Aprendizaje de la tcnica de cromatografa en capa fina Conocimiento de conceptos cromatogrficos: polaridad, fase mvil, fase estacionaria, factor de retencin, etc. Determinacin de los componentes orgnicos presentes en una muestra usando sustancias patrn. A%te#ede%tes$ La cromatografia es una tcnica de anlisis umico utilizada para separar sustancias puras de mezclas complejas. !sta tcnica depende del principio de adsorcin selectiva "no confundir con a#sorcin$. La cromatografa fue descu#ierta por el #otnico ruso, de origen italiano, %i&'ail (s)ett en *+,-, pero su uso no se generaliz 'asta la dcada de *+.,. (s)ett separ los pigmentos de las plantas "clorofila$ vertiendo e/tracto de 'ojas verdes en ter de petrleo so#re una columna de car#onato de calcio en polvo en el interior de una pro#eta. A medida ue la solucin va filtrndose por la columna, cada componente de la mezcla precipita a diferente velocidad, uedando la columna marcada por #andas 'orizontales de colores, denominadas cromatogramas. Cada #anda corresponde a un pigmento diferente. La cromatografa es pro#a#lemente la ms verstil de las tcnicas de separacin: es aplica#le a cualuier mezcla solu#le o voltil. De 'ec'o las tcnicas de separacin suelen dividirse en dos grandes grupos: cromatogrficas 0 no cromatogrficas. La eleccin de una tcnica cromatogrfica concreta depender de la naturaleza 0 cantidad de la muestra, del o#jetivo de la separacin 0 de las limitaciones del tiempo 0 euipo aseui#le. 1odemos distinguir . tipos de cromatografa dependiendo si la fase estacionaria2fase mvil es slido2luido, luido2luido o luido2gas: Si es s&lido'l()*ido+ #abe disti%,*i! e%t!e$ C!o-ato,!a.(a de adso!#i&%$ !l slido adsor#e al componente ue inicialmente esta#a en fase mvil "liuida o gaseosa$ "3uerzas de 4an der 5aals$. Cromatografia de cambio inico: el slido es un cam#iador de iones "fuerzas electrostticas$. Informe De Anlisis Instrumental II Elaborado por: Est. Jorge Luis Chambi Laura Pgina 1 Cromatografia de exclusin (o de geles): el slido es un gel formado por polmeros no inicos porosos ue retienen a las molculas de soluto seg6n su tama7o. Cromatografia de afinidad: es un tipo especial de cromatografia de adsorcin, utilizada especialmente en #ioumica, en la ue un slido tiene enlazado un llamado ligando de afinidad ue puede ser por ejemplo, un indicador enzimtico o un anticuerpo. Si es l()*ido'l()*ido+ #abe disti%,*i!$ Cromatografa de particin: el soluto se reparte entra la fase mvil "liuido o gas$ 0 la fase estacionaria. Si es l()*ido',as+ #abe disti%,*i! e%t!e$ Cromatografa gas-liquido (CGL)+ ue es una cromatografa de particin. Cromatografa gas-slido (CGS)+ ue es una cromatografa de adsorcin. 8i es un fluido supercrtico, "fluido calentado a una temperatura superior a la temperatura crtica, pero simultneamente comprimido a una presin ma0or ue su presin critica$, se trata de la cromatografa de fluidos supercrticos "C38$, ue puede ser de particin o de adsorcin. Las tcnicas cromatogrficas, seg6n el dispositivo utilizado para conseguir la separacin entre la fase mvil 0 la estacionaria, pueden ser: en columna 0 plana. Cromatografa en columna: 8e utiliza un tu#o cilndrico, en cu0o interior se coloca la fase estacionaria 0 a su travs se 'ace pasar la fase mvil. !l flujo de la fase mvil "luido o gas$ a travs de la estacionaria se consigue: *$ por presin, 9$ por capilaridad, .$ por gravedad. Cromatografia plana: La fase estacionaria esta colocada en una superficie plana ue en realidad es tridimensional, aunue una de sus dimensiones es mu0 reducida, por lo ue puede considerarse #idimensional. 8e divide en dos tipos generales: *. :Cromatografa en papel: en la ue el papel a#sor#ente act6a como soporte de la fase estacionaria "cromatografia de particin$. ;na muestra luida flu0e por una tira vertical de papel a#sor#ente, so#re la cual se van depositando los componentes en lugares especficos. 2. -Cromatografa en capa fina: en la ue un slido act6a como fase estacionaria "cromatografia de particin$, se e/tiende en una capa delgada so#re una placa, generalmente de vidrio. Informe De Anlisis Instrumental II Elaborado por: Est. Jorge Luis Chambi Laura Pgina 2 !l uso de la cromatografa est ampliamente e/tendido en el anlisis de alimentos, medicinas, sangre, productos petrolferos 0 de fisin radiactiva. Mate!iales / Rea#tivos$ %ateriales: < placas de cromatografa 9 vasos de precipitado de *,,ml 9 1laca 1etri * pro#eta de *, ml 4arillas de vidrio =eactivos: Acetona de lavar Acetato de etilo >e/ano 1atrn *: %entol 1atrn 9: Acetoacetato de etilo 1atrn .: 1irogalol 1atrn <: 3loroglucina 1atrn ?: @enzofenona %uestra pro#lema 1 * %uestra pro#lema 1 9 =evelador anisalde'do "99? ml etanol A *9 ml anisalde'do A *. ml > 9 8B < $ Obte%#i&% de #aila!es a a!ti! de ietas Paste*!$ 1ara la realizacin de la prctica se de#en de o#tener capilares para la siem#ra de una muestra, a partir de una pipeta 1asteur, calentando esta 0 jalarlo 'asta un dimetro de capilar menos a *mm, uno para cada muestra. 8e podra 'acer solo un capilar para las muestras, pero ello conllevara ue fuese limpiado el capilar cada vez ue lo usemos con una muestra distinta a la anterior, con lo ue se iran arrastrando errores. P!o#edi-ie%to e0e!i-e%tal$ !n este apartado se realizaran 9 placas de cromatografa . / *, cm, las cuales solo se podrn coger por los #ordes 0 nunca tocar la parte de la tiza "la #lanca$, porue ello acarreara errores en la medicin. ;na vez o#tenidas las placas, marcamos a lpiz una lnea a * cm de la #ase. 8o#re esa lnea marcamos C puntos, donde se depositaran con los capilares peue7as cantidades de las muestras. Informe De Anlisis Instrumental II Elaborado por: Est. Jorge Luis Chambi Laura Pgina 3 !n los frascos, ue act6an como tanue de elucin, se pondrn las disoluciones. ;tilizaremos 9 disoluciones de acetona 0 ter etlico. 3inalmente se revelarn las placas usando dos agentes reveladores: Reelador fsico, usaremos una lmpara de ra0os ;4, donde pondremos con unas pinzas las placas cromatogrficas. Las marcas ue aparezcan se se7alarn con lpiz. Reelador qumico! una vez pasada la placa por los ra0os ;4A, se introducir con una pinza en un revelador anisalde'do 0 posteriormente ser colocada en una placa calefactora a *,,D C. 3inalmente anotamos los colores o#tenidos. C"l#*los$ 1ara el clculo del factor de retencin, = f , se usar la siguiente e/presin: = f E distancia recorrida por el compuesto Distancia recorrida por el disolvente 8e tomar como distancia del compuesto la distancia comprendida entre la lnea trazada donde se 'a depositado el compuesto 0 el centro de la manc'a. PLACA 1 Siste-a el*/e%te$ ter Dista%#ia !e#o!!ida o! el disolve%te$ ..? cm Re#o!!ido 2#-3 R . 4V Colo! 9.< ,.-F? 8G verde Informe De Anlisis Instrumental II Elaborado por: Est. Jorge Luis Chambi Laura Pgina 4 PLACA 5 Siste-a el*/e%te$ Acetona Dista%#ia !e#o!!ida o! el disolve%te$ ..- cm Re#o!!ido 2#-3 R . 4V Colo! ... ,.+*-C Ho verde Dis#*si&% de !es*ltados$ !n algunas placas no se ve el mentol, esto es de#ido a ue es posi#le 'a0an 'a#ido otras reacciones las cuales impiden poder valorarlas. !n el factor de retencin, las distancias 'an sido medidas con una regla a simple vista, por lo ue los valores de polaridad no son e/actos sino una simple apro/imacin. Co%#l*sio%es$ La tcnica de cromatografa en capa fina "CC3$ tiene numerosas ventajas, aparte de ser rpida, sencilla, #arata... tiene tam#in la ventaja de utilizar poca cantidad de muestra. A partir del factor de retencin sa#remos ue sustancia es ms polar, siendo el mas polar auel ue tenga un = f menor. acetona I eter 6 Pola! 7 Pola! Informe De Anlisis Instrumental II Elaborado por: Est. Jorge Luis Chambi Laura Pgina 5