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B I O P R O S P E C O /A R T I G O S
APRENDENDO COM AS
INTERAES DA NATUREZA:
MICRORGANISMOS SIMBIONTES
COMO FONTES DE PRODUTOS
NATURAIS BIOATIVOS
Raphael Conti
Denise O. Guimares
Mnica T. Pupo
E
m geral, os microrganismos, especialmente fun-
gos e bactrias, so lembrados como causadores de
doenas. Esta associao natural, e, infelizmente,
mesmo em uma poca de tantos avanos cientcos e
tecnolgicos, algumas infeces microbianas podem
comprometer a vida de pacientes, principalmente aqueles que apre-
sentam o sistema imunolgico debilitado. Diversos microrganismos
tambm causam doenas em alimentos, plantas e animais, levando a
prejuzos signicativos no agronegcio.
Esses processos patolgicos e de deteriorao frequentemente
esto relacionados a fatores de virulncia microbianos, que podem
incluir substncias qumicas conhecidas como micotoxinas. Porm,
microrganismos tambm so profcuos produtores de substncias
qumicas com grande aplicao na indstria farmacutica, pois so
usadas como frmacos ou como estruturas-modelo para o planeja-
mento e desenvolvimento de frmacos. Diversos antibiticos, anti-
cancergenos, imunossupressores e agentes redutores do colesterol
sanguneo, entre outros, tm suas origens em produtos naturais mi-
crobianos. Os microrganismos apresentam, portanto, uma surpre-
endente capacidade de produzir substncias qumicas com elevada
potncia biolgica (1).
Todas essas substncias qumicas, com efeitos txicos, terapu-
ticos, ou mesmo sem efeito biolgico conhecido, so denomina-
das produtos naturais. Mas, qual a razo da aprecivel capacidade
biossinttica dos microrganismos? Diferentemente dos metab-
litos primrios, os produtos naturais so produzidos por razes
siolgicas especcas, sociais ou predatrias, estando, portanto,
relacionados com a ecologia dos organismos produtores (2). Mi-
crorganismos esto em todos os lugares: solo, ar, gua, pedras, na
superfcie ou no interior de outros seres vivos (plantas, animais,
humanos), ambientes com condies extremas de temperatura,
pH, oxigenao, entre outros. Esses microscpicos seres vivos no
apresentam defesas fsicas e no se locomovem, portanto precisa-
ram desenvolver estratgias adaptativas que permitissem sua so-
brevivncia no ambiente.
Em um ecossistema os organismos esto constantemente inte-
ragindo entre si; tais relaes podem ser intraespeccas ou interes-
peccas. Em funo dos tipos de dependncia que os organismos
mantm entre si, e se h prejuzo ou benefcio para os organismos
envolvidos, essas relaes ainda so subdivididas em harmnicas e
desarmnicas. Nas relaes harmnicas no existe prejuzo para ne-
nhuma das espcies envolvidas e, pelo menos uma delas, benecia-
da; j nas desarmnicas, ocorre prejuzo de uma das espcies e bene-
fcio da outra. A simbiose uma relao interespecca, harmnica
e estvel, em geral de longa durao, frequentemente encontrada
nas comunidades terrestres e aquticas, com papel fundamental no
surgimento das principais formas de vida na Terra e na gerao de
diversidade biolgica (3).
Os microrganismos surgiram e se diversicaram previamente
aos macrorganismos multicelulares. Estes organismos maiores e
mais complexos forneceram novos potenciais habitats ricos em nu-
trientes e que ainda propiciam proteo para os microrganismos.
Assim, muitos microrganismos se tornaram dependentes de seus
hospedeiros para a sobrevivncia. Por outro lado, os compostos bio-
ativos produzidos pelos microrganismos podem ser usados como
agentes de defesa pelos hospedeiros. Como resultado, plantas, ani-
mais e humanos tm se envolvido em complexas interaes com
microrganismos durante sua evoluo (3).
muito provvel que os produtos naturais sejam resultados das
interaes entre organismos entre si e destes com o ambiente, e que
desempenhem funes precisas e denidas nessas associaes sim-
biticas, representando uma das vantagens adaptativas e evolutivas
para os organismos produtores. Como consequncia dessa funo
ecolgica, os produtos naturais microbianos constituem fontes pro-
missoras para a bioprospeco de novas molculas com potencial
aplicao na medicina (frmacos), agricultura (agroqumicos) e nos
estudos de processos biolgicos (biologia qumica). De fato, a inves-
tigao de microrganismos que vivem em associaes simbiticas
com outros organismos (ex.: plantas, insetos, organismos marinhos,
nematoides), e mesmo em associao com outros microrganismos,
vem sendo cada vez mais explorada na qumica de produtos natu-
rais como uma alternativa para a busca de molculas com atividade
biolgica. Alguns exemplos de interaes simbiontes so destacados
a seguir.

MICRORGANISMOS ENDOFTICOS De acordo com a sanidade do
hospedeiro vegetal, o material coletado para anlise e a tcnica
de isolamento empregada, os microrganismos em relao simbi-
tica com as plantas so classicados em endofticos, epifticos,
rizosfricos, entre outros (4). Os endofticos, em geral fungos
e bactrias, vivem intra e/ou extracelularmente pelo menos em
um perodo de seu ciclo de vida, sem causar doenas aparentes
ao hospedeiro (5).
A interao entre planta e endofticos dependente de um
equilbrio antagnico, pois microrganismos considerados como
endofticos podem ser topatgenos em seu estado latente (4).
Verdadeiros endofticos esto diretamente associados com a sa-
nidade de seu hospedeiro, proporcionando-lhe benefcios atravs
da produo, induo ou inibio de metablitos primrios e/ou
secundrios, com funes em controle biolgico (to-hormnios,
herbicidas, antimicrobianos), regulao de estresse abitico, bior-
remediadores e vetores gnicos (4;5). Porm, as relaes bioqu-
micas entre endtos e suas plantas hospedeiras ainda no esto
totalmente esclarecidas.
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Acredita-se que os metablitos secundrios bioativos produzi-
dos por esses microrganismos possam estar diretamente associados
com a planta hospedeira atravs da recombinao gnica entre as
espcies durante a fase evolutiva. De fato, alguns dados da literatu-
ra tm mostrado a habilidade dos fungos endofticos de produzir
in vitro metablitos secundrios idnticos aos da planta hospe-
deira (Figu ra 2) (5). O mais marcante exemplo foi o isolamento
do antitumoral taxol (1) do fungo endoftico Taxomyces andreanae,
associado a Taxus brevifolia (6). Mais recentemente, os produtos na-
turais vegetais anticancergenos vincristina (2), camptotecina (3),
podolotoxina (4) e hipericina (5), foram tambm isolados de fun-
gos endofticos associados aos respectivos hospedeiros vegetais (5),
evidenciando uma possvel transferncia gentica de genes biossin-
tticos. Nesse contexto, ca evidente a importncia da etnobotnica
nos estudos de bioprospeco por microrganismos endofticos. No-
vos produtos naturais bioativos tm sido frequentemente descritos
na literatura, demonstrando a relevncia desses microrganismos em
programas de bioprospeco (5).

MICRORGANISMOS E ORGANISMOS MARINHOS Os mares e oceanos
juntos cobrem aproximadamente 70% da superfcie de nosso pla-
neta e servem de abrigo para 34 dos 36 los j descritos, alguns
exclusivamente de ambiente marinho, e representados por aproxi-
madamente 300 mil espcies, distribudas entre a fauna e ora (7,
8), constituindo o maior reservatrio de biodiversidade da Terra. Os
diversos fatores abiticos presentes nesses ecossistemas, como a pres-
so, salinidade, temperatura, pH, e biticos, como a competio por
espao, predao, incrustao da superfcie e reproduo, se reetem
tanto na variabilidade gentica, quanto nas rotas metablicas desses
seres vivos para que possam adaptar-se ao habitat em que vivem.
Produtos bioativos marinhos so obtidos principalmente de
invertebrados, macroalgas e microrganismos (9). Os microrga-
nimos so geralmente isolados da gua do mar, de sedimentos,
algas, peixes e principalmente de invertebrados marinhos como
esponjas, moluscos, tunicados, cnidrios e crustceos (10). Alguns
produtos naturais isolados de invertebrados marinhos mostram
grande semelhana estrutural com produtos naturais bacterianos,
sugerindo que os microrganismos esto, no mnimo, envolvidos
na sua biossntese ou so, de fato, a verdadeira fonte desses meta-
blitos (11, 12, 13). Esta hiptese simbitica tem atrado a ateno
dos pesquisadores, anal a produo em maior escala de eventuais
produtos por fermentao microbiana mais factvel e de menor
impacto ambiental que o isolamento de produtos naturais dos in-
vertebrados marinhos (11).
Em alguns casos h evidncias para essa hiptese, mas a com-
plexidade das associaes entre os organismos marinhos diculta
a denio da origem biossinttica de muitos produtos naturais.
Esponjas, por exemplo, constituem um microambiente que pode
abrigar uma ampla diversidade microbiana, incluindo fungos,
arqueobactrias, bactrias heterotrcas, algas, cianobactrias,
Figura 1. Representao do processo de isolamento de endfitos. A) Vegetal em seu habitat natural (Lychnophora ericoides); B) Razes
separadas do vegetal coletado; C) Microrganismos endofticos se desenvolvendo a partir de fragmentos vegetais em meio de cultura;
D) Microrganismos endofticos isolados em culturas puras; E) Microrganismos endofticos preservados em laboratrio
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Fotos: Raphael Conti
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criptofceas, dinoagelados e diatomceas (14;15). Estes sim-
biontes podem estar localizados intra e/ou extracelularmente na
esponja hospedeira. Especula-se que funes como aquisio de
nutrientes, regulao metablica, mecanismos de defesa e xao
de nitrognio podem ser atribudas s interaes entre esponjas e
microrganismos (12;16). Novos produtos naturais bioativos pro-
duzidos por microrganismos marinhos tm sido frequentemente
relatados na literatura (17).

QUANDO A FUNO DO PRODUTO NATURAL NA RELAO SIMBI-
TICA DESVENDADA A grande maioria dos trabalhos envolvendo
microrganismos simbiontes, como aqueles associados a plantas e
organismos marinhos, tem sido direcionada seguindo as estratgias
experimentais tradicionais da qumica de produtos naturais, isto ,
envolvendo o isolamento da linhagem microbiana de seu habitat,
o cultivo em laboratrio e a triagem dos extratos obtidos em dife-
rentes ensaios biolgicos para o isolamento e identicao dos pro-
dutos naturais bioativos. Esta abordagem permite a identicao
de produtos naturais ativos, objeto da bioprospeco, porm no
fornece respostas para a difcil questo que envolve as razes pelas
quais os produtos naturais so biossintetizados. Trabalhos mais
recentes tm sido direcionados para se determinar a funo real
desses produtos naturais para o microrganismo produtor. Exemplos
elegantes da determinao da funo ecolgica de produtos natu-
rais microbianos incluem estudos realizados com microrganismos
associados a insetos. Outros trabalhos envolvendo interaes entre
nematoides e microrganismos e entre microrganismos, tambm
tm determinado a funo dos produtos naturais envolvidos na
relao simbitica.

MICRORGANISMOS E INSETOS Insetos, um dos los de animais mais
abundantes e complexos, abrigam um surpreendente nmero de
microrganismos simbiontes. As formigas se destacam, representando
um exemplo fascinante de interao simbitica com microrganis-
mos. Formigas Apterostigma dentigerum coevoluram em um mutu-
alismo de cerca de 50 milhes de anos com o fungo basidiomiceto
Leucoagaricus sp., que cultivado em jardins como fonte de alimento
para as formigas. Porm, fungos lamentosos parasitas do gnero
Escovopsis podem comprometer a viabilidade dos ninhos de formigas,
devido ao efeito txico frente Leucoagaricus sp. Como forma de
proteo, as formigas desenvolveram estruturas especializadas em
seu corpo para carregar actinobactrias, predominantemente dos
gneros Pseudonocardia e Streptomyces, responsveis pela produo
de antimicrobianos que controlam a infeco por Escovopsis sp.,
protegendo a fonte de alimento. Das culturas laboratoriais de Pseu-
donocardia spp. foi obtido o depsipeptdeo cclico dentigerumicina
(6), responsvel pela inibio do fungo parasita Escovopsis sp. e de
outros fungos patognicos, mas sem toxicidade ao fungo usado para
alimentao das formigas (18). Formigas cortadeiras Acromyrmex
echinatior tambm estabelecem relao simbitica com o fungo
Leucoagaricus gongylophorus e com actinobactrias dos gneros Pseu-
donocardia e Streptomyces. Antimicinas A1-A4 (7-10), valinomicina
(11) e actinomicinas D e X2 (12-13) (Figura 3) foram identicadas
de espcies Streptomyces em associao com as formigas cortadeiras e
possuem atividade antibitica relacionada com a proteo das for-
migas contra patgenos (19). Outra espcie de formiga cortadeira,
Acromyrmex octospinosus, tambm possui relao simbitica com
fungos do gnero Leucoagaricus, e com actinobactrias do gnero
Streptomyces. Diversas espcies Streptomyces spp. produziram o anti-
bitico macroldeo, candicinina D (14) (Figura 3), que, juntamente
com outros antibiticos produzidos por essas actinobactrias, deve
auxiliar no combate aos fungos patognicos que possam causar morte
de Leucoagaricus sp. (20).
Vespas tambm estabelecem relaes simbinticas com micror-
ganismos. Streptomyces sp., isolado da vespa Sceliphron caementa-
rium, produz o polieno macrocclico escelifolactama (15) (Figura
3), substncia com atividade antifngica frente a Candida albicans
resistente anfotericina B (21). Outros metablitos, pertencentes
a diferentes classes qumicas, tambm foram identicados a partir
da simbiose entre Streptomyces sp. e as espcies de vespas Sceliphron
caementarium e Chalybion californicum (22). Vespas Philanthus spp.
cultivam bactrias simbiontes especcas Streptomyces spp. que so
incorporadas no casulo para proteo contra patgenos. A identi-
cao de substncias antibiticas produzidas por essas actinobac-
trias, como estreptoclorina (16), piericidina A1 (17), piericidina
B1 (18), glucopiericidina A (19) piericidina A5 (20), piericidina
C1 (21), 9-demetil-piericidina A1 (22), piericidina B5 (23) e pie-
ricidina IT-143-B (24) (Figura 4), indica que essa relao favorece
a garantia de sobrevivncia das vespas atravs da proteo das larvas
no casulo contra agentes patognicos (23).
Figura 2. Produtos naturais vegetais anticancergenos tambm isolados de fungos endofticos
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Outro estudo demonstrou que uma espcie de Streptomyces sp.,
simbionte do besouro Dendroctonus frontalis, responsvel pela pro-
duo da micangimicina (25) (Figura 3), que possui ao antago-
nista de crescimento frente ao fungo Ophiostoma minus, o qual um
competidor natural do fungo Entomocorticium sp., este ltimo por
sua vez possui importante funo protetora durante o desenvolvi-
mento de larvas do besouro Dendroctonus frontalis (24, 25).
MICRORGANISMOS E NEMATOIDES Outros metablitos secundrios
com atividade biolgica e possvel aplicao industrial tambm po-
dem ser exemplicados a partir de microrganismos encontrados em
associao com nematoides. Bactrias pertencentes ao gnero Pho-
torhabdus e Xenorhabdus vivem em associao complexa de simbiose
com nematoides hospedeiros, parasitam larvas de insetos no solo e
ainda enfrentam competidores microbianos. Atravs da relao de
simbiose entre bactrias Photorhabdus e Xenohabdus com nematoides
Heterorhabditis e Steinernema, respectivamente, possvel a garantia
de infeco de uma ampla variedade de larvas de insetos no ambien-
te, e essa caracterstica utilizada no auxlio como controle biolgico
natural na agricultura. Quando um nematoide invade um inseto,
ele regurgita a bactria, esta por sua vez produz toxinas, proteases e
esterases que auxiliam no combate e morte do inseto. Alm disso, as
bactrias produzem molculas que auxiliaro no desenvolvimento
de jovens nematoides at a fase adulta, contra a resposta imune inata
dos insetos e como antibiticos contra competidores microbianos
naturais. Essas funes biolgicas mltiplas podem ser atribudas
aos compostos produzidos, estilbenos (26) e isocianetos vinlicos,
como a rabduscina (27) (Figura 3) (26).

MICRORGANISMOS E MICRORGANISMOS Outro tipo de associao que
tem levado caracterizao funcional de produtos naturais estudo
de simbiose entre dois microrganismos. A substncia rizoxina (28)
(Figura 3), com propriedades anticncer, produzida pela bactria
Burkholderia rhizoxinica, encontrada em associao simbitica com
o fungo Rhizopus microsporus. Nessa relao ambos beneciam da
ao topatognica da rizoxina contra o arroz que, durante estgio de
morte, serve como alimento para a bactria e para o fungo. Alm disso,
a bactria ganha proteo dentro das clulas fngicas com condies
favorveis de metabolismo citoslico e o fungo necessita da bactria
para garantir sua esporulao, enquanto garante sua resistncia toxi-
cidade da rizoxina via mutaes genticas em genes da tubulina, alvo
de mecanismo geral para ao dessa toxina (26).

Figura 3. Produtos naturais microbianos envolvidos na simbiose de actinobactrias com formigas (6-14), vespas (15-24), e besouro (25),
e na simbiose de bactrias com nematoides (26-27) e fungo (28)
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CONCLUSES clara a relevncia da incluso de microrganismos
em programas de bioprospeco. Ateno especial deve ser dirigida
aos microrganismos simbiontes, que produzem diversos produtos
naturais ainda desconhecidos e envolvidos em funes ecolgicas,
sendo, portanto, candidatos promissores para a descoberta de mo-
lculas com aplicaes teraputicas e/ou agroqumicas. provvel
que muitos dos microrganismos em comunidades naturais sejam
obrigatoriamente dependentes de outras espcies de organismos
(3), o que explicaria a razo pela qual o cultivo em laboratrio de
cerca de 99% dos microrganismos seja difcil ou impossvel. Neste
sentido, a metagenmica e as tcnicas modernas de biologia mo-
lecular despontam como alternativas para acessar o genoma dessa
microbiota e, consequentemente, o amplo arsenal qumico que
ainda permanece escondido na biodiversidade microbiana. Porm,
o sucesso de projetos na rea depende de trabalho integrado entre
qumicos, bilogos e farmacuticos, com conhecimentos nas reas
de qumica orgnica, qumica analtica, qumica medicinal, farma-
cologia, microbiologia, biologia molecular, ecologia, entomologia,
botnica, meio ambiente, entre outros. No Brasil, o nmero de
grupos de pesquisa que se dedica ao estudo de produtos naturais
microbianos vem aumentando signicativamente. Com trabalho
integrado entre as diversas expertises pode-se vislumbrar um futuro
promissor que possibilitar a descrio das funes de produtos
naturais microbianos na mediao de interaes simbinticas e,
concomitantemente, a descoberta de novas molculas teis para o
planejamento de frmacos e agroqumicos.
Raphael Conti doutorando em cincias pelo Programa de Ps-Graduao em Cincias Farma-
cuticas da Faculdade de Cincias Farmacuticas de Ribeiro Preto, Universidade de So Paulo
(FCFRP-USP), Ribeiro Preto, SP. Email: raphael.conti@gmail.com.
Denise O. Guimares doutora em cincias pelo Programa de Ps-Graduao em Cincias Far-
macuticas FCFRP-USP e professora adjunta do curso de farmcia, Universidade Federal do Rio
de Janeiro, Maca, RJ . Email: denise@macae.ufrj.br.
Mnica T. Pupo doutora em cincias pelo Programa de Ps-Graduao em Qumica do DQ-UFS-
Car, professora associada da FCFRP-USP e bolsista do CNPq, Ribeiro Preto, SP . Email: mtpu-
po@fcfrp.usp.br.


NOTAS E REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
1. Lopes, A. A.; Guimares, D. O.; Pupo, M.T. Cincia Hoje Vol.286, no.30.
2011.
2. OBrien, J.; Wright, G.D. Curr. Op. Biotechnol. Vol.22, no.552. 2011.
3. Moran, N.A. Curr. Biol. Vol.16, R866, 2006.
4. Selosse, M.A.; Baudoin, E.; Vandenkoornhuyse, P.C.R. Biol. Vol.327,
no.639. 2004.
5. Borges, W. S.; Borges, K.B.; Bonato, P. S.; Said, S.; Pupo, M. T. Curr. Org.
Chem. Vol.13, no.1137. 2009.
6. Stierle, A.; Strobel, G.; Stierle, D. Science, Vol.260, no.214. 1993.
7. Faulkner, D.J. Nat. Prod. Rep. Vol.18, no.1. 2001.
8. Arrieta, J.M.; Arnaud-Haond, S.; Duarte, C.M. Proc. Natl. Acad. Sci. U.
S. A. Vol.107, no.18318. 2010.
9. Bhatnagar, I.; Kim, S.K. Mar. Drugs Vol.8, no.2673. 2010.
10. Kelecom, A. An. Acad. Bras. Cienc. Vol.74, no.151. 2002.
11. Piel, J. Curr. Med. Chem. Vol.13, no.39. 2006.
12. Taylor, M. W.; Radax, R.; Steger, D.; Wagner, M. Microbiol. Mol. Biol. Rev.
Vol.71, no.295. 2007.
13. Thomas, T.R.A.; Kavlekar, D.P.; Lokabharathi, P.A. Mar. Drugs. Vol.8,
no.1417. 2010.
14. Lee, Y. K.; Lee, J.H.; Lee, H.K. J. Microbiol. Vol.39, no.254. 2001.
15. Li, Z. Mar. Drugs. Vol.7, no.113. 2009.
16. Webster, N. S.; Taylor, M.W. Environ. Microbiol. (doi:10.1111/j.1462-2920.
2011.02460.x.), 2011.
17. Bhatnagar, I.; Kim, S.-K., Mar. Drugs Vol.8, no.2673. 2010.
18. Oh, D.-C.; Poulsen, M.; Currie, C.R.; Clardy, J. Nat. Chem. Biol. Vol.5,
no.391. 2009.
19. Schoenian, I.; Spieteller, M.; Ghaste, M.; Wirth, R.; Herz, H.; Spiteller, D.
Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. Vol.108, no.1955. 2011.
20. Haeder, S.; Wirth, R.; Herz, H.; Spiteller, D. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A.
Vol.106, no.4742. 2009.
21. Oh, D.-C.; Poulsen, M.; Currie, C.R.; Clardy, J. Org. Lett. Vol.13, no.752.
2011.
22. Poulsen, M.; Oh, D.-C.; Clardy, J.; Currie, C.R. PLoS One 6, e16763. 2011.
23. Kroiss, J.; Kaltenpoth, M.; Schneider, B.; Schwinger, M.-G.; Hertweck,
C.; Maddula, R.K.; Strhm, E.; Svatos, A. Nat. Chem. Biol. Vol.6, no.261.
2010.
24. Scott, J.; Oh, D.-C.; Yuceer, M.C.; Klepzig, K.D.; Clardy, J. Science
Vol.322, no.63. 2008.
25. Oh, D.-C.; Scott, J.J.; Currie, C.R.; Clardy, J. Org. Lett. Vol.11, no.633.
2009.
26. Crawford, J. M.; Clardy, J. Chem. Commun. Vol.47, no.7559. 2011.
4_NT_SBPC_39_p21a47_01.indd 47 05/07/12 18:25