INTRODUCCION

Los cultivos in-vitro han sido desarrollados con el propsito de reproducir organismos bajo
condiciones estriles, ptimas y controladas; estas condiciones dependen directamente del
organismo involucrado y el tipo de proceso vara de acuerdo a la finalidad del proyecto.
En la elaboracin de medios aptos para el cultivo de vitroplantas se requiere de los 13 nutrientes
esenciales para el crecimiento, sales en medio acuoso o semislido para facilitar la absorcin de
estos nutrientes y algunos componentes orgnicos (carbohidratos, vitaminas, gelificante, etc.)
para el mantenimiento y sostn de la planta.
Aunque actualmente contamos con literatura detallada acerca de tcnicas para la reproduccin in-
vitro de un gran nmero de especies vegetales, an existen algunas que presentan dificultades en
procesos como el enraizamiento, obligando a los investigadores a realizar ensayos arduos para
determinar un mtodo efectivo. A menudo se desarrollan nuevos protocolos probados
empricamente para la micropropagacin, pero an as, no se ha logrado establecer un diseo
racional que tenga en cuenta tanto la composicin centesimal de la clula vegetal como el
conjunto de condiciones que regulan el crecimiento y la diferenciacin celular; de ah la
importancia de aprovechar al mximo los factores que se pueden regular con eficacia como la
composicin del medio de cultivo.
En 1962, Murashige y Skoog (MS) desarrollaron un medio de cultivo nutritivo con el que lograron
un rpido crecimiento en tejidos de tabaco. La composicin de sales del medio MS ha demostrado
ser ptima para casi todas las especies y ha demostrado tener gran xito en la obtencin de
vitroplantas desde el ao 1970 cuando se comenz a usar en procesos de hibridacin,
diferenciacin, embriognesis, produccin de metabolitos secundarios y recientemente en
transformacin gentica y mejoramiento asistido por marcadores moleculares.

OBJETIVOS
Conocer todo el proceso de preparacin del medio de cultivo para la ejecucin de los trabajos de
cultivo de tejidos vegetales.

MATERIALES Y METODOLOGA
La preparacin del medio basal MS (Murashige y Skoog, 1962) se llev a cabo bajo
procedimientos establecidos, a saber:
Preparacin de las soluciones Stock
La preparacin de las soluciones madres para el medio basal se han llevado a cabo con
anterioridad en el laboratorio. [Anexo 1]
Preparacin del Medio
Se dio inicio lavando los frascos de cultivos y cristalera a utilizar, luego definimos el volumen de
medio MS a preparar, para el caso fue 400 ml de medio. Tomamos 200 ml de agua destilada en
una probeta y la llevamos a un erlenmeyer posteriormente llevamos a cabo la adicin de las
soluciones stock en el orden establecido y cantidades requerida. [Anexo 2].
Posteriormente el medio es suplementado con:
Azcar [ Sacarosa] 12 g
Myo Inositol 40 g

Luego aforamos hasta 400 ml, consecuentemente determinamos el pH del medio con la ayuda
del pH-metro, l cual debe ser 6,0 y se adiciona 3,6 gr de agar para finalmente llevarlo a
calentamiento hasta su clarificacin.
Luego de reposado el medio se le adiciono 0,4 mL de vitaminas MS y 1,2 mL de la hormona
2,4-D.
Ya preparado el medio se sirvi en los frasco, aproximadamente un volumen de 25 mL y se
procedi a taparlos con papel aluminio y a rotularlos. Luego se llevaron a esterilizacin en el
autoclave por 20 minutos a 121C [1,5]. Finalizado la esterilizacin se guardaron en el rea
trampa a temperatura ambiente o se refrigeraron si se van a dejar por ms de cuatro das

RESULTADOS Y DISCUSIONES
Como indicador principal del ptimo desarrollo de la prctica de laboratorio se defini la
inocuidad del medio de cultivo preparado.








Figura 1. Medio MS despus de la incubacin. En la figura de la izquierda observamos los frascos con los medios
debidamente sellados y rotulados. En la figura de la derecha se observa el medio MS libre de contaminacin [Patgenos] y
con una consistencia optima.
Al llevar a cabo la preparacin del medio MS inferimos su caracterstica distintiva, su alto
contenido de sales, especialmente las sales de K y de N, adems de B, Mn y Zn en cantidades altas
lo que permite un gran aporte de componentes inorgnicos necesarios para el desarrollo del
tejido vegetal.
Entre los factores ms importantes a tener en cuenta para lograr la respuesta morfolgica deseada
en un cultivo de tejido in vitro, es la composicin del medio de cultivo
1
por ello la preparacin del
medio basal MS debe estar fundamentada en condiciones de asepsia y as lograr la no
contaminacin del medio y un punto de partido para la eficacia del cultivo vegetal.
Los componentes del medio juegan un rol importante a la hora de obtener resultados, para ello se
debe primero saber qu objetivos se persiguen, especie vegetal que se trabajan, tipo de Explante
y as formular el medio ms ptimo, en el desarrollo del medio MS elaborado en esta prctica
inferimos como objetivo perseguido la callognesis o la formacin de callos, hecho que es
respaldado por las caractersticas de la hormona presente en el medio, la 2,4 Dicloro
fenolxiAcetico [2,4 D]
2
CONCLUSIONES
El desarrollo de cultivos vegetales se presenta como una herramienta para la fuente de alimentos
enfocada en el futuro, por ello se debe controlar y mejorar las etapas que conlleva este proceso.
En ese orden de ideas los medio de cultivo son la base para iniciar el desarrollo del cultivo,
funcionan como soporte y suministro de agua, nutrientes y reguladores del crecimiento y
desarrollo vegetal de ah la importancia de conocer y tener las competencias para formular y
preparar adecuadamente medios de cultivo.
REFERENCIAS
1. BADILLO, J., OLIVER M., MORENO K., PACHECO V., CORTES H. [2009]. MANUAL DE
LABORATORIOS DE CULTIVO DE TEJIDOS. INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL-
Departamento de bioprocesos.

2. CUELLAR, J., PROPAGACIN VEGETATIVA in vitro A PARTIR DE HOJAS JVENES DE CAA DE
AZCAR (Saccharum officinarum L.) AGRONOMIA MESOAMERICANA 8(1): 74-80.

ESPINOSA, A et al. Efecto del tipo de explante y la concentracin de cido 2,4-diclorofenoxiactico en
la formacin de callos en Morus alba L. Pastos y Forrajes [online]. 2012, vol.35, n.4, pp. 407-416. ISSN
0864-0394. (http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S0864-03942012000400006&script=sci_arttext)
PROPAGACIN VEGETATIVA in vitro A PARTIR DE HOJAS JVENES DE CAA DE AZCAR
(Saccharum officinarum L.) (http://www.mag.go.cr/rev_meso/v08n01_074.pdf)
http://books.google.com.co/books?id=EXijYNw55DUC&pg=PA426&lpg=PA426&dq=2,4+D+calloge
nesis&source=bl&ots=0ZCnd9RxCw&sig=pmESKrCPAtu15eXEcCcqvvR6L1s&hl=es&sa=X&ei=hg
YdU733LomTkQfxuIHADA&ved=0CGgQ6AEwBw#v=onepage&q=2%2C4%20D%20callogenesis&f
=false
Soluciones stock de
macronutrientes,
micronutrientes, cloruro de
calcio, ioduro de potasio,
Fe-EDTA, vitaminas y
hormonas.
Preparar en agua
destilada en una
probeta con la mitad
de volumen y
agregarla al
Erlenmeyer.
Adicionar los
componentes en orden:
macro y micro
nutrientes, CaCl
2
, IK, Fe-
EDTA, sacarosa y myo-
inositol.
Aforar y ajustar pH
Calentar el medio y
aadir el agar antes
de que hierva.
Agregar vitaminas
y hormonas
cuando enfri .
Tapar, rotular y
autoclavar.
Servir el medio
ANEXO 3. CUESTIONARIO
Realice un diagrama d eflujo del proceso de preparacin del medio de cultivo.
























Frascos de cultivos
lavados y
esterilizados
previamente
(solucin
jabonosa,
hipoclorito de
sodio)
Para la cantidad de
medio que
necesita, calcular
las soluciones que
se van a preparar
Por qu se le aade al medio el 2,4 D? A qu grupo hormonal pertenece y qu funcin realizar
en el medio de cultivo? Este medio de cultivo ser para obtener plantas completas? Justifique su
respuesta.
La dosis de 3mg/l de 2,4-D indujo la callognesis en las variedades evaluadas. Esta dosis es
recomendada por Heinz y Mee (1969), Payan y Tarcon (1977) y Villalobos (1986) para otras
variedades. Pertenece al grupo de la Auxinas, su funcin en el medio de cultivo es el crecimiento
del callo al inducir el crecimiento y alargamiento celular (Dubln, P. (1991). Teniendo en cuenta
que este medio de cultivo solo tiene esta hormona No producir una planta completa o vitroplanta;
pues para este proceso la planta debe sufrir la caulogenesis y la rizogenesis respectivamente con
su hormona (auxinas y citoquininas).
Qu tipos de formacin deber esperar a partir de este medio de cultivo? Justifique su respuesta.
En presencia del 2,4 D es evidente la aparicin de varios tipos de callo morfolgicamente
diferentes varias semanas despus de la iniciacin del cultivo.