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Microbiologa General y Bucal

Prctica 1: El laboratorio de
Microbiologa
Descripcin
Un laboratorio de Microbiologa es un lugar habilitado para manejar y estudiar
microorganismos.
El trabajo debe realizarse de acuerdo con los estndares tcnicos y de seguridad propios de
un laboratorio de Microbiologa Clnica.
Es importante recordar que la finalidad es determinar los microorganismos presentes en la
muestra por lo que es preciso extremar las precauciones para evitar contaminaciones que
den lugar a resultados errneos.
Todas las muestras deben ser manejadas con precaucin por su potencial patogenicidad.
Para deshacerse del material contaminado se deben utilizar recipientes adecuados que
deben ser esterilizados posteriormente.
Nunca se puede tirar nada contaminado por el fregadero o al cubo de la basura comn sin
haber sido esterilizado previamente.
El el laboratorio deben existir unas recomendaciones generales de limpieza y en caso de
vertidos:
Procedimientos de limpieza de superficies externas mediante papel humedecido con
solucin desinfectante (alcohol 70%, desinfectante fenlico diluido, etc.). Aclarar
con agua los restos de desinfectante.
En caso de usar soluciones de hipoclorito en zonas metlicas, limpiar posteriomente
para evitar el efecto corrosivo.
En caso de derramamientos de material peligroso o formacin de aerosoles: evitar
inspiraciones de esos aerosoles, esperar 30 minutos hasta que las partculas se
hayan depositado y limpiar con mascarilla, guantes y otros tiles protectores.
En caso de vertido de materiales, cubrir la superficie con desinfectante y
posteriormente cubrir con papel humedecido con desinfectante. Dejar durante 15
minutos y limpiar. En caso necesario aclarar con agua.
En caso de derramamientos menores limpiar el material vertido mediante papel
humedecido y posteriormente aclarar, cuando sea necesario.
Los laboratorios debern disponer de los aparatos e instrumental necesario para el correcto
desarrollo de su actividad.
Debe existir un procedimiento de control de calidad en el laboratorio de Microbiologa
Clnica que implique la monitorizacin de los medios e instrumentos, con el fin de asegurar
la adecuada realizacin de los aislamientos, identificacin y caracterizacin de los
patgenos y la realizacin precisa de las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos
como referencia teraputica. El sistema de la calidad deber contemplar la existencia de
registros de formacin de personal.
es imprescindible la existencia de un procedimiento sobre medidas de proteccin personal
en el manejo de equipos y aparatos.
Los equipos del laboratorio deben funcionar de forma que se asegure la reproducibilidad de
los resultados de las pruebas diagnsticas.
El laboratorio deber estar bajo la direccin y responsabilidad de un facultativo con la
especialidad correspondiente, legalmente capacitado para realizar aqullas determinaciones
clnicas que el laboratorio tenga autorizadas.
El personal tcnico y sanitario del laboratorio deber disponer la titulacin adecuada para
las funciones que desarrolla de conformidad con la legislacin vigente.

Estructura de un laboratorio de Microbiologa Clnica

rea administrativa
rea de recepcin de muestras
rea de extraccin que deber:
Disponer de material de un solo uso para contacto con muestras biolgicas.
Disponer de un rea de extracciones y toma de muestra, una sala de espera para los
pacientes y los servicios de higiene correspondientes.
Disponer de personal legalmente autorizado para la toma de muestras.
Disponer de un manual de extraccin, toma y transporte de muestras.
El manual antedicho deber ser elaborado por el responsable
rea de trabajo: anlisis y procesado de muestras
El puesto de trabajo debe debe de estar limpio y ordenado

El material necesario debe prepararse antes de empezar a trabajar y colocarse de forma
adecuada para que se facilite su utilizacin asi se evitarn accidentes y se minimizar el
riesgo de contaminacin
Nunca se debe pipetear con la boca. Utilizar siempre elementos manuales o automticos.
Todo el material utilizado debe estar estril.

1. Elementos y materiales ms frecuentes de un laboratorio de Microbiologa
Clnica

1.1. Mesas de laboratorio y fregadero


1.2. Vitrinas y armarios



1.3. Mechero Bunsen


Todas las manipulaciones deben realizarse en un radio de 10-15cm de la llama del
mechero (zona asptica).
En caso de utilizar mechero nunca se debe coger material por encima de la llama
Antes de comenzar a trabajar se procurar disponer de todo el material necesario para el
procesamiento de la muestra
Tomar las medidas necesarias para evitar la contaminacin de las muestras o/ y cultivo por
microorganismos ambientales

1.4. Gradillas



1.5. Estufa de incubacin
Es una cmara de temperatura controlada para cultivo de microorganismos.

Se utiliza para facilitar el desarrollo de los microorganismos a su temperatura ptima de
crecimiento (generalmente 35-37).




1.6. Frigorfico o cmaras refrigeradas

Se utilizan para conservar tanto materiales (medios de cultivo, reactivos) como
microorganismos.
Generalmente estn a una temperatura fija de 4C.


1.7. Congeladores
Se utilizan para la conservacin de reactivos y microorganismos a temperaturas inferiores a
0C, llegando a -80C (los ms frecuentes son -20, -40 y -80).


1.8. Microscopio ptico




1.9. Centrfuga
Aparato que aplica sobre los tubos una fuerza centrfuga lo que permite la separacin de los
distintos componentes de la muestra mediante la precipitacin en el fondo del tubo de las
partculas en suspensin.


1.10. Cmaras de seguridad biolgica (ver practica 2)


1.11. Desionizador de agua.
La mayor parte de los trabajos que se realizan en un laboratorio de Microbiologa Clnica
necesitan la utilizacin de agua pura con el fin de evitar cualquier tipo de interferencia.
Entre otra caractersticas debe: estar exenta de materiales en suspensin o
un pH comprendido entre 5,0 y 7,5. Durante aos se ha utilizado agua destilada, en la
actualidad los destiladores se han ido abandonando para dar paso a desionizadores que
funcionan con resinas de intercambio inico. Tambin se pueden utilizar otras tcnicas
como la smosis inversa.




1.12. Contador de colonias: Es un aparato que mediante la iluminacin de la placa y una
lupa, nos permite observar con mayor nitidez las colonias y por tanto facilita su recuento.



1.13. Balanzas



1.14. Baos termostticos: son recipientes que contienen agua y un sistema de regulacin
de la temperatura. Se utilizan para atemperar medios de cultivo o incluso para incubar
cultivos de microorganismos.


1.15. Agitador/ mezclador


vortex agitador horizontal

1.16. Jarras de anaerobios:
Recipientes que se usan para conseguir una atmsfera libre de oxgeno para el cultivo de
microorganismos anaerobios.


1.17. Asas de siembra:
Se utilizan para sembrar. Pueden ser metlicas o de plstico, curvas o rectas (para la
siembra por picadura).





1.18. Ph-metros:




1.19. Material fungible

Placas de Petri: recipientes para la preparacin de medios de cultivo slidos


Placas de Petri con medio slido


Tubos con medio lquido


Tubos con medio slido



Pipetas de vidrio, de plstico y pipeteadores.



Pipetas




Pipeteador automtico Pipeteador manual

Pipetas automticas (micropipetas) y puntas de pipeta:
Se utilizan para pipetear pequeas cantidades de lquidos.
Se utilizan con puntas desechables de distinto tamao y color segn la micropipeta. Existen
cuatro tamaos: de 0,5-2m; de 2-20 m; de 20-200 m y de 200-1000 m.






Asas acodadas o Asas de Digralsky:
Se utilizan para la extensin de microorganismos sobre la superficie de un medio de cultivo
en placa Petri.


Portas y cubres
Para realizar las observaciones al microscopio.



Vasos de precipitados y matraces



Cucharas y esptulas:
Se utilizan para pesar muestras o medios de cultivo.

rea de limpieza de material y eliminacin de residuos

Zona donde se procede a la esterilizacin mediante autoclave del material utilizado. El
material desechable se elimina y con el material reciclave se procede a la eliminacin de
residuos y lavado. De esta manera el material queda dispuesto para ser utilizado.

rea de esterilizacin
Procedimiento por el que se consigue la muerte de todos los organismos vivos y formas de
resistencia en un objeto o producto tratado.

Autoclave
Es el equipo ms utilizado.
Es un procedimiento de esterilizacin mediante calor hmedo. Se realiza en al
autoclave durante 15 20 min, segn el volumen, a 115C 121C, segn la
naturaleza del material que se desee esterilizar.
Autoclavado: es un procedimiento en el que se emplea vapor a presin (a 1 atmsfera).
Como tiene gran poder de penetracin la temperatura y el tiempo utilizados son menores
que los que se emplean con el horno Pasteur (121 C, 15-20 minutos).


Se utiliza para esterilizar: Medios de cultivo, ropa, material de plstico resistente al
calor hmedo, objetos de metal que no se alteren con la humedad y sobre todo material
de vidrio.



Horno de Pasteur: emplea altas temperaturas (160-180 C) durante un tiempo
prolongado (1.5 a 3 horas). Debido a su poca capacidad de penetracin se usa para
esterilizar vidrio y metales. Acta principalmente desnaturalizando las protenas y
secundariamente oxidando los compuestos celulares.



rea de preparacin de medios
Almacn de reactivos
rea de seguridad microbiolgica
Debe ser una zona diferenciada y aislada para la manipulacin de microorganismos
susceptibles de formar aerosoles potencialmente infecciosos.

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