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Produo e melhoramento de espcies

com interesse comercial


SUMRIO
- Aplicao de tcnicas citogenticas no controlo da reproduo
- Hibridizao interespecfica
- Manipulao cromossmica
- Induo de poliploidia
- Populaes monosexuais
- Reverso sexual
Fator importante para um bom desenvolvimento da aquacultura:
Controlo do processo de reproduo dos peixes
Mtodos
- Hibridizao interespecfica
- Manipulao cromossmica (induo de poliploidia)
- Populaes monosexuais
- Reverso sexual

Aplicao de tcnicas de citogentica
A aplicao de tcnicas de anlise citogentica
permite:

- Verificar a eficcia das tcnicas de controlo de reproduo utilizadas
( a partir do conhecimento do caritipo normal da espcie em causa)

- Estudar possveis alteraes do genoma causadas pelas tcnicas de
controlo de reproduo, tais como:
- Assimetria genmica dos hbridos
- Alterao da homozigotia nos organismos ginogenticos e
androgenticos
- Aberraes cromossmicas nos peixes em que foi feita
manipulao cromossmica
- Desenvolvimento de poliploides alterado
- Distrbios funcionais nos peixes com reverso de sexo
- Hibridizao interespecfica
- Manipulao cromossmica
- induo de poliploidia
- populaes monosexuais
- Reverso sexual
Mtodos de controlo do processo
de reproduo dos peixes
Amplamente espalhada, naturalmente e artificialmente
Hibridizao interespecfica
Ex. de hibridizao interespecfica natural:
- salmo do Atlntico (Salmo Salar) e a truta (Salmo trutta)
Hibridizao interespecfica em aquacultura (artificial):
Obter modificaes desejveis nas populas de peixes com interesse comercial

Objetivos:
- Aumento do ndice de crescimento
- Aumento da resistncia a doenas
- Aumento do rendimento da colheita
- Nalguns casos: aplicao da hibridizao para o estabelecimento de stocks de
peixes monosexuais e estreis
Citoplasma materno
(genomas nucleares de
diferentes espcies)
Sem perturbaes
visveis
Incompatibilidade dos genomas parentais
(diferenas no n, tamanho e morfologia dos cromossomas)
Ncleo materno
Ncleo paterno
Re-organizao e modificao do genoma
Eliminao parcial
de cromossomas
Eliminao total de um
genoma parental
Desenvolvimento
de poliploidia
Inviabilidade
dos hbridos
Verificao da eficcia da hibridizao: identificao dos cromossomas parentais
Hibridizao interespecfica
- Hibridizao interespecfica
- Manipulao cromossmica
- induo de poliploidia
- populaes monosexuais
- Reverso sexual
Mtodos de controlo do processo
de reproduo dos peixes
Manipulao cromossmica
Manipulao cromossmica:
- Envolve sempre alterao do n haploide, nunca aneuploidias ou
alteraes estruturais
- Os seus princpios baseiam-se fundamentalmente no processo de
meiose feminina
- choques trmicos
frios
quentes

- choques de presso hidrosttica

- tratamentos qumicos
Citocalasina B
Colchicina

- cruzamentos (fmeas 2n com machos 4n e vice-versa)
Mtodos de induo de poliploidia
Manipulao cromossmica
Induo de poliploidia
Induo de poliploidia por choques trmicos
- desova da fmea e extrao do esperma
nos machos por presso abdominal
- fecundao durante 2m
- lavagem
- incubao dos ovos, durante 15m, em gua bem oxigenada
- submerso dos ovos num sistema termoregulado
de gua quente (28C) durante 10m
- recolocao dos ovos tratados no sistema de incubao
Os choques trmicos, quentes ou frios, podem no ser efetivos quando
aplicados a temperaturas aqum ou alm do limite tolerado pela
espcie:
- Choques com intensidades entre 8 e 11C para peixes de guas
quentes (ex: Tilapia aurea)
- Choques com intensidades entre 26 e 28C para peixes de guas frias
(ex: salmondeos)
Induo de poliploidia por choques trmicos
Fundamento da induo de triploidia
Influncia da temperatura na taxa de sobrevivncia
Fundamento da induo de tetraploidia
Desvantagens
- difcil obter uma populao
tetraploide vivel e frtil
Resultados
- choque 8 minutos depois da fecundao -
triploides
- choque mais tardio - tetraploides
Procedimento
introduo dos ovos fecundados num cilindro de ao
cheio de gua temperatura constante de 10C e
fechado com pisto

- fazer subir a presso entre 408 a 476 atmosferas
num tempo curto
Induo de poliploidia por presso hidrosttica
Fundamento
bloqueio da metafase (colchicina)
inibio da citocinese (citocalasina B)
Desvantagens
- a % de poliploides depende de fatores como a temperatura e o tempo de
tratamento
- no se conhecem ainda as consequncias para a sade humana
Induo de poliploidia por agentes qumicos
Induo de triploidia por cruzamento
de fmeas 2n com machos 4n
Vantagens? Desvantagens?
A viabilidade e a sobrevivncia destes indivduos esto dentro dos
limites permitidos pela seleo e pela adaptao

- aparecem espontneamente na natureza
- possvel induzi-los artificialmente
Triploides VS Diploides
- A viabilidade menor quando as espcies cultivadas so triploides (menor % de
ovos que chegam a eclodir, devido ao choque do tratamento)
- A sobrevivncia dos triploides depois da ecloso igual dos diploides
respetivos
Tetraploides
- Viabilidade menor nas espcies com interesse comercial
- Quando frteis apresentam elevada taxa de anomalias
cromossmicas e malformaes nos seus gmetas
Viabilidade dos poliploides
Mtodos identificao dos poliploides
- Caritipo, marcadores cromossmicos (NORs, bandas C...)
- Volume nuclear dos eritrcitos
diploidia
triploidia tetraploidia
Identificao de poliploidia
Consequncias da triploidia nos peixes
Esterilidade

Testculos de tamanho e forma semelhantes aos normais, mas os seus
gmetas so cromossomicamente desequilibrados dando origem a
embries aneuploides e inviveis

Nas fmeas o desenvolvimento gonadal est completamente inibido (
maioria das espcies)

Em algumas espcies as fmeas, atingindo a puberdade um ano depois
do macho, no sofrem consequncias negativas do amadurecimento
sexual (taxas de crescimento, qualidade e mortalidade mais
favorveis)

A taxa de crescimento dos triploides superior dos
diploides

Controlo da maturao sexual pela triploidia
Controlo da maturao sexual pela triploidia
Repovoamento de rios e zonas marinhas, sem efeitos ambientais
negativos, uma vez que a esterilidade faz deles uma populao
neutra e controlada
- Hibridizao interespecfica
- Manipulao cromossmica
- induo de poliploidia
- populaes monosexuais
- Reverso sexual
Mtodos de controlo do processo
de reproduo dos peixes
Ginogenticos
indivduos resultantes da induo do desenvolvimento embrionrio, em
ocitos normais, por fecundao com esperma funcional mas inativo,
com posterior diploidizao do DNA de origem materna
Androgenticos
indivduos resultantes da induo do desenvolvimento embrionrio em
ocitos em que foi eliminado o DNA, por fecundao com esperma
normal, com posterior diploidizao do DNA de origem paterna
Populaes monosexuais
Podem ocorrer espontneamente (ex: carpa) ou podem ser
formadas artificialmente
Controlo sexual
produo de populaes todas fmeas ou machos
com importncia comercial
Ginogenticos meiticos (heterozigticos)
Ginogenticos mitticos (homozigticos)
Formao de ginogenticos
Para evitar a elevada taxa de mortalidade do embrio, aps
aplicao do choque para induo de diploidia, podem-se usar
ovos diploides provenientes de fmeas tetraploides
Para evitar a elevada taxa de mortalidade do
embrio, aps aplicao do choque para
induo de diploidia, podem-se inseminar os
ovos com espermatozoides diploides de
machos tetraploides
Formao de androgenticos
Sobrevivncia dos ginogenticos e androgenticos


A sobrevivncia menor nas espcies com manipulao cromossmica

- elevado ndice de mortalidade
- percentagem significativa de embries malformados

Consequncia das manipulaes drsticas nos gmetas
A radiao usada para inativar o DNA dos ocitos e/ou espermatozoides
pode:
- induzir danos no DNA mitocondrial dos ocitos, o qual tem funes
essenciais durante as primeiras fases do desenvolvimento embrionrio
- produzir fragmentos cromossmicos, podendo estes resduos de
cromossomas interferir com o desenvolvimento embrionrio dos
organismos androgenticos ou ginogenticos
- Dar origem a mosaicismo, quando a radiao induzida durante a
primeira diviso mittica

Avaliao da taxa de sucesso na formao
de ginogenticos e androgenticos


- avaliao da eficcia: utilizao de espcies albinas
- aplicao dos mtodos em bivalves: menor taxa de sucesso
- influncia materna: diferente susceptibilidade radiao UV
- Hibridizao interespecfica
- Manipulao cromossmica
- induo de poliploidia
- populaes monosexuais
- Reverso sexual
Mtodos de controlo do processo
de reproduo dos peixes
Reverso sexual: formao de neomachos
X
+
X
X XX
X
+
17-alfa-metiltestosterona
XX
XX
Obteno dos neomachos triploides
Administrao da hormona de crescimento 17-alfa-
metiltestosterona por injeco ou na dieta, durante os primeiros
meses de alvinagem

Cruzamento dos neomachos com fmeas normais

Ovos submetidos a um dos tratamentos de ploidizao j
referidos

Neomachos triploides


Masculinizao de indivduos XX com tratamentos
hormonais adequados - processo lento e complicado
Vantagens das populaes s de fmeas triploides
Produo massiva de variedades favorveis
sob o ponto de vista gentico e comercial
Crescimento mais rpido por desaparecimento da
competio com os machos
Populaes sem stress sexual, logo mais estveis
Neomachos - processo mais lento e complicado
Devido ao progresso das tcnicas citogenticas, estas tornaram-se parte integrante
das experincias biotecnolgicas em aquacultura, pois:
- Contribuem largamente para estudos relacionados com hibridizao e
manipulao cromossmica
- Permitem identificao de hbridos vs espcies parentais
- Permitem detetar incompatibilidade genmica, que pode causar rearranjos
cromossmicos drsticos, que resultam na morte dos hbridos durante a
embriognese
- Ajudam a avaliar a eficcia dos processos , verificando os nveis de ploidia e os
ndices de sexo feminino vs masculino entre os progenitores manipulados
- Podem fornecer dados sobre resduos de genomas parentais irradiados em
clulas de peixes com manipulao genmica
- Disponibilidade de marcadores cromossmicos que podem melhorar a anlise
das perturbaes cromossmicas em hbridos e espcies manipuladas
Concluso sobre a importncia da citogentica
em aquacultura
Temperature affects methylation of the myogenin putative promoter, its
expression and muscle cellularity in Senegalese sole larvae
Catarina Campos,1,2,3 Lusa M.P. Valente,1 Lus E.C. Conceio,2 Sofia Engrola2
and Jorge M.O. Fernandes3,*
1CIIMAR/CIMAR, Centro Interdisciplinar de Investigao Marinha e Ambiental and
ICBASInstituto de Cincias Biomdicas de Abel Salazar; Universidade do Porto;
Porto,
Portugal; 2CC MAR/CIMAR, Centro de Cincias do Mar; Universidade do Algarve;
Campus de Gambelas; Faro, Portugal; 3Faculty of Biosciences and Aquaculture;
Produo e melhoramento de espcies
com interesse comercial
?Melhoramento citogentico vs melhoramento epigentico?