02 Prelimina Res

VALIDACIN MTODOS ANLITICOS (DQO, HIERRO, H
2
O
2
, COT) EN
AGUAS

OLGA YAJAIRA CHICA MARTNEZ
NATALIA FERNANDA GALVIS CABALLERO
JULIANA MADRID ACEVEDO

Asesor
Margarita Mara Hincapi Prez
M.Sc. Ciencias Qumicas

UNIVERSIDAD DE MEDELLN
FACULTAD DE INGENIERA
PROGRAMA DE INGENIERA AMBIENTAL
MEDELLN
2007
2
TABLA DE CONTENIDO
INTRODUCCIN.............................................................................................................. 4
OBJETIVOS...................................................................................................................... 5
OBJETIVO GENERAL...................................................................................................... 5
OBJETIVOS ESPECFICOS............................................................................................ 5
1. VALIDACIN MTODOS ANLITICOS.................................................................. 6
1.1. Limite de Deteccin del Mtodo (LDM) ................................................................ 6
1.2. Limite de Cuantificacin del Mtodo (LCM) ......................................................... 8
1.3. Linealidad ............................................................................................................. 9
1.4. Exactitud ............................................................................................................. 10
1.5. Precisin............................................................................................................. 12
1.6. Recuperacin...................................................................................................... 13
1.7. Error fotomtrico................................................................................................. 14
2. DEFINICIONES ..................................................................................................... 15
3. DEMANDA QUIMICA DE OXIGENO (DQO)......................................................... 16
3.1. Limitaciones e interferencias.............................................................................. 17
3.2. Toma y preservacin de muestras..................................................................... 18
3.3. Equipos y reactivos............................................................................................. 18
3.4. Procedimiento..................................................................................................... 19
3.5. Clculo................................................................................................................ 19
4. DEMANDA BIOQUIMICA DE OXIGENO (DBO) ................................................... 20
4.2. Toma y preservacin de las muestras............................................................... 22
4.4. Procedimiento..................................................................................................... 23
4.5. Clculo. ............................................................................................................... 24
3
5. HIERRO.................................................................................................................. 25
5.3. Procedimiento..................................................................................................... 26
5.4. Calculo................................................................................................................ 26
6. DETERMINACION DE PERXIDO DE HIDRGENO ......................................... 26
6.3. Procedimiento..................................................................................................... 27
6.4. Calculo................................................................................................................ 27
7. CARBONO ORGNICO TOTAL (COT)................................................................. 27
7.2. Principio .............................................................................................................. 29
7.3. Toma y conservacin de la muestra.................................................................. 31
7.5. Procedimiento..................................................................................................... 31
8. VALIDACIN.......................................................................................................... 34
BIBLIOGRAFA............................................................................................................... 35

4

INTRODUCCIN

La validacin de mtodos analticos se enmarca en las buenas prcticas de laboratorio
que buscan certificar los procedimientos, equipos, personal, mtodos, registros, control
e instalaciones para la obtencin de resultados confiables. En la validacin se
asegura la calidad y validez de los resultados obtenidos en los ensayos, esto teniendo
en cuenta el tipo de muestra con la cual se trabaja, el equipo que se utiliza para la
determinacin y el principio del mtodo.

La validacin para anlisis en aguas busca garantizar que los procedimientos
utilizados para la estimacin de un parmetro son los adecuados y su resultado tiene
un margen de error muy pequeo, casi despreciable. Segn las necesidades de las
practicas que se llevan a cabo en el laboratorio del grupo de investigaciones GEMA,
se validaron los anlisis de Demanda Qumica de Oxgeno (DQO), Determinacin de
Hierro y de Perxido de Hidrogeno, adems se recomend el procedimiento a seguir
para la validacin de la Demanda Bioqumica de Oxgeno (DBO
5
) y la determinacin
de Carbono Orgnico Total (COT).

La validacin de estos mtodos es importante para probar que todos los anlisis que
se llevan a cabo en el laboratorio del grupo de investigaciones GEMA, ya sea para
investigacin o prestacin de servicios, son validos y cumplen con los requerimientos
de desempeo tcnico para cada prueba, con un nivel alto de confianza, creando
confianza y garantizando la seguridad del producto,

5

OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL

Realizar el protocolo de validacin de los mtodos analticos para anlisis de agua
utilizados en el laboratorio del grupo GEMA en la Universidad de Medelln, que son:
Demanda Qumica de Oxgeno (DQO), Demanda Bioqumica de Oxgeno (DBO),
Carbono Orgnico Total (COT), Determinacin de Hierro y determinacin de Perxido
de Hidrgeno y desarrollar el protocolo de validacin para la DQO, determinacin de
Hierro y Perxido de Hidrgeno.

OBJETIVOS ESPECFICOS

Definir las caractersticas de validacin que se emplearan en cada uno de los
protocolos.

Comprobar el lmite de deteccin, el lmite de cuantificacin, la exactitud y precisin de
la Demanda Qumica de Oxgeno (DQO), Determinacin de Hierro y determinacin de
Perxido de Hidrgeno.

Determinar el error fotomtrico del anlisis para la determinacin de Hierro.

Verificar la linealidad en los rangos de trabajo para la Demanda Qumica de Oxgeno
(DQO) y la Determinacin de Hierro.

6
1. VALIDACIN MTODOS ANLITICOS

La validacin de mtodos analticos tiene por objeto establecer por medio de prcticas
de laboratorio que demuestren cientficamente que un mtodo analtico tiene las
caractersticas de desempeo que son adecuadas para los objetivos buscados, las
pruebas a validar son cuantitativas: Demanda Qumica de Oxgeno (DQO), Demanda
Bioqumica de Oxgeno (DBO), Hierro, Perxido de Hidrgeno, Carbono Orgnico
Total (COT)

Implica la demostracin de la determinacin de las fuentes de variabilidad y del error
sistemtico y al azar de cada uno de los procedimientos, no solo dentro de la
calibracin sino en el anlisis de muestras reales.

La validacin de mtodos analticos, incluye la adecuacin a la finalidad y propsito
perseguido y por ende la definicin de los requisitos analticos y los parmetros de
calidad buscados en la investigacin.

Los mtodos a validar son cuantitativos y las caractersticas de validacin que
necesitan ser evaluadas son;

Lmite de deteccin
Lmite de cuantificacin
Rango y linealidad
Exactitud, veracidad, precisin
Error fotomtrico

1.1. Limite de Deteccin del Mtodo (LDM)
1

Cantidad ms pequea de analito en una muestra que puede ser detectada por una
nica medicin, con un nivel de confianza determinado, pero no necesariamente
cuantificada con un valor exacto. Es comnmente expresado como concentracin del
analito.

1
[ISO 3431] Citado por: ANGELINI, Nora. Consultora internacional de la FAO. Taller sobre
aseguramiento de la calidad y validacin de metodologa para anlisis qumicos.
<http://www.rlc.fao.org/prior/comagric/codex/rla3013/pdf/faovali.pps>
7
El lmite de deteccin del mtodo, LDM, es la menor concentracin o cantidad de
analito en una muestra que puede ser detectada, pero no necesariamente
cuantificada, bajo las condiciones experimentales establecidas en la etapa de
evaluacin de la selectividad.

Para la determinacin del LDM en los laboratorios se aplica el siguiente procedimiento:

Preparar de 7 a 10 estndares de concentracin mnima y medir su concentracin
siguiendo el protocolo de anlisis, utilizando como blanco agua destilada cuando
aplique.
Calcular la desviacin estndar s.
Calcular el LDM aplicando la ecuacin (1)

) 1 ( 95 . 0
=
n
t s LDM (1)
Donde LDM: lmite de deteccin del mtodo.
s: desviacin estndar del estndar utilizado
t
x(n-1)
: distribucin t de Student para n-1 grados de libertad, con una
confianza x = 0.95
n: nmero de replicas.

El criterio de aceptacin del valor estimado para el LDM est relacionado con la
experiencia del analista en la aplicacin del mtodo. Igualmente los datos obtenidos
permiten el clculo del Coeficiente de Variacin mediante la aplicacin de la ecuacin
2.
100
=
X
s
CV (2)

Donde CV: Coeficiente de Variacin, en porcentaje.
X: Valor promedio del estndar utilizado.

Si el valor obtenido para el CV es menor al 20% se acepta el valor estimado para el
LDM. De lo contrario se rechaza dicha estimacin y se procede a la realizacin de
nuevos anlisis.

8
1.2. Limite de Cuantificacin del Mtodo (LCM)
2

Cantidad ms pequea del analito en una muestra que puede ser cuantitativamente
determinada con exactitud aceptable. Es un parmetro del anlisis cuantitativo para
niveles bajos de compuestos en matrices de muestra y se usa particularmente para
impurezas y productos de degradacin. Se expresa como concentracin del analito.

El lmite de cuantificacin, tambin conocido como lmite de determinacin, es la
menor concentracin o cantidad de analito de una muestra que puede ser
determinada con aceptable precisin y exactitud bajo las condiciones experimentales
establecidas.

Para el clculo del lmite de cuantificacin se aplicar la siguiente relacin, la cual es
una funcin proporcional del valor obtenido para el LDM:

LDM K LCM = (3)

Donde LCM: lmite de cuantificacin del mtodo.
K: factor multiplicativo comprendido entre 10 a 20 veces el lmite de
deteccin del mtodo y dependiente de la tcnica analtica empleada.
LDM: lmite de deteccin del mtodo.

El valor obtenido mediante la aplicacin de la ecuacin (3) debe ser verificado
experimentalmente mediante el clculo de su repetibilidad y su reproducibilidad. Para
ello se procede de la siguiente manera para su confirmacin:

Preparar de 7 a 10 soluciones estndar de la concentracin hallada para el lmite
de cuantificacin LCM.
Calcular la desviacin estndar s y el valor promedio X de las concentraciones
estndares, al n-1 grado de libertad para un nivel de confianza de acuerdo ala
especilidad del laboratorio.

2
[ISO 3431] Citado por: ANGELINI, Nora. Consultora internacional de la FAO. Taller sobre
9
Si el coeficiente de variacin de los datos obtenidos es menor al 20%, se acepta dicho
resultado como valor estimado para el LCM. De lo contrario se hace necesario aplicar
un nuevo factor de proporcionalidad K y repetir el procedimiento anterior.

1.3. Linealidad
3

mbito entre la menor y la mayor concentracin de analito en la muestra (incluyendo
stas concentraciones) para las cuales se ha demostrado que el procedimiento
analtico tiene el nivel adecuado de precisin, exactitud y linealidad.

La linealidad es la capacidad del mtodo analtico para producir resultados
directamente proporcionales a la concentracin o cantidad de analito en un rango
definido. Se determina mediante el tratamiento matemtico de los resultados del
anlisis del analito a diferentes cantidades o concentraciones.

En el extremo bajo del rango de concentraciones los factores limitantes son los valores
de los lmites de cuantificacin. En el valor superior de las concentraciones las
limitaciones pueden ser impuestas por varios efectos que dependen de la respuesta
del sistema de medicin empleado. La extensin del rango lineal puede ser
establecida durante la evaluacin del rango de trabajo o ser el recomendado en el
respectivo protocolo de anlisis.

Para las tcnicas analticas en las cuales es necesario elaborar curva de calibracin,
se debe incluir:

un blanco de reactivos;
una serie de por lo menos cinco estndares o niveles de concentracin;
los niveles debern estar proporcionalmente espaciados;
se repetirn como mnimo por triplicado cada nivel.

Para la elaboracin de la curva de calibracin se aplica el mtodo de los mnimos
cuadrados, para la cual el coeficiente de correlacin debe ser cercano a 1,00. El
criterio de aceptacin de la curva de calibracin ser que su coeficiente de regresin
sea superior a 0,99 como mnimo.

3
[AOAC-PVMC] Citado por: ANGELINI, Nora. Consultora internacional de la FAO. Taller sobre
10

La curva de trabajo se reevaluar con niveles de concentracin inferior, media o
superior respecto a los valores de referencia de la curva. Si la desviacin del valor
obtenido es igual o mayor al 10% con respecto al valor esperado se debe proceder a
la elaboracin de una nueva curva de calibracin.
Estas curvas de calibracin debern ser actualizadas o renovadas como mnimo cada
ao.

1.4. Exactitud

Expresa la cercana entre el valor que es aceptado, sea como un valor convencional
verdadero (material de referencia), sea como un valor de referencia aceptado (material
estndar) y el valor encontrado (valor promedio) obtenido al aplicar el procedimiento
de anlisis un cierto nmero de veces.

La exactitud es la concordancia entre el promedio de un conjunto de resultados o de
un resultado individual y el valor aceptado como verdadero o correcto para la cantidad
medida. [IUPAC, Compendium of Chemical Technology, 1985]
4

Para la determinacin de la exactitud del mtodo analtico se procede de la siguiente
manera:

Se preparan de 7 a 10 veces un estndar de concentracin conocida a partir de un
material de referencia y cuyo nivel de concentracin se encuentre dentro del rango
de trabajo.
Se determina su concentracin en la curva de calibracin obtenida en el numeral
de linealidad.
Se calcula el valor promedio X y la desviacin estndar s de los resultados
obtenidos.
Los lmites aceptables de exactitud deben estar determinados por los
requerimientos de los resultados y su aceptabilidad se da estadsticamente con la
prueba t de Student, con un lmite de confianza que normalmente es el 95% y n-1
grados de libertad.
trab
t t
exp

4
Citado por: requerimientos para la validacin interna de mtodos analticos y presentacin de
informes de validacin. (Citada: 29 Abril de 2007).
<http://www.senasa.gov.ar/oldweb/marcolegal/Res_rs2/rs_138_02_cont__2.htm>
11
donde,
( )
s
n
X X t
promedio real
=
exp

donde, t
exp
: valor experimental obtenido de t.
t
tab
: valor tabulado de t. Para n-1 grados de libertad.
X
real
: valor real o de referencia
X
promedio
: valor promedio obtenido para n determinaciones.
n : nmero de determinaciones realizadas.
s : desviacin estndar de las n determinaciones

Si t
exp
es menor al valor de t
tab
se acepta que el mtodo es exacto bajo las condiciones
de experimentacin establecidas. Si dicho valor es mayor se rechaza, se evala y se
corrige.

Tambin es posible calcular la exactitud a partir del anlisis de una matriz enriquecida
con el analito de referencia y se calcula la recuperacin (%R ).
( )
CV
n
R t % 100
exp
=
donde t
exp.
: t experimental
%R : Recuperacin, en porcentaje
n : Nmero de rplicas
CV : Coeficiente de variacin, en porcentaje.

Los materiales de referencia para la validacin a utilizar en el laboratorio en
consecuencia pueden ser:

Un material enriquecido con materiales puros certificados u otros materiales de
pureza y estabilidad adecuadas.

Un material bien caracterizado probados en el laboratorio para estabilidad y
conservados para Control de Calidad (QC)

Para mtodos que se van a emplear dentro del laboratorio por largo tiempo se
puede emplear un material estable existente en el laboratorio o un material
certificado. Para trabajos de corta duracin se puede emplear un estndar
preparado o un enriquecimiento.
12
1.5. Precisin

Precisin obtenida dentro del laboratorio por diferentes analistas, diferentes equipos,
das distintos con la misma muestra homognea.

Es el grado de concordancia entre los resultados de las pruebas individuales cuando el
procedimiento se aplica repetidamente a la misma muestra.
Las dos mediciones ms comunes de precisin son la repetibilidad y la
reproducibilidad. La repetibilidad da idea de la clase de variabilidad que puede
esperarse, cuando un mtodo es realizado por un solo analista en un mismo equipo
durante un perodo corto. Si la muestra es analizada por varios laboratorios para
efectos de comparacin se obtiene una medicin ms significativa de la precisin y es
la reproducibilidad.
Los datos que se obtienen en las determinaciones del LDM, LCM, la linealidad, la
exactitud y el porcentaje de recuperacin permiten evaluar la repetibilidad y la
reproducibilidad, y de todos ellos, los obtenidos en la determinacin de la linealidad
sern los ms representativos.
La precisin usualmente se expresa con la desviacin estndar o con la desviacin
estndar relativa.
El procedimiento a seguir en el clculo de la precisin consiste en:
Tomar y tabular los datos obtenidos.
Calcular el promedio de los datos X y la desviacin estndar s (en trminos de la
diferencia absoluta).
Calcular el coeficiente de variacin.

Si el CV es menor o igual al 10% se acepta que el mtodo de anlisis es preciso, de lo
contrario se cuestiona su precisin.

13
1.6. Recuperacin
5

Es la recuperacin obtenida de una cantidad conocida agregada de la sustancia de
inters a una matriz dada.

La fraccin de analito adicionado a la matriz, antes del anlisis, las muestras no
adicionadas y el porcentaje de recuperacin (%R) se calculan de la siguiente manera:

100 %

=
CA
CU CF
R (4)

donde CF : concentracin del analito medido en la muestra enriquecida
CU : concentracin del analito medido en la muestra no enriquecida
CA : concentracin del analito adicionado(valor medido, no
determinado por el mtodo)

Con la determinacin del porcentaje de recuperacin del mtodo se evala el efecto
que tiene cada tipo de matriz que vaya a analizarse, y por tanto, se establece si el
mtodo aplica o no a ese tipo de matriz especfica.

Para determinar la recuperacin se proceder de la siguiente forma:

Se enriquece la matriz en estudio mediante la adicin de estndares de
concentracin definida, por triplicado y para tres niveles de concentracin que se
incluyan dentro del rango de trabajo (estos se llamarn nivel inferior, medio y
superior)

Para la aceptacin de los resultados los valores de la recuperacin deben oscilar entre
el 70% al 110% y el coeficiente de variacin debe ser igual o menor al 20%

El porcentaje de recuperacin permite evaluar las interferencias que estan presentes
en la matriz a la hora de realizar la prueba. Por ejemplo la interferencia del peroxido
de hidrogeno (H2O2) en la prueba de Demanda Qumica de Oxgeno (DQO)

5
[AOAC-PVMC] Citado por: ANGELINI, Nora. Consultora internacional de la FAO. Taller sobre
14
1.7. Error fotomtrico

La exactitud y precisin de los anlisis espectroscpicos frecuentemente estn
limitadas por la incertidumbre o ruido asociado al instrumento. Las mediciones en
espectroscopia implican; un ajuste a 100% T (o su contraparte en Absorbancia) y
finalmente el medir la Tramitancia o Absorbancia de la solucin.

El ruido generado en cada uno de esos procesos da finalmente un valor total de
incertidumbre en la medicin. (Error Fotomtrico).

Como consecuencia de lo anteriormente mencionado la precisin en la lectura de
absorbancia, esta limitada por altos y bajos valores de sta.

Otra forma de interpretar el hecho de que a bajos y altos valores de absorbancia o
tramitancia el grado de incertidumbre sea grande es considerando que a bajas
absorbancia la intensidad del haz incidente y transmitido es prcticamente igual y el
detector incurre en un error grande al percibir la intensidad de dos haces muy
semejantes. A altos valores de absorbancia la energa transmitida es tan pequea que
no es posible medirla con precisin. La Mayor precisin es obtenida en un rango de 15
% de tramitancia (A= 0.8) a 65% de la misma (A=0.20), por lo que si se desea obtener
resultados de alta precisin, es conveniente diluir o concentrar la muestra hasta que
su absorbancia o tramitancia est dentro de este rango.

Para el clculo del error fotomtrico se procede a medir 10 veces el mismo estndar,
preferiblemente el de la mitad de la curva de calibracin, en la misma celda.

= 2 *
% %
%
n
Ti Tprom
T

% 100
% 5 . 2

=
m
T
trico Errorfotom
Donde; m: pendiente de la curva de calibracin del mtodo
T
i
: Porcentaje de tramitancia para cada replica
T
prom
: Porcentaje de tramitancia promedio
n: nmero de replicas

15
2. DEFINICIONES
6

MATERIAL DE REFERENCIA (ESTANDARES): Material o sustancia, en el cual una o
ms de sus propiedades estn suficientemente bien establecidas para que sea usado
en la calibracin de un aparato, la estimacin de un mtodo de medicin o para
asignar valores a los materiales.

METODO ANALITICO: Adaptacin especfica de una tcnica analtica para un
propsito de medicin seleccionado

PROCEDIMIENTO ANALITICO: Forma en que se realiza el anlisis. Debe describir en
detalle los pasos necesarios para realizar cada prueba analtica. Puede incluir, pero no
necesariamente los siguientes conocimientos: caractersticas de la muestra,
preparacin de los estndares de referencia y reactivos, uso de los aparatos o
instrumentos, generacin de la curva de calibracin, uso de frmulas para los clculos.

SESGO: se usa en el sentido de exactitud de un promedio a largo plazo (valor
esperado) de una serie de promedios. Es la diferencia en el valor esperado
(tericamente igual al promedio de un nmero infinito de valores individuales
independientes) del valor verdadero, correcto o asumido.

TRAZABILDAD: propiedad del resultado de una medicin o del valor de un patrn por
el cual pueda ser relacionado a referencias determinadas, generalmente, patrones
nacionales o internacionales, por medio de una cadena ininterrumpida de
comparaciones teniendo todas, incertidumbres determinadas.

ANALITO: Sustancia o compuestos que se buscan en el proceso de anlisis.

BLANCO: Sistema fsico que no contiene muestra real y por consiguiente no deber
contener el analito de inters, pero que debe contener todos los reactivos que se
utilizan en el mtodo de anlisis y son sometidos a las mismas condiciones y al mismo
procedimiento que las muestras reales y los estndares.

6
Ministerio de Salud de Costa Rica. Gua de Validacin de Mtodos Analticos. (Citado: Marzo
30 de 2007).
<http://www.ministeriodesalud.go.cr/protocolos/guiavalidacionmetodosanaliticos.pdf>
16
ENRIQUECIMIENTO: Cantidades pequeas del compuesto de inters que se agregan
ala muestra original.

MATRIZ: El material en el cual el analito o analitos de inters estn embebidos.

MUESTRA: El trmino se refiere a cada sistema fsico que sea sometido al
procedimiento de anlisis siguiendo el mtodo que se est validando.

INCERTIDUMBRE: una estimacin unida al resultado de un ensayo que caracteriza el
intervalo de valores de ntro de los cuales se afirma que est el valor verdadero.

3. DEMANDA QUIMICA DE OXIGENO (DQO)

La Demanda Qumica de Oxgeno (DQO), es la cantidad de equivalentes-gramos de
agente oxidante gastados en la oxidacin de los compuestos presentes en el agua,
expresada en mg de Oxgeno por litro de solucin de agua (mg/L).

La Demanda qumica de Oxgeno (DQO), es un ensayo ampliamente usado para
medir la contaminacin por los desechos domsticos e industriales. Esta prueba mide
la cantidad total de Oxgeno requerido para la oxidacin qumica de los compuestos
presentes en una muestra de agua residual, bajo condiciones especficas de agente
oxidante, temperatura y tiempo.

Catalizador
MO + MI + AGENTE OXIDANTE ------------------> m (CO
2
) + H
2
O + Otros.

MO: Materia orgnica.
MI: Materia inorgnica oxidable.

Bajo las condiciones del anlisis y especialmente en la presencia del catalizador de
Ag
2
SO
4
, se tiene una oxidacin completa (terica) de todos los compuestos orgnicos
a CO
2
, H
2
O, NH
4
+
, H
3
PO
4
, SO
4
-2
, etc.

Existen dos mtodos para determinar la DQO, el mtodo del reflujo abierto, empleado
para una amplia gama de residuos en el cual se emplea gran cantidad de muestra y
reactivos, y el mtodo del reflujo cerrado o micro DQO, donde se utilizan pequeas
17
concentraciones de muestra y reactivos, lo cual lleva a reducir costos y tiempo de
anlisis. En nuestro caso especfico, se emplea el mtodo de la micro DQO; el cual
tiene como proceso analtico:

Medir el volumen de muestra (2.5 ml)
Adicionar el reactivo de digestin (1.5 ml)
Adicionar el reactivo de cido sulfrico (3.5 ml)
El digestor se calienta por 20 minutos (a 150C) antes de colocar los tubos o
celdas de digestin; y luego se colocan los tubos en digestin por dos horas.
Se deja enfriar las muestras, se calibra el equipo con el blanco
(espectrofotmetro) a = 600 nm y se lee la absorbancia para luego hallar la
concentracin en mg/L de DQO de la muestra con la curva de calibracin.

Las sustancias orgnicas e inorgnicas oxidables presentes en la muestra, se oxidan
mediante reflujo cerrado en solucin fuertemente cida (H
2
SO
4
) con un exceso
conocido de dicromato de potasio (K
2
Cr
2
O
7
) en presencia de sulfato de plata (Ag
2
SO
4
)
que acta como agente catalizador, y de sulfato mercrico (HgSO
4
) adicionado para
remover la interferencia de los cloruros. Despus de la digestin, el oxgeno
consumido se determina mediante lectura espectofotomtrica a una longitud de onda
de 600 nm contra estndares.

El mtodo de reflujo cerrado es ms econmico en el uso de reactivos de sales
metlicas, pero para obtener resultados reproducibles requiere la homogenizacin de
muestras que contengan slidos suspendidos.

Para muestras de un origen especfico, la DQO se puede relacionar empricamente
con la DBO, el carbono orgnico o la materia orgnica; la prueba se usa para controlar
y monitorear despus que se ha establecido la correlacin.

3.1. Limitaciones e interferencias

Compuestos alifticos, stos no se oxidan apreciablemente
Haluros, los cuales interfieren en la oxidacin de la materia orgnica, Si hay
cloruros presentes pueden interferir, ya que son oxidados por el dicromato
segn la siguiente reaccin:

18
6Cl
-
+ Cr
2
O
7
2-
+ 14 H
+
3Cl
2
+ 2Cr
+3
+ 7H
2
O
La interferencia se inhibe adicionando sulfato de mercurio (HgSO
4
), el Hg
+2

reacciona con los cloruros precipitando cloruro de mercurios (HgCl), segn la
siguiente reaccin:

Hg
+2
+ 2Cl
-
HgCl (precipitado)

Las especies inorgnicas reducidas, tales como iones ferroso, sulfuro,
manganoso, etc., se oxidan cuantitativamente bajo las condiciones de la
prueba; para concentraciones altas de estas especies, se pueden hacer las
correcciones al valor de DQO obtenido, segn los clculos estequiomtricos en
caso de conocer su concentracin inicial.
El perxido de hidrgeno (H
2
O
2
), esta interferencia se elimina con oxido de
manganeso.

3.2. Toma y preservacin de muestras

Colectar las muestras en botellas de vidrio preferiblemente; el uso de envases
plsticos es permisible si se asegura la ausencia de contaminantes orgnicos.

Las muestras que contengan slidos sedimentables deben mezclarse con un
homogenizador para obtener una muestra representativa.

3.3. Equipos y reactivos

Bloque de calentamiento, de aluminio fundido, de 40 a 50 mm de profundidad, con
agujeros de dimetro adecuado para un ajuste cerrado de los tubos o ampollas de
digestin.

Espectrofotmetro, para realizar lecturas a 600 nm, con porta celdas.

Solucin de digestin. 10,216 g de K
2
Cr
2
O
7
, grado estndar primario, previamente
secado a 103C durante 2 horas, 167 mL de H
2
SO
4
concentrado, y 33,3 g de HgSO4.
Disolver, enfriar a temperatura ambiente y diluir a 1000 mL.

19
Reactivo de cido sulfrico. Agregar Ag
2
SO
4
, grado reactivo o tcnico, en cristales o
en polvo, a una cantidad de H
2
SO
4
concentrado en proporcin de 5,5 g de Ag
2
SO
4
/kg
H
2
SO
4
(aproximadamente 545 mL de cido). Dejar en reposo de 1 a 2 das para que
se disuelva el Ag
2
SO
4
.

Ftalato de potasio e hidrgeno (KHP) estndar. Triturar ligeramente y secar biftalato
de potasio (HOOCC
6
H
4
COOK) a 120C hasta peso constante. Disolver 425 mg en
agua destilada y llevar a 1000 mL. El biftalato tiene una DQO terica de 1,176 mg
O
2
/mg y la solucin tiene una DQO terica de 500 g O
2
/mL. La solucin es estable
hasta tres meses si se conserva refrigerada; se debe verificar la presencia o ausencia
de crecimiento biolgico, y en caso afirmativo descartarla.

3.4. Procedimiento

Tratamiento de muestras. Lavar los tubos segn los procedimientos de lavado, con
agua, jabn, solucin de HCl y agua destilada. Colocar las muestras, el blanco y uno o
ms estndares en los tubos y agregar solucin de digestin. Agregar
cuidadosamente reactivo de cido sulfrico por la pared del tubo de tal manera que se
forme una capa de cido debajo de la mezcla de muestra y solucin digestora. Tapar
hermticamente los tubos, e invertirlos varias veces para mezclar completamente el
contenido. Colocar los tubos o las ampollas en el bloque de calentamiento o en un
horno precalentado a 150C, y dejar en reflujo durante 2 horas. Enfriar a temperatura
ambiente

Medicin de la reduccin del dicromato. Invertir varias veces los tubos fros y dejar
sedimentar los slidos antes de medir la absorbancia a un ? = 600nm. Desalojar los
slidos que se adhieren a las paredes mediante golpes ligeros.

3.5. Clculo

muestra de mL
1000 final volume el en O mg
/L O mg como DQO
2
2

=

20
4. DEMANDA BIOQUIMICA DE OXIGENO (DBO)
La demanda bioqumica de oxgeno (DBO) es una prueba usada para la determinacin
de los requerimientos de oxgeno para la degradacin bioqumica de la materia
orgnica en las aguas residuales; su aplicacin permite calcular los efectos de las
descargas de los efluentes domsticos e industriales sobre la calidad de las aguas de
los cuerpos receptores.
La prueba de la DBO es un procedimiento experimental, tipo bioensayo, que mide el
oxgeno requerido por los organismos en sus procesos metablicos al consumir la
materia orgnica presente en las aguas residuales o naturales. Las condiciones
estndar del ensayo incluyen incubacin en la oscuridad a 20C por un tiempo
determinado, generalmente cinco das. Las condiciones naturales de temperatura,
poblacin biolgica, movimiento del agua, luz solar y la concentracin de oxgeno no
pueden ser reproducidas en el laboratorio. Los resultados obtenidos deben tomar en
cuenta los factores anteriores para lograr una adecuada interpretacin.
Las muestras de agua residual o una dilucin conveniente de las mismas, se incuban
por cinco das a 20C en la oscuridad. La disminucin de la concentracin de oxgeno
disuelto (OD), medida por el mtodo Winkler o una modificacin del mismo, durante el
periodo de incubacin, produce una medida de la DBO.
Las muestras para anlisis de DBO deben diluirse, para garantizar suficiente oxigeno
para los microorganismos en los cinco das a las condiciones del bioensayo. La
dilucin se lleva a cabo con un agua que contiene todos los minerales inorgnicos
necesarios para el crecimiento microbiano, tamponada a un pH fisiolgico. El oxgeno
se suministra por saturacin de la muestra, o del agua de dilucin, con aire.

Los microorganismos se suministran mediante siembra en el agua de dilucin de una
semilla (inculo) apropiada: normalmente aguas negras sedimentadas, efluente de
plantas de tratamiento de aguas residuales domsticas, o en algunos casos
microorganismos aclimatados al sustrato particular de inters.

El mtodo de determinacin de la DBO consiste en llenar con muestra al menos cuatro
frascos winkler de 300 ml, incubar tres de ellos a 20 +/- 1C por cinco das. Medir el
oxgeno disuelto inicial en el frasco y el oxgeno disuelto final despus del perodo de
incubacin. La disminucin de la concentracin de oxgeno disuelto (OD), medida por
21
el mtodo winkler o una modificacin del mismo, durante el periodo de incubacin,
produce una medida de la DBO.

Para una oxidacin completa se requiere un tiempo infinito, pero para propsitos
prcticos se considera que la reaccin se completa en 20 das; sin embargo por ser este
un perodo muy largo, la experiencia ha demostrado que aproximadamente entre el 70 y
80 % de la DBO se ejerce en cinco das es por esto que histricamente la prueba se ha
desarrollado en este perodo.
Requerimientos de dilucin. Si el agua de dilucin es de baja calidad, su DBO
aparecer como DBO de la muestra, efecto que ser amplificado por el factor de
dilucin, y el resultado tendr una desviacin positiva. El mtodo de anlisis debe
incluir agua de dilucin de verificacin y agua de dilucin como blanco para establecer
su calidad, mediante la medicin del consumo de oxgeno con una mezcla orgnica
conocida, generalmente glucosa y cido glutmico. La fuente del agua de dilucin
puede ser: destilada a partir del agua de grifo, o agua libre de sustancias orgnicas
biodegradables o bioinhibitorias tales como cloro o metales pesados. El agua destilada
puede contener amoniaco o compuestos orgnicos voltiles; el agua desionizada
tambin puede estar contaminada con compuestos orgnicos solubles lixiviados del
lecho de la resina; el uso de destiladores con conductos o accesorios de cobre en las
lneas de agua destilada pueden producir agua con cantidades excesivas de cobre,
que acta como biocida.

La presencia de compuestos de nitrgeno interfiere positivamente en la DBO cuando
el perodo de incubacin es mayor de ocho das; en este caso se debe inhibir la
nitrificacin.

Concentraciones altas de compuestos txicos matan la poblacin microbiana dando
lugar a bajas DBO; en este caso una dilucin de la muestra puede disminuir la
toxicidad.
Existen numerosos factores que afectan la prueba de la DBO, entre ellos la relacin de
la materia orgnica soluble a la materia orgnica suspendida, los slidos
sedimentables, los flotables, la presencia de hierro en su forma oxidada o reducida, la
presencia de compuestos azufrados y las aguas no bien mezcladas. Al momento no
existe una forma de corregir o ajustar los efectos de estos factores.
22
4.2. Toma y preservacin de las muestras
Si el anlisis se emprende en el intervalo de 2 h despus de la recoleccin no es
necesario refrigerarlas; de lo contrario, guardar la muestra a 4C o menos; reportar
junto con los resultados el tiempo y la temperatura de almacenamiento. Bajo ningn
concepto iniciar el anlisis despus de 24 h de haber tomado la muestra.
Para garantizar que en la muestra exista un consumo de oxgeno adecuado, se espera
que como mnimo existan 2 mg OD/l a los cinco das de incubacin para que el
anlisis sea considerado vlido.

Botellas de incubacin para la DBO (Winkler), de 250 a 300 mL de capacidad.
Lavarlas con detergente, HCl y agua destilada, enjuagarlas varias veces, y escurrirlas
antes de su uso. Para evitar la entrada de aire en la botella de dilucin durante la
incubacin, se debe utilizar un sello de agua, que se puede lograr satisfactoriamente
invirtiendo las botellas en un bao de agua o adicionando agua en el reborde cncavo
de la boca de las botellas especiales para la DBO. Colocar una copa de papel sobre la
boca de la botella para reducir la evaporacin del sello de agua durante la incubacin.
Incubadora de aire o bao de agua, controlada termostticamente a 20 1C; excluir
cualquier fuente luminosa para eliminar el proceso de produccin fotosinttica de OD.
Solucin tampn de fosfato: Disolver 8,5 g de KH
2
PO
4
, 21,75 g de K
2
HPO
4
, 33,4 g de
Na
2
HPO
4
.
7H
2
O, y 1,7 g de NH
4
Cl en aproximadamente 500 mL de agua destilada y
diluir a 1L. El pH debe ser 7,2 sin posteriores ajustes. Si se presenta alguna seal de
crecimiento biolgico, descartar este o cualquiera de los otros reactivos.
Solucin de sulfato de magnesio: Disolver 22,5 g de MgSO
4
.
7H
2
O en agua destilada y
diluir a 1L.
Solucin de cloruro de calcio: Disolver 27,5 g de CaCl
2
en agua destilada y diluir a 1L.
Solucin de cloruro frrico: Disolver 0,25g de FeCl
3
.
6H
2
O en agua destilada, diluir a 1L
Soluciones cida y alcalina, 1 N, para neutralizacin de muestras custicas o cidas.
23
Acido. A un volumen apropiado de agua destilada agregar muy lentamente y mientras
se agita, 28 mL de cido sulfrico concentrado; diluir a 1L.
Alcalina. Disolver 40 g de hidrxido de sodio en agua destilada y diluir a 1L.
Solucin de sulfito de sodio: Disolver 1,575 g de Na
2
SO
3
en 1000 mL de agua
destilada. Esta solucin no es estable y se debe preparar diariamente.
Inhibidor de nitrificacin: 2-cloro-6-(triclorometil) piridina.
Solucin de glucosa-cido glutmico: Secar a 103C por 1 h glucosa y cido glutmico
grado reactivo. Disolver 150 mg de glucosa y 150 mg de cido glutmico en agua
destilada y diluir a 1L. Preparar inmediatamente antes de su uso.
Solucin de cloruro de amonio: Disolver 1,15 g de NH
4
Cl en 500 mL de agua destilada,
ajustar el pH a 7,2 con solucin de NaOH, y diluir a 1 L. La solucin contiene 0,3 mg
de N/mL.
4.4. Procedimiento

Preparacin del agua de dilucin. Colocar en un recipiente un volumen conocido de agua
de abastecimiento, y airearla, hasta que se sature de Oxgeno (Aproximadamente dos
horas), con bomba aireadora o con un compresor. Adicionar 1mL/L. de la semilla, la cual
ha sido preparada en el laboratorio con aguas residuales domsticas, y agregar
igualmente 1mL/L de los nutrientes, los cuales son macronutrientes (Buffer de fosfato) y 1
mL/L de micronutrientes (sulfato de magnesio, cloruro de calcio, cloruro frrico y cloruro
de amonio).

La semilla llamada tambin inoculo, diariamente se alimenta con un desecho y se hacen
observaciones al microscopio para ver el crecimiento de las bacterias, se oxigenan
continuamente con una bomba y si hay necesidad se aclimatan con el desecho en
estudio; esto para que las bacterias aprendan a biodegradarlo y obtener mejores
resultados.

Incubacin de la muestra. El porcentaje de muestra a ser incubada se calcula
correlacionando la demanda qumica de oxgeno con la demanda bioqumica de oxgeno
por lo tanto es necesario determinar primero la demanda qumica de oxgeno y as
calcular la cantidad de muestra de acuerdo con la siguiente ecuacin.

24
( )
100
%
%
deg

=
radable bio
e i
DQO
OD OD
DM , donde;

%DM = Porcentaje de dilucin de la muestra
OD
i
= Oxgeno disuelto de saturacin a la temperatura ambiente aproximadamente 7.0
mg/l
OD
e
= Oxigeno disuelto esperado a los cinco das aproximadamente 2.0 mg/l

Tomar un volumen de muestra de acuerdo al procedimiento anterior, completar a 500 ml
en baln volumtrico con el agua de dilucin, llenar el winkler y tapar verificando que no
queden burbujas en su interior, preparar por lo menos dos diluciones.

Preparar igualmente un blanco slo con el agua de dilucin, tambin por duplicado.

Determinar el oxgeno disuelto inicial del blanco y de la muestra. Guardar los duplicados
de la muestra y el blanco en una incubadora durante 5 das a 20 C y en la oscuridad.

Determinar el oxgeno disuelto final de las muestras y blanco al quinto da.

Determinacin de oxgeno disuelto. Lectura directa con el oxmetro. Calibrar el
electrodo segn las instrucciones del manual de uso y operacin de equipos. Colocar
el embudo para que no se pierda la muestra. Leer el oxigeno disuelto directamente del
equipo.

4.5. Clculo.
( ) ( )
P
f B B D D
DBO
2 1 2 1
5

= , donde;

D
1
= Oxgeno disuelto inicial de la muestra.
D
2
= Oxgeno disuelto de la muestra despus de cinco das de incubacin a 20C
B
1
= Oxgeno disuelto inicial del agua de dilucin
B
2
= Oxgeno disuelto del agua de dilucin despus de la incubacin a 20C
P = Fraccin decimal volumtrica de muestras usada. (Vmtra / 100)
F = Proporcin de semilla en la muestra diluida a la semilla en el control de semilla

25
5. HIERRO
7

El hierro se puede encontrar en las aguas, bien sea en solucin, en estado coloidal,
posiblemente peptizado con materia orgnica, en la forma de complejos, en forma de
partculas suspendidas; tambin se puede encontrar en los estados ferroso o frrico, o
en ambos a la vez.

El hierro disuelto forma un complejo de color naranja a rojo al reaccionar con la
fenantrolina. La solucin coloreada sigue la ley de beer y su absorbancia no cambia en
un rango de pH entre 3 9.


El cobre (Cu) y cobalto (Co) por encima de 5 mg/L; el cinc (Zn) cuando la
concentracin es diez veces mayor y el cromo (Cr) producen interferencias; el nquel
(Ni), cuando hay mas de 2 mg/L; el bismuto (Bi), la plata (Ag), el cadmio (Cd), el
mercurio (Hg) y el molibdato que precipitan con la fenantrolina y el cianuro deben estar
ausentes. Entre los iones se encuentran los fosfatos (mas los polifosfatos que los
ortofosfatos), los nitritos.

La ebullicin inicial con cido convierte los polifosfatos a ortofosfatos y elimina nitritos
y cianuro. La adicin de un exceso de hidroxilamina elimina los errores que pudieron
derivarse de concentraciones excesivas de sustancias intensamente oxidables.


Espectrofotmetro, para realizar lecturas a 510 nm, con porta celdas

Solucin buffer de acetato de amonio: Disolver 250 gr de acetato de amonio
(NH
4
C
2
H
3
O
2
). Agregar 700 mL de cido actico glacial. Llevar a un litro con agua
destilada. Preparar una nueva curva cada que se prepare esta solucin.

Solucin de fenantrolina: Disolver 0.1 gr de 1-10 fenantrolina monohidratado
(C
12
H
8
N
2
.H
2
O) en 100 mL de agua destilada con agitacin y calentamiento a 80 C,
pero sin llegar a ebullicin. Descarte la solucin si se oscurece. No es necesario el

7
Gernjak, Wolfgang, et al, 2006
26
calentamiento si se aaden dos gotas de HCl concentrado al agua. (1.0 mL de este
reactivo es suficiente para 100 g de Fe).

Solucin madre de hierro: Se agregan lentamente 20 mL de H
2
SO
4
concentrado a 50
mL de agua destilada y se disuelven 0,7022 gr de Fe(NH
4
)
2
(SO
4
)
2
. 6 H
2
O. Se
agrega, a gotas, KMnO
4
0,1 N hasta que persista un leve color rosa. Se diluye hasta
1000 mL con agua destilada exenta de hierro y se mezcla. Esta solucin madre
contiene 0,1 mg de Fe/mL.

5.3. Procedimiento

4 ml de la muestra filtrada son mezclados con 1 ml de solucin de fenantrolina y 1 ml
solucin buffer. Una pizca de acido ascrbico se adiciona al ensayo para reducir el
perxido de hidrgeno y cualquier oxidante en la solucin. Despus de 10 minutos se
lee la absorbancia a 510 nm, en contraste con el blanco.

5.4. Calculo

Se lee directamente en la grafica la absorbancia leda de la muestra y con la ecuacin
del ajuste de la curva se halla la concentracin en mg/L de Fe, si se hace dilucin de la
muestra se multiplica la concentracin leda por el factor de dilucin.

6. DETERMINACION DE PERXIDO DE HIDRGENO
La determinacin yodo-mtrica de perxido de hidrgeno en muestra de agua
oxigenada es posible porque el perxido de hidrgeno reacciona con los iones yoduro
en medio cido, segn la ecuacin:
O H I H I O H
2 2 2 2
2 2 2 + + +
+

El principio es que un exceso de yodo se agrega a la muestra en solucin acida.
Luego, el agente de oxidacin reacciona cuantitativamente con el yodo para formar
estequiomtricamente triyodo aninico. El triyoduro es determinado por adicin de
tiosulfato, el cual reacciona cuantitativamente.

+ +
2
6 4
2
3 2 3
3 2 O S I O S I
27
El almidn forma un complejo azul oscuro con el triyoduro. Consecuentemente, en
presencia de almidn como indicador de la desaparicin del in por observacin
visual, se observa un cambio de color, de azul oscuro a transparente.
Comprobar las condiciones de los reactivos y de los equipos, evalundolos
peridicamente. En experimentos de degradacin con bajo consumo de Perxido de
Hidrgeno, la primera muestra puede tener un valor cercano al valor terico calculado.
Si las concentraciones de Perxido de Hidrgeno estn entre 50 100 mg/L son
cuantificadas, interferencias como hierro disuelto y especialmente oxgeno disuelto son
considerables y el mtodo no se recomienda en este rango.

Solucin de KI 0.2 M. Disolver 33.2 g de KI y llevar a 1l con agua destilada, agitar.

Bureta digital

6.3. Procedimiento
Se toman entre 1 50 mL de la muestra y se agregan 20 mL de H
2
SO
4
1M y 25 mL de
KI 2M, despus de la adicin de la solucin de yodo en presencia de un oxidante la
solucin se vuelve amarilla oscura. La solucin es dejada por 30 min en una botella
cerrada protegida de la luz. Luego, se agregan 5 10 gotas de almidn como
indicador. La solucin se torna oscura. Consecuentemente la solucin es valorada con
Na
2
S
2
O
3
0.05 M.
6.4. Calculo

La concentracin de Perxido de Hidrgeno puede ser calculada con la siguiente
ecuacin:
l mg
V
V
C
muestra
O S Na
O H
/ 1700
3 2 2
2 2
=

7. CARBONO ORGNICO TOTAL (COT)

El carbono orgnico en las aguas (incluyendo las aguas residuales) est conformado
por una variedad de compuestos orgnicos en diferentes estados de oxidacin.
28
Algunos de estos compuestos orgnicos se pueden oxidar posteriormente mediante
procesos qumicos y biolgicos y sus fracciones se pueden caracterizar mediante la
demanda qumica de oxgeno (DQO) y la demanda bioqumica de oxgeno (DBO).
Cuando en los ensayos la presencia de carbono orgnico no responde a los anlisis
de DQO o DBO no se pueden realizar los anlisis de COT.

Los ensayos de COT son ms tiles, convenientes y dan una expresin ms directa
del contenido orgnico total en una muestra que los ensayos de DQO o DBO; sin
embargo no suministran el mismo tipo de informacin. A diferencia de la DBO o la
DQO, el COT es independiente del estado de oxidacin de la materia orgnica y no
mide otros elementos enlazados orgnicamente, tales como el nitrgeno y el
hidrgeno y otros elementos inorgnicos que pueden contribuir a la demanda de
oxgeno que se mide en la DBO o la DQO. Los ensayos de COT no constituyen un
reemplazo a los ensayos de la DBO y la DQO.

Con el fin de determinar el carbono enlazado orgnicamente, las molculas orgnicas
se deben deshacer a unidades de carbono sencillas y se deben convertir en una forma
molecular simple que pueda ser determinada cuantitativamente. Los mtodos para
analizar el COT utilizan calor, oxgeno, radiacin ultravioleta, oxidantes qumicos o
combinaciones de estos oxidantes para convertir el carbono orgnico en bixido de
carbono (CO
2
). El CO
2
se puede medir directamente por un analizador infrarrojo no
disperso, se puede reducir a metano midindolo posteriormente con un detector de
ionizacin con llama, o simplemente el CO
2
se puede titular qumicamente.

Fracciones del Carbono Total. Los mtodos y los equipos utilizados en la medicin de
COT analizan las fracciones de carbono total (CT) y miden el COT por dos o ms
formas. Las fracciones del carbono total se definen de la siguiente manera: carbono
inorgnico (CI) que son los carbonatos, bicarbonatos y CO
2
disuelto; carbono
orgnico total (COT) que son todos los tomos de carbono unidos por enlaces
covalentes en molculas orgnicas; carbono orgnico disuelto (COD) es la fraccin
de COT que pasa por un filtro con porosidad de 0.45 micrmetros de dimetro;
carbono orgnico particulado (COP) tambin conocido como carbono orgnico no
disuelto, es la fraccin del COT retenido en el filtro con porosidad de 0.45 micrmetros
de dimetro; carbono orgnico voltil (COV) tambin conocido como carbono
orgnico purgable, es la fraccin de COT que se remueve de una solucin acuosa
mediante desalojo de gas bajo ciertas condiciones; y carbono orgnico no purgable
(CONP) es la fraccin del COT que no se remueve por desalojo de gas.
29

En la mayora de las aguas, la fraccin del CI es mucho mayor que la fraccin de COT.
Eliminar o compensar las interferencias de CI, requiere de mltiples determinaciones
para medir el COT verdadero. Las interferencias del CI se pueden eliminar acidificando
las muestras a un pH de 2 o menos con el fin de convertir las especies de CI en CO
2
.
Seguidamente, se purga la muestra con un gas purificado para remover el CO
2
por
volatilizacin. La purga de la muestra tambin remueve el COP y por consiguiente la
medicin de carbono orgnico realizada despus de eliminar las interferencias del CI,
es bsicamente una medicin del CONP. En otras palabras se mide el COV para
determinar el COT. En muchas aguas superficiales y subterrneas la contribucin del
COV al COT es despreciable. Consecuentemente, en la prctica, la determinacin del
CONP se sustituye por la del COT.

Como alternativa, las interferencias del CI se pueden compensar realizando
mediciones separadas del carbono total (CT) y el carbono inorgnico. La diferencia
entre el CT y el CI da COT.

La fraccin purgable del COT est dada por algunas condiciones especficas y el
equipo utilizado. Por ejemplo, la temperatura y salinidad de la muestra as como la
tasa de flujo del gas, el tipo de difusor de gas, las dimensiones del vaso de purga, el
volumen de purga y el tiempo de purgado afectan el fraccionamiento del COT en
porciones purgables y no purgables. Cuando se analizan separadamente el COV y el
CONP en una misma muestra, se utilizan condiciones idnticas de purgado durante la
medicin de COV as como cuando se realiza la purga para preparar la porcin de
CONP para el anlisis. Cuando se hacen comparaciones de resultados de COV o
CONP entre diferentes laboratorios o diferentes equipos, se deben tener en cuenta las
condiciones de purgado.

El mtodo de combustin infrarroja ha sido utilizado para una gran variedad de
muestras; sin embargo, su exactitud depende de la reduccin del tamao de las
partculas ya que emplea jeringas de orificio pequeo.

7.2. Principio

Anlisis del Carbono Total. La muestra es introducida en el tubo de combustin del
Carbono Total (TC), la cual es llenada con el catalizador para la oxidacin y calentada
30
a 680C. La muestra es quemada en el tubo de combustin y como resultado el TC en
la muestra es convertido a bixido de Carbono (CO
2
). El portador del gas, cuyos flujos
son de 150 mL/min en el tubo de combustin, lleva los productos de combustin de la
muestra, del tubo de combustin a un electrodo deshumidificador, donde el gas es
refrescado y deshidratado. El gas entonces lleva los productos de combustin de la
muestra a travs del halgeno para remover el cloro y otros halgenos. Finalmente, el
portador del gas entrega los productos de combustin de la muestra a un analizador
de gas infrarrojo no disperso (NDIR), donde el CO
2
es detectado. Las salidas del
NDIR en la deteccin anloga forman un pico; el rea del pico es medido por el TOC-
Control V software.

El rea del pico es proporcional a la concentracin de TC en la muestra. La ecuacin
matemtica del a curva de calibracin expresa la relacin entre el rea del pico y la
concentracin de TC y se puede generar analizando varias concentraciones de
soluciones estndar de TC. La concentracin de TC en una muestra puede ser
determinada comparando el rea del pico obtenida en el anlisis con la ecuacin de la
curva de calibracin.

Anlisis del Carbono Inorgnico (IC). El TOC-V usa dos mtodos para medir el IC que
son validos: anlisis dentro de la jeringa de inyeccin y anlisis usando el reactor
opcional de IC.

La medida de IC en el anlisis de TOC consiste en el carbono presente en forma de
carbonatos y de dixido de carbono en el agua. Por acidificacin de la muestra con
una pequea cantidad de cido clorhdrico se obtiene un pH por debajo de 3, todos los
carbonatos son convertidos a dixido de carbono (CO
2
) por las siguientes reacciones:

O H NaCl CO HCl NaHCO
O H NaCl CO HCl CO Na
2 2 3
2 2 3 2
2 2
+ + +
+ + +

El dixido de carbono y dixido de carbono disuelto en la muestra son volatilizados por
burbujeo de aire o nitrgeno que no contiene dixido de carbono por la muestra y
luego es medido por el analizador de gas infrarrojo no disperso (NDIR).

Anlisis de Carbono Orgnico Total (COT). El COT es medido por la diferencia entre
los valores del anlisis del TC y el IC. Los valores de COT que se determinan usando
31
la diferencia entre el TC y el IC, incluyen errores asociados con errores individuales en
estas medidas, y pueden por lo tanto resultar en un error mayor en el valor del COT.

7.3. Toma y conservacin de la muestra

Tomar las muestras en un bote de cristal de color topacio, llenarlo completamente (sin
cmara de aire) y taparlo hermticamente con tapn con recubrimiento de tefln.

Conservar las muestras en la oscuridad y en fro. En el caso de que slo se desee
medir el TOC, aadir a la muestra, para su conservacin, SO
4
H
2
hasta pH =2.


Total Organic Carbon Analyzer (TOC-V
CHP/CPN
) SHIMADZU CORPORATION

Agua exenta de carbono.

Acido fosfrico, H
3
PO
4
, al 25%.

Solucin patrn de carbono total de 1000 mg C/l. Disolver, 2.125 g de Ftalato de
hidrgeno de potasio (C
8
H5KO
8
) en agua exenta de carbono, aadir H
2
SO
4
hasta pH
=2 y enrasar a 1000 ml. A partir de esta solucin, y mediante las diluciones
apropiadas, preparar los diferentes estandares de TC.

Solucin patrn de carbono inorgnico de 1000 mg C/l. Disolver, en agua exenta de
carbono, 4.4122 g de carbonato de sodio anhidro (CO
3
Na
2
), previamente calentado a
180C durante 30 minutos y enfriado en desecador, aadir 3.497 g de bicarbonato de
sodio anhidro (CO
3
HNa) y enrasar a 1000 ml. A partir de esta solucin, y mediante las
diluciones apropiadas para IC.

7.5. Procedimiento

Encendido

1. Abrir el gas, moviendo la manilla verticalmente hacia arriba
2. Encender el equipo del COT (botn inferior derecho)
3. Encender el computador y llamar el software del escritorio (TOC - control V)
32
4. Encender el horno (Instrument - Properties - seleccionar temperatura 680 - OK)
5. Entrar al men File y con la opcin Open (o desde los conos de la Barra de
Herramientas seleccionar la opcin Open - hoja amarilla), abrir una Sample Table
Editor
6. Conectar el computador al equipo COT, mediante la activacion del icono (rayo), con
Use Settings se verifica el encendido del horno y con Use Settings empieza la
coneccion entre los dos equipos y se activa el icono Semaforo (Start)

7. Esperar 20 minutos para que el equipo se estabilice

Lavado

Programar dos corridas con agua para que el equipo quede lavado una vez termine las
lecturas

Apagado

33
1. Apagar el horno por Instrument Properties- TOC - TC Furnace Off.
2. En el icono del reloj se le da la orden de Standbye
3. Desde el icono rayo por Edit Settings on PC entra a la misma ventana de
Instrument / Properties. Desconectar el computador del equipo COT, mediante la
desactivacin del icono (rayo), con Edit Setting se coloca off al horno y se desconecta
el COT del computador.

4. Esperar 30 minutos a que se apague el equipo automticamente
5. Cerrar la llave del gas.

Lectura de muestras

1. Abrir una sample run
2. Crear Autogenerete, en el men insert
3. En el autogenerete insertar las curvas de calibracin a utilizar

4. Activar el start con el icono del semforo.
34

8. VALIDACIN

Ver ANEXO 1. Protocolos de Validacin.

35
BIBLIOGRAFA

ANGELINI, Nora. Consultora internacional de la FAO. Taller sobre aseguramiento de
la calidad y validacin de metodologa para anlisis qumicos. (Citada: Abril 30 de
2007)

Doctor Caldern Laboratorios. Demanda Bioqumica de Oxgeno, metodo tradicional.
Citado: (Marzo 30 2007).
<http://www.drcalderonlabs.com/Metodos/Analisis_De_Aguas/Determinacion_de_DBO
5.htm>

Gernjak, Wolfgang, et al. Solar Photo Fenton treatment of eu priority substances:
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