CROMATOGRAFA INICA

Definicin de cromatografa:
Tcnica fsica de separacin basada en la distribucin de solutos entre una fase
mvil y una fase estacionaria. La cromatografa inica se basa en el uso de una resina de
intercambio inico como fase estacionaria.
Para qu se usa
Convendra decir que la cromatografa inica tiene un mbito de aplicacin que
engloba a los estudios en los que intervienen molculas con peso molecular menor a
!"".
#e usa para reali$ar un anlisis completo de los iones que pueda %aber presente
en una determinada muestra.
&esina de intercambio inico
Retencin
La separacin de los distintos iones se reali$a por medio de una columna de
intercambio inico' la carga de la matri$ de la columna (fase estacionaria) as como de
la fase mvil depender del p* y de la fuer$a inica' que es proporcional a la
concentracin de iones. Para unas condiciones determinadas sern retenidas en la
columna los iones que tengan una carga complementaria a la de la fase estacionaria (los
iones cargados negativamente sern retenidas por una matri$ cargada positivamente)'
siendo eluidos los restantes.
La composicin de las resinas puede ser variada. Los intercambiadores inicos
de poliestireno son tan grandes que las macromolculas muy cargadas' como las
protenas' se pueden enla$ar irreversiblemente a ellos. Los de celulosa y de+tranos
sirven para intercambio inico de macromolculas. Los geles de intercambio inico se
usan en el caso de molculas grandes (protenas y cidos nucleicos). Cuando las
separaciones e+igen condiciones qumicas fuertes se emplean intercambiadores inicos
inorgnicos.
Para generali$ar podemos decir que la separacin en estas resinas se basa en la
adsorcin reversible de molculas de soluto cargadas a grupos de intercambio inicos de
carga opuesta inmovili$ados en la resina.
,l intercambio inico al igual que cualquier proceso inico es un equilibrio. ,l
soluto cargado se une al intercambiador con carga opuesta mediante fuer$as
electrostticas.
Los intercambiadores cargados positivamente se unen a contraiones negativos'
por lo que se llaman intercambiadores aninicos' en los cargados negativamente pasa lo
contrario.
& P
-
La molcula unida al intercambiador puede ser rpidamente reempla$ada por
otro in:
& P
-
- .a
-
& .a
-
- P
-

Los mtodos de %acer que se sientan atrados en mayor medida unos iones u
otros consisten en variaciones en el p* y la fuer$a inica de la resina' como fue
indicado anteriormente.
La capacidad de un intercambiador es una medida cuantitativa de la %abilidad
para aceptar contraiones cambiantes' se puede e+presar como:
Capacidad total: n/mero de grupos sustituyentes cargados por unidad de
gramo de intercambiador seco o ml de intercambiador %/medo.
Capacidad disponible: Cantidad de analitos que pueden unirse a un
intercambiador inico en las condiciones de traba0o.
Elucin
#i las sustancias no deseadas son las que se unen a la columna no es necesario
reali$ar un cambio en las condiciones de elucin' ya que la sustancia de inters sale en
el percolado. Tampoco %ace falta reali$ar cambios cuando los componentes de la
muestra se retardan de forma diferencial y pueden separarse en las condiciones de
inicio.
#in embargo normalmente los compuestos se separan por elucin por gradiente'
que consiste en variar la carga inica del solvente o su p* de forma que se alcance el
punto isoelctrico del in de inters o el de la matri$' neutrali$ando de este modo la
fuer$a que los retiene en la columna y permitiendo que la abandonen.
*ay que tener precaucin con aquellas sustancias que presentan una solubilidad
mnima en el punto isoelctrico para evitar que se produ$ca precipitacin en la columna.
1 ba0a fuer$a inica la competencia por los grupos cargados de la matri$ es
mnima y las sustancias cargadas pueden unirse fuertemente' al aumentar la fuer$a
inica del medio la competencia aumenta y se reduce la interaccin entre el
intercambiador y las sustancias de inters resultando la elucin.
#upresin inica
Permite separar compuestos inicos reduciendo su ioni$acin mediante el
control del p* de la fase mvil. Conforme se aumenta la polaridad se reduce la
retencin. ,s un buen mtodo para favorecer la sensibilidad' ya que se eliminan los
iones que dan la se2al de fondo.
La fase mvil debe ser:
para cidos (p* 34!)' usando tampones acetato y fosfato.
para bases (p* 546)' alquilaminas y fosfatos alcalinos.
7uncionan muy bien para bases y cidos dbiles.
La me0or forma de reali$ar la supresin inica es por medio de una
micromembrana supresora.
Detectores
#e suelen emplear detectores de absorcin ultravioleta (se usa cuando se emplea
la cromatografa por pares inicos) o de conductividad (para el caso de la supresin
inica' o culalquier cromatografa de la que salgan iones)' que aunque menos sensible'
llega %asta puntos del orden de mg8l
,ste tipo de cromatografa se puede usar para aniones' aunque tambin e+isten
estas columnas y procesos para cationes.
Cromatografa de pares inicos
,n esta cromatografa los analitos inicos se me$clan en la fase mvil con una
disolucin que contiene un contra4in de carga opuesta' formando de este modo un
comple0o neutro que se debe mantener en equilibrio con las especies ioni$adas'
cromatografiandose en fase reversa:
1nalito - Contra49n Comple0o
,l eluyente fluye entre las dos membranas
semipermeables encontrndose con un flu0o de cido
sulf/rico en contracorriente.La membrana slo permite el
paso a los cationes' los protones pasarn desde las corrientes
del e+terior %asta la interior del dibu0o' la correspondiente al
eluyente. Los iones sodio %arn el sentido contrario.
#e producir mayor migracin de los iones cuanto
mayor sea la diferencia de concentraciones de la espacie
entre los dos lquidos.
Como la cromatografa la reali$amos en fase reversa vamos a usar una fase
apolar' de este modo podemos imaginar que el contra4in que utilicemos generalmente
tendr una parte orgnica. La separacin se produce seg/n la apolaridad de la me$cla.
:sando este contra4in conseguimos me0orar la retencin as como la forma de
los picos de cidos y bases fuertes (si no e+istiese este contra4in las bases y cidos
fuertes estaran totalmente disociados y no se retendran por lo que saldran
directamente). ,l p* de la fase mvil se debe de a0ustar para que el analito se mantenga
ioni$ado y de este modo pueda formar el comple0o con el contra4in. Cuanto mayor sea
el contra4in mayor ser la retencin del comple0o' ya que tendr mayor afinidad por la
fase estacionaria.
:n buen e0emplo de este mtodo podra verse en el e0emplo siguiente: ,l
amoniaco y la etanolamina no se separan seg/n un mtodo normal de cromatografa
inica' por lo que se recurre a este tipo de separacin.
&#;
<
- .*
<
&#;
<
4
.*
=
-
(par
inico>)
&#;
<
* - *;C*
3
C*
3
.*
3
&#;
<
4

-
.*
<
C*
3
C*
3
;* (par
inico3)
Como se puede observar el par inico > es menos %idrofbico que el 3 por lo que
el segundo sufrir una atraccin mayor a permanecer en la fase estacionaria' eluyndose
posteriormente
Cromatografa de e+clusin inica
Como su nombre indica es una tcnica cromatogrfica que se basa en la
e+clusin de los iones. #i nos basamos en la e+clusin de aniones (ya que es
principalmente para lo que se usa la cromatografa inica) podemos decir que la
columna que se emplea es de intercambio catinico. Las molculas fuertemente
disociadas (*Cl' #;
34
=
...) no sufrirn retencin ninguna (sern e+cluidas). ,l reactivo
que se usa tiene una parte orgnica para favorecer la separacin. Las interacciones que
e+isten entre los solutos no inicos y la fase estacionaria favorecen ms a/n la
separacin cromatogrfica. Debido a esto' tambin se suele emplear cierta cantidad de
un disolvente orgnico miscible en la fase mvil para me0orar la selectividad (debido a
que de este modo se favorece la polaridad y se permite que se produ$ca el intercambio
con el polmero como veremos a continuacin).
Cuanto mayor sea la tendencia a la ioni$acin de la sustancia' menor afinidad
tendr por la fase estacionaria y eluir antes.
Preguntas
>.4 ?,n qu consiste y con que fin se aplica la elucin por gradiente@
consiste en variar la carga inica del solvente o su p* de forma que se alcance el
punto isoelctrico del in de inters o el de la matri$' neutrali$ando de este modo la
fuer$a que los retiene en la columna y permitiendo que la abandonen.
3.4 ?Cmo definiras la capacidad de un intercambiador@ 9ndica las distintas
formas de e+presarla
,s una medida cuantitativa de la %abilidad para aceptar contraiones cambiantes'
se puede e+presar como:
Capacidad total: n/mero de grupos sustituyentes cargados por unidad de
gramo de intercambiador seco o ml de intercambiador %/medo.
Capacidad disponible: Cantidad de analitos que pueden unirse a un
intercambiador inico en las condiciones de traba0o.
<.4 :na fase estacionaria slida cargada negativamente' ?Au tipo de partculas
retendra@ ' ?Cmo se conoce a los intercambiadores que forman parte de la fase
estacionaria@
&etendra partculas de carga positiva' es decir' cationes. Los intercambiadores
de este estilo se conocen como intercambiadores catinicos.
Rafael Rodrguez Ruiz
4 de Ingeniera Qumica