1.

A que hacen referencia los trminos medida de crecimientos microbiano

y cultivo de enriquecimiento
Medidas de crecimiento microbiano: Se mide por cambios sucesivos en el
nmero de clulas o por el peso de la masa de las clulas. Existen varios mtodos
para contar las clulas o estimar la masa de stas.
Cultivo de enriquecimiento: es un medio de cultivo que contiene los nutrientes
necesarios para apoyar el crecimiento de una amplia variedad de
microorganismos, entre ellos algunos de los ms exigentes. Se utilizan
comnmente para la cosecha de diferentes tipos de microbios que estn
presentes en la muestra. Ciertos organismos no crecen en medios de cultivo
ordinarios. Requieren ingredientes que promueven el crecimiento, como la sangre,
glucosa, suero, huevo, entre otros. Los medios de enriquecimiento contienen
ingredientes que aumentan las cualidades estimulantes del medio propiciando un
crecimiento elevado. Otra caracterstica de los medios de enriquecimiento es que
pueden contener componentes qumicos que inhiben ciertos tipos de
microorganismos. De este tipo de Medios de cultivo se puede obtener un
subcultivo de una colonia aislada.
2.Explique brevemente dos mtodos de siembra utilizados para el estudio
microbiolgico de muestras ambientales. Mencione condiciones de toma de
muestras, procedimiento e interpretacin de resultados.
Los mtodos de siembra se utilizan para inocular por distintos mtodos sobre un
medio de cultivo apropiado una muestra que contenga bacterias con el fin de
reproducirlas para aumentar el nmero de individuos de la poblacin y formar
colonias en el caso de medios slidos.
Siembra por aislamiento: Es la separacin de un determinado microorganismo
del resto de microorganismos que le acompaan. El mtodo ms usual es la
siembra por estra sobre un medio de cultivo slido adecuado dispuesto en una
placa de petri.
Para ello se toma una pequea cantidad de muestra con un asa de platino y se
reparte sobre la superficie del medio de cultivo. Sobre el medio quedan separadas
e inmovilizadas las clulas bacterianas. Tras la incubacin en condiciones
adecuadas, cada clula viable origina una colonia visible resultado de sucesivas
divisiones celulares. Cada colonia bacteriana tiene unas caractersticas
determinadas en cuanto a su forma, borde, elevacin, tamao , consistencia, etc..
Los tipos de bacterias presentes en la muestra original es visible como tipos
diferentes de colonias. A partir de colonias separadas suficientemente es posible
obtener un cultivo puro de cada uno de los tipos de bacterias presentes en la
muestra original.
El xito del aislamiento, de la separacin sobre el medio de cultivo, depende de la
superficie sobre la que se ha distribuido la muestra. Es muy importante realizar el
mayor nmero de estras posible. En las primeras estras aparecern colonias
confluentes o una masa continua de microorganismos. En las estras finales
debern aparecer colonias separadas unas de otras. El aislamiento requiere un
reducido inculo de partida. La sucesiva disminucin del tamao de la poblacin
sobre el asa (por descarga sobre el medio de cultivo) al recorrer el medio de
cultivo, debe asegurar que finalmente algunas clulas queden suficientemente
separadas (aisladas unas de otras) sobre la superficie.
Criterios para la diferenciacin de colonias El aspecto de las colonias, su
coloracin, tamao, etc. permiten diferenciar diferentes bacterias, aunque son
propiedades generales muy influenciadas por las condiciones de cultivo, por lo que
a continuacin se realiza una descripcin muy general. Las colonias pueden ser
opacas, translucidas o transparentes. Algunas producen pigmentos fluorescentes
cuando se iluminan con luz ultravioleta. Otras aparecen con superficie
pulverulenta, otras son lisas, o rugosas, o poseen anillos concntricos. En
ocasiones el olor es tambin caracterstico.
Tincin de Gram:
Recoger muestras.
Hacer el extendido con un palillo de madera.
Dejar secar a temperatura ambiente o fijarlas utilizando un mechero.
Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado 3 veces
aprox.)
Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar 1 minuto.
Todas las clulas gram positivas se tien de color azul-prpura.
Enjuagar con agua.
Agregar lugol y esperar entre 1 minuto.
Enjuagar con agua.
Agregar alcohol acetona y esperar 30 segundos o 5 segn la concentracin del
reactivo (parte crtica de la coloracin).
Enjuagar con agua.
Tincin de contraste agregando safranina o fucsina bsica y esperar 1 minuto.
Este tinte dejar de color rosado-rojizo las bacterias Gram negativas.
Un microorganismo gram positivo debe presentar una pared celular sana. El
mismo microorganismo, si sufre dao de la pared por una u otra causa, se
vuelve gram negativo. Esto indica la importancia de la pared para la retencin
o el escape del colorante. Una posible teora del mecanismo de tincin es la
siguiente:
El colorante bsico entra al microorganismo, donde forma con el yodo una laca
insoluble en agua. El alcohol o la acetona empleados para aclarar, deshidrata
las paredes de los microorganismos grampositivos, tratados con mordiente, y
forma una barrera que la laca no puede atravesar. En las clulas
gramnegativas, los lpidos de la pared (ms abundantes que en las clulas
grampositivas) se disuelven por este tratamiento, lo que permite el escape del
complejo de cristal violeta con yodo. Algunos autores objetan esta teora, pero
es indudable la importancia general de la pared celular.