KATA PENGANTAR

Puji syukur kami panjatkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa karena atas
berkat dan penyertaan-Nya sehingga kami dapat menyelesaikan tugas laporan
tentang Metabolisme dan Oksidasi Biologis !ami juga mengu"apkan terima
kasih kepada semua pihak yang mendukung dalam penyusunan tugas laporan ini
!ami menyadari tugas laporan ini masih belum sempurna# oleh karena itu
kritik dan saran yang membangun dari para pemba"a sangat membantu kami
untuk perbaikan tugas ke depan
$khir kata kami dari kelompok %-& berharap semoga tugas ini berman'aat
bagi para pemba"a
(urabaya# )uni *+,-
Penyusun
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 1
DAFTAR ISI
!$T$ PEN.$NT$/,
0$1T$/ 2(2*
B$B 2 PEN0$3454$N&
B$B 22 T4)4$N P/$!T2!4M -
B$B 222 METO0E !E/)$,6
B$B 27 3$(25 P/$!T2!4M,8
*, 4ji 5aktat dehidrogenase dalam ragi
** 4ji ("hardinger
*& 4ji Oksidase dan Pengaruh 7itamin %
*- 4ji (i'at antioksidan 7itamin % terhadap gugus 'enol
*9 4ji si'at reduksi :itamin % terhadap reaksi Benedi"t
B$B 27 PEMB$3$($N **
!E(2MP45$N*;
B$B 7 0$1T$/ P4(T$!$*8
5$MP2/$N *<
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 2
BAB I
PENDAHULUAN
Metabolisme
Metabolisme adalah segala proses reaksi kimia yang terjadi di dalam
makhluk hidup# mulai dari makhluk bersel satu yang sangat sederhana# seperti
bakteri# proto=oa# jamur# tumbuhan# he>an? sampai kepada manusia# makhluk
yang susunan tubuhnya sangat kompleks 0i dalam proses ini makhluk hidup
mendapat# mengubah# dan memakai senya>a kimia dari sekitarnya untuk
mempertahankan hidupnya
Metabolisme meliputi proses sintesis dan proses penguraian senya>a atau
komponen dalam sel hidup Proses sintesis itu disebut anabolisme dan proses
penguraian disebut katabolisme (emua reaksi metabolisme dikatalis oleh en=im#
termasuk reaksi yang sederhana seperti penguraian asam karbonat menjadi air dan
karbondioksida? proses pemasukan dan pengeluaran =at kimia dari dan ke dalam
sel melalui membran? proses biosintesis protein yang panjang dan rumit? atau pun
proses penguraian bahan makanan dalam sistem pen"ernaan mulai dari mulut#
lambung# usus# dan penyerapan hasil penguraian tersebut melalui dinding usus#
serta penyebarannya ke seluruh bagian tubuh yang memerlukannya
$nabolisme dibedakan dari katabolisme dalam beberapa hal@ anabolisme
merupakan proses sintesis molekul ke"il menjadi molekul yang lebih besar#
sedangkan katabolisme adalah sebaliknya# yaitu proses penguraian molekul besar
menjadi molekul ke"il? anabolisme adalah proses yang membutuhkan energi#
sedangkan katabolisme adalah proses yang melepaskan energi? anabolisme
merupakan reaksi reduksi# sedangkan katabolisme adalah reaksi oksidasi?
seringkali hasil akhir anabolisme merupakan senya>a pemula untuk katabolisme
1ungsi katabolisme adalah menyediakan bahan baku untuk sintesis molekul lain
dan menyediakan energi kimia
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 3
Antioksidan
0alam pengertian kimia# senya>a antioksidan adalah senya>a pemberi
elektron Aelectron donorsB (e"ara biologis# pengertian antioksidan adalah
senya>a yang mampu menangkal atau meredam dampak negati' oksidan dalam
tubuh $ntioksidan bekerja dengan "ara mendonorkan satu elektronnya kepada
senya>a yang bersi'at oksian sehingga akti:itas senya>a oksidan tersebut bisa
dihambat
(e"ara umum# antioksidan dikelompokkan menjadi *# yaitu antioksidan
en=imatis dan non-en=imatis $ntioksidan en=imatis dan non-en=imatis tersebut
bekerja sama memerangi akti:itas senya>a oksidan dalam tubuh Terjadinya stres
oksidati' dapat dihambat oleh kerja en=im-en=im antioksidan dalam tubuh dan
antioksidan non-en=imatis
$ntioksidan en=imatis
$ntioksidan en=imatis merupakan antioksidan endogenus Termasuk di
dalamnya adalah en=im superoksida dismutase A(O0B# katalase# glutation
peroksidase A.(3-PCB# serta glutation reduktase A.(3-/B En=im-en=im
ini bekerja dengan "ara melindungi jaringan dari kerusakan oksidati' yang
disebabkan oleh radikal bebas oksigen seperti anion superoksida# radikal
hidroksil# dan hidrogen peroksida A3
*
O
*
B ABray D Taylor#
,<<&?Pen"e#,<<,B
$ntioksidan non-en=imatis
$ntioksidan non-en=imatis dibagi menjadi * kelompok# antara lain @
$ntioksidan larut lemak# seperti Etoko'erol# karotenoid# 'la:onoid#
Fuinon# dan bilirubin
$ntioksidan larut air# seperti asam askorbat# asam urat# protein
pengikat logam# dan protein pengikat heme
$ntioksidan non-en=imatis banyak ditemukan dalam sayuran dan buah-
buahan !omponen yang bersi'at antioksidan dalam sayuran dan buah-buahan
meliputi :itamin %#E#G-karoten# 'la:onoid# iso'la:on# 'la:on# antosianin# katekin#
dan isokatekin A!ahkonen# et al# ,<<<B# serta asam lipoat A$ndreassen# et al#
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 4
*++,B (enya>a 'itokimia ini membantu melindungi sel dari kerusakan oksidati'
yang disebabkan oleh radikal bebas
Berdasarkan mekanisme kerjanya# antioksidan digolongkan menjadi &
kelompok# yaitu @
$ntioksidan primer
$ntioksidan primer meliputi en=im superoksida dismutase A(O0B#
katalase# dan glutation peroksidase A.(3-PCB $ntioksidan primer disebut
juga antioksidan en=imatis (uatu senya>a dikatakan sebagai antioksidan
primer# apabila dapat memberikan atom hidrogen se"ara "epat kepada
senya>a radikal# kemudian radikal antioksidan yang terbentuk segera
berubah menjadi senya>a yang lebih stabil
$ntioksidan sekunder
$ntioksidan sekunder disebut juga antioksidan eksogenus atau non-
en=imatis Menurut (oe>oto A*++,B dan 5ampe A,<<<B# antioksidan
sekunder meliputi :itamin E# :itamin %# -karoten# 'la:onoid# asam urat#
bilirubin# dan albumin (enya>a antioksidan non-en=imatis bekerja
dengan "ara menangkap radikal bebas Afree radical scavengerB# kemudian
men"egah reakti:itas ampli'ikasinya !etika jumlah radikal bebas
berlebihan# kadar antioksidan non-en=imatik yang dapat diamati dalam
"airan biologis menurun
$ntioksidan tersier
!elompok antioksidan tersier meliputi sistem en=im 0N$-repair dan
metionin sul'oksida reduktase En=im-en=im ini ber'ungsi dalam
perbaikan biomolekuler yang rusak akibat reakti:itas radikal bebas
Vitamin
7itamin disebut juga sebagai =at pengatur yang melan"arkan jalannya
mesin tersebut 0alam 'ungsi tubuh# :itamin itu bukan saja perlu untuk
melan"arkan proses-proses hidup tubuh# tetapi tanpa :itamin# mesin tubuh kita
tidak dapat bekerja sama sekali )adi# :itamin bukan saja mengatur terjadinya
proses-proses penggerak kegiatan tubuh# tetapi juga memungkinkan
berlangsungnya proses-proses tersebut
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 5
Asal Vitamin dalam Bahan Makanan
(ebagian besar :itamin dibentuk di dalam tumbuhan dan sebagian ke"il
saja dibentuk di dalam tubuh he>an dan manusia 3e>an dan manusia sanggup
mengubah beberapa =at tertentu menjadi :itamin Bahan dasar yang kemudian
diubah menjadi :itamin tersebut# dinamakan prekursor atau pro:itamin
7itamin merupakan ikatan kimia organik dan =at kimia organik ini
disusun di dalam tumbuhan yang berhijau jaun Akhloro'ilB# dari bahan dasar gas
karbondioksida A%O
*
B dan air# dengan pertolongan tenaga sinar matahari
7itamin %
7itamin % merupakan senya>a yang sangat mudah larut dalam air#
mempunyai si'at asam dan si'at pereduksi yang kuat (i'at-si'at tersebut terutama
disebabkan adanya struktur enediol yang terkonjugasi dengan gugus karbonil
dalam "in"in lakton Bentuk :itamin % yang ada di alam terutama adalah 5-asam
askorbat 0-asam askorbat jarang terdapat di alam dan hanya memiliki ,+ persen
akti:itas :itamin % Biasanya 0-asam askorbat ditambah ke dalam bahan pangan
sebagai antioksidan# bukan sebagai sumber :itamin %
7itamin % atau yang disebut juga asam askorbat# digolongkan atau
diklasi'ikasikan ke dalam kelompok senya>a yang disebut /edukton (enya>aH
senya>a yang termasuk golongan redukton berada dalam sistem oksidasi E
reduksi yang bersi'at re:ersible
(ebagai antioksidan# :itamin % bekerja sebagai donor elektron# dengan
"ara memindahkan satu elektron ke senya>a logam %u (elain itu# 7itamin % juga
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 6
dapat menyumbangkan elektron ke dalam reaksi biokimia intraseluler dan
ekstraseluler 7itamin % mampu menghilangkan senya>a oksigen reakti' di dalam
sel netro'il# monosit# protein lensa# dan retina 0i luar sel# :itamin % mampu
menghilangkan senya>a oksigen reakti'# men"egah terjadinya 505 teroksidasi#
mentrans'er elektron ke dalam toko'erol teroksidasi# dan mengabsorpsi logam
dalam saluran pen"ernaan A5e:ine# et al#,<<9B
Metabolisme Vitamin C
(umber :itamin % terdapat dalam makanan# terutama buah-buahan dan
sayur mayur 0i dalam sayuran tidak terdapat begitu banyak :itamin % jika
dibandingkan dengan buah-buahan 0alam buah-buahan# :itamin % dapat
ditemukan lebih banyak pada kulit dibandingkan dengan di bagian daging dan
paling sedikit di dalam biji !adar :itamin % sangat dipengaruhi :arietas#
lingkungan tempat tumbuh# pemakaian berbagai jenis pupuk# tingkat matang
buah# dsb 7itamin % sangat mudah rusak pada penyimpanan dan pemasakan
serta berbagai proses teknologi pangan# sehingga dalam hidangan# :itamin %
yang tertinggal jauh lebih ke"il dibandingkan dengan kadarnya di dalam bahan
makanan segar sebelum mengalami pemasakan atau penanganan lainnya
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 7
Tabel ! Kand"n#an Vitamin $ dalam sa%"&'sa%"&an dan
b"a('b"a(an
!omoditas 7itamin % AmgI,++ gB
0aun katuk rebus &#66
!a"ang panjang rebus J *#8+
!angkung ,,#&-
%abai hijau -+#;6
Bayam <#8&
Pepaya *6#6;
Nanas ,*#86
Pisang raja ,*#,*
)eruk mandarin ,+#,,
Taoge tumis ,<#88
)eruk peras ;#&6
!ubis &#*&
)eruk :alen"ia &,#+*
Mangga indramayu &;#,-
)ambu biji 9*#+6
Tomat apel &#6,
$pel malang 9#8*
$sam askorbat dapat meningkatkan 'ungsi imun# dengan menstimulasi
produksi inter'eron Aprotein yang melindungi sel dari serangan :irusB 7itamin
ini dapat menstimulasi kemotaksis dan respons proli'erasi netro'il# serta
melindungi sel dari serangan radikal bebas yang diproduksi oleh netro'il
teroksidasi $sam askorbat juga memiliki peran penting dalam proses 'isiologis
tanaman# termasuk pertumuhan# di'erensiasi# dan metabolismenya A1oyer# ,<<&B
$skorbat berperan sebagai reduktor untuk berbagai radikal bebas
7itamin E
7itamin E merupakan istilah umum untuk sejumlah senya>a tokol dan
trienol# dimana senya>a yang paling akti' adalah K-toko'erol Terdapat delapan
atau lebih senya>a dalam kelas toko'eril Atokol dan trienolB yang semuanya
merupakan turunan dari 6-kromonal dan tersebar luas di alam 0ari delapan
senya>a tersebut terdapat empat senya>a yang memiliki struktur tokol yang
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 8
merupakan isoprenoid berantai sisi %,6 jenuh A'itilB dan - senya>a lainnya
berstruktur trienol yang mempunyai & ikatan rangkap pada %,6nya
Tokotrienol se"ara alami banyak terdapat di berbagai tanaman# namun
jumlah berlebihan ditemukan dalam minyak kelapa sa>it (umber :itamin E lain
terdapat dalam beras# ke"ambah gandum# oat# barley# biji-bijian# ka"ang-
ka"angan# sayuran hijau# minyak nabati# dan minyak hati (ebagai antioksidan
K-tokotrienol memiliki potensi lebih tinggi daripada K-toko'erol yang dikenal
sebagai :itamin E Oleh sebab itu# senya>a ini diprediksi akan menjadi
antioksidan baru yang akan banyak digunakan di kemudian hari
Tabel )! Kand"n#an Vitamin E dalam sa%"&'sa%"&an
!omoditas 7itamin E AmgI,+ gB
0aun katuk merah ,#**
0aun katuk rebus ,#-6
!a"ang panjang mentah ,#&*
!a"ang panjang rebus +#<9
Peanut butter ,#6,
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 9
0aun singkong mentah ,#+*
0aun singkong rebus ,#;,
Biji kedelai ,#;8
!e"ambah kedelai rebus *#,*
Taoge mentah ,#9&
!angkung +#<&
%abai hijau ,#**
Bayam +#<&
)agung mentah ,#9,
)agung rebus *#++
!elapa mentah +#-&
!elapa matang +#-&
Taoge tumis +#86
Toko'erol# terutama K-toko'erol telah diketahui sebagai antioksidan yang
mampu mempertahankan integritas membran (enya>a tersebut dilaporkan
bekerja sebagai s"a:enger radiakal bebas oksigen# peroksi lipid# dan oksigen
singlet A0iplo"k# et al# ,<8<B Menurut $s"herio# et al A,<<*B# K-toko'erol
merupakan bentuk suplemen :itamin E yang paling banyak 7itamin E atau K-
toko'erol merupakan antioksidan yang larut dalam lemak# banyak terdapat dalam
membran eritrosit dan lipoprotein plasma (ebagai antioksidan# :itamin E
ber'ungsi sebagai donor ion hidrogen yang mampu mengubah radikal peroksil
Ahasil oksidasi lipidB menjadi radikal toko'erol yang kurang reakti'# sehingga
tidak mampu merusak rantai asam lemak
1enol
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 10

1enol atau asam karbolat atau ben=enol adalah =at kristal tak ber>arna
yang memiliki bau khas /umus kimianya adalah %639O3 dan strukturnya
memiliki gugus hidroksil A-O3B yang berikatan dengan "in"in 'enil !ata 'enol
juga merujuk pada beberapa =at yang memiliki "in"in aromatik yang berikatan
dengan gugus hidroksil 1enol memiliki kelarutan terbatas dalam air# yakni 8#&
gramI,++ ml 1enol memiliki si'at yang "enderung asam# artinya dapat
melepaskan ion 3
L
dari gugus hidroksilnya Pengeluaran ion tersebut
menjadikan anion 'enoksida %639O
M
yang dapat dilarutkan dalam air
0ibandingkan dengan alkohol ali'atik lainnya# 'enol bersi'at lebih asam
3al ini dibuktikan dengan mereaksikan 'enol dengan NaO3# di mana 'enol dapat
melepaskan 3
L
Pada keadaan yang sama# alkohol ali'atik lainnya tidak dapat
bereaksi seperti itu Pelepasan ini diakibatkan pelengkapan orbital antara satu-
satunya pasangan oksigen dan sistem aromatik# yang mendelokalisasi beban
negati' melalui "in"in tersebut dan menstabilkan anionnya
1enol didapatkan melalui oksidasi sebagian pada ben=ena atau asam
ben=oat dengan proses /as"hig 1enol juga dapat diperoleh sebagai hasil dari
oksidasi batu bara 1enol merupakan komponen utama pada antiseptik dagang#
trikloro'enol atau dikenal sebagai T%P Atri"hlorophenolB 1enol juga merupakan
bagian komposisi beberapa anestitika oral# misalnya semprotan kloraseptik
1enol ber'ungsi dalam pembuatan obat-obatan Abagian dari produksi aspirin#
pembasmi rumput liar# dan lainnyaB 1enol yang terkonsentrasi dapat
mengakibatkan pembakaran kimia>i pada kulit yang terbuka
Akti*itas *enol te&(ada+ en,im
!entang ASolanum tuberosumB mudah sekali mengalami pen"oklatan
Abro>ningB# bila penenganannya kurang baik # salah satu 'a"tor yang
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 11
mempengaruhi adalah asam askorbat# tirosin# en=im poli'enol oksidase dan
oksigen yang tersedia /eaksi pen"oklatan dapat terjadi melalui dua proses yaitu
proses pen"oklatan en=imatik# disebabkan adanya en=im PPO dan tirosin yang
berperan sebagai substrat sedangkan proses non en=imatis disebabkan karena
reaksi Meillard# karamelisasi atau oksidasi asam askorbat Proses pen"oklatan
yang terjadi kan mengurangi kualitas produk dan menurunkan minat konsumen
Pada penelitian ini di"oba mempelajari proses yang terjadi apakah proses
en=imatik atau non en=imatik# dengan menggunakan dua jenis kentang :arietas
Nonosobo dan Ta>angmangu Proses pen"oklatan sebenarnya dimulai dari
kentang yang dikupas# dipotong-potong# oksidasi asam askorbat# senya>a
phenol seperti senya>a tirosin sebagai substrat# akan dikatalisis en=im PPO
menjadi Fuinon dan berpolimerisasi membentuk o Fuinon# sehingga
menghasilkan >arna ke"oklatan Penentuan asam askorbat dalam :arietas
kentang digunakan untuk proses penghambatan pen"oklatan kentang atau proses
bro>ning AinhibitorB# karena menurut Mondy#,<<&# asam askorbat dapat
menghambat en=im PPO pembentuk melanin
Poli'enol Oksidase
Bahan pangan sayur dan buah dapat mudah mengalami pen"oklatan jika
bahan pangan tersebut terkelupas atau dipotong Pen"oklatan AbrowningB
merupakan proses pembentukan pigmen ber>arna kuning yang akan segera
berubah menjadi "oklat gelap Pembentukan >arna "oklat ini dipi"u oleh reaksi
oksidasi yang dikatalisis oleh en=im 'enol oksidase atau poli'enol oksidase !edua
en=im ini dapat mengkatalis oksidasi senya>a 'enol menjadi Fuinon dan
kemudian dipolimerasi menjadi pigmen melaniadin yang ber>arna "oklat
En=im poli'enol oksidase memiliki kode Enzym Commision AE%B
,,-,8,# nama tri:ial monophenol monooOygenase dan nama 24P$%
monophenol# 5-dopa@oOygen oOidoredu"tase
(elain itu# en=im ini juga memiliki nama lain# yaitu tyrosinase# phenolase#
monophenol oOidase# "resolase# "ate"hol oOidase# polyphenolase# pyro"ate"hol
oOidase# dopa oOidase# "hlorogeni" oOidase# "ate"holase# monophenolase# o
diphenol oOidase# "hlorogeni" a"id oOidase# diphenol oOidase# odiphenolase#
tyrosine-dopa oOidase# odiphenol@ oOygen oOidoredu"tase# polyaromati" oOidase#
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 12
monophenol monooOidase# odiphenol oOidoredu"tase# monophenol
dihydroOyphenylalanine@ oOygen oOidoredu"tase# !a"etyl-6-hydroOytryptophan
oOidase# monophenol# dihydroOy-5-phenylalanine oOygen oOidoredu"tase# o
diphenol@O
*
oOidoredu"tase# dan phenol oOidase AN%-24BMB *+,+B En=im
poli'enol oksidase dihasilkan dari reaksi antara 5-tyrosine# 5-dopa# dan O
*
menjadi 5-dopa# dopaFuinone# dan 3
*
O
En=im poli'enol oksidase APPOB adalah en=im oksidoreduktase yang
mengandung tembaga A%uB yang umumnya dikenal berperan dalam proses
melanisasi pada he>an dan pen"oklatan pada tanaman En=im PPO tersebar luas
di alam# mempunyai berat molekul ,*8+++ dalam keadaan murni# tidak
ber>arna# dan stabil pada p3 netral Pertama kali diidenti'ikasi pada tahun ,<;9
dari jamur !onsentrasi en=im yang tinggi ditemukan pada jamur# umbi kentang#
apel# pisang# alpukat# daun teh# biji kopi# dan daun tembakau (elain pada
tanaman# en=im PPO juga ditemukan pada bakteri dan mamalia
Pada tanaman# en=im PPO terdapat dalam plastida dan kloroplas# juga
ditemukan terlarut dalam sitoplasma pada tanaman yang tua dan sebagai 'raksi
terlarut dari homogenat beberapa sayur
En=im poli'enol oksidase atau PPO A"olyphenol #$idaseB telah banyak
dilaporkan oleh beberapa peneliti bah>a en=im tersebut di dalam tanaman
berperan terhadap sistem ketahanan dan penyembuhan jaringan yang terluka
$kti:itas en=im PPO telah dipelajari pada berbagai tanaman antara lain @
pada apel AMalus sp%B# pir A"yrus sp%B# bun"is AVicia faba &%B# kentang ASolanum
tumerosum &%B# daun selada A&ectuca sativa &%B# pisang AMusa cavendishii &%B#
dan kopi ACoffea arabica &%B
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 13

BAB II
TU-UAN PRAKTIKUM
Tujuan analisis biokimia metabolisme dan oksidasi biologis adalah @
! Laktat de(id&o#enase dalam &a#i
Mengetahui peristi>a oksidasi-reduksi berdasarkan akti:itas en=im laktat
dehidrogenase terhadap substratnya asam laktat
)! U.i S/(a&din#e&
Mengamati peristi>a reduksi berdasarkan akti:itas en=im laktat
dehidrogenase dalam susu segar
0! U.i 1ksidase dan Pen#a&"( Vitamin $
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 14
- Memperlihatkan proses oksidasi senya>a 'enol oleh poli'enol oksidase
APPOB di dalam bahan
- Memperlihatkan e'ek antioksidan :itamin % terhadap oksidasi 'enol oleh
PPO
2! U.i si*at antioksidan 3itamin $ te&(ada+ #"#"s *enol
- Memperlihatkan proses oksidasi senya>a 'enol oleh poli'enol oksidase
APPOB di dalam kentang
- Memperlihatkan e'ek antioksidan :itamin % terhadap oksidasi 'enol oleh
PPO
4! U.i Si*at &ed"ksi 3itain $ te&(ada+ &ea#en benedi/t
Memperlihatkan proses reduksi :itamin terhadap reagen benedi"t yang
mengandung ion %u
LL

BAB III
MET1DE KER-A
! Laktat de(id&o#enase dalam &a#i
/eagen dan Bahan @
Tabung reaksi# pipet tetes# suspensi ragi AyeastB# metilen blue +#+* P#
sodium laktat# para'in
Prosedur @
(iapkan * tabung reaksi# yang diisi dengan 9 ml suspesi ragi dan metilen
blue +#+* P !husus tabung pertama ditambahkan sodium laktat 9P !o"ok
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 15
pelan 5apisi permukaan tabung dengan para'in# panaskan dalam penangas
&8Q% $mati perubahan >arna yang terjadi
)! U.i S/(a&din#e&
$lat dan Bahan @
Tabung reaksi# pipet tetes# suspensi ragi AyeastB# metilen blue ++*P#
'ormaldehid +-P# susu segar# "asteurized milk Asusu yang telah dipanaskan
sampai ;+
o
%B
Prosedur @
(iapkan * tabung reaksi Tabung pertama diisi susu segar# tabung kedua
diisi pasteurized milk Masing-masing tabung ditambahkan & tetes metilen
blue ++*P da sodium laktat 9 P sebanyak , ml %ampur dengan baik#
panaskn dalam penangas 6+Q%# selama &+ menit $mati perubahan >arna
yang terjadi
0! U.i 1ksidase dan Pen#a&"( Vitamin $
Alat dan Bahan '
Tabung reaksi# pipet tetes# mortir# stamper# pisau# buah-buahan Apisang#
kentang dllB# larutan 'enol , P# larutan :itamin %# larutan :itamin E
"rosedur '
(ampel Akentang I apel I buah lainB dikupas# dilumatIdihan"urkan# diambil
sarinya# dimasukkan ke dalam & tabung reaksi sebanayak &-9 ml (emua
tabung ditambahkan larutan 'enol ,P sebanyak ,+ tetes !husus tabung ,
ditambahkan larutan :itamin % ,+ tetes# tabung * ditambahkan :itamin E ,+
tetes !o"ok pelan sampai homogen Perhatikan perubahan >arnaR
0ilakukan dengan "epat# untuk menghindari kesalahan hasil
2! U.i si*at antioksidan 3itamin $ te&(ada+ #"#"s *enol
$lat dan Bahan @
Tabung reaksi# pipet tetes# pisau# buah-buahan Apisang# kentang dllB# larutan
asam askorbat
Prosedur @
(ampel AkentangIapelIbuah lainB dikupas# disayat tipis# *-& potong dalam
tabung reaksi# ditambahkan larutan asam askorbat ,+ ml pada tabung ,#
larutan :itamin E ,+ m5 pada tabung * sedangkan tabung & ditambhakna air
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 16
suling dalam jumlah yang sama (etelah S jam perhatikan perubahan >arna
buah
4! U.i si*at &ed"ksi 3itamin $ te&(ada+ &ea#en benedi/t
$lat dan Bahan @
Tabung reaksi# pipet tetes# larutan :itamin %# reagen# larutan glukosa
Prosedur @
(iapkan * tabung reaksi# yang masing-masing diisi reagen benedi"t
sebanyak * ml !husus tabung , ditambahkan larutan asam askorbat - tetes
sedangkan tabung * ditambahkan - tetes larutan glukosa 0idihkan dalam
penangas 9 menit atau di api spritus & menit $mati yang terjadi
BAB IV
HASIL PRAKTIKUM
! Laktat de(id&o#enase dalam &a#i
/eaksi 4ji 3asil pengamatan kesimpulan
Tabung ,
AL sodium laktat 9
PB
Terjadi perubahan
>arna menjadi pu"at
/eduksi
Tabung * Tidak terjadi
perubahan >arna
oksidasi
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 17
)! U.i S/(a&d&in#e&
/eaksi 4ji 3asil Pengamatan !esimpulan
! 5s"s" se#a&6 Berubah menjadi
>arna biru pu"at
Mengalami reduksi
)! 5pasteurized6 >arna biru tetap Tidak mengalami
reduksi
0! U.i 1ksidase den#an Pen#a&"( Vitamin $
!entang
Tabung @ ) 0
ekst&ak kentan# & m5
Fenol 7 ,+ tetes
Vitamin $ - ,+ tetes -
Vitamin E - - ,+ tetes
!o"ok ad homogen# amati perubahan >arna
3asil pengamatan @
%oklat
agak tua
TT
%oklat
kekuningan
%oklat
kemerahan
$pel
Tabung @ ) 0
ekst&ak A+el & m5
Fenol 7 ,+ tetes
Vitamin $ - ,+ tetes -
Vitamin E - - ,+ tetes
!o"ok ad homogen# amati perubahan >arna
3asil pengamatan @ %oklat !uning
!uning
keruh
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 18
)eruk
Tabung @ ) 0
Ekst&ak -e&"k & m5
Fenol 7 ,+ tetes
Vitamin $ - ,+ tetes -
Vitamin E - - ,+ tetes
!o"ok ad homogen# amati perubahan >arna
3asil pengamatan @ !uning
!uning
jernih
!uning
keruh
(emangka
Tabung @ ) 0
Ekst&ak Seman#ka & m5
Fenol 7 ,+ tetes
Vitamin $ - ,+ tetes -
Vitamin E - - ,+ tetes
!o"ok ad homogen# amati perubahan >arna
3asil pengamatan @ Merah
!uning
jernih
!uning
keruh
Pir
Tabung @ ) 0
Ekst&ak Pi& & m5
Fenol 7 ,+ tetes
Vitamin $ - ,+ tetes -
Vitamin E - - ,+ tetes
!o"ok ad homogen# amati perubahan >arna
3asil pengamatan @
Putih
!e"oklatan
Putih keruh
Putih
ke"oklatan
keruh
2! U.i Si*at antioksidan 3itamin $ te&(ada+ #"#"s *enol
Pir
Tabung @ ) 0
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 19
I&isan Pi& & sayatan
Vitamin $ ,+ ml - -
Vitamin E - ,+ ml -
Ai& S"lin# - - ,+ ml
3asil pengamatan @
Narna buah
tetap
Narna buah
tetap
Berubah
menjadi
ke"oklatan
!entang
Tabung @ ) 0
I&isan Kentan# & sayatan
Vitamin $ ,+ ml - -
Vitamin E - ,+ ml -
Ai& S"lin# - - ,+ ml
3asil pengamatan @
Narna buah
tetap
Narna buah
tetap
Berubah
menjadi
ke"oklatan
$pel
Tabung @ ) 0
I&isan A+el & sayatan
Vitamin $ ,+ ml - -
Vitamin E - ,+ ml -
Ai& S"lin# - - ,+ ml
3asil pengamatan @
Narna buah
tetap
Narna buah
tetap
Berubah
menjadi
ke"oklatan
4! U.i Si*at &ed"ksi Vitamin $ te&(ada+ &ea#en Benedi/t
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 20
/eaksi 4ji 3asil Pengamatan !esimpulan
Tab"n# 5Vit $6 Narna biru benedi"t
berubah menjadi >arna
merah bata
Tereduksi
Tab"n# )
5Gl"kosa6
Narna biru benedi"t tidak
berubah
Tidak tereduksi
BAB V
PEMBAHASAN
! Laktat de(id&o#enase dalam &a#i
5aktat dehidrogenase A50# 503B adalah en=im intraseluler yang terdapat
pada hampir semua sel yang bermetabolisme# dengan konsentrasi tertinggi
dijumpai di jantung# otot rangka# hati# ginjal# otak# dan sel darah merah 503
merupakan suatu molekul tetramerik yang mengandung empat subunit dari dua
bentuk? 3 AjantungB dan M AototB# yang berkombinasi sehingga menghasilkan
lima isoen=im yang diberi nama 503, A3-B sampai 5039 AM-B 2soen=im-
isoen=im tersebut memiliki spesi'isitas jaringan yang sangat berguna dalam
menentukan organ asal
Pada 4ji 5aktat 0ehidrogenase# metilen blue akan bertindak sebagai
akseptor hydrogen# sodium laktat sebagai donor hidrogen sedangkan en=im
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 21
laktat dehidrogenase akan membantu proses pengambilan atom hidrogen dari
senya>a donor Asodium laktatB ke senya>a penerima Ametilen blueB En=im
laktat dehidrogenase yang berasal dari ragi akan membantu perpindahan atom
hidrogen dari sodium laktat ke metilen blue $tom hydrogen akan mereduksi
metilen blue sehingga pada tabung 2 yang telah diberi sodium laktat >arna yang
akan dihasilkan akan lebih pu"at (edangkan pada tabung 22 yang tanpa
pemberian metilen blue >arna yang dihasilkan akan lebih tua karena pada
tabung tersebut tidak ada substrat sodium laktat# sehingga metilen blue tidak bisa
mereduksi karena tidak ada pemberian donor hidrogen
)! U.i S/(a&d&in#e&
Pasteurisasi adalah sebuah proses pemanasan makanan yang bertujuan
membunuh organisme merugikan seperti bakteri# :irus# proto=oaTerdapat tiga
metode pasteurisasi yang umum dipakai di industri susu# terutama pada
kombinasi suhu dan >aktu tertentu
Pada tabung yang berisi susu segar# setelah ditambahkan & tetes metilen
blue +#+* P dan , ml sodium laktat 9 P# di"ampur dengan baik# lalu dipanaskan
selama &+ menit di penangas 6+
+
% terjadi perubahan >arna menjadi >arna biru
pu"at 3al ini menunjukkan adanya akti:itas reduksi metilen biru oleh en=im
dehidrogenase $kibatnya metilen biru yang ditambahkan akan tereduksi
menjadi >arna putih yang sebelumnya ber>arna biru En=im dehidrogenase
yang terdapat dalam susu segar mengkatalis pelepasan 3L dari 'ormaldehid#
atom yang dibebaskan akan bereaksi dengan metilen biru membentuk
leukobirumetilen 3ydrogen yang diperoleh dari 'ormaldehid untuk mereduksi
atom 3 yang terjadi oleh en=imnya segera diikat pada oksigen atau atom 3
diikat oleh akseptor birumetilen AMbB# maka terjadilah air atau luekobirumetilen
yang tidak ber>arna
Pada tabung yang berisi pasteuri=ed milk# setelah diberi perlakuan yang
sama dengan tabung yang berisi susu segar tidak mengalami perubahan >arna
Atetap ber>arna biruB# menunjukkan tidak adanya akti:itas reduksi metilen biru
oleh en=im dehidrogenase 3al ini disebabkan karena adanya pemanasan pada
susu segar A pasteurisasi B yang dapat merusak en=ime dehidrogenase yang ada
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 22
dalam susu segar sehingga susu tersebut kehilangan akti:itas en=im
dehidrogenase# dan pada saat pemberian metilen blue dan pemanasan >arna biru
tetap tidak berubah karena tidak dapat tereduksi oleh en=ime dehidrogenase
/eaksi 0ehidrogenasi @
%3
&
O3 U3
*
%O L 3
*
0! U.i 1ksidase den#an Pen#a&"( Vitamin $
Praktikum uji oksidase ini bertujuan untuk mengetahui proses oksidase
senya>a 'enol oleh en=im poli'enol oksidase APPOB serta memperlihatkan e'ek
pemberian antioksidan berupa :itamin % terhadap oksidasi 'enol oleh en=im
PPO Bahan yang kami gunakan dalam praktek ini adalah ekstrak kentang#apel#
pir# jeruk dan semangka yang didapat dari buah yang dikupas lalu dilumatkan
dalam mortir dan disaring ekstraknya5alu#di masukkan masing-masing dalam &
tabung reaksi (emua tabung ditambahkan larutan 1enol ,P 5alu tabung ke *
ditambahkan larutan :itamin %# dan tabung ke & ditambahkan larutan :itamin
E
Pada uji oksidase pertama Atabung reaksi ,B dimasukkan di dalamnya 9 ml
ekstrak kentang# apel# atau pir dan ,+ tetes larutan 'enol ,P Terjadi perubahan
>arna menjadi "oklat agak tua# atau "oklat Pembentukan >arna "oklat dipi"u
oleh reaksi oksidasi yang dikatalisis oleh en=im 'enol oksidase atau poli'enol
oksidase A PPO B En=im ini dapat mengkatalis oksidasi senya>a 'enol menjadi
Fuinon dan kemudian dipolimerasi menjadi pigmen melanin yang ber>arna
"oklat Oleh karena itu pada tabung , untuk uji ekstrak kentang# apel dan pir
terjadi perubahan >arna menjadi "oklat
3al yang sedikit berbeda terjadi pada buah jeruk dan semangka !etika
dikupas dan dilumatkan dengan mortir# kedua buah ini tidak mengalami
perubahan >arna menjadi "oklat 0engan penambahan 'enol# kedua buah ini
tetap tidak menunjukkan perubahan# namun >arnanya tidak terlalu segar Pada
proses ini terjadi sedikit proses oksidasi Buah jeruk dan semangka termasuk
jenis buah non-klimakterik (emangka mengandung suatu senya>a# 5ikopen
merupakan senya>a antioksidan yang berpotensi untuk men"egah radikal bebas
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 23
Buah semangka dan jeruk merupakan buah yang mengandung antioksidan#
sehingga ketika berada diuadara bebas tidak terjadi oksidasi karena :itamin % dan
likopen yang terkandung didalamnya ber'ugsi untuk menghalangi radikal bebas
yang ada diudara
Pada tabung yang ditambahkan 'enol dan :itamin E# mengasilkan >arna
yang tidak terlalu jauh perbedaannya !etika ditambahkan dengan :itamin %#
>arna kedua buah menjadi "erah dan segar 3al ini karenakan adanya :itamin E
yang di tambahakan pada tabung & sebagai antioksidan dan men"egah terjadinya
oksidasi dengan "ara memutus berbagai reaksi rantai radikal bebas dalam ekstrak
tersebut#karena kemampuannya memindahkan atau menyumbangkan hidrogen
'enolat kepada radikal bebas yang teroksidasi# sehingga radikal bebas menjadi
tidak reakti' $danya hidrogen yang disumbangkan kepada radikal bebas ekstrak
tersebut# toko'erol sendiri menjadi suatu radikal# tetapi lebih stabil karena elektron
yang tidak berpasangan pada atom oksigen mengalami delokalisasi ke dalam
struktur "in"in aromatik
/adikal bebas 'enoksi yang terbentuk dapat bereaksi dengan :itamin %
untuk menghasilkan kembali toko'erol atau bereaksi dengan radikal bebas
berikutnya sehingga "in"in kromana serta rantai samping dioksida menjadi
produk bukan radikal bebas Namun :itamin E daya antioksidannya tidak sekuat
:itamin %# sehingga >arna pada tabung * ber>arna lebih "oklat dari tabung ,
2! U.i Si*at antioksidan 3itamin $ te&(ada+ #"#"s *enol
2risan apel# kentang# pir yang dilarutkan dalam air suling berubah >arna
menjadi sedikit keruh Aagak ke"oklatanB 3al ini dikarenakan ketiga buah
tersebut mengandung en=im yang disebut oksidase poli'enol APPOB atau
tryosine En=im inilah yang bertanggungja>ab atas >arna "oklat pada apel
!etika ketiga buah diiris atau digigit# en=im tersebut mun"ul dan bereaksi
dengan oksigen sehingga mengoksidasi senya>a 'enolik yang terdapat dalam
jaringan apel o-kuinon O-kuinon kemudian menghasilkan produk-produk
sekunder ber>arna "oklat yang merubah dari >arna asli apel
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 24
2risan apel# kentang# pir yang dilarutkan dalam :itamin % tidak terjadi
perubahan >arna 3al ini dikarenakan :itamin % tersebut men"egah terjadinya
proses oksidasi senya>a 'enolik yang terdapat dalam jaringan apel# kentang# dan
pir
2risan apel# kentang# pir yang dilarutkan dalam :itamin E tidak terjadi
perubahan >arna 3al ini dikarenakan :itamin E tersebut men"egah terjadinya
proses oksidasi senya>a 'enolik yang terdapat dalam jaringan apel# kentang# dan
pir
4! U.i Si*at &ed"ksi Vitamin $ te&(ada+ &ea#en Benedi/t
4ji benedi"t bertujuan untuk mengetahui adanya gula pereduksi dalam
suatu larutan dengan indikator yaitu adanya perubahan >arna menjadi merah
bata /eagen benedi"t digunakan untuk menguji atau memeriksa adanya gula
pereduksi dalam suatu "airan /eagen benedi"t terdiri dari "ampuran larutan
tembaga sul'at#natrium 'iltrat dan natrium karbonat
Pada tabung yang ditambahkan larutan :itamin %# terjadi
perubahan menjadi >arna merah bata 7itamin % merupakan reduktor kuat
dengan adanya gugus enadiol# sehingga mampu mereduksi ion %u*L dari
pereaksi benedi"t menjadi ion %uL dengan membentuk endapan %u*O yang
ber>arna merah bata 7itamin % mampu mereduksi tembaga sul'at dari reagen
benedi"t sehingga menghasilkan endapan ber>arna merah bata 4ji benedi"t
bukan tergantung dengan senya>anya melainkan pada strukturnya sehingga uji
benedi"t dapat dilakukan juga untuk uji :itamin % Terbentuknya endapan merah
bata menunjukkan :itamin % bisa bersi'at sebagai reduktor dan karena
strukturnya identik sama dengan glukosa
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 25
Pada tabung yang ditambahkan glukosa# tidak terjadi perubahan
>arna 5arutan tetap ber>arna biru 3asil ini tidak sesuai karena glukosa
merupakan gula pereduksi yang seharusnya memberikan hasil perubahan >arna
menjadi merah bata !esalahan ini mungkin disebabkan kurang telitinya
praktikan saat mengerjakan praktikum
KESIMPULAN
4ji 5aktat dehidrogenase dalam ragi
En=im laktat dehidrogenase yang berasal dari ragi membantu perpindahan
atom hidrogen dari sodium laktat ke metilen blue Tanpa pemberian metilen blue
>arna yang dihasilkan kan lebih tua karena dalam tabung tersebut tidak ada
substrat sodium laktat
4ji ("hradinger
Terdapat akti:itas en=im dehidrogenase yang dalam susu segar dimana
pada saat pemanasan dapat mereduksi metilen biru A>arna biru berubah menjadi
putihI biru pu"at B
4ji Oksidase dan pengaruh :itamin % dan 4ji (i'at antioksidan 7itamin %
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 26
terhadap gugus 'enol
Terjadi reaksi oksidasi yang dikatalisis oleh en=im 'enol oksidase atau
poli'enol oksidase A PPOB dalam kentang# apel
7itamin % dapat menghambat terjadinya oksidasi 'enol oleh en=im
PPO dalam kentang# apel
7itamin E dapat menghambat terjadinya oksidasi# akan tetapi tidak
sekuat 7itamin %
4ji reduksi :itamin % terhadap reagen Benedi"t
4ji benedi"t untuk membuktikan adanya gula pereduksi yang ada pada
:itamin %# yaitu timbulnya endapan ber>arna merah bata yang menunjukkan
hasil positi'

BAB VI
DAFTAR PUSTAKA
(ediaotema# $"hmad 0jaeni ,<8; Vitaminologi )akarta @ Balai Pustaka
$ndar>ulan# Nuri ,<<* (imia Vitamin )akarta @ /aja>ali
Padmadisastra Y# (idik# $ji=ah ( *++& )ormulasi sediaan cair gel &idah Buaya
*$loe :era &inn%+ sebagai minuman kesehatan Bandung@ 1akultas 1armasi#
4ni:ersitas Padjadjaran
Ninarsi# 3ery *++; Antioksidan Alami , -adikal Bebas Yogyakarta@ !anisius
Muray # /obert ! *++< Biokimia .arper edisi *; # E.% @ )akarta
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 27
LAMPIRAN
U.i Laktat de(id&o#enase dalam &a#i
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 28
1 2
Tabung , @ 0itambahkan sodium laktat 9 P
Tabung * @ Tidak ditambahkan sodium laktat 9 P
U.i S/(&adin#e&
Tabung , @ (usu (egar
Tabung * @ (usu pasteurized
U.i Si*at antioksidan Vitamin $ te&(ada+ #"#"s *enol
APEL
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 29
2 1
PIR
U.i Si*at &ed"ksi Vitamin $ te&(ada+ &ea#en Benedi/t

Tabung , @ 7itamin %
Tabung * @ .lukosa
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 30
1
2
Praktikum Biokimia |METABOLISME dan OKSIDASE BIOLOGIS 31