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Universidad Andrs Bello

Facultad de Ciencias de la Salud


Departamento de Ciencias Biolgicas
Laboratorio de Biologa Celular BIO 035

Alumnos:
Benjamn Guzmn F
Nicole Riquelme A
Ignacio Serey D
Nicols Silva V
Seccin:
N6

Profesores:
Cristina Navarro V
Camila Peralta E


05/05/2014
TRABAJO PRACTICO N3
MICROSCOPA
INTRODUCCIN


En la biologa existen variados mtodos, tcticas, procedimientos para poder obtener
los resultados deseados, sin embargo, hay un instrumento el cual es trascendental en
el estudio de esta ciencia, el microscopio. Objeto que fue utilizado por primera vez por
Robert Hooke en 1665 quien luego de observar un trozo de corcho visualiz unas
diminutas celdillas a las que denomin clulas, que mas adelante se confirm que lo
que haba visto Hooke a travs de su microscopio eran las paredes de las clulas
muertas del corcho. Desde este acontecimiento en adelante el microscopio y la teora
celular han ido evolucionando en conjunto con el invento de nuevas tecnologas. Es
gracias a este instrumento de laboratorio que nuestros ojos pueden percibir con
claridad estructuras muy pequeas y traslcidas, ayudndonos al estudio de estas. En
la actualidad existen diferentes tipos de microscopios que utilizan diferentes mtodos:
el microscopio ptico y electrnico que han permitido poder indagar en los distintos
campos. En el microscopio ptico el objeto que se desea estudiar se coloca en una
platina y se ilumina con luz, que se refracta en las lentes pticas y llega hasta el ojo
del observador con una imagen muy ampliada del objeto.
En el microscopio electrnico el objeto que se desea visualizar es bombardeado con
un haz de electrones, mediante este microscopio es posible obtener fotografas
demasiado pequeos como para poder ser fotografiados con luz. En la actualidad los
tipos de microscopios utilizados son el de fluorescencia, el microscopio confocal, el
electrnico de transmisin (MET), electrnico de barrido (MEB) y el microscopio ptico
el cual fue utilizado en esta actividad experimental y sobre el cual nos adentraremos
junto con la microscopia en el presente informe y en los resultados obtenidos tras el
uso de este instrumento de laboratorio.


OBJETIVOS


El ojo humano posee un mnimo poder de resolucin de 0,2 mm (200 m) lo cual nos
limita el poder observar estructuras muy pequeas es por eso que se ha tenido que
recurrir a mtodos alternativos como el microscopio. El siguiente trabajo practico de
laboratorio tiene como objetivo principal conocer cada una de las partes de este
instrumento y sus respectivas funciones, esto con el fin de utilizar correctamente esta
herramienta que permite indagar a mayor profundidad los objetos que el hombre no
puede ver a simple vista debido al diseo y estructura del ojo humano.










MATERIALES Y MTODOS


El procedimiento aplicado en este experimento, se llevo a cabo en un medio seco, en
el cual se cont con dos microscopios pticos por cada grupo de trabajo. Se les fue
entregado a los estudiantes una bandeja las cuales venan equipadas con 5 muestras,
porta objetos, cubreobjetos, pinzas y preparaciones histolgicas. Antes de usar los
microscopios, se confirm que en ambos, el objetivo estuviera en el menor aumento
(el cual seria 4X). Despus de preparar los microscopios se prosigui a iniciar con las
actividades.

En el primer microscopio se coloc una de las muestras la cual era una letra e
impresa y recortada de un trozo de papel, para esta muestra se pas de un aumento
de 4X a uno de 10X y as se fue rotando el revolver hasta llegar al aumento 40X, con
el que se peda se observara la muestra en esta actividad, mientras que en el otro
microscopio se coloc otra muestra, la cual era de un intestino delgado de rata en un
corte transversal, para esta muestra se us un aumento de 40X, y al poder apreciar
las muestras, se dibujaron.

Luego se cambiaron las muestras. En un microscopio se puso una muestra de frotis
sanguneo, se le aplic una gota de aceite de inmersin y se visualiz utilizando un
aumento total de 1000X. En esta muestra se observaron claramente eritrocitos o
glbulos rojos y algunos glbulos Blancos (muy pocos). Se prosigui con dibujar lo
que se observ. Continuando con las dems actividades, se cambi la muestra de
frotis de sangre por una muestra de euglena en un medio acuoso. Usando una pipeta
pasteur se coloc una gota de este medio en el portaobjetos y luego se puso encima
de dicha gota un cubreobjetos, una vez preparada la muestra se visualiz por el
microscopio con el mnimo aumento posible y una vez que se encontraron las
euglenas y se verific que se quedaron inmviles se observ finalmente con un
aumento total de 400X para tratar de verlas con mayor detalle y se dibuj.

Se continu con una muestra de protozoos (paramesium) tambin contenidos en un
medio acuoso, en un tubo de ensayo, para transportarlo se us nuevamente la pipeta
pasteur, se puso una gota de agua que contena los protozoos que se observaran en
el portaobjetos y posteriormente se puso sobre este un cubreobjetos como se hizo con
la muestra anterior que de euglenas. Al igual que en la actividad anterior, se empez
con el menor aumento y una vez que se localizaron los protozoos se cambi a un
aumento aun mayor, sin embargo no se encontr ningunos de ellos, se pens que tal
vez eran demasiado pequeos como para visualizarse con este tipo aumento y
posteriormente se cambi a un aumento total de 400X, pero tampoco se encontraron
paramesium, se busc por toda la muestra y durante varios minutos, sin obtener el
resultado esperado. Se pens que la mejor opcin era cambiar la muestra por una
mas fresca y as se hizo, se obtuvo otra del mismo tubo de ensayo de donde de
extrajo la gota de agua de la muestra anterior y se reintent todo el procedimiento
realizado con el microscopio anteriormente descrito, pero nuevamente no se encontr
rastros del paramecio, se repiti otra vez el mismo procedimiento y solo se obtuvieron
tres intentos fallidos.


Prosiguiendo con el experimento, se cambiaron las muestras de los microscopios por
muestras frescas de tejido vegetal, en este caso se utiliz tejido de una cebolla, se
extrajeron dos muestras de esta y se ti una con azul de metileno, se coloc cada
muestra por separado en el porta objetos y encima se puso el cubreobjetos, una vez
listas las muestras se llevaron al microscopio para ser observadas con un aumento
total de 100X. Se visualiz primero la muestra sin teir y se dibuj, una vez listo esto,
se cambi la muestra por la que estaba teida y al igual que el resto de las muestras
de dibuj.
Una vez finalizado el experimento se prosigui con ordenar el area de trabajo,
devolver la bandeja con los materiales tal cual como fueron entregados, apagar y dejar
los microscopios con el mnimo aumento. Una vez que se hizo esto se dio por
terminada la actividad.





































RESULTADOS

1. La actividad numero uno consisti en el calculo del aumento y el limite de
resolucin del microscopio.

Se sabe que la funcin del microscopio es aumentar el tamao y por consiguiente
la resolucin de la imagen. El poder de resolucin es la capacidad que permite
hacer visible dos puntos que estn situados muy juntos entre ellos.

En la siguiente tabla se muestra el poder de aumento y la apertura
numrica de los lentes objetivos:


AUMENTO

APERTURA NUMRICA
4X 0.10
10X 0.25
40X 0.65
100X 1.25

En esta tabla se muestra el aumento y la apertura numrica de los lentes
oculares:


AUMENTO

APERTURA NUMRICA
10X 18

A continuacin se muestra la apertura numrica del condensador


APERTURA NUMERICA (NA)

1.25

Y destacar la apertura numrica de la interfase de aire y la interfase del
aceite

NA. INTERFASE DEL AIRE NA. INTERFASE DEL ACEITE
1.0 1.3 - 1.5

La resolucin mxima de un microscopio esta dada por la apertura numrica
mxima efectiva que posea y por el valor mas bajo de los anteriores dados. Este
valor normalmente corresponde al lente 100x (NA. 1.25). Entonces se puede
calcular el lmite de resolucin y la resolucin del microscopio. Entendiendo que la
Longitud de onda = 400nm.

Limite de resolucin



Limite de resolucin=




Limite de resolucin= 51,2 .

Resolucin:




Resolucin:




Resolucin: 0.00512


2. En esta actividad se observ una letra e impresa con tinta sobre papel; se
puso en el portaobjetos utilizando el objetivo de 10X y se divis la letra e en
forma invertida. Se rot el objetivo a un 40X y se enfoc la letra e sin tener
cambio en su orientacin invertida, como se observa en la siguiente imagen:





















3. Determinacin del dimetro campo visual de cada objetivo, se obtuvieron los
siguientes resultados:
Sabiendo que la formula a utilizar es: DCV obj.x=



Entonces:
DVC obj. 4X=

= 4,3 mm

DVC obj. 10X=

= 1,72 mm

DVC obj. 40X=

= 0,43mm

DVC obj.100X=

= 0,172mm

Transformando estos resultados a unidades micromtricas queda
expresando en la siguiente tabla:

Aumento Objetivo Dimetro de campo visual
del objetivo en milmetros
(mm)
Dimetro de campo
visual del objetivo en
micrmetros (m)
4X 4,3 4300
10X 1,72 1720
40X 0,43 430
100X 0,172 172

Se observaron dos muestras fijas:
La primera es una muestra de intestino de ratn a un aumento total de 400X. Se
logr observar una estructura de color rosado, con varios pliegues y un gran
espacio en el centro.












Luego se observ de una muestra de frotis de sangre a un aumento total de
1000X. Se puede apreciar una gran cantidad de glbulos rojos y en menos
cantidad de divisa dos glbulos blancos, en color morado con su ncleo
respectivo. Cabe mencionar que se pudo calcular aproximadamente el nmero de
clulas de la muestra, esto se hace dividiendo el campo visual imaginariamente en
4, y contar el nmero de clulas de un cuarto que son 124 clulas, lo
multiplicamos por 4 y da un total de 496 aprox. clulas en el campo visual.

















4. Se observ una muestra temporal de Euglena a un aumento total de 400X.
Al enfocarlo se puede distinguir un protozoo verde con forma ovalada y gran
movilidad. Contiene ms estructuras en su interior.















5. Determinacin del tamao celular (TC): se puede calcular sabiendo el DCV
del objetivo y el nmero de clulas del campo visual de dicho objetivo a travs de
la siguiente formula: TC=




Como anteriormente se mencion, se ocup un aumento de 100X, con un valor
aprox. De 496 clulas. Entonces despejando quedara como

TC=

= 0,0087mm 8,7 m de tamao celular.





6. Se pretendi observar una muestra de Elodea sp (planta acutica). Se
deposit una trozo de una hoja de la muestra en un porta objeto con una gota de
agua cubrindolo con el cubreobjetos. Con un total de 400X. Se logr divisar una
red de celdas mayoritariamente verde, que son las clulas vegetales de esta
planta. Estas clulas contienen unos pequeos corpsculos en el interior, que son
los cloroplastos.
Luego se observ un protozoo (Paranesium) a un aumento total de 400X, fue la
muestra con ms complicaciones ya que no se tuvo xito para encontrarla, eso
considerando que se cambi tres veces la muestra.
















7. Se observ dos muestras, las dos de catafilo de cebolla, una sin teir y la
otra teida a un aumento total de 100x. La muestra sin tincin se pudo
observar las clulas vegetal rodeadas de la pared celular y al interior el
ncleo. En la muestra con tincin con azul de metileno se puede ver ms
claramente que al interior de las clulas hay ms estructuras aparte del
ncleo.

















DISCUSIN

A las muestras y resultados obtenidos anteriormente se le aplicar un anlisis para as
lograr comprender de una mejor manera las actividades realizadas.

La actividad nmero dos consista en la observacin de una letra e impresa, la cual
deba ser vista en el microscopio con un aumento objetivo de 10x. Al realizar el
trabajo se not inmediatamente que la imagen obtenida es una letra e invertida y de
mayor tamao. Este fenmeno sucede debido a que la muestra est fuera de la
distancia focal, entonces al pasar los rayos de luz por este se refracta, obteniendo as
los resultados mencionados anteriormente.
Luego en la misma actividad se pide ver la misma letra con un aumento objetivo de
40x. Con esto se consigui ver partes ms aumentadas de nuestra muestra, en
consecuencia basndose en conceptos de la fsica, la letra e permanece invertida, y
sigue siendo de mayor tamao, adems tiene la caracterstica de ser virtual ya que es
la imagen de una imagen.
La actividad tres, consta de la observacin de muestras fijas, estas muestras tienen la
particularidad de ser preparadas con agentes fijadores como acetona, formaldehdo o
glutaraldehdo, con el fin de hacer que las preparaciones duren en buen estado meses
o aos. La primera muestra fija es una seccin transversal de un intestino de ratn con
un aumento total de 400x. En l se vio un sistema de pliegues bastante completo el
cual es usado para amplificar la superficie de absorcin, uno de estos pliegues son las
vellosidades, las cuales se pueden ver claramente. Por debajo de estas se logra
divisar una capa circular que correspondera a musculo liso que va a contribuir en la
circulacin del quilo en su camino hacia el intestino grueso. Tambin se contempl el
lumen, mayormente conocido como la luz que con la ayuda de las clulas que
recubren el intestino, transporta nutrientes como los hidratos de carbono protenas y
lpidos hacia el medio intracelular.
La siguiente actividad fue la del frotis de sangre con un aumento total de 1000x como
sabemos esta muestra paso por varios procesos para que se pudiera visualizar ya que
es una muestra fija. Sin embargo, a diferencia de la preparacin anterior, el frotis de
sangre debe ser analizado a 1000x por lo que debe ser tratado con una gota de aceite
de inmersin antes de verlo a travs del microscopio. En esta muestra se pudo ver
eritrocitos, comnmente llamados glbulos rojos que se encuentran en igual tamao,
color (rojo), se puede notar su forma bicncava y su ausencia de ncleo, diseada
especialmente para el transporte de oxgeno. Se observ tambin glbulos blancos del
tipo neutrfilos uno de los tipos ms abundantes en la sangre humana, su funcin
principal es la fagocitosis de bacterias y hongos. Se mostraban como clulas
ameboide, con ncleo de color morado, que a veces se presentaba como
poliformonucleares.
Siguiendo con la actividad numero cuatro en la cual se debi observar una muestra
fresca en esta caso Euglena, un gnero de algas unicelulares pertenecientes al grupo
de los Euglnicos. En este espcimen se puede visualizar un ncleo y un flagelo, por
lo que se encuentra constantemente en movimiento. La Euglena se ve de color verde,
ya que como se mencion anteriormente pertenece al grupo de los Euglnicos, el cual
cuenta con numerosos cloroplastos.


Actividad numero seis, Observacin de muestras frescas, con preparaciones
temporales.
Primero se vio la Elodea un gnero de planta acutica tambin conocida como Yana.
En esta oportunidad se not cloroplastos en forma de pequeos crculos de color
verde contenidos en una pared celular de una clula vegetal. Al ver fijamente la
preparacin observamos que los cloroplastos de movan dentro de estas paredes, esta
corriente es llamada transmisin ciclnica. La causa real de este movimiento no est
clara, pero se altera con calor y luz.

Luego se contino con la observacin de paramecios. Protozoos ciliados, con un
macro ncleo y de forma ovalada y posiblemente los ms estudiados en la ciencia.
Para ubicar a estos organismos se hizo muy difcil, al punto de tener que repetir 3
veces la actividad para lograr verlo, lo cual se nos hizo imposible, sin embargo
investigando sobre este pudimos entender el porque se hizo tan difcil encontrarlo, ya
que este se mueve mucho, esto se explica por la gran cantidad de cilios que recubren
toda su superficie. Se sabe gracias a otras investigaciones que si logras verlo con el
microscopio se puede observar que tiene numerosas estructuras dentro, estas pueden
ser vacuolas las cuales tienen gran importancia en esta pequea forma de vida, ya
que tienen funciones digestivas y tambin regulan la presin.

La ltima actividad, la numero siete consisti en la comparacin de dos muestras de
catafilo de cebolla, estando una sin teir y otra con tincin a un aumento total de 100x.
En la preparacin sin agregados slo logramos divisar una pared celular y un ncleo,
mientras que en el modelo con tincin de azul de metileno, un colorante bsico, se
pudo hacer una diferencia aun mayor entre las estructuras ya mencionadas, sin
embargo, no se logr ver ninguna otra diferencia.

CONCLUSION DE LA DISCUSIN

Gracias a las actividades que se realizaron se pudo concluir que bajo el microscopio
se pueden obtener una gran variedad de resultados segn la muestra que se observe,
como por ejemplo, el caso de la letra e en el cual se observ un resultado
totalmente opuesto al esperado y que dista de ser igual al de la muestra que se
observ, ya que la imagen que arroj finalmente el microscopio fue una letra e
invertida. Tambin se pudo deducir lo importante que es la preparacin de una
muestra para que esta sea temporal o fija.
Finalmente quedo en evidencia lo fundamental que es el uso de tinciones en las
muestras, para poder visualizar un mejor contenido de estas.











CONCLUSIN


La microscopia es fundamental en el area de las ciencias, sin el microscopio ptico no
se hubieran podido realizar descubrimientos que ahora son la base de la biologa,
especialmente en reas como la biologa celular, bacteriologa, histologa, entre otras.

Es esencial en el estudio de organismos demasiados pequeos para as poder saber
la estructura de estas, la funcin que cumple y su relacin con el medioambiente
La actividad experimental se pudo aprender correctamente a utilizar el microscopio, a
trabajar con distintos tipos de muestras e interpretar los resultados obtenidos luego de
observarlas.



































BIBLIOGRAFA

Universidad Andrs Bello. Gua de laboratorio N3 : microscopa, curso
BIO035, 2014

http://biogenmol.blogspot.com/2008/07/el-intestino-delgado.html
Fecha de ingreso: 03/05/2014

http://es.wikipedia.org/wiki/Plaqueta
Fecha de ingreso: 03/05/2014

http://es.wikipedia.org/wiki/Euglena
Fecha de ingreso: 03/05/2014

http://es.wikipedia.org/wiki/Elodea
Fecha de ingreso: 03/05/2014

http://www.ehowenespanol.com/cloroplastos-mueven-celula-elodea-
como_139864/
Fecha de ingreso: 03/05/2014

http://es.wikipedia.org/wiki/Paramecium
Fecha de ingreso: 03/05/2014

http://eca-ensenanzamedia-biologia.blogspot.com/2011/04/paramesio.html
Fecha de ingreso: 03/05/2014