BANDEO CROMOSMICO

Continuando con el tema de la heterogeneidad de la cromatina, las caractersticas qumicas de

la misma hacen que al aplicar tratamientos diferenciales se resalte uno u otro de los tipos de
cromatina existente, lo que en citogentica se conoce como Bandeo cromosmico.
El advenimiento de las tcnicas de bandeo cromosmico, dotan hoy a la citogentica de una
nueva herramienta otorgndole una mayor precisin en la individualizacin de los
cromosomas, facilitando su agrupamiento y clasificacin morfolgica: la determinacin de
aberraciones cromosmicas de importante incidencia en animales con problemas de reduccin
de la fertilidad: la localizacin de genes que confluyen al mapeo gentico.
Los bandeos cromosmicos hacen posible que se tenga un mayor conocimiento acerca de la
estructura cromosmica y de los reordenamientos que se producen en las distintas
alteraciones tales como: fusiones y fisiones cntricas, translocaciones recprocas y en tandem;
inverciones peri y paracntricas; delecciones; duplicaciones; contricciones secundarias.; gapss,
fracturas cromosmicas, etc. Por otro lado permiten realizar estudios evolutivos de especies
relacionadas entre s.
En Citogentica se conocen los trminos de coloracin selectiva y diferencial cada una de ellas
es especfica de un tipo de bandas. Las coloraciones selectivas colorean sitios especficos del
mismo, se conocen las bandas C y NORs; las tcnicas de coloraciones diferenciales producen
bandas a lo largo de cada uno de los cromosomas de un complemento, en este tipo se
encuentran las bandas G y R (Verma y Babu 1989 citado por Henao y Gomez, 1999)
Los bandeos cromosmicos pueden clasificarse en morfolgicos y dinmicos:
Los bandeos morfolgicos: se obtienen basndose en tcnicas inherentes a la
heterogeneidad de la cromatina. Existe en ellos una relacin con protenas (histnicas y no
histnicas) e interacciones ADN.
Estos bandeos pueden ser a su vez clasificados en: tcnicas de tincin diferencial, mtodos
de tincin selectiva, coloraciones con fluorocromos especficos aislados o combinados con
colorantes no fluorescentes, y tinciones con anticuerpos fluorescentes.

Los bandeos dinmicos: se obtienen basndose en: tcnicas que implican la incorporacin
de una base anloga, bromo-desoxiuridina (BrdU), en el ADN durante la fase S del ciclo
celular. Se denomina tambin bandeo de replicacin debido a la relacin existente entre el
tiempo de incorporacin del BrdU y el patrn de replicacin.
Cuando se incorpora BrdU durante la fase de replicacin temprana se obtiene un patrn de
bandeo R destacndose las regiones ricas en G-C. Luego de realizada esta tcnica, los
cromosomas pueden visualizarse utilizando distintos mtodos de tincin que emplean
colorante tales como el Giemsa o el naranja de acridina o utilizando anticuerpos
especficos.
Por otro lado si se incorpora la base anloga durante la fase tarda de replicacin se obtiene
un patrn de bandas G, destacndose las zonas de predominio de secuencias A-T. Los
cromosomas pueden ser visualizados utilizando diferentes mtodos de tincin.
En relacin con la nomenclatura para descubrir los diferentes bandeos cromosmicos, se
emplea un cdigo de tres letras: la primera, indica el tipo de bandeo utilizado, la segunda,
la tcnica de deteccin empleada y la tercera, el tipo de tincin.



Nomenclatura de bandeos morfolgicos.
- QFQ: Bandas Q por fluorescencia usando quinacrina.
- GTG: Bandas G por tratamiento enzimtico con tripsina utilizando Giemsa.
- RFA: Bandas R por fluorescencia usando naranja de acridina.
- RHG: Bandas R mediante desnaturalizacin trmica utilizando Giemsa.
- THG: Bandas T por desnaturalizacin trmica empleando Giemsa.
- CBG: Bandas C por hidrxido de bario utilizando Giemsa.

Nomenclatura de bandeos dinmicos.
- GBG: Bandas G por incorporacin de BrdU utilizando Giemsa.
- RBA: Bandas R por incorporacin de BrdU empleando naranja de acridina.
- RBG: Bandas R por incorporacin de BrdU utilizando Giemsa.
- GB-AAu: Bandas G por incorporacin de BrdU empleando anticuerpos especficos unidos
a partculas de oro coloidal.
- RB-AAu: Bandas R por incorporacin de BrdU usando anticuerpos especficos unidos a
partculas de oro coloidal.

En todas las disciplinas siempre existen procedimientos de mayor uso que otros, as que en
este mdulo slo hablaremos de las ms bandas cromosmicas ms utilizadas en el
cotidiano del ejercicio de la Citogentica.

Banda C: La tcnica de Banda C fue descubierta por casualidad y originado en un
experimento en donde ADN satlite marcado en ratn fue hibridado in situ con
cromosomas de ratn. En este experimento, el ADN del cromosoma fue desnaturalizado
con NaOH y renaturalizado en buffer SSC. Los sitios hibridados fueron detectados por
autoradiografa usando coloracin de Giemsa para cromosomas. La prueba de hibridacin
preferencialmente fue en las regiones centromericas de los cromosomas. Sin embargo
tambin se not que el Giemsa coloreo otras regiones en otros cromosomas (Fukui y
Nakayama, 1996).
Esta banda se caracteriza por teir aquellas regiones ricas en heterocromatina constitutiva
que corresponden a secuencias de ADN altamente repetitivas; se encuentran
principalmente en centrmero, telmeros y ADN satlite y en ocasiones constricciones
secundarias como son los NORs.
Despus del descubrimiento de las tcnicas de banda C se desarrolladas tcnicas para
cromosomas de mamferos. Mientras en animales se utiliza NaOH para el paso de la
desnaturalizacin, el Ba(OH)2 es usado para producir banda C en cromosomas de plantas
siguiendo el mtodo de Summer. l fue el primero en sugerir que la coloracin oscura del
Giemsa coloreaba heterocromatina constitutiva causada por la preferencia del ADN
altamente repetitivo durante la renaturalizacin.
Los sitios de los cromosomas que presentan heterocromatina constitutiva y que tien
Banda C positiva son 1) en la regin del centrmero 2) alrededor de la regin organizadora
nucleolar 3) cerca del sitio del RNA para 5S y 4) en la parte final de los cromosomas es decir
la heterocromatina telomerica, en general estas localizaciones se conocen
como centromerica e intercalar y la ltima categora incluye todas las otras posiciones
(Yunis y Yasmineh, 1972 citado por Maclean y Vaughan, 1978).
En el campo de la investigacin para aclarar que tipo de elementos son los que se
remueven dentro del tratamiento de esta banda, en un estudio en donde se analiz HCl 0.2
N el cual es una de las soluciones utilizadas para realizar tratamiento para banda C se
encontr por medio de electroforesis la presencia de las 5 protenas histnicas, la que
presentaba una banda de mayor intensidad fue la H3 y H4, estando presentes tambin las
otras pero en menor cantidad (Burkhoder & Duezek, 1980)
Para cromosomas de plantas, la estandarizacin de las tcnicas en Banda C han mejorado
en su resolucin y el mtodo ha sido utilizado para la identificacin de cromosomas. En
plantas esta tcnica identifica las secuencias que contienen gran cantidad de ADN
repetitivo. Por ejemplo en cultivos de centeno Secale cereale en hibridizacin in situ es
utilizada para detectar zonas de ADN altamente repetitivo de las cuales solamente unas
pocas colorean Banda C positiva (Fukui y Nakayama, 1996).
Por su parte, en muchas especies de animales domsticos se han encontrado
complementos cromosmicos que por las tcnicas convencionales de coloracin no pueden
ser ordenados completamente, debido a la presencia de cromosomas con rasgos
morfolgicos muy similares. Esto sucede, por ejemplo: con los cromosomas 8, 9 y X del
cerdo; con el 11 y el 12 de la misma especie; con los cromosomas 14, 15, 16, 17, 18 y 19 del
equino; con los cromosomas 23, 24, 25, 26 y 27 tambin del equino; y con gran parte de los
cromosomas del bovino, del ovino y del caprino. Lo anterior gener la necesidad de
desarrollar tcnicas de coloracin denominadas de bandeo, o sea, aquellas que producen
patrones constantes de bandas claras y oscuras, caractersticos de cada cromosoma que
permiten identificar los cromosomas sin ambigedades (Henao y Gmez, 1997).
Las tcnicas de bandeo han permitido tanto en animales como en vegetales, tambin, la
deteccin de un gran nmero de aberraciones cromosmicas, con la correspondiente
definicin de los componentes del complemento comprometidos en el problema.

Bandas Ag-NOR: Se conoce como bandas Ag-NOR aquella que colorea
las Regiones Organizadoras Nucleares (de ah la nomenclatura NOR) en ocasiones son
tambin llamadas Banda N, su coloracin es debido a la afinidad con el Nitrato de Plata.
La Regin Organizadora Nucleolar es el sitio en donde estn localizados los genes de ADNr;
el nucleolo esta compuesto por cinco componentes estructurales, el centro fibrilar, el
componente fibrilar, el componente granular, el intersticio nucleolar, y la cromatina
condensada asociada. (Goessens, 1984).
En eucariotas el organizador nucleolar consiste de mltiples repeticiones arregladas en
tandem, de las secuencias para ARN-r 18S y 28S intercalado con secuencias espaciadoras.
Los espacios pueden ser transcritos, pero su transcripcin nunca incluye un ribosoma
maduro. Usualmente se refiere a ADN ribosomal (ADN-r) como una repeticin de genes con
secciones en tamdem arregladas y agrupadas dentro de uno o varias regiones del set de
cromosomas (Champman y may, 1993).
Este tipo de banda se debe especficamente a la presencia de las protenas afines a la
actividad transcripcional en los cistrones ribosomales (Henao y Gmez, 1997).Durante la
metafase estos estn localizados generalmente dentro de la constriccin secundaria
(Howell 1982) Citado por (Fakan y Hernndez-Verdun, 1986).
El comportamiento del nucleolo en proliferacin celular es llamado ciclo nucleolar, se
considera que el ciclo comienza en el momento en que en interfase este o no la decisin
de entrar en proliferacin o diferenciacin, se considera que el ciclo comienza cuando el
nucleolo se organiza nuevamente seguido de las fases de la mitosis, es decir el nucleolo no
es una entidad nuclear individual (De la Torre y Jimnez-Martn, 1982)
Ante todo y de gran importancia es de anotar que esta banda es funcional, es decir, es
positiva siempre y cuando las Regiones Organizadoras Nucleolares hayan estado en
actividad la interfase inmediatamente anterior al momento de realizar la banda, es decir la
banda se expresa en las metafases obtenidas cuando los genes de ADNr hayan sido
transcritos.
Un anlisis morfo-funcional de las Regiones Organizadoras Nucleolares teniendo en
cuenta los ciclos circadianos demostr la relacin directa de los centro fibrilares ( uno de
los componentes del NOR) con la actividad nucleolar. (Fakan y Hernndez-Verdun, 1986
En un estudio sobre protenas asociadas con los NORs se estableci que estas son no
histonicas y son argyrophilic Las proteinas NOR estn estrictamente localizadas dentro
del centro fibrilar y el componente fibrilar denso del nucleolo interfasico (Fakan y
Hernndez-Verdun, 1986). En general, el nucleolo crece durante la interfase, algunas veces
el volumen es proporcional al incremento tanto del componente fibrilar y el granular, pero
en mayor proporcin de la acumulacin del componente granular. La talla final del
nucleolo maduro en el ciclo celular aparentemente no es una funcin estrictamente lineal
del numero de genes ribosomales que el NOR posee (De la Torre y Jimnez-Martn, 1982).
Son varias las aplicaciones de las bandas NOR entre otras se tiene que: (tomado de
Camacho, 1999) con la banda NOR se puede establecer el grado de variabilidad de los
patrones inter e intra especficos entre especies y/o poblaciones, pues tanto los
cromosomas portadores de NOR como la posicin en el cromosoma son usualmente
diversos entre especies (Disney y Wright, 1987; Takai y Ojima, 1986 citado por Oberdorff et
al, 1990). La diferencia en talla entre NORs homlogos ha sido descrita en varias especies
de vertebrados (Miller et al., 1977; Ruiz el al., 1981; Galetti et al., 1984 citados por Sanchez
et al., 1990). Esta variacin interespecfica ha sido utilizada para probar hiptesis
filogenticas e inferir otras, antes basadas principalmente en datos morfolgicos (Amemiya
y Gold, 1990); parece ser que las alteraciones en los NOR ocurren normalmente con
relacin a la diferenciacin y evolucin de las especies (Oberdorff et al, 1990).
La variacin intraespecfica puede ser usada para averiguar el origen maternal y paternal de
los cromosomas en un individuo (Mellink et al, 1994) constituyndose la actividad del
NOR como una propiedad heredable cuyo tipo de transmisin puede ser mendeliana
(Jotterand y Van Melle, 1981); adems los NOR activos muestran variacin de generacin
en generacin mientras los inactivos no (Zakharov et al, 1982 citado por Mellink et al,
1994).
En plantas se encontr tambin que el mtodo servia no solo para localizar Regiones
Organizadoras Nucleolares sino para identificar cromosomas en cereales, adems de
encontrar una relacin entre bandas C y Namda N lo cual fue clarificado por Schlegel y Gill.
Tambin se realizo tcnicas de una banda N secuencial con hibridacin in situ para
identificar cromosomas con las la posicin especifica de ADN, la metafase primero es
identificada en sus patrones de bandas y despus se destina para hibridizacin in situ as se
puede recurrir a la misma clula en metafase, de esta manera se permite una asignacin
directa de los sitios de hibridizacin con cromosomas individuales (Fukui y Nakayama,
1996).

Bandas GTG: Las bandas G deben su nombre al hecho de que en todas sus modalidades se
emplea Giemsa para colorear los cromosomas. Esta tcnica que, en trminos generales, es
la ms usada en mamferos, por permitir excelentes preparaciones permanentes sin
requerir el uso de microscopio de fluorescencia, se basa en un tratamiento que altera la
estructura de las protenas cromosmicas seguido de una coloracin. El mtodo de
denaturacin trmica descrito por Sumner et al. (1971), es conocido como ASG (Acid-
Saline-Giemsa) y se constituye en la primera tcnica de bandas G conocida. En esta
modalidad se logra la denaturacin proteica mediante un tratamiento con 2XSSC (Solucin
Salina Citratada) caliente. Sin embargo, el mtodo ms usado en la actualidad es el
conocido con el nombre de bandas GTC (bandas G por Tripsina usando Giemsa como
colorante); fue introducido por Seabright en 1971, y como su nombre lo indica, se basa en
una digestin enzimtica con Tripsina.
Se asume que el mecanismo por el cual se produce el patrn de bandeo G es porque el
colorante interactua con las protenas de cromosoma, al parecer ricas en grupos disulfuro
en las bandas positivas (oscuras), y en grupos sulfhidrilo en las negativas (claras) (Verma y
Babu, 1989). Se acepta, adems, que la extraccin diferencial de protenas ocurrida durante
la fijacin y los tratamientos de denaturacin, juega un papel muy importante en la
obtencin de estas bandas. Rooney y Czepulkowski (1987), consideran que las bandas G
oscuras corresponden con las crommeras del paquiteno, que se presentan en segmentos
de DNA de replicacin tarda, con alto contenido de Adenina y Timina, y con relativamente
pocos genes activos (Henao y Gmez, 1999).
La banda G ha sido reportada en muchos grupos animales pero por ejemplo en varias
especies de peces esta banda no resulta positiva pues al parecer muchos de ellos no poseen
compartamentalizadin del ADN en isocoros quienes seran los responsables del
bandeamiento.
Por su parte en plantas los reportes son pocos, e inclusive su existencia se ha puesto en
duda. Sin embargo en un anlisis de centeno, S. cereale al construir el cariograma despus
de tratamiento de banda G, se identificaron los cromosomas homlogos por los patrones
de tipo de bandas oscuras y claras, se estableci diferencias con los patrones obtenidos en
banda C, mientras banda C positiva produce grandes bandas telomericas y algunas
intersticiales Banda G produce ms intersticiales que banda C negativa. Aunque los
resultados obtenidos son prometedores en este caso se hace necesario mejorar antes las
tcnicas antes de utilizarlas en la identificacin de cromosomas en plantas (Fukui y
Nakayama, 1996).

Bandas RHG: Este patrn de bandas es, en trminos generales, el inverso (reverse) de las
bandas G, o sea, las bandas G-positivas son R-negativas, y las G-negativas son R-positivas;
se les denomina bandas RHG para significar que son bandas reversas obtenidas por calor
usando Giemsa como colorante. La tcnica original se basa en una denaturacin trmica
selectiva en buffers de diversa naturaleza, seguida por una coloracin de cromosomas con
Giemsa (Dutrillaux y Lejeune, 1971). Respecto al mecanismo de produccin de este patrn
de bandeo, se asume que depende de la denaturacim selectiva que produce el calor en
ciertas zonas del cromosoma, al parecer asociadas con segmentos de DNA ricos en
Adenina-Timina; en este caso las bandas oscuras son las zonas ricas en Guanina-Citocina, o
sea, las que resisten el calor. Verma y Babu (1989) describen el siguiente protocolo para
estas bandas: (Henao y Gmez,1999).
Entre las mltiples tcnicas de coloracin diferencial conocidas hoy, es preciso resaltar la
importancia de las bandas G y de las bandas R en la definicin de los cariotipos de la
mayora de los animales de importancia zootcnica. Entre las tcnicas selectivas, las de
mayor importancia son las bandas C y las bandas NOR, por su aporte tanto a la
identificacin cromosmica como a los estudios de heteromorfismos.

Hibridacin por fluorescencia in situ (FISH): Cuando una secuencia de ADN, en este caso
referida como una sonda de ADN (en ingls, probe), es marcada con istopos radioactivos
o fluorescencia, podemos hibridarla con su secuencia complementaria en el ADN genmico
de un cromosoma especfico y observar la marca directamente sobre el extendido
cromosmico con un microscopio ptico.
La hibridacin in situ fluorescente (FISH) es una tcnica muy sensible siempre que se cuente
con sondas lo suficientemente grandes (y homlogas) y que se suprima la fluorescencia de
fondo.
La sensibilidad de esta variante de la tcnica de hibridacin in situ permite localizar una
secuencia con una precisin de hasta 30 Mb y de detectar anormalidades cariotpicas en
cromosomas metafsicos tanto como interfsicos. Los fluorocromos ms empleados son la
fluorescena (FITC), la rodamina (XRITC) y la Texas Red.
Aunque se trata de una tcnica muy confiable, el FISH es poco utilizado en la construccin
de mapas en el ratn por varias razones: (i) en muchos casos es ms fcil y prctico realizar
esquemas reproductivos, (ii) la hibridacin in situ nos provee de una posicin regional, no
una localizacin precisa y (iii) los cromosomas murinos, como ya se dijo, son muy difciles
de distinguir entre s, en un preparado citogentico. De todas maneras, la hibridacin in situ
es la tcnica de eleccin para la localizacin rpida de los transgenes (ver Captulo VIII). Es
tambin muy til para evaluar si los grandes insertos en los cromosomas artificiales de
levadura (YACs) derivan todos del mismo cromosoma o, por el contrario, son quimricos.
Por ltimo, el pintado de cromosomas (del ingls chromosome painting) es una variante del
FISH que emplea una mezcla de sondas de ADN derivada de un cromosoma entero o de una
regin cromosmica de inters. Se utiliza para obtener patrones de regiones homlogas
entre diferentes especies y es una forma muy directa de evaluar la cantidad de rearreglos
que se produjeron entre dos especies en el curso de la evolucin.
- FISH en metafase: Cuando las clulas estn en metafase, sus cromosomas se
encuentran condensados a modo de preparacin para la divisin celular. Para
detenerlas en metafase, se empleacolchicina, un agente despolimerizante de
los microtbulos encargado de separar las cromtidas hermanas de un cromosoma,
impidiendo as el avance de la divisin celular. Este tipo de FISH se utiliza para detectar
microdeleciones especficas, translocaciones o para identificar material extra de origen
desconocido. Los tipos de sondas usadas son:

o Los csmidos son secuencias nicas que hibridan con fragmentos pequeos. Se
emplean en estudios de microdeleciones.
o Las sondas satlites estn formadas por secuencias altamente repetidas que se
encuentran cerca de lo centrmeros. En la mayora de los casos son especficas de
cada cromosoma. Se usan para determinar aneuploidias o para identificar el origen
de cromosomas marcadores.
o Las sondas completas consisten en la suma de varias sondas que hibridan en distintas
zonas del cromosoma y as marcar el cromosoma completo. Se usan para ver
translocaciones.
En la imagen que acompaa el texto se muestra un ejemplo de uso de una sonda
completa para el cromosoma 4, en el que destacan las dos copias de dicho cromosoma
sobre el resto.


- FISH en interfase: No siempre es posible tener ncleos fijados en metafase para realizar
el FISH, y los resultados obtenidos no sern tan especficos. Sin embargo, el FISH en
interfase tiene la ventaja de que no es necesario cultivar previamente las clulas
durante diversos das antes de poder analizar sus cromosomas. Adems, cuando las
clulas se encuentran en interfase, la cromatina est en torno a 10 000 veces ms
descondensada que en metafase, lo cual permite una mayor resolucin a la hora de
detectar anomalas pequeas.
Se emplea sobre todo para la deteccin de aneuploidias o grandes deleciones,
duplicaciones en clulas fetales o tumorales. No es posible distinguir entre un cariotipo
normal y un cariotipo que presente una translocacin equilibrada. Adems, puede ser
empleado en el anlisis de tumores slidos, que se dividen con muy poca frecuencia.
Una forma reciente derivada del FISH inverso son los arrays de CGH (del ingls
"Comparative Genomic Hybridization"), que estn desplazando a tcnicas como FISH y el
cariotipo.

- FISH en hebra: Este tipo de FISH (tambin llamado "Fiber FISH" o "Halo FISH") se aplica
sobre hebras de ADN desproteinizadas (es decir, desprovistas de las histonas encargadas
de su compactacin). Se extiende linealmente y de forma mecnica en una porta el
fragmento de cromosoma a estudiar. Se observarn puntos discontinuos por rotura de
la hebra de ADN. Esta tcnica permite detectar pequeas reorganizaciones porque
admite una mayor resolucin (permite incluso la visualizacin de genes individuales). La
tcnica puede ser usada para detectar deleciones en clones y para estimar huecos en los
proyectos genoma.

- FISH inverso: Por su parte, el FISH inverso es una tcnica que se usa mucho para
determinar la procedencia de un cromosoma marcador. Este tipo de FISH tiene la
peculiaridad de ser el ADN problema el que se marca. El procedimiento consiste en
recortar un fragmento de cromosoma o dicho cromosoma marcador de un porta donde
se encuentran todos los cromosomas fijados.
Se encuentran teidos con Giemsa o con una sonda, esto sirve para marcar ese ADN y
convertirlo en una nueva sonda. A continuacin, ponemos los cromosomas de un
donantes sin anomalas (generalmente procedente de sus linfocitos y de un varn para
contemplar todas las opciones, es decir, tener los cromosomas X e Y) en un porta y
aadimos la sonda preparada.
Esperamos ver que hay hibridacin de la sonda (cromosoma marcador) con alguno de
los cromosomas del donante por complementariedad en su secuencia. As, podemos
determinar que ese cromosoma marcador procede del cromosoma con el que hibrida.
Una vez identificado, el cromosoma marcador pasara a ser llamado un cromosoma
derivativo.

- FISH on a chip: Anlisis de una muestra de sangre por la tcnica FISH on chip: Se
introduce la muestra de sangre en el chip por capilaridad. Se aade la protena K para
digerir las clulas y se desnaturaliza su ADN con calor. A continuacin se introducen las
sondas y se dejan hibridar con el ADN diana.
Esta nueva variante de la tcnica FISH, ha surgido como una forma de automatizar los
estudios de muestras por el mtodo convencional.
Esta nueva tcnica conlleva numerosas ventajas, como la necesidad de utilizar menor
cantidad de reactivos, el empleo de un menor nmero tiempo de anlisis (ya que en
menos de una hora se pueden analizar los ncleos, frente a las 2-3 horas que precisa el
procedimiento de FISH convencional), su rapidez para la obtencin de resultados, su alta
sensibilidad o su menor coste, con comparacin con la tcnica convencional de FISH.
La principal aplicacin de este novedoso sistema es en el campo del diagnstico clnico,
sobre todo en el estudio de enfermedades neuronales, como es el caso de la
enfermedad del Alzheimer en su estado temprano, aunque no se descarta su uso en
otros campos como en la industria alimentaria.
Se emplea un chip microfludico con estrechos canales, por los que se hace pasar la
suspensin celular purificada por capilaridad, lavada previamente con PBS. Una vez
adheridas o fijadas las clulas a los canales por calor, digerimos las clulas mediante la
adicin de proteinasa K y desnaturalizamos su material gentico, nuevamente por un
incremento de temperatura.
Tras estos pasos, ya pueden ser aadidas las sondas y reactivos necesarios, que
difundirn a lo largo de todo el canal, pudiendo observar los ncleos bajo el microscopio
en el mismo chip y de manera ordenada.
FISH on chip es una tcnica muy til para detectar anomalas cromosmicas
(aneuploidas), entre otros defectos. En el caso del Alzheimer, es habitual utilizar
muestras de linfocitos procedentes de sangre perifrica, fibroblastos o muestras de
orina.


- FISH multicolor: El FISH Multicolor, M-FISH o SKY (Spectral Karyotiping) es una
adaptacin del FISH que permite la visualizacin de los 23 pares de cromosomas a la vez,
teidos con diferentes sondas fluorescentes.
A nivel comercial slo hay 5 colores distintos posibles, por lo que se puede usar la sonda
de un color concreto o combinar dos tipos de sondas para crear un nuevo color. El
sistema de deteccin del equipo empleado debe estar adaptado a los 5 colores. Un
programa informtico se encarga de analizar las imgenes y formar el cariograma:
organiza los cromosomas de acuerdo a la emisin de las sondas que tiene integradas y
las combina hasta dar las 23 combinaciones. Se utiliza con frecuencia en el estudio de
clulas tumorales. El poder de dicho mtodo reside en su habilidad para:

o Determinar rpidamente si hay algn cromosoma adicional en el cariotipo y de qu
cromosoma se trata, porque su color permitir identificarlo.
o Determinar si est presente algn cromosoma translocado y qu cromosomas estn
implicados en la translocacin por la combinacin de dos colores asociados a
cromosomas diferentes en un mismo cromosoma.
o Rpida identificacin de material cromosmico de un cromosoma que haya sido
insertado en otro cromosoma por la variacin del color del fragmento insertado
respecto al color de todo el cromosoma.
o Identificacin de cromosomas pequeos o fragmentados que frecuentemente
implican el problema de averiguar su origen, como es el caso de los cromosomas
marcadores.

Estas aplicaciones del SKY se deben a que cada cromosoma est teido completamente de
un nico color (de una nica sonda) y por eso, viendo el color que van a tener todos los
cromosomas de la muestra podemos saber que anomala presenta el paciente. Sin
embargo, aunque se pensaba que iba a desbancar al cariotipo tradicional, tiene una serie
de desventajas que han frenado su uso, especialmente el uso clnico. Estas son:

o El elevado precio
o Menor definicin que el FISH convencional. Slo se pueden ver cromosomas y
traslocaciones grandes, sin poder observar bandas.

MORFOLOGA DEL CROMOSOMA METAFSICO
Los cromosomas se ven como estructuras delgadas y alargadas. Tienen un brazo corto y otro
largo separados por un estrechamiento o constriccin primaria, llamada centrmero. El brazo
corto se designa como p y el largo como q. El centrmero es el punto de unin del huso
mittico y es parte integral del cromosoma. Es esencial para el movimiento y segregacin
normales del cromosoma durante la divisin celular. Con frecuencia tienen constricciones
secundarias (NOR) en los brazos cortos, conectando trozos muy pequeos de ADN
llamados satlites, que contienen genes que codifican el RNA ribosmico.
Las cromtides son estructuras idnticas en morfologa e informacin ya que contienen cada
una una molcula de ADN. Las cromtidas estn unidas por el centrmero. Morfolgicamente
se puede decir que el cromosoma es el conjunto de dos cromtidas y genticamente cada
cromtida tiene el valor de un cromosoma.
Los telmeros.- Al extremo de cada brazo del cromosoma se le denomina telmero. El ADN
de los telmeros no se transcribe.

Morfologa del Cromosoma: Los cromosomas metafsicos cuatro formas bsicas y se pueden
clasificar de acuerdo con la longitud de los brazos corto y largo, as como por la posicin del
centrmero. Los cromosomas metacntricos tienen los brazos corto y largo de
aproximadamente la misma longitud, con el centrmero en el punto medio. Los
cromosomas submetacntricos tienen los brazos corto y largo de longitudes desiguales, con el
centrmero ms prximo a uno de los extremos. Los cromosomas acrocntricos tienen el
centrmero muy cerca de un extremo, con un brazo corto muy pequeo. En
los telocntricos el centrmero est en un extremo del cromosoma y ste tiene un solo
brazo.
Tipos de Cromosomas:
- Metacntricos: El centrmero est ubicado ms o menos en el centro, es decir los
brazos p y q son aproximadamente de la misma longitud.
- Submetacntricos: El centrmero se encuentra desplazado claramente del centro. (Los
brazos difieren en longitud).
- Acrocntricos: El centrmero est ubicado cerca de un extremo. (Un brazo
considerablemente grande comparado con el otro).
- Telocntricos: Con el centrmero en un extremo, este cromosoma solo tiene el brazo
largo.


MORFOLOGA DE LOS CROMOSOMAS HUMANOS

1 metacntrico, grande.
2 submetacntrico, grande.
3 metacntrico, grande.
4 submetacntrico, grande.
5 submetacntrico, grande.
6 submetacntrico, mediano.
7 submetacntrico, mediano.
8 submetacntrico, mediano.
9 submetacntrico, mediano.
10 submetacntrico, mediano.
11 submetacntrico, mediano.
12 submetacntrico, mediano.
13 acrocntrico, mediano, con satlite en su brazo corto.
14 acrocntrico, mediano, con satlite en su brazo corto.
15 acrocntrico, mediano, con satlite en su brazo corto.
16 submetacntrico, pequeo.
17 submetacntrico, pequeo.
18 submetacntrico, pequeo.
19 metacntrico, pequeo.
20 metacntrico, pequeo.
21 acrocntrico, pequeo.
22 acrocntrico, pequeo.
23
1
X submetacntrico, mediano. 23
2
Y acrocntrico, pequeo.