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1 Introduo..........................................................................................

3
2 Formas de imunizao....................................................................3
3 Objetivos da vacinao...................................................................5
4 Tipos de vacinas............................................................................7
4.1 Vacinas replicativas.....................................................................................7
4.1.1 Vacinas com vrus patognico.....................................................................8
4.1.2 Vacinas com vrus de espcie heterloga...................................................8
4.1.3 Vacinas com vrus atenuado......................................................................9
4.1.4 Vetores vacinais.......................................................................................14
4.2 Vacinas no-replicativas............................................................................17
4.2.1 Vacinas com vrus inativado......................................................................18
4.2.2 Vacinas de subunidades virais..................................................................18
4.2.3 Vacinas de protenas recombinantes.........................................................19
4.2.4 Vacinas de peptdeos sintticos...............................................................21
4.3 Vacinas de DNA e RNA................................................................................22
4.4 Vacinas monovalentes e polivalentes.........................................................23
5 Adjuvantes..................................................................................23
6 Controle de qualidade.................................................................26
7 Conservao e administrao de vacinas.....................................27
8 Falhas vacinais............................................................................28
9 Reaes adversas da vacinao...................................................30
10 Bibliografa consultada.............................................................31
Cludio Wageck Canal
Clarissa Silveira Luiz Vaz
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Vacinas vricas
Vacinas vricas
3
1 Introduo
At o sculo XVIII, a varola afetava e matava
milhes de pessoas em todo o mundo. Naquela
poca, a prtica utilizada para evitar a doena era a
exposio das pessoas a uma pequena quantidade
de material obtido de leses cutneas de pessoas
com varola. Isso tinha como objetivo provocar uma
infeco controlada, que seria seguida de resposta
imunolgica e proteo frente a uma nova exposio
ao agente. A prtica, conhecida como variolao, era
originria da China e, embora bastante difundida
nas reas endmicas, no era considerada segura,
j que uma signifcativa parcela dos indivduos que
eram submetidos ao procedimento desenvolvia a
doena aps a exposio.
Em seus estudos sobre a varola humana, o
mdico britnico Edward Jenner observou que
os ordenhadores de vacas infectadas pela varola
bovina no desenvolviam a forma humana da en-
fermidade, o que sugeria algum tipo de proteo
cruzada. Em 1796, para comprovar a sua teoria,
Jenner coletou material de leses de varola do
bere de uma vaca e o administrou a um menino
de oito anos de idade. Alguns meses mais tarde,
ele exps esta criana ao vrus da varola humana
(smallpox) que, confrmando suas suspeitas, no
produziu a doena na criana. Com essa prtica,
Jenner demonstrou que a exposio prvia ao
vrus da varola bovina, um patgeno de baixa
virulncia, conferia proteo frente ao desafo
com o vrus da varola humana, antigenicamente
relacionado ao vrus bovino, porm mais virulento.
Posteriormente, na dcada de 1870, Louis Pasteur
utilizou o termo vacina (do Latim, vaccinia; termo
derivado de vaca) como forma de homenagem a
Jenner, para designar a prtica da administrao
de patgenos a indivduos sadios com o objetivo
de induzir resposta imunolgica. Pasteur realizou
diversos estudos que indicavam a viabilidade do
uso de micro-organismos atenuados ou inativados
como vacina, em uma poca em que as bases teri-
cas da imunizao ainda eram pouco conhecidas.
As vacinas consistem em micro-organismos
(viveis ou inativados) ou fraes destes que, quan-
do administradas a um indivduo, induzem uma
resposta imunolgica capaz de proteger frente ao
contato posterior com o agente original. A resposta
imunolgica que induzida resulta do desenvol-
vimento de clulas efetoras e clulas de memria.
A vacinao constitui-se na estratgia mais efetiva
de preveno e controle de vrias enfermidades
causadas por vrus e bactrias. Diversas viroses
animais e humanas j foram ou esto sendo contro-
ladas e erradicadas de pases e continentes graas
vacinao. A varola foi erradicada do mundo
h mais de trs dcadas; a poliomielite (paralisia
infantil) e o sarampo esto em vias de erradicao.
Cabe ressaltar que o Brasil possui o maior programa
governamental de vacinao humana do mundo,
sendo a maior parte das vacinas produzidas no
pas. Doenas animais, como a febre aftosa, peste
suna clssica, doena de Aujeszky, entre outras,
tambm foram erradicadas de pases e continentes
inteiros pelo uso sistemtico da vacinao.
A tecnologia empregada para a produo de
vacinas contra vrus apresentou um grande avano
com o domnio das tcnicas de cultivo de clulas, a
partir das quais foi possvel otimizar a atenuao
e a multiplicao de diversos agentes virais; e da
tecnologia de DNA recombinante, que permitiu a
manipulao dos genomas virais. Constantemente,
surgem outras novas tecnologias que podem servir
para o desenvolvimento de vacinas vricas mais
seguras, efcazes, estveis e de baixo custo. Algumas
dessas propostas ainda so essencialmente expe-
rimentais, e no h produtos licenciados, porm
podem preceder novas vacinas com possibilidade
de produo em escala comercial que podem es-
tar disponveis em um futuro prximo. Entre os
desafos para a indstria de imunobiolgicos est
a adequao dessas tecnologias surgidas nas lti-
mas dcadas para a produo de vacinas cada vez
mais efcientes frente demanda cada vez maior
por segurana, bem-estar e produtividade animal.
2 Formas de imunizao
O termo imunizao se refere induo de
imunidade frente a um determinado agente ou
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antgeno. De acordo com a participao do sistema
imunolgico na produo dessa imunidade, exis-
tem dois tipos principais de imunizao: passiva
ou ativa. A imunizao passiva pode ser natural
(adquirida ou transmitida atravs da placenta, co-
lostro ou gema do ovo) ou artifcial (administrao
de soro hiperimune). A imunizao ativa ocorre
pela exposio do animal ao agente infeccioso
(infeco) ou por vacinao.
2.1 Imunizao passiva
A imunizao passiva resulta da transferncia
de anticorpos especfcos pr-formados atravs da
placenta ou do colostro materno ao flhote mamfe-
ro; da gema do ovo em aves; ou da administrao de
soro hiperimune. Nesses casos, no h a produo
de resposta especfca pelo sistema imunolgico do
hospedeiro. Ao contrrio, o hospedeiro recebe os
anticorpos pr-formados. A imunidade passiva de
extrema importncia para neonatos e em situaes
em que necessria uma rpida resposta frente a
um patgeno ou antgeno especfco, como nos
casos de exposio a toxinas ou doenas de carter
letal, como a raiva.
A capacidade de transferncia de imunida-
de humoral atravs da placenta varia de acordo
com caractersticas peculiares de cada espcie.
A placenta humana, de outros primatas, de roe-
dores e de carnvoros permite a transferncia de
anticorpos da classe IgG durante a gestao. A
placenta de ruminantes, equdeos e sudeos, no
entanto, virtualmente impermevel passagem
de imunoglobulinas. Nessas espcies, a imunizao
passiva depende exclusivamente da ingesto do
colostro nas primeiras horas de vida, quando o
epitlio intestinal permevel absoro dessas
molculas. Neste caso, a quantidade de anticorpos
que ser absorvida depende da quantidade de
colostro ingerida pelo flhote em tempo hbil. A
durao da imunidade passiva recebida pelo co-
lostro varia entre as espcies e depende de vrios
fatores, incluindo o ttulo de anticorpos maternos,
concentrao de imunoglobulinas no colostro,
quantidade de colostro ingerida, quantidade de
imunoglobulinas efetivamente absorvidas e taxa
de crescimento corporal.
Por outro lado, a imunidade passiva pode in-
terferir na produo de imunidade ativa resultante
de uma subsequente vacinao dos animais jovens.
Em geral, quanto maior a concentrao plasmtica
de anticorpos maternos, menor ser a efccia da
vacinao. A imunidade induzida por vacinas com
vrus atenuado menos afetada pela imunidade
passiva do que a induzida por vacinas inativadas.
A imunidade colostral pode ser sistmica, quando
mediada por IgG que so absorvidas na mucosa
intestinal e ganham acesso ao sangue. Por outro
lado, IgAs ingeridas com o colostro podem conferir
proteo local pela neutralizao de micro-orga-
nismos no lmen intestinal. O decrscimo gradual
dos nveis de anticorpos adquiridos passivamente
seguido pelo surgimento de anticorpos produzidos
ativamente frente infeco natural ou vacinao
(Figura 12.1).
A avicultura industrial um bom exemplo da
utilizao em larga escala da imunidade passiva
para o controle de doenas virais importantes. As
matrizes recebem vrias doses de vacinas que vi-
sam proteger passivamente a sua prognie contra a
infeco por alguns patgenos aos quais os pintos
so expostos nos primeiros dias de vida. Apesar
de ser inicialmente dispendioso, o custo-benefcio
Vacinas vricas
5
deste programa de vacinao acaba sendo favorvel,
pois cada matriz gera aproximadamente 150 pintos
imunizados passivamente. Este tipo de imunidade
fundamental para a proteo dos pintos contra
o vrus da doena infecciosa da bolsa (IBDV), reo-
vrus das aves e vrus da encefalomielite aviria.
A vacinao de fmeas, antes ou depois da
cobertura, para induzir a produo de anticorpos
que sejam posteriormente transferidos aos recm-
-nascidos pelo colostro, tambm um mtodo
muito utilizado para prevenir doenas vricas de
neonatos, como a rotavirose e coronavirose suna e
bovina. Em tese, fmeas com imunidade humoral
contra qualquer agente viral iro transferir essa
imunidade aos fetos ou neonatos, conferindo pro-
teo nas primeiras semanas de vida.
A resposta imunolgica conferida pela imu-
nizao passiva tipicamente de curta durao,
pois baseada nos anticorpos que so transferidos
e no na resposta do hospedeiro. Essa imunidade
no possui memria e perdura somente no per-
odo em que os anticorpos transferidos no so
degradados pelo organismo do hospedeiro. Apesar
dessas caractersticas, a imunidade passiva fun-
damental no s para a defesa de neonatos, mas
tambm em situaes nas quais necessria uma
resposta imediata. Para combater a infeco pelo
vrus da cinomose (CDV), por exemplo, pode-se
administrar soro hiperimune especfco aos ces
doentes, na tentativa de auxiliar o seu organismo
a combater a infeco. Tambm os indivduos
expostos ao vrus da raiva (RabV) devem receber
a aplicao do antissoro especfco, j que uma
imunizao ativa provavelmente no teria tempo
hbil para proteger antes do fnal do perodo de
incubao da doena.
2.2 Imunizao ativa
A imunidade ativa pode resultar tanto da
exposio ao patgeno por infeco natural quan-
to da administrao da vacina especfca. Como
resultado, o sistema imunolgico do hospedeiro
estimulado pelo antgeno ao qual foi exposto. A
magnitude e durao da resposta imunolgica de-
pendem de fatores do hospedeiro, como a presena
de anticorpos adquiridos passivamente, idade e
imunocompetncia do hospedeiro; e de vrios
fatores da vacina. Como regra, considera-se que
a resposta imunolgica mais efetiva e duradoura
aquela induzida pela infeco natural. Portanto,
quanto mais as vacinas mimetizarem a infeco
natural, melhor ser a resposta imunolgica. Por
isso, acredita-se que as vacinas com vrus replica-
tivos (ou vivos) sejam as mais efetivas, pois so
as que mais se assemelham infeco natural.
Alm da vacinao clssica, outras formas de
imunizao ativa tm sido ocasionalmente utili-
zadas em alguns sistemas. Por exemplo, leitoas
suscetveis ao parvovrus suno (PPV) podem ser
expostas a fezes ou a ambientes contaminados
com o vrus, de modo a adquirirem a infeco
(que benigna nesses animais) e se tornarem
imunes. Posteriormente, se forem expostas ao
agente durante a gestao, estaro imunizadas e
os seus fetos estaro protegidos contra a infeco.
Da mesma forma, alguns pecuaristas mantm o
hbito de expor os cordeiros s crostas de ectima
contagioso obtidas de ovinos adultos, buscando
a proteo contra uma subsequente exposio
ao vrus. Essas formas empricas de imunizao
apresentam alguns riscos, pois podem estar ex-
pondo os animais a outros agentes patognicos,
alm da incerteza com relao inocuidade do
vrus administrado.
De acordo com o tipo de antgeno envolvido
na exposio inicial, a imunidade resultante pode
ser predominantemente do tipo humoral, celular
ou ambas. Na imunizao passiva, a imunidade
obtida tipicamente humoral e de curta durao.
Na imunizao ativa, a resposta imunolgica ge-
ralmente de maior magnitude e durao. A maior
durao da imunidade ativa deve-se principalmente
produo de linfcitos especfcos de vida longa,
chamados genericamente de clulas de memria.
3 Objetivos da vacinao
As vacinas so utilizadas com o objetivo de
induzir a formao de resposta imunolgica es-
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pecfca capaz de controlar ou diminuir os sinais
clnicos da doena frente exposio posterior
ao vrus. Assim, as vacinas devem ser efetivas
para induzirem proteo e seguras para
no produzirem doena no hospedeiro. Nesse
sentido, as vacinas inativadas so consideradas
mais seguras se comparadas com as vacinas vivas
atenuadas, uma vez que no ocorre replicao
do agente ou risco de reverso virulncia. Por
outro lado, os vrus presentes nas vacinas vivas
possuem a capacidade de replicao no orga-
nismo hospedeiro, estimulando a imunidade
humoral e celular. Por isso, as vacinas vivas (ou
replicativas) so consideradas mais efcientes na
induo de proteo.
A efetividade vacinal est relacionada com
a capacidade de estimulao de clulas apresen-
tadoras de antgenos, seguida da liberao das
citocinas apropriadas. As vacinas devem estimular
linfcitos T e B, gerando um nmero adequado
de clulas de memria especfcas para o antgeno
inoculado. Devem ainda estimular a produo
de linfcitos T auxiliares (Th) e T citotxicos (Tc)
especfcos para diferentes epitopos do antgeno
vacinal. O antgeno contido na vacina dever
persistir, preferivelmente, em locais especfcos
do tecido linfoide, permitindo que continue es-
timulando as clulas do sistema imunolgico.
A induo de resposta imunolgica mediada
por linfcitos T (imunidade celular), que pode ser
obtida de acordo com o tipo de vacina utilizada,
uma das mais efetivas defesas do organismo
contra os vrus. Igualmente importante a ca-
pacidade de estimular a produo de anticorpos
neutralizantes, capazes de neutralizar os vrions
circulantes e, dessa forma, evitar a infeco de
novas clulas.
De modo ideal, espera-se que uma vacina
seja capaz de conferir proteo prolongada do
indivduo frente a uma nova exposio ao agente,
caracterizando a imunidade de longa durao.
Espera-se, portanto, a estimulao de memria
imunolgica, que ir permitir uma resposta imu-
nolgica mais intensa frente a uma nova exposio
ao vrus. Vacinas contra vrus de animais devem
apresentar caractersticas especfcas, tais como:
facilidade de administrao, custo de aquisio
acessvel, estabilidade do produto durante o
armazenamento e, aps a inoculao no orga-
nismo, adequao para programas de vacinao
em massa e capacidade de estimular imunidade
forte e duradoura. Devem ainda causar o menor
nmero possvel de efeitos colaterais, e no afetar
o desempenho produtivo dos animais.
Em termos prticos, os objetivos da vacina-
o incluem: a) prevenir a infeco (imunidade
esterilizante), o que virtualmente impossvel
com as vacinas atuais. Mesmo em animais ade-
quadamente vacinados, a exposio subsequente
seguida de replicao do agente prximo ao local
de penetrao; b) prevenir a doena clnica e suas
consequncias (esse objetivo pode ser alcanado
por vrias vacinas animais); c) atenuar a doena
clnica e suas consequncias (para algumas viroses,
as vacinas somente conseguem atenuar ou reduzir
a intensidade e severidade dos sinais, reduzindo as
consequncias da doena); d) proteger o feto. Para
vrias viroses (diarreia viral bovina e parvovirose
suna, por exemplo), as maiores consequncias da
infeco resultam das perdas fetais. Nesses casos,
a vacinao objetiva imunizar as mes para que
a sua resposta imunolgica proteja e impea a
infeco fetal; e) proteger os neonatos. Para viroses
que afetam os animais nas primeiras semanas de
vida (rotavirose, coronavirose), a imunizao das
fmeas visa conferir proteo passiva aos recm-
-nascidos; f) reduzir a excreo viral. Animais
vacinados, se posteriormente expostos ao agente,
devem excretar o vrus em menores quantidades
e por menos tempo, reduzindo, assim, a sua dis-
seminao e transmisso; e g) erradicar o agente
da populao. A vacinao contra determinados
vrus, mais do que prevenir e/ou atenuar a doena
clnica, objetiva criar, na populao, uma imuni-
dade protetora que torne invivel a circulao e
perpetuao do agente. Esse tipo de cobertura
denomina-se imunidade de populao ou de reba-
nho e importante em animais de produo, j
que a sade do rebanho economicamente mais
signifcativa do que a sade individual.
Vacinas vricas
7
Em situaes em que o uso de imungenos
pode difcultar o diagnstico sorolgico da doena
e, com isso, difcultar programas de controle ou
erradicao, a deciso sobre o uso de vacinao
deve ser criteriosamente avaliada.
4 Tipos de vacinas
Diferentes tipos de vacina contra vrus esto
licenciados para uso veterinrio, sendo a maioria
composta por vrus inativados ou por vrus vivos
atenuados. A utilizao de novas tecnologias, prin-
cipalmente envolvendo a manipulao gentica
(tecnologia de DNA recombinante), tem originado
inmeros estudos e expectativas no surgimento
de novas opes de vacinas. Algumas vacinas
recombinantes j esto no mercado, enquanto
vrias outras esto em fase de desenvolvimento
ou de testes. Para algumas dessas vacinas, no en-
tanto, muitos estudos ainda so necessrios para a
comprovao de sua segurana e efccia, motivo
pelo qual ainda possuem pouca participao no
mercado veterinrio. Por outro lado, algumas
vacinas produzidas por mtodos clssicos, h
dcadas, ainda conservam o seu espao devido
sua efccia e segurana. Vacinas autgenas de
uso individual, produzidas com material coleta-
do do animal a ser vacinado, so ainda uma das
melhores formas de controle da papilomatose
bovina e canina, demonstrando maior efcincia
se comparadas com outros tipos de vacinas. Os
diferentes tipos de vacinas contra vrus, j licen-
ciadas ou ainda em fase de desenvolvimento,
esto apresentados na tabela 12.1.
4.1 Vacinas replicativas
So vacinas que contm o vrus vivel (vivo,
replicativo) e, por isso, proporcionam a replicao
do agente no organismo hospedeiro, resultando na
amplifcao viral e no aumento da quantidade de
antgeno que apresentada ao sistema imunolgico.
Essas vacinas comportam-se de modo semelhante
ao vrus em infeces naturais. Os vrus vivos
podem ser utilizados como vacinas em diferentes
apresentaes (Figura 12.1).
1. Replicativas
(vrus vivo)
Vrus patognicos
Vrus heterlogos
Vrus atenuados
Vetores virais
Vrus naturalmente atenuados;
Vrus atenuados por passagens em cultivo celular;
Vrus atenuados por passagens em ovos embrionados;
Vrus atenuados por passagens em espcie heterloga;
Vrus temperatura-sensveis;
Vrus modificados pela deleo de genes;
Vacinas com marcadores antignicos.
Vrus inativado
Produtos de vrus
Subunidades de vrus;
Protenas recombinantes;
Peptdeos sintticos.
2. No replicativas
(sem vrus vivo)
3. DNA/RNA Contm o gene da protena de interesse.
Tabela 12.1. Tipos de vacinas vricas
Tipo Caractersticas/propriedades
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4.1.1 Vacinas com vrus patognico
Em casos especfcos, o prprio vrus com
potencial patognico, sem atenuao ou trata-
mento prvio, pode ser utilizado como vacina.
Ovinos infectados pelo vrus do ectima contagioso
apresentam leses na regio oral e focinho, de-
senvolvendo uma resposta imunolgica protetora
aps a primeira exposio ao vrus. Para induzir
o desenvolvimento de imunidade, os cordei-
ros podem ser expostos a crostas de leses que
contm o vrus patognico, um procedimento
semelhante prtica realizada na poca da va-
riolao humana; ou podem ser vacinados com
uma vacina comercial que tambm contm o vrus
em sua forma patognica. Nesse caso, a vacina
inoculada por meio de escarifcao na pele da
face interior da coxa, onde o vrus no causa os
sinais e leses indesejveis. Para a parvovirose
suna, a exposio prvia de leitoas primparas
s fezes ou as instalaes de sunos adultos (que
provavelmente j entraram em contato com o vrus)
pode conferir imunidade e prevenir a ocorrncia
de perdas reprodutivas, caso sejam infectadas
posteriormente, durante a gestao.
4.1.2 Vacinas com vrus de espcie
heterloga
Alguns vrus, que so antigenicamente rela-
cionados com outros vrus, podem ser utilizados
para induzir imunidade em determinadas espcies
nas quais no causam doena. O poxvrus bovino
antigenicamente semelhante ao vrus da varola hu-
mana e, como comprovado pelos estudos clssicos
de Jenner, pode induzir imunidade em humanos.
Os poxvrus de outras espcies de aves tambm tm
sido utilizados para induzir proteo de galinhas
contra a bouba (varola aviria). Um herpesvrus
de perus utilizado para imunizar galinhas contra
a doena de Marek, causada por um herpesvrus
antigenicamente relacionado. Da mesma forma, o
rotavrus bovino pode ser empregado para imu-
nizar sunos contra a rotavirose suna. O vrus da
parainfuenza 3 de bovinos j foi utilizado para
imunizar crianas contra o vrus da parainfuenza
3 de humanos. Da mesma forma, um rotavrus de
bovino tem sido utilizado na formulao de vacinas
contra a rotavirose humana, importante causa de
diarreia em crianas de pases subdesenvolvidos
e em desenvolvimento. Em todos esses casos, o
Vacinas vricas
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vrus vacinal apatognico para a espcie vaci-
nada e induz proteo cruzada contra um vrus
antigenicamente semelhante ao da espcie.
4.1.3 Vacinas com vrus atenuado
Vrus que apresentam maior patogenicidade
e virulncia precisam ser submetidos a procedi-
mentos especfcos para reduzir o seu potencial
patognico e viabilizar a sua utilizao como va-
cinas replicativas. Do contrrio, podem produzir
doena e, at mesmo, mortalidade nos animais
vacinados. Devido a sua atenuao ser relativa a
animais hgidos, a sua administrao no reco-
mendada para indivduos imunodeprimidos, nos
quais pode causar a doena. Os procedimentos de
atenuao devem preservar as suas caractersticas
antignicas e a capacidade replicativa. A reduo
do potencial patognico do agente denomina-se
genericamente atenuao, e o agente com a pato-
genicidade reduzida dito atenuado. As vacinas
que contm o vrus replicativo com patogenici-
dade reduzida so denominadas genericamente
de vacinas vivas, vacinas atenuadas ou vacinas
com vrus vivo modifcado. Vacinas atenuadas
esto disponveis contra a doena de Marek das
galinhas, bronquite infecciosa das galinhas, par-
vovirose e cinomose canina, rinotraquete felina,
encefalomielite aviria, rinotraquete infecciosa e
diarreia viral bovina, entre muitas outras.
Em geral, os vrus vacinais atenuados repli-
cam nos tecidos prximos ao local da inoculao,
produzem pouca ou nenhuma disseminao sist-
mica e, por isso, geralmente no produzem doena
nos animais vacinados. Ou seja, a vacinao com
vrus atenuado se constitui na realidade em uma
infeco controlada ou restrita. A resposta vacinal
ser melhor quando a vacina escolhida for capaz
de mimetizar a infeco natural e estimular uma
resposta imunolgica especfca, de magnitude,
espectro e durao adequados. Nesse sentido, a
replicao limitada das vacinas atenuadas no hos-
pedeiro de amplitude sufciente para estimular
os mecanismos da resposta imunolgica inata e
adaptativa, sem resultar no desenvolvimento de
sinais clnicos importantes. Nesta ltima, so gera-
das resposta celular (linfcitos Th e Tc) e humoral
(linfcitos B, anticorpos), alm de imunidade de
mucosas, o que conveniente no caso de se buscar
proteo contra uma infeco natural que ocorra
em superfcies mucosas. A imunidade conferida
pelas vacinas atenuadas geralmente prolongada
e, por isso, reduz ou elimina a necessidade de
revacinaes com a mesma vacina.
Vacinas atenuadas, entretanto, no so consi-
deradas totalmente seguras para todos os vrus, em
razo da possibilidade, embora rara, de reverso
virulncia. Cabe ressaltar que as alteraes que
so induzidas nos processos de atenuao viral so
produzidas ao acaso e, na maioria das vezes, so
desconhecidas. Isso signifca que difcil prever as
circunstncias nas quais poderia ocorrer a reverso
virulncia. Por exemplo, algumas cepas atenuadas
de vrus da laringotraquete infecciosa das galinhas
(ILTV) so capazes de reverter-se forma virulenta
aps algumas passagens em aves no vacinadas.
Dessa forma, a utilizao dessa vacina reservada
somente para as regies onde o vrus endmico
ou em surtos da doena. Vacinas atenuadas contra
o herpesvrus bovino tipo 1 (BoHV-1) e vrus da
diarreia viral bovina (BVDV) retm a capacidade
de infectar o feto e causar perdas reprodutivas
(abortos, por exemplo), por isso no devem ser
administradas a fmeas prenhes.
Vacinas com vrus atenuado so formuladas
a partir de vrus naturalmente pouco patognicos
ou de cepas virais originalmente patognicas, mas
cuja atenuao foi obtida por induo artifcial.
A maioria das vacinas replicativas com vrus
atenuado que esto licenciadas foi obtida pela
atenuao proposital da cepa viral por diferentes
mtodos. Os tipos de vacinas replicativas com
vrus atenuado so os seguintes: vrus natural-
mente atenuado, vrus atenuado por passagens
em cultivo celular, vrus atenuado por passagens
em ovos embrionados, vrus atenuado por passa-
gens em espcie heterloga, vrus atenuado por
induo de sensibilidade temperatura, vrus
atenuado por deleo de genes e vrus atenuado
com marcadores antignicos.
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4.1.3.1 Vrus naturalmente atenuado
Determinadas cepas virais so naturalmente
pouco virulentas e, assim, podem ser utilizadas
em vacinas vivas sem a necessidade de atenuao
prvia. Um exemplo est na utilizao de vrus
dos sorotipos 2 e 3 do vrus da doena de Marek
para proteger os pintos contra o sorotipo 1 onco-
gnico. O sorotipo 2 pode ser isolado de galinhas
e o tipo 3 pode ser isolado de perus, sendo ambos
apatognicos, mas capazes de proteger as galinhas
contra os tumores induzidos pelo vrus patognico.
Provavelmente a grande maioria dos vrus animais
apresente alguma cepa pouco virulenta circulando
na populao ou naturalmente atenuada e que
poderia ser utilizada como vacina. No entanto, o
procedimento mais utilizado para a produo de
vacinas atenuadas a induo de atenuao de
cepas originalmente patognicas. O adenovrus
canino tipo 2, agente que participa da etiologia da
tosse dos canis, usado em vacinas destinadas a
proteger contra essa enfermidade, mas tambm, e
talvez principalmente, contra o adenovrus canino
tipo 1, agente da hepatite infecciosa canina, que
muito mais virulento.
4.1.3.2 Vrus atenuado por passagens em
cultivo celular
Em 1974, foi desenvolvida uma vacina atenu-
ada contra a varicela, a partir de uma cepa viral
denominada Oka, obtida de um isolado clnico
do vrus da varicela-zoster (VZV). Essa cepa foi
propagada sucessivamente em cultivos de fbro-
blastos de embrio de cobaias e em clulas WI38.
O objetivo da propagao em cultivo celular era
obter a atenuao do vrus, de modo a adapt-lo
a um ambiente diferente daquele encontrado no
hospedeiro natural, sem eliminar a capacidade de
replicao viral. No caso da cepa Oka, a vacina
resultante capaz de induzir uma forte imunidade
frente ao VZV sem produzir sinais clnicos nos
indivduos vacinados, ou seja, o vrus vacinal
desprovido de patogenicidade e virulncia, pro-
priedades que caracterizam a atenuao viral.
Seguindo esse mesmo princpio, passagens
sucessivas de vrus em cultivos de clulas se cons-
tituem, atualmente, na maneira mais comum de
se obter atenuao de vrus para uso em vacinas
replicativas de uso veterinrio. As passagens nor-
malmente so realizadas em linhagens celulares de
espcies diferentes daquela para a qual a vacina se
destina. Tambm podem ser realizadas passagens
em clulas da mesma espcie, mas que devem ser
de tecido ou rgo diferente daqueles infectados
naturalmente pelo vrus. Uma das formas de se
obter a atenuao do CDV, que naturalmente
infecta clulas linfoides, por meio de passagens
sucessivas do vrus em cultivo de clulas renais
de origem canina.
Aps vrias passagens em cultivo celular,
existe uma tendncia ao acmulo de mutaes
pontuais no genoma viral, sendo que a frequncia
dessas mutaes maior nos vrus RNA. O acmulo
de mutaes, algumas provavelmente em genes
associados virulncia, eventualmente resulta
na atenuao do vrus, ou seja, o vrus se adapta
aos cultivos e perde algumas funes necessrias
para a sua virulncia na espcie hospedeira. Uma
das principais restries a esse tipo de vacina o
desconhecimento da base gentica da atenuao.
Se a atenuao for devida a uma ou a poucas
mutaes, existe o risco de reverso ao fentipo
virulento aps a administrao ao animal.
4.1.3.3 Vrus atenuado por passagens em
ovos embrionados
A realizao de mltiplas passagens em
embries de galinha tambm tem sido utilizada
como forma de se atenuar vrus para uso em
vacinas. Esse procedimento pode ser utilizado
tanto para vrus de aves como para vrus de ma-
mferos que replicam em embries de galinha.
Dentre os vrus avirios que foram atenuados por
passagens em ovos embrionados destacam-se o
vrus da bronquite infecciosa das galinhas (IBV)
e o vrus da infuenza. Vacinas contra a infuenza
de mamferos (sunos e equinos) tambm foram
produzidas pela atenuao do vrus em ovos
Vacinas vricas
11
embrionados. A exemplo das vacinas atenuadas
por passagens em cultivos celulares, a restrio
maior desse tipo de vacina o desconhecimento
da base gentica da atenuao, havendo o risco
de reverso virulncia.
Alm de vrus avirios, diversos outros v-
rus podem ser atenuados desse modo. Vacinas
atenuadas por passagens do vrus em embries
de galinha j foram produzidas contra o CDV,
vrus da lngua azul (BTV) e da raiva (RabV),
entre outros. A reduo da virulncia, aps um
determinado nmero de passagens, pode ser
confrmada por ensaios laboratoriais e pela ino-
culao do vrus na espcie de interesse. Essa
uma etapa indispensvel para a certifcao da
vacina como atenuada e estvel.
4.1.3.4 Vrus atenuado por passagens em
espcie heterloga
Os vrus destinados ao uso em vacinas replica-
tivas tambm podem ser atenuados por mltiplas
passagens em uma espcie heterloga, geralmente
animais de laboratrio (coelhos, camundongos,
cobaias). Esse mtodo, embora seja pouco prtico
e cada vez mais restrito devido s questes de tica
em experimentao animal, o mais adequado
para a atenuao de determinados vrus, como o
RabV e alguns arbovrus.
A espcie animal utilizada para a atenuao
viral pode tambm ser prxima espcie para a
qual a vacina destinada. Vacinas contra o CDV
podem ser atenuadas por passagens sucessivas
do vrus em fures. J a cepa chinesa do vrus da
peste suna clssica (CSFV), mundialmente utiliza-
da como vacina viva, foi atenuada por passagens
sucessivas em coelhos.
4.1.3.5 Vrus atenuado por induo de
sensibilidade temperatura
A atenuao de vrus replicativos tambm
pode ser obtida pela seleo de variantes que
apresentam capacidade limitada de replicar sob
temperatura corporal (37C), mas que replicam
com efcincia sob temperaturas mais baixas. Os
vrus que apresentam essas caractersticas so
denominados vrus temperatura-sensveis (TS).
Para a obteno dos variantes TS, o vrus vacinal
cultivado em clulas sob temperaturas mais bai-
xas que a temperatura do organismo hospedeiro
(geralmente 30-33C). Isso resulta na seleo de
variantes virais capazes de replicar efciente-
mente nessa temperatura, porm incapazes de
replicar temperatura corporal e, por isso, no
causam infeco sistmica quando administrados
ao hospedeiro.
As vacinas TS so geralmente indicadas para
administrao intranasal, como, por exemplo,
uma vacina TS contra o vrus da infuenza, para
uso humano nos Estados Unidos; e uma vacina
TS contra o BoHV-1, que utilizada em vrios
pases, inclusive no Brasil. Nesses casos, aps a
administrao, o vrus vacinal replica prximo
mucosa nasal, onde a temperatura inferior
temperatura corporal. Uma das principais van-
tagens das vacinas TS contra o BoHV-1 a segu-
rana, pois o vrus vacinal infecta as clulas do
local da inoculao, mas no capaz de replicar
temperatura corporal. Com isso, o BoHV-1 TS
teoricamente incapaz de se disseminar de forma
sistmica e infectar o feto, cuja infeco pode
causar aborto. Vacinas TS contra doena genital
causada pelo BoHV-1 (balanopostite e vulvova-
ginite) tambm foram disponveis na Europa, e
so administradas localmente. Vacinas TS contra
a infuenza humana (gripe), de administrao
intranasal, esto disponveis nos Estados Unidos.
4.1.3.6 Vrus atenuado por deleo de
genes
Quando os genes envolvidos na virulncia
de um vrus so conhecidos, possvel introduzir
alteraes direcionadas no genoma viral atravs de
manipulao gentica. Vacinas deletadas so obtidas
pela remoo ou inativao de genes relacionados
com a virulncia, utilizando tcnicas de DNA re-
combinante. Os mutantes virais vacinais que so
produzidos preservam a capacidade de replicao
Captulo 12
12
e, por isso, retm a sua capacidade imunognica.
No entanto, so incapazes de causar doena porque
apresentam pouca ou nenhuma virulncia.
O vrus vacinal deletado precisa se manter
vivel aps a manipulao gentica, e a estabilidade
desta mutao deve ser evidenciada aps vrias
passagens em cultivo celular. Como em qualquer
outra metodologia empregada para se obter a
atenuao viral, sempre existe a preocupao de
evitar a reverso para a forma virulenta. Assim,
procura-se fazer a excluso de um gene inteiro
ou de mais de um gene de virulncia no mesmo
vrus, sempre preservando a capacidade de repli-
cao viral. Essa estratgia reduz a possibilidade
de o vrus recuperar a virulncia e torna a vacina
deletada mais segura do que as demais vacinas de
vrus atenuados.
A atenuao que pode ser obtida nos herpes-
vrus um bom exemplo da produo de vacinas
atenuadas por deleo. Esses vrus possuem um
gene que codifca a enzima timidina quinase (TK),
associada com a capacidade do vrus de replicar
em neurnios e ser neurovirulento. A eliminao
do gene da TK do BoHV produz um vrus mutante
atenuado, com capacidade reduzida ou nula de
produzir infeces neurolgicas. Outras vacinas
desse tipo encontram-se em desenvolvimento para
o BoHV-1 e BoHV-5. Vacinas contra alguns poxvrus
animais tambm foram obtidas pela deleo do
gene da TK, enzima que tambm est envolvida na
capacidade de replicao e virulncia desses vrus.
A tecnologia de gentica reversa, embora no
tenha sido desenvolvida como ferramenta para
atenuao viral por deleo de genes, permitiu
conhecer as funes de vrios genes e protenas
virais no-estruturais detalhadamente, abrindo
vrias perspectivas de avano na vacinologia,
incluindo para a atenuao viral. Por meio de
gentica reversa, verifcou-se que a presena de
determinados aminocidos no stio de clivagem
do gene da hemaglutinina favorece a replicao
de variantes altamente virulentos do vrus da
infuenza aviria no hospedeiro. Dessa forma, a
remoo desses aminocidos pode ser usada para
a atenuao desses vrus.
4.1.3.7 Vrus atenuado com marcadores
antignicos
Para algumas viroses animais, existem va-
cinas disponveis e efcazes que, no entanto, no
podem ser utilizadas devido interferncia nos
programas de vigilncia sanitria baseados em
testes sorolgicos, como o caso do vrus da
febre aftosa (FMDV). Para alguns desses casos,
existem as vacinas com marcadores antignicos,
que induzem uma resposta sorolgica nos animais
vacinados que pode ser distinguida da resposta
infeco natural. Essas vacinas com marcadores
antignicos so tambm conhecidas como vaci-
nas diferenciais ou DIVA (diferentiating infected
from vaccinated animals) e so muito teis em
programas de controle e erradicao de infeces
vricas que produzem infeces persistentes ou
latentes. Nesses programas, a vacinao utilizada
paralelamente a outros procedimentos, como a
identifcao e eliminao dos animais portadores.
Nesses casos, crtico que se diferenciem os
animais vacinados daqueles que so portadores do
vrus. O carter diferencial em um vrus vacinal
geralmente obtido pela deleo do gene que
codifca alguma protena do envelope do vrion.
A diferenciao realizada pelo uso de um teste
sorolgico geralmente um teste de ELISA que
detecta anticorpos contra a protena ausente no
vrus vacinal, mas que est presente no vrus de
campo. Ou seja, a deteco de anticorpos espec-
fcos contra esta protena indica que os animais
foram infectados com o vrus de campo. Animais
somente vacinados no reagem positivamente
no teste. As vacinas com marcadores antigni-
cos so comercializadas acompanhadas do teste
diagnstico especfco, que permite diferenciar a
resposta vacinal da resposta induzida pelo vrus
de campo. Esta estratgia possibilita a implantao
de programas de vacinao em reas de risco,
sem prejudicar a perda da condio de rebanho
livre ou prejuzo ao trnsito de animais.
O herpesvrus suno (PRV) presente em
uma vacina com marcador antignico contra a
doena de Aujeszky dos sunos foi atenuado por
Vacinas vricas
13
meio da deleo do gene que codifca a gE, uma
das glicoprotenas do envelope viral que no
essencial viabilidade e replicao do vrus. Essa
vacina gE negativa capaz de induzir a produo
de anticorpos no hospedeiro. Portanto, animais
vacinados com a cepa gE negativa no formaro
anticorpos especfcos contra esta glicoprotena,
enquanto que os animais que forem infectados
com o vrus de campo desenvolvero anticorpos
contra a gE. Atravs do teste de ELISA, fornecido
com a vacina, pode-se, subsequentemente, dife-
renciar os sunos vacinados daqueles infectados
Captulo 12
14
pelo vrus de campo. O princpio das vacinas
com marcadores antignicos e a sua utilizao
para diferenciar animais vacinados daqueles
infectados com o vrus de campo est ilustrado
na fgura 12.3.
Os programas de erradicao do PRV nos
Estados Unidos, na Alemanha e em outros pases
europeus tiveram como base o uso de vacinas
diferenciais. No Brasil, o programa de erradica-
o dessa doena no estado de Santa Catarina
utilizou uma vacina gE negativa, associada com
um teste imunoenzimtico. Vacinas com mar-
cadores antignicos esto sendo utilizadas em
vrios pases europeus em programas de controle
e erradicao do BoHV-1. A possibilidade de se
manipular geneticamente os vrus e modifc-los
antigenicamente abre a possibilidade da confeco
e utilizao deste tipo de vacina contra outros
vrus animais.
Embora as vacinas diferenciais clssicas te-
nham sido concebidas para utilizao do vrus
deletado como vacina replicativa, o vrus com
marcador antignico pode tambm ser utilizado
em vacinas no-replicativas. Portanto, o carter
diferencial entre animais vacinados e animais
infectados pelo vrus de campo pode ser obtido
tanto por vacinas com marcadores antignicos
vivos quanto vacinas com marcadores antignicos
sem vrus vivo.
4.1.4 Vetores vacinais
Vrus natural ou artifcialmente atenuados
podem ser utilizados para carrear um ou mais genes
que codifcam antgenos virais imunoprotetores de
outros vrus. Dessa maneira, esses vrus funcionam
como vetores vivos para a imunizao de animais.
O gene de interesse inserido no genoma do vrus
vetor por tcnicas de manipulao gentica, e o
resultado um micro-organismo recombinante
que expressa as suas prprias protenas e tambm
a(s) protena(s) heterloga(s). Como consequncia,
a vacinao com este vrus induz resposta imu-
nolgica contra as protenas do vetor e tambm
contra a protena do vrus heterlogo.
Para ser usado como vacina replicativa, um
vrus vetor deve apresentar algumas caracters-
ticas, como ser pouco ou nada patognico, ser
minimamente ou no excretado no ambiente e
replicar preferencialmente em stios equivalentes
aos infectados pelo vrus de interesse. Dessa for-
ma, a resposta imunolgica ser estimulada nos
locais naturais de infeco. Em geral, os vetores
virais vacinais utilizados so aqueles que j tm
o genoma sequenciado e caracterizado, alm de
serem capazes de comportar a insero e expressar
o gene heterlogo que ir codifcar o antgeno de
interesse. Sendo assim, os poxvrus, os herpesvrus
e os adenovrus so os vrus mais frequentemente
empregados como vetores vacinais. Contudo,
diversos outros vrus vm sendo estudados como
vetores para vacinas humanas e animais, como os
alfavrus (vrus da encefalite equina venezuelana
[VEEV], vrus Sindbis), favivrus (vrus da febre
amarela) e o poliovrus (cepa atenuada Sabin,
a mesma que utilizada como vacina contra a
poliomielite).
Dentre os Avipoxvirus, o vrus da bouba avi-
ria um bom vetor de expresso para vacinas
destinadas a outras espcies animais porque apre-
senta baixo ndice de replicao e incapacidade
de disseminao quando inoculado em clulas
de mamferos, ao mesmo tempo que expressa
antgenos heterlogos de maneira muito efciente.
Um exemplo a vacina recombinante contra a
cinomose canina, disponvel comercialmente. Os
genes das glicoprotenas hemaglutinina (H ou HA)
e de fuso (F) do CDV foram inseridos no genoma
do vrus da bouba de canrio, gerando um vrus
recombinante que expressa protenas do CDV.
Esse vrus recombinante multiplicado em escala
industrial at atingir altos ttulos, quando ento
pode ser usado na imunizao de ces. O resulta-
do a induo de resposta imunolgica contra os
antgenos do poxvrus irrelevante neste caso, pois
este no um vrus de ces mas principalmente
contra as protenas H e F, conferindo proteo aos
ces contra o CDV (Figura 12.4). Outro exemplo
o poxvrus avirio, usado como base para vacinas
vetoradas contra o vrus do Nilo Ocidental (WNV)
Vacinas vricas
15
para uso em equinos, que tambm pode ser en-
contrado como vetor vacinal para enfermidades
vricas de aves. Uma vacina contendo o vrus da
bouba aviria como vetor de antgenos do vrus
da doena de Newcastle das aves (NDV) usada
comercialmente para imunizao de galinhas, nas
quais induz proteo contra o NDV.
A raiva em carnvoros silvestres da Blgica e
Frana tem sido controlada com o emprego de um
vetor vacinal poxvrus, o Orthopoxvirus vaccnia,
que expressa a glicoprotena G do RabV. Essa vaci-
na de administrao oral fornecida por meio
de iscas alimentares distribudas nas pradarias e
forestas. Os carnvoros que receberam a vacina
no apresentaram sinais clnicos de raiva ou leses
de pox. Essa vacina vetorada tambm vem sendo
usada para controle da raiva silvestre na Amrica
do Norte e em outros pases europeus.
Os adenovrus so tambm bons vetores
vacinais, pois so vrus de manipulao relativa-
Captulo 12
16
mente fcil e de genoma bem caracterizado, que
permite a insero de longas sequncias de genes
virais sem necessitar a remoo de sequncias
originais do vrus. Alm disso, os adenovrus
apresentam tropismo por diferentes tipos celu-
lares e facilidade de replicar em altos ttulos em
cultivos celulares. Esta estratgia foi utilizada
para a produo de uma vacina contra a febre
aftosa, na qual um adenovrus humano expressa
protenas do capsdeo do FMDV. Os adenovrus
so tambm encontrados como vetores de vacinas
humanas, como, por exemplo, uma vacina contra
o papiloma genital humano causador do carci-
noma de colo de tero produzida pela insero
de genes do papilomavrus humano no genoma
de um adenovrus; ou uma vacina contra a gripe
humana em que um adenovrus vetor para a
hemaglutinina do vrus da infuenza.
Os herpesvrus tambm tm sido explorados
como vetores potenciais para carrear antgenos de
outros vrus devido facilidade de atenu-los por
deleo gnica e pela capacidade de seu genoma
receber a insero de um ou mais genes. Dentre
os usos experimentais de herpesvrus como ve-
tores vacinais, incluem-se: BoHV-1 expressando
antgenos do RabV, do BVDV e do vrus sincicial
respiratrio bovino (BRSV). O resultado uma
vacina polivalente para bovinos que estimula o
sistema imune no local de entrada desses vrus.
Por outro lado, existe a preocupao com a possi-
bilidade de os vetores herpesvrus estabelecerem
latncia no animal vacinado. Estudos realizados
com o herpesvrus canino (CHV) como vetor
para vacinao de raposas demonstraram que,
embora o vrus tenha sido detectado nos stios de
latncia, no foi observada a sua reativao viral.
O genoma do PRV apresenta boas caractersticas
para a insero de genes heterlogos e, por isso,
vem sendo utilizado experimentalmente como
vetor para genes de outros vrus sunos, como o
CSFV e o circovrus suno (PCV). O resultado
um herpesvrus atenuado que atua como vacina
multivalente e apresenta timas perspectivas
para vacinao em sunos. O PRV tambm pode
ser utilizado como vetor para outras espcies
animais, havendo estudos que o utilizam como
vetor de genes do FMDV.
Uma variao das vacinas vetoriais so os vrus
quimricos, gerados pela combinao de partes
do genoma de vrus apatognicos com os genes
imunoprotetores do vrus patognico. Uma vacina
inativada para leites foi preparada a partir de um
clone infeccioso de DNA quimrico contendo a
poro imunognica ORF2 (fase aberta de leitura 2)
do gene do capsdeo viral do PCV2 inserido no ge-
noma do PCV1 (vrus no patognico para sunos).
As pesquisas prvias ao licenciamento da vacina
revelaram que o vrus quimrico PCV1-2 induz
imunidade protetora contra a infeco por PCV2
em sunos, mas retm a natureza no-patognica
do PCV1. Esta vacina inativada e utilizada em
leites com 3 a 4 semanas de idade.
As vacinas que utilizam vetores virais apre-
sentam a vantagem de no sofrerem interferncia
da imunidade passiva materna, pois os animais
geralmente no possuem imunidade contra ant-
genos do vrus vetor. Da mesma forma, se o vrus
vetor for um vrus no-patognico para a espcie
animal vacinada, no existe o risco de tornar-se
virulento. Eles tambm so boas alternativas de
vacinas contra vrus que replicam de maneira
insatisfatria em cultivos celulares. Conforme o
local de replicao do vetor utilizado, haver o
estmulo de imunidade de mucosas (penetrao
em mucosas) ou imunidade mediada por linfcitos
T (penetrao intracelular). Certamente, novas
vacinas de vetores virais sero incorporadas ao
mercado nos prximos anos pelas vantagens e
aplicaes potenciais que apresentam.
Algumas bactrias tambm podem ser utili-
zadas como vetores para a expresso de antgenos
virais. Nesse caso, o gene que codifca uma pro-
tena viral imunoprotetora inserido no genoma
bacteriano por meio de manipulao gentica. A
bactria recombinante , ento, amplifcada em
cultura e administrada pela via oral ao hospedeiro.
No intestino, a bactria recombinante se multiplica
e produz o antgeno viral, que apresentado ao sis-
tema imunolgico. Enterobactrias, como Escherichia
coli e Salmonella, so consideradas boas candidatas
Vacinas vricas
17
a vetores de antgenos de vrus entricos devido
perspectiva de apresentao do antgeno viral
diretamente no tecido linfoide que est associado
ao intestino. Vetores bacterianos para antgenos
virais apresentam boas perspectivas para uso em
humanos, pois, alm de induzirem resposta imu-
nolgica local (IgA), poderiam ser administrados
pela via oral, uma via interessante para a vacinao
de animais de companhia.
Outra possibilidade de vetor vacinal que vem
sendo estudada so vegetais (leguminosas ou
frutas) transgnicos que expressariam antgenos
imunoprotetores, cuja ingesto na forma in natura
poderia estimular resposta imunolgica frente ao
antgeno recombinante, e, dessa forma, atuariam
como vacinas comestveis. Devido falta de
homogeneidade no nvel de expresso de antge-
nos em vegetais ou frutos provenientes da mesma
planta transgnica e pela difculdade prtica na
separao dos alimentos com fns vacinais daqueles
destinados alimentao humana ou animal, plan-
tas ou tecidos vegetais transgnicos foram ento
propostos como biorreatores para a produo de
antgenos em grande escala. Experimentalmente,
foram produzidos antgenos vacinais em diversos
vegetais, como folhas de alfafa, tabaco ou feijo,
contra o RabV, NDV, FMDV, rotavrus bovino,
parvovrus canino, dentre outros vrus; assim como
anticorpos monoclonais contra o RabV para imu-
nizao passiva de indivduos expostos ao vrus.
Entretanto, para que produzam esses antgenos ou
outras protenas, as plantas biorreatoras precisam
ser dotadas de um sistema efetivo de expresso da
protena recombinante e de controle do processa-
mento ps-traduo dessa protena, bem como
deve haver disponibilidade de um mtodo tambm
efetivo de purifcao do produto recombinante,
que sero determinantes na viabilidade funcional
e comercial dessa estratgia.
4.2 Vacinas no-replicativas
As vacinas no-replicativas no contm o
agente vivel e, por isso, so mais seguras do
que as vacinas com vrus replicativo porque no
oferecem a possibilidade de reverter a virulncia
e de causar doena. No entanto, por no promo-
verem amplifcao do antgeno como ocorre
com as vacinas vivas e por no induzirem
resposta mediada por linfcitos Tc, apresentam
efetividade geralmente inferior s vacinas com
vrus replicativo. Contudo, essas vacinas pos-
suem inmeras aplicaes e tm contribudo
para o controle e erradicao de vrias doenas
vricas importantes, como a febre aftosa e raiva
animal. Vrias vacinas no-replicativas esto
disponveis no mercado e outras tantas esto em
fase de desenvolvimento ou testes. As vacinas
no-replicativas podem ser compostas por vrions
inativados, por fraes ou protenas extradas
dos vrions, por protenas virais recombinantes,
por peptdeos sintticos correspondentes aos
determinantes antignicos imunoprotetores das
protenas e, fnalmente, por DNA ou RNA que
codifca a protena de interesse (Figura 12.5).
Dentre estas, a maioria contm partculas vricas
ntegras, porm desprovidas de infectividade
(vacinas inativadas ou mortas).
Captulo 12
18
4.2.1 Vacinas com vrus inativado
Vacinas inativadas, tambm chamadas de
vacinas mortas, so obtidas a partir do vrus in-
fectivo original, cuja infectividade eliminada por
mtodos fsicos ou qumicos. So, portanto, vacinas
compostas de partculas vricas ntegras, porm
inertes e sem capacidade replicativa. As vacinas
com vrus inativado so estveis temperatura
ambiente e so muito seguras porque possveis
vrus contaminantes, se presentes no estoque ori-
ginal de vrus, so tambm inativados durante o
processo de inativao. A inativao irreversvel
e elimina qualquer possibilidade de retorno do
vrus vacinal forma virulenta.
Para a produo da vacina, o vrus inicial-
mente amplifcado em um sistema biolgico (cultivo
celular, ovos embrionados) at atingir ttulos altos.
Esses vrus so, ento, submetidos ao processo de
inativao, que objetiva eliminar a sua viabilidade.
Durante a eliminao da capacidade infectiva do
vrus, procura-se preservar a capacidade antignica,
de modo que a resposta imunolgica seja devida-
mente estimulada. A manuteno da integridade
da conformao dos antgenos imunoprotetores
um fator que pode infuenciar na resposta imuno-
lgica. Produtos qumicos, como o formaldedo,
etilenemina e b-propiolactona, so utilizados para
inativar vrus para uso em vacinas. Esses qumi-
cos, contudo, se empregados em concentraes e
tempo excessivos, podem alterar a conformao
de epitopos virais e, consequentemente, resultar
em reduo da imunogenicidade do antgeno.
Atualmente, a b-propiolactona e os derivados da
etilenemina so os inativantes mais utilizados pela
indstria de vacinas.
A imunidade decorrente da aplicao de va-
cinas no-replicativas inativadas tipicamente
humoral, uma vez que as partculas inativadas so
incapazes de replicar no organismo hospedeiro
e, desse modo, desencadear a resposta celular
mediada por linfcitos Tc. Aps a administrao
de uma vacina inativada, ocorre a estimulao
de clones especfcos de linfcitos B, parte dos
quais se transforma em plasmcitos secretores
de anticorpos e parte se transforma em clulas de
memria, de longa durao. Clones de linfcitos
Th so tambm estimulados e auxiliam a proli-
ferao e diferenciao dos linfcitos B atravs
da secreo de citocinas (interleucinas). Em uma
exposio posterior ao mesmo agente, as clulas
de memria so rapidamente estimuladas e se
diferenciam em plasmcitos. Os plasmcitos se-
cretam grandes quantidades de anticorpos, muitos
dos quais com atividade neutralizante, que so
responsveis pelo combate ao agente e controle
da infeco. Porm, a magnitude e a durao da
imunidade resultante do uso dessas vacinas so
menores do que a imunidade decorrente de vaci-
nas replicativas, que estimulam resposta celular e
humoral. A incapacidade de replicao do vrus
implica a necessidade de realizar reforos vacinais,
alm de se incluir grande quantidade de antgeno
na vacina, o que pode elevar o seu custo. Mesmo
assim, os resultados so geralmente inferiores aos
obtidos com vacinas vivas. Alm disso, as vacinas
inativadas requerem o uso de potencializadores da
resposta imunolgica denominados adjuvantes
que tambm aumentam o seu custo e podem
provocar efeitos colaterais. No obstante, as vacinas
inativadas continuam sendo a nica opo contra
algumas doenas, seja pela impossibilidade de se
obter sufciente atenuao do agente viral ou pela
impossibilidade de se usar o vrus replicativo em
algumas situaes, como em fmeas prenhes ou em
reas livres de determinadas viroses. Atualmente,
a maioria das vacinas utilizadas contra vrus de
animais inativada. O controle e a erradicao da
febre aftosa no Brasil so baseados na poltica de
vacinao com uma vacina inativada, assim como a
vacina contra a raiva, que utilizada em diferentes
espcies domsticas no pas.
4.2.2 Vacinas de subunidades virais
O sistema imunolgico por meio de suas
clulas e molculas no reconhece a estrutu-
ra completa do vrus. Ao contrrio, reconhece
e interage com pequenas regies das protenas
que compem as partculas vricas. Essas regies,
Vacinas vricas
19
que na realidade so determinadas sequncias
de aminocidos, so denominadas epitopos ou
determinantes antignicos. Dentre os epitopos que
um vrion possui, alguns so mais imunognicos
do que outros. Alm disso, a maioria dos epito-
pos virais no gera imunidade protetora, capaz
de neutralizar os vrions ou provocar a lise das
clulas infectadas. No entanto, existem epitopos
altamente imunognicos, contra os quais a resposta
imunolgica altamente efetiva. Dessa forma,
possvel se produzir vacinas com essas fraes do
vrus, selecionadas dentre as mais imunoprotetoras.
As vacinas de subunidades virais so aquelas que
contm apenas epitopos imunognicos do vrus
original, e no o vrus completo. Como consequ-
ncia, essas vacinas so desprovidas de capacidade
replicativa e so muito seguras.
Vacinas de subunidades so produzidas a partir
do cultivo inicial do vrus em grande quantidade.
A seguir, uma ou mais das protenas virais imuno-
protetoras previamente selecionadas so purifcadas
por mtodos qumicos e administradas junto com
adjuvantes na forma de vacina (Figura 12.6).
Essa estratgia tem sido utilizada para a pro-
duo de vacinas contra a infuenza humana con-
tendo a hemaglutinina viral. Para tal, diferentes
cepas do vrus so cultivadas em ovos embrionados
de galinha, seguido de inativao e subsequente
purifcao das hemaglutininas que iro constituir
a vacina. Outra possibilidade a vacina de subuni-
dade contendo as glicoprotenas da superfcie do
vrus (hemaglutinina), que so reunidas e adminis-
tradas na mesma vacina. A vacina clssica contra o
vrus da hepatite B humana (HBV) era produzida
pela purifcao de partculas subvirais inertes,
obtidas do plasma de indivduos portadores. J
esto disponveis no mercado nacional opes de
vacinas de subunidades contra a circovirose suna
e cinomose canina, e, provavelmente, o nmero
de opes dever aumentar nos prximos anos.
4.2.3 Vacinas de protenas recombinantes
O princpio das vacinas no-replicativas de
protenas recombinantes semelhante ao das va-
Captulo 12
20
cinas de subunidades virais, com a diferena de
que a protena viral de interesse no extrada dos
vrions, e sim produzida em micro-organismos
recombinantes. Os genes que codifcam protenas
imunoprotetoras do vrus so identifcados, remo-
vidos do vrus e inseridos no genoma de bactrias,
vrus ou leveduras, que passam a produzir a pro-
tena em grande quantidade. A protena ento
purifcada e administrada na forma de vacina
no-replicativa (Figura 12.7). Este sistema, alm de
produzir uma maior quantidade da protena imu-
noprotetora, tambm seguro e de baixo custo. A
vacina atual contra o HBV, licenciada e disponvel
para a imunizao humana, foi produzida a partir
da clonagem de genes que codifcam o antgeno
de superfcie do HBV (HBsAg) em levedura. Os
antgenos produzidos pelas leveduras recombinan-
tes so subsequentemente purifcados e utilizados
como vacina. A administrao dessa vacina de
protena recombinante estimula o desenvolvimento
de resposta imunolgica especfca contra o vrus
no hospedeiro.
Utilizando o sistema de bactrias, genes que
codifcam capsdeos virais tambm podem ser
clonados em plasmdeos e produzidos em gran-
de escala. As protenas produzidas se organizam
em uma estrutura semelhante ao vrus original,
porm vazio (virus-like particles, VLPs), e podem
ser utilizadas como vacina. Essas partculas virais
no possuem cidos nucleicos nem capacidade de
replicao e, por isso, so desprovidas de infecti-
vidade e totalmente seguras. Essas partculas j
foram produzidas experimentalmente para vrias
espcies de rotavrus, calicivrus, picornavrus
e orbivrus. Uma vacina recombinante contra o
papilomavrus humano (HPV), agente associado
ao carcinoma de colo uterino em mulheres, est
disponvel comercialmente. A protena do caps-
deo do HPV produzida em levedura, e as suas
unidades se associam formando VLPs que so,
ento, utilizadas como imungeno e induzem boa
proteo contra a infeco. Uma vacina contra o
vrus da leucemia felina (FeLV) foi produzida pela
expresso da glicoprotena viral gp70 em E. coli
(Figura 12.7). Alternativamente, vrus de plantas,
Vacinas vricas
21
como o vrus do mosaico do tabaco, podem ser-
vir como vetores de antgenos vacinais, sendo o
antgeno produzido pelas plantas transgnicas.
Vacinas que utilizam esta estratgia de plantas
transgnicas j foram desenvolvidas contendo
genes do FMDV e do BoHV-1.
Vacinas que utilizam protenas purifcadas
estimulam linfcitos Th CD4+, alm de resposta
humoral mediada por linfcitos B e anticorpos;
contudo no geram uma resposta relevante de
linfcitos Tc. A ausncia de resposta citotxica deve-
-se ao fato de essas protenas serem processadas e
apresentadas quase que exclusivamente associadas
ao complexo principal de histocompatibilidade de
classe II (MHC-II). Como resultado, no ocorre a
estimulao adequada e resposta mediada por
linfcitos Tc, que dependem de estimulao via
MHC-I. Vacinas contendo protenas recombinantes
apresentam perspectivas promissoras para uso em
vrias doenas vricas animais e humanas.
4.2.4 Vacinas de peptdeos sintticos
Por maior que seja a molcula do antgeno,
somente alguns epitopos so importantes para o
reconhecimento pelos linfcitos B e induo da
resposta imunolgica. Partindo desse princpio,
os epitopos virais que so bem conhecidos e ca-
racterizados por apresentarem maior capacidade
imunoprotetora podem ser sintetizados em labo-
ratrio. As vacinas vricas de peptdeos sintticos
so aquelas que contm apenas essas sequncias
de aminocidos produzidas sinteticamente, cor-
respondentes aos epitopos virais mais relevantes.
Os peptdeos sintticos produzidos so qui-
micamente anlogos aos determinantes antignicos
originais e, em geral, contm de 3 a 10 aminocidos.
Por meio desta metodologia, foi possvel estimular
a produo de anticorpos neutralizantes contra
RabV, FMDV e parvovrus canino.
Os linfcitos B reconhecem antgenos na sua
conformao natural. Assim, muitos dos epitopos
capazes de estimular resposta humoral necessitam
manter esta conformao. No entanto, grande parte
dos peptdeos que so sintetizados apresenta-se
como cadeia curta de forma linear, no dispondo
de conformao terciria ou quaternria. Como
consequncia, o nvel de induo dos linfcitos
B e a atividade dos anticorpos que induzida
pelas vacinas de peptdeos sintticos so baixos e
insatisfatrios quando comparados com aqueles
induzidos pelas vacinas compostas por partculas
virais completas ou por protenas purifcadas.
Uma das estratgias usadas para contornar esta
Caracterstica Replicativas
Sim Imunidade mediada por linfcitos TcD8+
No replicativas
No
Longa Durao da imunidade Curta
No Necessidade de adjuvante Sim
Pequena Quantidade de antgeno por dose Grande
Uma (geralmente) Nmero de doses Vrias
Injetvel ou oral Via de administrao Injetvel
Lbil Estabilidade trmica Estvel
Raro Reverso forma virulenta No
No recomendado Uso em fmeas em gestao Sim
Tabela 12.2. Propriedades e restries das vacinas vricas replicativas e no replicativas
Captulo 12
22
baixa imunogenicidade a ligao dos peptdeos
a protenas maiores (carreadoras), para induzir
uma melhor resposta e produo de anticorpos.
As vacinas replicativas e no-replicativas apre-
sentam propriedades e restries, de acordo com a
sua formulao e fnalidade a que se destinam. As
principais vantagens e desvantagens desses dois
tipos de vacina esto apresentadas na tabela 12.2.
4.3 Vacinas de DNA e RNA
No incio dos anos 1990, foi demonstrado que
a administrao intramuscular de DNA plasmideal
contendo um gene sob a regulao de um promotor
de eucariotas era capaz de levar expresso da
protena codifcada pelo gene nas clulas do animal
inoculado. As vacinas vricas de DNA consistem
de DNA exgeno contendo o gene da protena de
interesse sob regulao de um promotor, cuja ino-
culao em animais resulta na produo da protena
viral nos tecidos do hospedeiro, desencadeando
uma resposta imunolgica especfca.
A elaborao de uma vacina vrica de DNA
envolve a identifcao de um gene viral que codi-
fca uma determinada protena imunodominante
e indutora de resposta protetora, geralmente um
epitopo. O gene inserido em um plasmdeo de
expresso, que serve como vetor vacinal e que con-
tm um promotor eucaritico forte e um marcador
de seleo para a produo do DNA em grande
escala em bactrias. Uma grande quantidade desses
plasmdeos produzida em E. coli, sendo ento
purifcada e inoculada no hospedeiro como vacina
de DNA. Uma vez que diferentes genes podem
ser combinados em uma mesma vacina de DNA,
essa vacina pode ser do tipo polivalente, capaz de
estimular resposta imunolgica a mltiplos vrus
ou sorotipos virais. As vacinas de DNA so geral-
mente administradas pelas vias intramuscular ou
intradrmica, atravs das quais os plasmdeos so
injetados associados a lipdeos catinicos ou por
balstica (gene-gun).
Uma vez no organismo hospedeiro, a vacina
vrica de DNA transportada at o ncleo das c-
lulas locais, onde o gene ser transcrito e a protena
viral produzida e, posteriormente, apresentada ao
sistema imunolgico. O resultado a estimulao
de resposta imunolgica humoral e celular con-
tra esta protena e, como consequncia, contra o
vrus que a possui em sua estrutura. Em teoria, a
natureza da resposta imunolgica desencadeada
pelas vacinas vricas de DNA altamente desej-
vel porque, alm de resposta humoral, promove
tambm a estimulao de linfcitos T. Contudo,
embora o mecanismo de ao dessas vacinas seja
aparentemente simples, a maneira exata pela qual
desencadeiam a resposta imunolgica ainda no
est totalmente esclarecida. Sabe-se que a produ-
o dos antgenos imunognicos ocorre intrace-
lularmente no organismo hospedeiro, portanto,
no existem os riscos observados nas vacinas
vivas, tais como infeco, produo de latncia
e desenvolvimento de imunidade contra o vetor
vacinal. Os peptdeos resultantes so reconhecidos
como no-prprios, sendo ento processados por
clulas apresentadoras de antgenos e expostos
s clulas do sistema imunolgico, via MHC
classe I e II, resultando na induo de resposta
de linfcitos Tc e Th, respectivamente. A resposta
de linfcitos Tc, importantes na eliminao de
clulas infectadas por vrus, uma das principais
vantagens das vacinas de DNA em relao aos
outros tipos de vacinas vricas no-replicativas,
que somente estimulam linfcitos Th. Diversos
estudos indicam que a resposta humoral e a ce-
lular so promissoras. Experimentalmente, no
foram detectadas interferncias com a imunidade
passiva, sugerindo que as vacinas de DNA podem
ser usadas em neonatos para estimular resposta
imunolgica contra vrus clinicamente importantes
na fase inicial de vida.
Entretanto, os nveis de anticorpos detectados
aps a vacinao ainda so baixos. De fato, para
induzir uma resposta imunolgica satisfatria,
necessria a inoculao de uma grande quantidade
de DNA. Por isso, a administrao das vacinas por
meio de gene-gun tem se mostrado mais efciente
porque permite administrar grande quantidade
de DNA, capaz de gerar resposta imunolgica de
maior magnitude. Porm, as difculdades prti-
Vacinas vricas
23
cas desse mtodo de aplicao da vacina tornam
remota a sua utilizao na rea veterinria.
As vacinas de RNA so uma variao das
vacinas de DNA. Nesses casos, o RNA mensageiro
(mRNA) que codifca protenas virais de interesse
produzido in vitro e incorporado em lipossomos ou
em micropartculas. A inoculao dessas partculas
ou lipossomos no animal resulta em transporte do
mRNA para o interior das clulas, onde ocorre a
traduo e produo da protena. Esta protena
, ento, apresentada ao sistema imunolgico,
resultando em estimulao de resposta humoral
e celular.
Vacinas de DNA e RNA vm sendo pesquisa-
das contra o vrus da imunodefcincia felina (FIV),
vrus da leucemia felina (FeLV), FMDV, BVDV,
BRSV, RabV, entre tantos outros, mas, apesar das
vantagens e aplicaes originalmente vislumbradas,
essas vacinas ainda no encontraram a aplicao ini-
cialmente prevista na rea animal. Atualmente, trs
vacinas de DNA encontram-se disponveis para uso
veterinrio nos EUA direcionadas para proteger
equinos contra o vrus do Nilo Ocidental (WNV).
4.4 Vacinas monovalentes e polivalentes
Vrias vacinas de uso humano e animal con-
tm antgenos de mais de um vrus e tambm
de bactrias em sua formulao. O objetivo de se
formular vacinas di, tri, tetra ou polivalentes o de
facilitar o manejo da vacinao, ou seja, imunizar
os animais contra vrios patgenos em apenas uma
administrao. Dentre as vacinas multivalentes,
podem-se mencionar dois tipos, de acordo com o
objetivo e abrangncia: a) vacinas multivalentes
direcionadas contra sndromes clnicas defnidas;
b) vacinas multivalentes direcionadas contra v-
rus no-relacionados, mas que so prevalentes
na populao. Dentre as primeiras, incluem-se
as vacinas direcionadas ao complexo respiratrio
bovino, contendo os vrus BoHV-1, BVDV, vrus
da parainfuenza 3, BRSV e bactrias que mais
frequentemente esto associadas etiologia desta
doena. Nessa categoria tambm se incluem as
vacinas contra diarreias neonatais de bovinos e
sunos, que possuem rotavrus e coronavrus em
sua formulao, alm de antgenos bacterianos.
Dentre as vacinas multivalentes contra vrus no-
-relacionados, incluem-se as vacinas contra viroses
de ces, que contm antgenos de at seis vrus
diferentes em sua formulao, alm de antgenos
bacterianos. Estas tm o objetivo de imunizar
os animais contra os agentes mais prevalentes
da espcie, mesmo que alguns no apresentem
relao epidemiolgica entre si. So disponveis
comercialmente tambm vacinas di e trivalentes,
contra vrus de maior importncia em determinadas
situaes epidemiolgicas.
A maior vantagem das vacinas multivalentes
a praticidade, pois permitem a imunizao dos
animais contra vrios agentes na mesma aplicao.
Essas vacinas, no entanto, apresentam algumas
restries potenciais do ponto de vista imunol-
gico: a) exigem a resposta simultnea do sistema
imunolgico contra um nmero muito grande de
antgenos; b) mesclam antgenos imunodominantes
com antgenos menos imunognicos; c) algumas
incluem agentes imunodepressores em algumas
delas; d) unifcam a ocasio da aplicao, que pode
no ser tima para alguns dos antgenos presentes;
e) algumas mesclam preparaes de vrus vivo
com vrus inativado. Mesmo assim, vrias vacinas
de uso animal contm antgenos de mais de um
vrus em sua formulao e muitas delas tm sido
usadas com sucesso para o fm a que se destinam.
5 Adjuvantes
Os adjuvantes so substncias que tm a funo
de potencializar a resposta imunolgica induzida
por vacinas no-replicativas, constitudas por vrus
inativados, subunidades, protenas recombinantes
ou peptdeos sintticos. As protenas na forma
solvel e os antgenos purifcados e de baixo peso
molecular que compem essas vacinas podem ser
pouco imunognicos, mas apresentam um aumento
acentuado na sua imunogenicidade quando so com-
binadas com adjuvantes. Por isso, com exceo das
vacinas atenuadas (compostas de vrus replicativo)
e das vacinas de DNA e RNA, as outras formas de
Captulo 12
24
vacinas no-replicativas devem, necessariamente,
incluir adjuvantes em sua formulao.
Alm de aumentar a magnitude da resposta
imune, alguns adjuvantes so capazes de promover
a induo da imunidade de mucosas e estimular
linfcitos Tc, aumentando a efcincia de macrfagos
e clulas dendrticas na apresentao de antgenos
e prolongando a expresso do complexo peptdeo/
MHC-II na superfcie de clulas apresentadoras
de antgenos. Por outro lado, a maioria dos ad-
juvantes no capaz de formar ligaes estveis
com o antgeno.
Diversas substncias so utilizadas como
adjuvantes, diferindo na sua composio, que ge-
ralmente determina o modo de ao (Tabela 12.3).
Em geral, existem dois mecanismos principais de
atuao: sistemas de entrega do antgeno e adju-
vantes imunoestimuladores.
Sais inorgnicos, como o hidrxido de alu-
mnio, promovem a precipitao e a deposio
do antgeno no local da aplicao da vacina, de
onde ser liberado gradualmente. A liberao
lenta do antgeno tambm o princpio de ao
das emulses de gua em leo, como o adjuvante
incompleto de Freund, que forma depsitos no
tecido inoculado.
Fraes de origem bacteriana podem ser
timos adjuvantes. Os lipopolissacardeos (LPS)
bacterianos desencadeiam sinais que tornam as
clulas apresentadoras de antgeno mais ativas.
Esses compostos induzem ainda a produo de
citocinas infamatrias, e, consequentemente, a
resposta imunolgica local de magnitude su-
perior. O adjuvante completo de Freund contm,
alm do leo mineral, microbactrias inativadas,
cujos componentes da parede celular so capazes
de aumentar a imunoestimulao.
Vesculas artifcialmente produzidas a partir
de lipdeos, denominadas lipossomos, podem in-
corporar antgenos no seu interior ou superfcie.
Se os lipossomos forem envoltos por protenas
do envelope viral, sero capazes de mimetizar o
envelope natural do vrus, sendo chamados de
virossomos. Vacinas contra a infuenza e vrus da
hepatite A humana, baseadas em virossomos, j
foram licenciadas em vrios pases europeus.
Complexos imunoestimuladores (ISCOMs)
resultam da mistura do antgeno ao colesterol, aos
Tipo de adjuvante Forma de ao
Armazenamento e liberao
gradual do antgeno.
Sais inorgnicos
Exemplos
Hidrxido de alumnio, fosfato
de alumnio, fosfato de clcio.
Armazenamento e liberao
gradual do antgeno,
estimulao de macrfagos.
Componentes de
bactrias
Adjuvante completo de
Freund.
Estimulao de macrfagos
e induo da liberao de
citocinas.
LPS, BCG (linhagem atenuada
de Micobacterium bovis).
Armazenamento e liberao
gradual do antgeno.
Partculas lipdicas
Adjuvante incompleto de Freund
(emulso de leo em gua).
Liberao do antgeno
encapsulado no citosol,
estimulando linfcitos T
citotxicos.
Lipossomos, virossomos,
ISCOMs.
Estmulo de clulas T
citotxicas ou de clulas
dendrticas.
Citocinas Interleucinas 1, 2 e 12;
Interferon alfa e gama.
Tabela 12.3. Principais adjuvantes utilizados em vacinas e seu mecanismo de ao
Vacinas vricas
25
fosfolipdeos e saponina Quil A, um glicosdeo pu-
rifcado de plantas. Os ISCOMs apresentam estrutura
esfrica, com cerca de 40 nm de dimetro, e j existem
algumas vacinas para uso veterinrio que utilizam este
complexo como adjuvante. Outra possibilidade que
surgiu atravs da tecnologia de DNA recombinante
foi a fuso de protenas ou peptdeos imunoprotetores
de vrus com diferentes citocinas. Esses complexos
agiriam como adjuvantes e direcionariam a resposta
imune desejada contra o vrus alvo.
Algumas citocinas tm efeito positivo da modu-
lao da resposta imunolgica e, por isso, aumentam
a efccia vacinal, atuando como adjuvantes. Estas
citocinas (interleucinas ou interferon alfa e gama) so
administradas ao indivduo separadamente da vacina.
Outra possibilidade, no caso de vacinas vetoradas,
a incluso do gene que a codifca no vetor viral. A
interleucina 18 (IL-18) induz a produo de interferon
gama (IFN-) e a proliferao de linfcitos T e, por
isso, vem sendo explorada experimentalmente para
melhorar a resposta de vacinas recombinantes que
utilizam vetores vacinais. Um exemplo prtico um
poxvrus avirio como vetor do gene da interleucina 18
(IL-18) e de antgenos de alguns vrus animais, como
o FMDV e o vrus da infuenza aviria H5N1, que
desencadeia melhores nveis de resposta imunolgica
celular, se comparado vacina sem incluso de IL-
18. A modulao da resposta imunolgica tambm
tem sido possvel usando o IFN- como adjuvante
de vacinas vricas.
As clulas apresentadoras de antgenos, parti-
cularmente as clulas dendrticas e os macrfagos,
so os principais alvos da ao dos adjuvantes,
resultando em efeitos diversos que produzem um
aumento na resposta imune (Figura 12.8).
Alguns efeitos adversos decorrentes do uso
de adjuvantes devem ser considerados. Os sais
inorgnicos geralmente desencadeiam reao
granulomatosa no local da aplicao. O adjuvante
completo de Freund no utilizado em animais
de produo, devido possibilidade de induzir
reao cruzada com o teste de tuberculinizao e
intensa reao local. As reaes adversas locais,
bem como a possibilidade de desenvolver efei-
tos carcinognicos, fazem com que este tipo de
adjuvante tambm no seja utilizado em vacinas
humanas.
Somente compostos contendo alumnio, hi-
drxido de alumnio ou fosfato de alumnio esto
atualmente aprovados para uso humano. J na rea
veterinria, as substncias mais utilizadas como
adjuvantes so o leo mineral e os sais minerais
baseados em alumnio, embora outros compostos
estejam sendo testados experimentalmente. A prin-
cipal difculdade em identifcar novos adjuvantes
que, embora muitos resultados experimentais em
animais demonstrem boa capacidade imunoesti-
muladora, esses compostos frequentemente so
txicos para os animais.
Captulo 12
26
6 Controle de qualidade
Durante o processo de desenvolvimento e
produo, as vacinas devem ser submetidas a tes-
tes para assegurar a sua inocuidade e capacidade
imunognica. Dentre os testes realizados incluem-se
os de esterilidade (para assegurar a ausncia de
contaminao bacteriana ou fngica), inocuidade
(para certifcar que no causa efeitos indesejveis),
estabilidade (para verifcar a estabilidade gentica
e fenotpica dos vrus atenuados; ou para atestar
a estabilidade do antgeno, no caso de vacinas
inativadas) e potncia (capacidade imunognica).
A ocorrncia de qualquer outro micro-orga-
nismo na vacina, incluindo algum outro vrus que
no o vrus ou cepa viral desejados, caracteriza
a presena de um agente exgeno no produto.
Agentes exgenos involuntariamente veiculados
em vacinas podem acarretar efeitos deletrios nos
animais vacinados, cujo mais grave seria causar
doena, ou ter efeito incerto se for um contaminante
de patogenicidade pouco conhecida. A deteco
de agentes exgenos em vacinas aumentou aps a
popularizao do uso da PCR em testes de controle
de qualidade. O DNA de vrus cujo signifcado cl-
nico para animais ainda pouco conhecido, como
o torque tenovrus suno (TTV), j foi encontrado
em partidas de vacinas contra Mycoplasma hyop-
neumoniae. Contudo, sem o isolamento do TTV ou
de qualquer outro vrus exgeno na vacina, no
possvel afrmar seguramente que esse agente
exgeno est vivel na vacina e se poderia causar
algum efeito deletrio populao vacinada.
No controle de qualidade de vacinas, os testes
de potncia assumem uma importncia especial,
pois avaliam a capacidade da vacina de induzir
uma resposta imunolgica adequada. Em geral,
esses testes so realizados na espcie animal para
a qual a vacina destinada. No entanto, animais
de laboratrio (cobaias, coelhos) podem tambm
ser utilizados, desde que se avalie previamente a
resposta imunolgica dessas espcies e se com-
pare esta com a resposta do hospedeiro natural.
A capacidade imunognica de uma vacina pode
ser avaliada pela deteco e quantifcao dos
anticorpos produzidos em resposta imunizao
ou por testes de desafo.
A quantifcao da resposta sorolgica indu-
zida o mtodo mais utilizado para se avaliar o
potencial imunognico de antgenos vacinais. Para
isso, um grupo de animais vacinado e anticorpos
especfcos contra o vrus so pesquisados por
tcnicas sorolgicas como soroneutralizao (SN)
ou ELISA, a diferentes intervalos aps a vacinao.
Alm da quantifcao da resposta sorolgica em
curto prazo (30, 60 dias), podem-se acompanhar
os animais por um perodo mais longo, a fm de
monitorar-se a durao da resposta induzida. A
maior restrio desse mtodo refere-se ao fato
de que quantifca apenas a resposta humoral.
Portanto, mais apropriado para a avaliao de
vacinas no-replicativas, que induzem resposta
predominantemente humoral. Para alguns vrus,
os ttulos de anticorpos que conferem proteo j
foram razoavelmente determinados. Assim, a de-
teco de anticorpos com ttulos desta magnitude
nos animais vacinados pode ser utilizada como
indicativo de proteo e de efccia da vacina.
Para vacinas replicativas, no entanto, o parmetro
sorolgico nem sempre refete a magnitude da
resposta imunolgica, pois no avalia a resposta
celular. Embora tambm utilizada para avaliar a
potncia de vacinas replicativas, a sorologia deve
ser considerada um indicador apenas parcial da
imunogenicidade, pois essas vacinas induzem
tambm resposta mediada por linfcitos Tc.
O mtodo mais objetivo de se avaliar a efccia
de uma vacina a vacinao seguida de desafo.
Nesse teste, um grupo de animais vacinado de
acordo com as recomendaes do fabricante e
outro grupo permanece no-vacinado (controle).
Aps algum tempo (geralmente 30-60 dias), os
animais dos dois grupos so inoculados com o
vrus patognico pela via natural de infeco.
Essa inoculao denominada desafo e objetiva
mimetizar uma situao de infeco natural que
os animais podem, eventualmente, enfrentar a
campo. Aps o desafo, os animais vacinados e os
controles so monitorados quanto excreo viral
e, principalmente, quanto manifestao de sinais
Vacinas vricas
27
clnicos de doena. A efccia da vacina medida
por sua capacidade de reduzir a excreo viral
(magnitude e durao) e, sobretudo, por prevenir
a ocorrncia de doena nos animais vacinados. Se
a vacina objetiva prevenir a infeco fetal e a ocor-
rncia de abortos, por exemplo, fmeas prenhes
previamente vacinadas devem ser desafadas e o
efeito da infeco nos fetos deve ser monitorado.
Embora seja o mtodo mais objetivo de avaliao
de efccia vacinal, este mtodo apresenta algumas
difculdades, tais como: custo elevado, difculdade
crescente do uso de animais para experimentao,
incerteza quanto cepa e dose viral a ser utilizada
no desafo, entre outras.
7 Conservao e administrao de
vacinas
As vacinas podem ser administradas por
diferentes vias, que so defnidas pelas caracte-
rsticas do antgeno ou do vrus vacinal, do tipo
de imunidade que se deseja estimular, da doena
contra a qual se destinam e tambm da espcie
animal na qual so aplicadas. As principais vias de
administrao de vacinas vricas so: intramuscular,
subcutnea, intradrmica, cutnea, ocular, oral e
nasal. A maioria das vacinas animais administrada
por via parenteral (intramuscular ou subcutnea);
algumas so administradas por via oral (na gua de
bebida ou rao) ou atravs de aerossis; e poucas
so administradas atravs de escarifcaes na pele.
Vacinas de aplicao intraprepucial e intravaginal
tambm j foram desenvolvidas para a doena
genital causada pelo BoHV-1. A vacina contra o
ectima contagioso de ovinos aplicada em gotas
sobre a pele escarifcada da face interna da coxa.
A administrao de vacinas por meio da gua de
beber ou por aerossol usada para vacinao em
massa de animais de produo, como sunos e
aves. Usando a nanotecnologia, que trabalha com
materiais em escala de tamanho diminuto (1 a 100
nm), possvel desenvolver vacinas na forma de
nanocompostos formados por partculas diminutas
e estveis, as quais so complexadas ao vrus ou
epitopos virais imunognicos e administradas a
animais ou humanos por vias alternativas, como
mucosa nasal e por contato com a pele, sem en-
volver o uso de agulhas.
A via pela qual a vacina administrada in-
fuencia o tipo de resposta imunolgica que
induzida, sendo um fator de grande importn-
cia na preveno da infeco, pois o estmulo da
imunidade deve ocorrer preferencialmente nos
locais de penetrao do vrus no organismo. Como
exemplo, as vacinas de vrus atenuados que so
administradas pelas vias nasal e oral devem replicar
no trato respiratrio e intestinal, respectivamente.
Nas infeces de mucosas, como a respira-
tria, intestinal, genital, urinria e ocular, a IgA
secretada nessas mucosas a imunoglobulina mais
importante para a preveno da infeco. Portan-
to, h situaes em que a imunidade local mais
importante do que a imunidade sistmica, o que
infuencia diretamente na via de administrao
da vacina. Vacinas atenuadas, administradas pela
via oral contra o NDV das aves, tm a vantagem
de favorecer a replicao viral no trato intestinal,
promovendo o estmulo e sntese de IgA local por
um perodo prolongado. O vrus da poliomielite
humana replica no epitlio intestinal, que o mesmo
stio de replicao da vacina atenuada de uso oral,
conhecida como Sabin. A imunidade resultante ,
portanto, vantajosa em relao administrao
injetvel da vacina. Vacinas inativadas contra a
infuenza, que so administradas na forma paren-
teral, podem no estimular a resposta de IgA na
mucosa respiratria, stio no qual a imunidade
mais importante frente a uma subsequente expo-
sio ao vrus.
Um importante avano foi obtido na inds-
tria avcola com a demonstrao de que embries
de galinha podem ser vacinados ainda dentro
do ovo e, assim, desenvolver precocemente uma
resposta imunolgica. A vacinao in ovo estimula
a imunidade dos pintos antes dos primeiros dias
de vida, momento em que, provavelmente, tero
o primeiro contato com o vrus de campo. Nesse
caso, os ovos so vacinados entre os 17 e 18 dias
de incubao, exatamente no momento em que
feita a transferncia para os nascedouros. A vaci-
Captulo 12
28
nao in ovo realizada de modo automatizado,
atravs de um equipamento capaz de imunizar
at 50.000 ovos a cada hora. Essa via de vacinao
est disponvel apenas para a doena de Marek,
mas h perspectiva de se estender o mtodo para
outros patgenos importantes de aves.
A conservao correta das vacinas infui di-
retamente na sua efccia. As vacinas com vrus
replicativo apresentam menor estabilidade, pois o
vrus pode perder a sua viabilidade sob condies
inadequadas de temperatura e exposio radiao
solar. As vacinas no-replicativas so geralmente
mais estveis, porm tambm necessitam ser ade-
quadamente conservadas para evitar a degradao
dos antgenos e reduo da sua potncia. Como
regra, recomenda-se conservar as vacinas no-
-replicativas a 4-6C, evitando-se o congelamento
e descongelamento. A maioria das vacinas vricas
replicativas comercializada de forma lioflizada
e deve ser conservada sob congelamento (-20C).
Estas vacinas devem ser ressuspendidas imedia-
tamente antes do uso, para evitar a perda da via-
bilidade do vrus vacinal. Recomenda-se a sua
aplicao no menor intervalo de tempo possvel
aps a ressuspenso. Se necessrio, podem ser
mantidas resfriadas por algumas horas, evitando-
-se o congelamento e descongelamento. Exposio
a desinfetantes, gua clorada, irradiao solar e
altas temperaturas so altamente prejudiciais
viabilidade dos vrus e possuem efeitos altamente
deletrios sobre a efccia vacinal.
8 Falhas vacinais
As vacinas vricas so utilizadas para conferir
proteo contra exposies posteriores ao agente,
impedindo que as infeces resultem em doena
clnica. Se a resposta imunolgica decorrente da va-
cinao for de amplitude e magnitude adequadas,
dever minimizar a replicao e a disseminao
do vrus no organismo e prevenir a ocorrncia
de manifestaes clnicas. No entanto, algumas
vezes no se obtm o efeito protetor esperado,
por razes diversas. Em geral, as falhas vacinais
podem ser atribudas a problemas intrnsecos
da vacina, de sua conservao ou administrao,
ou tambm a falhas do animal em responder
vacinao (Figura 12.9).
Vrias famlias de vrus, principalmente as
de genoma RNA, possuem sorotipos ou variantes
antignicos que possuem distribuio variada na
populao. Dessa forma, pode ser importante
tipifcar a cepa de campo de algumas espcies
de vrus antes de se recomendar a vacina mais
apropriada para uma determinada regio. Um
exemplo disso tem sido o IBV, contra o qual es-
to disponveis vrias cepas vacinais diferentes.
Os isolados tm sido caracterizados por SN ou
PCR, seguido de sequenciamento ou clivagem do
genoma com enzimas de restrio. O resultado
da caracterizao comparado com o das cepas
vacinais e pode-se optar pela cepa que mais se
assemelhe ao vrus de campo. Outro exemplo tem
Vacinas vricas
29
sido a vacina autgena utilizada para o controle
do papilomatose bovina, j que amostras de outros
animais podem ser antigenicamente diferentes e
no conferirem proteo aos bovinos infectados
com tipos diferentes do BPV. O mesmo ocorre com
o BVDV, cujas vacinas disponveis no comrcio
brasileiro contm isolados norte-americanos, que
so antigenicamente diferentes dos isolados locais.
Infelizmente, para muitas espcies de vrus, ainda
existe pouca informao sobre as caractersticas
genmicas e antignicas das cepas que circu-
lam na populao animal local. Alguns mtodos
utilizados para a produo de vacinas podem
resultar em antgenos que so menos efcientes na
ativao do sistema imunolgico se comparados
com o vrus original. De fato, a destruio parcial
ou completa dos epitopos imunoprotetores, que
pode ocorrer durante o processamento e inati-
vao do vrus vacinal, capaz de reduzir a sua
capacidade imunognica. Ainda que o antgeno
inativado permanea estvel, se estiver presente
em quantidade insufciente, poder resultar no
comprometimento da efccia vacinal. Em grande
parte, esses efeitos podem ser minimizados com
base nos testes de qualidade a que as vacinas
comerciais devem ser submetidas. Esses testes
devem incluir necessariamente as provas de po-
tncia vacinal, nas quais avaliada a capacidade
imunognica da vacina produzida.
Muitas vezes, as causas de falhas vacinais
esto relacionadas ao animal e decorrem da va-
cinao em perodo imprprio. Uma das causas
mais frequentes da falta de resposta vacinal a
vacinao dos animais no perodo de incubao
da doena, quando a vacina no ser efetiva. O
momento de vacinar tambm deveria ser con-
siderado na deciso de vacinar animais jovens.
Se realizada no momento em que os animais
ainda esto protegidos pela imunidade passiva,
a vacinao ser parcialmente efetiva devido
interferncia dos anticorpos maternos. De fato, a
presena de imunidade passiva provavelmente
se constitui em uma das causas mais comuns
de falhas vacinais. A resposta vacina pode ser
prejudicada ainda por condies desfavorveis
do animal vacinado, principalmente situaes de
estresse, presena de doenas imunodepressoras,
subnutrio ou intensa infestao por parasitas.
Por todos os aspectos que infuenciam a
imunidade que decorre da vacinao, sabe-se que
a resposta imunolgica no ser de magnitude
igual em todos os indivduos vacinados. Ou seja,
cada animal responder de maneira individu-
al. Assim, a maioria dos animais montar uma
resposta moderada ou mdia; alguns animais
respondero de forma excelente e outros, de
forma insatisfatria. Os animais que respondem
de maneira insufciente so epidemiologicamente
importantes em doenas altamente contagiosas,
como a febre aftosa, e representam uma possibi-
lidade de disseminao da doena. J em viroses
pouco insidiosas e de evoluo lenta, como a raiva,
uma populao vacinada que responde de forma
parcial vacina pode ser sufcientemente capaz
de impedir a disseminao da doena.
A efccia das vacinas pode ser prejudicada
pelo armazenamento inadequado, principalmente
no caso de vacinas contendo vrus replicativos man-
tidas em temperaturas superiores recomendada.
Mesmo que armazenadas de modo correto, o ttulo
viral das vacinas vivas tende a reduzir devido
inativao de vrus ao longo do prazo de validade
do produto. Por exemplo, as vacinas associadas a
clulas que so utilizadas contra a doena de Marek
sofrem acentuada reduo do ttulo viral durante o
perodo de armazenamento a -20C. Dessa forma,
devem ser estocadas em nitrognio lquido e, uma
vez descongeladas, devem ser aplicadas em um
curto perodo de tempo.
Por outro lado, a vacinao por mtodos alter-
nativos ao parenteral, como a via nasal, oral ou por
aerossis, pode difcultar no s a administrao
da dose vacinal correta, como tambm a imuni-
zao uniforme de todos os animais de um lote.
Para espcies criadas em grandes concentraes,
como na avicultura industrial, a viabilidade de
vacinas orais compostas de vrus sensveis ao cloro
pode ser comprometida com a excessiva clorao
da gua, que utilizada como veculo vacinal. Fi-
nalmente, deve ser considerada a interferncia de
Captulo 12
30
desinfetantes empregados excessivamente para a
antissepsia que precede a administrao parenteral
de vacinas vivas.
Cabe ressaltar que a ocorrncia de doena
branda em animais vacinados no signifca ne-
cessariamente uma falha vacinal. As vacinas so
produzidas para proteger os animais da doena
clnica. No entanto, algumas delas no conseguem
cumprir integralmente este objetivo e, mesmo
animais vacinados, podem desenvolver um qua-
dro clnico discreto. Se esta vacina foi efetiva na
reduo signifcativa da gravidade da doena,
quando comparada com animais no-vacinados,
pode-se afrmar que a mesma cumpriu parcial-
mente o seu objetivo.
9 Reaes adversas da vacinao
Embora os benefcios obtidos pelo uso da
vacinao sejam inquestionveis, como a erradi-
cao de vrias doenas virais, nenhuma vacina
totalmente isenta de riscos. Apesar de relativamente
raros, efeitos indesejveis e prejudiciais sade do
hospedeiro tm sido relatados pelo uso de vacinas.
Por isso, a possibilidade de efeitos colaterais no
deve ser negligenciada e os benefcios advindos
da vacinao devem superar os riscos possveis
resultantes de seu uso.
Efeitos residuais de virulncia em vacinas
vivas devem ser considerados. Um sorotipo avi-
rulento do poliovrus, utilizado na vacina oral
infantil, pode sofrer mutaes e tornar-se viru-
lento, causando poliomielite pela administrao
da vacina em uma taxa de um caso a cada milho.
Casos de encefalite ps-vacinal, atribuda ao vrus
presente na vacina, j foram relatados em bovinos
vacinados contra o BoHV-1 e em ces vacinados
contra o CDV. Um efeito adverso menos deletrio
a opacidade da crnea em ces decorrente da
vacinao contra a hepatite viral canina com o
adenovrus canino tipo 1 (CAdV-1). Este problema
tem sido evitado pela utilizao do CAdV-2 na
formulao vacinal, ao invs do CAdV-1.
Vacinas vivas devem ser utilizadas com muito
critrio em animais imunodeprimidos. Por outro
lado, a vacinao contra um agente pode causar
imunodepresso, que pode ser determinante na res-
posta vacinao contra outros micro-organismos.
Vacinas atenuadas contra a parvovirose canina
causam imunodepresso em flhotes, os quais
podem adoecer aps a aplicao de vacina viva
contra a cinomose. Tambm o estresse causado
pelo manejo dos animais durante a vacinao
uma causa comprovada de reativao das infeces
latentes pelos herpesvrus.
A vacinao de fmeas em gestao deve ser
precedida de cuidados com relao deciso de
vacinar contra determinados vrus, assim como na
escolha do tipo de vacina a ser utilizada. Vacinas com
vrus atenuados administradas a fmeas gestantes
que no foram anteriormente imunizadas podem
prejudicar o desenvolvimento fetal e mesmo causar
abortos, como no caso do vrus da panleucopenia
felina (FPLV), BoHV-1 e BVDV. Sendo assim, vacinas
contendo vrus inativados so as mais indicadas
para a vacinao das fmeas nesse perodo.
Por outro lado, possvel que vacinas inati-
vadas potencializem a doena decorrente de um
contato posterior com o vrus de campo por parte
do flhote vacinado. Esse fato j foi observado em
crianas previamente vacinadas contra o vrus
respiratrio sincicial (RSV) e em potros vacinados
contra o vrus da encefalite equina do leste (EEEV).
Reaes de hipersensibilidade podem surgir
aps a administrao de vrias doses de vacina,
principalmente tratando-se de vacinas inativadas
ou de antissoro. Essas reaes podem variar de
hipersensibilidade do tipo III, com intensa reao
infamatria local, at distrbio vascular generali-
zado. Pacientes expostos ao RabV passavam pelo
tratamento ps-exposio com o soro antirrbico
produzido em coelhos, que exigia mltiplas apli-
caes abdominais, as quais, muitas vezes, desen-
cadeavam reaes de hipersensibilidade. Reaes
de hipersensibilidade retardada, com formao
de granulomas, podem ser ocasionadas pelo uso
de determinados tipos de adjuvantes, como os
que agem pela formao de depsitos. Por isso,
esses tipos de adjuvantes no so utilizados na
formulao de vacinas para uso humano. Qualquer
Vacinas vricas
31
componente da vacina pode ser responsvel pelo
desencadeamento de reao de hipersensibilida-
de, j que a resposta de cada organismo muito
peculiar. Contudo, os mais envolvidos so os ant-
genos derivados dos cultivos de clulas ou de ovos
embrionados utilizados para o cultivo do vrus.
Pessoas ou animais alrgicos a albumina do ovo
podem apresentar hipersensibilidade imediata e de-
senvolver choque anafltico em resposta a vacinas
cujo vrus foi amplifcado em ovos embrionados.
O aumento do nmero de casos de pancitopenia
neonatal bovina em algumas regies da Europa foi
relacionado ingesto de colostro pelos bezerros
afetados produzido por vacas vacinadas com uma
determinada vacina contra BVD.
O uso de vacinas pode favorecer a seleo de
novas variantes antignicas dos vrus. A imunizao
parcial do rebanho apontada como uma das cau-
sas de presso seletiva que favorece o surgimento
peridico de novas variantes do vrus, as quais
podem substituir o vrus de campo. Em galinhas,
tem sido bem evidente o surgimento peridico de
novas variantes do IBV e do IBDV, apesar da mas-
siva utilizao de vacinas contra esses patgenos.
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