Universidad Tecnolgica del Suroeste de Guanajuato.

PRCTICA 8
Identificacin de aminocidos de una muestra problema


Procesos Alimentarios.


2 A PAL.


Qumica de Alimentos.


Profesor: Q.F.C. Jovita Puente Martnez.


Presenta: Yezlia Yasmi rayas Lpez..


12/marzo/2014.













Prctica No. 8
Identificacin de aminocidos de una muestra problema.

RESULTADO DE APRENDIZAJE.
Realizar algunas reacciones para identificar de aminocidos en una muestra.

OBJETIVO:
Seleccionar reacciones para identificar los aminocidos en una muestra.

Fundamento.
Los aminocidos son sustancias cristalinas, casi siempre de sabor dulce; tienen carcter cido como
propiedad bsica y actividad ptica; qumicamente son cidos carbnicos con, por lo menos, un grupo
amino por molcula, 20 aminocidos diferentes son los componentes esenciales de las protenas
las protenas que son los compuestos nitrogenados ms abundantes del organismo, a la vez que
fundamento mismo de la vida. en efecto, debido a la gran variedad de protenas existentes y como
consecuencia de su estructura, las protenas cumplen funciones sumamente diversas, participando en
todos los procesos biolgicos y constituyendo estructuras fundamentales en los seres vivos. de este modo,
actan acelerando reacciones qumicas que de otro modo no podran producirse en los tiempos
necesarios para la vida (enzimas), transportando sustancias (como la hemoglobina de la sangre, que
transporta oxgeno a los tejidos), cumpliendo funciones estructurales (como la queratina del pelo),
sirviendo como reserva (albmina de huevo), etc
Marco terico:
En animales superiores, las protenas son los compuestos orgnicos ms abundantes, pues representan
alrededor del 50% del peso seco de los tejidos. el punto de vista funcional, su papel es fundamental. no
existe proceso biolgico alguno que no dependa de la presencia y/o actividad de este tipo de sustancias;
las protenas cumplen diferentes funciones: enzimas, hormonas, trasportadores, los anticuerpos,
receptores de muchas clulas, etc.
todas las protenas contienen carbono, hidrgeno, oxgeno y nitrgeno y casi todas poseen tambin
azufre. si bien hay ligeras variaciones en diferentes protenas, el contenido de nitrgeno representa,
trmino medio, el 16% de la masa total de la molcula, lo cual permite calcular la cantidad de protena
existente en una muestra, por medicin del n de la misma.
debido a su gran tamao, cuando se dispersa a estas molculas en un solvente adecuado, forman
obligadamente soluciones coloidales, con caractersticas especiales que las distinguen de las soluciones
de molculas pequeas.
por medio de la hidrlisis, las molculas protenicas son escindidas en sus monmeros, los aminocidos. y
cientos o miles de estos aminocidos pueden participar en la formacin de la gran molcula polimrica de
una protena. Los aminocidos, como ya hemos comentado, son materia prima de protenas y pptidos
que cumplen diferentes funciones en nuestro organismo. no obstante, tambin pueden utilizarse como
materia prima del metabolismo energtico, de hecho, alrededor del 30% de los aminocidos, pasan a
una ruta metablica que, despus de eliminar el nitrgeno de la molcula, enva los productos
desaminados al ciclo de krebs.
Pruebas generales para aminocidos:
reaccin con la ninhidrina: los grupos amino libres de los aminocidos, de los pptidos y las protenas
reaccionan con la ninhidrina a un ph entre 4 y 8, para dar un compuesto de intensocolor azul prpura. la
prueba tambin es positiva con aminas primarias y amonaco pero sin desprendimiento de co2. los
aminocidos prolina e hidroxiprolina dan un color amarillo en lugar del color prpura con la ninhidrina. la
reaccin es muy sensible y es ideal para la deteccin de aminocidos en cromatogramas y para su
cuantificacin mediante tcnicas espectrofotomtricas de las fracciones que se obtienen de columnas
cromatogrficas.
reaccin xantoproteica los aa, que contienen un ncleo aromtico forman nitroderivados de color
amarillo cuando se calientan con cido ntrico concentrado. las sales de estos derivados son de color
naranja intenso en medio alcalino. la fenilalanina, la tirosina y en cierto grado el triptfano, as como todas
las protenas que los contienen, dan positiva la prueba.
reaccin del cido glioxlico para triptfano el grupo indlico del triptfano reacciona con cido
glioxlico en presencia de cido sulfrico concentrado dando un complejo de color prpura. el cido
actico glacial que ha sido expuesto a la luz contiene cido glioxlico.
reaccin para el triptfano este aminocido se condensa fcilmente con varios aldehdos en presencia
de cidos fuertes para dar compuestos coloreados. en la reaccin se utiliza el reactivo de ehrlich (p-
dimetilaminobenzaldehdo al 10% en hcl conc.) que reacciona con un buen nmero de compuestos
orgnicos tales como indoles, aminas aromticas y compuestos ureicos para dar complejos coloreados.
reacciones para cistena y cistina cuando los aa y las protenas que contienen grupos tilicos se
calientan en medio fuertemente alcalino, el azufre presente reacciona para formar sulfuros. este sulfuro
puede detectarse por la formacin de un precipitado negro de sulfuro de plomo por adicin de acetato de
plomo. los grupos tioles tambin reaccionan con el nitroprusiato de sodio en presencia de un exceso de
amonaco para dar un complejo de color rojo.
prueba para arginina el aa. arginina contiene un grupo guanidino en la cadena lateral, este grupo
reacciona con el reactivo de sakaguchi (a-naftol/agua de bromo) en medio alcalino para dar un compuesto
de color rojo.
prueba de biureth los compuestos que tienen dos grupos carbamidos (-conh-), ya sea unidos
directamente o a travs de un tomo de carbono o nitrgeno, dan un color violeta con el sulfato de cobre
alcalino (reactivo de biureth). los tripptidos son las molculas ms pequeas capaces de dar una prueba
de biureth positiva, mientras que esto no ocurre con los aminocidos. la prueba de biureth es una buena
prueba general para las protenas y la intensidad del color violeta es una medida del nmero de enlaces
peptdicos. algunas sustancias como la oxamida pueden dar falsos resultados positivos en ensayos
cualitativos de protenas.
desnaturalizacin por calor y ph extremos la desnaturalizacin es cualquier proceso por el cual el
arreglo espacial de una protena cambia de la estructura ordenada de la molcula nativa a una forma
tridimensional desordenada. durante la desnaturalizacin se pierden las estructuras de orden superior de
las protenas, con prdida de la actividad biolgica. las enzimas por ejemplo, que realizan trabajos
catalticos en las clulas, tienen una temperatura y un ph ptimo en el cual presentan un mximo de
actividad, pero la actividad disminuye significativamente hacia valores extremos de ph y a bajas o elevadas
temperaturas
precipitacin con cationes y aniones pesados y sales concentradas los cationes de metales pesados
y los aniones de elevado peso molecular son muy usados en la separacin de protenas y en la
preparacin de filtrados libres de protenas. a ph neutro por lo general las protenas tienen carga neta
negativa y se combinan fcilmente con iones de metales pesados que, al neutralizar la carga producen la
precipitacin. a ph por debajo del punto isoelctrico en cambio, se combinan con aniones porque
presentan carga neta positiva. soluciones concentradas de sales, de sulfato de amonio, por ejemplo,
reducen en gran medida la solubilidad de las protenas, porque compiten por las molculas de agua de
disponibles para la solvatacin y las interacciones protena-protena se hacen ms importantes.

REACTIVOS:
cidos sulfrico, ntrico y actico concentrados (50 ml de c/u).
NaOH al 40% y al 5 % (100 ml de c/u).
NH
4
OH al 10 % (100 ml).
Disolucin de Ninhidrina: Disuelva 100 mg de Ninhidrina en 10 ml de etanol al 95% y diluya con
agua destilada a 100 ml. Consrvese en frasco mbar y en refrigeracin.
Reactivo de Millon: Disuelva 1 g de mercurio en 1 g de cido ntrico concentrado, calentando
suavemente; deje enfriar y agregue agua destilada, agitando, hasta complementar 60 ml.
Reactivo de Sakaguchi: Disuelva 2 g de Bromo (manjese con gran cuidado) en 100 ml de NaOH
al 5 %.
Acetato de plomo 2 M Preparar 100 ml
Nitrito de sodio al 0.5 % - Preparar 100 ml.
cido sulfanlico al 0.5 % en HCl al 2 %. Preparar 100 ml.
Soluciones de aminocidos de prueba: 0.01 M. El instructor las suministrar en pequeos
volmenes.
Alfa-naftol al 0.15%. Preparar 100 ml.

MATERIAL Y EQUIPO

Vasos de precipitados
Agitador
Agua destilada
Balanza analtica
Matraces Erlen Meye de 100 y 250 ml.
Papel de cromatografa.
Dos huevos
2 buretas de 100ml graduadas.
Tubos de ensaye.
Parrilla elctrica.


METODOLOGA
Simultneamente se realizarn las pruebas con clara de huevo (diluda o no, segn se indique) y con la
disolucin acuosa problema que se le suministrar a cada alumno. El problema es una mezcla de
aminocidos y el alumno deber informar qu tipo de aminocidos contiene.


1. Reaccin con ninhidrina.
En un tubo de ensayo, ponga 1 ml de clara de huevo diluida; en otro tubo igual, ponga 1 ml de disolucin
de su problema. A cada tubo agregue 0.5 ml de reactivo con ninhidrina y caliente suavemente hasta que
se observe un cambio de color. La produccin de color azul o rojizo-violeta. Recuerde que hay tonos de
color particulares para ciertos aminocidos.

2. Reaccin Millon
A 1 ml de clara de huevo sin diluir y a 1 ml de problema, agrgueles separadamente, 1 ml de reactivo de
Milln. Caliente hasta observar un color diferente. Si el problema da el mismo resultado que la clara de
huevo, el aminocido que tiene en su problema es fenlico.

3. Reaccin Xantoprotica
A 1 ml de clara de huevo diluida, agregue lentamente y agitando, 1 ml de HNO
3
concentrado. Caliente
hasta que hierva suavemente y anote el color. Deje enfriar y aada gota a gota, solucin de NaOH al 40 %
hasta alcalinizar. Anote el cambio de color. Si su problema da igual color que la clara de huevo, contiene
tirosina o bien una protena que contiene este aminocido.

4. Reaccin con acetato de plomo, en medio alcalino
A 2 ml de clara de huevo, SIN DILUIR, agregue 5 gotas de NaOH al 40 % y haga hervir durante 2 minutos,
agitando. Agregue 5 gotas de disolucin de acetato de plomo. Anote el color del precipitado que se forma.
Repita el procedimiento con su problema y si obtiene el mismo color, tiene algn aminocido que contiene
azufre.

5. Reaccin de Sakaguchi
A 5 ml de clara de huevo diluida y a 5 ml de problema, en tubos distintos, agrgueles 1 ml de NaOH al 40
%. Deje reposar durante 15 minutos a 2-4 (en refrigerador). Agregue 5 ml de alfa-naftol al 0.5% y unas
gotas de solucin de reactivo de Sakaguchi. Anote el color producido. Si su problema da reaccin positiva,
contiene arginina u otro aminocido guanidnico.

6. Reaccin con cido glioxlico (Hopkins-Cole o Adamkiewicz).
A 1 ml de clara de huevo diluida, agregue 2 ml de cido actico concentrado (el cul contiene como
impureza, cido glioxlico) y mezcle bien. Incline el tubo y vierta cuidadosamente, deslizando por las
paredes y sin agitar, 1 ml de H
2
SO
4
concentrado.
Se forma un anillo de color, a nivel de la superficie de separacin de los dos lquidos.
Si su problema da positiva esta reaccin, contiene triptofano.

7. Reaccin de Ehrlich
Mezcle 1 ml de solucin de cido sulfanlico, con 1 ml de nitrito de sodio al 0.5% y deje reposar esta
mezcla durante 15 minutos. Adale 1 ml de problema y alcalinice con unas gotas de hidrxido de amonio
al 10%. Anote el color que se produce. La reaccin positiva indica la presencia de histidina o de tirosina (o
de ambas).

RESULTADOS Y ANLISIS DE RESULTADOS:

Interpretacin: Posibles aminocidos que contienen el problema:

REACCION Color obtenido con el problema
Ninhidrina Prueba positiva violeta
Xantoprotica Prueba positiva color estable
Acetato de Pb Prueba positiva rojo ladrillo
Sakaguchi Prueba positiva
Hopkins-Cole Prueba positiva. Un cambio tenue.


Los aminocidos se pueden clasificar segn diversos criterios. Con fines analticos, y
limitndonos a los grupos representativos que se tratan en esta prctica, distinguiremos:
Aminocido que contienen azufre: Cistina, Cistena, Metionina.
Aminocido con un grupo guanidnico: Arginina y creatina
Aminocidos derivados del indol: Triptfano.
Debe verificarse la identificacin haciendo uso de la cromatografa de aminocidos es la ninhidrina,
que da color con todos los aminocidos y el color sirve de indicador sobre el aminocido presente
(as la prolina e hidroxiprolina dan color amarillo, la asparagina da color caf y los dems dan tonos
azul violeta).
Ehrilch, da positivo en histidina y tirosina.
El grupo alfa-amino de los aminocidos forma complejos coloreados con la ninhidrina:
violeta azuloso en la mayora de los aminocidos cuyo grupo amino es primario, amarillo
para la prolina e hidroxiprolina y caf para la asparagina que tiene un grupo amido en la cadena
lateral. Esta reaccin tambin identifica los grupos alfa-amino libres presentes en pptidos y
protenas.
Reaccin de Milln
El anillo fenlico tiene un comportamiento caracterstico frente a las sales de Mercurio a pH cido,
formando complejos color rojo ladrillo con el anillo fenlico de la tirosina y las protenas que la
contienen.
Reaccin Xantoprotica. Los anillos aromticos presentes en algunos aminocidos reaccionan con
cido ntrico concentrado formando nitroderivados de color amarillo o anaranjado por lo cual esta
reaccin permite reconocer la presencia de Tirosina, Fenilalanina y Triptfano.
Reaccin de Sakaguchi El grupo guanidinio presente en la cadena lateral de la Arginina reacciona
con soluciones de alfanaftol en presencia de Bromo en medio

Anlisis de resultados.

Todas la pruebas fueron positivas ya que este alimento es rico en contenido de aminocidos, la anhidrina
reacciona con todos los aminocidos alfa cuyo pH se encuentra entre 4 y 8, dando una coloracin que
vara de azul a violeta intenso, en este caso el aminocido que se detecto en el huevo fue amina.

En cuanto ara la reaccin xantoproteica da resultado positivo en aquellas protenas
con aminocidos portadores de grupos aromticos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez
realizada la prueba se neutraliza con un lcali, se torna color amarillo oscuro. se puede considerar como
una sustitucin electroflica aromtica de los residuos de tirosina de las protenas por el cido ntrico dando
un compuesto coloreado amarillo a pH cido

Para la reaccin de acetato de plomo se puede decir que las protenas son compuestas de carbono,
oxigeno hidrogeno y nitrgeno. La mayora de ellas contienen adems azufre, y algunos fsforos. Y las
molculas proteicas estn compuestas de aminocidos. Y entre los aminocidos que se logran detectar en
esta reaccin es la cistina ya que contiene tomos de azufre.

La reaccin de Sakaguchi es la prueba capaz de detectar aminocidos que contienen grupos guanidinos
en este caso el aminocido es la arginina, en esta reaccin esta reacciona con naftol y un agente oxidante
tal como el agua de bromo o hipoclorito en un medio alcalino, dando un color rojo.

En la reaccin de Hopkins-Cole est a reacci n es caract erst i ca del ani l l o i ndol y por lo tanto del
triptfano, por ser ste el nico aminocido que contiene este grupo. El react i vo cont i ene ci do
gl i oxl i co que se prepara por reducci n del ci do oxl i co con magnesio en polvo o amalgama
de sodio. Numerosos aldehdos pueden dar una reaccin similar con triptfano. La naturaleza del
compuesto colorido formado no se conoce totalmente. Los cloratos, nitritos y cloruros interfieren en la
reaccin

CONCLUSIONES
Logre realizar la prctica satisfactoriamente y determinar diferentes sustancias en una muestra
problema con los mtodos correspondientes. Logre realizar un trabajo con mas orden y sin
supervisin de un maestro por lo cual creo que fue una practica que logre realizar correctamente a
pesar de ello, para terminar la practica en un tiempo menor aprendi a tener una mayor
organizacin.
En cuanto a las reacciones en esta ocasin logre visualizar el anillo que se formo en la muestra con
la solucin de Hopkins-cole aunque era muy tenue, reforc los conocimientos que tenia de las
practicas pasadas, y considero que aprend nuevos puntos de importancia con mi anlisis de
resultados.



CUESTIONARIO
1. Escriba la reaccin completa que ocurre entre el alfa-aminocido y la Ninhidrina.
La reaccion ocurre en dos fases. Durante la primera reaccin, se consumen dos equivalentes de
Ninhidrina por cada aminocido. En la primera fase de la reaccin el aminocido se oxida,
descarboxilndose y liberando amoniaco, mientras que uno de los equivalentes de Ninhidrina se reduce a
Hidrindantina.
En la segunda fase la Hidrindantina formada y otro equivalente de Ninhidrina, reaccionan con el amoniaco,
todos los aminoacidos forman un complejo de color prpura (Prpura de Ruhemann), excepto la Prolina
que produce un compuesto color amarillo.



2. Cmo puede prepararse el cido glioxlico (reactivo de Hopkins-Cole) a partir de cido oxlico?
Escriba la reaccin.
Se prepara aadiendo 10 g de magnesio en polvo en 20 ml de agua destilada. Agregar lentamente 250 ml
de una solucin fra y saturada de cido oxlico. La reaccin se produce con gran rapidez, desprendiendo
tanto calor que se debe enfriar el matraz en la corriente de agua mientras se aade el cido. Cuando se ha
terminado de aadir el cido. Agitar el contenido y verterlo sobre un papel filtro para separar el oxalato de
magnesio insoluble. Se vierte un poco de agua sobre el filtro, se acidifica de magnesio al quedar largo
tiempo en reposo, y se lleva a un litro de agua destilada en un matraz aforado. Esta solucin contiene
nicamente la sal magnsica de cido glioxlico.

3. Escriba las frmulas de los aminocidos identificados en el problema.




4. Cuando la mezcla de aminocido es muy compleja se emplea el mtodo de cromatografa en dos
dimensiones. Explique en qu consiste dicho mtodo.
La teora de la cromatografa de reparto se basa en que, en general, si dos fases inmiscibles se
encuentran en contacto una con otra y si una de las dos fases contiene un soluto, ste se distribuir entre
ambas de acuerdo con sus solubilidades relativas. Dicho fenmeno se denomina reparto y viene
determinado por el coeficiente de reparto, que es la relacin entre las concentraciones del soluto, en el
equilibrio, en las dos fases. En la cromatografa de reparto tenemos un soporte inerte al que est unida la
fase estacionaria lquida. La mezcla a separar junto con la fase mvil se hace avanzar a lo largo
de la fase estacionaria por capilaridad. En dicho avance, la fase mvil arrastrar consigo un porcentaje de
molculas de cada componente a separar de acuerdo con los respectivos coeficientes de reparto. La
distancia recorrida por cada uno de los componentes de la muestra depender de la cantidad de solvente
o eluyente que se haga pasar y de los coeficientes de reparto, de manera que si stos son diferentes
aqulla tambin lo ser, siendo posible la separacin si se utiliza el volumen de eluyente apropiado. En su
desplazamiento, las molculas de soluto se distribuirn no puntualmente, si no formando un rea debido a
que son parcialmente solubles en las dos fases y a otros fenmenos tales como la difusin.

5. Cmo se efecta la reaccin llamada de Sullivan, para identificar la cistina?
La reaccin consiste en aadirle a 0.5 ml de la solucin problema patrn al 1% y blanco de agua
destilada en un tubo de ensaye; 0.5 ml de cianuro sdico al 5%, asi como con 0.5 ml de 1,2-naftoquinon-4-
sulfonato sdico al 0.5% recin preparado y realizar una mezcla con 2.5 ml de sulfito sdico al 10% en
hidrxido sdico al 2% y aadirlos al tubo con la muestra problema para poder adicionar al final 0.5 ml de
tiosulfato sdico al 2%

En el resultado aparece una coloracin roja, la reaccin es positiva e indicativa de la presencia de
cistena o cistina y si no es as, la prueba no es positiva.


Bibliografa.

http://es.scribd.com/doc/15958125/1-PROPIEDADES-QUIMICAS-Y-FISICOQUIMICAS-DE-LAS-
PROTEINAS
http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/11%20CROMATOGRAF%C3%8DA%20DE%20CAPA%20FINA%20DE%20AAs.pdf
http://www.buenastareas.com/ensayos/Reacciones-De-Color-Para-Identificaci%C3%B3n-De/6025662.html

histidina
tirocina
Arginina.