INSTRUCCIONES DE USO

MEDIOS EN
LAMINOCULTIVOS LISTOS
PARA USAR


DA-273157.00 Rev.: Junio de 2003

BD BBL Mycoslide

USO PREVISTO
BBL Mycoslide es un laminocultivo de tres lados con medios para la deteccin de hongos,
incluidas levaduras, a partir de orina, esputo, lavados farngeos, muestras fecales y diversas
muestras recogidas con torundas.

PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO
Mtodo microbiolgico.
Los hongos filamentosos y las levaduras son patgenos frecuentes que causan muchos tipos
de infecciones locales y sistmicas en personas inmunocompetentes e inmunodeprimidas
1
.

Uno
de los patgenos fngicos ms frecuentes es Candida albicans. En pacientes
inmunodeprimidos, C. albicans y la C. dubliniensis recientemente descrita, son los organismos
que con ms frecuencia causan infecciones localizadas y sistmicas. Las tres zonas corporales
principales en las que se producen infecciones locales son las vas respiratorias, el sistema
genitourinario y los intestinos. La determinacin cuantitativa de las levaduras aisladas a partir
de estas zonas corporales es importante, dado que pueden estar presentes en pequeas
cantidades en la flora normal pero aumentan significativamente durante las infecciones
1-5
.
BBL Mycoslide est formado por un soporte de agar de tres lados, cubierto por dos medios
fngicos y un medio para la deteccin de bacterias presentes en la muestra. Todo el soporte de
agar se sumerge en muestras lquidas o se inocula mediante la extensin de las muestras a
partir de torundas. Despus de la incubacin, los aislados pueden someterse a recuentos y ser
utilizados para pruebas de diferenciacin e identificacin adicionales y pruebas de sensibilidad.
El medio 1 es el agar malta, para la deteccin de todo tipo de hongos, incluidos los hongos y
levaduras. El extracto de malta contiene todos los nutrientes necesarios para favorecer el
crecimiento de hongos. El bajo pH del medio produce una inhibicin parcial o completa de las
bacterias contaminantes, pero es bien tolerado por los hongos. Este medio se utiliza para la
determinacin cuantitativa de los patgenos fngicos.
El medio 2 es el agar malta suplementado con cicloheximida que es un inhibidor de mohos
saprofitos y determinadas levaduras. La mayora de los hongos patgenos, incluida la Candida
albicans, no es inhibida en este medio. Sin embargo, Cryptococcus neoformans y determinadas
especies de Candida diferentes de C. albicans que tambin pueden desempear un papel como
agentes infecciosos, son inhibidas por la cicloheximida.
El medio 3 es el agar CLED (Agar cistina-lactosa deficiente en electrolitos), un medio de cultivo
diferencial para el aislamiento y el recuento de bacterias presentes en la orina. Tambin puede
ser utilizado para aislar bacterias a partir de otras muestras si dichos organismos no son muy
exigentes. En BBL Mycoslide, el medio se utiliza principalmente para determinar la flora
bacteriana acompaante.

BBL Mycoslide se utiliza para la deteccin, el aislamiento y el recuento de hongos a partir de
una variedad de zonas corporales y tipos de muestras. Tambin puede ser utilizado como
medio de transporte de la consulta del mdico a los laboratorios de anlisis.
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REACTIVOS
Frmulas* por litro de agua purificada
BBL Mycoslide
Medio 1: Agar malta Medio 2: Agar malta con
cicloheximida
Medio 3: Agar CLED
Extracto de malta 30,0 g Extracto de malta 30,0 g Peptona de gelatina 4,0 g
Agar 15,0 Agar 15,0 Peptona de casena 4,0
pH 4,1 0,2 Cicloheximida 1,0 Extracto de carne
bovina
3,0
pH 4,1 0,2 Lactosa 10,0
L-cistina 0,128
Azul de bromotimol 0,02
Agar 15,0
pH 7,3 0,3
*Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento.

PRECAUCIONES
. Solamente para uso profesional.
No utilizar los laminocultivos si muestran evidencia de contaminacin microbiana, decoloracin,
deshidratacin, grietas o cualquier otro signo de deterioro.
Emplear tcnicas aspticas y medidas de proteccin contra peligros biolgicos durante todo el
procedimiento. Consultar los procedimientos de manipulacin asptica, riesgos biolgicos y
desecho del producto usado en el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO.
Cuando se utilice BBL Mycoslide como medio de transporte desde la consulta del mdico al
laboratorio de diagnstico, cumplir las normas locales para el envo de muestras infecciosas.

ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL
Al recibir BBL Mycoslide almacenarlo en un lugar oscuro a 15 20 C en el envase original
hasta momentos antes de su utilizacin. No congelar, sobrecalentar, deshidratar ni someter a
fluctuaciones de temperatura.
Los portaobjetos pueden inocularse hasta la fecha de caducidad (vase la etiqueta del envase)
e incubarse durante los perodos de incubacin recomendados.
Los portaobjetos sin abrir de envases abiertos almacenados en un lugar limpio a 15 20 C
pueden ser utilizados hasta la fecha de caducidad. Una vez abiertos, deben utilizarse de
inmediato.

CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO
Preparar suspensiones equivalentes al patrn N 0,5 de McFarland de las cepas mencionadas
a continuacin. Para cada organismo, preparar un tubo (lo suficientemente ancho para permitir
la insercin de un soporte de agar BBL Mycoslide) con 20 25 mL de solucin salina estril y
aadir 1 mL de la suspensin anterior de la cepa. Abrir un BBL Mycoslide, quitar un soporte
de agar, sumergirlo brevemente en la suspensin de la cepa de prueba y continuar segn lo
descrito en Procedimiento de anlisis para las muestras lquidas. Incubar de 2 a 5 das a 35
2 C. Examinar si las superficies de agar presentan crecimiento, segn lo descrito en
Resultados e Interpretacin.

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Cepas Medio 1
Agar malta
Medio 2
Agar malta con
cicloheximida
Medio 3
Agar CLED
Candida albicans
ATCC 10231
Crecimiento Crecimiento Crecimiento
Aspergillus niger
ATCC 16404
Crecimiento Inhibicin de parcial a
completa
Crecimiento
E. coli
ATCC 25922
Inhibicin de parcial a
completa
Inhibicin de parcial a
completa
Crecimiento
Pseudomonas aeruginosa
ATCC 27853
Inhibicin de parcial a
completa
Inhibicin de parcial a
completa
Crecimiento
Enterococcus faecalis
ATCC 29212
Inhibicin de parcial a
completa
Inhibicin de parcial a
completa
Crecimiento
Staphylococcus aureus
ATCC 25923
Inhibicin de parcial a
completa
Inhibicin de parcial a
completa
Crecimiento
Sin inocular mbar claro mbar claro Amarillo
verdoso

PROCEDIMIENTO
Materiales suministrados
BBL Mycoslide. Con control microbiolgico.

Materiales no suministrados
Medios de cultivo auxiliares, reactivos y equipo de laboratorio que se requiera.

Tipos de muestras
BBL Mycoslide es adecuado para el aislamiento y recuento de hongos a partir de orina (de la
parte media de la miccin, de sonda o bien orina recogida mediante puncin vesical
suprapbica), esputo, lavados farngeos y otras muestras diversas (por ej., torundas vaginales).
No utilizar para detectar infecciones bacterianas.

Recogida y preparacin de las muestras
Emplear tcnicas aspticas al recoger las muestras. Utilizar los procedimientos estndar para la
recogida
1,6
.

La orina debe ser de una muestra reciente y de no ms de 2 h. Tambin se pueden mantener
las muestras de orina refrigeradas (hasta 24 h) para evitar el crecimiento excesivo de los
agentes infecciosos o contaminantes antes de la inoculacin.
Esputo: Una parte de un esputo expectorado o inducido reciente se aade a una parte de
solucin de tripsina al 0,25% y se agita con microesferas de vidrio estriles durante 45 minutos
a 37 C. Tambin el esputo se puede homogeneizar en un homogeneizador Stomacher durante
1 minuto. Si slo se dispone de una pequea cantidad de esputo, se puede utilizar sin
tratamiento previo.
Lavados farngeos: Centrifugar el lquido durante 10 minutos a 2000 x g. Desechar la fase
lquida, tomar el sedimento en 5 mL de solucin de tripsina (0,25%) o solucin salina estril y
agitar con microesferas de vidrio estriles durante 15 minutos a 37 C.
Muestras fecales, recientes o refrigeradas durante un mximo de 48 h. Homogeneizar una
muestra fecal en 100 ml de solucin de tripsina al 0,25% o solucin salina estril con
microesferas de vidrio estriles durante 15 minutos a 37 C.
Torundas: Recoger la muestra (por ej., de la faringe o la vagina) en una torunda y aplicar
directamente sin tratamiento previo segn se describe a continuacin. Si se produce una
demora entre la recogida y la inoculacin, transportar la torunda en medios de transporte
adecuados
1,6
.


Procedimiento de anlisis
1. Examinar a simple vista las superficies del agar con el tubo BBL Mycoslide cerrado.
Desechar los portaobjetos con reduccin de los medios o contaminacin.
2. Etiquetar el tubo con el nombre del paciente, el nmero de muestra y la fecha de inoculacin.
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3. Desenroscar la tapa y retirar el portaobjetos del tubo de plstico sin tocar las superficies del
agar.
Inoculacin con muestras lquidas (por ej., orina o lavados farngeos):
1. Sumergir brevemente el portaobjetos tres veces en las muestras lquidas (por ej., orina o
esputo pretratado, lavados farngeos, etc.) de manera que las capas de agar sean
inoculadas completamente por el lquido. No dejar el portaobjetos en el lquido durante ms
de 10 segundos, dado que as se podran eliminar los ingredientes y/o soltarse el gel del
soporte de plstico.
2. Si se dispone solamente de un pequeo volumen de muestra, recogerlo con una pipeta
estril o jeringa y enjuagar los tres medios completamente.
3. Dejar que el exceso de material se escurra, sosteniendo por la punta del portaobjetos contra
el borde interno del tubo.
4. Las ltimas gotas pueden ser eliminadas de la punta del portaobjetos con un papel tis.
Colocar con cuidado el portaobjetos nuevamente en el tubo de plstico y cerrar
completamente.
5. Incubar el portaobjetos durante 48 h a 30 2 C o enviar a un laboratorio especial despus
de la inoculacin. Es posible que se requiera una incubacin ms prolongada para el
crecimiento de hongos filamentosos, por ej., a partir de infecciones de las vas respiratorias
inferiores.
Inoculacin con muestras de torundas:
Extender con cuidado la torunda sobre los tres medios de cultivo del portaobjetos.

Resultados e Interpretacin
Despus de la incubacin, retirar con cuidado el portaobjetos del tubo para realizar la
interpretacin. Emplear tcnicas aspticas durante todo el procedimiento de examen. Se
recomienda utilizar guantes quirrgicos durante el examen. No tocar las superficies del agar!
Medio 1 (agar malta): Este medio permite la deteccin del recuento total de todos los hongos.
Los hongos filamentosos a veces producen colonias con una superficie rugosa (micelio areo).
Las colonias a menudo presentan pigmentacin (negro, gris, azul verdoso, amarillento y otros).
Las especies de levadura producen colonias de color de blanco a crema, de brillantes a opacas,
que generalmente tienen una superficie lisa y se asemejan a las colonias bacterianas. Se
requieren ms pruebas para lograr una identificacin completa de los patgenos
1
.
Para una determinacin cuantitativa, comparar el crecimiento real en el portaobjetos con las
imgenes de referencia suministradas en la Gua de interpretacin al final de este documento.
En caso de crecimiento denso y grandes cantidades de colonias (10
5
), las superficies de agar
pueden cubrirse por completo con la capa confluente de crecimiento.
Consultar en la tabla y las referencias la importancia clnica de los recuentos de patgenos para
las muestras de diversas zonas corporales
1-5
:

Nmero de colonias de levaduras Tipo de muestra
Normal
1)
Dudoso
2)
Importancia
clnica
Orina de la parte media de la miccin o de
sonda
10
3
/mL 10
4
10
5
/mL 10
5
/mL
Orina recogida mediante puncin vesical
suprapbica
La presencia de cualquier hongo tiene importancia clnica
Esputo 10
3
/mL 10
4
10
5
/mL 10
5
/mL
Lavados farngeos 10
2
10
3
10
4
>10
4

Muestras fecales 10
3
/g 10
4
10
5
/g >10
5
/g
3)
Muestras vaginales La presencia de cualquier aspecto de hongos tiene
importancia clnica
1)
Los recuentos bajos pueden ser significativos en pacientes tratados previamente o en pacientes con infecciones
crnicas.
2)
Volver a evaluar si es posible.
3)
Se debe evaluar con cuidado en pacientes con altos recuentos de lavaduras en las muestras fecales. Los
recuentos elevados se detectan a menudo en pacientes con tratamiento previo de antimicrobianos y antibacterianos.
Al final del tratamiento antibacteriano, el recuento de levaduras a menudo se reduce nuevamente hasta volver a su
valor normal. En los pacientes inmunodeprimidos, incluso los recuentos bajos pueden indicar una infeccin
1,3
.


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Medio 2 (agar malta con cicloheximida): Este medio asegura la supresin de aquellos hongos
filamentosos sensibles a la cicloheximida (por ej., mohos como Aspergillus). Determinadas
levaduras tambin son inhibidas por este aditivo. La resistencia a la cicloheximida es una
caracterstica importante para la diferenciacin de hongos:

Organismos
1)
Importancia clnica y frecuencia
Candida albicans Patgeno importante, frecuente
C. dubliniensis A menudo detectado en pacientes
con HIV
C. guilliermondii Raro, bajo
C. kefyr (=C. pseudotropicalis) Raro, bajo
Resistente a la
cicloheximida
Otras especies Raro
Candida tropicalis Raro, bajo
C. krusei Patgeno relativamente frecuente,
conocido
C. parapsilosis Patgeno raro, conocido
C. (Torulopsis) glabrata Patgeno relativamente frecuente,
conocido
Cryptococcus neoformans Patgeno raro, importante
Sensible a la cicloheximida
Aspergillus, Penicillium, y other fungi Aspergillus puede producir
infecciones en, por ejemplo, las
vas respiratorias inferiores. Estos
hongos tambin pueden aparecer
como contaminantes.
1)
Se debe tener en cuenta que el crecimiento o la inhibicin en este medio no se ven limitados a las especies
enumeradas en esta tabla. Los organismos mencionados ocurren muy frecuentemente en muestras clnicas. Para
obtener ms informacin, consultar las referencias
1,7
.


Medio 3 (agar CLED) se utiliza para la determinacin cuantitativa del recuento bacteriano
presente en la muestra. Los recuentos bacterianos pueden ser importantes en la evaluacin de
la relacin entre crecimiento bacteriano y hongos, por ej., en muestras fecales.

Tener en cuenta que son necesarias pruebas adicionales, tales como procedimientos
bioqumicos y/o al microscopio, para identificar por completo los patgenos aislados para este
laminocultivo
1
. La mayora de estos mtodos slo estn disponibles en los laboratorios de
diagnstico y, por lo general, no pueden ser realizados en la consulta del mdico. Por tanto,
todos los laminocultivos con resultados dudosos o claramente positivos deben ser enviados al
laboratorio de anlisis que realiza las pruebas micolgicas.

Despus de su utilizacin y antes de desecharlos, todos los tubos usados y otros materiales
contaminados deben ser esterilizados en autoclave o incinerados. Para obtener detalles, vase
el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO.

CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
BBL Mycoslide se utiliza para la deteccin, el aislamiento y la deteccin de hongos, incluidas
las levaduras a partir de orina, esputo, lavados farngeos, muestras fecales y otras muestras
numerosas. Los medios contenidos en este laminocultivo son medios estndar utilizados
comnmente para el aislamiento de los grupos fngicos y bacterianos respectivos
1, 8-10
.
De vez en cuando el crecimiento de bacterias en el medio de cultivo fngico (medios 1 y 2) de
este laminocultivo no se suprime por completo. En los casos dudosos, se debe realizar una
tincin con azul de metileno o tincin de gram a partir de las colonias presuntivas.
La mayora de las especies bacterianas menos exigentes crecern en el medio 3 (agar CLED).
Sin embargo este medio no favorece el crecimiento de organismos tales como la especie
Neisseria, Haemophilus spp., y otros. Los estreptococos beta-hemolticos no crecen bien en
este medio. Por tanto, se debe incluir agar sangre o agar chocolate si se sospecha infeccin
bacteriana con dichos organismos. En BBL Mycoslide, el agar CLED se utiliza principalmente
para determinar la flora bacteriana acompaante. Para obtener un diagnstico exacto de las
infecciones bacterianas, se recomienda utilizar otros sistemas y medios. Los sistemas BBL
Urotube se deben utilizar para el diagnstico de infecciones bacterianas a partir de muestras de
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orina. Las muestras para la deteccin de infecciones bacterianas de otras zonas corporales
deben ser procesadas en medios de cultivo en placas segn lo apropiado para la muestra.

El nmero de especies que pueden crecer en los medios de este laminocultivo es elevado y no
se limita a las especies mencionadas en la seccin Resultados e interpretacin. La
identificacin apropiada de muchos organismos puede ser realizada solamente por laboratorios
de anlisis. Por tanto, los portaobjetos deben ser enviados a dichos laboratorios despus de la
inoculacin o despus de la inoculacin e incubacin.

BBL Mycoslide es un sistema diseado para ser utilizado para aislamiento primario y recuento.
Para las pruebas adicionales y, especialmente, si se producen cultivos mixtos en los medios de
este sistema, se deben realizar subcultivos en medios en placa apropiados para obtener
cultivos puros, lo que es preceptivo para obtener una identificacin completa y pruebas de
sensibilidad
1
.

Los laminocultivos no deben utilizarse para realizar pruebas de sensibilidad en disco.

REFERENCIAS
1. Fromtling, R.A. (section editor). 2003. Mycology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A.
Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for
Microbiology, Washington, D.C.
2. Halle, E., et al. 2000. Genitalinfektionen Teil I und II. In: Mauch, H., Lttiken, R., and S. Gatermann
(eds.): MiQ - Qualittsstandards in der mikrobiologisch-infektiologischen Diagnostik, vol. 10 and 11.
Urban & Fischer, Munich, Germany.
3. Kist, M., et al. 2000. Infektionen des Darmes. In: Mauch, H., Lttiken, R., and S. Gatermann (eds.):
MiQ - Qualittsstandards in der mikrobiologisch-infektiologischen Diagnostik, vol. 9. Urban & Fischer,
Munich, Germany.
4. Podbielski, A., et al. 2000. Infektionen des Mundes und der oberen Atemwege. In: Mauch, H. and R.
Lttiken (eds.): MiQ - Qualittsstandards in der mikrobiologisch-infektiologischen Diagnostik, vol.13.
Urban & Fischer, Munich, Germany.
5. Mauch, H., et al. 2003. Infektionen der tiefen Atemwege Teil II. In: Mauch, H., Lttiken, R., and S.
Gatermann (eds.): MiQ - Qualittsstandards in der mikrobiologisch-infektiologischen Diagnostik, vol.
8. Urban & Fischer, Munich, Germany.
6. Sutton, D.A. 2003. Specimen collection, transport, and processing: mycology. In: Murray, P. R., E. J.
Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed.
American Society for Microbiology, Washington, D.C.
7. Hazen, K.C. 1995. New and emerging yeast pathogens. Clin. Microbiol. Rev. 8: 462-478.
8. MacFaddin, J. D. 1985. Media for isolation-cultivation-identification- maintenance of medical bacteria,
vol. 1, p. 275-284. Williams & Wilkins, Baltimore, MD.
9. Larone, D.H. 1995: Medically important fungi - a guide to identification. 3rd edition. ASM Press,
Washington.
10. Atlas, R.M. 1993. Handbook of Microbiological media. CRC Press, Boca Raton, FL.

ENVASE Y DISPONIBILIDAD
BBL Mycoslide
N de cat. 273157 10 portaobjetos

INFORMACION ADICIONAL
Para obtener ms informacin, dirjase a su representante local de BD.


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ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection.
2003 Becton, Dickinson and Company





GUIA DE INTERPRETACION (agar malta, medio 1)






10
3
10
4
10
5
10
6


Para la determinacin cuantitativa de recuentos de clulas (vase la seccin Resultados e
interpretacin para conocer los recuentos de importancia clnica)

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