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UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

CENTRO UNIVERSITARIO DE SUR OCCIDENTE


TECNICO EN PROCESAMIENTO DE ALIMENTOS
MICROBIOLOGIA I
PRACTICA DE LABORATORIO No.2
ESTERILIZACION
Preparacin de !a"eria para e "ra#a$o en Micro#ioo%&a
Li!pie'a ( De)in*eccin
INTRODUCCION
El material del laboratorio de microbiologa requiere una preparacin especial,
deber ser estril, para que no ofrezca un riesgo de contaminacin de las muestras, ya
que de esto depender el xito o fracaso del estudio microbiolgica a realizar.
Los microorganismos como todo ser vivo, son susceptibles a todos los cambios
de condiciones ambientales y en la medida en que se an ido adaptando a estos cambios,
se an distribuido en una gran diversidad de bitats incluyendo los de condiciones
extremas sobre todo de tipo fsico y qumico.
!e an desarrollado y aplicado diversos procesos de desinfeccin y esterilizacin
para limitar su presencia o eliminarlos. "o existe un procedimiento de esterilizacin y
desinfeccin aplicable a todos los casos. La esterilizacin es un mtodo de eliminacin
total de todo tipo de organismos y que asegura la ausencia absoluta de cualquier forma
viviente, mientras que la desinfeccin es un proceso que solo elimina formas
vegetativas de los microorganismos. El mtodo de esterilizacin ser seleccionado para
cada caso teniendo en cuenta la naturaleza fsica del ob#eto y la naturaleza biolgica del
contaminante. $omo es muy difcil conocer la poblacin de microorganismos sobre un
ob#eto que debe ser tratado, es me#or presuponer que se encuentran presentes las formas
microbianas ms resistentes% las endosporas.
La esterilizacin es la muerte y&o eliminacin de todo microorganismo. La
esterilizacin se mide en grado absoluto, es decir, es estril o no lo es. Es un mtodo
por el cual se elimina toda forma de vida microbiana, incluyendo formas bacterianas
esporuladas y vegetativas, virus, ongos y parsitos.
Existen diferentes mtodos de esterilizacin de mayor utilizacin en
microbiologa, como la esterilizacin por mtodos fsicos y qumicos. 'entro de los
mtodos fsicos se encuentran% calor, rayos ultravioleta, filtracin, etc., y mtodo
qumicos, en los cuales se utilizan sustancias bactericidas o bacteriostticos, como
alcooles, fenoles, algenos, detergentes, entre otros. $ada uno de estos mtodos tiene
sus venta#as y desventa#as.
(ctualmente existen valores tabulados de tiempo de exposicin, temperatura y
concentracin de principios activos para los mtodos de esterilizacin ms usados que
nos permiten elegir el ms adecuado para cada caso. En la eleccin tambin debe
tenerse en cuenta el uso posterior que se le dar al ob#eto a esterilizar.
)ara asegurar que un proceso de esterilizacin tendr xito es necesario tomar en cuenta
lo siguiente%
a.* Esterilizacin previa% est ser necesaria cuando el material y&o equipos ayan
sido utilizados con material infeccioso o presunto infeccioso, por e#emplo
placas de )etri inoculadas, tubos conteniendo cultivos de microorganismos.
!ern esterilizados en autoclave a + atm. de presin durante +,-./ minutos.
)ara las pipetas y micropipetas, puede emplearse este mtodo o sumergirlas
inmediatamente despus de ser utilizadas en solucin desinfectante de formol al
+/0 durante una ora.
b.* Limpieza previa. !e realiza para eliminar la suciedad o residuos infecciosos
1resto de pegamento, tinta aderida, etc.*. !e puede emplear el raspado con
esptula, cepillo, espon#a metlica, pa2os, etc. !e en#uagar repetidas veces ba#o
el corro de agua corriente a presin. !e aconse#a el 3ltimo en#uague con agua
destilada. !e de#ar secar en canasta o re#illa de alambre boca aba#o a
temperatura ambiente o estufa a 4/5$ 6 7/5$.
El material de vidrio que luego de este tratamiento aun queda mancado debe ser
sumergido en una solucin sulfocrmica durante 89 oras 1slo personal
especializado debe realizar esta operacin*.
c.* )reparacin del material de vidrio% este procedimiento debe realizarse de manera
de asegurar la esterilizacin del mismo en todos sus puntos y evitar la posterior
contaminacin.
- $a#as de )etri% se envuelven en papel.
- :ubos de ensayo% se confecciona en tapn de algodn y se cubre con un
capucn de papel de aluminio.
- )ipetas% se obtura el extremo superior con un filtro de algodn y luego se
envuelve con tira de 9 a , cm. de anco de papel comenzando por la punta
de la misma. 'ebe rotularse cada una con la capacidad y graduacin
correspondiente.
OB+ETIVO
- $onocer los principios generales de las tcnicas de esterilizacin de materiales
de vidrio y medios de cultivo de uso com3n en microbiologa.
$;<!:(LE;<(
9 ca#as de petri, 1por grupo*
MATERIALES
,i)opo) -de !an%o de !adera ( ar%o).
Pape de en/o/er
Cin"a "e)"i%o
Ma)0e "ape
+a#n -para i!pie'a de cri)"aer&a ( an"i#ac"eria para !ano).
E)pon$a)
Aco1o -para de)in*ec"ar.
G2an"e)
Ma)caria
)izeta
(gua destilada
Pape !a(ordo!o
=uantes de asbesto
Marcador per!a!en"e p2n"o !edio
(gua destilada
E3UIPO 4 UTENSILIOS
(utoclave
PROCEDIMIENTO%
( )reparacin de material para esterilizar
+. Lavar perfectamente las ca#as de petri o toda la cristalera a utilizar en la
prctica, con espon#a y detergente. En#uagar con suficiente agua potable.
8. Escurrir el exceso de agua, en#uagar el material con agua destilada con una
pizeta, en la parte interna.
.. 'e#ar escurrir el material sobre una toalla. "o se debe secar el material por
ning3n otro medio.
9. >na vez seco el material, se proceder a envolver las ca#as de petri o el material
a utilizar con papel de estraza 1?raft, envolver*. $uando se traba#e con tubos y
matraces se elaborarn tapones de algodn y gasa, procurando que a#usten con
olgura, sobre los que finalmente se les colocar un capucn de papel.
@. Esterilizacin de materiales
+. Las ca#as de petri o materiales envueltos para esterilizar se colocarn en el
autoclave con las condiciones adecuadas de esterilizacin. +8+5$ por +, min.
8. !acar el material del autoclave y de#arlo enfrar, abrirlo en el momento que se va
a utilizar siempre cumpliendo normas de asepsia.
.. El proceso de esterilizacin en autoclave se realizar de acuerdo a las siguientes
instrucciones%
a.* ;evisar que el autoclave y el agua contenida en ella se encuentre limpia. 'e
lo contrario lavar el autoclave 1canasta* y cambiar el agua.
b.* ;evisar que el nivel de agua coincida con la marca en el tubo indicador. En
caso necesario a2adir agua destilada.
c.* $onectar el autoclave y poner la perilla de control en calentamiento alto.
(comodar los medios y materiales en la canasta del autoclave y colocar
dentro.
d.* $errar la puerta, apretar las mani#as de dos en dos en posicin encontrada y
esperar a que salga el vapor de agua por el orificio del purgado. 'espus
cerrar este orificio con la vlvula de seguridad.
e.* 'e#ar que el equipo se caliente asta alcanzar las condiciones de
esterilizacin, +, minutos, +8+ 5$ a ++, psi, revisando continuamente la
escala del manmetro. >na vez alcanzada esta temperatura deber ba#arse
el nivel de calentamiento moviendo la perilla de control al nivel medio o
ba#o.
f.* Aantener el equipo y material en estas condiciones por +, minutos.
g.* (pagar el autoclave y de#ar que ba#e la presin al valor /. Buitar la vlvula
de seguridad y con la ayuda de guantes de asbesto o una #erga 3meda abrir
cuidadosamente la puerta, de adelante acia atrs para evitar quemaduras por
la salida de vapor.
;E$CAE"'($<D"%
"unca de#ar el autoclave funcionando sin supervisin, siempre debe aber presente uno
o dos encargados.
CUESTIONARIO
+. E$mo se clasifican los ob#etos que se esterilizan en microbiologaF
8. Explique los mtodos de esterilizacin siguientes%
a.) )or destruccin total de microorganismosG
b.) )or muerte o inactivacinG y
c.) )or eliminacin con medios fsicos.
.. E$ules son los indicadores de comprobacin de la esterilidadF Explique cada
uno de ellos.
9. ;ealice un diagrama 1dibu#o* del autoclave, e indique las partes que la
componen.
,. E$mo funciona el autoclaveF
4. E$ules son las fases del procedimiento completo de esterilizacinF Explique
cada una de ellas.
H. E)or qu es necesario purgar el aire de la cmara del autoclaveF
7. E$ules son las normas de seguridad para traba#ar con autoclaveF
I. EBu nombre recibe el material, cultivo o medio de cultivo sometido al proceso
de esterilizacinF
+/. EBu mtodo de esterilizacin se recomienda para materiales termolbilesF
<nvestigue que es un material termolbil.