PAS DIAGNOSTICA

CRA 49C No. 76 224 BARRANQUILLA-COLOMBIA Tel: (57-5) 3018686 Fax: (57-5) 3580170
www.pasdiagnostica.com


SIGNIFICADO CLINICO:
1-3
La cuantificacin de cido rico es comnmente usada en el diagnstico de gota.
Niveles altos (hiperuricemia) se pueden presentar en leucemia, policitemia,
arteriosclerosis, diabetes, hipotiroidismo y condiciones asociadas con una reduccin en la
funcin renal; Niveles bajos estn presentes en pacientes con la enfermedad Wilsons.

MTODO:
El cido rico ha sido histricamente determinado por mtodos colorimtricos con
variaciones de fosfotungstato
4,5
y reduccin de hierro
6,7
. Metodologas recientes usan
las enzimas uricasa y peroxidasa, y un cromgeno para producir un producto final
colorimtrico, demostrando mayor especificidad para la determinacin de cido rico
8,9
.
El procedimiento de PAS DIAGNOSTICA usa uricasa, peroxidasa y el cromgeno TBHB
para producir un producto final colorimtrico. El producto final colorimtrico producido en
esta reaccin puede ser medido a 520 nm y es proporcional a la concentracin de cido
rico en la muestra.

PRINCIPIO:
Uricasa
Acido Urico + O2 + H2O Alantona + CO2 + H2O2

Peroxidasa
H2O2 + 4-AAP + TBHB Quinoneimina + H2O

El cido rico es oxidado a alantona por la accin de la uricasa con la produccin de
H2O2. El peroxido reacciona con la 4-aminoantipirina (4-AAP) y THBH en la presencia de
peroxidasa para formar un colorante de quinoneimina. El producto resultante en la
absorbancia a 520nm (500-550nm) es proporcional a la concentracion de acido urico en
la muestra.

CONTENIDO Y COMPOSICIN:
Reactivo: 4-Aminoantipirina 0.5 mM, TBHB 1.75mM, Uricasa >32 U/L, Peroxidasa
(rbano) >1300U/L, Estabilizadores y aditivos no reactivos, pH (7.8 8.2).

Estndar: Acido rico 5mg/dL.

Evite ingerir el reactivo, la toxicidad no ha sido determinada. Contiene cida de sodio
(0.05%) como preservativo y puede reaccionar con la tubera de plomo o cobre. Enjuague
las tuberas de drenaje con abundante agua.

PREPARACIN DEL REACTIVO:
El monoreactivo y el estndar estn listos para su uso.

ESTABILIDAD Y ALMACENAMIENTO:
Conservado de 2-8C el reactivo es estable hasta la fecha indicada en la etiqueta.

DETERIORO DEL REACTIVO:
No utilice este reactivo si:
1. El reactivo reconstituido tiene una absorbancia del blanco mayor de 0.5 a 500 nm.
2. El reactivo esta turbio.
3. El reactivo no cumple con los controles establecidos.

RECOLECCIN Y CONSERVACIN DE LA MUESTRA:
Suero libre de hemolisis, el cido rico en suero es estable por 3 das a 2-8C y hasta 6
meses a -20C.
2


INTERFERENCIA:
Los siguientes resultados fueron obtenidos en estudios para determinar el nivel de
interferencia de hemoglobina, bilirrubina, y lipemias.
Hemoglobina:
No interferencia (10%) hasta 200 mg/L.
Bilirrubina:
No interferencia (10%) hasta 20.9 mg/dL.
Lipemias:
No interferencia (10%) hasta 1020 mg/dL.
Un nmero de drogas y substancias afectan la determinacin de Acido rico.
10


EQUIPO ADICIONAL REQUERIDO:
1. Analizador de qumica clnica con longitud de onda de 500 nm y temperatura de 37C y
sus consumibles.
2. Material control (suministrados por PAS DIAGNOSTICA).

PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO:
Procedimiento para uso manual.
1) Atemperar el reactivo a temperatura ambiente.
2) Dispensar 1000 L del reactivo en cada tubo (Estndar, Controles y muestra) e
incubar a 37C.
3) Agregar 20 L de Estndar, muestra problema y/o suero control al tubo
correspondiente. Mezclar, e incubar a 37C durante 10 minutos
4) Ajustar a cero el espectrofotmetro con blanco de reactivo a 500 nm.
5) Leer la absorbancia exactamente a los 10 minutos despus de la adicin del
estndar, controles y muestras.

Procedimiento automatizado:
Para este procedimiento siga las instrucciones contenidas en el manual de operacin del
analizador y las aplicaciones de los reactivos PAS DIAGNOSTICA

para los analizadores

ms comunes.



PARMETROS:
Temperatura 37C
Longitud de onda 500 nm
Tipo de Ensayo Punto final
Direccin Creciente
Relacin: Muestra/Reactivo 1:50
Volumen de Muestra 0.003mL (3 L)
Volumen de Reactivo 0.150 (150 L)
Tiempo de incubacin 5 minutos

CALCULOS:
Abs: Absorbancia
Abs
muestra
x Concentracion del estndar (mg/dL) = C cido rico en mg/dL
Abs
estndar

Ejemplo de clculos:
Abs. Muestra = 0.071
Abs. Estndar = 0.302
Concentracin del Estndar = 5.0

0.071 x 5.0 = 1.18 mg/dL cido rico
0.302

CALIBRACION:
Esta prueba debe ser calibrada utilizando el Calibrador de Qumica de PAS
DIAGNOSTICA (P/N: CAL1-5) o un estndar apropiado.

CONTROL DE CALIDAD:
La integridad de la reaccin debe ser evaluada usando un control de dos niveles con
valores conocidos como el PAS DIAGNOSTICA Control de Qumica (P/N: CON1-5 y
CON2-5).

LIMITACIONES:
Valores superiores a 25 mg/dL debe ser diluida la muestra 1:1 con solucin salina y
evaluada nuevamente, multiplicando el resultado final por 2.

VALORES DE REFERENCIA:
11
Nios: 2.0- 5.5 mg/dL
Adulto Masculino: 3.5 7.2 mg/dL
Adulto femenino: 2.6 6.0 mg/dL
Se recomienda que cada laboratorio establezca su rango de normalidad
7
.

DESEMPEO:
Linealidad:
Es linear de 0.2 a 25 mg/dL, cuando se evala de acuerdo a las recomendaciones del
ensayo.

Comparacin del Mtodo:
Los siguientes resultados fueron obtenidos mediante estudios realizados entre ste
procedimiento y uno similar:
Concepto
Cromgeno
TBHB DCHBS
Nmero de pares de muestras 58 50
Rango de muestras 1.70 20.70 (mg/dL) 2.20 11.30 (mg/dL)
Coeficiente de Correlacin 0.9792 0.9977
Pendiente 1.044 1.117
Intercepto 0.00 (mg/dL) -0.58 (mg/dL)

Precisin:
Entre Corridas Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3
Promedio (mg/dL) 6.60 11.31 20.12
S.D. (mg/dL) 0.15 0.24 0.30
C.V. (%) 2.2 2.1 1.5
Entre Series: Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3
S.D. (mg/dL) 0.27 0.47 0.51
C.V. (%) 4.1 4.1 2.5
Sensibilidad:
Un factor de calibracin aproximado a 58.66 fue obtenido, lo cual es equivalente a una
sensibilidad de 0.01704 Abs por mg/dL.

NOTAS:
Este ensayo requiere el uso de un Suero Estndar o Estndar apropiado.
Los volmenes de muestra y reactivo pueden ser modificados proporcionalmente
para adaptarlos a los requisitos de varios instrumentos.
Estudio realizado en Synchron CX.

REFERENCIAS:
1. Searcy RL: Diagnostic Biochemistry. McGraw-Hill, New York, NY, (1969).
2. Henry RJ, Common C, Winkelman JW (eds), Clinical Chemistry: Principles
and Techniques. Harper & Row, Hagerstown, MD, (1974).
3. Balls ME: Adv Clin Chem 18:213, (1976).
4. Folin, D., Dennis, W., J. Biol. Chem. 13:469 (1913).
5. Caraway, W.T., Clin. Chem. 4:239 (1963).
6. Morin, L.G., J. Clin. Path. 60:691 (1973).
7. Morin, L.G., Clin. Chem. 20:51 (1974).
8. Klackar, H.M., J. Biol. Chem. 167:429 (1947).
9. Praetorius, E., Pouldon, H., Scand. J. Clin. Invest 5:273 (1953).
10. Young, D.S., et al. Clin. Chem. 21:1D (1975).
11. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, WB Saunders Co., Philadelphia PA, 2
nd
Ed (1994).

PI: URI2P.JS02 REV: 04/14/09

A AC CI ID DO O U UR RI IC CO O
Mtodo Enzimtico
Punto Final

Solo para uso diagnostico In vitro




PAS DIAGNOSTICA
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CLINICAL SIGNIFICANCE
1-3

Uric Acid measurements are most commonly used in the diagnosis of gout. Increased
levels (hyperuricaemia) may be observed in leukemia, polycythaemia, atherosclerosis,
diabetes, hypothroidism, and conditions associated with decreased renal funtion.
Decreased levels are present in patients with Wilsons disease.

METHODOLOGY
Uric Acid has historically been determined by variations of colorimetric phosphotungstate
4, 5
and iron reduction
6, 7
methods. Recent methodologies use the enzymes uricase and
hydrogen peroxidase, along with a chromogen to yield a colorimetric end product. These
methods demonstrate better specificity for uric acid,
8, 9
. The PAS procedure uses uricase,
peroxidase and he chromogen TBHB to yield a colorimetric end product. The colorimetric
end product produced in this reaction can be measured at 520nm and is proportional to
the uric acid concentration in the sample.

PRINCIPLE
Uricase
Uric Acid + O2 + H2O Allantoin + CO2 + H2O2

Peroxidase
H2O2 +4-Aminoantipyrine+TBHB Quinoneimine + H2O

Uric Acid is oxidized by Uricase to allantoin and hydrogen peroxide. TBHB + 4-
aminoantipyrine + hydrogen peroxide, in the presence of peroxidase, produce a
quinoneimine dye that is measured at 520nm (500-550). The color intensity at 520nm is
proportional to the concentration of Uric Acid in the sample.

COMPOSITION AND CONTENT
Reagent: 4-Aminoantipyrine 0.5 mM, TBHB 1.75 mM, Uricase (Bacillus Sp.) >32
U/L, Peroxidase (Horseradish) >1300 U/L, Non-reactive stabilizers and fillers, pH
(7.8 8.2).

Standard: Urid Acid 5mg/dL.

Avoid eating the reagent, the toxicity has not been determined.Reagent contains Sodium
Azide (0.05%) as preservative. In a dry state may react with copper or lead plumbing to
form explosive metal azides. Upon disposal, flush with large amounts of water to prevent
azide build up.

REAGENT PREPARATION
The monoreactivo and standard are ready for use.

STABILITY AND STORAGE
Conserved 2-8 C, the reagent is stable until the date indicated on the label.

REAGENT DETERIORATION
Do not use the reagent if:
1. The reagent is turbid.
2. The reagent blank has an absorbance of 0.50 or greater at 500nm.
3. The working reagent does not meet stated performance parameters.

SPECIMEN COLLECTION AND STORAGE
Haemolysis-free serum, the serum uric acid is stable for 3 days at 2-8 C and up to 6
months at -20 C.
2

INTERFERENCE
Studies to determine the level of interference for hemoglobin, bilirubin and lipemia were
carried out, the following results were obtained:
Hemoglobin:No significant interference ( 10%) from hemoglobin up to 200 mg/dL.
Bilirubin:No significant interference ( 10%) from bilirubin up to 20.9 mg/dL.
Lipemia:No significant interference ( 10%) from lipemia up to 1020 mg/dL measured as
triglycerides.
A number of drugs and substances affect the determination of uric acid.
10

ADDITIONAL EQUIPMENT REQUIRED

1. Clinical chemistry analyzer with a wavelength of 500 nm and 37 C and its
consumables.
2. Control material (supplied by PAS DIAGNOSTICA).

ASSAY PROCEDURE
For this procedure follow the instructions in the manual operation of the analyzer and
reagents applications of PAS DIAGNOSTICA Analyzer most common.
PARAMETERS








CALCULATIONS:
Abs = Absorbance
Abs (patient) x Concentration of standard = Uric Acid
Abs (standard) (mg/dL) (mg/dL)

Example:
Abs patient = 0.071
Abs standard = 0.302
Concentration of standard = 5.0 mg/dL.

0.071 x 12.1 = 1.18 mg/dL Uric Acid
0.302

CALIBRATION
A calibrator such as PAS DIAGNOSTICA Chemistry Calibrator (P/N: CAL1-5), or an
appropriate aqueous standard should be used to calibrate this test.

QUALITY CONTROL
The integrity of the reaction should be monitored by use of a two level control with known
values such as PAS DIAGNOSTICA Chemistry Controls (P/N: CON1-5 and CON2-5).

LIMITATIONS
Values above 25 mg / dL should be diluted sample 1:1 with saline and tested again,
multiplying the result by 2.

EXPECTED VALUES
12

Child: 2.0 5.5 mg/dL
Adult Male: 3.5 - 7.2 mg/dL
Adult Female: 2.6 6.0 mg/dL
It is recommended that each laboratory establish its range of normalidad
7
.

PERFORMANCE
Linearity:
When run as recommended the assay is linear from 0.2 to 25.0 mg/dL.

Method Comparison:
Studies performed between this procedure and similar methodologies yielded the
following results:

Concept
Chromogen
TBHB DCHBS
Number of samples pairs 58 50
Range of samples 1.70 20.70 (mg/dL) 2.20 11.30 (mg/dL)
Correlation Coefficient 0.9792 0.9977
Slope 1.044 1.117
Intercept 0.00 (mg/dL) -0.58 (mg/dL)

Precision:
Within Run Level 1 Level 2 Level 3
Mean (mg/dL) 6.60 11.31 20.12
S.D. (mg/dL) 0.15 0.24 0.30
C.V. (%) 2.2 2.1 1.5

Total Level 1 Level 2 Level 3
S.D. (mg/dL) 0.27 0.47 0.51
C.V. (%) 4.1 4.1 2.5

Sensitivity:
A calibration factor of approximately 58.66 was obtained, which is equivalent to a
sensitivity of 0.01704 Abs per mg/dL.

NOTES
This test requires the use of a Standard or Standard Serum appropriate.
The volumes of sample and reagent can be modified proportionately to fit the
requirements of different instruments.
Study conducted in Synchron CX.

REFERENCES
1. Searcy RL: Diagnostic Biochemistry. McGraw-Hill, New York, NY, (1969).
2. Henry RJ, Common C, Winkelman JW (eds), Clinical Chemistry: Principles and Techniques. Harper & Row,
Hagerstown, MD, (1974).
3. Balls ME: Adv Clin Chem 18:213, (1976).
4. Folin, D., Dennis, W., J. Biol. Chem. 13:469 (1913).
5. Caraway, W.T., Clin. Chem. 4:239 (1963).
6. Morin, L.G., J. Clin. Path. 60:691 (1973).
7. Morin, L.G., Clin. Chem. 20:51 (1974).
8. Klackar, H.M., J. Biol. Chem. 167:429 (1947).
9. Praetorius, E., Pouldon, H., Scand. J. Clin. Invest 5:273 (1953).
10. Young, D.S., et al. Clin. Chem. 21:1D (1975).
11. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, WB Saunders Co., Philadelphia PA, 2
nd
Ed (1994).

PI: URI2P.JS01 REV: 04/14/09


Temperature 37C
Wavelength 500 nm
Assay type End point
Direction Increase
Sample / rgt ratio 1: 50
Sample vol 0.003mL. (3 L)
Reagent vol 0.150 mL (150 L)
Incubation time 5 min
U UR RI IC C A AC CI ID D
Enzymatic method
End Point

Only for in vitro diagnostic use