BCM Bloque II 1

Biologa de organelas

Artculos y actividades













BCM Bloque II 2
Biologa de organelas

En esta clase vamos a abordar tres preguntas que nos permitirn conocer y discutir algunos
aspectos de la biologa celular y molecular de las organelas. La clase se dividir en tres grupos y
cada uno tomar una pregunta.

Antes de la clase los grupos debern:

! Realizar la investigacin bibliogrfica del marco terico. Para ello tienen una serie de
preguntas cuya finalidad es guiarlos en la bsqueda de informacin.
! Analizar el paper correspondiente. No hace falta que lean el paper de principio a fin. En
cada caso se especifica qu resultados deben analizarse.
! Organizar una presentacin oral segn se indica.
Durante esta etapa podrn consultar dudas y pedir la ayuda necesaria a los auxiliares
docentes.

El da de la clase cada grupo realizar su presentacin oral de alrededor de 20 minutos y los
docentes guiarn una discusin general sobre cada tema.

1) An ocurre la transferencia de genes del genoma de las organelas al DNA nuclear?
Las mitocondrias y los cloroplastos se han generado a partir de eventos de endosimbiosis que
ocurrieron en el origen de las clulas eucariontes. A lo largo de un largo proceso evolutivo gran
parte del genoma del endosimbionte ha sido transferido al DNA nuclear de la clula. Es as que
actualmente los genomas de mitocondrias y cloroplastos contienen solo una parte de los genomas
originales. Se han encontrado evidencias que sugieren que la transferencia de genes an contina
ocurriendo.

Investigue:

! Qu caractersticas particulares tiene el genoma de los cloroplastos?
o En lneas generales, qu se codifica en la organela y qu en el ncleo?
o Existen variaciones de los genomas cloroplsticos entre especies? Busque ejemplos
concretos.
! Investigue al menos dos ejemplos de transferencia de genes del cloroplasto al ncleo
incluyendo los posibles mecanismos moleculares responsables de la transferencia.
! Qu es el DNA promiscuo? Cmo se relaciona este DNA con la transferencia reciente de
genes?

Analice:

En el paper que se adjunta High-frequency gene transfer from the chloroplast genome to
the nucleus, se desarrolla una estrategia experimental para analizar la frecuencia de eventos de
transferencia de DNA del cloroplasto al ncleo. En lneas generales dicha estrategia consisti en
construir un vector (pRB98) para transformar cloroplastos de tabaco conteniendo dos genes de
resistencia a antibiticos, flanqueados por secuencias de la regin intergnica de dos tRNAs de
cloroplastos (trnfM y trnG) (Fig. 1 A). La presencia de estas secuencias permite la insercin de los
transgenes en el genoma de la organela por recombinacin homloga.
En particular, el gen de resistencia a espectinomicina (aadA) se encuentra bajo el control de
un promotor especfico de cloroplastos, lo que permite seleccionar las clulas cuyos cloroplastos
han sido transformados. Por otra parte, el gen para resistencia a Kanamicina (nptII) se encuentra
bajo el control de un promotor (promotor del virus del mosaico del tabaco, 35S) que slo es capaz
de expresarse fuertemente en el ncleo. Por lo tanto se espera obtener plantas resistentes a
Kanamicina solo si ocurre transferencia del gen nptII del cloroplasto al ncleo.
La transformacin se realiz bombardeando secciones de hojas de tabaco con pRB98. Los
segmentos de tejido bombardeados se seleccionaron en medio conteniendo espectinomicina y a
partir de las clulas resistentes se regeneraron plantas. Las lneas obtenidas, Nt-pRB98-1, Nt-
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pRB98-11 y Nt-pRB98-12 se denominaron transplantmicas ya que tienen modificado el DNA de
las organelas.
! Qu significa que las lneas transplantmicas obtenidas son homoplsmicas? Por
qu es importante?
! Cmo se realiza la bsqueda de eventos de transferencia de DNA del cloroplasto al
ncleo en las lneas transplantmicas?
! Qu resultados obtuvieron y a que conclusin arribaron con respecto a la transferencia
reciente o actual de genes del cloroplasto al ncleo? Analizar Fig.2 y Tabla 1.
! Qu consecuencias evolutivas sugieren estos resultados?

Presentacin oral:
El da de la clase presentar un breve marco terico sobre las caractersticas del genoma de
cloroplastos y de los eventos de transferencia gnica al ncleo. Especificar qu evidencias hacen
pensar que todava existen eventos de transferencia. Presentar cmo el diseo experimental
(Fig.1) y los resultados ms relevantes del paper (Fig. 2 y Tabla 1) aportan nuevas evidencias para
sostener dicha hiptesis. Presentar las consecuencias evolutivas que sugieren estos resultados.

Paper: High-frequency gene transfer from the chloroplast genome to the nucleus. Stegemann, S y
col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 100 8828-8833 (2003).

2) El metabolismo redox regula el transporte de pre-protenas del citoplasma al
cloroplasto?
El transporte al cloroplasto de pre-protenas o protenas precursoras codificadas en el ncleo es
un proceso crucial de la biognesis de esta organela. Su regulacin es compleja y responde a
distintos estmulos celulares y del ambiente. Recientemente se ha reportado que modificaciones en
el metabolismo redox de la clula pueden alterar el transporte de las pre-protenas.

Investigue:
! Cmo son importadas al cloroplasto las pre-protenas codificadas en el ncleo?
o Poseen un pptido seal?
o Qu ocurre en el citoplasma una vez sintetizada la pre-protena?
o Cmo ocurre el pasaje por las membranas externas e internas del cloroplasto?
Qu protenas estn involucradas en dicho pasaje?
! Qu seales del ambiente o celulares regulan la importacin de pre-protenas?
Investigue al menos dos ejemplos.

Analice:
En el paper que se adjunta Preprotein Import into Chloroplasts via the Toc and Tic
Complexes Is Regulated by Redox Signals in Pisum sativum se estudian dos aspectos de la
regulacin redox del transporte de pre-protenas del cloroplasto al ncleo: la modificacin de los
grupos tioles de las protenas que forman los complejos de importacin y la modificacin de la
relacin NADP/NADPH en el estroma del cloroplasto. Nosotros vamos a analizar el primer aspecto.
! Cuando se tratan cloroplastos con agentes reductores Qu ocurre con el transporte de
las protenas precursoras? (Fig. 1 y Tabla2).
! Qu componentes de la maquinaria de importacin seran regulados por los agentes
reductores? Qu evidencias experimentales lo muestran? (Fig. 2).
! Cul sera el rol fisiolgico de la regulacin redox del transporte de precursores al
cloroplasto?

Presentacin oral:
El da de la clase presentar un breve marco terico sobre el transporte de pre-protenas
codificadas en el ncleo hacia el cloroplasto y algunas cuestiones bsicas de cmo se regula este
mecanismo. Presentar los objetivos generales del paper. Explicar cmo el tratamiento de los
cloroplastos con agentes reductores influye sobre el transporte de pre-protenas (Fig. 1 y Tabla 2)
y qu componentes de los complejos de importacin estaran siendo modificados (Fig. 2). Discutir
el rol fisiolgico de la regulacin redox de este proceso.
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Paper: Preprotein Import into Chloroplasts via the Toc and Tic Complexes Is Regulated by Redox
Signals in Pisum sativum. Stengel A., y col., Molecular Plant 2, 1181-1197 (2009).


3) Cul es el rol de la protena PGC1-! en la regulacin de la actividad metablica
mitocondrial inducida por ejercicio fsico?
Se sabe que en mamferos la actividad fsica sostenida (ejercicio intenso) produce biognesis
mitocondrial en el musculo esqueltico. PGC-1! es una protena crucial en la biognesis de esta
organela, en condiciones normales, ya que se ha visto que activa y/o aumenta la expresin de
factores de transcripcin que regulan genes nucleares mitocondriales.

Investigue:
! Cmo ocurre la sntesis de mitocondrias en una situacin normal?
o Por qu es esencial la accin coordinada de genes nucleares y mitocondriales durante
este proceso?
o Cmo son importadas las protenas codificadas por genes nucleares a la mitocondria?
! Cul es el rol fisiolgico del aumento de la actividad mitocondrial en el musculo esqueltico
frente a un ejercicio intenso?
o Cules seran las primeras seales que desencadenan este proceso?

Analice:
En el paper Exercise increases mitochondrial pgc-1! content and promotes nuclear-
mitochondrial cross-talk to coordinate mitochondrial biogenesis se estudia el rol molecular de la
protena PGC1-! en el incremento de la actividad mitocondrial inducido por ejercicio de resistencia
intenso. Por estudios previos, realizados en condiciones normales, se saba que PGC1-! regula la
biognesis mitocondrial co-activando la transcripcin de genes nucleares que codifican protenas
mitocondriales. Recientemente Alquilano y col. encontraron a la protena PGC1-! en la
mitocondria, asociada a nucleoides de DNA mitocondrial junto con el factor de transcripcin Tfam
(activa la transcripcin de genes mitocondriales durante la biognesis). A su vez los autores del
paper que vamos a analizar reportaron la acumulacin de mensajeros y protena PGC1-! en
musculo esqueltico durante un ejercicio intenso.
! Qu ocurre con la localizacin de la protena PGC-1! durante un ejercicio de
resistencia intenso? (Fig. 5).
! Con qu protena se asocia PGC-1! en la mitocondria durante un ejercicio de
resistencia intenso? (Figs. 6 y 7).
! Qu evidencias adicionales aporta el experimento de la Fig. 8A sobre el rol de la
protena PGC1-!?
! De acuerdo a todas estas evidencias Cul es el rol propuesto para PGC-1! en el
incremento de la actividad mitocondrial inducida por ejercicio intenso?

Presentacin oral:
El da de la clase presentar un breve marco terico sobre la biognesis de mitocondrias
inducida por ejercicio intenso, introduciendo la importancia de la comunicacin ncleo-mitocondria.
Presentar el objetivo general del paper y los antecedentes previos. Explicar las evidencias
experimentales analizadas y cmo las mismas permiten proponer un rol para PGC-1! en la
biognesis de mitocondrias durante el proceso fisiolgico que se estudia.
Paper: Exercise increases mitochondrial pgc-1! content and promotes nuclear-mitochondrial cross-
talk to coordinate mitochondrial biogenesis. Safdar A., y col., J. Biol. Chem. 286, 10605-10617
(2011)