inza para tubos de ensayo Reactivo de Bial.
4radilla 1lcohol 1milico.
4otero Reactivo de &elli5anoff.
-apel tornasol 1cido clorhdrico concentrado.
&oluciones de6 glucosa" galactosa" ribosa" arabinosa" 7idr$'ido de sodio /,.
&acarosa" lactosa" fructosa" almid$n" leche 8traer de la casa9 &olucion de yodo.
*eche 8traer9
PROCEDIMIENTO
Prue! "e M#$%&' : 1gregue . gotas del reactivo de ,olish a / ml de una muestra que contenga carbohidratos
8*eche9. 1:ada cuidadosamente por las paredes del tubo /ml de cido sulfrico concentrado" hasta que se
formen dos capas. ;bserve cualquier cambio de color en la interfase de los dos lquidos.
Prue! "e Be(e"%)* : <ome = tubos de ensayo+ agregue al primero 0.. ml de soluci$n de lactosa" al segundo 0..
ml de soluci$n de glucosa y al tercero 0.. ml de soluci$n de sacarosa. 1dicione 0.. ml del reactivo de Benedict a
cada tubo y col$quelos en un ba:o de agua hirviendo por = min. *a formaci$n de un precipitado de color ro#o
ladrillo indica la presencia de azcar reductor.
Prue! "e B!r+#e" : <ome = tubos de ensayo+ adicione al primero 0.. ml de soluci$n de galactosa" al segundo
0.. ml de soluci$n de ribosa y al tercero 0.. ml soluci$n de almid$n. 1dicione / ml del reactivo de Barfoed a
cada tubo" hierva por > min y de#e reposar. *a formaci$n de un precipitado de color ro#o ladrillo indica la
presencia de monosacridos.
Prue! B%!$ : <ome = tubos de ensayo+ adicione al primero 0..ml de soluci$n de ribosa" al segundo 0..ml de
soluci$n de arabinosa y al tercero 0..ml de soluci$n de almid$n. 1dicione 0.. ml del reactivo de Bial a cada
tubo y caliente hasta que empiece a hervir" de#ar enfriar y luego agregue / ml de alcohol amilico y agite" la
aparici$n de una coloraci$n azul verdosa es prueba positiva es prueba positiva para pentosas.

Prue! "e S!$$%,!(#++- Tome = tubos de ensayo+ adicione al primero 0..ml de soluci$n de fructosa" al
segundo 0..ml de soluci$n de arabinosa y al tercero 0..ml de soluci$n de glucosa. 1dicione /ml del reactivo de
&elli5anoff a cada tubo. (aliente durante / min en un ba:o de agua hirviendo" la aparici$n de un color ro#o o
rosado es prueba positiva para cetosas.
Prue! .!r! &!)!r#&! : 1 >.. ml de una soluci$n de sacarosa agregue = gotas de cido clorhdrico concentrado"
caliente durante . minutos en un ba:o de agua hirviendo" enfri% y agregue 7idr$'ido de &odio /, hasta que la
soluci$n sea neutra o ligeramente alcalina 8prueba con papel tornasol9" divida la soluci$n hidrolizada en dos
porciones y realice por separado las pruebas de Benedict y &elli5anoff.
/. Prue! .!r! .#$%&!)/r%"#&- (oloque /ml de soluci$n de almid$n" a:ada / gotas de soluci$n de yodo.
;bserve la producci$n de un color azul. (aliente el tubo ?@u% observaA De#e enfriar y observe
nuevamente" ?@u% ocurreA E'plique sus observaciones.
CUESTIONARIO
/. Escriba cada una de las reacciones en las diferentes pruebas para carbohidratos.
>. E'plique los resultados de cada una de las pruebas realizadasA
>. E'plique estructuralmente" por que la maltosa es un azcar reductor y por que el almid$n no lo sus
observaciones
=. (onsulte las enfermedades producidas por el mal metabolismo de los carbohidratos.
3. -or qu% la celulosa a pesar de estar formada por mol%culas de glucosa es insoluble en agua.
.. ?por que la sacarosa es un azcar no reductorA. (onsulte las posibles estructuras de las muestras
problemas.
B. (onsulte el fundamento de otras t%cnicas usadas para la determinaci$n de la glucosa en el laboratorio.
BIBLIO0RAFIA-
-*C,ER" D.<. Dntroducci$n a la bioqumica prctica. ,e'ico. ,a4ra5! 7ill *atinoamericana" &.1.
(;EE" E y &tumpf" -.F. Bioqumica G.
*;-EH" E y 1EH;*1" (. 4uas de laboratorio de Bioqumica. Gacultad de ciencias. Cniversidad
Eacional de (olombia sede Bogota.