CROMATOGRAFIA

Aplicaciones

Tecnologa de alimentos y Productos Naturales: Puede realizarse la
caracterizacin de aceites esenciales y aromas, los cuales son empleados en la
elaboracin de saborizantes, aromatizantes, licores, perfumes, artculos de aseo, y
como materias primas para productos farmacuticos.

Control Ambiental: Dentro de los contaminantes posibles de ser estudiados estn:
los hidrocarburos aromticos, BTEX, pesticidas organoclorados y organo-
fosforados en muestras de aguas superficiales, subterrneas, suelos y lodos.

Qumica Forense y mdico-biolgicas: Es posible la aplicacin de la cromatografa
de gases y la espectrometra de masas en la deteccin y cuantificacin de analitos
de inters en la qumica forense. Por ejemplo la determinacin, cuantificacin
de alcohol en sangre, anlisis de licores, entre otros.

Petrleo y qumicos: cidos grasos; combustibles sintticos, carbn y aceites;
separacin de enantimeros.


Ventajas y desventajas del mtodo a utilizar

Columna: Como fase estacionaria se usa, generalmente, gel de slice o almina dentro de
una columna. La eleccin del disolvente es crucial para una buena separacin. Dicho
disolvente pasa a travs de la columna por efecto de la gravedad o bien por aplicacin de
presin. La columna se prepara mezclando el soporte con disolvente y se rellena la
columna poniendo en el fondo de sta un poco de algodn o lana de vidrio, para evitar
que la slica o la almina queden retenidas en la columna y que el disolvente se
engrasada hasta el nivel del soporte. A continuacin se introduce la muestra por la parte
superior de la columna y se eluye con el disolvente elegido, recogindose por lo general
en tubos de ensayo.
Desventajas:
Para que haya una separacin efectiva de los componentes, su velocidad a travs
de la columna debe ser suficientemente diferente y la longitud de la columna,
adecuada. La eficiencia mxima para la cromatografa lquida ocurre a muy bajas
velocidades de flujo.
Para la cromatografa lquida se necesitan varios aparatos.
Para una buena eleccin de la fase mvil o disolvente, hay que tener en cuenta
que la interaccin con la fase estacionaria (micropartculas) debe ser ptima y la
separacin debe ser lo ms rpida posible. NOTA: (Los parmetros que
determinan el tipo de disolvente a utilizar son: viscosidad, transparencia al UV,
punto de ebullicin, ndice de refraccin, inercia frente a la muestra, resistencia a
la corrosin, toxicidad, precio y mantenimiento).
La muestra no debe contener slidos para que no se atasque la columna, si es
necesario deber filtrarse por un filtro de membrana o precolumna. Lo mejor es
disolver la muestra en el eluyente que se vaya a emplear en la separacin.
El volumen inyectado de muestra debe ser lo ms pequeo posible, para que los
resultados aparezcan ms ntidos.
La eleccin de las columnas es lo ms crtico, existen dos diferencias
fundamentales que deben ser consideradas para la eleccin de la columna: la
cantidad de muestra que admiten (capacidad de carga) y los valores de los flujos
del gas portador.

Ventajas:
Si se utiliza una columna clsica de relleno, a mayor tamao de partcula del
relleno mayor ser su permeabilidad, cuanto ms rugosa sea su superficie mayor
capacidad de carga se obtendr.

Placa fina: La separacin se basa en que las sustancias investigadas se reparten de
modo diferencial entre una fase estacionaria y otra mvil: en la TLC (Cromatografa en
placa fina) el eluyente (fase mvil) se desplaza por una fina capa del sorbente (fase
estacionaria), transportando as los componentes individuales de la mezcla de sustancias
ms o menos lejos dependiendo de su solubilidad y/o de su comportamiento frente a la
adsorcin.
Desventajas:
Las separaciones se realizan generalmente por el procedimiento ascendente.

Ventajas:
Es un procedimiento rpido y sencillo para separar mezclas de sustancias y para
identificar/caracterizar o para determinar semi cuantitativamente componentes
individuales.
Al contrario, que en la cromatografa en columna, el proceso separativo transcurre
en un sistema abierto, la placa separativa plana.

Carotenoides
Los carotenoides o tetraterpenoides son una clase de pigmentos terpenoides con 40
tomos de carbono derivados biosintticamente a partir de dos unidades de geranil-
geranil-pirofosfato, en su mayora son solubles en solventes apolares y de coloraciones
que oscilan entre el amarillo (por ejemplo el -caroteno) y el rojo (por ejemplo el licopeno).

Los carotenoides se clasifican en dos grupos: carotenos y xantofilas. Los carotenos solo
contienen carbono e hidrgeno (por ejemplo el -caroteno, el licopeno, etc.), mientras que
las xantofilas contienen adems oxgeno (por ejemplo la lutena).
A los carotenoides generalmente se les denomina con nombres comunes que incluyen las
variaciones estructurales de los anillos laterales, en especial la posicin del enlace doble.
El b-caroteno, hoy es denominado b,b-caroteno, para indicar que los dos anillos de los
extremos tienen el enlace doble en la misma posicin relativa. El a-caroteno, ahora se
denomina b,e-caroteno En general para los carotenos se usa el sufijo caroteno, y para las
xantofilas el sufijo ina.
Se conocen ms de 600 carotenoides, y se les encuentra en forma libre, como steres de
cidos grasos o como glicsidos. Sin embargo los glicsidos carotenoides son muy raros,
un ejemplo de estos ltimos es la crocina.
-Los carotenos, que son aquellos carotenoides que poseen una de coloracin rojiza y
anaranjada. Dentro de los carotenos tendramos los siguientes:
Los beta-carotenos: Los betacarotenos son precursores de la vitamina A. Se trata
de un pigmento vegetal que, una vez ingerido, se transforma en el hgado y en el
intestino delgado en vitamina A. Es un componente antioxidante que favorece la
no aparicin del cncer, especialmente el de pulmn, boca y estmago. Las
zanahorias, calabazas, la verdolaga, espinacas o la papaya son alimentos ricos en
este tipo de carotenos.

El alfa-caroteno: Con propiedades ms destacadas como antioxidante que el
betacaroteno, aparece en los mimos alimentos que este aunque en una proporcin
menor. Se encuentra en las zanahorias, en el maz, mandarinas, naranjas,
melones y frambuesas.


El gamma-caroteno: posee actividad de vitamina A, aunque inferior a la de los
carotenos alfa y beta. Los estudios preliminares demuestran una actividad
antioxidante del gamma caroteno, aunque menor que los dems carotenos. Se
obtiene de las algas.


El licopeno: El licopeno, es un componente al cual deben su coloracin roja los
tomates, las sandias y los pimientos. Con propiedades similares a los
betacarotenos de las zanahorias, el licopeno tiene propiedades anticancergenas.

La criptoxatina: Con propiedades ms destacadas como antioxidante que el
betacaroteno, aparece en los mismos alimentos que este aunque en una
proporcin menor. Igual que los betacarotenos, es precursor de la vitamina A. La
coliflor es la verdura ms rica en este tipo de caroteno.

-Las xantofilas son carotenoides que poseen una coloracin amarillenta y parda: Dentro
de las xantofilas ms importantes tendramos los siguientes:
La lutena: Pigmento liposoluble de color amarillento que aparece en algas,
bacterias y plantas superiores. Su funcin sera la de proteger la planta contra la
radiacin solar. Los arndanos, ciruelas, aronia y las grosellas negras son fuentes
ricas en lutena.

La zeaxantina: Con propiedades similares a la lutena. Los esprragos y el kiwi
son buenas fuentes de este carotenoide.




La astaxantina proviene de microalgas, posee 500 veces la potencia antioxidante
de la vitamina E y 10 veces la del beta caroteno.


La capsantina: la capsantina es un pigmento que se encuentra en los pimientos
rojos junto con otros carotenoides como la capsorubina. Tiene propiedades
antioxidantes.

Una vez obtenido el extracto o los extractos de carotenoides, estos se pueden separar y
analizar por cromatografa en capa fina, en papel o en columna. El mtodo ms usado es
la cromatografa en capa fina con varias clases de fases estacionarias que incluyen: xido
de magnesio activado, slica gel, hidrxido de calcio y fosfato de magnesio entre otros.
Para proteger los colores contra la oxidacin, las placas cromatogrficas pueden rociarse
con una solucin de aceite de parafina al 5% en ter de petrleo.


Glosario
Fase estacionaria: Material que permanece dentro de la columna cromatogrfica durante
la cromatografa y que retiene algn componente de la muestra, posee una gran rea
superficial y puede ser un slido o un lquido dispuesto sobre un slido que acta como
soporte




Bibliografa:
Aplicaciones de la cromatografa Universidad Nacional de San Antonio Abad del
Cusco. Cusco, Per. 2012 (En lnea). Fecha de consulta: 30-SEP-13. Disponible:
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Anlisis qumico . Cromatografa. Principios y aplicaciones Prof. Manuel
Chicharro en Ciencia y Tecnologa de los alimentos. 2009. (En lnea). Fecha de
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Mtodos en biotecnologa. Cromatografa de gases Universidad Nacional
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Rodrguez. Mxico, D.F. junio 2004. (En lnea) Fecha de consulta: 30-SEP-13.
Disponible: </ http://www.ibt.unam.mx/>