Citologia Microbiana

Fernanda Abreu
fernandaaabreu@micro.ufrj.br
Farmcia Noturno 2013
1. Descoberta dos micro-organismos:
- Robert Hooke: microscpio e observao de bolores
(1655)
Microscpio de Robert Hooke
Introduo
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2. Descoberta de bactrias:
- Antoni van Leeuwenhoek em 1676
Microscpio de Robert Hooke
Introduo
Pequenos animlculos
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2. Descoberta de bactrias:
Ferdinand Cohn (fundador da Bacteriologia)
- Botnico
- Interesse na resistncia trmica de bactrias: descrio do ciclo
de vida de Bacillus
- Bactria filamentosa Beggiatoa mirabilis
- Introduo do sistema de classificao
bacteriana

Introduo
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2. Descoberta de bactrias:
- O que motivou novas descobertas na Microbiologia?
- Questionamento a respeito da gerao espontnea;
- Questionamento a respeito da natureza das infeces.
Louis Pasteur Robert Koch
Introduo
3. Desenvolvimento da Microbiologia
Desenvolvimento de tcnicas e inmeras
descobertas: subdisciplinas da cincia bsica da
microbiologia (sistemtica, fisiologia, bioqumica,
gentica, virologia, citologia microbiana...)
Introduo
Madigan et al, 2010 (12 Ed)
Citologia Microbiana
Bacteria / Archaea
Eukarya
Madigan et al, 2010 (12 Ed)
Bactrias e Arqueas
1. Morfologia celular
Morfologia comuns
coco
bacilo
espirilo
espiroqueta
hifa
pednculo
filamentosas
Bactrias com brotamento
e apendiculadas
Arranjos de clulas
(geralmente especficos para gneros)
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Bactrias e Arqueas
1. Morfologia celular
Outras formas

Stella
Corpos de frutificao de mixobactrias
Candidatus
Magnetoglobus multicellularis
Bactrias e Arqueas
1. Morfologia celular
Alguns grupos so imediatamente
reconhecidos pela morfologia celular
Ex.: espiroquetas



Ex.Caso clnico: Streptococcus
No entanto, geralmente, impossvel prever propriedades das clulas procariticas
tendo como base somente a morfologia celular
Bactrias e Arqueas
1. Morfologia celular
Determinao na morfologia celular

Parede celular: confere forma e rigidez a clula
Citoesqueleto: MreB e crescentina
Bactrias e Arqueas
2. Tamanho celular e implicaes
H grande variao no tamanho das
clulas
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Bactrias e Arqueas
2. Tamanho celular e implicaes
Maior procarioto conhecido

Madigan et al, 2010 (12 Ed)
Thiomargarita

Ambientes aquticos
ricos em H
2
S
No cultivada
Presena de glbulos
de enxofre
Bactrias e Arqueas
2. Tamanho celular e implicaes
O que faz com que a clula seja to
grande?
- Restries na capacidade de captao de nutrientes;
Em geral, clulas menores crescem mais
rapidamente que maiores: maior troca de
nutrientes por unidade de volume celular.
Maior taxa de mutaes e vantagem adaptativa.
Bactrias e Arqueas
2. Tamanho celular e implicaes
Limites para tamanho da clula

Mnimo: todos os componentes necessrios a
sobrevivncia e diviso devem estar presentes na
clula, biomolculas essenciais.

Mximo: limitada taxa de troca de nutrientes
com ambiente
Bactrias e Arqueas
3. Membrana citoplasmtica

- Definio: estrutura delgada que envolve a clula
que separa o interior da clula de seu ambiente.
- Definio: barreira de permeabilidade seletiva que
permite a concentrao de metablitos especficos e
excreo de dejetos.
- Concluso: barreira fsica e de permeabilidade.
Bactrias e Arqueas
3.1. Composio da membrana: bicamada
fosfolipdica
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3.1. Composio da membrana: poro lipdica

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Tipos de lipdeos:

- Glirecolipdeos
-Fosfolipdeos (estrutura bsica
da membrana); e outros

- Glicolipdeos
-Glicoglicerolipdeo (mais
abundantes glicerolpdeos com
unidades de acar);
-Glicoesfingolpdeos (no tem
glicerol, mas bases nitrogenadas
de cadeia longa tipo esfingosina).
-Hopanoides


Bactrias e Arqueas
3.1. Composio da membrana:
Estabilizao da membrana
Pontes de H, interaes hidrofbicas, Mg
2+
e Ca
2+
(interaes inicas com a carga negativa dos
fosfolipdeos).
Fluidez da membrana
Relativamente fluida

Bactrias e Arqueas
3.1. Lipdeos da membrana arqueas:
- Diferem dos encontrados em Bacteria e Eukarya;

Bactrias e Arqueas
3.1. Lipdeos da membrana arqueas:
- No possuem cidos graxos unidos por ligao ster ao
glicerol;
- Cadeias hidrofbicas: unidades repetidas do hidrocarboneto
de 5 carbonos isopreno; ligao ter com glicerol.
20 carbonos
Bactrias e Arqueas
3.1. Lipdeos da membrana
arqueas:
- Arquitetura da membrana de
arqueas
Monocamada: resistente a separao. Ex.: hipertermfilas
Bactrias e Arqueas
3.2. Composio da membrana:
poro proteica
- Protenas de membrana:
pores hidrofbicas e hidroflicas
- Protenas integrais: firmemente
embebidas na membrana
- Protenas perifricas: no esto
embebidas, mas associadas s
superfcies da membrana. Ex.:
lipoprotenas. Geralmente interagem
com protenas integrais de membrana.
- Organizao em segmentos:
agrupadas de acordo com sua interao
ou funo celular
Bactrias e Arqueas
3.3. Composio da membrana: carboidratos

- At 1970: glicosilao era considerado
processo exclusivo de eucariotos;
- Membrana:
- Glicoprotenas
- Glicolipdeos
Bactrias e Arqueas
3.4. Funes da membrana celular
Bactrias e Arqueas
3.5. Tipos de transporte atravs da membrana
A. Difuso: pequenas molculas hidrofbicas
Exceo: H
2
O: capaz de penetrar livremente
aquaporinas: aceleram o processo
Difuso facilitada
Bactrias e Arqueas
3.5. Tipos de transporte
atravs da membrana
- Pq a necessidade de
transportadores?
Vida: Acmulo de solutos
contra gradiente de
concentrao
- Propriedades das ptns
transportadoras:
- Efeito de saturao
Bactrias e Arqueas
3.5. Tipos de transporte atravs da
membrana
- Propriedades das ptns transportadoras:
- Alta especificidade: nica molcula ou classe
de molculas (acares ou aa)
- Regulao de sua biossntese pela clula: em
funo tipo e concentrao de nutrientes.
Ex.: determinado nutriente em concentrao
muito baixa, necessita de transportador de
maior afinidade.
Bactrias e Arqueas
3.5. Transporte atravs da
membrana
- Protenas
transmembrana:
Possuem 12 domnios -hlice
que dobram-se atravs da
membrana, formando um
canal;
O evento de transporte
envolve alterao
conformacional da protena
transportadora aps sua
ligao ao soluto.

Bactrias e Arqueas
3.5. Tipos de transporte atravs da membrana
- portador
Bactrias e Arqueas
3.5. Tipos de
transporte atravs
da membrana
Estrutura e
funo das ptns
transportadoras
Ptn transmembrana
Bactrias e Arqueas
3.5. Tipos de transporte atravs da membrana
Escherichia coli
B. Transporte simples:
Energia prton motiva
Bactrias e Arqueas
3.5. Tipos de transporte atravs da membrana
Escherichia coli
C. Translocao de grupo: Sistema fosfotransferase
-Glicose, manose ou frutose
-Substancia transportada quimicamente modificada
-Fosforilaes e desfosforilaes em cascata at o transportador real, que fosforila o acar
transportado
Bactrias e Arqueas
3.5. Tipos de transporte atravs da membrana
D.Protenas periplasmticas de ligao e sistema ABC
Escherichia coli
Transporte com a participao
de:
-Protenas periplasmticas de
ligao;
- Transportadora de membrana;
- Protenas que hidrolisam ATP.

ABC: ATP-binding-cassete:
cassete de ligao ATP

Transporte de: acares, aa,
sulfato, fosfato e metais traos.

Em bactrias Gram-positivas:
protenas de ligao ao substrato
esto ancoradas superfcie
externa da membrana
citoplasmtica.

Bactrias e Arqueas
3.6. Secreo em procariotos
Translocases: protenas responsveis pela exportao e insero
de outras protenas na membrana citoplasmtica procaritica.
Ex.: Sistema translocase Sec: enzimas hidrolticas
Sistema de secreo do tipo III: secreo de toxinas por
bactrias patognicas
Bactrias e Arqueas
4. Membranas internas
- Formadas por invaginao da membrana celular
- Possuem funes especficas envolvidas na gerao de ATP
- Ex.:
- Bactrias Nitrificantes: amnia monooxigenase oxidao da amnia
- Bactrias Fotossintticas: bacterioclorofilas e outros pigmentos
Bactrias e Arqueas
5. Citoplasma

- Contm: protenas, nucleide, ribossomos,
pequenas molculas orgnicas (aa, acares,
vitaminas, coenzimas,...).
- Possui alta concentrao de solutos: gera
presso de 2 atm equivalente a presso de
pneu de automvel.

Bactrias
5. Citoplasma

- Organelas: estruturas com funes especficas
- Clorossomos: estruturas que captam luz para fotossntese em
bactrias verdes sulfurosas e no sulfurosas.
- Anamoxossomos: estrutura onde ocorre a oxidao da amnia;
- Carboxissomos: estruturas polidricas que contm a enzima
ribulose-bisfosfato carboxilase oxigenase (RuBisCO); onde ocorre a fixao de
Carbono;
- Magnetossomos: estrutura formada por cristal magntico envolto
por membrana.
Bactrias e Arqueas
6. Incluses celulares:

- Atuam no armazenamento de energia ou reservatrio
de outro constituinte;
- Vantagem do armazenamento de substncias em
forma insolvel: reduo do estresse osmtico que
existiria se a substncia fosse armazenada na forma
solvel.
- Exemplos de incluses:
- Polmeros de armazenamento de carbono;
- Polifosfato e enxofre;
- Incluses magnticas (magnetossomos).


Bactrias e Arqueas
6. Incluses celulares:
Polmeros de armazenamento de
carbono:

- Poliidroxialcanoatos so incluses
lipdicas comuns em bacterias;

- Grnulos de glicognio: forma
comum de reserva de
polissacardeos;

- Sintetizadas quando h excesso de
carbono;

-Utilizados como fonte de carbono e
energia em condies de escassez.


Bactrias e Arqueas
6. Incluses celulares:
Polifosfato e enxofre:

- Polifosfato: grnulos de fosfato
inorgnico PO
4
2-
. So utilizados como
fonte de fosfato para sntese de
cidos nucleicos e lipdeos e tambm
na produo de ATP.

- Enxofre: produzidos durante a
oxidao de H
2
S; utilizados na
ausncia de H
2
S, em que so oxidados
a sulfato. So periplasmticos e no
citoplasmticos.



Bactrias e Arqueas
6. Incluses celulares:
Incluses magnticas (magnetossomos):


Bactrias e Arqueas
6. Vesculas de gs:
- Procariotos planctnicos
possuem vesculas de gs que
possibilitam a flutuao.
- Funo: posicionamento na
coluna dgua em resposta a
fatores ambientais.
- Presentes em bactrias e
arqueas.
- Membrana da vescula
formada por protenas (GvpA
e GVpC): rigidez e
impermeabilidade a gua e
solutos.
Bactrias e Arqueas
7. Parede celular
- Confere forma e rigidez a clula: impede lise
devido a presso interna;
- Diferenas estruturais so utilizadas nas
reaes de colorao e classificao das
bactrias;
- Gram-positivas e Gram-negativas
Bactrias
7. Parede celular
Multicamadas e complexa Espessa e predomnio de nico tipo de molcula
Bactrias
7. Parede celular

- peptidoglicano: camada
rgida de
polissacardeo
composto por dois
derivados de acares,
N-acetilglicosamina e
cido N-
acetilmurmico, unidos
por ligao glicosdica
1,4.
Bactrias
7. Parede celular

- peptidoglicano:
Formado tambm por
alguns aa (L-alanina, D-
alanina, cido D-
glutmico e lisina ou
cido diaminopimlico,
que associam-se ao
polissacardeo,
formando o
tetrapeptdeo glicano.
Bactrias
7. Parede celular

- peptidoglicano:
Ligao (1,4):
estabilidade em
apenas 1 eixo.
Ligaes cruzadas so
necessrias para
garantir rigidez na
direo X e Y.

Bactrias
7. Parede celular

- Ligaes cruzadas:
Interligam as cadeias de polissacardeos;
Ocorrem em graus diferentes nas espcies de
bactrias;
Quanto maior o nmero de ligaes cruzadas, maior
a rigidez;

Bactrias
7. Parede celular

- Ligaes cruzadas:

Gram-negativas:
Grupo amino do DAP de uma
cadeia + grupo carboxil da D-
alanina de outra cadeia.
Gram-positivas:
Ponte interpeptdica: natureza e
nmero de aminocidos da
ponte variveis.

Bactrias
7. Parede celular

- peptidoglicano:

Apresentam grande diversidade (+ de 100 tipos em 2009).

Diversidade relacionada a qumica das ligaes cruzadas e
pontes interpeptdicas.


Bactrias
7. Parede celular
- Bactrias Gram-positivas:
- 90% da parede formada por peptidoglicana;
- Possuem at 25 camadas interconectadas;
- Possuem cidos teicoidos;
- Possuem cido lipoteicoico;
- Possuem Protenas associadas a parede.



cidos teicoicos: so todos os
polmeros de parede celular, de
membrana citoplasmtica ou
capsulares que contm resduos
de glicerol-fosfato ou ribitol
fosfato.
Bactrias e Arqueas
7. Parede celular
- Lisozima e
protoplastos:
- Lisozima: Enzima que cliva as
ligaes glicosdicas -1,4,
enfraquecendo a parede.
- Protoplasto
- Esferoplasto



Bactrias
7. Parede celular
- Bactrias que no possuem parede celular

- Micoplasmas: bactrias patognicas; possuem esteris na
membrana citoplasmtica, o que a deixa rgida .
- Thermoplasma: arquea (lipdeos diter e tetrater)





Bactrias
7. Parede celular
- Bactrias Gram-negativas:
- 10% da parede formada por peptidoglicano;
- Possuem periplasma
- Possuem membrana externa;







Bactrias
7. Parede celular
- Bactrias Gram-negativas: Membrana externa








-Formada por lipopolissacardeos
(LPS); e fosfolipdeo em uma
camada;
-Camada interna possui
lipotrotenas que ligam a
membrana externa ao
peptidoglicano
-Composio variada dependendo
da espcie;
-Componentes do LPS:
polissacardeo O, p. cerne, lipdeo
A;
Bactrias
7. Parede celular
- Bactrias Gram-negativas: Membrana externa
- Impede a difuso de protenas localizadas externamente a membrana
citoplasmtica;
- txica aos animais;
- Propriedades txicas relacionadas a poro do lipdeo A: endotoxina;
- Relacionada aos sintomas de infeces por patgenos (Salmonella,
Shigella e Escherichia, ...; gases, diarreia e vmito,...);
- ME relativamente permevel a molculas pequenas: porinas
- Porinas: canais que permitem a entrada e sada de substncias hidroflicas
de baixa massa molecular;
- Porinas:
- Inespecficas: canais preenchidos por gua
- Especficas: possui stio de ligao para substncias
estruturalmente relacionadas





Associao de 3 subunidades idnticas
Bactrias
7. Parede celular
- Bactrias Gram-negativas: Periplasma
- o espao situado entre a superfcie externa da membrana
citoplasmtica e a superfcie interna da membrana externa;
- Contm alta concentrao de diversas protenas (quimiotaxia,
transporte, ptns hidrolticas...), resultando em uma consistncia
semelhante a gel.






Bactrias
7. Parede celular
- Micobactrias
- Gnero de actinobactrias patognicas. Ex.: Mycobacterium
tuberculosis.
- Parede formada por 3 tipos de molculas interligadas:
- peptidoglicano
- arabinogalactana
- cido miclico (60%)
- Coram mal por Gram
- Tcnica de Ziehl-Neelsen:
- tcnica de colorao
para bactrias lcool-cido resistentes.



Arqueas
7. Parede celular
- Arqueas:
- No possuem
peptidoglicano;
- No possuem
membrana externa;
- Algumas possuem
pseudomurena






Methanobacterium
Arqueas
7. Parede celular
- Arqueas:
- Algumas possuem
outros
polissacardeos






Carregado
negativamente: ligao
a ons Na
+
do
ambiente, o que
resulta na estabilizao
da parede.
Halococcus
Arqueas
7. Parede celular
- Arqueas:
- Camada S: tipo mais comum
de parede em arqueas;
- Tambm chamada de camada
superficial paracristalina;
- Formada por protenas ou
glicoprotenas que
apresentam aspecto
ordenado quando observadas
ao TEM;
- Tambm presente em
bactrias;
- Corresponde sempre a
camada mais externa;
- Funes: rigidez para evitar
ruptura osmtica; barreira
seletiva (passagem de
substncia de baixa massa
molecular- ex.: evitar vrus no
ambiente); reteno de
protenas prximo
superfcie celular.



Bactrias e Arqueas
8. Outras estruturas de superfcie

- Camadas da superfcie;
- Pili e fmbrias;

Bactrias e Arqueas
8. Outras estruturas de
superfcie:
- Camadas da superfcie:
formados por polissacardeos e
protenas secretados pela clula.
- Cpsula: camada formada por
composto em matriz compacta que
exclui pequenas partculas como tinta
nanquim.
- Camada limosa: camada no to
compacta, facilmente deformvel,
frouxamente ligada a superfcie da
clula.

Bactrias e Arqueas
8. Outras estruturas de superfcie:


Funes das camadas de superfcie :
- Adeso a superfcies slidas;
- Inibio do reconhecimento e destruio da clula bacteriana
pelas clulas fagocitrias do sistema imune;
- Resistncia a dessecao.



Bactrias e Arqueas
8. Outras estruturas de superfcie:
- Pili e fmbrias: so estruturas filamentosas proteicas que so
projetadas a partir da superfcie da clula.
- Fmbrias so mais curtas e esto presentes na clula em elevado
nmero; os pili so semelhantes s fmbrias, porm mais longos e
presentes em menor nmero (uma ou poucas cpias).




Bactrias e Arqueas
8. Outras estruturas de superfcie:
- Funes:
- Fmbrias: adeso
- Pili: adeso, troca gentica entre clulas na conjugao,
motilidade celular (motilidade pulsante), secreo.




Pilus T de Agrobacterium tumefaciens
Pilus P de E.coli
Bactrias e Arqueas
8. Outras estruturas de superfcie
- Prosteca ou pednculo:
- So extenses verdadeiras da clula, contendo citoplasma,
peptidoglicano e membrana celular.
Funes:
-Adeso,
agrupamento;

-Melhor aquisio
de absoro de
nutrientes.

Bactrias
9. Endosporos:
- Clulas diferenciadas de resistncia produzidas
durante o processo de esporulao.
- Resistncia: calor, dessecamento, carncia
nutricional, radiao...


Bactrias
9. Endosporos:
- Forma de disperso de algumas bactrias;
- Bacillus e Clostridium;


*
Sinal ambiental: clula cessa o crescimento
Refringncia do esporo
esporo ativao
germinao
extruso
Bactrias
9. Endosporos:
- Estrutura:
Apresenta camadas que no so
observadas na clula vegetativa:

Exosprio

Capa do esporo

Parede do cerne

Crtex (peptidoglicano com
ligaoes cruzadas frouxas)

Cerne (membrana
citoplasmtica, citoplasma,
ribossomos, nucleide, e outros
constituintes celulares).

Bactrias
9. Endosporos:
- Cerne:
- Rico em acido dipicolnico (DPA)e Ca
2+
- Complexo (DPA) e Ca
2+
representa 10% do peso seco do esporo.
- Funo do complexo:
- reduo da disponibilidade de gua (aumento da termo-
resistncia, maior resistncia a agentes qumicos como H
2
O
2
e
inativao de enzimas);
- estabilizao do DNA contra desnaturao trmica (intercala-se
entre as bases).



DPA
Bactrias
9. Endosporos:
- Cerne:
- Rico em pequenas protenas cido-solveis (PPASs);
- PPASs:
- So sintetizadas durante o processo de esporulao
- Funes:
- Ligam-se ao DNA do cerne, compactando-o e protegendo-o
contra danos causados pela radiao U.V., dessecamento e
calor seco;
- Atuam como fonte de carbono e energia na extruso de uma
nova clula vegetativa a partir do endsporo em germinao.


Bactrias
9. Endosporos:
- O processo de
esporulao:

- Srie de eventos
de diferenciao
celular

- Ex.: Bacillus
subtilis
(8 horas)


Estgio 0: Clula vegetativa
Compactao do DNA
Estgio 1
Diviso celular assimtrica
Estgio 2
Septo do endsporo
cresce ao redor do
protoplasto
Formao do pr-esporo
Estgio 3
Bactrias
9. Endosporos:


Estgio 3
Estgio 4
Estgio 5
Estgio 6
Sntese do exosprio e crtex
Desidratao
Incorporao de Ca
2+
Desidratao
Produo de DAP e PPAS
Formao da capa
Maturao
Lise celular
Estgio 7
Endsporo livre
Bactrias e Arqueas
Momento Jurassic Park
Por quanto tempo um endsporo pode
sobreviver?
Amostra de 25-40 milhes de anos. Endsporo do
intestino da abelha extinta.
Concluso dos trabalhos: Acredita-se que
os endsporos podem durar milhes de
anos.