UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN

MARCOS

Facultad de Farmacia y Bioqumica
ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE
FARMACIA Y BIOQUMICA




TEMA:
Rol biolgico del citocromo P-450

PROFESORA:
Mg. Yadira Fernndez Jer

CURSO:
Bioqumica I

INTEGRANTES:

Ayllon Rojas ,Rocio del Carmen
Guizado Torres , Fiorella
Leon Limaymanta ,Beatriz
Santos Taype , Evelyn
Yapuchura Casavilca ,Karina



2014


OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL:

Dar a conocer la importancia del rol biolgico del citocromo P450
a nivel Bioqumico

OBJETIVOS ESPEFICFICOS:

Conocer la funcin metablica del citocromo en los xenobiticos
y sustancias endgenas.








































INTRODUCCION

Los organismos estn expuestos a una gran variedad de contaminantes ambientales y
compuestos endgenos, que deben metabolizar a fin de evitar el dao por estas
sustancias cuando ingresan a las clulas. Asimismo, el ser humano requiere de una serie
de medicamentos para contender con las enfermedades, y su organismo debe ser capaz
de disponer de ellas, para luego eliminarlas.
En 1964 los investigadores japoneses Tsuneo Omura y Ryo Sato, mediante estudios
espectrales describieron un nuevo grupo de hemoprotenas que presentaba un pico de
absorcin caracterstico a 450 nm; este evento marc el inicio de la impresionante
aventura por conocer la funcin y naturaleza del sistema enzimtico de citocromo P450
(CYP450), enzimas que catalizan la oxidacin de ms del 90 por ciento de compuestos
exgenos en mamferos.
Su aparicin en la naturaleza ocurri con los primeros organismos, ya que no slo se ha
descrito su presencia en bacterias como Pseudomonas putida, en donde participa en el
metabolismo del alcanfor, sino en prcticamente todos los grupos de la clasificacin
biolgica actual; a la fecha se han descrito ms de 766 genes distintos y la lista sigue en
aumento: se conocen 57 genes en humanos, de los cuales 15 estn identificados como
importantes en el metabolismo de xenobiticos, 17 en el metabolismo de compuestos
endgenos y de los restantes se desconoce su ubicacin y funcin (CYP450 hurfanos















CARACTERISTICAS GENERALES

El citocromo P-450 tiene como funcin cataltica metabolismo de algunos frmacos y
compuestos exgenos.El sistema P-450 presenta una norme versatilidad funcional que se
refleja tanto en la gran variedad de procesos que puede catalizar ,como en el elevado
numero de subtratos que es capaz de metabolizar .Si bien el p-450 interviene
fundamentalmente en reacciones de oxidacin , tambin es capaz de catalizar
reducciones ,hidrataciones o hidrlisis.Salvo contadas excepciones , el p-450 requiere
oxigeno molecular y NADPH para oxidar al substrato.Se trata de reacciones de
monooxigenacion en las que solo uno de los atomos de oxigeno es incorporado en la
molecula del substrato , mientras que el otro es reducido hasta agua.A las enzimas que
catalizan este tipo de oxidaciones se les conoce como monooxigenasas u oxidasas de
funcin mixta.
RH + NADPH + O2 + H+ monooxigenasa ROH + NADP+ + H2O
Reaccion catalizada por la enxima monooxigenasa
Entre las reacciones catalizadas por el P-450 se incluyen hidroxilaciones aromaticas y
alifticas , N- y S-oxidaciones,epoxidaciones , O-,N- y S-desalquilaciones ,
desaminaciones ,desulfuraciones,deshalogenaciones y deshidrogenaciones.Entre sus
substratos tenemos etanol,ciclosporina , aromaticos o lineales , tanto planas como
globulares , que contengan o no heteroatomos .Esta amplia especificidad es debida a
multiples formas del enzima , cadauna de las cuales se ha a daptado para el metabolismo
de grupos de compuestos relacionados estructuralemente.An as, esta versatilidad no
tiene precedentes y ningn otro enzima puede acomodarse a substratos de naturaleza
qumica tan dispar.

ESTRUCTURA DEL CITOCROMO P450

Los p-450 son hemoprotenas catalticas en las cuales un grupo tiol del aminocido
cistena sirve como quinto ligando al tomo de hierro del grupo hemo y el sexto ligando es
una molcula de agua (al menos as aparece en las estructuras de cristal del enzima libre
de sustrato disponibles hasta el momento).La similitud en la secuencia de aminocidos
entre los diferentes P-450s es relativamente baja , llegando a ser menor del 20% en
algunos casos.El extremo C-terminal de la molcula presenta una conservacin de las
secuencias de aminocidos entre los distintos P-450s mayor que la regin N-terminal.

La molcula est constituida por una combinacin de regiones a-hlice y de hojas
fundamentalmente en la regin de la protena que rodea al grupo hemo ,mientras que la
regiones mas variables son las que constituyen los lugares de anclaje a la membrana o de
unin y de reconocimiento de substratos.El enzima permanece anclado a la membrana a
travs de una hlice hidrofbica cercana al extremo N-terminal , por lo que la mayor parte
de la protena se sita en la cara citoslica de la membrana.Esta hlice es seguida por
aminocidos bsicos cuyos residuos interaccionan con las cargas negativas de los lpidos
de la membrana .

El monxido de carbono puede unirse al hierro ferroso (forma reducida de la
hemoprotena) del P-450 para formar un complejo Fe(2+)-CO,produciendo un cambio en
el mximo de absorvancia del grupo hemo(pico de soret) a 450nm.Esta propiedad es
precisamente la que dio origen a que estos enzimas pasaran a denominarse como
citocromo P-450(p es por pigmento), a pesar de que ,como se comprob posteriormente ,
estas hemoprotenas no son citocromos , en el sentido estricto de la palabra.El grupo tiol
de la cistena ligado al atomo de hierro es responsable de este pico de Soret.














Fig. 1 Pico de absorcin caracterstico de CYP450

Los enzimas P-450 catalizan el ataque oxidativo a compuesto de naturaleza organica
(hidrocarburos y sus derivados)no activos .Estas reacciones son regio y estero-
especficas y tienen lugar a temperatura especfica.















LOCALIZACION DEL CITOCROMO P-450

En los organismos eucariotas los P-450s de clase I se encuentran asociados a la
membrana interna de la mitocondria .El origen filogentico de las formas de P-450
mitocondrial identificadas en diferentes especies animales (enzimas que no han sido
descritos en plantas) parece no estar relacionado con los P-450 de clase I de los
procariotas .En los mamferos estos P-450 catalizan diversos pasos de la biosntesis de
hormonas esteroideas y vitamina D
3.

Los enzimas de clase II son los mas abundantes en eucariotas .Los P-450 y las NADPH-
citocromo P-450 reductasas no estn asociadas y ambos estn anclados de forma
independiente en la cara externa de la membrana del retculo endoplasmatico mediante la
regin hidrofbica del extremo amino terminal.La actividad de algunos P-450 se ve
favorecida por la presencia de citocromo b
5
que facilita la transferencia de electrones
desde el NADPH.En los hongos , estas enzimas , se encargan de la sntesis de esteroles
de membrana y micotoxinas, y en los vegetales intervienen en los procesos de sntesis y
catabolismo de hotmonas .En los animales , la biosntesis y el catabolismo de molculas
sealizadoras , hormonas esteroideas y cido retinoico.

Los P-450 de clase III participan en la sntesis de prostaglandinas en mamferos ,mientras
que el P-450 de clase IV slo se a identificado en hongos.Estas clases se podran
consideran como formas ancestrales de P-450s que participan en la detoxificaion de
especies activadas de oxigeno.

CITOCROMO P450: NOMENCLATURA Y TERMINOLOGA

Actualmente se conocen 57 genes y ms de 59 pseudogenes divididos en 18 familias de
genes y 43 subfamilias . Dentro de la superfamilia de protenas citocromo P450 existen
diversas protenas relacionadas en una misma especie que comparten, con diversos
grados de similitud, secuencias de aminocidos comunes. A medida de que los
investigadores empezaron a aislar diferentes formas de citocromo P450 de diversas
especies entre ellas el ratn, rata, conejo y hombre se hizo patente la dificultad de discutir
sobre numerosas protenas citocromo P450 debido a la falta de un sistema uniforme de
nomenclatura es por eso que en el ao 1987 se establecieron los principios del sistema
de nomenclatura y clasificacin que se utiliza hoy en da, el cual obedece a criterios
filogenticos y se basa en la identidad con las de la secuencia de aminocidos en las
cadenas polipeptidicas de los diferentes enzimas en diversas familias y subfamilias
designadas mediante nmeros y letras respectivamente.
Las formas del citocromo P450 de una misma familia pueden metabolizar sustratos
diferentes, pero estn asignados a la misma familia debido a las similitudes en la
secuencia de aminocidos. Se decidi que una familia citocromo P450 contenga protenas
que comparten al menos un 40% de homologa en la secuencia de aminocidos y se
identifica con un numero arbigo. Las protenas citocromo P450 asignadas a la misma
familia, que comparten al menos el 55% de homologa de homologa de secuencia se
clasifican adems dentro de una subfamilia y se les asigna una letra ayscula. Asi las
formas de citocromo P450 que se designan 2, 2B, 2C representan protenas citocromo
P450 que comparten al menos el 40% de homologa de secuencia para ser clasificadas
en la familia 2. Las protenas citocromo P450 que comparten 55.99% de homologa se
agrupan seguidamente en subfamilias que se identifican mediante una letra mayscula.
Las formas de citocromo P450 de la misma subfamilia pueden proceder de especies
diferentes finalmente, para identificar protenas citocromo P450 concretas dentro de una
subfamilia se le asigna a la protena a la protena un segundo nmero, por ejemplo, 2A1,
2A2 o 2A3.
El termino CYP O CIP, que representa las dos primeras letras de la palabra inglesa para
citocromos (cytrocrome) y la primera letra en P450 se ha designado 1A2 Y P450 2D6 se
abrevian CYP1A2 Y CYP2D6 en este sistema de nomenclatura. Durante un cierto tiempo
se utiliz el termino CYP para designar el gen mientras que P450 se refera a la protena,
pero en la actualidad es frecuentemente el uso indistinto DE LAS DESIGNACIONES P450
y CYP para identificar tanto el gen como a la protena.












Los P450a constituyen una superfamilia de hemoproteinas que pueden encontrarse en
numerosas especies (bacterias, hongos, plantas, insectos, nematodos, peces, aves,
mamferos) y para los que se supone un origen comn. Todos los P450 identificados a lo
largo de la escala filogentica (desde bacterias hasta mamferos) se nombran segn el
mismo criterio y se incluyen dentro de la misma clasificacin. Algunos P450 son comunes
a varias especies (por ejemplo CYP1A2 y CYP2E1 presentes en diferentes mamferos
roedores) y otros son caractersticos de una especie en particular (por ejemplo CYP2A6 o
AYP3A4 exclusivos del hombre). En cualquier caso, cada especie presenta su propio
patrn de p450. Estas enzimas se han utilizado como instrumentos para estudios
filogenticos. En este sentido, la informacin obtenida tras el anlisis de la homologa de
los genes que codifican los P450 en diferentes especies ha permitido la generacin de
mapas de la evolucin de dichas especies y las relaciones existentes entre las mismas.























FIGURA 5. Los enzimas P-450 identificados en la especie humana

CLASIFICACIN: SISTEMA DE TRANSPORTE ELECTRNICO DEL
CITOCROMO P450















Dependiendo de la forma en la que captan los electrones del NADPH, las enzimas P450
pueden clasificarse en cuatro clases:
Los P-450s pueden clasificarse en cuatro clases en funcin de cmo acceden los
electrones desde el NADPH hasta el centro cataltico del enzima
Las protenas de clase I utilizan una reductasa que contiene FAD y una ferrosulfoprotena
(ferridoxina). Las de clase II usan una cadena de transferencia P-450 que contiene
FAD/FMN para la transferencia de electrones. Las de clase III son autosuficientes y no
requieren un donador de electrones, mientras que las de clase IV reciben los electrones
directamente del NAD(P)H.
En los organismos eucariotas los P-450s
de clase I se encuentran asociados a la
membrana interna de la mitocondria. El
origen filogentico de las formas de P-
450 mitocondrial identificadas en
diferentes especies animales (estos
enzimas no han sido descritos en
plantas) parece no estar relacionado con
los P-450s de clase I de los procariotas,
a pesar de sus analogas en la cadena
de transporte electrnico (6). En los
mamferos estos P-450s catalizan
diversos pasos de la biosntesis de
hormonas esteroideas y vitamina D3.
Estructura de la Ferredoxina
Los enzimas de clase II son los ms abundantes en eucariotas. Los P450s y las NADPH-
citocromo P-450 reductasas no estn asociados y ambos estn anclados de forma
independiente en la cara externa de la membrana del retculo endoplsmico mediante la
regin hidrofbica del extremo amino-terminal La actividad de algunos P-450s se ve
favorecida por la presencia de citocromo b5 que facilita la transferencia de electrones
desde el NAD(P)H . Estos enzimas participan en mltiples funciones biosintticas. A modo
de ejemplo, en los hongos se encargan de la sntesis de esteroles de membrana y
micotoxinas, y en los vegetales intervienen en los procesos de sntesis y catabolismo de
hormonas, la oxidacin de cidos grasos, las rutas metablicas que conducen a la
lignificacin y la sntesis de pigmentos y compuestos de defensa (antioxidantes,
fitoestrgenos, aromas) . En los animales, entre sus funciones fisiolgicas se incluyen la
biosntesis y el catabolismo de molculas sealizadoras, hormonas esteroideas y cido
retinoico.
Adems de sus funciones biosintticas, los P-450s de clase I y de clase II participan en
los procesos de metabolizacin de xenobiticos tanto en plantas como en animales. Se
trata de enzimas de gran trascendencia desde el punto de vista farmacolgico y
toxicolgico. Son los responsables del metabolismo de frmacos y de los procesos de
detoxificacin. No obstante, en ocasiones participan en procesos de activacin
contribuyendo a la aparicin de fenmenos txicos o de carcinognesis.
Los P-450s de clase III participan en la sntesis de prostaglandinas en mamferos,
mientras que el P-450 de clase IV slo se ha identificado en hongos . Ambas clases de
enzimas se podran considerar como las formas ms ancestrales de P-450s que
participan en la detoxificacin de especies activadas de oxgeno.












ISOENZIMAS DEL CITOCROMO P450

El Citocromo P450 es todo un grupo de isoenzimas responsables del metabolismo de
muchos de los frmacos ms frecuentemente prescritos. La Isoforma ms habitual es la
3A4 que representa el 30- 60% de las isoenzimas a nivel heptico y el 70% de las formas
intestinales. Cuando se utilizan concomitantemente dos frmacos que comparten va
metablica pueden aparecer interacciones. Los isoenzimas de CYP son un grupo de
enzimas hemo situadas en la bicapa lipdica del retculo endoplasmico; muy presentes en
los hepatocitos, pero tambin estn distribuidas en el intestino, el rin, el pulmn y el
cerebro. Se han identificado ms de treinta isoenzimas humanos de CYP. Todos los
isoenzimas de CYP en la misma familia tienen por lo menos semejanza estructural del
40%, y esos en igual subfamilia tienen semejanza estructural por lo menos del 60%. En
un principio se pens que los P-450s eran protenas exclusivamente hepticas. Esta idea
inicial se descart al comprobarse la presencia de estos enzimas en prcticamente todo el
organismo e incluso algunos de ellos slo se localizan en tejidos extrahepticos. La
amplia distribucin tisular de los P-450s se debe probablemente al gran nmero de
funciones que realizan. No obstante, el hgado es el rgano con mayor expresin de estos
enzimas y en l se encuentran tanto los P-450s implicados en reacciones fisiolgicas
como los encargados del metabolismo de xenobiticos, si bien stos ltimos son los ms
abundantes. Se estima que alrededor del 70% de los P-450 hepticos pertenecen a las
familias 1 a 3 (Tabla 1). Precisamente estas tres familias son las que catalizan la mayor
parte de las reacciones de biotransformacin de substratos exgenos. Los isoenzimas
ms abundantes en el hgado humano son el CYP3A4 y los CYP2Cs, que representan un
30% y un 20% respectivamente del contenido total de P-450. Como consecuencia de ello,
y a pesar de que algunos P-450s que participan en las reacciones de biotransformacin
slo se expresan en tejidos extrahepticos (p. e. CYP1A1, CYP2F1) el hgado se
considera como el principal rgano de metabolizacin de xenobiticos. El papel clave del
hgado en la eliminacin de estos compuestos deriva de su mayor contenido en enzimas
implicados en las reacciones de metabolizacin y de su privilegiada situacin anatmica
que le permite el contacto directo con todos los compuestos que acceden al organismo
por va oral.
Son seis las enzimas que juegan un importante rol en el metabolismo oxidativo
xenobitico: 1A2, 3A4, 2C9, 2C19, 2D6, 2E121.


Familia
CYP450
Nmero-de-
Subfamilias
Isoenzima Funcion
CYP 1 2(A,B) 1A1,1A2
1B1
Metabolismo
de
xenobioticos
CYP 2 13(A,B,C,D,E,F,G,J,R,S,T,U,W) 2A6, 2A7, 2A13,
2B6, 2C8, 2C9,2C18,
2C19,2D6,2E1,2F1,2J2,
2R1, 2S1,2U1, 2W1
Metabolismo
esteroides y
xenobiticos
CYP 3 1 3A4, 3A5, 3A7 y 3A43 Metabolismo
de
xenobiticos

A continuacin, enumeraremos brevemente las caractersticas de los principales
miembros de las familias CYP1,CYP2 y CYP3 implicados en el metabolismo.
Familia CYP1
Incluye dos subfamilias, 1A y 1B; a su vez 1A presenta dos citocromos muy parecidos,
CYP1A1 y CYP1A2. La subfamilia 1B solamente el CYP1B1. Esta familia est
representada por la aril hidrocarburo hidroxilasa, responsable de la activacin metablica
de numerosos hidrocarburos policclicos ambientales, promutgenos y procarcingenos,
como el benzopireno, presentes en el humo del cigarrillo y otros productos de
combustin. Estos tres enzimas comparten una serie de caractersticas. En todos ellos, el
control transcripcional de la expresin del enzima tiene lugar a travs de la va del
receptor nuclear Ah (Aryl hydrocarbon receptor). Adems, los tres participan de forma
destacada en procesos de activacin de procarcingenos. Sin embargo, presentan
notables diferencias en su actividad metablica y su distribucin en diversos tejidos. Los
enzimas CYP1A1 y CYP1A2 juegan un papel importante en la activacin de algunos
procarcingenos, convirtindolos en metabolitos intermediarios que pueden unirse al DNA
originando mutaciones. El CYP1A1 activa el beno(a)pireno y otros hidrocarburos
aromticos policclicos, y el CYP1A2 participa fundamentalmente en la activacin de
nitrosaminas, aflatoxina B1 y aminas aromticas.
El CYP 1Al es un enzima extraheptico. Su expresin constitutiva es muy baja, pero es
muy inducible por ligandos del receptor Ah (hidrocarburos aromticos policclicos,
dioxinas, humo del tabaco) por lo que la exposicin a estos compuestos aumenta de
forma significativa sus niveles en tejidos como el pulmn, la placenta, la glndula mamaria
o los linfocitos. Presenta formas polimrficas, algunas de las cuales se han relacionado
con una mayor incidencia del cncer de pulmn en algunos grupos de poblacin. La
expresin CYP1A2 parece estar restringida al hgado, donde constituye aproximadamente
el 10% del contenido total de P-450. Se trata de un enzima inducible por hidrocarburos
(contenidos en el humo del tabaco o producidos durante la carbonizacin de algunos
alimentos), compuestos indlicos de algunos vegetales o algunos frmacos
(fenitona,omeprazol). Se han identificado variantes allicas del enzima, algunas de las
cuales se correlacionan con una mayor o menor respuesta al efecto inductor del humo del
tabaco, lo que podra explicar, al menos en parte, la elevada variabilidad que presenta el
enzima entre diferentes individuos. Entre los substratos del CYP1A2 no slo se
encuentran precarcingenos y compuestos txicos, sino tambin molculas con actividad
farmacolgica como fenacetina, paracetamol, cafena, teofilina, olanzapina o propanolol.
En general, se trata de molculas neutras o bsicas, lipoflicas y planas. El CYP1B1 es el
miembro de la familia ms recientemente caracterizado. Se expresa de forma constitutiva
en el rin, prstata, glndula mamaria o el ovario, pero no en el hgado. En general su
expresin basal (en situaciones de no induccin) es mayor que la del CYP1A1y participa
tanto en el metabolismo de estrgenos como de hidrocarburos aromticos policclicos y
de aminas heterocclicas. El gen del CYPlB1 presenta formas allicas algunas de las
cuales se traducen en una alteracin funcional. Se ha sugerido un posible papel del
enzima como modulador de ciertos procesos de crecimiento y diferenciacin, as como
una sobreexpresin del mismo en algunos tumores.
Familia CYP2
Est representada en los tejidos, especialmente el hgado, por 5 subfamilias. Las
subfamilias 2A y 2B tienen escasa importancia para el metabolismo de drogas, en cambio,
las subfamilias 2C, 2D y 2E son ms relevantes. Se trata de la familia constituida por
mayor nmero de miembros, los cuales estn organizados en ms de 20 subfamilias. En
el hombre la familia CYP2C la integran 20 enzimas pertenecientes a 13 subfamilias
diferentes. A diferencia de la familia CYP1, sus miembros no comparten vas comunes de
regulacin de la expresin y la naturaleza qumica de los substratos de estos enzimas es
muy heterognea. Tres miembros de la subfamilia CYP2A han sido identificados en el
hombre: CYP2A6, CYP2A7 y CYP2A13. El CYP2A6 se expresa en el hgado donde
representa aproximadamente el 5% del total y es inducible por fenobarbital y otros
frmacos antiepilpticos. Este enzima interviene en la activacin de algunos
procarcingenos como aflatoxina B1 o nitrosaminas del humo del tabaco, en la
metabolizacin de la nicotina y en la biotransformacin de algunos frmacos. Se ha
observado la existencia de polimorfismos genticos del CYP2A6 que han sido asociados
a una diferente susceptibilidad al cncer de pulmn. El CYP2A7 es una protena no
funcional y el CYP2A13 no se expresa en el hgado y s de forma importante en la mucosa
olfativa. El CYP2B6 es el nico miembro de la subfamilia CYP2B identificado en el
hombre. Los niveles en hgado son bajos y muy variables, si bien en general representa
un contenido < 1% del P-450 total. Su induccin est mediada por el receptor nuclear
CAR (constitutiye active receptor)y probablemente tambin por PXR (pregnane X
receptor). Entre los substratos del CYP2B6 se han identificado compuestos txicos y
algunos frmacos. La subfamilia CYP2C en el hombre est integrada por cuatro genes:
CYP2C8, CYP2C9, CYP2C18 y CYP2C19. Entre ellos, el CYP2C9 es el que presenta
mayor contenido en hgado humano. Los substratos del CYP2C9 suelen ser molculas
dbilmente lipoflicas que se comportan como cidos dbiles. Se ha identificado la
existencia de polimorfismos genticos del CYP2C9, pero se desconocen sus
consecuencias funcionales, a pesar de que este enzima cataliza el metabolismo de gran
nmero de compuestos de gran inters teraputico tales como frmacos antiinflamatorios
o hipoglucemiantes. El CYP2C9 metaboliza la mayor parte de estos substratos a travs
de reacciones de hidroxilacin. Se trata, en general, de molculas de carcter cido,
ionizadas a pH fisiolgico, posiblemente con un heterotomo y anfipticas (la regin
hidrofbica se corresponde con el lugar de hidroxilacin) Los frmacos antiinflamatorios
no esteroideos constituyen el grupo de substratos ms importante, en los cuales la
hidroxilacin tiene lugar en el anillo aromtico o en una cadena alqulica lateral de 2 3
tomos de carbono. El CYP2C19 tambin se expresa en hgado y es responsable del
metabolismo de un nmero importante de frmacos. Presenta polimorfismo gentico
cuyas consecuencias fenotpicas conducen a la aparicin de individuos considerados
como metabolizadores lentos con una incidencia del 3% y 20% en poblaciones
caucsicas y japonesas, respectivamente. Este polimorfismo afecta al metabolismo de
frmacos como la mefenitona, warfarina u omeprazol. A diferencia del CYP2C9, los
substratos del CYP2C19 suelen ser molculas neutras o de carcter bsico y
moderadamente lipoflicas. El CYP2C8 se expresa en hgado en niveles variables y poco
importantes. Entre sus substratos se encuentran molculas endgenas (cido retinoico,
retinol) y algunos frmacos. Hasta el momento no se ha detectado la existencia de formas
polimrficas. El CYP2C18 no se expresa en hgado, al menos de forma apreciable y se
desconocen su actividad funcional y las posibles implicaciones fenotpicas de las formas
polimrficas identificadas. Dentro de la subfamilia CYP2D, en el hombre slo se ha
identificado el CYP2D6, el cual se expresa en hgado y no es inducible. Se trata
posiblemente del P-450 ms popular entre los mdicos y profesionales de la salud debido
a su polimorfismo gentico. En la actualidad se conocen unas 80 variantes allicas del
gen, la mayor parte de las cuales afectan a la actividad de la correspondiente protena. se
ha relacionado tambin con una diferente susceptibilidad a la enfermedad de Parkinson y
al cncer de hgado o de pulmn. Es de destacar el hecho de que el CYP2D6 es
considerado el segundo enzima en importancia en el metabolismo de frmacos (despus
del CYP3A4), ya que se estima que ms del 25% de los frmacos son substratos del
mismo, cifra superior a la de otros enzimas ms abundantes como CYP1A2, CYP2C9 o
CYP2E1. Este dato contrasta con el contenido relativamente bajo del enzima en hgado,
donde slo representa en torno al 2-5% del P-450 total. Los substratos del enzima son en
general molculas ligeramente hidrfilas con al menos un tomo de nitrgeno de carcter
bsico El CYP2E1, el nico miembro de la subfamilia CYP2E identificado en la especie
humana. Se expresa en el hgado (alrededor del 10% del P- 450 total en este tejido) y
tambin en otros tejidos, aunque de forma menos importante. Este enzima participa en la
activacin de ciertos carcingenos (hidrocarburos halogenados, nitrosaminas) y en el
metabolismo de solventes de uso comn como etanol, acetona o benceno. Se conocen
pocos frmacos metabolizados por el CYP2E1 entre los que cabe destacar el
paracetamol, clorzoxazona o ciertos anestsicos (p.e. halotano, enflurano). Se trata, en
general, de molculas pequeas (peso molecular< 200 kD) y neutras. Una de las
caractersticas del CYP2E1 es su inducibilidad por etanol y otros compuestos (acetona,
isoniazida), pero tambin por ciertos estados fisiopatolgicos tales como la diabetes o el
ayuno. En el resto de subfamilias pertenecientes a la familia CYP2 se incluyen diversos
enzimas con muy baja expresin (muchos son slo extrahepticos) y con poca relevancia
desde el punto de vista funcional. Entre ellos se encuentran enzimas que intervienen en el
metabolismo de substratos endgenos (p.e. CYP2J2) y otros que metabolizan
xenobiticos (p.e. CYP2F1), si bien no se ha identificado la participacin de enzimas de
estas subfamilias en el metabolismo de compuestos de inters farmacolgico.
Familia CYP3
La familia 3 metaboliza casi el 55% de las drogas en uso a travs de su miembro ms
representativo, el CYP3A4, que en el hgado representa el 30%del contenido total de
citocromos. Otros miembros de la familia son, el CYP3A3, el CYP3A7 y el CYP3A5.Todos
se hallan agrupados en una zona estrecha del brazo corto del cromosoma7. Las enzimas
de la familia 3 son inducibles por frmacos y su presencia es clnicamente relevante en la
mucosa intestinal (donde participan reduciendo la biodisponibilidad oral de muchos
medicamentos) y otros tejidos. Adicionalmente, estos citocromos participan en el
metabolismo de esteroides endgenos. En el hombre esta familia contiene una nica
subfamilia que comprende cuatro genes: CYP3A4, CYP3A5, CYP3A7 y CYP3A43, de los
cuales slo se han caracterizado las protenas correspondientes a los tres primeros. Son
enzimas con una alta homologa en la secuencia de aminocidos(>85%), con
caractersticas funcionales (actividad cataltica) muy similares e inducibles por ciertos
frmacos (barbitricos, rifampicina, dexametasona). Se trata del grupo de enzimas con
mayor importancia en el metabolismo de agentes teraputicos, si bien tambin
metabolizan xenobiticos de relevancia toxicolgica (p.e. aflatoxina B1,1-nitropireno o
compuestos endgenos (p.e. cortisol, testosterona ,progesterona . La expresin tisular de
estos enzimas presenta notables diferencias. El CYP3A4 es el P-450 ms abundante en
el hgado humano (constituye un 30-40% del total) y se expresa tambin en la mucosa
intestinal. El CYP3A5 es menos abundante que el CYP3A4 y se localiza en el hgado
(donde se expresa de forma polimrfica), pulmn, rin, colon, esfago o glndula
pituitaria. El CYP3A7 se encuentra fundamentalmente en el hgado fetal, donde es la
forma mayoritaria, aunque existen evidencias de que tambin se expresa en hgado
adulto. Los CYP3A son inducibles por ciertos frmacos entre los que se encuentran
anticonvulsivantes (fenobarbital, fenitoina, carbamazepina), agentes antimicrobianos
(rifampicina) y glucocorticoides (dexametasona). La induccin de CYP3A4 y CYP3A7 est
regulada a travs del receptor nuclear PXR y la del CYP3A5 a travs del receptor para
glucocorticoides (60,89,90).El papel destacado de estos P-450 en el metabolismo de
frmacos, y de forma particular del CYP3A4, se debe no slo a su mayor abundancia en
el tejido heptico (en situaciones de induccin puede llegar a suponer ms del 50% del P-
450 heptico), sino tambin al gran nmero de molculas de inters clnico que han sido
identificadas como substratos del mismo. En este sentido, se estima que la mitad de los
frmacos con rutas metablicas conocidas son metabolizados por el CYP3A4 y en esta
larga lista se incluyen agentes teraputicos de notable importancia como la eritromicina,
midazolam, ciclosporina A, lidocaina o nifedipina (91-93). La administracin simultnea de
dos o ms frmacos es una prctica teraputica comn y cabe la posibilidad de que
dichos frmacos sean metabolizados por el mismo enzima, probablemente el CYP3A4.
Este hecho origina la aparicin de interferencias metablicas motivadas por la
competencia de dos frmacos por el enzima, lo que puede dar lugar a variaciones
importantes, y no esperadas, en los niveles plasmticos de los frmacos. Estas
interacciones pueden ser especialmente peligrosas en el caso de frmacos con ndices
teraputicos muy estrechos. A modo de ejemplo, la coadministracin de antifngicos
azlicos (potentes inhibidores delCYP3A4) y cisaprida (frmaco utilizado para el
tratamiento de la dispepsiano ulcerosa y metabolizado por el CYP3A4) conduce a un
aumento delos niveles de ste ltimo, lo que aumenta el riesgo aparicin de arritmias
ventriculares potencialmente fatales. Otra posible causa de interaccin metablica es la
coadministracin de un frmaco inductor delCYP3A4 y otro metabolizado por el enzima.
El aumento de la actividadCYP3A4 dar lugar a una rpida metabolizacin del frmaco,
por lo que sus niveles plasmticos no alcanzarn los niveles deseados y el frmaco se
mostrar ineficaz. Por ejemplo, el tratamiento con fenitoina reduce considerablemente los
niveles plasmticos y la biodisponibilidad dela ciclosporina y la rifampicina acelera la
eliminacin del etinilestradiol, quinidina y otros frmacos.


Principales P-450s de metabolizacin de frmacos en el hgado humano.
CYP Abundancia
en hgado
(%)
Variabilidad
interindividual
Expresin Metabolismo
de frmacos
(%)
Activacin de
pre-
carcingenos
1A2 10 30 Inducible,
polimrfico
4 Si
2A6 5 100 Polimrfico Menor a 1 Si
2B6 1 50 Inducilble Menor a 1
2C8 Menor a 1 30 Polimrfico Menor a 1
2C9 15 30 Polimrfico 11 Si
2C19 4 30 Polimrfico 6
2D6 4 200 polimorfico 25
2E1 10 50 Inducible,
polimrfico
4 Si
3A4 30 80 Inducible,
polimrfico
50 si
3A5 Menor a 1 Inducible,
polimrfico
Menor a 1



Isoenzima: Funcin metablica
CYP4A11: Metabolismo cidos grasos (b-hidroxilacin y w-hidroxilacin)
CYP4B1: Metabolismo cido araquidnico (sntesis de 12(R)-HETE)
CYP4F2: Metabolismo cido araquidnico (sntesis de 20-HETE)
CYP4F3: Metabolismo de leucotrinenos (LTB4)
CYP4F8: Metabolismo prostaglandinas (19R-hidroxilacin)
CYP5: Metabolismo del cido araquidnico (Tromboxano A2 sintetasa)
CYP7A: Biosntesis de cidos biliares (primer paso y limitante de la va)
CYP7B: Sntesis neuroesteroides (cerebro)
CYP8A: Metabolismo del cido araquidnico (Prostaciclina sintasa)
CYP8B: Biosntesis de cidos biliares (12-a hidroxilasa)
CYP11A:l Biosntesis esteroides (conversin de colesterol a pregnenolona)
CYP11B1: Sntesis cortisol (11-b hidroxilacin de 11-desoxicortisol)
CYP11B2: Sntesis de aldosterona (18-hidroxilacjn de costicosterona)
CYP17: Sntesis de testosterona y estrgenos (12-a hidroxilasa)
CYP19: Sntesis de estrgenos (actividad aromatasa)
CYP20: Enzima especfico de vertebrados (posible papel en el desarrollo)?
CYP21: Sntesis cortisol (C21 esteroides sintetasa)
CYP24: Degradacin/inactivacin de metabolitos de la vitamina D
CYP26A1: Metabolismo del cido retinoico (trans hidroxilasa)
CYP26B1: Posible papel en el metabolismo del cido retinoico?
CYP26C1: Posible papel en el metabolismo del cido retinoico?
CYP27A1 :Biosntesis de cidos biliares (esterol 27-hidroxilasa)
CYP27B1: Activacin vitamina D3 (1-a hidroxilacin del precursor)
CYP39 :Metabolismo del colesterol (24-hidroxicolesterol 7-hidroxilasa)
CYP46: Metabolismo del colesterol (colesterol 24-hidroxilasa)
CYP51 :Sntesis de colesterol (lanosterol 14-a desmetilasa).
FACTORES DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA DEL CITOCROMO P450

FACTORES EXTRINSECOS
1. Exposicion a qumicos, toxicos, contaminantes ambientales.
2. Infecciones virales, bacterianas, parasitarias, inflamacin.
3. Estilo de vida (alcohol, drogas, tabaco)
4. Dieta
5. Salud/enfermedad
6. Administracin de farmacos
7. Inmuno y radioterapia.

FACTORES INTRINSECOS
1. Genero, variaciones hormonales
2. Tipo de tejido
3. Polimorfismos
4. Desarrollo/crecimiento
5. Cncer
6. Grupo tnico
Los factores farmacolgicos implicados en la actividad del citocromo p450 son:
- Factores ambientales.
- Factores nutricionales.
- Induccin, inhibicin.
- Control gentico
- Edad
- Sexo temperatura
- Ambiente qumico
- Frmacos y enfermedades
Todos estos factores condicionan que los niveles hepticos de los enzimas p450 varen
notablemente entre diferentes individuos. Esta variabilidad explica las notables diferencias
que en ocasiones se observan en el metabolismo de frmacos, justificando adems la
aparicin de alteraciones en la respuesta farmacolgica, as como las diferencias
individuales en la susceptibilidad a la accin de txicos o carcingenos. Los procesos de
absorcin, distribucin, metabolismo y excrecin a los que se ve sometido un frmaco
regulan su concentracin en el lugar de accin, jugando un papel determinante en su
eficacia farmacolgica. Los niveles y la actividad de ciertas subfamilias P450 varan de un
individuo a otro, siendo la induccin o inhibicin de estas enzimas uno de los factores
fundamentales. En efecto, se ha demostrado que ciertas subfamilias pueden ser inducidas
o inhibidas despus de la exposicin de los individuos a frmacos, que se suministran
concomitantemente con agentes antitumorales, a compuestos endgenos, compuestos
exgenos o por autoinduccin de frmacos. As entonces, la induccin o inhibicin de
enzimas P450 tiene un impacto positivo o negativo en la farmacoterapia contra el cncer,
dependiendo de las caractersticas de los metabolitos obtenidos en la biotransformacin
de frmacos.

Inhibicin enzimtica
Podemos definir los inhibidores enzimticos como aquellos agentes moleculares que
interfieren en la catlisis de una reaccin hacindola ms lenta o detenindola. Como los
enzimas catalizan todos los procesos celulares podemos decir que los inhibidores
enzimticos se encuentran entre los agentes farmacuticos ms importantes, un ejemplo
es la aspirina, la cual inhibe el enzima que cataliza el primer paso de la sntesis de
prostaglandinas, compuestos que intervienen en procesos que producen dolor. Por otra
parte, el estudio de los inhibidores enzimticos ha proporcionado una informacin muy
importante sobre mecanismos enzimticos y tambin ha ayudado a definir algunas rutas
metablicas. Por definicin, los mecanismos basados en la inhibicin, implican la
transformacin del inhibidor en un metabolito reactivo que modifica las enzimas del
citocromo P450, y produce una prdida de actividad enzimtica. No se incluyen entre los
inhibidores a aquellas sustancias o factores como el pH o la Temperatura, que actan
produciendo una desnaturalizacin de la enzima, ni tampoco las acciones externas que
retardan o dificultan la accin de cualquier tipo de enzima. Aunque los mecanismos de
inhibicin de los metabolitos inhibidores no estn bien establecidos, expondremos a
continuacin la revisin ms reciente. En general, los mecanismos inhibitorios pueden
clasificarse en dos grupos:
Alquilacin del hemo y/o protena.
Formacin de un complejo metablico intermedio (MI).

Se produce una fuerte unin entre el metabolito, y el estado reducido del hierro hemo,
dando lugar al complejo metablico intermedio, MI, sin actividad cataltica. La unin es
fuerte, pero no se forman enlaces covalentes, por lo que puede revertirse bajo
determinadas condiciones experimentales como por ejemplo la adicin de ferrocianida
potsica La formacin de aductos en las enzimas del P450, est generalmente
caracterizada por una unin covalente, entre una sustancia electroflica, y la parte
nucleoflica de un aminocido del sitio activo del citocromo, o de su grupo prosttico. De
los 31 mecanismos inhibitorios in vitro descritos en la literatura, 9 (29%) se han clasificado
como inhibiciones irreversibles por alquilacin; 14 (45%) se han clasificado como
formadores de complejos inhibidores (MI). Los 8 mecanismos restantes (26%), se han
clasificado como desconocidos. Los tipos de inhidores son ya conocidos por ser
fundamento en bioqumica. Existe un tipo de inhibidores irreversibles llamado
inactivadores suicidas, los cuales son compuestos poco reactivos hasta que se unen al
sitio activo de un enzima especfico. Un inactivador suicida pasa a travs de los primeros
pasos de una reaccin enzimtica normal, pero enseguida se convierte en un compuesto
muy reactivo que se combina irreversiblemente con el enzima, en lugar de transformarse
en el producto normal. Estos compuestostambin se conocen con el nombre de
inactivadores basados en el mecanismo, ya que utilizan el mecanismo de reaccin
enzimtico normal para inactivar el enzima. Debido a que el inactivador suicida se ha
diseado para un enzima especfico y no es reactivo hasta que se encuentra en el sitio
activo del enzima, los frmacos basados en este mtodo son a menudo muy eficaces y
con pocos efectos secundarios. En lo que se refiere al CYP450, una posible causa de
interaccin es que dos frmacos sean substratos del mismo P-450 y se produzca una
competencia por su unin al enzima. As mismo en determinadas ocasiones, uno de los
compuestos puede bloquear o inactivar irreversiblemente la actividad del P-450 que
metaboliza al otro frmaco. En ambos casos se produce una elevacin de los niveles
circulantes de ste ltimo, y en el caso de frmacos con un ndice teraputico estrecho,
dalugar a situaciones de sobredosis con una respuesta exagerada y/o toxicidad. Se
estima que alrededor del 75% de los frmacos son metabolizados por el CYP3A4 y/o el
CYP2D6, con lo que es fcil imaginar que la mayor parte de las interacciones metablicas
se deben a interferencias a nivel de estos enzimas






CYP Inhibidor Inhibicin
1A2 Furafilina
7,8-benzoflavona
Fluvoxamina
Irreversible
Competitiva
competitiva
2A6 Metoxalen
Triptamina
Tranilcipromina
Irreversible
Competitiva
Competitiva
2C8 Quercetina Competitiva
2C9 Sulfafenazol
Acido tienilico
Competitiva
Irreversible
2C19 Tranilcipromina competitiva
2D6 Quinidina competitiva
2E1 Dietil ditiocarbamato
4-metilpirazol
Disulfiram
Irreversible
Competitiva
irreversible
3A4 Troleandromicina
Eritromicina
Ketoconazol
Getodene
Complejo inactivo
Complejo inactivo
Competitiva
irreversible


Se reflejan los inhibidores e inductores de los enzimas CYP2D6 y CYP3A4 con
mayor relevancia clnica.
CYP Inhibidores Inductores
2D6 Antiarritmicos: quinidina,
amiodarona.
Antidepresivos: fluoxetina,
paroxetina, sertralina.
Azoles antifungicos:
keoconazol, itrakonazol,
miconazol, fluconazol.
Antibiticos macrolidos:
eritromicina, claritromicina,




Antituberculosos:
rifampicina, rifampin,
rifabutin.

Anticonvulsionantes:
troleandromicina. fenobarbital, carbamepina,
fenitoina
3A4 Inhibidores de la proteasa
del VIH: ritonavir, indinavir,
aprenavir.
Antidepresivos: fluoxetina,
fluvoxamina, nefazodona.
Antiarritmicos: amiodarona
Zumo de pomelo.
Glucocorticoides.
Dexametasona
Hierba de San Juan.



Cuando se administran dos o ms frmacos, estos compiten por su unin al CYP y se
interfieren mutuamente, en este caso la inhibicin por sustrato es competitiva y su grado
es funcin de la concentracin del inhibidor. La inhibicin del CYP2D6 por el antiarrtmico
quinidina es un ejemplo tpico. Otras veces el efecto inhibidor puede realizarse
competitivamente pero a travs de alguno de los productos resultantes. Por ejemplo,
algunas fluoqinolonas, especialmente enoxacina y ciprofloxacina, a travs del CYP2D6
forman el metabolito 4-oxoquinolona, inhibidor de los CYP1A2 , CYP2C9 y CYP3A4 (49).
Otras sustancias actan como inactivadoras suicidas, es decir, se unen covalentemente
o destruyen el hemo, gastndose en la reaccin. Estas sustancias como el
secobarbital, la noretindrona y el etinilestradiol, producen la forma de inhibicin
irreversible. Finalmente otras drogas como los imidazoles (cimetidina, ketokonazol y otros)
o los macrlidos (eritromicina, troleandomicina y sus metabolitos) inhiben el metabolismo
oxidativo al formar un complejo fuertemente unido al hemo del P450. Esta forma de
inhibicin es no competitiva pues acta impidiendo el acceso del O2 y los electrones al
centro activo.





Induccin enzimtica
El fenmeno de induccin enzimtica fue demostrado hace ms de 40 aos y es tejido-
especfico, concentracin dependiente, rpido y reversible (51). Existen diferentes teoras
para explicar el mecanismo de induccin enzimtica. Algunas propuestas tericas
publicadas recientemente se basan en tres hiptesis:
a) Cada isoforma CYP inducible qumicamente, se corresponde con un receptor
intracelular con el que interacta, mediando as la induccin.
b) Cada isoforma CYP inducible qumicamente y su receptor correspondiente, pueden
poseer una alta similitud estructural y estrica en los puntos de unin al sustrato inductor.
c) Cada gen CYP inducible puede tener diferentes elementos de respuesta gnica, que
interactan selectivamente con el receptor activado.
En realidad, induccin es la sntesis de nuevas molculas enzimticas (lo que incrementa
bruscamente su nmero en un tejido y momento dados) como consecuencia de la
transcripcin gnica. En la induccin enzimtica la presencia de algunos principios activos
aumenta la produccin enzimtica, reduciendo la disponibilidad y la eficacia del mismo
inductor o de otras sustancias que usan la misma va enzimtica. Cuando un mismo
compuesto induce la biotransformacin de otros y tambin su propio metabolismo, el
fenmeno se conoce como autoinduccin, es el caso de la rifampicina, la carbamazepina
y otros anticonvulsivantes. La induccin de los citocromos est sometida al control de
protenas intensificadoras de la transcripcin gnica, perteneciendo casi todas a la
superfamilia de los receptores citoslico-nucleares. Estas protenas de control se hallan
en el citosol o se ubican directamente sobre el ADN. En la mayora de los casos la unin
del xenobitico favorece la entrada al ncleo, la dimerizacin del intensificador y su
fijacin con alta eficacia sobre la secuencia de ADN reguladora del gen CYP a transcribir.
En otros casos, el xenobitico favorece la entrada al ncleo y la dimerizacin del
intensificador que ya de por s es activo. Como consecuencia se pone en marcha la
maquinaria de la transcripcin y se sintetiza ARN-m que ser traducido en las diferentes
protenas CYPm.
Existen 4 tipos de inductores de los CYP que actan sobre las protenas de control.
- Hidrocarburos aromticos policclicos y dibenzodioxinas: inducen la familia CYP1 a
travs del receptor Ah (Aromatic hydrocarbon).
- Fenobarbital: induce fundamentalmente las subfamilias 2B y 2C a travsdel
receptor CAR (Constitutive Androstane Receptor).
- Rifampicina y glucocorticoides: activan fundamentalmente las subfamilias 3A y 2C
a travs del receptor PXR (Pregnane X Receptor).
- Fibratos: activan la familia CYP3A4 a travs del receptor PPAR (Peroxisome
Proliferator-Activated Receptor).
La subfamilia 2E es inducida por el etanol y la isoniazida, sin embargo, los mecanismos
por los que tiene lugar esta induccin son distintos. En ellos podran participar el HNF-1
(Hepatic Nuclear Factor) y otros reguladores, que inhibiran procesos que normalmente
terminan y degradan el mensaje gentico y las protenas (supresin de la transcripcin,
desestabilizacin del ARN-m). Hay que destacar que los propios intensificadores
mencionados incrementansu autotranscripcin y que los glucocorticoides, a travs de su
propio receptor GR, induce la sntesis de CAR y PXR, por lo que su efecto inductor sobre
los CYP es mayor. Tambin debe decirse que varias citokinas (IL-6,IFN-g, TFN-a) , por el
contrario, reprimen la expresin CYP.

Se han estudiado los efectos de la inhibicin enzimtica de la citocromo CYP3A4
ocasionada por la naringinina (compuesto encontrado en el zumo de frutas ctricas) y su
forma aglicona. El efecto contrario se observa con los inductores de las enzimas CYP3A4
y CYP2C8 la dexametasona, el fenobarbital y la rifampicina. El efecto inductor sobre
CYP3A4 es negativo para frmacos antitumorales como el pacliaxel, docetaxel, vincristina
y videstina, porque produce un Incremento en metabolitos con pocas propiedades
antitumorales, causando la eliminacin ms rpida del frmaco. Por otro lado, la induccin
de CYP3A4 produce un efecto positivo sobre la actividad de profrmacos como la
ifosfamida y ciclofosfamida porque se produce mayor cantidad de metabolitos con
propiedades antitumorales. Se ha demostrado que la hierba de San Juan induce CYP3A4,
CYP2C19 y la protena transportadora Pgp13. La administracin de esta hierba en
pacientes con tratamiento con imatinib aumenta el clearance de imatinib, lo que significa
la necesidad de aumentar la dosis para mantener la eficacia clnica. La importancia de
CYP3A4 en la biodisponibilidad de Imatinib ha sido demostrada al estudiar la interaccin
entre dos frmacos, en voluntarios sanos la coadministracin de ketoconazol (un potente
inhibidor de CYP3A4) aumenta la concentracin plasmtica de Imatinib (Cmax) y el rea
bajo la curva de concentracin versus tiempo (AUC) en 26% y 40%, respectivamente15.
La coadministracin de rifampicina, un potente inductor de CYP3A4, disminuye la
concentracin plasmtica de imatinib (Cmax) y el rea bajo la curva de concentracin
versus tiempo (AUC) en 54% y 74%, respectivamente.
Algunos estudios indican que los taxanos tales como el paclitaxel, incrementan
considerablemente los niveles de CYP3A4 al activar los genes que codifican para esta
enzima. El efecto resultante en este caso es la induccin de la propia degradacin del
paclitaxel, disminuyendo as su efectividad teraputica. CYP3A4, la ms abundante de las
enzimas P450 en hgado humano, est relacionada con el metabolismo de cerca de 60%
de los frmacos actualmente conocidos y es muy proclive a ser inhibida por una variedad
de frmacos, tales como: claritromicina, eritromicina, isoniazida, tamoxifeno, irinotecano,
ritonavir, delavirdina, verapamilo, diltiazem, gestodeno y raloxifena.
Por otra parte, estudios clnicos demuestran que la enzima CYP2C8, es inhibida
competitivamente por quercetina, trimetoprim y gemfibrozilo. El efecto producido por la
inhibicin de la actividad enzimtica de las enzimas P450 sobre el metabolismo de
agentes antineoplsicos en general tiene consecuencias negativas ya que puede generar
un incremento riesgoso de la toxicidad de los agentes antineoplsicos, en especial
cuando algunas isoenzimas P450 producen metabolitos capaces de unirse
covalentemente a enzimas P450, inhibindolas. Esta inhibicin tambin puede conducir a
una disminucin o interrupcin de la produccin de metabolitos con propiedades
citotxicas, en el caso de los profrmacos.






Consecuencias clnicas de la induccin y de la inhibicin enzimtica
Estos dos procesos al operar sobre los CYP u otras enzimas del metabolismo xenobitico
generan profundos cambios en el clearance metablico, Clm (tanto heptico como
intestinal) de los frmacos, modificando, no slo los niveles sricos y tisulares, sino
tambin la biodisponibilidad de las formas farmacuticas orales que los contienen.
Asimismo contribuyen a las variaciones interindividuales observadas en las respuestas a
las drogas, causando interacciones potencialmente peligrosas. El conocimiento de las
enzimas metabolizadoras y sus posibles inductores e inhibidores permite un mejor
desarrollo de frmacos pues obliga a estudiar con antelacin las posibles interacciones.
La induccin enzimtica aumenta la biotransformacin y la actividad del frmaco original,
lo que conduce a una prdida de efectividad teraputica.












MECANISMO ENZIMATICO DEL CITOCROMO P-450

Los detalles de los mecanismos por los que los P-450s catalizan tan ele-
vado nmero de reacciones son todava desconocidos. La activacin del oxgeno, que
parece ser similar en todos los P-450s (o al menos en todos los estudiados), es
precisamente el aspecto mejor conocido (5). El centro cataltico de los P-450 es el tomo
de hierro hexacoordinado (con los 4 anillos de la protoporfirina IX, con el grupo tiol de un
residuo de cistena de la cadena polipeptdica y con el solvente, normalmente agua).

El primer paso del proceso cataltico consiste en la unin del substrato y el
desplazamiento del solvente en la sexta posicin de coordinacin del tomo de hierro.
Como consecuencia de ello se originan cambios en el estado de spin, en el potencial
redox y en el mximo de absorbancia de la hemoprotena.

En el segundo paso se produce la reduccin del complejo hemoprotena-substrato al
estado ferroso (el Fe3+ del grupo hemo pasa a Fe2+) gracias al aporte de un electrn y al
aumento en el potencial redox originado en el paso anterior.

El tercer paso es la unin del oxgeno molecular para formar un complejo superxido.

El cuarto paso se produce el aporte de un segundo electrn con la formacin de una
especie activada de oxgeno.

A partir de este punto el mecanismo no se conoce con certeza. La naturaleza de la
especie activada de oxgeno es desconocida (se apunta que pudiera ser una mezcla de
complejos hierro peroxo o hierro-oxocon la hemoprotena). En cualquier caso, se tratara
de un oxidante electroflico de vida muy corta formado por la protonacin del dioxgeno
(O=O) (15).




Ciclo cataltico del citocromo P-450


El resultado final sera la liberacin de uno de los tomos de oxgeno en forma de una
molcula de agua y la incorporacin del otro en el substrato. En la Figura est
representado el proceso que dara lugar a la formacin de un metabolito hidroxilado. El
resultado de la actividad enzimtica del P-450 no siempre es la insercin de oxgeno en la
molcula del substrato, pudiendo ca- talizar tambin reacciones de deshidratacin,
deshidrogenacin, isomerizacin, dimerizacin, e incluso reduccin.

El desacoplamiento del ciclo cataltico del P-450 se produce cuando los electrones del
cofactor NADPH son consumidos sin formacin de metabolitos oxidados. Esto ocurre
cuando:

a) El intermediario Fe2+O2 se autooxida liberando anin superxido y regenerando el
enzima en estado frrico

b) El intermediario Fe3+ hidroperxido se disocia en una molcula de H2O2 y enzima
frrico;

c) La especie Fe=O en lugar de oxidar el sustrato es reducida a una molcula de agua por
transferencia adicional de electrones.




METABISLISMO DE XENOBIOTICOS
A lo largo de su evolucin, los organismos vivos han estado expuestos de forma continua
a nmero creciente de sustancias qumicas extraas presentes en su entorno y
susceptibles de acceder a su interior de modo accidental. Para salvaguardarse del libre
acceso de estos compuestos, los organismos vivos interponen una serie de barreras de
naturaleza fsica o biolgica. No obstante, un nmero indeterminado de los mismos es
capaz de superar dichos mecanismos de proteccin y contactar con las clulas y tejidos
produciendo efectos de diversa ndole a los cuales se les denomina xenobioticos .

Los xenobioticos son compuestos qumicos que no forman parte de la composicin
habitual del cuerpo humano, pero que son capaces de acceder a su interior.



Pesticidas medicmentos


Sus Caracterisiticas:

Se trata de compuestos de naturaleza qumica muy variada, algunos de los cuales
son de origen natural, entre los que destacan las micotoxinas o los alcaloides o
son productos originados por la propia actividad humana, como los contaminantes
ambientales o los compuestos qumicos de sntesis.
El vertiginoso desarrollo de la industria qumica en las ltimas dcadas ha hecho
aumentar de forma excepcional el nmero de estos compuestos, con el
correspondiente aumento del riesgo de contacto con los mismos. Algunas
estimaciones elevan a varios miles el nmero de moleculas nuevas introducidas
cada ao y que engrosan la ya larga lista de xenobiticos.

Estos compuestos pueden acceder a nuestro organismo mediante ingestin,
inhalacin, por va parenteral o a travs de la piel. Entre los mismos se incluyen
frmacos, cosmticos, aditivos alimentarios, pesticidas, productos de uso
domstico, derivados de la combustin de carburantes, residuos procedentes de la
industria qumica, etc.

Los xenobiticos no son utilizados como nutrientes, por lo que no se incorporan a
las rutas bioqumicas del metabolismo intermediario y no son degradados a travs
de estas vas metablicas.

Se trata, en general, de compuestos de naturaleza lipoflica por lo que pueden
atravesar con relativa facilidad las membranas biolgicas, acceder al interior de las
clulas y unirse a estructuras celulares de carcter lipoflico.

su eliminacin del organismo es dificultosa, dado que la excrecin de compuestos
no voltiles se realiza a travs de fluidos de naturaleza acuosa, principalmente
orina. Ante esta situacin, los organismos vivos han desarrollado sistemas
metablicos alternativos para acelerar la eliminacin de estos compuestos.
Debido a estas caractersticas y a los daos que estas puedan causar por no ser fciles
de eliminar del organismo, existe una serie de enzimas no integrados en las vas del
metabolismo energtico o intermediario del organismo y cuyos substratos son los
xenobiticos.

Su funcin es la de convertir los xenobiticos en molculas ms polares, ms
hidrosolubles y, por tanto, ms fcilmente excretables. El papel de estos enzimas es clave
para la supervivencia celular. De no existir tales vas metablicas, una vez en el interior
del organismo los xenobiticos tenderan a acumularse alterando el equilibrio celular y
provocando alteraciones funcionales e incluso la muerte celular.

BIOTRANSFORMACION

Consiste en un conjunto de reacciones encaminadas a dotar a los xenobiticos, de la
hidrosolubilidad suficiente para ser eliminados del organismo con mayor facilidad.

Para ello se necesita la introduccin de grupos funcionales en la molcula que aumenten
la polaridad de la misma, lo que se consigue gracias a las reacciones de Fase I o
Funcionalizacin. Esta etapa es crucial en la excrecin de las sustancia toxicas y tienen
lugar en los siguientes tejidos:
Fraccin microsomal heptica (retculo endoplsmico liso de los hepatocitos). En mayor
proporcin en el SNC, rion, pulmn e intestino.






Tradicionalmente estos procesos se han agrupado en dos fases o etapas.

En la fase 1 los xenobiticos son modificados mediante reacciones de oxidacin,
reduccin o hidrlisis y convertidos en productos ms hidrosolubles gracias a la aparicin
de nuevos grupos funcionales de carcter polar (hidroxilo, amino, carboxilo).

En la fase 2 los xenobiticos, o los metabolitos generados por las reacciones de la fase 1,
se combinan con molculas endgenas de carcter polar para formar productos de
conjugacin que son rpidamente excretados.

En general, los enzimas de fase 1 son capaces de transformar mltiples substratos y
catalizar reacciones diferentes. Se trata de protenas catalticas de naturaleza muy diversa
entre los que se incluyen enzimas con actividad monooxigenasa,como el citocromo P-450
o la flavin monooxigenasa, diversas oxidasas (alcohol deshidrogenasa, aldehido
deshidrogenasa, amino oxidasas, aromatasas), la epxido hidrolasa o esterasas y
amidasas hepticas y plasmticas.

El citocromo P-450 es sin duda el miembro ms destacado de este grupo de enzimas y el
que ha sido ms ampliamente estudiado.




Reacciones de Fase I (1)

Reacciones de oxidacin.
Tienen lugar preferentemente en la fraccin microsmica del hgado y de otros tejidos, y
en menor grado en la fraccin mitocondrial.

Reacciones de reduccin.
Tienen lugar en la fraccin microsmica.

Reacciones de hidrlisis.
Tienen lugar en el plasma y diversos tejidos.

Los cambios producidos por estas reacciones pueden tener diferentes resultados :

Activacin de un profrmaco.
Conversin de un producto activo en otro activo, cuya actividad puede ser similar o
distinta de la del frmaco original.
Conversin de un producto activo en otro activo, cuya actividad estxica.
Inactivacin

Participacion relativa de diferentes enzimas de fase 1
en el metabolismo xenobioticos
citocromo
p450
flavin-
monooxigen
asa



























METABOLISMO ENDOGENO
Convierten sustancias que consumimos en constituyentes necesarios para mantener la
integridad de la pared celular (esteroides, acido biliares, colesterol y prostaglandinas). Su
dficit es incompatible con la vida.
SNTESIS DE HORMONAS ESTEORIDEAS
Todos los esteroides son derivados del colesterol, que es un compuesto de 27 tomos de
carbono (C
27
). El cuerpo lteo o cuerpo amarillo posee este color debido al
almacenamiento del colesterol que toma de las lipoprotenas de baja densidad (LDL)
circulantes, que es el principal sustrato para la sntesis de la P ltea.
A partir del colesterol (C
27
), se forman los progestgenos (C
21
-esteroides), como la P, la
- -OHP) y sus metabolitos precursores pregnenolona (PREG)
y 17-hidroxipregnenolona (17-OHPREG), respectivamente. A partir de los C
21
-esteroides
se forman los andrgenos o esteroides C
19
, como la dehidroepiandrosterona (DHEA), la
androstenodiona (A), el androstanodiol (Adiol) y la testosterona (T). Finalmente, por
aromatizacin de los andrgenos se forman los estrgenos, que son esteroides C
18
, como
-estradiol (E
2
) y la estrona (E
1
).
La mayora de las enzimas que intervienen en la esteroidognesis pertenece al complejo
enzimtico de la citocromo P450 (CYP o P450c), entre ellas: el complejo enzimtico que
CYP1
1A1
CYP19
(aroma
tasa)
escinde la cadena lateral del colesterol para formar la PREG (CYP11A1 o P450scc); el
complejo enzimtico formado por la 17a-hidroxilasa/17,20-liasa o desmolasa (CYP17 o
P450
c17a
), que participa en los pasos metablicos que convierten la PREG en DHEA y la
P en A, y, por ltimo, el complejo enzimtico aromatasa (P450arom o CYP19), que
convierte la A en E
1
y la T en E
2
(Fig. 14.4).
Fig. . Sntesis de los sexoesteroides. El colesterol por accin de la protena StAR penetra
al interior de la mitocondria. El complejo enzimtico CYP11A1 (20,22-desmolasa o
P450
scc
) convierte el colesterol en
5
-pregnenolona, que por accin del complejo
-HSD II y la
4,5
-isomerasa se convierte en progesterona. El complejo
de la CYP17 (P450
c17a
/17,20-liasa) convierte la
5
-pregnenolona y la progesterona, por
-hidroxilasa y la 17,20-liasa o
-HSD III o 17-reductasa convierte la DHEA, A y E
1
en
Adiol, T y E
2
, respectivamente. Finalmente, la CYP19 (aromatasa o P450
arom
) convierte la
A en E
1
y la T en E
2
. A: androstenodiona. Adiol: androstanodiol. CYP11A1 o P450
scc
:
20,22-desmolasa. CPY11B1 o P450 -hidroxilasa 1. CYP11B2 o P450
c11AS
-
hidroxilasa 2 o aldosterona sintetasa. CYP17 o P450 -hidroxilasa /17,20-liasa.
CYP19 o P450
arom
: aromatasa. CYP21 o P450 -OH. DHEA:
dehidroepiandrosterona. 11-DOC: desoxicorticosterona. E
1
: estrona. E
2
: estradiol.
-HSD II. Protena StAR: protena reguladora aguda de la esteroidognesis. T:
-HSD II: 3b- - -
- - - -hidroxiesteroide dehidrogenasa
isoenzima 3. 18-OH: 18- - -hidroxilasa.

SNTESIS DE LA ALDOSTERONA
La aldosterona se sintetiza y libera en la zona glomerulosa de la corteza suprarrenal; su
precursor es el colesterol. Las clulas suprarrenales sintetizan un 20% de este
colesterol, mientras que el 80% restante procede de las lipoprotenas de baja densidad
circulantes, que son captadas por receptores especficos de la membrana mediante un
proceso de endocitosis. La mayora de los pasos implicados en la sntesis de la
aldosterona estn catalizados por diversas oxidasas, de funcin mixta, de la familia del
citocromo P450. El paso limitante de la sntesis es la conversin de colesterol en 5-
pregnenolona, que implica la escisin de la cadena lateral del colesterol en C20; esta
reaccin es catalizada por la desmolasa (CYP11A1), enzima localizada en la membrana
interna mitocondrial. A continuacin, la pregnenolona pasa al citoplasma, donde tiene
lugar la accin de la 3-hidroxiesteroide-deshidrogenasa (3-HSD) y la hidroxilacin
sucesiva en posicin C21 y C11, realizada por las enzimas CYP21A2 y CYP11B1. La
corticosterona as formada se convierte por la accin de la 18-hidroxilasa (CYP11B1) y
de la 18-metiloxidasa (CYP11B2), enzimas que introducen una funcin aldehdo en el
C18, en aldosterona.
Aunque inicialmente se crea que la sntesis de aldosterona se restringa a la zona
glomerulosa de la corteza adrenal, en los ltimos aos se ha demostrado que tambin
se sintetiza en otros tejidos, como corazn, cerebro, rin y vasos, donde hay tanto los
receptores mineralocorticoideos como las enzimas necesarias para su sntesis.


Sntesis y Utilizacin de los cidos Biliares
Los productos finales de la utilizacin del colesterol son los cidos biliares. En efecto, la
sntesis de los cidos biliares es la principal va de catabolismo de colesterol en los
mamferos. Aunque varias de las enzimas implicadas en la sntesis de cidos biliares se
activa en muchos tipos de clulas, el hgado es el nico rgano donde su completa
biosntesis puede ocurrir. Sntesis de cidos biliares es uno de los mecanismos
predominantes en la excrecin de exceso de colesterol. Sin embargo, el la excrecin de
colesterol en forma de cidos biliares es insuficiente para compensar un exceso de
ingesta diettica de colesterol. Sntesis de un completa de los cidos biliares requiere
17 enzimas individuales y se produce en mltiples compartimentos intracelulares que
incluyen el citosol, endoplsmico retculo (ER), las mitocondrias y peroxisomas.
Teniendo en cuenta el hecho de que muchos metabolitos cidos biliares son citotxicos
es comprensible que su sntesis tiene que ser estrictamente controlada.
La principal va para la sntesis de los cidos biliares se inicia a travs de
hidroxilacin de colesterol en la posicin 7 a travs de la accin del colesterol 7-
hidroxilasa (CYP7A1), que es una enzima localizada ER. CYP7A1 es un miembro de la
citocromo P450 de la familia de enzimas metablicas. Esta va se muestra en muy
abreviada la moda en la siguiente figura. El camino iniciado por CYP7A1 se conoce
como el "clsico" o "neutral" va de la sntesis de cidos biliares. Hay una va alternativa
que consiste en la hidroxilacin de colesterol a los 27 posicin por la enzima
mitocondrial esteroles 27-hidroxilasa (CYP27A1). Este va alternativa se conoce como
el "cido" va de cidos biliares sntesis. Aunque en los roedores de la va cida puede
representar hasta el 25% de sntesis total de cidos biliares, en los seres humanos que
representa no ms del 6%. Los cidos biliares intermedios generados a travs de la
accin de CYP27A1 son posteriormente hidroxilados en la posicin 7 por oxiesteroles
7-hidroxilasa (CYP7B1). Aunque el va cida no es una va importante para la sntesis
de cidos biliares humanos es un muy importante como lo demuestra el fenotipo que
presentan en un recin nacido acogida una mutacin en el gen CYP7B1. Este nio
present con colestasis grave (obstruccin en el flujo de bilis del hgado) con disfuncin
heptica y cirrosis.
El grupo hidroxilo sobre el colesterol en la posicin 3 est en la -orientacin y
debe ser epimerized a la -orientacin durante la sntesis de la los cidos biliares. Este
epimerizacin se inicia por la conversin de la 3-hidroxilo a un grupo 3-oxo catalizada
por la 3-hidroxi-
5
-C
27
oxidorreductasa-esteroides (HSD3B7). Que esta reaccin es
fundamental para la sntesis de cidos biliares y la funcin se demuestra en los nios
que tienen mutaciones en el gen HSD3B7. Estos nios desarrollan enfermedad
heptica progresiva que se caracteriza por ictericia colestsica.
A raz de la accin de los intermediarios HSD3B7 cidos biliares que se proceda a
travs de dos vas que los productos finales son quenodeoxiclico cido (CDCA) y
clico cido (CA). La distribucin de estos dos cidos biliares se determina por la
actividad de esteroles 12-hidroxilasa (CYP8B1). Los productos intermedios de la
reaccin HSD3B7 que se acte en funcin de CYP8B1 convertido CA y los que
escapan a la accin de la enzima se convertirn en CDCA. Por lo tanto, la actividad del
gen CYP8B1 se determinar la proporcin de CA para CDCA. Como se analiza a
continuacin el gen CYP8B1 est sujeto a la regulacin de los cidos biliares a travs
de ellos su capacidad para regular la accin del receptor nuclear FXR.


Sntesis de los 2 cidos biliares ms importantes, cido clico y cido
quenodeoxiclico. La reaccin catalizada por la 7-hidroxilasa (CYP7A1) es el paso
limitante en la sntesis de cidos biliares. La conversin de 7-hidroxicolesterol a cidos
biliares requiere varios pasos que no se indican en detalladamente en esta imagen.
Solamente los cofactores relevantes necesarios para la sntesis se indican. Esteroles
12-hidroxilasa (CYB8B1) controla la sntesis de cido clico y como tal es bajo un
estricto control de la transcripcin (vase el texto)
Los cidos biliares ms abundante en la bilis humana son quenodeoxiclico
cido (45%) y cido clico (31%). Estos se denominan como el cidos biliares
primarios. Estas reacciones de conjugacin rendimiento glicoconjugados
y tauroconjugates,, respectivamente. Este proceso aumenta la conjugacin de la
naturaleza anfiptica de los cidos biliares, facilitando su secretable as como
citotxicos menos.









FORMACION DE EROS (ESPECIES REACTIVOS DE OXIGENO)

Los radicales libres o especies reactivas de oxigeno son productos liberados por el
sistema oxidativo de la clula, en concreto por la mitocondria como consecuencia de
nuestro metabolismo aerbico. Entre los radicales libres generados de forma endgena
destacan el radical hidroxilo (OH-) y el anin superxido (O2
._
). Los radicales libres de
oxgeno y concretamente el OH- son especies altamente reactivas; es decir poseen una
vida media extraordinariamente corta y reaccionan con cualquier cido nucleico o protena
que encuentren en su camino. Una proporcin importante del oxgeno que respiramos
acaba en forma de radicales libres a travs de la siguiente reaccin mostrada.



Uno de los mecanismo que dispone el organismo implica la accin del enzima superxido
dismutasa que convierte al radical superxido en perxido de hidrogeno (H2O2) que no es
una especie reactiva. Asu vez, el peroxido de hidrogeno (que es una fuente potencial de
radical hidroxilo) es eliminado a travs de la catalasa para dar lugar a oxigeno y agua.
Otro de los mecanismos que posee el organismo de eliminacin de radicales libres es la
presencia de agentes antioxidantes.

Fig. . Formacin y metabolizacin celular de las especies reactivas de oxgeno
(ROS). Los ROS, como el anin superxido (O
2
), perxido de hidrgeno (H
2
O
2
) y
los radicales hidroxilo (OH), son generados en respuesta a agentes exgenos o,
mayoritariamente, por vas endgenas del metabolismo celular, como la cadena de
transporte mitocondrial, la NAD(P)H oxidasa de la membrana citoplasmtica, la
citocromo P450 reductasa, etc. La superxido dismutasa (SOD) transforma el O
2

en H
2
O
2
, y ste es degradado principalmente a H
2
O por las enzimas glutatin
peroxidasa (GSH px) y catalasa. Mediante la reaccin de Fenton o Haber-Weiss,
el H
2
O
2
es capaz de formar OH, un radical altamente reactivo.

El trmino radicales libres del oxgeno o especies reactivas del oxgeno (RLO) engloba
no solamente a los verdaderos radicales derivados del oxgeno, como el superxido (O
2
. -
)
o el hidroxilo (OH
.
) (no confundir con el in hidroxilo OH
-
que no es un radical libre), sino
que en l se incluyen adems molculas no radicales como: H
2
O
2
, ozono (O
3
), etc. Bajo el
punto de vista qumico tanto el O
2
. -
como el H
2
O
2
no son muy reactivos frente a la mayora
de las biomolculas en soluciones acuosas y en condiciones fisiolgicas (aunque lo son
bastante ms que el O
2
) si las comparamos con la actividad del radical OH
.
, el problema
que plantean aquellos es que, en determinadas circunstancias del entorno celular, se
transforman en radicales hidroxilo.




REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS


(1)Nelson, D.L., Cox, M.M. (2006): Lehninger Principios de Bioqumica, 6: 209-
212.

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Arbiol. Espaa: Comunicacin Grfica, s.l.2001. Coleccin Docencia Universitaria.
Ciencias Biomdicas.

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research on cytochrome P 450. pp 1465-1467.

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(5) Oliva R., Ballesta F. Oriola J., Claria J. Gentica Medica, Pubilcations I Edicions, 3
Edicion, Barcelona 2004.