largamente utilizada pelos qumicos na anlise de molculas de diversas massas molares ( g-pg). uma tcnica destrutiva. A grande sensibilidade do mtodo faz com que seja rotineiramente usado na anlise de substncias em baixa concentrao, como no caso do doping, controle de alimentos e medicamentos, contaminao ambiental, entre muitas outras aplicaes. Princpio bsico Princpio bsico Etapas Etapas Bombardeamento Bombardeamento das das molculas molculas por por um um feixe feixe de de eltrons eltrons de de alta alta energia energia Acelerao Acelerao dos dos ons ons em em um um campo campo eltrico eltrico ou ou magntico magntico ee separao separao eltrico eltrico ou ou magntico magntico ee separao separao pela pela razo razo massa/carga massa/carga Deteco Deteco dos dos ons ons com com determinada determinada razo razo massa/carga massa/carga Ionizao Ionizao Formao de ons positivos Formao de ons positivos Remoo de um eltron Remoo de um eltron M + e M + e MM +. +. + 2 + 2ee M +. (on molecular) expressa por m/z Massa (m) e Carga (z) Tipos de analisadores Tipos de analisadores Deflexo em campo magntico (impacto Deflexo em campo magntico (impacto de eltrons de eltrons EI) EI) Quadrupolo Quadrupolo Quadrupolo Quadrupolo Tempo de Vo (TOF) Tempo de Vo (TOF) Ressonncia de on Cclotron Ressonncia de on Cclotron EM/EM EM/EM Analisadores Analisadores Existem vrios dispositivos para separar Existem vrios dispositivos para separar ons com razo m/z diferentes ons com razo m/z diferentes Idealmente o analisador deveria ser Idealmente o analisador deveria ser capaz de distinguir diferenas de massa capaz de distinguir diferenas de massa capaz de distinguir diferenas de massa capaz de distinguir diferenas de massa minsculas minsculas Tipo de analisador Tipo de analisador Na tcnica de impacto de eltrons (EI) comumente a mais usada, as molculas gaseificadas so bombardeadas com um feixe de eltrons (70 eV) de alta energia e aceleradas. Aps a ionizao, as espcies carregadas passam por um campo magntico, onde so defletidas de acordo com a razo massa/carga (m/z) para um tubo analisador e detectadas. Tipo de analisador Tipo de analisador Filtro de massas quadrupolo Quadrupolo Quadrupolo Quatro Quatro bastes bastes sujeitos sujeitos aa uma uma DDP DDP (quadrupolo (quadrupolo) ) Gerao Gerao de de um um campo campo eletrosttico eletrosttico oscilante oscilante oscilante oscilante ons ons atravessam atravessam na direo Z na direo Z ons ons com certo m/z tm com certo m/z tm ooscilao estvel de scilao estvel de ampli ampli- - t tude ude constante (atingem o constante (atingem o d detector) etector) Oscila nos eixos X e Y Oscila nos eixos X e Y Detector + + - - TOF TOF (Time of Flight) (Time of Flight) Aps ionizada, a amostra entra no Aps ionizada, a amostra entra no tubo e a separao feita baseado tubo e a separao feita baseado na diferena de velocidade entre as na diferena de velocidade entre as partculas partculas partculas partculas Tipos de ionizao Tipos de ionizao Ionizao qumica (CI): a amostra vaporizada Ionizao qumica (CI): a amostra vaporizada introduzida no espectrmetro com um excesso de introduzida no espectrmetro com um excesso de gs (metano, gs (metano, isobutano isobutano ou amnia) ou amnia) ons primrios ons primrios ons secundrios reagem com a amostra M ons secundrios reagem com a amostra M Impacto de eltrons (EI) Impacto de eltrons (EI) Injeo da amostra Injeo da amostra Amostra aquecida Amostra aquecida Vaporizada Vaporizada Bombardeada com feixe de eltrons Bombardeada com feixe de eltrons Acelerada para o analisador Acelerada para o analisador M + e M + e MM +. +. + 2 + 2ee Desvantagens: Desvantagens: Limitadas para molculas termicamente Limitadas para molculas termicamente instveis instveis 1 em 1 x 10 1 em 1 x 10 6 6 molculas ionizadas molculas ionizadas Insuficiente para amostras com alto Insuficiente para amostras com alto peso molecular peso molecular Espectrometria de massa com ionizao Espectrometria de massa com ionizao por spray de eltrons (ESI) por spray de eltrons (ESI) ligada ligada sada de um HPLC (CLAE) sada de um HPLC (CLAE) ESI ESI (Electrospray Ionization) (Electrospray Ionization) A amostra introduzida em um A amostra introduzida em um capilar sob alta voltagem capilar sob alta voltagem Acontece presso atmosfrica Acontece presso atmosfrica Acontece presso atmosfrica Acontece presso atmosfrica A injeo da amostra muito lenta A injeo da amostra muito lenta L / seg L / seg Espectrometria de massa a laser Espectrometria de massa a laser assistida por matriz (MALDI) assistida por matriz (MALDI) MALDI MALDI (Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization) (Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization) Aplicvel para molculas com alto Aplicvel para molculas com alto peso molecular peso molecular Biomolculas Biomolculas Para molculas termicamente Para molculas termicamente instveis instveis A ionizao feita pela incidncia de A ionizao feita pela incidncia de um laser um laser Pulsos em comprimento de onda fixo Pulsos em comprimento de onda fixo Pulsos em comprimento de onda fixo Pulsos em comprimento de onda fixo Utiliza Utiliza- -se matriz para ionizao se matriz para ionizao Separar as molculas, impedindo a Separar as molculas, impedindo a formao de dmeros, trmeros... formao de dmeros, trmeros... Papel da matriz Papel da matriz Doar um H Doar um H + + Formar o (MH) Formar o (MH) + + Placa da amostra Espectro de Massa obtido por EI: Espectro de Massa obtido por EI: M + M + ee MM ++ + 2 + 2ee Formao de Formao de on molecular e pico base on molecular e pico base 100 % 100 % 100 % 100 % 100 % 100 % Espectro de massa de alta resoluo Espectro de massa de alta resoluo N O O O C 15 H 31 NO 2 MM = 494,2781 Importncia de diferentes tcnicas de ionizao Importncia de diferentes tcnicas de ionizao Importncia de diferentes tcnicas de ionizao Importncia de diferentes tcnicas de ionizao Dessoro de campo Dessoro de campo Importncia de diferentes tcnicas de Importncia de diferentes tcnicas de ionizao e fragmentao ionizao e fragmentao Dessoro Dessoro de campo de campo Cromatografia gasosa acoplada Cromatografia gasosa acoplada espectrometria de massa (CG/EM) espectrometria de massa (CG/EM) OCH 3 I I C 15 H 31 MM = 570 Espectro de Massa obtido por EI: Espectro de Massa obtido por EI: M + M + ee MM ++ + 2 + 2ee Formao de Formao de on molecular e pico base on molecular e pico base 100 % 100 % 100 % 100 % 100 % 100 % Principais istopos estveis de Principais istopos estveis de elementos mais comuns elementos mais comuns Intensidade relativa de Intensidade relativa de M + 1 M + 1 e e M + 2 M + 2 em algumas molculas em algumas molculas Utilizao do pico Utilizao do pico M + M + 1 na 1 na determinao determinao da frmula molecular da frmula molecular Espectrometria de massa de alta resoluo Regras de fragmentao Regras de fragmentao Fragmentaes Fragmentaes on troplio on troplio Exemplos gerais de modos de fragmentao mais comuns Rearranjos Fragmentaes de alcanos Fragmentaes de alcanos Fragmentaes de cicloalcanos Fragmentaes de cicloalcanos Fragmentaes de alquenos e alquinos Fragmentaes de alquenos e alquinos Fragmentaes de terpenos Fragmentaes de terpenos Fragmentaes de hidrocarbonetos Fragmentaes de hidrocarbonetos aromticos aromticos Fragmentaes de lcoois Fragmentaes de lcoois Fragmentaes de fenis Fragmentaes de fenis Fragmentaes de teres Fragmentaes de teres teres aromticos Fragmentaes de aldedos Fragmentaes de aldedos Fragmentos de cetonas Fragmentos de cetonas Cetonas cclicas Fragmentaes de steres Fragmentaes de steres Fragmentaes de cidos carboxlicos Fragmentaes de cidos carboxlicos Fragmentaes de aminas Fragmentaes de aminas Fragmentaes de amidas Fragmentaes de amidas Fragmentaes de haletos Fragmentaes de haletos Intensidade relativa de picos dos Intensidade relativa de picos dos istopos para vrias combinaes de istopos para vrias combinaes de bromo e cloro bromo e cloro Alguns fragmentos comuns no Alguns fragmentos comuns no detectados detectados Massas de fragmentos comuns Massas de fragmentos comuns Alguns modos comuns de fragmentao Alguns modos comuns de fragmentao por classes funcionais por classes funcionais