Los medios de cultivo en

microbiologa
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin
de microorganismos es observar su crecimiento en
sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los
microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento
de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado
ms de 10.000 medios de cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial
debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y
presin de oxgeno adecuadas, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad.
Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento
necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.
La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en
composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de
muchos medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a la que
se aadirn otros ingredientes.
El agar es un elemento solidificante muy empleado para la
preparacin de medios de cultivo. Se lica completamente a la
temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40
grados. Con mnimas excepciones no tiene efecto sobre el
crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que
crecen en l.
La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho
menos ya que bastantes bacterias provocan su licuacin.
En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de
enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los
hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar
el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin de los
microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se
aaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes.
Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por
ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de unas
bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH
bsico y amarillo en pH cido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que
impide el crecimiento de la mayoria de las bacterias Gram-positivas).


Condiciones generales para el cultivo de
microorganismos
El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve
afectado por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos,
son ajenos por completo al propio medio.
1- disponibilidad de nutrientes adecuados
Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener,
como mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos
casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras sustancia inductoras del
crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer
de donantes o captadores de electrones para las reacciones qumicas que tengan
lugar.
Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de
carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparacin de
estas sustancias para su aplicacin a los medios de cultivo provocaban la prdida
de los factores nutritivos lbiles.
Actualmente, la forma ms extendida de aportar estas sustancias a los medios es
utilizar peptona que, adems, representa una fuente fcilmente asequible de
nitrgeno y carbn ya que la mayora de los microorganismos, que no suelen
utilizar directamente las protenas naturales, tienen capacidad de atacar los
aminocidos y otros compuestos ms simples de nitrgeno presentes en la
peptona.
Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas especficas por lo que se aade a
muchos medios sustancias como suero, sangre, lquido asctico, etc. Igualmente
pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio,
magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento,
generalmente de naturaleza vitamnica.
Muy a menudo se aaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como
indicadores de ciertas actividades metablicas o bien por sus capacidades de
ejercer de inhibidores selectivos de ciertos microorganismos.
2- consistencia adecuada del medio
Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo
productos como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en
estado semislido o slido.
Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos
microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al
punto de fusin de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.
Actualmente los medios slidos son de uso universal, por su versatilidad y
comodidad, pero hay tambin gran cantidad de medios lquidos cuyo uso est
ampliamente extendido en el laboratorio.
3- presencia (o ausencia) de oxgeno y otros gases
Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de oxgeno
normal. Algunas pueden obtener el oxgeno directamente de variados sustratos.
Pero los microorganismos anaerobios estrictos slo se desarrollarn adecuadamente
en una atmsfera sin oxgeno ambiental. En un punto intermedio, los
microorganismos microaerfilos crecen mejor en condiciones atmosfricas
parcialmente anaerobias (tensin de oxgeno muy reducida), mientras los
anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de
las citadas condiciones.
4- condiciones adecuadas de humedad
Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es
imprescindible para un buen desarrollo de las clulas vegetativas microbianas en
los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mnimas en las
estufas de cultivo a 35-37C proporcionando una fuente adecuada de agua que
mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar as que
se deseque el medio.
5- Luz ambiental
La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en
presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de los
microorganismos fotosintticos.
6- pH
La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de los
microorganismos. La mayora de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH
neutro, aunque los hay que requieren medios ms o menos cidos. No se debe
olvidar que la presencia de cidos o bases en cantidades que no impiden el
crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos
metablicos normales.
7- Temperatura
Los microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a temperaturas entre 15 y
43C. Otros como los psicrfilos crecen a 0C y los temfilos a 80C o incluso a
temperaturas superiores (hipertemfilos). En lneas generales, los patgenos
humanos crecen en rangos de temperatura mucho ms cortos, alrededor de 37C,
y los saproftos tienen rangos ms amplios.
8- Esterilidad del medio
Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la
aparicin de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el
crecimiento microbiano normal del o de los especimenes inoculados en dichos
medios. El sistema clsico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que
utiliza vapor de agua a presin como agente esterilizante)
La evolucin de los medios de cultivo
Podemos decir que la microbiologa empieza su verdadero desarrollo como ciencia
en el momento en que se descubre el microscopio y comienza la observacin de los
primeros microorganismos, pero es indudable que la puesta a punto de los medios
de cultivo y la utilizacin del agar como solidificante, marcan dos importantes
puntos de inflexin en su evolucin.
La primera noticia de la utilizacin de medios de cultivo nos llega del miclogo
Brefeld, que consigui aislar y cultivar esporas de hongos en medios slidos
realizados a base de gelatina.
Sin embargo este sistema no era adecuado para las bacterias (por su menor
tamao) y no fue hasta el ao 1878 cuando Lister populariz un mtodo enfocado
al cultivo puro basado en diluciones seriadas en un medio lquido.
Koch realiz sus investigaciones utilizando en un primer momento rodajas de
patata como soporte nutritivo slido, pero no tard en recurrir al caldo de carne
lquido, diseado por Loeffler, al que, en 1881, aadi gelatina, logrando un medio
slido transparente ideal para la observacin de la morfologa macroscpica de las
colonias microbianas.
En el ao 1882 tiene lugar uno de los grandes avances de la microbiologa en
relacin con los medios de cultivo: el mdico alemn Walter Hesse introduce el
agar-agar (polisacrido extrado de algas rojas) como solidificante.
En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri, comienza a utilizar placas de cristal
planas, que se llaman desde entonces placas de Petri, para sustituir a las clsicas
bandejas de vidrio cubiertas con campanas que se usaban hasta entonces.
Beijerinck y Winogradsky, que desde de 1888 realizaron sus investigaciones sobre
las bacterias quimioauttrofas (utilizacin de nitrgeno y azufre sobre todo)
tuvieron gran importancia en el desarrollo de los medios selectivos y de
enriquecimiento. Disearon este tipo de medios de tal forma que su especial
composicin qumica favoreca el crecimiento de ciertos tipos de microorganismos
que, en funcin de sus procesos metablicos, eran los nicos capaces de utilizar
para su desarrollo ciertos nutrientes del medio.
En 1892 Wrtz impuls el uso de los medios diferenciales, incorporando indicadores
de pH a la composicin de ciertos medios con lo cual se poda observar la
produccin de cidos en la fermentacin en ciertos microorganismos.
Tipos bsicos de medios de cultivo
atendiendo a su estado fsico:
lquidos
semislidos
slidos
atendiendo a su utilidad prctica:
Medios para aislamientos primarios:
Para usos generales: no selectivos, para cultivo de una amplia
variedad de organismos difciles de hacer crecer. A menudo estn
enriquecidos con materiales como: sangre, suero, Hemoglobina, FX,
FV, glutamina, u otros factores accesorios para el crecimiento de las
bacterias (Agar Sangre, Schaeadler, etc)
selectivos: (pueden ser de moderada o de alta selectividad) se
aaden sustancias que inhiban el crecimiento de ciertos grupos de
bacterias, permitiendo a la vez el crecimiento de otras. Variando las
sustancia aadidas, se vara el tipo y grado de selectividad (Mac
Conkey, Kanamicina-Vancomicina)
enriquecidos: ralentizan/suprimen el crecimiento de la flora
competitiva normal potenciando el cultivo y crecimiento deseado
(Selenito, medio con Vitamina K).
Para aislamientos especializados: formulaciones nutritivas
especiales que satisfacen requerimientos de grupos especficos de
bacterias, ayudando a su identificacin (Lowenstein).
Medios para identificacin:
diferenciales: formulaciones especiales en las que se estudian las
peculiaridades fisiolgicas (nutricin y respiracin sobre todo)
especficas de las bacterias. Seleccionando los medios adecuados se
puede llegar a la identificacin de casi cualquier bacteria (Oxidacin-
Fermentacin)
El agar-agar
es un hidrocoloide extrado de algas marinas que es ampliamente utilizado en la industria
alimentaria. Entre sus propiedades principales se destacan su alto poder gelificante, elevada
fuerza de gel a bajas concentraciones, baja viscosidad en solucin, alta transparencia, gel
termorreversible y temperaturas de fusin/gelificacin bien definidas. El agar-agar tambin
es utilizado en menor escala en diversas aplicaciones de otros sectores industriales.

MATERIA PRIMA

El agar-agar es obtenido de diversos gneros y especies de algas marinas rojas de la
clase Rodophyta. Tales algas son denominadas agarofitas y las principales especies de valor
comercial son la Gracilaria, la Gelidium y la Pterocladia. El contenido de agar-agar en ellas
vara de acuerdo con las condiciones del mar: concentracin de dixido de carbono, presin
de oxgeno, temperatura del agua e intensidad de la radiacin solar.
Las algas son, en general, recolectadas manualmente por pescadores en zonas de baja
profundidad y marea baja o, tambin, por sumersin mediante el uso de equipos adecuados.
Despus de la recoleccin, las algas son colocadas al sol para su secado hasta que lleguen a
un nivel de humedad ideal para su procesamiento.

12.- FACTORES FSICOS Y QUMICOS QUE INFLUYEN EN EL
CRECIMIENTO.
1.- Temperatura: Cada microorganismo tiene una temperatura de crecimiento
adecuada. Si estudiamos la variacin de la velocidad de crecimiento en
funcin de la temperatura de cultivo, podemos observar una temperatura
mnima por debajo de la que
no hay crecimiento; a temperaturas mayores se produce un incremento lineal
de la velocidad de crecimiento con la temperatura de cultivo hasta que se
alcanza la temperatura
ptima a la que la velocidad es mxima. Por encima de esta temperatura
ptima, la velocidad de crecimiento decae bruscamente y se produce la muerte
celular.
El incremento de la velocidad de crecimiento con la temperatura se debe al
incremento generalizado de la velocidad de las reacciones enzimticas con la
temperatura. Se
denomina coeficiente de temperatura a la relacin entre el incremento de la
velocidad
de reaccin y el de temperatura. En trminos generales, la velocidad de las
reacciones
bioqumicas suele aumentar entre 1.5 y 2.5 veces al aumentar 10C la
temperatura a la
que tienen lugar.
La falta de crecimiento a temperaturas muy bajas se debe a la reduccin de la
velocidad de crecimiento por la reduccin de la velocidad de reaccin y al
cambio de estado
de los lpidos de la membrana celular que pasan de ser fluidos a cristalinos
impidiendo
el funcionamiento de la membrana celular.
La muerte a altas temperaturas se debe a la desnaturalizacin de las protenas
y a las
alteraciones producidas en las membranas lipdicas a esas temperaturas.
Es importante tener en cuenta que a temperaturas bajas, el metabolismo
celular se
enlentece y las clulas paran de crecer; aunque no tienen porqu morir. Sin
embargo,
cuando la temperatura es superior a la ptima, se produce la muerte celular
rpidamente
y las clulas no pueden recuperar su capacidad de divisin si baja
posteriormente la
temperatura. Esto permite esterilizar por calor y no por fro.
Hay varios tipos de microorganismos en funcin de sus temperaturas de
crecimiento mnima, mxima y ptima.
Los microorganismos psicrtrofos son mesfilos que pueden crecer a
temperaturas
bajas. Por tanto, se les puede considerar como psicrfilos facultativos. Esto es
importante desde el punto de vista aplicado porque cuando se encuentran
contaminando alimentos, son capaces de crecer en condiciones de
refrigeracin (4 - 8C) y de producir
infecciones en los consumidores del alimento (30 - 35 C).
Los microorganismos capaces de producir infecciones son los mesfilos y
algunos
psicrtrofos ya que sus temperaturas ptimas de crecimiento coinciden con las
corporales. sin embargo, tanto mesfilos como psicrfilos, psicrtrofos y
termfilos pueden
producir toxinas causantes de intoxicaciones alimentarias.
2.- Actividad de agua: Se denomina actividad de agua a la relacin entre la
presin
de vapor de agua del substrato de cultivo (P) y la presin de vapor de agua del
agua pura
(P0). El valor de la actividad de agua est relacionado con el de la humedad
relativa
(HR).
El valor de la actividad de agua nos da una idea de la cantidad de agua
disponible
metablicamente. Por ejemplo: comparemos el agua pura donde todas las
molculas de
agua estn libremente disponibles para reacciones qumicas con el agua
presente en una
disolucin saturada de sal comn (NaCl) donde una parte importante de las
molculas
de agua participa en la solvatacin de los iones de la sal disuelta. En este
ltimo caso, la
actividad de agua es mucho menor que en el primero. Conforme aumenta la
cantidad de
solutos en el medio, disminuye su actividad de agua.
Cuando un microorganismo se encuentra en un substrato con una actividad de
agua
demasiado baja, su crecimiento se detiene. Esta detencin del crecimiento no
suele llevar asociada la muerte del microorganismo, sino que ste se mantiene
en condiciones de
resistencia durante un tiempo ms o menos largo. En el caso de las esporas, la
fase de
resistencia puede ser considerada prcticamente ilimitada.
La gran mayora de los microorganismos requiere unos valores de actividad
de agua
muy altos para poder crecer. De hecho, los valores mnimos de actividad para
diferentes
tipos de microorganismos son, a ttulo orientativo, los siguientes: bacterias aw
>0.90,
levaduras aw>0.85, hongos filamentosos aw >0.80. Como puede verse, los
hongos filamentosos son capaces de crecer en substratos con una actividad de
agua mucho menor
(mucho ms secos) de la que permite el crecimiento de bacterias o de
levaduras. Por
esta razn se puede producir deterioro de alimentos de baja actividad de agua
(por
ejemplo, el queso o almbares) por mohos (hongos filamentosos) y no por
bacterias.
En funcin de su tolerancia a ambientes con baja a
w, los microorganismos que pueden crecer en estas condiciones se clasifican
en halotolerantes, halfilos y xerfilos
segn toleren o requieran condiciones salinas o hipersalinas, respectivamente.
La reduccin de la actividad de agua para limitar el crecimiento bacteriano
tiene importancia aplicada en industria alimentaria. La utilizacin de
almbares, salmueras y
salazones reduce la actividad de agua del alimento para evitar su deterioro
bacteriano.
3.- pH: Es un parmetro crtico en el crecimiento de microorganismos ya que
cada
tipo de microorganismo slo puede crecer en un rango estrecho de pH fuera
del cual
mueren rpidamente.
El pH intracelular es ligeramente superior al del medio que rodea las clulas
ya que,
en muchos casos, la obtencin de energa metablica depende de la existencia
de una
diferencia en la concentracin de protones a ambos lados de la membrana
citoplsmica.
El pH interno en la mayora de los microorganismo est en el rango de 6.0 a
7.0.
Los rangos de pH tolerables por diferentes tipos de microorganismos son,
tambin,
distintos. Hay microorganismos acidfilos que pueden vivir a pH=1.0 y otros
alcal-
filos que toleran pH=10.0
Hay que considerar que, como consecuencia del metabolismo, el pH del
medio de
crecimiento suele tender a bajar durante el cultivo. Por otra parte, la bajada del
pH del
medio que producen ciertos microorganismos les confiere una ventaja
selectiva frente a
otros microorganismos competidores. As, por ejemplo, las bacterias lcticas
que producen grandes cantidades de cido lctico como consecuencia de su
metabolismo primario
reducen el pH del medio de cultivo a valores inferiores a los soportables por
otras bacterias competidoras (llegan a bajar el pH del medio hasta 4.5). De
esta forma, las bacterias
competidoras mueren y las lcticas se convierten en la poblacin dominante.
La bajada del pH se puede deber a varios factores, uno de los cuales es la
liberacin
de cidos orgnicos de cadena corta (frmico, actico, lctico) por ciertas
bacterias. En
este sentido, hay que tener en cuenta que la accin bactericida de estos cidos
orgnicos
de cadena corta es ms potente que la debida nicamente a la bajada del pH
que producen. Esto es, los cidos orgnicos de cadena corta son txicos para
algunas bacterias por
s mismos.
El efecto letal del pH cido sobre los microorganismos tiene aplicacin en la
conservacin de alimentos acidificndolos. De esta forma, la adicin de cido
actico en forma
de vinagre permite la conservacin de alimentos perecederos (escabeches, por
ejemplo)
y la produccin de cidos en el curso de fermentaciones naturales permite
alargar la
vida de los alimentos (coles fermentadas, por ejemplo).
4.- Potencial redox: nos indica la capacidad del substrato para aceptar o donar
electrones, esto es: sus caractersticas oxidantes o reductoras. Uno de los
factores que intervienen en el potencial redox, aunque no el nico, es la
concentracin de oxgeno
[O2].
Hay microorganismos que requieren ambientes oxidantes para crecer,
mientras que
otros necesitan ambientes reductores. El metabolismo de ambos tipos de
microorganismos presenta diferencias notables. El requerimiento de
condiciones oxidantes o reductoras no debe confundirse con la necesidad de
presencia o ausencia de oxgeno para que
se produzca el crecimiento.
En general, cuando un microorganismo requiere un ambiente oxidante se dice
que
desarrolla un metabolismo oxidativo (o respirativo) mientras que los
microorganismos
que requieren ambientes reductores (o menos oxidantes) realizan un
metabolismo fermentativo.
Un microorganismo es aerobio cuando necesita oxgeno para vivir y es
anaerobio
cuando o bien no lo necesita (anaerobios facultativos como las bacterias
entricas, o
como Saccharomyces cerevisiae; o anaerobios aerotolerantes como las
bacterias lcticas) o cuando muere en presencia de oxgeno (anaerobios
estrictos como los clostridios).
Hay microorganismos que viven en ambientes carentes de oxgeno
(anaerobios) que,
sin embargo, llevan a cabo un metabolismo oxidativo porque usan otro
aceptor final de electrones que acta como oxidante ambiental. Por ejemplo,
las bacterias que "respiran"
nitratos (NO3
-
), sulfatos (SO4
2-) u otros compuestos orgnicos oxidados (respiracin
anaerobia).
Hay microorganismos que, aunque viven en presencia de oxgeno, no son
capaces de
utilizarlo como aceptor final de electrones y deben desarrollar un metabolismo
fermentativo (las bacterias lcticas que son anaerobias aerotolerantes, por
ejemplo).
Por otra parte, hay microorganismos que pueden desarrollar ambos tipos de
metabolismo. Esto es: en presencia de oxgeno desarrollan un metabolismo
oxidativo y en su
ausencia, fermentativo. El rendimiento de los procesos fermentativos es
menor que el
de los respirativos: las bacterias y las levaduras producen menos biomasa
cuando crecen
fermentando que cuando lo hacen respirando.
En el curso de ciertas reacciones metablicas redox se forman compuestos
altamente reactivos (radicales libres, formas superxido) que pueden daar las
protenas, membranas y cidos nucleicos produciendo la muerte de las clulas.
Las clulas se defienden
de estos compuestos reactivos mediante las enzimas siguientes: Superxido
dismutasa
(SOD) y catalasa. Los anaerobios estrictos carecen de SOD y de catalasa o
tienen niveles muy bajos de estas enzimas de forma que no pueden sobrevivir
en presencia de
oxgeno. La deteccin de estas enzimas tiene valor taxonmico


Qu es un Cultivo Microbiolgico?


Un cultivo es la forma en la que se hacen crecer los microorganismos (colonias) en una
superficie solida (agar) o en medio lquido (caldo) e incluso en clulas (lnea celular) y es
utilizado como el mtodo principal para poder estudiar a los agentes causales de
enfermedades, y saber si se trata de bacterias, hongos, virus, parsitos o algas.

Cul es su utilidad?

En el manejo de enfermedades infecciosas, es necesario saber con certeza cual es el
microorganismo que esta causando la enfermedad, pues ello nos permite tratarlo y eliminarlo
de forma ms rpida y efectiva, sin dao para el paciente; adems, permite conocer el
pronstico o la posible evolucin de la infeccin y establecer su eliminacin. Adems permite
detectar bacterias u hongos que aunque no estn produciendo directamente enfermedad en el
sitio donde se encuentran (colonizacin), puedan causar dao futuro (infeccin oportunista por
estado de portador) o empeorar otras patologas (p.e. asma, urticaria, roscea, prurigo, acn,
prpura trombocitopnica idioptica, anemia por deficiencia de hierro, entre otras patologas).

Con el estudio mdico microbiolgico del cultivo se logra aislar e identificar al agente causal de
la infeccin (corroborar el diagnstico clnico) y poder practicarle las pruebas de susceptibilidad
a los antimicrobianos (antibiograma), para saber a ciencia cierta como los antibiticos afectan
al microorganismo que esta produciendo la enfermedad, y as optimizar el tratamiento de las
infecciones.

Fuente: http://www.medicomicrobiologo.com/home.html


Cultivo de Candida albicans (Hongo)



Medio de cultivo
Vase tambin: Cultivo (microbiologa)


Una placa de agar -- un ejemplo de crecimiento medio bacteriano. Las lneas y los puntos naranjas son colonias
bacterianas.
Un medio de cultivo consta de un gel o una solucin que cuenta con los nutrientes necesarios para
permitir, en condiciones favorables de pH y temperatura, el crecimiento
de virus, microorganismos, clulas, tejidos vegetales o incluso pequeas plantas. Segn lo que se
quiera hacer crecer, el medio requerir unas u otras condiciones. Generalmente se presentan
desecados en forma de polvo fino o granular antes de ser preparados; ya preparados pueden
encontrarse en estado slido, semislido o lquido. El objetivo ltimo del cultivo es
variado: antibiograma, identificacin, multiplicacin...
Los virus, por ejemplo, son obligados parsitos intracelulares, por lo que necesitan un medio que
contenga clulas vivas.
ndice
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1 Clasificacin
2 Conteo bacteriano
3 Vase tambin
4 Referencias
Clasificacin[editar editar cdigo]
Segn sus cualidades fsicas, se distinguen:
lquidos
semislidos
slidos
Segn su formulacin:
qumicamente definidos: se conoce la cantidad exacta de cada uno de los compuestos que hay
en el medio.
complejos: se realizan a partir de extractos naturales (extracto de levadura, sangre, etc.); no se
conoce exactamente cul es la composicin del medio; sin embargo, presenta la ventaja de que
ya estn presentes todos o casi todos los elementos que una clula puede requerir.
Segn su uso:
medio general: medio en donde crecen todo tipo de microorganismos, excepto los que
necesitan condiciones especiales (por ejemplo, agar CLED).
medio selectivo: permite seleccionar el crecimiento de una especie o grupo determinado
(hongos, bacterias entricas, protozoos...).
medio diferencial: permite identificar una especie con otra, ambas en el mismo medio. Puede
ser por su crecimiento, su metabolismo,su respiracin, etc. (por ejemplo, medio de McConkey).
medio de enriquecimiento: contiene los nutrientes necesarios para apoyar el crecimiento de una
amplia variedad de microorganismos, se utiliza para la cosecha de diferentes tipos de
microorganismos en un mismo medio.
medio mnimo: contiene la mnima cantidad de nutrientes posible que permite el crecimiento de
una especie;
medio de transporte: preparado para servir como almacenamiento temporal a especmenes
transportados o en transferencia; mantienen su viabilidad y su concentracin;
Simple

Frotis
Un frotis de sangre es un mecanismo cientfico que consiste en el extendido de una gota de sangre
en la superficie de un portaobjetos o de un cubreobjetos, con el fin de analizarla posteriormente.
Es ms adecuado emplear sangre que an no ha estado en contacto con el anticoagulante, pues
este podra alterar los resultados (algunos anticoagulantes tienden a deformar las clulas de la
sangre).
Su arquitectura de las clulas al formarse en la mdula sea.
1. Las alteraciones singulares en la forma de las clulas, que son una identificacin especifica
de algunas enfermedades.
2. Algn indicador de los efectos nocivos de la quimioterapia y de la radioterapia.
3. La diferenciacin y recuento de los elementos celulares de la sangre.
La fidelidad de la informacin obtenida de ellos, depende en gran parte de la calidad de las
extensiones. Estas no deben ser demasiado gruesas porque las clulas se amontonaran y no
podran ser reconocidas, ni diferenciarse, ni demasiado delgadas porque las clulas se deformaran,
distorsionaran y destruiran. Por eso los frotis de sangre deben ser bien nivelados y para obtener
buenos resultados es necesario que:
1. Tanto portaobjetos como cubreobjetos deben estar bien limpios y desengrasados
(prefentemente nuevos).
2. La gota de sangre usada para la preparacin de el frotis no debe ser muy grande ni
pequea, de preferencia de el tamao de la cabeza de un alfiler (entre 2 y 3 mm), obtenida
por puncin capilar.
3. La sangre no haya estado en contacto con anticoagulante, pues podra deformarse la
morfologa celular si pasase esto.
4. La lectura de las extensiones se har en las zonas donde los eritrocitos "casi se tocan".

ANTIBIOGRAMA
3.1 Se entiende por antibiograma el estudio de la
sensibilidad "in vitro" de las bacterias a los antibiticos.
Por extensin, se suele incluir el estudio de la sensibilidad
a las sulfamidas y otros quimioterpicos.
Utilidad: La razn por la cual es conveniente el estudio del
antibiograma de una bacteria determinada radica en el
hecho de la diferente sensibilidad a losantibiticos de las
distintas especies bacterianas y, ms an, en el hecho de
que en numerosas especies existen grandes diferencias de
sensibilidad a un determinado antibitico entre unas y
otras cepas.
El antibiograma es un mtodo de diagnstico rpido y
preciso
Con ayuda del antibiograma se puede escoger
el antibitico ms adecuado para el tratamiento de una
enfermedad.
3.2. Mtodo de la difusin en medio slido
Se siembra, con el grmen a estudiar, una placa de un
medio de cultivo adecuado. Sobre la superficie del medio
se colocan discos de papel impregnados con el antibitico o
quimioterpico a ensayar. Si el germen estudiado es
sensible, en torno al disco se observar un halo, en el cual
no hay proliferacin de bacterias. Si el germen es
resistente al antibitico, crecer uniformemente y no
habr ningn halo de inhibicin en torno al disco de papel.


3.3. Preparacin de los discos impregnados de antibitico
para realizar un antibiograma.
En las casas de productos de laboratorio pueden adquirir
se los discos que se emplean para hacer un antibiograma.
Sin embargo, como aprendizaje, y con bastante fiabilidad,
es fcil prepararlos a partir de las cpsulas, comprimidos
grageados o viales de 250 mg 500 mg de los antibiticos
que expenden en las farmacias.


Para que la concentracin de antibitico que impregna los
discos no sea ni excesiva ni insuficiente, y sea posible
distinguir los halos de inhibicin, se puede proceder del
siguiente modo, realizando un banco de diluciones.
La concentracin de 0,1 mg/cl ya es adecuada para
trabajar.
Para evaluar, aproximadamente, el volumen de una gota se
pueden colocar en una probeta gra duada 100 gotas
calculando el volumen que ocupan; dividiendo por 100
tendremos el volumen que corresponde a una gota.
Suponiendo que el volumen hallado para una gota sea de
0,003 ml, la expresin 0,1 x 0,003 nos dar la
concentracin de antibitico en mg/ gota. De este modo
sabremos la concentracin de antibitico con que
impregnamos los discos de papel secante, que se
acostumbran a tomar de 6,5 m m de dimetro. Repitiendo
la operacin con cpsulas de distintos antibiticos
podremos preparar diferentes discos.
3.4 Medios de cultivo.
Los distintos microorganismos tienen distintas exigencias
tanto en los que se refiere al medio nutritivo en s como a
la temperatura de incubacin ya las condiciones
atmosfricas. Casi todos los microorganismos pueden
cultivarse en medios nutritivos inertes. Hay medios de
cultivo lquidos y slidos; de hecho los slidos son medios
de cultivo lquidos a los que se adicionan diferentes
sustancias, las ms utilizadas son el agar y la gelatina.

Agar ordinario

peptona 15 gr/l

NaCl 5gr/l

agar 12gr/l

Agar nutritivo
Agar nutritivo


Agar ordinario ms 10 gr/1 de glucosa
Los medios de cultivo deben estar ajustados a un pH
adecuado. El agar ordinario y el agar nutritivo a un pH =
7,2. El ajuste se realiza con NaOH y/o HCl en soluciones 1
N y 1/10N. Se acos- tumbra a hacer antes de la
esterilizacin, aunque, a veces, debe hacerse despus. La
esterilizacin de los medios de cultivo se hace
generalmente calentndolos en un autoclave a 121 C ya una
atmsfera de presin de vapor, durante 15-30 minutos.
Alternativamente puede utilizarse una olla a presin
adecuada.
3.5 Lectura del antibiograma.
Una vez sembrada una placa de un medio de cultivo
adecuado y colocados los distintos discos im pregnados de
antibitico y una vez colocada a incubacin en la estufa
durante unas horas, se procede a la lectura de los
resultados, que puede hacerse a intervalos peridicos,
basada en la medi cin del halo de inhibicin. Segn la
amplitud de este halo los grmenes se clasifican en:
-RESISTENTES
-SENSIBLES
-MUY SENSIBLES
Debe tenerse presente que el dimetro del halo de
inhibicin depende tambin de la difusibilidad del
antibitico y, por tanto, no es una medida absoluta de la
eficacia.
Los datos que proporciona el antibiograma son muy valiosos
pero su aplicacin no es tan sencilla. Para la prescripcin
correcta de los antibiticos hay que tener en cuenta
siempre la naturaleza del proceso infeccioso, la historia
clnica del paciente, el mecanismo de accin del antibitico,
la toxicidad, las posibles sensibilizaciones del paciente, la
va de administracin, etc.