Se puede definir a la palabra microscopio como un elemento o instrumento que nos
facilita la tarea de observar objetos que tienen como caracterstica principal ser demasiado pequeos para ser vistos por nuestros ojos. Existen distintos tipos de microscopios, por ende cada uno de ellos posee una funcin y caracterstica diferente.
El microscopio ms comn y el primero en ser inventado es el de tipo ptico; ste es un instrumento que posee una o varias lentes que nos permiten tener una imagen aumentada de la sustancia u objeto que estamos observando, su funcionamiento es por refraccin. La palabra Microscopio se relaciona con la palabra microscopa, ste es la ciencia de estudiar los pequeos objetos mediante el uso de dicho instrumento.
Historia del microscopio
La historia de los microscopios se remontan al ao 1610 en el que hay constancia de su uso por primera vez por parte de Galileo, segn referencia de los registros que hay italianos, pero si contrastamos estos registros con otros que hay holandeses, le adjudican este merito Zacharias Jansen ms o menos de la misma poca. Sin embargo la Accademia Nazionale dei Lincei (Academia Nacional de los Linces), que es la ms antigua e importante de Italia y probablemente de Europa a la cual perteneca Galileo, publico un trabajo sobre la observacin microscpica del aspecto de una abeja.
Posteriormente se publicaron otros trabajos muy importantes sobre el campo de la microscopa, como por ejemplo Malpighi que apareci sobre el ao 1660 - 1665, el cual constaba de la observacin de la circulacin sangunea a travs de los microscopios, lo que probo la teora de Harvey (que fue un mdico al que se le atribuyo de ser la primera persona en describir la circulacin de sangre, pero el espaol Miguel Servet hizo una descripcin de la circulacin sangunea pulmonar un cuarto de siglo antes de que naciera Harvey, pero en aquella poca fue considerado como una hereja, por lo que fueron destruidos el libro que escribi, aunque afortunadamente tiempo despus fueron encontradas tres copias). En aos posteriores fueron apareciendo nuevas investigaciones como Robert Hooke (que fue un cientfico ingls uno de los ms importantes de la historia, en su trayectoria abarco varios campos desde la biologa, medicina, fsica, microscopia, hasta la arquitectura, entre otros). Sobre mediados del siglo XVII un comerciante holands Anton Van Leeuwenhoek realizo una investigacin con microscopios de fabricacin casera en la cual visualizo por primera vez protozoos, bacterias, espermatozoides y glbulos rojos.
A lo largo del siglo XVIII los microscopios tuvieron varios adelantos mecnicos que aumentaron su estabilidad y facilidad de uso. Una de las mejoras ms importantes que tuvieron los microscopios sobre el ao 1877, fue sobre la ptica de los microscopios, ya que Carl Zeiss (que fue un ptico alemn y las primeras lentes fueron empleadas como piezas en la construccin de microscopios) mejoro la microscopa de inmersin sustituyendo el agua por aceite de cedro consiguiendo as hasta 2000 aumentos.
Posteriormente a principios de los aos 30 se haba alcanzado el mximo desarrollo para los microscopios pticos, pero un deseo cientfico que se siguiera investigando hasta que los microscopios electrnicos se empezaron a desarrollar sobre el ao 1931 los microscopios electrnicos de transmisin (TEM) y posteriormente en 1942 los microscopios electrnicos de barrido (SEM). En ambos casos, estos microscopios han permitido obtener imgenes de gran resolucin en materiales ptreos, metlicos y orgnicos.
De todas formas las primeras publicaciones importantes dentro del campo de la microscopa se realizaron entre 1660 y 1665 cuando se prueba la teora Harvey sobre la circulacin sangunea al observar en el microscopio los capilares sanguneos.
En 1665, Robert Hooke hizo una observacin con el microscopio de un delgado corte de corcho y pudo notar la porosidad del material; dichos poros, en conjunto, formaban cavidades que eran poco profundas a modo de cajas, a las mismas las llam clulas. Lo que haba observado Hooke era clulas muertas. Un tiempo ms tarde, Marcelo Malpighi, un reconocido anatomista y bilogo italiano, pudo observar clulas vivas y fue el primer encargado de estudiar tejidos vivos en el microscopio. Limites tcnicos de los microscopios pticos
A principios de 1930 se haba alcanzado el lmite tcnico en cuanto a microscopios pticos se refiere, no consiguiendo aumentos superiores a 500% o 1000%, de todas formas, se tena el deseo cientfico de observar los detalles de las estructuras celulares.
Histricamente el microscopio fue un invento que contribuy mucho a una rama que es fundamental para la vida del ser humano, la medicina, a travs de ellos se pudieron observar las primeras clulas cancergenas, por ejemplo, permitiendo de esta forma estudiar una compleja enfermedad y desarrollar mtodos para contrarrestarla. Tambin influy mucho en ramas como la biologa y la paleontologa, dndonos la posibilidad de saber de dnde venimos y conocer con qu tipo de naturaleza estamos conviviendo.
Partes esenciales de los microscopios
Los microscopios modernos pueden estar compuestos de diferentes componentes. En la imagen contigua se enumeran las partes ms importantes de los microscopios. Los microscopios estn formados por varias partes: una ptica y otra mecnica. A continuacin haremos una breve descripcin de estas partes:
1. Ocular: Son las lentes que estas situadas ms cerca del observador de los microscopios. 2. Brazo / soporte del tubo: Estn ubicados de forma perpendicular al pie y pueden tener una forma arqueada o de manera vertical, para as unirlos al pie. 3. Platina: Es la parte que soporta el portaobjetos, va provista de dos pinzas y de un orificio por el cual penetra la luz para observar la muestra. 4. Ajuste macromtrico: Es un tornillo que es para enfocar y desplazar de manera rpida las lentes. 5. Ajuste micromtrico: Es un tornillo que es para enfocar y realizar desplazamientos de las lentes de manera lenta. 6. Ajuste de altura de platina: Es un tornillo mediante el cual se ajusta la platina. 7. Pie: Es la parte que sostiene al microscopio. 8. Fuente de luz: Se utiliza para iluminar las muestras u objetos a observar, y se encuentra instalada en el pie. 9. Condensador: Es el conjunto de lentes que se encuentran situadas debajo de la platina y su funcin es la de concentrar la luz sobre la muestra u objeto. 10. Pinzas: Son dos pinzas que estn situadas sobre la platina y se utilizan para la sujecin de las muestras. 11. Objetivo: Es la lente que esta situada ms prxima a la muestra, lo que la hace ampliar la imagen de sta. 12. Revolver: Es la parte que sostiene el sistema de objetivos, y le permite girar para cambiar los objetivos. 13. Tubo: Es la parte donde esta ubicado el ocular, que tiene el revolver con los objetivos en la parte inferior y los oculares en la parte superior.
Los microscopios contienen los siguientes componentes
El pie es la base de los microscopios, sobre las que se estructuran los dems componentes. El soporte del tubo es una columna, sobre la que se sujetan la ptica y la platina. El tubo est casi siempre situado de forma oblicua, rara vez de forma vertical, en la parte superior de los microscopios. El soporte para trabajar, que tiene una perforacin en el centro se denomina platina. Para el ajuste de la nitidez normalmente dispone de dos ruedas, la rueda de ajuste macromtrico y la de ajuste micromtrico. Todos los dems componentes de los microscopios que se utilizan para la iluminacin y el aumento sobre la muestra, forman parte de la ptica. Se mira a travs del ocular que se encuentra en el tubo. Sobre la muestra se encuentran los objetivos sujetos al revolver para cambiarlos de forma instantnea. Por debajo de la platina de los microscopios se encuentra un sistema de lentes llamado condensador. Para iluminar las muestras se usa la fuente de luz o un espejo.
Tambin se debe de tener en cuenta, a la hora de utilizar los microscopios, son las diferentes caractersticas de los objetivos de los microscopios ya que de ellos depende de que tengamos una mejor imagen de las muestras que se pretenden observar o estudiar. A continuacin haremos una breve relacin de dichas caractersticas como:
- La escala de reproduccin que es la relacin lineal que existe entre el tamao del objeto y su imagen, como por ejemplo 4:1, 40:1. - El poder definidor que se refiere a la capacidad de los objetivos de formar imgenes con los contornos bien definidos. - El lmite de resolucin que es la distancia ms pequea que debe de haber entre los dos objetos para que puedan visualizarse por separado. - El poder de penetracin que es la nos permite la observacin simultanea de varios planos de la muestra, que es inversamente proporcional a la escala de reproduccin o aumento. - La distancia frontal que es la distancia que hay de la lente frontal hasta la muestra colocada en la platina, cuando est enfocada, disminuyendo cuando va aumentado la escala de reproduccin del objetivo. - El aumento total el que debemos de tener en cuenta que el ocular tambin tiene un aumento, por lo que el aumento total de la imagen que estamos observando es el producto entre el aumento del objetivo y el del ocular.
Pasos a seguir para realizar una observacin a travs de los microscopios
Para realizar una observacin a travs de los microscopios debe de seguir unos pasos para que as tenga un resultado ptimo. Lo primero que debera tener en cuenta es que el objeto o muestra a observar por los microscopios sea sometido a un proceso para destacar algunas de las partes que le interese observar especialmente. Se debe de conservar la muestra u objeto para realizar observaciones posteriores. Las dos fases de este proceso son: la de fijacin y la tincin. La fijacin consiste en que la muestra que deseamos observar no se mueva y para ello se utilizan diferentes sustancias lquidas o temperaturas elevadas para que la muestra se deshidrate, y posteriormente debe lavarse en un medio apropiado para poder realizar la observacin. En cuanto a la tincin se trata de colorear la muestra que deseamos observar a travs de los microscopios, para as destacar las partes que nos interesan. Para realizar esta tincin la gama de colores es muy amplia, y cada uno de ellos destaca una parte diferente de la muestra, por ejemplo si la muestra que tenemos para observar a travs de los microscopios es una clula, la tincin que deberamos de utilizar para la observacin del ncleo de la clula sera la fucsina bsica, el verde metilo. Si queremos observar el citoplasma de la misma se utilizara la fucsina cida, el verde luz o la eosina, etc.
Una vez que ya tiene preparada las muestras para observarlas a travs de los microscopios, debera de colocarlas en un vidrio transparente (portaobjetos) y la cubrimos con otro vidrio transparente ms fino (cubreobjetos). Las muestras se pondran en los microscopios para realizar la observacin. Para obtener una imagen aumentada de las muestras en los microscopios debe de tener en cuenta que para obtener el aumento deseado debe de combinar los objetivos con el ocular. Posteriormente para enfocar las muestras debe realizarse con el tornillo macromtrico y despus con el tornillo micromtrico para afinar el enfoque y as obtendremos una visin perfecta de las muestras. Cuando las muestras ya estn perfectamente enfocadas se van cambiando los objetivos hasta encontrar el aumento que necesitamos. Y ya para tener una observacin perfecta la fuente de luz que tienen los microscopios, la pueden regular con el diafragma hasta tener la iluminacin adecuada para la observacin.
Los microscopios son instrumentos que permiten observar objetos que son demasiado pequeos para ser vistos a simple vista. El ms comn de ellos es el microscopio ptico, que esta basado en lentes pticas. Diferentes tipos de microscopios
Microscopio simple: Solamente utiliza una lente de aumento (como por ejemplo una lupa).
Microscopio compuesto: Se compone de un conjunto de lentes, dispuestas de tal manera que puedan aumentar la imagen que se est observando a travs de ellas (microscopios pticos).
Microscopio de luz ultravioleta: La imagen en este tipo de microscopio depende de la absorcin de la luz por las molculas de la muestra. Su funcionamiento no es muy diferente del funcionamiento en un espectrofotmetro pero sus resultados son registrados en fotografas. Adems un punto muy importante es que no se puede observa directamente a travs del ocular porque la luz ultravioleta puede daar la retina.
Microscopio electrnico: Utiliza electrones en lugar de luz visible (fotones) para formar imgenes de objetos pequeos. Estos tipos de microscopios aumentan la velocidad de los electrones para obtener una longitud de onda ms corta y conseguir una resolucin mayor (los electrones poseen una longitud de onda bastante inferior que la luz visible, y por tanto pueden disgregar estructuras muy pequeas) consiguiendo con ello una capacidad de aumente de hasta 500.000 aumentos en comparacin con otros tipos de microscopios ptico. Las imgenes originales obtenidas son en blanco y negro pues se usan electrones en vez de luz. El haz electrnico se produce mediante un ctodo de Wolframio.
Microscopio electrnico de transmisin: Emite un haz de electrones hacia la muestra que se quiere aumentar, en la que hay parte de estos electrones que rebotan o son absorbidos por la muestran y otros que la atraviesan formando la imagen aumentada, por lo que el tipo de muestras tienen que ser capas muy finas para que as se pueda aumentar perfectamente. Este tipo de microscopios pueden aumentar la muestra hasta un milln de veces su tamao real. Microscopio electrnico de barrido: La muestra se cubre con una capa fina de metal y se realiza un barrido de electrones, en el que un detector mide la cantidad de los electrones que emite la intensidad de la muestra, por que es posible de mostrar figuras en tres dimensiones con una gran resolucin, pudiendo proyectar la imagen de la muestra en un televisor (materiales metlicos u orgnicos).
Microscopio de sonda de barrido: Este tipo de microscopios va provisto de un transmisor en la parte exequimal de la lente, adems utiliza una sonda que recorre la superficie de la muestra que se quiere estudiar.
Microscopio de luz reflejada: Estos microscopios se usan principalmente para observar preparados transparentes y lquidos. El mbito de uso es por ejemplo el anlisis de sangre, clulas, pruebas en plantas. Los microscopios clsicos de luz reflejada tienen una distancia de trabajo muy nfima, por debajo de 4 mm. Por ello, esta clase de microscopios son aptos para preparados muy finos. Los preparados se ponen encima del porta muestras y se tapan con el cubre muestras. Los microscopios de luz reflejada se ofrecen normalmente con muchos aumentos (de 40 hasta ms de 1000 aumentos). En trabajos con 1000 aumentos es necesario poner una gota de aceite de inmersin para cerrar el espacio de aire entre el porta muestras y el cubre muestra. Imgenes hasta 400 aumentos se pueden ver con cualquier aparato sin necesidad de alguna tcnica en especial. Con el cambio de los oculares se puede incrementar los aumentos de los microscopios de luz reflejada.
Microscopio de fluorescencia: Se utilizan para revelar molculas fluorescente naturales, como por ejemplo la vitamina A que fluorece y emite luz de longitud de onda que se encuentra dentro del espectro visible cuando es expuesta a la luz ultravioleta, o para revelar una fluorescencia agregada, como en la deteccin de anticuerpos. El color verde de las hojas de las plantas (clorofila) con la excitacin de forma natural con luz de onda corta fluorece en luz intensiva roja. Para la observacin de esta fluorescencia primaria con los microscopios no es necesaria ninguna preparacin. En una fluorescencia secundaria se marcan los objetos que no fluorecen con un colorante fluorescente. Un colorante fluorescente conocido es por ejemplo Acridinorange, que con la excitacin del ncleo de la clula con luz azul, muestra una fluorescencia verde. Debido a que la fluorescencia se produce slo con la preparacin del colorante fluorescente, se habla tambin de fluorescencia inducida. En la fluorescencia inmune se acopla un colorante fluorescente (casi siempre FITC = Fluorescein-iso-thio-cyanat) con un anticuerpo. Estos anticuerpos se pueden producir de forma muy especfica para determinadas estructuras biolgicas. La unin del colorante se transmite prcticamente a travs del anticuerpo. Estas coloraciones son extremadamente selectivas, sin embargo, no tan intensivas como en la fluorescencia secundaria tradicional.
Microscopio estreo de luz reflejada y luz transmitida: Estos microscopios se usan principalmente para visualizar objetos mayores. El mbito de uso es por ejemplo el anlisis de insectos, plantas, monedas o la comprobacin de materiales. La mayora de los microscopios de luz reflejada tienen una distancia de trabajo de ms de 40 mm. Por ello, estos microscopios son ideales para trabajar con objetos grandes o para la comprobacin de materiales. Normalmente se ofertan estos microscopios como modelos binoculares.
Microscopio digital: La microscopa digital es la pareja de la microscopa convencional. Las pruebas no se analizan directamente a travs del ocular de los microscopios, sino que se presentan como imagen completa virtual, que despus de escanear completamente la prueba se muestra en pantalla con la resolucin deseada. Un auto foco integrado garantiza que la imagen est situada siempre en el foco, y por tanto sea ntida. Las imgenes producidas mediante el escaneo se solapan de forma automtica para producir finalmente una imagen completa. La imagen final virtual se puede grabar en una base de datos.
Microscopio de fuerza atmica: Estos modelos de microscopios tienen las caractersticas similares a los microscopios de efecto tnel y tambin en cuanto a la resolucin pero sirven para materiales que no sean conductores, en los que la aguja esta en contacto con la muestra a estudiar y detecta los efectos de las fuerzas atmicas.
Microscopio petrogrfico: Se utiliza para identificar y estimar cuantitativamente los componentes minerales tanto de rocas gneas como las rocas metamrficas, el cual tienen un dispositivo para polarizar la luz que pasa a travs de la muestra examinada.
Microscopio de efecto tnel: Estos microscopios tienen una aguja tan afilada que en su extremo solo hay un tomo. En la punta de la aguja se ubica sobre el material y se aproxima hasta una distancia de 1 nanmetro, y una corriente elctrica dbil genera una diferencia de potencial de 1 voltio. Al recorrer la superficie de la muestra, la aguja reproduce la topografa atmica de la muestra.
Microscopio en campo oscuro: En el objetivo de este tipo de microscopios se recibe la luz dispersa o refractada por las estructuras de la muestra, por lo que est equipado con un condensador especial que ilumina la muestra con una luz muy fuerte indirecta.
Microscopio de contraste de fase: Es muy til para la observacin de clulas vivas y para observas clulas sin coloreas.
Microscopio de luz polarizada: Es una modificacin de los microscopios pticos el cual contienen un filtro polarizante llamado polarizador entre la fuente de luz y la muestra, y se ubica un segundo polarizador, denominado analizador entre el objetivo y el observador.
Microscopio con focal: Se utiliza una iluminacin mediante un rayo lser, el cual va haciendo un barrido de la muestra por todo el volumen de esta, creando as muchas imgenes bidimensionales que un PC. Este mtodo tiene la ventaja de que se pueden tomar imgenes de la muestra en cortes muy finos.
Microscopio virtual: Es un proyecto que ha sido creado para realizar estudios sobre el comportamiento de organismos microscpicos, en investigaciones forenses, etc.
Microscopio de antimateria: Estos microscopios estn basados en una antipartcula de los electrones, se denominan positrones, que estos pueden dar imgenes de alta calidad de los defectos en las superficies de semiconductores.
Microscopios monoculares, binoculares y trinoculares: Los microscopios monoculares son los ms econmicos para introducirse en el mundo de la microscopa. No pierde visibilidad por usar un slo objetivo. Para una visualizacin prolongada y ms relajada conviene trabajar con los microscopios binoculares. Al usar ambos ojos, la vista est ms relajada durante un espacio de tiempo prolongado. Los microscopios binoculares tienen, adems de elementos normalizados, una disposicin de prismas ms compleja y una iluminacin ms potente.
Para aplicaciones que requieren guardar imgenes existen microscopios trinoculares. Se trata de microscopios binoculares con un tubo adicional. Este le permite situar una cmara USB que registra las imgenes. Las imgenes registradas las puede transmitir a continuacin a un PC o porttil. Tambin tiene la posibilidad de conectar un micro ocular a los microscopios binoculares. Este micro ocular se coloca simplemente en uno de los oculares de los microscopios. El micro ocular le ofrece la posibilidad de transformar de forma econmica los microscopios en videos microscopios.
Cambio en microscopios a objetivos mayores
Site las clulas de la muestra que desea observar con ms aumentos en el centro de la imagen, para que cuando cambie el objetivo la encuentre nuevamente. Cambie el objetivo del microscopio moviendo el revolver. Casi siempre sucede que la nueva imagen es ntida. El ajuste de la nitidez lo consigue mediante el ajuste micromtrico. Siga el mismo procedimiento para poner un objetivo con ms aumentos an.
A tener en cuenta al trabajar con grandes aumentos
Al trabajar con grandes aumentos el diafragma de los microscopios no deben de estar demasiado cerrado, pues esto puede producir que se vean lneas dobles y la imagen no sea ntida. En ese caso debe abrir ms el diafragma. En caso que el diafragma estuviera abierto del todo, la imagen puede aparecer de forma dbil, hasta el punto que no se pueda reconocer casi nada. En ese caso deber cerrar un poco el diafragma. Si despus de efectuar un ajuste correcto sigue teniendo una imagen dbil, probablemente el problema sea que el ocular o el objetivo de los microscopios est sucio. En ese caso deber limpiar los lentes correspondientes.
Exigencias a los microscopios
Dependiendo del uso que le vaya a dar, pondr ms o menos exigencias al equipamiento. Microscopios normales con 400 o 600 aumentos suelen tener una iluminacin suficiente. La iluminacin especial como un contraste de fase, de campo oscuro e iluminacin potente halgena permiten un reconocimiento de detalles de objetos sin contraste, sin la necesidad de tintar el preparado.