ANALISIS FITOQUIMICO PRELIMINAR

I. INTRODUCCION.
El hombre utiliza las plantas con propsitos medicinales desde tiempos
prehistricos y an hoy tienen un papel clave en el mantenimiento de la salud
de la mayor parte de la poblacin mundial, pese a los avances de la medicina
moderna. Esto si se tienen en cuenta las diversas formas en que se utilizan,
que van desde la preparacin de decocciones e infusiones en zonas rurales y
pases pobres, pasando por los productos fitoteraputicos, hasta la obtencin
de principios activos en pases desarrollados para la elaboracin de
medicamentos. Se estima que en el mundo se utilizan cerca de 10000 especies
vegetales con fines medicinales, la mayor parte en sistemas de medicina
tradicional.
El estudio de los productos naturales de los vegetales comprende: los estudios
etnobotnico, fitoqumico y de bioactividad.
La etnobotnica es el estudio de las relaciones entre plantas y hombres. En la
etnobotnica se trata el cultivo, la cosecha y el uso posible y efectivo de las
plantas, los cultos que refieren a esos y el papel de las plantas en la visin del
mundo y en la lengua.
La fitoqumica estudia las propiedades y estructuras qumicas de los productos
naturales (de las plantas). A travs de lo que se conoce como marcha
fitoqumica (serie de pasos donde se observan reacciones como cambio de
color, fluorescencia, etc.) se determina la existencia de un tipo de compuesto
qumico.
La bioactividad trata de descubrir qu parte de la planta es responsable de la
actividad biolgica importante y propiedades tiles para ser estudiada.
Hay tres razones por las cuales el anlisis fitoqumico preliminar de los
productos naturales vegetales es necesario para establecer:
La identidad y fuente correcta de la droga (variacin bioqumica).
La pureza, ausencia y lmites de materias extraas (adulteracin).
La calidad y cantidad de componentes activos (deterioro).
El Anlisis Fitoqumico de una planta puede comprender los siguientes
aspectos: estudio etnobotnico de la planta; identificacin botnica; recoleccin
y coleccin de la especie vegetal; extraccin, separacin y aislamiento de los
componentes de inters; caracterizacin de los compuestos aislados;
investigacin de las rutas biosintticas referidas a compuestos determinados;
valoraciones cuantitativas.
Toda la materia prima utilizada procedente de una planta ha de ser
adecuadamente identificada, ya que puede desperdiciarse mucho tiempo y
dinero en el examen del material de origen dudoso. La eleccin de la marcha
fitoqumica preliminar depende de la naturaleza de la materia prima vegetal y
de los componentes que han de ser aislados de ella. Uno de los mtodos es
fraccionar o separar los distintos compuestos de la planta segn una regla de
afinidad; por ejemplo a ciertos disolventes.

II. OBJETIVO.
2.1. Conocer las tcnicas bsicas para realizar un anlisis fitoqumico
preliminar de una especie vegetal.
2.2. Identificar los diferentes grupos de metabolitos secundarios presentes en
su muestra.

III. FUNDAMENTO TEORICO.
Los organismos vivos pueden considerarse como un laboratorio biosinttico, no
solamente de compuestos utilizables en la alimentacin (carbohidratos,
protenas, grasas), sino tambin de una gran variedad de compuestos
(glicsidos, alcaloides, aceites voltiles, etc. que ejercen determinados efectos
fisiolgicos. Estos compuestos qumicos dan a las drogas sus propiedades
teraputicas y se les llama constituyentes activos, para diferenciarlos de los
constituyentes "inertes" que tambin estn en las drogas.
Una clasificacin de los constituyentes de los organismos vivos es en primarios
o esenciales y secundarios:
Primarios: sustancias que son necesarias para el funcionamiento
qumico normal de la clula (metabolitos, aminocidos, cidos grasos,
glicridos, monosacridos, vitaminas, hormonas, etc.)
Secundarios: sustancias que aparentemente no tienen funciones y que
solamente aparecen en especies particulares (alcaloides, aceites
esenciales, antraquinonas, etc.)
3.1. Identificacin de los grupos de metabolitos secundarios.
Debido a la diversidad de grupos funcionales que pueden estar presentes en
los componentes de una planta no existe una prueba especfica para su
reconocimiento. Sin embargo existen unos pocos procedimientos
experimentales que permiten reconocer algunos de ellos por una serie de
reacciones de precipitacin, coloracin con diferentes reactivos, su absorcin
de luz UV de 254 nm y su Rf en cromatografa en capa fina.
Las reacciones de precipitacin y coloracin se utilizan para comprobar la
presencia de los metabolitos secundarios en la muestra. Se han desarrollado
un gran nmero de reactivos de coloracin y de precipitacin, algunos de ellos
son considerados de aplicacin general, mientras otros son ms especficos y
pueden servir para clasificaciones parciales de sustancias. Generalmente se
considera que hay presencia de especfica de ese grupo de metabolitos
secundarios si dan reaccin positiva a por lo menos dos de estos reactivos; en
el caso de los alcaloides, por lo menos cuatro de estos reactivos. Los anlisis
pueden realizarse de variadas formas.
Tanto en los extractos obtenidos en frio y en caliente se realizan las pruebas
descritas a continuacin: Extraccin, destilacin a contracorriente, precipitacin
de derivados poco solubles, destilacin, absorcin e intercambio inico. En el
anlisis de las drogas crudas son muy tiles la microdestilacin, sublimacin,
precipitacin, ensayos a la gota, cromatografa de absorcin en papel. En el
caso de drogas no particulares (grasas, aceites esenciales, resinas, es til para
la identificacin la determinacin de una serie de valores tales como ndice de
iodo, punto de fusin, ndice de saponificacin, ndice de acetilo, ndice de
steres, solubilidad, viscosidad, materia insaponificable, ndice de refraccin,
densidad, poder rotatorio.
Los mtodos qumicos empleados en el anlisis de drogas puras son del
mismo tipo que los usados para compuestos qumicamente puros (gravimetra,
hidrovolumetra, colorimetra, espectrofotometra, cromatografa, etc.), pero en
muchos casos debe primero alcanzarse una determinada concentracin del
compuesto ensayado para eliminar interferencias de otros constituyentes. En
los ltimos aos el desarrollo de mtodos de separacin y aislamiento por
medio de adsorcin, intercambio inico y cromatografa de gases han facilitado
muchos anlisis.
El uso del IR hace necesario el aislamiento previo.
3.2. Resultados de los grupos de metabolitos secundarios.
La Prctica de Laboratorio permitir establecer la presencia de las siguientes
familias demetabolitos:
Aceites Esenciales,
Carotenoides,
cidos Grasos,
Cumarinas,
Taninos Catquicos,
Taninos Glicos,
Quinonas,
Alcaloides,
Flavonoides,
Compuestos Reductores,
Antocianinas,
Esteroles,
Triterpenos,
Lactonas Insaturadas,
Y Otros.


IV. PROCEDIMIENTO.







V. MATERIALES Y REACTIVOS.
5.1. Materiales.
Balanza
Vasos de precipitacin
Estufa
Matraces
Bao mara
Embudos
Cocina elctrica
Papel de filtro
Equipo de evaporacin al vaco.
5.2. Reactivos.
Solventes: Etanol, metanol, cloroformo y ter.
Tricloruro de hierro: FeCl3 al 1%.
Reactivo de Borntranger: NaOH al 10%.
Reactivo de Liebermann-Bouchard: Mezclar 5 ml de anhdrido actico
con 5 ml de cido sulfrico concentrado. Agregar esta mezcla, con
mucho cuidado y enfriando, a 50 ml de etanol (preparar poco antes de
su uso). Aspersar y calentar 10 min. A 110 C. Observar la aparicin de
una mancha fluorescente a la luz UV, a 365 nm, para la deteccin 5-3-
esteroles, otros esteroides y glicsidos triterpnicos.
Reactivo de Dragendorf, segn Munier:
Solucin a: Se disuelven 1,7 g de nitrato bsico de bismuto, en 20 g
de cido tartrico y luego en 80 ml de H2O.
Solucin b: Se disuelven 16 g de ioduro de potasio en 40 ml de
H2O.
Solucin de reserva: Mezclar volmenes iguales de las soluciones a
y b, conservar en refrigeracin.
Para utilizar, disolver 10 g de cido tartrico en 50 ml de H2O y
agregar 5 ml de la solucin de reserva, para la deteccin de
alcaloides indlicos y derivados.
Reactivo de Mayer:
Solucin a: Se disuelven 13,5 g de HgCl2 en 20 ml de H2O. Se
disuelven 49,8 g de KI en 20 ml de H2O. Se mezclan y se completa
a 100 ml. Se agrega 15 ml HCl en solucin acuosa al 17%.
Solucin b: Se disuelven 5 g de ZnCl2 en 80 ml de HCl (37%).
Solucin c: Solucin amoniacal al 15%.
Aspersar con a, se lava el cromatograma con agua durante 10 min,,
se deja escurrir, se aspersa con b y despus con c. Observar la
aparicin de manchas marrones, para la deteccin de alcaloides.
Reactivo de Wagner: Se disuelven 1 g de iodo y 10 g de ioduro de
potasio en 50 ml de H2O. Acidificar con 2 ml de cido actico glacial y
completar con H2O hasta 100 ml. Aspersar y observar formacin de
manchas marrones, para la deteccin de alcaloides.
Reactivo de Shinoda. Se adiciona a la solucin problema limaduras de
Mg y 1 ml de HCl al 0%. Observar la aparicin de coloracin rojiza,
hasta los 10 min., para la deteccin de flavonoides.
Ensayo de la Espuma: Se adiciona 5 ml de solucin etanlica en un
tubo de ensayo, se agita vigorosamente. Observar la aparicin de
espuma con una permanencia de 10 segundos, para la deteccin de
saponinas.






VI. RESULTADOS.
Leyenda:
(+) Presenta.
(-) no presenta.
Adems nuestra muestra presento saponinas, las cuales identificamos al agitar
un poco de la muestra por 2 minutos y dejar reposar por 10, manteniendo una
leve espuma, lo que indico la presencia de saponinas.

VII. CONCLUSIONES
Los resultados del anlisis fitoqumico preliminar efectuado sobre la
muestra de hojas de Origanum vulgare evidencian la presencia de
alcaloides, taninos, saponinas. No presento flavonoides, ya que al
momento de hacer el anlisis no presento un color rojizo, sino un marrn y
no tiene antisoninas porque al agregar hidrxido de sodio no cambio de
color.
METABOLITO
SECUNDARIO
ENSAYO COLORACIN RESULTADOS
Taninos glicos FeCl3 Azul +
Taninos catquicos FeCl3 Verde oscuro -
Quinonas Borntranger Rojo en fase acuosa -
Esteroides
Liebermann-
bouchard
Verde o azul-
verdoso
-
Alcaloides
Dragendorf Naranja -
Mayer Blanco o crema -
Wagner Marrn +
Flavonoides shinoda Rojo -
antoncianinas Verde castao o azul -





VIII. DISCUSION DE LOS RESULTADOS.
8.1. Cules son los resultados ms resaltantes obtenidos de la marcha
fitoqumica preliminar realizada por su Grupo de Trabajo?
Principalmente, al empezar nuestro anlisis nos dimos cuenta que la
muestra de organo nos dio por resultado de que presentaba taninos
glicos, los cuales son polmeros heterogneos formados por cidos
fenlicos, en particular cido glico, y azcares simples. Son ms
pequeos que los taninos condensados y son hidrolizados con ms
facilidad, slo basta cido diluido para lograrlo. La mayora tiene una masa
molecular entre 600 y 3000.los cuales son los que dan un ligero olor
caracterstico, sabor amargo y astringente, y su color va desde el amarillo
hasta el castao oscuro

8.2. Son los resultados obtenidos en el anlisis fitoqumico preliminar de
su especie vegetal concordantes con los reportados en la bibliografa?
De acuerdo Nelson Genovs (1980) la hoja de organo en un anlisis
preliminar presenta, taninos glicos, alcaloides triterpenos, saponinas.
Segn los resultados obtenidos y con el anlisis preliminar que realizamos
al organo, podemos decir que obtuvimos la gran parte de estos resultados
concordando con Nelson en los resultados del anlisis preliminar,
obteniendo as taninos glicos, saponinas y alcaloides. Claro los cuales
tambin pudieron de alguna manera haber sido afectados por el solvente
(alcohol) que se us en este anlisis, ya que si bien sabemos el alcohol
podra hacer que varen los resultados, arrojndonos datos errneos.

8.3. Las propiedades medicinales/colorantes/cosmticas/industriales de la
especie vegetal analizada por su Grupo, podran explicarse por la
presencia de los metabolitos secundarios encontrados?
Si, debido a que est formado por taninos glicos lo cuales se encuentran
en dicotiledneas las cuales estn presentes en la familia Lamiaceae, en
las que se encuentra el organo y sirve para tratar enfermedades como
clicos, reumatismo, artritis, etc.
8.4. Cul sera la utilidad, como profesional agroindustrial, que le
proporcionar el anlisis fitoqumico preliminar de su especie vegetal?
Conocer qu principios activos posee, en nuestro caso el organo, y as
poder producir productos capaces de mejorar la calidad de vida de las
personas de una manera sana y natural.
El organo se podra utilizar en el campo farmacutico como comprimido,
estomacal, digestivo.

VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS UTILIZADAS.
Nelson Genovs Leonor (tesis de graduacin) 1980. Obtencin y
aprovechamiento de extractos vegetales.
Cumpa J, Uribe A. "Plantas medicinales- propiedades y usos. Primera
edicin 2003 Tomo 2. BIBLIOTECA DE LA UNIVERSIDAD CESAR
VALLEJO













ANEXOS
Fotos del proceso de anlisis fitoquimico preliminar del oregano






















ANEXO
ESPECIE VEGETAL EN ESTUDIO: OREGANO
1.1 INFORMACIN GENERAL
1.1.1. Nombre cientfico: Origanum vulgare
1.1.2. Nombres comunes: Oregano.
1.1.3. Taxonoma:
Reino: Plantae.
Divisin: Magnoliophyta.
Clase: Magnoliopsida.
Orden: Lamiales.
Familia: Lamiaceae.
Gnero: Origanum.
Especie: O. vulgare.

1.1.4. Descripcin del oregano:
Planta perenne de la familia de las labiadas de hast 80 cm. Tallos
erectos, pilosos y aromticos. Hojas ovales, pecioladas, dentadas o
enteras. Flores rosadas, violceas o blancas de hasta 7 mm.,
reunidas en inflorescencias redondeadas terminales.
1.1.5. Principios activos:
Acidos: rosmarinico (planta y hojas) palmtico, esterico,
oleico, ursolico, cafeico,caprico(planta).
Aceite esencial: rico en timol, cineol, carvacrol, borneol, beta-
bisolobeno, limoneno, alfa-pineno,mirceno,canfeno, alfa
terpineno.
Minerales: potasio, magnesio, manganeso, zinc, cobre, hierro
Taninos: (planta)
Vitaminas: niacina, betacarotenos(planta)
1.2. ORIGEN Y DISTRIBUCIN GEOGRFICA
El nombre organo proviene de la palabra griega Origanum y se deriva de
dos palabras, oros montaa y ganos alegra, en alusin a la apariencia
festiva que le da esta planta a las laderas de las montaas donde crece
(Olivier, 1997).
Con el nombre genrico de organo se conoce a diversas especies de plantas
pertenecientes a las familias verbenaceae, labiadas y compuestas, abarcando
170 gneros y 3000 especies. Las especies ms importantes desde el punto
de vista econmico son: Lippia berlandieri, Origanum vulgare, y Lippia
palmeri.
Los principales tipos de organo de importancia econmica en el mundo son:
MEXICANO (Lippia berlandieri Schauer;Lippia graveolens HBK). TURCO
(Origanum onites L.). GRIEGO (Origanum vulgare ssp. Hirtium (Link)
letswaart).ESPAOL (Coridohymus capitatus (L.) Hoffmanns y Link)
(Lawrence, 1984).
El organo, es una planta originaria de Mxico, conocida con varios nombres
como organo del cerro, O. cimarrn O. silvestre, O. mexicano, mejorana
(Flores, 1991). Las plantas de las diferentes familias de organo mexicano se
encuentran en estado silvestre, en regiones ridas y semiridas de, al menos,
24 estados de la repblica. Sus principales hbitats estn en suelos
generalmente pedregosos de cerros, laderas y caadas entre los 400 y 2000
metros de altitud, aunque se le halla en mayor abundancia entre los 1400 y
1800 metros de altitud.

1.5 ECOSISTEMA

Clima: Templado, relativamente hmedo.
Suelo: No es exigente en cuanto a calidad de suelos. Se adapta muy
bien a diferentes tipos de suelos, aunque son ms aptos para el cultivo
los franco-arenosos de mediana fertilidad, buen drenaje y algo
hmedos. Suelos excesivamente frtiles producen abundante
vegetacin y menor rendimiento en flores y, como consecuencia,
dificultades de cosecha, maduracin despareja y menor rinde.
Biotipo de poblaciones naturales: Habita en terrenos secos de los
1,200 a los 2,000 m de altitud, se adapta a los lugares secos y
arenosos como son las montaas. Esta planta es muy comn, tambin
crece en prados y lugares herbosos, tiene que tener luz suficiente y la
humedad debe ser muy poca, como un medio litro diario.

1.6. PRCTICAS CULTURALES
El organo para crecer de la mejor manera y dar todo su aroma tiene que
desarrollarse al sol, al calor y al aire. Cultivado en lugares sombreados y
frescos la calidad y la cantidad de aceitas esenciales disminuye
sensiblemente. Son las plantas que crecen en proximidad de las zonas
marinas qu tienen la mayor fragancia.
A medida que la vegetacin se seca es necesario removerla.
El organo no es una planta particularmente grande por que tiene que ser
hecho el control de las hierbas infestantes.
Tienen que ser hechas bastante regularmente las elaboraciones de la tierra
de modo que remover la costra superficial que devuelven el terreno
asfctico sobre todo si el cultivo ocurre en tierra arcillosas.
RIEGO
El organo prefiere suelos secos, debe ser regado poco y a menudo teniendo
cuidado a no ensopar el terreno y no dejes estancamientos hdricos qu no
estoy en ningn modo tolerado que causan la putrefaccin de las races. Las
mayores solicitudes hdricas se tienen cuando la planta todava es joven y
durante la floracin.
SUELO - TRASPLANTE
El organo es una planta que se conforma tranquilamente con cualquier tipo de
terreno tambin pobre, aunque prefiere tierras calcreas, permeables y secas y
con una buena dosis de sustancia orgnica.
No tolera sobre todo los suelos hmedos de invierno si asociaran a
temperaturas demasiado bajas.
ABONO
Las plantas de organo son muy rsticas y no solicitan abonos particulares. A
la reanudacin vegetativa se hace un abono completo con Nitrgeno, Fsforo y
Potasio. Despus de cada corte es hacer bien un nuevo abono azoado para
estimular la planta al crecimiento.
FLORACION
La floracin del organo ocurre en verano y hasta el otoo (de julio a
septiembre - octubre) y las semillas maduran del verano al otoo, agosto -
septiembre - octubre.
PODA
Por el organo no se habla de real poda pero sencillamente de eliminacin de
las partes daadas o bajos para evitar la manifestacin de enfermedades.
MULTIPLICACIN
El organo se multiplican por semilla, por esqueje o por divisin de la planta.
La multiplicacin por semilla tiene con si la desventaja que, sucediendo la
variabilidad gentica, no se tiene la certezza que se tendrn plantas iguales a
las plantas madre de organo, en el caso que se quiera conseguir una
determinada planta de organo o no se ha ciertos de la calidad de la semilla
que est utilizando, es hacer bien la multiplicacin por esqueje o por divisin de
la planta madre.

1.8. CULTIVO
PLANTACIN.
Crece fcilmente en terrenos algo hmedos. Se compone de marcos de
plantacin variables segn las zonas y suelos, variando de unos 30 centmetros
entre filas (sin exceder los 75 centmetros) y 20-35 centmetros entre plantas
dentro de la hilera. La densidad ptima de plantacin es de unos 40.000
pies/hectrea. Hay que tener cuidado con las escardas para no hacer dao a
las races.
FERTILIZACIN.
Debe considerarse, para el establecimiento del plan de abono de fondo, la
duracin del cultivo. sta puede variar un mnimo de 8 aos a un mximo de 10
aos. Por lo tanto se aporta estircol a razn de 3-4 tm/hectrea que se
enterrarn en el momento del laboreo principal (aradura).
Adems, cada ao se deber asegurar un aporte de los tres elementos
fundamentales. Para estimular la vegetacin y por tanto la produccin de
biomasa, se aconsejan valores de 120-150 unidades de nitrgeno, equilibrados
con aportes de 80-100 unidades de fsforo y de 100-120 unidades de potasio.
El nitrgeno debe suministrarse en las fases crticas, es decir, en la
recuperacin vegetativa y tras las siegas. En particular, despus de la ltima
recoleccin, la planta debe recuperar las energas prdidas para superar bien
el invierno y es precisamente de cmo salga de l de lo que depende la
produccin del ao siguiente. En otros trminos, el abono debe tender a
obtener el mximo, pero tambin a prolongar lo ms posible la duracin de la
plantacin.
LABORES CULTURALES.
La vida til del cultivo es de 8-10 aos, por lo que el suelo tiene tendencia a
compactarse, lo que evitaremos mediante las binas y escardas necesarias. Las
escardas deben efectuarse cada ao en el nmero suficiente para mantener
controladas las malas hierbas y, al mismo tiempo, ventilar el terreno (el
organo sufre mucho de asfixia radicular en los casos de estancamiento
hdrico).
Al tratarse de una especie plurianual, se ha considerado el problema del
deshierbe qumico y se efecta en algunos pases. Los herbicidas selectivos
normalmente utilizados son dos: Lenacilo (materia activa del Venzar) en dosis
de 1 kg/ha de producto comercial el primer ao, en el momento de la
plantacin. El segundo es el Terbacilo (materia activa del Simbar) controla
mayor nmero de malas hierbas, ser utilizado antes del arranque de la
vegetacin, a partir del segundo ao, en dosis de 1 kg/ha de producto
comercial.
Las exigencias hdricas del cultivo son ms fuertes en la fase de germinacin
de las semillas y de arraigo de las plantas despus del trasplante, pero se
dejan sentir tambin despus de la primera siega.
1.9. USOS
La gran cantidad de propiedades de esta hierba medicinal se presta para una
gran cantidad de usos en enfermedades comunes y a veces no tan comunes.
Entre los usos del oregano podemos recomendar:

El te de oregano es un excelente digestivo, ya que ayuda con la
indigestin, flatulencia, vmitos y diarrea.
El te de oregano tambin es usado para aliviar los problemas de
infecciones urinarias, infecciones bronquiales, glndulas inflamadas y
afecciones similares.
La pasta hecha de hojas secas de oregano es usada exitosamente
para tratar dolores particulares del reumatismo, artritis, inflamaciones,
picazn, msculos inflamados y otros dolores musculares.
El aceite esencial de oregano es usado en conjunto con jabn lquido
para tratar problemas de acn y espinillas, debido a su efecto
antibitico.
Otro de los usos del aceite de organo es su inhalacin en
vaporizadores para aliviar el asma y congestiones severas.
El aceite tambin es usado para tratar el mal aliento, problemas de
encillas, lceras bucales, ampollas, etc.
Un par de gotas de aceite de oregano mezcladas con shampoo
eliminan cualquier infestacin del cuero cabelludo.

1.10. CONTRAINDICACIONES DEL OREGANO
El organo es considerado un remedio suave con mnima toxicidad, pero
algunas personas pueden presentar sntomas alrgicos como dificultad
para respirar, picazn, inflamacin. No usar en caso de tener reacciones
alrgicas a esta u otras hierbas.
Debido a que es un estimulante de las paredes uterinas, est contraindicado en
mujeres embarazadas.
El aceite es una substancia muy concentrada y voltil, y no debe ser utilizada
directamente en la piel.