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UNIVERSIDADE FEDERAL DE MINAS GERAIS

ESCOLA DE ENGENHARIA
CURSO DE ENGENHARIA AMBIENTAL
GENTICA APLICADA ENGENHARIA AMBIENTAL

RELATRIO: PRTICA DE CONJUGAO DE BACTRIAS


GRUPO 4
Elizngela Pinheiro da Costa N de matrcula 2010020965
Marina Lorena Campos Teixeira - N de matrcula 2010021228
Ricardo Mortara Batistic - N de matrcula 2010021287
Tuane Cafiero Garcia N de matrcula 2010021317

BELO HORIZONTE
2011

Introduo
A conjugao um processo de recombinao gnica, em que ocorre
transferncia de DNA envolvendo contato fsico entre duas bactrias. A clula
doadora fornece material gentico, proveniente do plasmdeo, para uma clula
receptora. Isso promove uma recombinao no material gentico da receptora,
permitindo que ela desenvolva novas caractersticas, entre elas a resistncia a
alguns tipos de antibiticos e a capacidade de metabolizar substncias nocivas.
A bactria Escherichia coli, que ser utilizada no experimento, facilmente
encontrada nos intestinos de mamferos. Foram utilizadas duas linhagens
diferentes no experimento: E.coli BH100 e E.coli K12. A E.coli BH100, a clula
doadora, no patognica e possui genes de resistncia aos antibiticos:
tetraciclina (Tc), canamicina (Km), ampicilina (Ap), cloranfenicol (Cm) e ao
mercrio. Alm disso, possui o gene lac +, ou seja, utiliza a lactose como fonte
de carbono. A E.coli K12 no possui plasmdeo, sendo assim a clula
receptora. Apresenta resistncia ao antibitico estreptomicina (Sm), mas o
gene que confere essa resistncia est localizado no cromossomo. Possui o
gene lac-, o gene mutante incapaz de utilizar a lactose.
O meio de cultura utilizado foi o eosine methylene blue (EMB), que possui
lactose, e apresenta uma propriedade interessante para o experimento: a
colnia que apresenta o gene lac+ apresenta uma colorao azul, enquanto a
que possuir o gene lac- fica incolor.
Com essas duas linhagens foi realizado um experimento a fim de verificar a
transferncia de material gentico por meio da conjugao, e como esse
material transferido afeta a bactria.
MATERIAIS

Ala de platina;

Ala de Drigalski;

5 Placas de Petri com meio de cultura eosine methylene blue (EMB);

Bico de Bunsen;

Pipeta graduada;

Tubo contendo cultura de E.coli BH100;

Tubo contendo cultura de E.coli Km 12Sm.

PROCEDIMENTOS
Inicialmente foram preparadas duas culturas de bactrias E.coli BH100 e E.coli
Km 12Sm, que foram mantidas 24 horas em estufa a 37C para crescimento.
Cinco placas de Petri contendo meio de cultura EMB foram utilizadas, sendo
identificadas como 1, 2, 3, 4 e 5. As placas de 1 a 4 foram divididas em duas
partes, sendo uma identificada como BH100 e a outra como K12.
Na placa 1 no foram adicionados antibiticos, tornando esta a placa controle
do experimento. Na placa 2 foi adicionada estreptomicina. Na placa 3 foi
adicionado outro antibitico, a tetraciclina. Nas placas 4 e 5 foi adicionada uma
mistura dos dois antibiticos marcadores, sendo a existncia de diviso entre
os lados da placa a distino entre a 4, que possui, e a 5, que no possui a
diviso.
Com o auxlio do bico de Bunsen a ala de platina foi esterilizada com o calor.
Os tubos contendo as culturas de bactrias foram abertos prximos chama,
para descontaminar a parte superior dos mesmos. Em seguida a ala foi
inserida em uma cultura de bactria e, depois, passada nos meios de cultura
das placas de 1 a 4, nos respectivos lados identificados, realizando um
movimento sinuoso, produzindo estrias no meio de cultura. A ala de platina foi
esterilizada e, em seguida, o procedimento foi repetido para a segunda cultura
de bactria.
Na placa 5 foram adicionados, com o auxlio da pipeta, 0,1m da cultura
contendo E.coli BH100 e E.coli Km 12Sm. Em seguida, a cultura foi espalhada
pela placa com a ala de Drigalski.
BH100

K12 Sm

BH100

EMB

Placa
1

K12 Sm

BH100

Tc

K12 Sm

BH100

Sm

Placa
2

K12 Sm

Tc/S
m

Placa
3

Placa
4

Figura 1- Esquema das placas de Petri utilizadas no experimento

BH100 x K12 Sm

Tc/S
m

Placa
5

Todo o material foi esterilizado novamente antes de ser deixado na bancada.


RESULTADOS
BH100
K12 Sm
BH100 X

EMB

Tc

Sm

Tc/Sm

+
4

K12 Sm
Onde:
+ indica crescimento de colnias
- indica que no houve crescimento de colnias
DISCUSSO
Na placa 1, onde havia apenas o meio de cultura EMB, houve crescimento
normal das duas linhagens de bactrias nos locais onde foram feitas as estrias,
configurando esta como a placa controle do experimento. As colnias da
BH100 apresentaram colorao azulada, confirmando a expectativa de que,
por apresentarem gene lac+ em seu plasmdeo, estas seriam capazes de
metabolizar a lactose e produzir beta galactose, que, por sua vez, confere a cor
azul s colnias. As colnias da K12 Sm no apresentaram colorao, fato j
antecipado pelo fato desta possuir gene mutante lac-.
Na placa 2 houve crescimento ao longo da estria apenas da BH100, enquanto
na placa 3 ocorreu o crescimento de colnias ao longo da estria apenas da
K12Sm. Tais fatos comprovaram as expectativas de que a BH100 sobreviveria
ao da TC, enquanto a K12 Sm no poderia sobreviver, uma vez que
apenas a bactria BH100 possui gene de resistncia Tc em seu plasmdeo.
De maneira semelhante era esperado a sobrevivncia apenas da K12 Sm em
meio com Sm, uma vez que apenas esta possui gene de resistncia para esse
antibitico.
Na placa 4 no foram identificadas colnias, o que era esperado para esta
placa contendo os dois marcadores, antibiticos Sm e Tc, uma vez que as
bactrias BH100 e K12 Sm no possuem resistncia aos respectivos
antibiticos.
Houve crescimento de colnias azuladas em toda a placa 5. Como esta placa
possua Sm, essas colnias no poderiam ser de BH100, uma vez que esta
bactria no tem resistncia a esse antibitico. Como as colnias surgiram em
um meio contendo Tc, estas no poderiam ser de K12 Sm, porque esta
bactria no possui resistncia Tc. Dessa maneira, este experimento
confirma a expectativa da ocorrncia de conjugao entre as duas linhagens de
bactrias, onde a BH100 transfere seu plasmdeo para a K12 Sm e confere a
esta genes de resistncia a diversos antibiticos, como a resistncia Tc, alm
do gene lac+. As colnias que apareceram na placa 5 correspondiam a
bactrias K12 Sm conjugadas, ou seja, com o plasmdeo da BH100, por isso
estas colnias eram azuladas e sobreviveram Tc e Sm ao mesmo tempo.
CONCLUSO
Observamos que ocorreu conjugao entre as bactrias BH100 e K12
Sm, uma vez que na placa (5) houve crescimento de colnias marcadas pela
colorao azul, mesmo na presena dos antibiticos tetraciclina e
estreptomicina. Tal fato evidencia que a linhagem K12 Sm passou a ser capaz
de metabolizar lactose e a ser resistente ao antibitico tetraciclina, alm da
estreptomicina.
5

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