RESUMEN En la primera parte se realizo la prueba de desnaturalizacin en que se coloco en un tubo de ensayo una pequea cantidad de clara de huevo, y se le aadi 5 gotas de acido actico y se procedi a calentar el tubo a la llama del mechero. En la segunda prueba se aplico la reaccin Xantoproteica al poner en el tubo de ensayo 2 a 3 cc. de solucin problema (clara de huevo), y se le aadi 1 cc. de HNO 3 concentrado, y se calent a bao maria, se enfri en agua y se le aadi gota a gota una disolucin sosa al 40%. En la reaccin de Biuret se tomo un tubo de ensayo y se puso unos 3cc. de albumina de huevo y se le aadi 2cc. de solucin de hidrxido sdico al 20%, a continuacin 4 o 5 gotas de solucin de sulfato cprico diluida al 1%. Y en la ltima parte se puso en el tubo de ensayo 3 cc. de albumina de huevo y se aadi 2 cc. de solucin hidrxido sdico al 20%, se aadi 10 gotas de solucin acetato de plomo al 5 % y se calent el tubo hasta ebullicin.
Palabras Clave: protenas, pptidos, aminocidos, clara de huevo
INTRODUCCION
Las protenas constituyen sin duda uno de los grupos de molculas de gran trascendencia en los seres vivos a gama considerable de funciones diferentes se deben a la existencia de miles de protenas, cada una plegada en una estructura tridimensional especifica, que le permite interactuar con un gran numero y muy variado grupo de molculas. El gran numero de protenas existentes, su gran variedad de actividades biolgicas y las diferencias qumicas existentes entre las protenas homlogas, de los distintos organismos, determinan que la extraccin, purificacin y la caracterizacin de las protenas, haciendo que constituyan un punto central en la investigacin bioqumica. En este experiencia se realizo un estudio a las protenas de la clara de huevo por medio de diferentes reacciones con fines diferentes, tales como la desnaturalizacin, la RxXantproteica, Rx de Biuret y la Rx de azufrados. La razn de tomar al huevo como objeto de investigacin es por quees un complicado sistema biolgico y probablemente el ingrediente culinario ms utilizable y utilizado universalmente. En la dieta sustituye con frecuencia a la carne y al pescado; debido a sus propiedades extraordinarias como agente espumante, emulsionante, espesante y estabilizante, Muchas de estas propiedades se deben a la cantidad y tipo de protenas presentes en el mismo, por lo que es de inters estudiar los factores que afectan el comportamiento de las mismas, como es el caso de la desnaturalizacin que es una modificacin de la estructura de la protena y que da lugar a cambios de las propiedades qumicas, fsicas y biolgicas. Y se toma especficamente a la clara de huevo por que constituye una gran fuente de protenas muy tiles para su estudio, adems de otros componentes como pueden ser minerales, materiales grasos, vitaminas y glucosa. Entre las protenas se encuentran la ovoalbmina, que es la protena ms abundante, la ovomucina, la ovomucoide, la conalbmina y la lisozima. La clara de huevo contiene 11,12% de protenas, un 0,70% de hidratos de carbono y un 88,00% de agua.
MATERIALES Y METODOS Materiales y reactivos: Tubos de ensayo mechero Clara de huevo Acido actico 1 cc. De HNO 3 concentrado. Agua NaOH al 40% 2 cc. de solucin de hidrxido sdico al 20% Solucin de sulfato cprico diluida al 1% Solucin de acetato de plomo al 5%
Mtodos: Desnaturalizacin. Reaccin Xantoproteica. Reaccin de Biuret. Reaccin de los aminocidos azufrados.
RESULTADOS
Prueba A la clara de huevo
resultados p o s i t i v a n e g a t i v a
Desnaturalizaci n.
Se formaron cogulos
X
Rx. Xantoproteica. Al aadir 1cc. de NNO3 y calentar a bao mara a 100 C,se formaron tres fases la primera de color amarillo, la segunda de color blanco y la ultima amarillo nuevamente; al finalizar se dejo enfriar tomando un color anaranjado homogneo.
X
Rx. De Biuret.
Al adicionar los dos reactivos propios de esta prueba el resultado fue que la sustancia tomo una coloracin violeta.
X
Rx. De los a.a azufrados.
Luego de aadir el reactivo de la prueba a la clara de huevo y calentar, se formo un precipitado de color negro
X
EVIDENCIA DE LOS RESULTADOS - RxXantoproteica:
- Rx de Biuret:
- Rx de los a.a azufrados:
ANALISIS DE RESULTADOS El huevo es un alimento de origen animal que proporciona la mejor protena de todos los alimentos ya que contiene todos los aminocidos esenciales en las proporciones exactas que necesita el organismo para el crecimiento ptimo y el mantenimiento del tejido magro, metablicamente activo. Las protenas incluidas en la clara del huevo son: La ovomucina que hace el 1,5% de la albmina protenica existente en el huevo, a pesar de ello es el ingrediente que mayores propiedades culinarias tiene debido a que es la responsable de cuajar el huevo frito y pochado. Su misin biolgica es la de ralentizar la penetracin de los microbios. La ovoalbmina es la ms abundante del huevo (y es la protena que primero se cristaliz en laboratorio, en el ao 1890); 6 se desnaturalizafcilme nte con el calor. La conalbmina que hace el 14% del total de las protenas de la clara de huevo. El ovomucoide que alcanza una proporcin del 11%, es el causante de muchas de las respuestas alrgicas al huevo. La lisozima alcanza el 3.5 % y acta como antibitico. La avidina que alcanza una proporcin de 0,005%, se une a la Biotina y la bloquea. Flavoproteina un 0.8% precursor de vitaminas. Ovoinhibidor 1.5% principal enzima antiproteinasa de la clara 1 .
Dentro de estas protenas hay aminocidos que las constituyen tales como: Porcentaje (%) de aminocidos por peso
En la primera parte de la experiencia sehizo la desnaturalizacin de las protenas quehan adoptado una estructura en el espacio especfica, esencial para el desarrollo de su funcin biolgica. Esta estructura tridimensionalse caracteriza por un plegamiento determinado de su estructura. La desnaturalizacin de las protenas ocurre cundo se pierde esta conformacin espacial especfica 2 .
En este caso se tomo una pequea cantidad de clara de huevo que es gran parte albuminas en agua,a la que se leaadi 5 gotas de acido actico y se someti al calor, estos dos procesos anteriores son factores desnaturalizantes al ser cambios bruscos de calor y pHque modifican la forma de las molculas de la protenas y provocanque la energa cintica de las molculas desorganicen la envoltura acuosa de las protenas, alterando la estructura secundaria, terciaria o las dos. Cuando esto sucede, la protenano puede realizar sus diversas funciones biolgicas en el organismo 3 ,por consiguiente se puede decir que ha perdido su funcin biolgica.Adems se puede observar otros efectos como la disminucin drstica de la solubilidad ya que los residuos hidrofbicos del interior aparecen en la superficie y la ruptura de los puentes de hidrgeno facilitan la agregacin intermolecular que provocan la precipitacin o como se pudo observar la formacin de cogulos, y cambios en las propiedades hidrodinmicas de la protena: aumenta la viscosidad y disminuye el coeficiente de difusin 4 . En esencia consiste en convertir las largas cadenas de aminocidos que stas presentan en su estado crudo en una especie de burbujas o glbulos proteicos. Esta globulizacin de la protena es el causante de la gelificacin de la clara de huevo. Puede reconstituirse de nuevo como clara lquida aadindole agua. Una protena desnaturalizada cuenta nicamente con su estructura primaria. Por este motivo, en muchos casos, la desnaturalizacin es reversible ya que es la estructura primaria es la que contiene la informacin necesaria y suficiente para adoptar niveles superiores de estructuracin.
Estado nativo estado desnaturalizado
Con la misma solucin problema (clara de huevo) se realizo la reaccin Xantoproteica que identifica aminocidos aromticos qumicos a travs de la reaccin de la nitracin debida a la formacin de un compuesto aromtico nitrado de color amarillo, cuando las protenas son tratadas con cido ntrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas protenas con aminocidos portadores de grupos bencnicos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un lcali vira a un color anaranjado oscuro 5 . En este caso la clara de huevo al tener protenas que contengan tirosina y fenilalanina, se formo el compuesto aromtico nitrado al observar fases de color amarillo. En la reaccin de Biuret se identifico los enlaces peptidicos. Esta prueba se basa en la reaccin que se produce entre los nitrgenos de los grupos animo que participan en los enlaces peptdicos y los iones cprico (Cu2+) del CuSO4, lo que da lugar a la formacin de un compuesto, llamado biuret, cuyo color oscila entre azul, violeta y rosa, dependiendo de la naturaleza de la protena detectada 6 . Esta reaccin solo es positiva cuando hay ms de un enlace peptidico o hay presencia de protenas es negativo a los aminocidos, por tanto con los resultados obtenidos podemos decir que al obtener una coloracin violeta la clara de huevo presenta 2 o ms enlaces peptidicos consecutivos (- CO- NH -) que se destruye al liberarse los aminocidos, y protenas que se ponen en contacto con un lcali concentrado, se forma una sustancia compleja denominada biurety. Y para finalizar se aplic la reaccin de los aminocidos azufrados que se pone de manifiesto por la formacin de un precipitado negruzco de sulfuro de plomo. Se basa esta reaccin en la separacin mediante un lcali, del azufre de los aminocidos, el cual al reaccionar con una solucin de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo 7 . En el caso de la clara de huevo los enlaces peptdicos se hidrolizaron con facilidad al proceder a calentar, al agregarse la base lareaccin dauna separacin del azufre de los aminocidos, el cual al reaccionar con una solucin de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomode color negro. CONCLUSIONES - Las protenas constituyen una de las molculas ms importantes en el organismo ya que cumplen muchas funciones vitales. - En las reacciones donde se obtuvo precipitacin se debi a un cambio en el estado fsico de la protena, mientras que en la coagulacin se ha producido un cambio en el estado fsico y en la estructura qumica por eso es irreversible. - La desnaturalizacin de protenas se da en la clara de los huevos, que son en gran parte albminas en agua. - Para saber si una sustancia desconocida, es una protena se utiliza el Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de protenas, pptidos cortos y otros compuestos con dos o ms enlaces peptdicos. - Una protena desnaturalizada cuenta nicamente con su estructura primaria. Por este motivo, en muchos casos, la desnaturalizacin es reversible ya que es la estructura primaria es la que contiene la informacin necesaria y suficiente para adoptar niveles superiores de estructuracin.
CIBERGRAFIA
1. El huevo (alimento, tomado de http://es.wikipedia.org/wiki/Huev o_(alimento). 2. La desnaturalizacin de protenas, tomado de, http://www.bloogie.es/educacion /ciencias-naturales/315-la- desnaturalizacion-de-proteinas
3. Desnaturalizacin de las proteinas, tomado de, http://www.nutricionnatural.info/t ipos/desnaturalizacion-de-las- proteinas.html 4. Naturalizacin delas proteinas, tomado de, http://www.ehu.es/biomoleculas/ proteinas/desnaturalizacion.htm 5. Reconocimiento de las proteinas, tomado de, http://www.angelfire.com/scifi/an arkimia/Reconocimiento%20de %20Protenas.htm 6. Estudio de las protenas, tomado de, http://iesptolosa.net/ies/dptos/dp to_biologia_geologia/bto_1/prac tica_de__proteinas.pdf 7. Reconocimiento de las protenas, tomado de, http://www.angelfire.com/scifi/an arkimia/Reconocimiento%20de %20Protenas.htm