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Universidade Estadual da Paraba UEPB

Centro de Cincias e Tecnologias TCC


Eng. Sanitria e Ambiental
Laboratrio de Microbiologia



Amostra de Solos









Equipe: Kamila Lacerda
Rodrigo Andrade
Whelton Brito



Campina Grande PB
Junho de 2012
Relatrio referente prtica da
II Unidade Temtica da
componente curricular
Microbiologia Experimental.
Ministrada pela Prof Hlvia
Arajo.







Introduo
O solo habitado por uma enorme variedade de microorganismos vegetais
(microflora do solo) e animais (micro fauna do solo) e ainda por organismos animais
que vo de dimenses microscpicas a dimenses mdias ou mesmo relativamente
grandes (macro fauna).
As bactrias so o grupo mais importante de organismos do solo, no qual, em
condies favorveis, atingem nmeros extraordinariamente elevados. H bactrias
aerbias obrigatrias, anaerbias obrigatrias e facultativas. As primeiras obtm o seu
oxignio do ar, e s prosperam, portanto em solos bem arejados. As segundas no
necessitam de oxignio gasoso, ou so mesmo prejudicadas por este, pelo que se
encontra em solos compactos e/ou com drenagem deficientes; a sua atividade muito
inferior das primeiras. As chamadas facultativas constituem o grupo mais importante,
e atuam tanto num caso como no outro. Desempenham papel importante na
decomposio de resduos orgnicos e na formao do hmus, e incluem organismos
fixadores de azoto amoniacal em azoto ntrico (nitrificaro). Das bactrias fixadoras de
azoto, uma (Rhizobium) vivem em simbiose com leguminosas, fixando azoto em
ndulos das razes destas. Outras, no-simbiticas, obtm o azoto o azoto do ar e
energia da decomposio de resduos vegetais. o caso do Azotobacter e da
Beijerinckia; aerbios, e do Clostridium pastorianum, anaerbio. As bactrias so, em
geral, bastante exigentes em clcio e prosperam especialmente em solos de reao
levemente cida a levemente alcalina.
Os fungos podem atingir no solo uma massa total superior das bactrias. So
provavelmente todos heterotrficos e, em certas condies, parecem ser dos organismos
do solo mais aptos para decompor a lenhina. O acmulo de miclios de fungos ajuda a
melhorar a estrutura fsica do solo, com isso as leveduras so frequentemente
encontradas no solo.
Algas. Podem iniciar o acmulo de matria orgnica, tendo a associao com os
fungos fazendo a mineralizao do solo.
Protozorios e vrus. Ocorrem em tecidos de plantas e em animais mortos, bem
como em excrementos dos mesmos.
Amostragem do Solo
A amostra do solo uma pequena poro de solo (terra) coletada de forma que
possa representar o solo por inteiro. Cada hectare de terra tem centenas de toneladas de
solo, e a amostra s vai ter cerca de meio quilo. Assim, muito importante coletar o
solo da melhor maneira para que a amostra indique realmente o que ele pode oferecer
para as culturas.
Para a retirada da amostra do solo deve-se fazer uma diviso da rea, cada uma
dessas reas dever ser uniforme quanto cor, topografia, textura e quanto s adubaes
e calagem que recebeu. reas pequenas, diferentes das circunvizinhas, no devero ser
amostradas juntas. Retiram-se amostras de 15 a 20 pontos diferentes, que devero ser
colocadas juntas em um balde limpo. Todas as amostras individuais de uma mesma rea
uniforme devero ser muito bem misturadas dentro do balde, retirando-se uma amostra
final, em torno de 500g. As amostras devero ser retiradas da camada superficial do
solo, at a profundidade de 20 cm, tendo antes o cuidado de limpar a superfcie dos
locais escolhidos, removendo as folhas e outros detritos. No retirar amostras de locais
prximos a residncias, galpes, estradas, formigueiros, depsitos de adubos, etc. No
retirar amostras quando o terreno estiver encharcado. No caso de culturas perenes
(frutferas, por exemplo) sugere-se tambm retirar amostras entre 20 e 40cm de
profundidade.
Vrios fatores so levados em conta em relao coleta do solo: localizao,
segurana, equipe, recipientes adequados, tipos de amostras, amostra de solo,
armazenamento, transporte at a localizao de anlises.

Objetivo
Analisar a presena de microrganismos em uma amostra de solo.



Materiais
10g de amostra do solo.
Erlenmeyer.
gua destilada.
Pipeta.
Pipetador.
Tubos de ensaio.
Ala de Platina.
Bico de Bunsen.
Caldo Verde bili brilhante.
Lembrando que todos os materiais utilizados estavam esterilizados.

Procedimentos
Foi utilizada a tcnica de tubos mltiplos para coliformes fecais (termotolerante)
na amostra do solo:
Pesou-se 10g da amostra e transferiu-a para um frasco de rosca estril
(capacidade de 250 mL) e adicionou-se 90 mL de soluo estril (gua destilada ou
soluo tamponada estril).
Agitou-se a amostra vagarosamente por 15 minutos a temperatura ambiente.
Realizou-se as diluies necessrias utilizando como diluente a soluo estril.
Preparo de diluies: Com uma pipeta estril de 1 mL, transferiu-se 1 mL da
amostra para um frasco contendo 9 mL do lquido de diluio antecipadamente
identificado. Preparou-se assim, a primeira diluio decimal (10
-1
), sendo que 1 mL da
mesma corresponde a 0,1 mL da amostra. Homogeneizou-se.
Semeou-se trs sries de tubos, utilizando 10
-1
; 10
-2
e 10
-3
em caldo contendo
tubos de fermentao invertido.
Identificou-se os tubos anotando a amostra, a data e as pores da amostra.
Identificou-se tambm os frascos de diluio.
Homogeneizou-se a amostra.
Com uma pipeta estril transferiu-se 1 mL da amostra para os tubos da
primeira srie contendo o meio caldo Verde bili brilhante.
Colocou-se a estante contendo os tubos inoculados na estufa a 35 C durante
24-48 horas.
Aps esse perodo e incubao, retirou-se os tubos da estufa para e efetuou-se a
leitura dos resultados. Para isso agitou-se cada tubo e verificou-se a presena de
turbidez e/ou gazes nos tubos. Descartou-se os tubos negativos.
E os outros positivos inoculou-se em tubos contendo meio Caldo EC, e
inoculou-se durante 24-48 horas.
Os procedimentos foram executados com os devidos cuidados de assepsia para que no
ocorresse a contaminao da amostra.

Resultados
A quantidade de tubos em que ocorreu a verificao da presena de turbidez e/ou
gs foi: 3 para 100 mg ou 0,1 mL/tubo; 2 para 10 mg ou 0,01 mL/tubo e 2 para 1 mg ou
0,001 mL/tubo (3-2-2). O nmero mais provvel de microrganismos por g ou mL de
210. O limite de NMP inferior 35-470.

Concluso
Em relao o custo, o mtodo de tubos mltiplos o mais utilizado para a
determinao de microrganismos em amostras de solo, mas no muito vivel se a
quantidade de amostras for grande, devido o tempo que se gasta para a concluso. A
presena desses microrganismos j era esperado.

Referncias Bibliogrficas
http://www.cnps.embrapa.br/servicos/metodo_coleta.html. Acessado em 16 de
Julho de 2012.
http://www.soloplan.agrarias.ufpr.br/amostragemsolo.pdf. Acessado em 16 de
Julho de 2012.