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Testosterona

Cdigo:9001103
Ensayo inmunoenzimtico por Quimioluminiscencia para la medicin cuantitativa
de Testosterona (TEST) en el suero humano.
96 PRUEBAS

USO

El equipo de Testosterona CLIA se destina para la determinacin
cuantitativa de concentracin de TEST en el suero humano.

INTRODUCCIN
La Testosterona se forma en los capilares y las venas la
transportan a la periferia o atraviesa las clulas testiculares y entra
a los tbulos seminferos donde se involucra en la
espermatogenesis. En los conductos seminferos la testosterona
estimula a los espermatocitos primarios para formar
espermatocitos secundarios y finalmente espermatocitos jvenes.
La secrecin testicular representa el 95% de la testosterona
circulante en los varones. En la mujer el ovario y adrenal secretan
pequeas cantidades de testosterona; sin embargo, la mayora de
la testosterona en la sangre deriva del metabolismo
antroestenedional.
La medicin de testosterona serica en hombres y nios esta
relacionada a la investigacin de disfuncin testicular y es usada
para monitorear el tratamiento de pacientes con hiperplasia
adrenal congnita. En las mujeres testosterona serica es til para
evaluar hirsutismo, alopecia y desordenes menstruales. La
concentracin de testosterona en la plasma es tambin parte de la
evaluacin de recin nacidos e infantes con genitales ambiguos
El ensayo tradicional de testosterona plsmica involucra la
extraccin de esteroides, purificacin cromatogrfica, RIA y ELISA.
Este sistema es usado para establecer un mtodo de deteccin de
la testosterona total en el suero CLIA.

PRINCIPIO DE LA PRUEBA
En el procedimiento del ensayo TEST CLIA, el estndar de
Testerona o el suero del paciente es incubado con anticuerpo de
Testosterona y con testotsterona-peroxidasa equina conjugado
en el pocillo impregnado con anti-conejo Testosterona. En este
sistema de fase slida, anticuerpo adherido de testosterona
permanecer en el pocillo mientras que la no adherida ser
eliminada por lavado. Una reaccin de quimioluminisencia se
desarrolla cuando el substrato de CLIA es mezclado don el
anticuerpo de la testosterona adherida con peroxidasa equina
La Unidad de Luz Relacionada (RLU) es proporcional a la cantidad
de enzima presente e inversa a la cantidad de testosterona
desetiquetada en la muestra. Por referencia de una serie de
estndar de de testosterona probados en la misma manera, la
concentracin de testosterona en la muestra desconocida es
cuantificada.
MATERIALES Y COMPONENTES
Materiales suministrados con el equipo:
Plato con 96 micropozos impregnado con reactivo Anti-Test
Enzima conjugada reactivo, 6ml.
Anticuerpo testosterona en solucin 6ml
TEST estndar de referencia 1 set contiene 0, 0.5, 1.0,2.5,
10.0 y 20.0ng/ml. Liofilizado
Solucin de Lavado concentrado de 2 viales
CLIA sustrato A, 3.5 ml
CLIA sustrato B, 3.5 ml








Material necesario pero no suministrado:
Pipetas de precisin y puntas,, 0.1ml,0.025ml, 0.05ml
Agua destilada.
Tubos de vidrio o frascos para mezclar CLIA sustrato A y B
Papel absorbente o una toalla de papel
Papel para grafica logartmica
Un luminmetro

RECOLECCIN Y PREPARACIN DE LA MUESTRA
1. La sangre debe extraerse usando tcnicas estndar de
venopuncin y el suero debe ser separado de los glbulos rojos
de la sangre tan pronto como sea posible. Evite totalmente
hemlisis, lipemia o turbidez en las muestras.
2. Muestras de plasma recogidas en los tubos que contengan
EDTA, heparina, oxalato o puede interferir con los
procedimientos de ensayo y debe evitarse.
3. Las muestras debern ser niveladas y se puede almacenar
hasta 48 horas a 2-8 C, antes de ensayo. Los especimenes
retenidos para un tiempo ms largo pueden ser congelados a -
20 C. Los especimenes deben ser mezclados antes de la
prueba.

ALMACENAMIENTO DEL EQUIPO E INSTRUMENTACIN

1. El equipo sin abrir debe guardarse a 2-8 a partir de la
recepcin y la placa debe guardarse en una bolsa sellada con
desecantes para minimizar la exposicin a la humedad del aire.
El equipo se puede utilizar en toda la fecha de caducidad del
equipo. Consulte la etiqueta del frasco para la fecha de
caducidad.
2. El equipo abierto se mantendr estable hasta que expira la
fecha indicada, siempre y cuando se almacena segn lo
estipulado anteriormente.

PREPARACIN DE REACTIVOS
1. Todos los reactivos deben ser sometidos a la temperatura
ambiente (18-25) antes de su uso. Todos los reactivos deben
mezclarse suavemente a travs de invertir o agitacin antes de
su uso. No inducir la formacin de espuma.
2. Reconstituir cada liofilizado estndar con 0,5 ml de agua
destilada. Deje que el material reconstituido reposar durante un
mnimo de 10 minutos. Los estndares reconstituidos deben
almacenarse a 2-8 C sellado y debern utilizarse dentro de 14
das y ser congelados a -20 para almacenamiento a largo
plazo.
3. Para preparar Buffer de Lavado: aadir 1 bolsa de Lavado de
amortiguacin concentrado a 500ml de agua destilada y mezclar
bien. El lavado de amortiguacin se mantiene estable en
temperatura 2-8C.
4. Para preparar CLIA sustrato: mezclar suavemente el sustrato A
y B sustrato en la proporcin de 1:1 20 minutos antes de usarla.
El preparado CLIA solucin de sustrato (despus de la mezcla)
es estable a temperatura ambiente, en la oscuridad, durante 12
horas. Descartar el exceso despus de cada uso.

PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO
1. Asegure el nmero deseado de revestimiento de pozos en el
receptor. Dispensar 25 l de Standard TEST, especmenes, y
los controles en los pocillos apropiados.
2. Dispensar 50 l anti cuerpo Testosterona a cada pocillo.
3. Dispensar 50 l de enzima conjugada a cada pocillo. Mezclar
suavemente durante 30 segundos.


4. Incubar a 232 C por 60 minutos. Preparar sustrato CLIA
20 minutos antes de usarla.
5. Al final de la incubacin, retire la mezcla de incubacin
vaciando el contenido de la placa en un contenedor de
residuos. Enjuagar y vaciar la placa 5 veces con solucin de
lavado de amortiguacin. Secar la placa sobre un papel
absorbente o toallas de papel para eliminar todas las gotas de
agua residual. El volumen del pozo es de aproximadamente
300l.
6. Dispensar 50l de la CLIA sustrato preparado en cada
reactivo. Mezcle Suavemente durante 10 segundos.
7. Incubar a temperatura ambiente en la oscuridad durante 10
minutos sin agitar y leer los valores de RLU con un
Luminometro

Notas importantes:
1. El procedimiento de lavado es fundamental. La insuficiencia
de lavado se traducir en mala precisin y lecturas de
absorbancia falsamente elevadas.
2. Se recomienda que no ms de 32 pozos sean utilizados para
cada ensayo p, si el pipeteado es manual, ya que los
especimenes y los controles deben ser completado dentro de
5 minutos. Una placa de 96 pocillos pueden utilizarse si el
pipeteado es automtico.
3. La duplicacin de todas los standards y especmenes, aunque
no es obligatorio, se recomienda

CALCULO DE RESULTADOS
Recomendamos utilizar el software apropiado para el calcuelo de
los resultados, si este no este a su alcance, construya una curva
estndar trazando el RLU obtenido a partir de cada Standard de
referencia en contra de su concentracin en IU/ml en papel
logartmico cuadriculado, con valores RLU en la vertical o eje Y las
concentraciones en la horizontal o eje X. Utilice el RLU valores
para cada muestra para determinar la concentracin
correspondiente de TEST en IU/ml de la curva estndar.
Cualquier espcimen diluido debe ser corregido por el factor de
disolucin apropiado.

VALORES ESPERADOS
Cada laboratorio debe establecer sus propios rangos normales
sobre la base de poblacin de pacientes. Los resultados
mostrados abajo fueron tomados en un laboratorio con muestras
de pacientes tomadas al azar.

Testotsterona (n...g/ml)
Rango
Hombre 2.8 - 12.0
Mujer 0 - 2.0

La concentracin minima detectable de TEST humano por este
ensayo se estima que es de 0.1 n...g/ml

RESUMEN DEL PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO
Dispense 25 l de estndares, especimenes, controles
Dispense 50l de Solucin anticuerpo TEST
Dispense 50l de enzima conjugada
Incube por 60min a 37C
Lave 5 veces

Dispense 50l de CLIA sustrato
Incube por 10min. a temperatura ambiente
Lea los valores RLU

REFERENCIAS
1. DM Styne and MM Grumbach. Puberty in the Male and Female: Its physiology
and disorders. In Reproductiove Endocrinology: Pathophysiology and Clinical
Management, SSC Yen, RB Jaffe (eds). Philadelphia, Saunders, 1978,pp 189-
240.
2. M Sanchez-Carbayo, M Mauri, R Alfayate, C Miralles, and F Soria. Elecsys
Testosterone Assay Evaluated. Clin Chem 44(8): 1744-1746,1998
3. JS Fuqua, ES Sher, CJ Migeon, and D Berkovitz. Assay of Plasma
Testosterone During the First Six Months of Life: Importance of
Chromatographic Purification of Steroids. 41(8): 1146-1149
4. R L Fitzgerald and DA Herold. Serum Total Testosterone: Immunoassay
Compared with Negative Chemical Ionization Gas Chromatography-mass
Spectrometry. Clin Chem 42(5): 749-755,1996.
5. RV Haning Jr, IH Carlson, J Cortes, WE Nolten and S Meier. Danazol And Its
Principal Metabolites Interfere with Binding of Testosterone, Cortisol, and
Thyroxin by Plasma Proteins, Clin Chem 28(4): 696,1996
6. SJ Winters, DE Kelley and B Goodpaster. The Analog Free Testosterone
Assay: Are the Results in Men Clinically Useful? Clin Chem 44(21): 2178-
2182, 1998

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