NOMBRE DE LA PRCTICA: Cuantificacin de azcares reductores con el reactivo DNS

PROCEDIMIENTO:
1) Preparacin de soluciones de 200 microlitrosl y 500 microlitros de glucosa y de pia A y
de lacto suero con factor de dilucin de 1:25 y 1:100 respectivamente
2) Tomar 0,5 ml de cada solucin en cuatro diferentes tubos de ensayo
3) Agregar 0,5 ml de DNS a cada tubo
4) Agitar manualmente los tubos
5) Poner los tubos en bao mara durante 5 min
6) Dejar reposar 5 min para luego depositarlos en un recipiente con hielo
7) Adicionar a cada tubo 5 ml de agua destilada
8) Agitar los tubos y dejarlos reposar por 10 min
9) Se llevaron muestras al espectrofotmetro a una longitud de onda de 540 nm para
determinar la absorbancia de las muestras

Objetivo
Determinar la cantidad de azucares reductores de dos soluciones: pia y lactosuero, aplicando la
tcnica de Miller que consiste en agregar DNS (cido 3,5-dinitrosalicilico) a las soluciones, este
reactivo tiene la capacidad de oxidar a los azucares reductores dando resultados calorimtricos
que se pueden medir con una longitud de onda de 540 nm.
La absorbancia de una solucin es directamente proporcional a la concentracin y
a la longitud del paso de la luz.
A = . b. c
Siendo:
A: absorbancia. No tiene unidades.
: el coeficiente de extincin molar, tambin llamado coeficiente de absorcin. Es
constante para un compuesto dado siempre que se fijen condiciones de longitud
de onda, de pH, de temperatura, de solventes, etc. Sus unidades son 1/ (mol/cm).
b: es la longitud de paso de la luz, en cm.
c: es la concentracin del absorbente. Se mide en mol/L.

La aplicacin prctica de la Ley de Beer es, que conociendo la absorbancia de una sustancia
podemos averiguar su concentracin y esto lo podemos hacer
A travs de una curva de calibracin: la curva de calibracin es la representacin grfica en un eje
de coordenadas de la Absorbancia (eje de ordenadas) frente a la Concentracin (eje de abcisas). Se
ensayan varias soluciones de concentracin conocida y se determinan sus A, construyndose la
curva de calibrado, que es una recta. Una vez ensayadas las soluciones problemas, su
concentracin se averigua por interpolacin de las A de las soluciones problema en la curva de
calibracin.
Resultados y anlisis

De la prueba con DNS comprobamos que las cuatro muestras contenan azucares reductores. Se
procede a realizar la curva para interpolar y encontrar la concentracin de glucosa que contienen
las otras muestras: pia A y lactosuero.

Curva patrn
Con los datos de las concentraciones de glucosa de todos los grupos realizamos la curva de
calibracin:
concentracin absorbancia
100 -0,02
100 -0,013
200 0,0946
200 0,0272
300 0,1217
300 0,0924
400 0,1018
500 0,2199
500 0,2088
600 0,2564
600 0,2752
800 0,3751




Clculo de la concentracin de azcar reductores en
Muestra de pia A:
306,6 mg/l

Muestra de Lactosuero:

Conclusiones
Al aplicar la tcnica DNS y usar la curva de calibracin se pudo determinar que de las dos
muestras la mayor cantidad de azcares reductores se encuentran en el lacto suero.
Las curvas de calibracin constituyen una herramienta muy til para la cuantificacin (e
identificacin) de sustancias a partir de sus espectros de absorcin.


y = 0.0005x - 0.0638
R = 0.9608
-0.04
-0.02
0
0.02
0.04
0.06
0.08
0.1
0.12
0.14
0.16
0.18
0.2
0.22
0.24
0.26
0.28
0.3
0.32
0.34
0.36
0.38
0.4
0 100 200 300 400 500 600 700 800 900
A
B
S
O
R
B
A
N
C
I
A

CONCENTRACIN (mg/L)
Curva de Calibracin
El espectrofotmetro es un instrumento que sirve para medir de manera
exacta y precisa la absorbancia de soluciones. Por tanto, la seleccin de la
longitud de onda debe ser lo ms exacto posible y la luz altamente
monocromtica, es un instrumento de construccin complicada y costoso.