Realizado por Guzmn Gonzlez Hctor Eduardo

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TCNICA HISTOLGICA ORDINARIA

La tcnica histolgica se compone de los siguientes pasos:
1. OBTENCIN DEL TEJIDO
2. FIJACIN
3. INCLUSIN
4. CORTE O SECCIN
5. TINCIN
6. MONTAJE

OBTENCIN DEL TEJIDO
El tejido se puede obtener de todo ser vivo por medio de una biopsia. Sin embargo, tambin se
puede adquirir de un organismo muerto gracias a una necropsia.
Segn la porcin de tejido que se obtenga, podemos dividir a la biopsia en dos tipos:
Incisional: Se extirpa slo un fragmento de la lesin o del tejido que se desea estudiar. El
objetivo de este tipo de biopsia es nicamente el diagnstico (Dx)
Excisional: Se extirpa toda la lesin o tejido que se desea estudiar. El objetivo de este tipo de
biopsia es el diagnstico (Dx) y el tratamiento (Tx).
Se utilizan distintos mtodos de obtencin, entre los principales encontramos:
Corte con bistur
Sacabocado:
Consiste en un mango con una hoja cortante circular, que al ser aplicado sobre la piel (uso ms
frecuente) y rotado sobre su eje y en direccin vertical, corta un fragmento cilndrico de tejido
correspondiente al dimetro de su luz.
Puncin:
Tcnica en la cual se introduce una aguja en una zona corporal determinada. Suele utilizarse
para la extraccin de lquidos. Un ejemplo clsico, es la obtencin de sangre perifrica para
realizar una citologa hemtica. Sin embargo, tambin es importante mencionar la puncin
lumbar para la obtencin de lquido cefalorraqudeo.
Tru-cut (aguja gruesa):
Este tipo de tcnica es utilizada en la extraccin de mdula sea roja. Adems, es muy utilizada
en la obtencin de tejido mamario para la deteccin de cncer.


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Biopsia por aspiracin con aguja fina (BAAF):
Se emplea para la aspiracin de tejidos superficiales o profundos con una aguja fina. Un
ejemplo, es la aspiracin de glndula tiroides.
Raspado:
Los siguientes son dos tipos relevantes de la tcnica de raspado:
Citologa exfoliativa: Muestra de tejido que se obtiene por el raspado de las superficies
de los rganos. Es usada comnmente en el diagnstico temprano de cncer cervical.
Legrado: Tcnica en la cual se elimina tejido del revestimiento uterino por medio de
una legra. Se utiliza principalmente en casos de aborto.
Biopsia por endoscopia:
Se obtiene la muestra introduciendo un endoscopio por un orifico natural; el endoscopio est
compuesto de un sistema de luz y de pinzas para extirpar el tejido deseado.






FIJACIN
La fijacin es un proceso que tiene como finalidad conservar la estructura del tejido de forma
permanente. En la tcnica histolgica ordinaria el fijador que se usa con ms frecuencia es la
formalina al 10%. Los efectos de la formalina sobre el tejido son:
Anula el metabolismo celular.
Detiene la autlisis.
Evita los cambios osmticos.
Tiene accin antisptica-antimictica al destruir microorganismos
patgenos.
Endurece el tejido como consecuencia de la formacin de enlaces
cruzados o de la desnaturalizacin de las molculas proteicas.
Sirve como mordente. Un mordente facilita la captacin de las tinciones en
el tejido.
INCLUSIN
La inclusin tiene como finalidad preparar la muestra para permitir su corte. Este proceso se divide
en tres pasos: la deshidratacin, el aclaramiento o diafanizacin y la infiltracin.
Deshidratacin:
La muestra se deshidrata en una serie de soluciones alcohlicas de concentracin creciente
hasta alcanzar alcohol al 100%.

Aclaramiento o diafanizacin:
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Se realiza principalmente con el solvente orgnico denominado Xilol. La importancia de esta
sustancia es ser miscible entre el alcohol y la parafina. Adems, tiene la capacidad de eliminar
los lpidos.

Infiltracin:
El medio ms comn para realizar este proceso es la parafina. El tejido se introduce en un
recipiente con parafina fundida, hasta que el tejido es infiltrado por completo. Poco despus,
se coloca en un receptculo y se deja endurecer. Al final, se forma un bloque listo para su corte.






CORTE O SECCIN:
Se lleva a cabo gracias a un micrtomo, un aparato equipado con una hoja de acero y un brazo que
desciende en incrementos especficos iguales en el bloque del tejido. El tamao del corte en la
tcnica histolgica ordinaria es de 5 a 10 m con un promedio de 7m.






TINCIN:
Para poder realizar este proceso, previamente se tiene que eliminar la parafina de la muestra y
llevarse a cabo una fase de rehidratacin.
Los cortes obtenidos se montan en un portaobjetos a los que antes se le ha aadido un medio de
montaje (albmina, pineno o resinas acrlicas) para que sirva de adhesivo.
Cuando preparamos una muestra para examinar al microscopio ptico, las tinciones son
hidrosolubles; las ms utilizadas son la Hematoxilina y la Eosina.
Hematoxilina: Es un colorante bsico con carga neta positiva. Por lo tanto, reacciona con
los componentes aninicos de la clula, principalmente los grupos fosfato de los cidos
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nucleicos. La capacidad de estos grupos aninicos de reaccionar con la hematoxilina se
denomina basofilia.

El color de la hematoxilina normalmente es de azul a morado.

LA HEMATOXILINA TIE NCLEO (AL REACCIONAR CON EL DNA Y EL RNA QUE CONTIENE)
Y RIBOSOMAS (AL REACCIONAR NICAMENTE CON EL RNA).










EOSINA: Es un colorante cido con carga neta negativa. Por lo tanto, reacciona con los
componentes catinicos de la clula, principalmente los grupos aminoionizados de las
protenas bsicas. La capacidad que tienen las estructuras bsicas de reaccionar con la
eosina se denomina acidofilia.
El color de la eosina normalmente es de rosa a naranja.










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Es importante mencionar que este proceso no es especfico; existen distintas tinciones con las cuales
uno puede teir estructuras especficas.
MONTAJE
Despus de someter la muestra a tincin, se deshidrata de nuevo para que pueda fijarse de modo
permanente en un cubreobjetos con un medio adecuado para montaje.








Las macromolculas que se pierden durante la fijacin de rutina en fijadores acuosos son: el
glucgeno y los proteoglucanos y glucosaminoglucanos. Estas molculas, sin embargo, pueden
conservarse si se utilizan fijadores no acuoso o si a la solucin fijadora se le aaden agentes ligadores
especiales.
Metabolitos intermedios, glucosa, sodio, cloro y sustancias similares se pierden durante la
preparacin de las muestras de rutina que se incluyen en parafina y luego se tien con H-E. Estas
sustancias se estudian en preparados especiales.
De la misma forma, tambin se disuelven los lpidos por los solventes orgnicos utilizados.

NOTA: En cada paso de la tcnica histolgica puede introducirse un artefacto, un error en el proceso
de preparacin de la muestra. Por lo general, los artefactos que aparecen en el preparado terminado
estn relacionados con la metodologa, el equipo o los reactivos utilizados durante el
procedimiento.

Bibliografa:
Ross M., Pawlina W., (2012). Histologa: texto y atlas color con biologa celular y molecular
(6. ed.). Buenos Aires: Mdica Panamericana.
Gartner L., Hiatt J., (2008). Texto Atlas de Histologa (3. ed.). Editorial: Mc Graw-Hill
Interamericana.